MX2011004824A - Uso de derivados de butano catecólico en terapia contra el cáncer. - Google Patents

Abstract

La presente divulgación se relaciona con composiciones y métodos para tratar un desorden proliferativo administrando a un sujeto una composición farmacéutica de un inhibidor dual de quinasas. Los butanos catecólicos pueden servir como inhibidores duales de quinasa para propósitos de los métodos descritos aquí. Los sujetos pueden ser tratados adicionalmente coadministrando un inhibidor EGFR. La presente solicitud también se relaciona con el análisis de una muestra con respecto a los niveles de IGF-IR y EGFR y comparar los niveles de IGF-IR y EGFR con un control. Los pacientes pueden ser seleccionados para tratamiento con un butano catecólico con base en la evaluación; opcionalmente, los pacientes pueden ser tratados adicionalmente con un inhibidor EGFR, un inhibidor IGF-IR, o ambos.

Description

USO DE DERIVADOS DE BUTANO CATECÓLICO EN TERAPIA CONTRA EL CÁNCER CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención está relacionada con composiciones y métodos para tratar un desorden proliferativo administrando a un sujeto una composición farmacéutica de un inhibidor dual de quinasas, mas particularmente está relacionada con el uso de butanos catecólicos como inhibidores duales de quinasa en terapias contra el cáncer.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las enfermedades proliferativas son una amenaza seria para la sociedad moderna. Los crecimientos cancerosos, incluyendo los crecimientos cancerosos malignos, plantean serios retos para la medicina moderna debido a sus características únicas. Sus características incluyen proliferación celular incontrolable que da como resultado, por ejemplo, crecimiento no regulado de tejidos malignos, una capacidad para invadir tejidos locales e incluso remotos, falta de diferenciación, falta de síntomas detectables y lo que es más significativo, la carencia de una terapia y prevención efectiva.

El cáncer puede desarrollarse en cualquier tejido de cualquier órgano a cualquier edad. La etiología del cáncer no está claramente definida pero mecanismos tales como la susceptibilidad genética, trastornos de ruptura cromosómica, virus, factores ambientales y trastornos inmunológicos se han relacionado todos con el crecimiento y transformación celular malignos. El cáncer abarca una amplia categoría de condiciones médicas, que afectan a millones de individuos en todo el mundo. Las células cancerosas pueden surgir en casi cualquier órgano y/o tejido del cuerpo. El cáncer se desarrolla cuando las células en una parte del cuerpo comienzan a crecer o diferenciarse fuera de control. Todos los tipos de cáncer comienzan con el crecimiento incontrolado de células anormales.

Actualmente, algunos de los principales tratamiento disponibles son cirugía, terapia por radiación y quimioterapia. La cirugía es frecuentemente una medida drástica y puede tener consecuencias serias. Por ejemplo, todos los tratamientos para cáncer ovárico pueden dar como resultado la infertilidad. Algunos tratamientos para el cáncer cervical y el cáncer de vejiga pueden producir infertilidad y/o disfunción sexual. Los procedimientos quirúrgicos para tratar el cáncer pancrático pueden dar como resultado una eliminación parcial o total del páncreas que por sí mismo involucra riesgos significativos, causando efectos adversos serios en el paciente. La cirugía para el cáncer de seno invariablemente involucra la eliminación de parte de o del seno completo. Algunos procedimientos quirúrgicos para el cáncer de próstata conllevan el riesgo de incontinencia urinaria e impotencia. Los procedimientos para los pacientes con cáncer de pulmón frecuentemente tienen un dolor post operatorio significativo puesto que las costillas deben ser seccionadas para tener acceso y eliminar el tejido pulmonar canceroso. Además, los pacientes que tienen cáncer pulmonar y alguna otra enfermedad pulmonar, tal como enfisema o bronquitis crónica, experimentan típicamente un incremento en la reducción de la respiración después de la cirugía.

En el mundo, más de 10 millones de personas son diagnosticadas con cáncer cada año y se estima que este número crecerá a 15 millones de casos nuevos cada año hacia el 2020. El cáncer causa 6 millones de muertes cada año o el 12% de las muertes a nivel mundial.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN Las realizaciones aquí divulgadas se relacionan en general con métodos para el tratamiento de enfermedades utilizando un butano catecólico o derivados del mismo. Algunas realizaciones específicas se relacionan con el uso del ácido catecólico butano nordihidroguayarético (NDGA) o una sal, solvato, isómero, tautómero, metabolito, análogo o profármaco del mismo en el tratamiento de una enfermedad proliferativa .

Se proporcionan aquí métodos para tratar una enfermedad que comprenden la administración de una cantidad efectiva de un compuesto farmacéutico capaz de inhibir la actividad de la tirosina quinasa del receptor 1 del factor de crecimiento similar a la insulina (IGF- IR) y del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) (esto es, un inhibidor de quinasa doble) , en donde el compuesto farmacéutico es un butano catecólico.

También se proporcionan aquí métodos para tratar una enfermedad en un sujeto que ha desarrollado resistencia a uno o más inhibidores de tirosina quinasa, por ejemplo, uno o más inhibidores de EGF-R y/o uno o más inhibidores de IGF-1R, que comprenden la administración de una cantidad efectiva de un compuesto farmacéutico capaz de inhibir la actividad de la tirosina quinasa tanto de IGF- IR como de EGFR (esto es, un solo compuesto que es un inhibidor dual de quinasa) , en donde el compuesto farmacéutico es un butano catecólico.

Las enfermedades que se tratan utilizando los métodos provistos aquí son enfermedades proliferativas .

Una enfermedad proliferativa incluye, pero no se limita a, un cáncer maligno, premaligno o benigno. Los cánceres que van a ser tratados utilizando los métodos divulgados incluyen, por ejemplo, un tumor sólido, un linfoma o una leucemia. En una realización, un cáncer puede ser, por ejemplo, un tumor cerebral (por ejemplo, un tumor maligno, premaligno o benigno del cerebro tal como por ejemplo, un glioblastoma, un astrocitoma, un meningioma, un meduloblastoma o un tumor neuro ectodérmico periférico) , un carcinoma (por ejemplo, .un carcinoma de la vesícula biliar, un carcinoma bronquial, un carcinoma de las células b sales, un adenocarcinoma, un carcinoma de células escamosas, un carcinoma de células pequeñas, un carcinoma no diferenciado de células grandes, adenomas, cistadenomas , etc.), un basalioma, un teratoma, un retinoblastoma, un coroideomelanoma, un seminoma, un sarcoma (por ejemplo, sarcoma de Ewing, rabdomiosarcoma, craneofaringeoma, osteosarcoma, condrosarcoma, miosarcoma, liposarcoma, fibrosarcoma, leimiosarcoma, tumor de Askin, linfosarcoma, neurosarcoma, sarcoma de Kaposi, dermatofibrosarcoma, angiosarcoma, etc.), un plasmocitoma, un tumor de cabeza y cuello (por ejemplo, oral, laríngeo, nasofaríngeo, esofágico, etc.) un tumor en el hígado, un tumor de riñon, un tumor de células renales, un carcinoma de células escamosas, un tumor uterino, un tumor óseo, un tumor de próstata, un tumor de seno incluyendo, pero no limitándose a un tumor de seno que es Her2- y/o ER- y/o PR- , un tumor de vejiga, un tumor pancreático, un tumor del endometrio, un carcinoma de células escamosas, un tumor del estómago, gliomas, un tumor colorrectal, un tumor testicular, un tumor de colon, un tumor rectal, un tumor ovárico, un tumor cervical, un tumor de ojo, un tumor en el sistema nervioso central (por ejemplo, linfornas CNS primarios, tumores del eje espinal, gliomas del tallo cerebral, adenomas de la pituitaria, etc.), un tumor tiroideo, un tumor de pulmones (por · ejemplo, cáncer de pulmones de células no pequeñas (NSCLC) o cáncer de pulmón de células pequeñas) , una leucemia o un linforna (por ejemplo, linfornas de células T cutáneas (CTCL) , linfornas de células T periféricas no cutáneas, linfornas asociados con virus linfotrofico de células T humanas (HTLV) tal como una leucemia/linforna (ATLL) , de células de T adultas, linforna de células B, leucemias no linfocíticas agudas, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielógena crónica, leucemia mielógena aguda, linfornas y mielomas múltiples, linforna diferente a Hodgkin, leucemia aguda linfática (ALL) , leucemia crónica linfática (CLL) , linfoma de Hodgkin, linfoma de Burkitt, linfoma de leucemia de células T adultas, leucemia mieloide aguda (AML) , leucemia mieloide crónica (CML) , o el carcinoma hepatocelular, etc.), un mieloma múltiple, un tumor de piel (por ejemplo, carcinomas de células básales, carcinomas de células escamosas, melanomas tales como melanomas malignos, melanomas cutáneos o melanomas intraoculares , dermatofibrosarcoma protuberans, carcinoma de células de Merkel o sarcoma de Kaposi) , un tumor ginecológico (por ejemplo sarcomas uterinos, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma de la cérvix, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, etc.), enfermedad de Hodgkin, un cáncer del intestino delgado, un cáncer del sistema endocrino (por ejemplo, un cáncer de tiroides, paratiroides o glándulas adrenales, etc.), un mesotelioma, un cáncer de la uretra, un cáncer del pene, tumores relacionados con el síndrome de Gorlin (por ejemplo, meduloblastomas , meningioma, etc.), un · tumor de origen desconocido; o metástasis de cualquiera de los anteriores.

En otra realización, el cáncer es un tumor de pulmón, un tumor de seno, un tumor de colon, un tumor colorrec al, un tumor de cabeza y cuello, un tumor de hígado, un tumor prostático, un glioma, un glioblastoma multiforme, un tumor ovárico o un tumor de tiroides; o metástasis de cualquiera de los anteriores.

En aún otras realizaciones, el cáncer es un tumor endometrial, un tumor de vejiga, mieloma múltiple, melanoma, tumor renal, sarcoma, tumor cervical, leucemia y neuroblastoma .

Los tumores tal como se indica aquí son tumores primarios o metástasis.

Las enfermedades proliferativas también pueden ser trastornos de la piel.

En un aspecto, el trastorno de la piel es por ejemplo, un tumor, queratosis actínica, acné, psoriasis, heridas en la piel, verrugas, infecciones bacterianas, infecciones fúngicas o infecciones virales. Las infecciones virales incluyen, pero no se limitan a infección por VIH, infección por PVH, o infección por VSH.

Se proporcionan aquí métodos para tratar un cáncer maligno, premaligno o benigno, que comprende la administración de una cantidad efectiva de un compuesto farmacéutico capaz de inhibir la actividad de la tiroxina quinasa tanto de IGF- IR como de EGFR (esto es, un compuesto individual que es un inhibidor dual de la quinasa) , donde el compuesto farmacéutico es un butano catecólico.

Los cánceres que se van a tratar utilizando los métodos divulgados incluyen, por ejemplo, un tumor de origen desconocido; un tumor sólido, un linfoma o una leucemia. En una realización, un cáncer puede ser, por ejemplo, un tumor cerebral (por ejemplo, un tumor maligno, premaligno o benigno del cerebro tal como por ejemplo, un glioblastoma, un astrocitoma, un meningioma, un neuroblastoma o un tumor neuro ectodérmico periférico) , un carcinoma (por ejemplo, un carcinoma de la vesícula biliar, un carcinoma bronquial, un carcinoma de las células básales, un adenocarcinoma, un carcinoma de células escamosas, un carcinoma de células pequeñas, un carcinoma no diferenciado de células grandes, adenomas, cistadenomas , etc.), un basalioma, un teratoma, un retinoblastoma, un coroideomelanoma, un seminoma, un sarcoma (por ejemplo, sarcoma de Ewing, rabdomiosarcoma, craneofaringeoma, os eosarcoma, condrosarcoma, miosarcoma, liposarcoma, fibrosarcoma, leimiosarcoma, tumor de Askin, linfosarcoma, neurosarcoma, sarcoma de Kaposi, dermatofibrosarcoma, angiosarcoma, etc.), un plasmocitoma, un tumor de cabeza y cuello (por ejemplo, oral, laríngeo, nasofaríngeo, esofágico, etc.) un tumor en el hígado, un tumor de riñon, un tumor de células renales, un carcinoma de células escamosas, un tumor uterino, un tumor óseo, un tumor de próstata, un tumor de seno incluyendo, pero no limitándose a un tumor de seno que es Her2- y/o ER- y/o PR- , un tumor de vejiga, un tumor pancreático, un tumor del endometrio, un carcinoma de células escamosas, un tumor del estómago, gliomas, un tumor colorrectal, un tumor testicular, un tumor de colon, un tumor rectal, un tumor ovárico, un tumor cervical, un tumor de ojo, un tumor en el sistema nervioso central (por ejemplo, linfornas CNS primarios, tumores del eje espinal, gliomas del tallo cerebral, adenomas de la pituitaria, etc.), un tumor tiroideo, un tumor de pulmones (por ejemplo, cáncer de pulmones de células no pequeñas (NSCLC) o cáncer de pulmón de células pequeñas) , una leucemia o un linfoma (por ejemplo, linfornas de células T cutáneas (CTCL) , linfornas de células T periféricas no cutáneas, linfomas asociados con virus linfotrofico de células T humanas (HTLV) tal como una leucemia/linforna (ATLL) , de células de T adultas, linfoma de células B, leucemias no linfocíticas agudas, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielógena crónica, leucemia mielógena aguda, linfomas y mielomas múltiples, linfoma diferente a Hodgkin, leucemia aguda linfática (ALL) , leucemia crónica linfática (CLL) , linfoma de Hodgkin, linfoma de Burkitt, linfoma de leucemia de células T adultas, leucemia mieloide aguda (AML) , leucemia mieloide crónica (CML) , o el carcinoma hepatocelular, etc.), un mieloma múltiple, un tumor de piel (por ejemplo, carcinomas de células básales, carcinomas de células escamosas, melanomas tales como melanomas malignos, melanomas cutáneos o melanomas intraoculares , dermatofibrosarcoma protuberans, carcinoma de células de Merkel o sarcoma de Kaposi) , un tumor ginecológico (por ejemplo sarcomas uterinos, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma de la cérvix, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, etc.), enfermedad de Hodgkin, un cáncer del intestino delgado, un cáncer del sistema endocrino (por ejemplo, un cáncer de tiroides, paratiroides o glándulas adrenales, etc.), un mesotelioma, un cáncer de la uretra, un cáncer del pene, tumores relacionados con el síndrome de Gorlin (por ejemplo, meduloblastomas , meningioma, etc.), un tumor de origen desconocido; o metástasis de los mismos.

En otras realizaciones, el cáncer es un tumor de pulmón, un tumor de seno, un tumor de colon, un tumor colorrectal, un tumor de cabeza y cuello, un tumor de hígado, un tumor prostático, un glioma, un glioblastoma multiforme, un tumor ovárico o un tumor de tiroides; o metástasis de cualquiera de los anteriores .

En aún otra realización, el cáncer es un tumor de endometrio, un tumor de vejiga, mieloma múltiple, melanoma, tumor renal, sarcoma, tumor cervical, leucemia y neuroblastoma .

Los tumores tal como se proporcionan aquí pueden ser tumores primarios o metástasis . Los cánceres también pueden ser cánceres con base epitelial. En una realización, las células de los tumores pueden expresar EGFR. En otra realización, las células de los tumores pueden expresar IGF-1R. En aún otra realización, las células de los tumores pueden expresar EGFR e IGF-IR.

Se proporcionan aquí métodos para tratar un trastorno de la piel, comprendiendo la administración de una cantidad efectiva de un compuesto farmacéutico capaz de inhibir la actividad de la tiroxina quinasa de IGF-1R y EGFR (esto es, un compuesto individual que es un inhibidor de quinasa dual) , donde el compuesto farmacéutico es un butano catecólico.

En un aspecto, el trastorno de la piel es, por ejemplo un tumor, queratosis actínica, acné, psoriasis, heridas en la piel, verrugas, infecciones bacterianas, infecciones fúngicas o infecciones virales. Las infecciones virales incluyen, pero no se limitan a una infección por VIH, una infección por VCH, una infección por VBH, infección por VPH y una infección por VSH. Los tumores de piel incluyen, pero no se limitan a, carcinomas de células básales, carcinomas de células escamosas, melanomas, dermatofibrosarcoma protuberans, carcinoma celular de Merkel y sarcoma de Kaposi.

En un aspecto, una composición farmacéutica que se va a administrar a un sujeto es un butano catecólico.

En una realización de los métodos descritos aquí, un butano catecólico puede tener la estructura de formula I: en donde Ri y R2 son independientemente H, alquilo inferior, o acilo inferior; R3, R4, R5, Rs, io, ii/ R12 y R13 son independientemente H o alquilo inferior; y R7/ R8 y R9 son independientemente H, hidroxi, alcoxi inferior o aciloxi inferior. También se incluyen sales farmacéuticamente aceptables, solvatos farmacéuticamente aceptables, tautómeros, metabolitos y profármacos de la formula En otra realización de los métodos descritos aquí, un butano catecólico puede tener la estructura de la fórmula II: en donde R5/ Rio, R6 y R13 son independientemente H; cuando R3 es H, Rn es alquilo inferior; o cuando R3 es alquilo inferior, Rn es licuando R4 es H, R12 es alquilo inferior,- o cuando R es alquilo inferior, Ri2 es H; dos de R7, Rs, y R9 son hidroxi, el otro es H, y uno de los grupos hidroxi está en la posición 3 y el otro grupo hidroxi está en la posición 4 con respecto al susituyente aquileno. También se incluyen sales farmacéuticamente aceptables, solvatos farmacéuticamente aceptables, tautómeros, metabolitos y profármacos de la formula II.

Ejemplos no limitantes de butanos catecólicos para uso en los presentes métodos incluyen por ejemplo, NDGA, tetra-O-metil NDGA; tetraglicinil NDGA; tetra-dimetilglicinil NDGA o una sal de los mismos; y tri-O-metil NDGA; tetrapivalato del ácido nordihidroguayarético; tetrapropionato del ácido nordihidroguayaretico y todas las configuraciones ópticas de los mismos Ejemplos no limitantes de butanos catecólicos para uso en los métodos presentes incluyen también, por ejemplo, la mezcla d- , 1- racémica de d- y 1-, y meso- isómeros de 1,4-bis ( 3 , 4 -dihidroxifenil) -2 , 3 -dimetilbutano ,- 1 , 4 -bis ( 3 , 4 -dihidroxifenil ) butano ; 1 , 4 -bis ( 3 , 4 -dimetoxifenil ) -2,3-dimetilbutano; 1 , 4 -bis (3 , 4 -dietoxifenil) -2 , 3 -dimetilbutano ; 1, 4-bis (3, 4 -dipropoxifenil) -2, 3 -dimetilbutano; 1- (3 , 4-dihidroxifenil) -4- (3 , 4 , 5-trihidroxifenil) butano; 1,4-bis (3 , 4-diacetoxifenil) -2 , 3 -dimetilbutano; l,4-bis(3,4-dipropioniloxifenil) -2 , 3 -dimetilbutano; 1, 4-bis (3,4-dibutiroiloxifenil) -2 , 3 -dimetilbutano; l,4-bis(3,4-divaleroiloxifenil ) -2,3 -dimetilbutano ; 1 , 4 -bis ( 3 , 4 -dipivaloiloxifenil) -2 , 3 -dimetilbutano; l,4-bis(3,4-dineopentilcarboxilfenil) -2 , 3 -dimetilbutano ; o l-(3,4-dihidroxifenil) -4-fenilbutano; y 1- (3, 4 -dihidroxifenil) -4-(2 , 5-dihidroxifenil) butano.

En una realización, el butano catecólico es ácido nordihidroguayarético (NDGA) .

Las composiciones farmacéuticas de las presentes realizaciones pueden formularse para cualquier ruta de administración tal como, por ejemplo, administración intranasal; administración oral; administración por inhalación; administración subcutánea; administración transdérmica ; administración intraarterial , con o sin oclusión; administración intracraneal; administración intraventricular; administración intravenosa; administración bucal; administración intraperitoneal ; administración intraocular; administración intramuscular; administración por implantación; y administración por el sistema venoso central.

En una realización, el butano catecólico se formula para administración oral. En otra realización el butano catecólico se formula para administración intravenosa.

Las dosis de butanos catecólicos pueden determinarse utilizando medios empíricos. A manera de ejemplo solamente, los butanos catecólicos pueden administrarse en una cantidad desde aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 375 mg/kg por dosis; desde aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 250 mg/kg por dosis; desde aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 200 mg/kg por dosis; desde aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 150 mg/kg por dosis; desde aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg por dosis; desde aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 75 mg/kg por dosis; desde aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 50 mg/kg por dosis. Alternativamente, los butanos catecólicos pueden administrase en una cantidad que va desde aproximadamente 1,500 mg por día hasta aproximadamente 2,500 mg por día; desde aproximadamente 1,800 mg por día hasta aproximadamente 2,300 mg por día; o aproximadamente 2,000 mg por día. En una realización, un butano catecólico puede ponerse en contacto con las células objetivo en una concentración en un rango de aproximadamente 1 µ? hasta aproximadamente 30 µ?. En otra realización, un butano catecólico puede ponerse en contacto con las células objetivo en una concentración en un rango de aproximadamente 1 µ? hasta aproximadamente 10 µ?.

En una realización, una composición farmacéutica puede administrarse más frecuentemente que una vez cada 6 días durante un periodo de tiempo, o más frecuentemente que una vez cada 2 días durante un periodo de tiempo. En una realización, una composición farmecéutica se administra diariamente durante cuatro semanas. En otra realización, una composición farmacéutica se administra tres veces al día durante tres semanas con un hiato de una semana antes de iniciar un nuevo ciclo. En otra realización, una composición farmacéutica se administra diariamente durante una semana seguida por un hiato de una semana. En otra realización, una composición farmacéutica se administra diariamente durante dos semanas seguida por un hiato de dos semanas. En otra realización, una composición farmacéutica se administra una vez o dos veces diariamente de forma continua o con un hiato de una semana antes de iniciar un nuevo ciclo. Aún otra realización, una composición farmacéutica se administra una vez por semana o dos veces por semana.

En cualquiera de tales métodos provistos aquí, un sujeto que esta recibiendo la administración de un butano catecólico puede recibir adicionalmente la administración de un agente o régimenes de tratamiento anticácerígenos adicionales. Los agentes anticáncerígenos incluyen, pero no se limitan a, agentes para el deterioro de ADN, inhibidores de topoisomerasa e inhibidores mitóticos. En algunas realizaciones, los uno o más agentes anticáncerígenos que van a administrarse pueden ser un inhibidor de EGFR, un inhibidor de IGF- IR o ambos.

En un aspecto de los métodos aquí descritos, un paciente que está recibiendo la administración de un butano catecólico puede ser tratado adicionalmente mediante la administración de un inhibidor de EGFR, un inhibidor de IGF- IR o ambos.

En una realización, el sujeto que va a ser tratado puede ser resistente al tratamiento con uno o más inhibidores de tiroxina quinasa, por ejemplo un inhibidor de EGFR solo, un inhibidor de IGF- IR solo, un inhibidor de EGFR y un inhibidor de IGF- IR.

Se proporcionan aquí métodos para seleccionar sujetos para los niveles de actividad de tirosina quinasa de IGF- IR y de EGFR, que comprenden: (i) analizar una muestra obtenida del sujeto que comprende niveles de medición de IGF-1R y EGFR; y (ii) comparar los niveles de IGF-1R y EGFR en la muestra con los niveles en un control .

Se proporcionan aquí métodos para determinar el tratamiento de una enfermedad que comprenden: (i) analizar una muestra obtenida de un sujeto que comprende niveles de medición de IGF- IR y EGFR, y (ii) comparar los niveles de IGF- IR y del EGFR en la muestra con los niveles de un control; donde los niveles incrementados de IGF- IR y EGFR, o ambos en comparación con el control indican que el sujeto va a ser tratado con un inhibidor dual de tirosina quinasa (esto es, un compuesto simple que inhibe tanto IGF-1R como EGFR) . En una realización, el inhibidor dual de tirosina quinasa es un butano catecólico tal como se describe aquí.

En una realización, el nivel de expresión de EGFR esta en los niveles de línea base o mayor que los niveles de línea base y el nivel de expresión de IGF- IR esta en niveles de línea base o niveles superiores a la línea base. En otra realización, el nivel de expresión del EGFR esta a niveles de línea base y el nivel de expresión de IGF- IR es dos veces mayor que los niveles de línea base o más. En otra realización, el nivel de expresión de IGF- IR esta en los niveles de línea base y el nivel de expresión de EGFR es dos veces mayor que los niveles de línea base o más. En aún otra realización, el nivel de expresión de IGF-1R es dos veces más mayor que los niveles de línea base o más y el nivel de expresión de EGFR es dos veces superior a los niveles de línea base o más.

Los niveles de AR mensajero (ARNm) de IGF- IR y EGFR pueden analizarse utilizando pruebas tales como, por ejemplo, la reacción en cadena de trascriptasa reversa-polimerasa (RT-PCR) , hibridización Northern, hibridización in si tu y RT-PCR cuantitativo (qRT-PCR) .

Los niveles proteínicos de IGF- IR y EGFR pueden analizarse utilizando ensayos tales como, por ejemplo, un ensayo inmunosorbente enlazado con enzima (ELISA) , un Western blot, inmunohistoquímica, inmunoprecipitación, inmunofluorescencia, inmunoensayo enzimático (EIA) y radioinmunoensayo (RIA) .

Los niveles de ADN genómico de IGF- IR y EGFR pueden analizarse utilizando, por ejemplo, hibridización Southern o chips genéticos.

En un aspecto, los IGF-1R y EGFR pueden analizarse mediante (a) la introducción en un sujeto de un anticuerpo marcado dirigido contra IGF- IR y un anticuerpo marcado dirigido contra EGFR y (b) la detección de dichos anticuerpos marcados mediante técnicas de imágenes estándar. Un anticuerpo puede ser etiquetado con un marcador radioactivo cuya presencia y localización en un sujeto puede detectarse por técnicas estándar de imágenes. En una realización, el marcador radioactivo es diferente para un anticuerpo dirigido contra IGF-IR y un anticuerpo dirigido contra EGFR.

En un aspecto, el método puede comprender adicionalmente la administración al sujeto de un compuesto farmacéutico capaz de inhibir la actividad de tirosina quinasa de IGF-IR y EGF-R, donde dicho compuesto farmacéutico es un butano catecólico que inhibe IGF-1R y EGFR (esto es, un inhibidor dual de quinasa) .

En cualquiera de tales métodos provistos aquí, un sujeto puede recibir adicionalmente la administración de uno o más agentes y/o régimenes de tratamiento anticáncerígenos . Los agentes anticancerígenos incluyen, pero no se limitan a, agentes de deterioro de ADN, inhibidores de topoisomerasa e inhibidores mitóticos. En una realización, en uno o más agentes anticancerígenos son un inhibidor EGFR, un inhibidor IGF-IR o ambos.

En un aspecto de los métodos descritos aquí, un paciente puede ser tratado adicionalmente mediante la administración de un inhibidor de EGFR, un inhibidor de IGF- IR, o ambos. En una realización, el sujeto que va a ser tratado puede ser resistente al tratamiento con un inhibidor de EGFR solo, un inhibidor de IGF- IR solo, o un inhibidor de EGFR y un inhibidor de IGF- IR.

En un aspecto, el sujeto que va a ser tratado tiene una enfermedad proliferativa tal como se describió más arriba.

Se proporcionan aquí métodos para seleccionar un sujeto para tratamiento con un butano catecólico capaz de inhibir la actividad de la tirosina quinasa de IGF-1R y EGF-R (esto es, un inhibidor de quinasa dual), donde dicho sujeto esta identificado por tener niveles de IGF- IR, EGFR o ambos, en niveles de línea base o dos veces mayor que los niveles de línea base en comparación con niveles de control.

En un aspecto, un sujeto ha sido tratado previamente con un inhibidor de EGFR o un inhibidor de IGF-IR.

En un aspecto, el sujeto puede ser resistente a un tratamiento con al menos un inhibidor de tirosina quinasa, por ejemplo, un inhibidor de EGFR y/o inhibidor de IGF-IR.

En un aspecto, una composición farmacéutica que va a ser administrada a un sujeto es un butano catecólico. Las rutas de administración, dosis y programas de administración de los butanos catecólicos ya han sido descritas más arriba.

En cualquiera de tales métodos provistos aquí, un sujeto puede recibir adicionalmente la administración de uno o más agentes y/o régimenes de tratamiento anticancerígenos . Los agentes anticancerígenos incluyen, pero no se limitan a, agentes para el deterior de ADN, inhibidores de topoisomerasa e inhibidores mitóticos. En una realización, el uno o más agentes anticáncerígenos que van a ser administrados son un inhibidor de EGFR, un inhibidor de IGF-1R o ambos.

En un aspecto de los métodos descritos aquí, un paciente puede ser tratado adicionalmente administrando un inhibidor de EGFR, un inhibidor de IGF-1R, o ambos. En una realización, el sujeto que va a ser tratado puede ser resistente al tratamiento con al menos un inhibidor de tirosina quinasa, por ejemplo un inhibidor de EGFR solo, un inhibidor de IGF-IR solo, o un inhibidor de EGFR y un inhibidor de IGF-IR.

En un aspecto, el sujeto (paciente) que va a ser tratado tiene una enfermedad proliferativa tal como las descritas aquí .

En una realización, el nivel de expresión de EGFR esta a niveles de línea base o mayores que los niveles de línea base y el nivel de expresión de IGF-1R esta a niveles de línea base o mayores que los niveles de la línea base. En otra realización, el nivel de expresión de EGFR esta a niveles de línea base y a nivel de expresión de IGF- IR es dos veces mayor que los niveles de línea base o más. En otra realización, el nivel de expresión de IGF- IR esta a niveles de línea base y el nivel de expresión de EGFR es dos veces mayor que los niveles de línea base o más. En aún otra realización, el nivel de expresión de IGF-1R es al menos dos veces mayor que los niveles de línea base o más si el nivel de expresión de EGFR es dos veces mayor que los niveles de línea base o más.

Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patente mencionadas en esta especificación se incorporan aquí como referencia en el mismo grado como si cada publicación, patente o solicitud de patente individual fuera específica e individualmente indicada para ser incorporada como referencia.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Los rasgos novedosos de las realizaciones se definen con particularidad en las reivindicaciones anexas. Se obtendrá un mejor entendimiento de los rasgos y ventajas de las presentes realizaciones con referencia a la siguiente descripción detallada- que define realizaciones ilustrativas, en las cuales se utilizan los principios de las realizaciones, y los dibujos acompañantes de los cuales: La figura 1 demuestra que NDGA (TT-100) inhibe directamente la actividad de tirosina quinasa de IGF-IR y EGFR ambos purificados con mayor afinidad que sus acciones contra la lipoxigenasa purificada (LOX) .

La figura 2 demuestra que TT-100 inhibe las células NSCLC resistentes a Iressa que expresan la mutación EGFR T790M.

La figura 3 demuestra que TT-100 hace sinergia con las concentraciones clínicas de Iressa en células NSCLC resistentes al fármaco.

La figura 4 demuestra que TT-100 inhibe la formación de colonias de células NSCLC resistentes a Iressa.

La figura 5 demuestra que la terapia con TT-100 inhibe el crecimiento de tumores de seno HER2 subcutáneos in vivo.

La figura 6 demuestra que la terapia con TT-100 inhibe la activación de EGR e IGF- IR en tumores de seno in vivo.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Definiciones Se debe entender que la descripción general antecedente y la siguiente descripción detallada son a titulo de ejemplo y explicativas únicamente y que no son restrictivas de ninguna materia reivindicada. En está solicitud, el uso del singular incluye el plural a menos que se establezca lo contrario específicamente. Debe anotarse que, tal como se utilizan en la especificación y en las reivindicaciones anexas, las formas singulares "un" "una" y "el/la" incluyen referentes plurales a menos que el contexto claramente dicte otra cosa. También debe notarse que el uso de "o" quiere decir "y/o" a menos que se establezca otra cosa. Adicionalmente , el uso del término "incluyendo" así como de otras formas, tales como "incluyen", "incluye", y "incluido" no es limitante.

El término "tumor sólido" se refiere a tumores en los cuales una pluralidad de células tumorales están asociadas una con otra, esto es, contiguas y localizadas dentro de un sitio confinado. Esto se contrasta con tumores "fluidos" o "hematogénicos" en los cuales las células tumorales se presentan primariamente como células no asociadas o individuales, por ejemplo, leucemia. Los tumores sólidos en general se propagan sobre tejidos huésped tales como los tejidos epiteliales, conectivos y de soporte así como en otros tejidos localizados a lo largo del cuerpo.

"Cirugía" significa cualquier procedimiento terpáutico o diagnóstico que involucre la acción metódica de la mano o de la mano con un instrumento, sobre el cuerpo de un humano u otro mamífero para producir un efecto curativo, remedial o diagnóstico .

"Terapia por radiación" significa exponer a un paciente a una radiación de alta energía, incluyendo sin limitación rayos X, rayos gamma y neutrones. Este tipo de terapia incluye sin limitación terapia de haces externos, terapia de radiación interna, radiciación con implante, braquiterapia, terapia por radiación sistémica y radioterapia.

"Quimiterapia" significa la administración de uno o más fármacos anticáncerígenos tales como, agentes quimioterapéuticos antineoplásticos, agentes quimiopreventivos , y/o otros agentes a un paciente con cáncer por diversos métodos incluyendo intravenoso, oral, intramuscular, intraperitoneal , intravesical , subcutáneo, transdérmico, bucal o inhalación o en la forma de un supositorio. La quimioterapia puede darse antes de la cirugía para encoger un tumor grande antes de un procedimiento quirúrgico para retirarlo, después de la cirugía o de la terapia de radiación para prevenir el crecimiento de cualquier células cancerígena remanente en el cuerpo.

Los términos "cantidad efectiva" o "cantidad farmacéuticamente efectiva" se refieren a una cantidad no toxica pero suficiente del agente para proveer el resultado biológico, terapéutico y/o profiláctico deseado. El resultado puede ser la reducción y/o alivio de los signos, síntomas o causas de una enfermedad, o cualquier otra alteración deseada de un sistema biológico. Por ejemplo, una "cantidad efectiva" para usos terapéuticos es la cantidad de butano catecólico tal como se divulga aquí per se o una composición que comprende el butano catecólico requerido aquí para proveer una disminución terapéuticamente significativa en una enfermedad. Una cantidad apropiada efectiva en cualquier caso individual puede determinarse por una persona de habilidad normal en la técnica utilizando experimentación de rutina.

Por "f rmacéuticamente aceptable" o "farmacológicamente aceptable" se entiende un material que no es bilógicamente o de alguna otra manera indeseable, esto es, el material puede ser administrado a un individuo sin causar ningún efecto biológico indeseable o interactuar de una forma deletérea con cualquiera de los componentes de la composición en la cual está contenido.

El término "tratar" y sus equivalentes gramaticales tal como se utilizan aquí, incluyen alcanzar un efecto terapéutico y/o un beneficio profiláctico. Por beneficio terapéutico se entiende la erradicación o mejora del trastorno subyacente que esta siendo tratado. El tratamiento también se refiere a la obtención de un efecto farmacológico y/o fisiológico deseado. El efecto puede ser profiláctico en términos de prevenir completa o parcialmente una condición o enfermedad o síntoma de las mismas y/o puede ser terapéutico en términos de una cura parcial o completa para una condición o enfermedad y/o efecto adverso atribuible a la condición o enfermedad. "Tratamiento", asi, cubre por ejemplo cualquier tratamiento de una condición o enfermedad en un mamífero, particularmente en un humano, e incluye: (a) evitar que la condición o enfermedad ocurra en un sujeto que puede estar predispuesto a la condición o enfermedad pero que no ha sido todavía diagnosticado como teniéndola; (b) inhibe la condición o enfermedad, tal como por ejemplo, detener su desarrollo; y (c) suavizar, aliviar o mejorar la condición o enfermedad tal como, por ejemplo, causando la regresión de la condición o enfermedad. A manera de ejemplo solamente, en un paciente con cáncer, el beneficio terapéutico puede incluir la erradicación o mejora del cáncer subyacente. También, un beneficio terapéutico puede alcanzarse con la erradicación o mejora de uno o más de los síntomas fisiológicos asociados con el trastorno subyacente de tal forma que se observa una mejora en el paciente, sin importar el hecho de que el paciente aún pueda estar afligido con el trastorno subyacente. Para benficio profiláctico, puede ejecutarse un método, o administrarse una composición a un paciente en riesgo de desarrollar cáncer, o en paciente que reporte uno o más de los síntomas fisiológicos de tales condiciones, aunque pueda no haberse hecho todavía un diagnóstico de la condición. En algunos casos, tratamiento significa estasis (esto es, que la enfermedad aún no empeora) y la supervivencia del paciente se prolonga. Una dosis por ser administrada depende del sujeto que va a ser tratado, tal como la salud general del sujeto, la edad del sujeto, el estado de la enfermedad o condición, el peso del sujeto, el tamaño de un tumor, por ejemplo.

El término "sujeto", "paciente" o "individuo" tal como se utiliza aquí en referencia a individuos que sufren de un trastorno, y similares, abarca mamíferos y no mamíferos. Ejemplos de mamíferos incluyen, pero no se limitan a, cuaqlueir miembro de la clase de los Mamíferos: humanos, primates no humanos, chimpancés y otras especies de simios y monos; animales de granja, tales como ganado, caballos, ovejas, cabras, cerdos; animales domésticos, tales como conejos, perros y gatos; animales de laboratorio que incluyen roedores, tales como ratas, ratones y cobayas, y similares; ejemplos de no mamíferos incluyen, pero no se limitan a, aves, peces y similares. En algunas realizaciones de los métodos y composiciones provistas aquí el mamífero es un humano .

Tal como se utiliza aquí, los términos "coadministración" , "administrado en combinación con" y sus equivalentes gramáticos o similares pretenden abarcar la administración de los agentes terapéuticos seleccionados a un paciente individual, y pretenden incluir regímenes de tratamiento en los cuales se administran los agentes por la misma o diferentes rutas de administración o al mismo o diferentes tiempo. En algunas realizaciones, un inhibidor será coadministrado con otros agentes. Estos términos abarcan la administración de dos o más agentes a un animal de tal manera que ambos agentes y/o sus metabolitos están presentes en el animal al mismo tiempo. Incluyen la administración simultánea en composiciones separadas, administración en tiempos separados en composiciones separadas, y/o administración en una composición en la cual ambos agentes están presentes. Así, en algunas realizaciones, un inhibidor o los otros agentes se administran en una composición individual. En algunas realizaciones, el inhibidor y los otros agentes se mezclan en la composición. En realizaciones adicionales, el inhibidor y los otros agentes se administran en tiempos separados en dosis separadas.

El término "composición farmacéutica" , tal como se utiliza aquí, se refiere a un compuesto biológicamente activo, opcionalmente mezclado con al menos un componente químico farmacéuticamente aceptable, tal como, aunque no limitándose a vehículos, estabilizadores, diluyentes, agentes de dispersión, agentes de suspensión, agentes espesantes y/o excipientes .

El término "vehículo" tal como se utiliza aquí, se refiere a compuestos químicos o agentes relativamente no tóxicos que facilitan la incorporación del compuesto en las células o tejidos.

El término "excipiente farmacéuticamente aceptable" , incluyen vehículos, adyuvantes o diluyentes u otras sustancias auxiliares, tales como las que son convencionales en la técnica, que están fácilmente disponibles para el público. Por ejemplo, sustancias auxiliares farmacéuticamente aceptables incluyen agentes para ajuste y regulación del pH, agentes para el ajuste de la tonicidad, estabilizantes, agente de humectación y similares.

El término "metabolito" , tal como se utiliza aquí, se refiere a un derivado de un compuesto que se forma cuando el compuesto se metaboliza.

El término"metabolito activo", tal como se utiliza aquí, se refiere a un derivado biológicamente activo del compuesto que se forma cuando se metaboliza el compuesto.

El término "metabolizado" , tal como se utiliza aquí, se refiere a la suma de los procesos (incluyendo, pero no limitándose a, reacciones de hidrólisis y reacciones catalizadas por enzimas) mediante los cuales una sustancia particular es modificada por un organismo. Así, las enzimas pueden producir alteraciones estructurales específicas en el compuesto. Por ejemplo, el citocromo P450 cataliza una variedad de reacciones oxidativas y reductoras a la vez que las uridin difosfato glucuroniltrasferasas catalizan la transferencia de una molécula de ácido glucurónico activada a alcoholes aromáticos, alcoholes alifáticos, ácidos carboxílieos , aminas y grupos sulfhidrilo libres. Puede obtenerse información adicional sobre el metabolismo en The Pharmacological Basis de Therapeutics , 9th Edition, McGraw-Hill (1996) .

El término "forma de dosificación unitaria", tal como se utiliza aquí, se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para sujetos humanos y animales, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de API calculado en una cantidad suficiente para producir el efecto deseado en asociación con un diluyente, transportador o vehículo farmacéuticamente aceptable. Las especificaciones para las formas de dosificación unitaria novedosas de los presentes compuestos dependen del compuesto particular empleado y del efecto que se va a alcanzar, y de la farmacodinámica asociada con cada compuesto en el huésped.

Tal como se utiliza aquí, "por ciento", "porcentaje" o el símbolo "%" significa el porcentaje del componente indicado en la composición con base en la cantidad del vehículo presente en la composición, sobre una base peso/peso (p/p) , peso/volumen (p/v) o volumen/volumen (v/v) como se indica con respecto a cualquier componente en particular, todos con base en la cantidad de vehículo presente en la composición. Así, pueden estar presentes diferentes tipos de vehículos en una cantidad de hasta 100% según se indica, lo que no evita la presencia del API, cuya cantidad puede ser indicada como un % o como un cierto número de mg presentes en la composición o un cierto número de mg/ml presentes, donde el ¾ o mg/ml esta basado en la cantidad de vehículo total presente en la composición. Ciertos tipos de vehículos pueden estar presentes en una combinación para alcanzar el 100% del vehículo .

Un compuesto "sustancialmente purificado" en referencia a los butanos catecólicos o a los compuestos NDGA o derivados es aquel que está sustancialmente libre de materiales que no sean el butano catecólico, los compuestos NDGA o los derivados de NDGA. A manera de ejemplo, sustancialmente libres significa que al menos 50% de los materiales no son NDGA, al menos 70%, al menos 80%, al menos 90% libre o al menos 95% libre de materiales que no son NDGA.

El término "antígeno de célula tumoral "se define aquí como un antígeno que está presente en cantidades más altas en una célula tumoral o en fluidos corporales que en células tumorales no relacionadas, células normales, o en fluidos corporales normales. La presencia del antígeno puede ser verificada mediante cualquier número de ensayos conocidos para los expertos en la técnica e incluyen sin limitación negativa y/o selección positiva con anticuerpos tales como prueba de ELISA, un radioinmunoensayo , o por Western Blot .

"Un agente inductor de apoptosis" se define aquí porque induce la muerte por apoptosis/programada de células, e incluye, por ejemplo, agentes anticáncerígenos y tratamientos donde las células (por ejemplo, células tumorales) se inducen para sufrir una muerte celular programada. Ejemplos de agentes inductores de apoptosis se describen en más detalle más ab j o .

Los términos "apoptosis" o "muerte celular programada" se refieren a los procesos fisiológicos mediante los cuales las células no deseadas o inútiles se eliminan durante el desarrollo y otros procesos biológicos normales. La apoptosis es un modo de muerte celular que ocurre bajo condiciones fisiológicas normales y la célula es un participante activo en su propia muerte ("suicidio celular") . Se encuentra lo más frecuentemente durante la regeneración de las células normales y la homeostasis de los tejidos, embriogénesis , inducción y mantenimiento de tolerancia inmune, desarrollo del sistema nervioso y de atrofia tisular dependiente del sistema endocrino. Las células que sufren apoptosis muestran rasgos morfológicos y bioquímicos característicos. Estos rasgos incluyen agregación de cromatina, condensación nuclear y citoplasmática, partición del citoplasma y del núcleo en vesiculos rodeados por membrana (cuerpos apoptoticos) , los cuales contienen ribosomas, mitocodrias morfológicamente intactas y material nuclear. In vivo, estos cuerpos apoptoticos son reconocidos y fagocitados rápidamente por los macrófagos, células dendríticas o células epiteliales adyacentes. Debido a este eficiente mecanismo para la eliminación de células apoptoticas in vivo se elicita una respuesta no inflamatoria. In vi tro, los cuerpos apoptoticos así como los fragmentos celulares restantes al final se inflaman y finalmente se lisan. La fase terminal de la muerte celular in vitro ha sido denominada "necrosis secundaria" . La apoptosis puede medirse por métodos conocidos para los expertos en la técnica tales como fragmentación de ADN, exposición de anexina V, activación de caspasas, liberación de citocromo c, etc. Una célula que ha sido inducida a morir se denomina aquí como una "célula apoptótica" .

La apoptosis también puede probarse utilizando una prueba estándar de apoptosis por anexina V: se cultivan células NIH-OVCAR-3 en placas de 6 pozos (NUNC) y se irradian o tratan con un anatgonista (o en combinación con otro fármaco anticáncerígeno) durante 4 - 48 horas, se lavan y se tiñen con anexina V- FITC (BD - Pharmingen) durante 1 hora. Las células se analizan por citometría de flujo (Becton-Dickinson, CellQuest) , se contratiñen con yoduro de propidium y se analizan de nuevo en el citometro de flujo.

Butanos catecólicos Tal como se utiliza aquí, el término "butano catecólico" se refiere a compuestos que son inhibidores duales de quinasa tanto de EGFR como de IGF-IR (esto es, un compuesto individual que es un inhibidor dual de quinasa) .

En una realización, un butano catecólico puede tener la estructura de la formula I: en donde Ri y R2 son independientemente H, alquilo inferior, o acilo inferior; R3, R4, R5, Rs, Rio, a, R12 Y R13 son independientemente H o alquilo inferior; y R7, R8 y R9 son independientemente H, hidroxi, alcoxi inferior o aciloxi inferior. También se incluyen sales farmacéuticamente aceptables, solvatos farmacéuticamente aceptables, tautómeros, metabolitos y profármacos de la formula I.

En otra realización, un butano catecólico puede tener la estructura de formula II: en donde R5, Ri0, 16 y R13 son independientemente H; cuando R3 es H, Rll es alquilo inferior; o cuando R3 es alquilo inferior, Rll es H; cuándo R4 es H, R12 es alquilo inferior; o cuando R4 es alquilo inferior, R12 es H; dos de R7 , R8 , y R9 son hidroxi, el otro es H, y uno de los grupos hidroxi está en la posición 3 y el otro grupo hidroxi está en la posición 4 con respecto al susituyente aquileno. También se incluyen sales farmacéuticamente aceptables, solvatos f rmacéuticamente aceptables, tautómeros, metabolitos y profármacos de la formula II.

Tal como se usa aquí, alquilo inferior se entiende que en general significa alquilo Cx-C6, y preferiblemente R3 y R4 son alquilo Ci-C3. Tal como se usa aquí, alquilo inferior también representa, ínter alia, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, iso-butilo, tert-butilo, n-pentilo, -isopentilo, n-hexilo, y similares.

Tal como se usa aquí, acilo inferior se entiende que en general significa acilo [Ci-C6] , con acilo [C2-Ce] como preferido. Tal como se usa aquí, acilo inferior también representa grupos que tienen la fórmula general RCO--, e.g., acetil (CH3CO--), propionil (CH3CH2CO- - ) , butiril (CH CH2CH2CO-- ) , y similares .

Los butanos catecólicos pueden ser dirigidos tanto a compuestos fenólicos como a los esteres y éteres convencionales de los mismos . Cuando el compuesto butano catecólico es, por ejemplo, un fenil sustituido, los grupos correspondientes son acetoxi (CH3C02--), propioniloxi (CH3CH2C02--) , y butiroiloxi (CH3CH2CH2C02- - ) .

Los compuestos pueden estar en la forma de un isómero óptico sencillo o una mezcla de tales isómeros, por ejemplo, una mezcla racémica o diastereoisómeros .

En una realización, el butano catecólico es ácido nordihidroguayáretico (NDGA) o un derivado del mismo.

El NDGA es un compuesto fenólico que fue identificado como componente principal de un te hecho a partir de los extractos resinosos del arbusto de creosote Larrea divaricatta .

Ejemplos no limitantes de butanos catecólicos para uso en los presentes métodos incluyen, pero no se limitan a, NDGA, tetra-O-metil NDGA; tetraglicinil NDGA; tetra-dimetilglicinil NDGA o una sal del mismo; o tri-O-metil NDGA; ácido nordihidroguayarético tetrapivalato; el tetrapropionato del ácido nordihidroguayarético y todas las configuraciones ópticas del mismo.

Ejemplos no limitantes de butanos catecólicos para uso en los métodos presentes incluyen también, por ejemplo, la mezcla racémica d-,1-, d- y 1-, y meso-isómeros de 1,4-bis (3 , -dihidroxfenil) -2, 3 -dimetilbutano ; l,4-bis(3,4-dihidroxifenil) butano; 1, 4 -bis (3 , 4 -dimetoxifenil ) -2,3-dimetilbutano; 1, 4 -bis (3, 4 -dietoxifenil) -2, 3 -dimetilbutano; 1, -bis (3 , 4-dipropoxifenil) -2, 3 -dimetilbutano; 1- (3 , 4-dihidroxifenil) -4- (3 , 4 , 5-trihidroxifenil) butano; 1,4-bis ( 3 , 4 -diacetoxifenil) -2 , 3 -dimetilbutano ; 1 , -bis ( 3 , 4 -dipropioniloxifenil) -2 , 3 -dimetilbutano; 1 , 4 -bis (3,4-dibutiroiloxifenil) -2, 3 -dimetilbutano ; l,4-bis(3,4-divaleroiloxifenil) -2 , 3 -dimetilbutano ; 1 , 4-bis (3,4-dipivaloiloxifenil ) -2 , 3 -dimetilbutano ; 1 , 4 -bis (3 , 4 -dineopentilcarboxilfenil) -2 , 3-dimetilbutano; o l-(3,4-dihidroxifenil) -4 - fenilbutano ; y 1- ( 3 , 4 -dihidroxifenil ) -4 - (2 , 5-dihidroxifenil) butano.

Otros butanos catecólicos descritos en la técnica se contemplan para su uso aquí. Los butanos catecólicos descritos en, por ejemplo, las patentes de los Estados Unidos NOS. 5,008,294; 6,291,524; O 6,417,234; las solicitudes de los Estados Unidos publicadas Nos. 20080207532, 20080096967, 20060151574, 20060141029 y 20070099847 se incorporan aquí como referencia.

La definición de términos químicos estándar puede encontrarse en trabajos de referencia, incluyendo Carey y Sundberg "Advanced Orgánic Chemistry 4th Ed. "Vols. A (2000) and B (2001), Plenum Press, New York. A menos que se indique otra cosa, se emplean métodos convencionales de espectroscopia de masas, RMN, HPLC, IR y espectroscopia UV/Vis y de farmacología dentro del alcance de la técnica. A menos que se proporcionen definiciones específicas, la nomenclatura empleada en conexión con, y los procedimientos y técnicas de laboratorio de, la química analítica, la química orgánica sintética y la química medicinal y farmacéutica descritos aquí son los conocidos en la técnica. Pueden utilizarse técnicas estándar para las síntesis química, análisis químico, preparación, formulación y administración farmacéutica, y tratamiento de pacientes. Las reacciones y técnicas de purificación pueden llevarse a cabo por ejemplo, utilizando kits de especificaciones del fabricante o como se logran comunmente en la técnica o tal como se describa aquí . Las siguientes técnicas y procedimientos pueden llevarse a cabo en general por métodos convencionales bien conocidos en la técnica y están descritos en diversas referencias generales y más especificas que se citan y se discuten a lo largo de la presente especificación. A través de la especificación, los grupos y sustituyentes de los mismos pueden escogerse por una persona experimentada en la técnica para proveer unidades estructurales y compuestos estables.

Los compuestos presentados aquí pueden existir como tautomeros . Los tautomeros son compuestos que son interconvertibles por migración de un átomo de hidrógeno, acompañada por una conmutación de un enlace sencillo y un enlace doble adyacente. En soluciones donde es posible la tautomerización, existirá un equilibrio químico de los tautomeros. La proporción exacta de los tautomeros depende de diversos factores, incluyendo temperatura, solvente y pH . Algunos ejemplos de pares tautoméricos incluyen: OH 0 OH vV H - vVH H H O . OH NH2 NH Y^NH2 Y^NH ??? El término "derivado o profármaco farmacéuticamente aceptable" tal como se utiliza aquí, se refiere a cualquier sal, éster, sal de un éster u otro derivado de un compuesto, farmacéuticamente aceptable, el cual, por administración a un receptor, es capaz de proveer (bien sea directa o indirectamente) un metabolito o un residuo del mismo farmacéuticamente activos. Los derivados o profármacos particularmente favorecidos son aquellos que incrementan la biodisponibilidad de los compuestos cuando tales compuestos se administran a un paciente (por ejemplo, permitiendo que un compuesto administrado oralmente sea absorbido más rápidamente hacia la sangre) , y que potencien la liberación del compuesto original a un compartimiento biológico (el cerebro o el sistema linfático) .

El término "sal farmacéuticamente aceptable" tal como se utiliza aquí, se refiere a sales que retienen la efectividad bilogica de los ácidos y bases libres del compuesto especificado y que no son biológicamente o de ninguna otra forma, indeseables. Los compuestos descritos aquí pueden poseer grupos ácidos o básicos y por lo tanto pueden reaccionar con cualquiera de un número de bases inorgánicas u orgánicas, y de ácidos inorgánicos y orgánicos para formar una sal farmacéuticamente aceptable. Estas sales pueden prepararse in situ durante el aislamiento final y purificación de los compuestos, o hacienda reaccionar separadamente un compuesto purificado en su forma de base libre y con un ácido orgánico o inorgánico adecuado, y aislando la sal asi formada. Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen aquellas sales preparadas por reacción del compuesto con un ácido mineral u orgánico o una base inorgánica, incluyendo tales sales, acétate, acrilato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, benceno, benceno sulfonato, bisulfato, bisulfito, bromuro, butirato, butin-1, 4-dioato, camforato, camforsulfonato, caproato, caprilato, clorobenzoato, cloruro, citrato, ciclopentanopropionato, decanoato, digluconato, dihidrógenofosfato, dinitrobenzoato, dodecilsulfato , etanosulfonato, formiato, fumarato, glucoheptanoato , glicerofosfato, glicolato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, hexin-1, 6-dioato, hidroxibenzoato, ?-hidroxibutirato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2-hidroxietanosulfonato, yoduro, isobutirato, lactato, maleato, manonato, metanosulfonato, mandelato, metafosfato, metanosulfonato, metoxibenzoato, metilbenzoato, monohidrogenofosfato, l-naftalenosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, palmoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, pirosulfato, pirofosfato, propiolato, ftalato, fenilacetato, fenilbutirato, propanosulfonato, salicilato, succinato, sulfato, sulfito, succinato, suberato, sebacato, sulfonato, tartrato, tiocianato, tosilato undeconato y xilensulfonato . Otros ácidos, tales como el oxálico, en tanto que no son por si mismos farmacéuticamente aceptables, pueden emplearse en la preparación de las sales útiles como intermediariso en la obtención de los compuestos descritos aquí y sus sales de adición ácida farmacéuticamente aceptables. Véase, por ejemplo, Berge et al., J. Pharm. Sci. 1977, 66, 1 - 19. Adicionalmente , estos compuestos descritos aquí que pueden comprender un grupo ácido libre pueden reaccionar con una base adecuada, tal como hidróxido, carbonato o bicarbonato de un catión metálico farmacéuticamente aceptable, con amoniaco, o con una amina orgánica primaria, secundaria o terciaria farmacéuticamente aceptable. Sales representativas alcalinas o alcalinotérreas incluyen las sales de litio, sodio, potasio, calcio, magnesio y aluminio y similares. Ejemplos ilustrativos de bases incluyen hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, hidróxido de colina, carbonato de sodio, N+(Cl-4 alquilo) 4, y similares. Aminas orgánicas representativas útiles para la formación de sales de adición básica incluyen etilamina, dietilenamina, etilendiamina, etanolamina, dietalonamina, piperazina y similares. Debe entenderse que los compuestos también incluyen la cuaternización de cualquier grupo básico que contiene nitrógeno que ellos puedan contener. Pueden obtenerse productos solubles en agua o aceite o dispersables mediante tal cuaternización. Véase por ejemplo, Berge et al., supra .

Los butanos catecólicos también pueden existir en diversos estados polimórficos , todos los cuales se contemplan aquí, y que también pueden ser útiles para el tratamiento de los trastornos. Por ejemplo, los polimorfos de los butanos catecólicos pueden administrarse en realización de los métodos aquí descritos. Los butanos catecólicos incluyen, por ejemplo, todas las formas cristalinas (conocidas como polimorfos) . Los polimorfos incluyen las diferentes disposiciones de empaquetamiento cristalino de la misma composición elemental del compuesto. Los polimorfos pueden tener diferentes patrones de difracción de rayos X, espectros infrarojo, puntos de fusión, densidad, dureza, forma cristalina, propiedades ópticas y eléctricas, estabilidad, solvatos y solubilidad. Diversos factores tales como el solvente de recristalización, la velocidad de cristalización y la temperatura de almacenamiento pueden hacer que predominen una forma particular de cristal. Los diversos polimorfos pueden administrarse como composiciones farmacéuticas .

En formas de dosificación farmacéutica, los agentes activos pueden administrarase en la forma de sus sales farmacéuticamente aceptables, o también pueden ser utilizados solos o en asoción apropiada, asi como en combinación, con otros compuestos farmacéuticamente activos. Los métodos y excipientes siguientes son solamente ejemplos y de ninguna manera limitantes . Los métodos para preparar diversas composiciones farmacéuticas con una cantidad especifica de un compuesto activo son conocidos o serán evidentes para los expertos en esta técnica. Por ejemplo, véase en Remington Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Ester, Pa., 18th Edition (1990) .

Los excipientes farmacéuticamente aceptables, tales como vehículos, adyuvantes, transportadores o diluyentes, son convencionales en la técnica. Vehículos excipientes adecuados son, por ejemplo, agua, solución salina, dextrosa, glicerol, etanol o similares, y combinaciones de los mismos. Además si se desea, el vehículo puede contener cantidades menores de sustancias auxiliares tales como agentes para el ajuste y regulación del pH, agentes para el ajuste de la tonicidad, estabilizantes, agentes humectantes o agentes emulsificantes . Los métodos reales para preparar tales formas de dosificación son conocidos o serán evidentes para las personas experimentadas en la técnica. Véase, por ejemplo, Remington Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa . , 17th edition, 1985. La composición o formulación que se va a administrar contendrá, en cualquier caso, una cantidad del agente adecuado para alcanzar el estado deseado en el sujeto que esta siendo tratado.

Los agentes activos pueden formularse en preparaciones para inyección disolviendo, suspendiendo o emulsificándolos en un solvente acuoso o no acuoso, tal como aceites vegetales u otros similares, incluyendo aceite de maíz, aceite de castor, glicéridos de ácidos alifáticos sintéticos, ésteres de ácidos alifáticos superiores o propilen glicol; y si se desea, con aditivos convencionales, tales como solubilizantes , agentes isotónicos, agentes de suspensión, agentes emulsificantes , estabilizadores y preservativos.

Las suspensiones acuosas contienen el material activo en mezcla con , excipientes adecuados para la manufactura de suspensiones acuosas. Tales excipientes son agentes de suspensión, por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto y goma acacia,-agentes de dispesión o humectación pueden ser un fosfatido de origen natural, por ejemplo, lecitina o productos de condensación de un oxido de alquileno con ácidos grasos, por ejemplo, estearato de polioxietileno, o productos de condensación de oxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, por ejemplo, heptadecaetileno-oxietanol , o productos de condensación de oxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y un hexitol tal como un polioxietilen sorbitol monooleato, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo, polietilen sorbitano monooleato. Las suspensions acuosas también pueden contener uno o más agentes, y uno o mas agentes endulzantes, tales como sacarosa, sacarina o aspartame .

Las preparaciones farmacéuticas pueden formularse para administración parentérica mediante inyección, por ejemplo, por inyección de bolus o infusión continua. Las formulaciones para inyección pueden presentarse en formas de dosificación unitaria, por ejemplo, en ampollas o en contenedores de dosis múltiples con un preservativo agregado. Las composiciones pueden tomar formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilización y/o dispersión. . Las formulaciones pueden presentarse en contenedores de dosis individuales o dosis múltiples, por ejemplo ampollas y viales sellados, y pueden almacenarse en forma de polvo en una condición de secado por congelación ( liofilizado) que require solamente la adición de un vehículo liquido estérilo, por ejemplo, solución salina o agua estéril libre de pirógenos, inmediatamente antes de su uso. Las soluciones y suspensiones para inyección estéril pueden prepararse a partir de polvos, granulos y tabletas estériles de la clase previamente descrita.

Las formulaciones para administración parentérica incluyen soluciones estériles para inyección acuosas o no acuosas (oleosas) de los compuestos activos que pueden contener antioxidantes, reguladores, biocidas, bacteriostáticos y solutos que hacen que la formulación resulte isotónica con respecto a la sangre del supuesto receptor; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes. Ejemplos de vehículos isotónicos adecuados para uso en tales formulaciones incluyen inyección con cloruro de sodio, solución de Ringer, o inyección con lactate de Ringer. Solventes o vehículos lipofílicos adecuados incluyen ácidos grasos tales como aceite de sésamo, o ásteres de ácidos grasos sintéticos, tales como oleato de etilo o triglicéridos , o liposomas u otros sistemas de micropartículas que pueden utilizarse para dirigir el compuesto hacia los componentes de la sangre en uno o más órganos. La concentración del ingrediente activo en una solución puede variar ampliamente. Típicamente, la concentración del ingrediente activo en la solución va de aproximadamente 1 ng/ml hasta aproximadamente 10 g/ml, por ejemplo, desde aproximadamente 10 ng/ml hasta aproximadamente 1 pg/ml . Las suspensiones de inyecciones acuosas pueden contener sustancias que incrementan la viscosidad de la suspensión, tales como carboximetilcelulosa de sodio, sorbitol o dextrano. Opcionalmente, la suspensión también puede contener estabilizantes o agentes adecuados que incrementan la solubilidad de los compuestos para permitir la preparación de soluciones altamente concentradas.

Las preparaciones farmacéuticas también pueden formularse como una preparación de deposito. Tales formulaciones de acción prolongada pueden administrarse mediante implantación (por ejemplo subcutánea o intramuscular) o por inyección intramuscular. Así, por ejemplo, los compuestos pueden formularse con materiales polímericos o hidrófobos adecuados (por ejemplo como una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico, o como derivados ligeramente solubles, por ejemplo, en forma de una sal ligeramente soluble.

Para administración bucal o sublingual, las composiciones pueden tomar la forma de tabletas, lozenges, pastillas o geles formulados de forma convencional. Tales composiciones pueden comprender el ingrediente activo en una base saborizada tal como sacarosa y acacia o tragacanto.

Las preparaciones farmacéuticas pueden administrarse tópicamente, esto es por administración no sistémica. Esto incluye la aplicación de las composiciones externamente a la epidermis o a la cavidad bucal y la instilación de tal compuesto dentro del oido, ojo y nariz, de tal forma que el compuesto no entra significativamente en la corriente sanguine . En contraste, la administración sistémica se refiere a administración oral, intravenosa, intraperitoneal e intramuscular .

Las preparaciones farmacéuticas adecuadas para administración tópica incluyen preparaciones líquidas o semilíquidas adecuadas para penetrar a través de la piel al sitio de inflamación tales como geles, linimentos, lociones, cremas, ungüentos o pastas, suspensiones, polvos, soluciones, aspersiones, aerosol, aceites y gotas adecuadas para administración al ojo, oido o nariz. Alternativamente, una formulación puede comprender un parche o un emplasto tal como una banda o un emplasto adhesivo impregnado con ingredientes activos y opcionalmente uno o más excipientes o diluyentes. La cantidad de ingrediente activo presente en la formulación tópica puede variar ampliamente. El ingrediente activo puede comprender, para administración tópica, desde 0.001% hasta 10% p/p, por ejemplo desde 1% a 2% en peso de la formulación. Sin embargo puede comprender tanto como 10% p/p pero preferiblemente comprenderá menos de 5% p/p, niás preferiblemente desde 0.1% a 1% p/p de la formulación.

Las formulaciones adecuadas para administración tópica en la boca incluyen lozenges que comprenden el ingrediente activo en una base saborizada, usualmente sacarosa y acacia o tragacanto; pastillas que comprenden el ingrediente activo en una base inerte tal como gelatina o glicerina, o sacarosa y acacia; y enjuagues bucales que comprenden el ingrediente activo en un vehículo liquido adecuado.

Las formulaciones adecuadas para administración tópica en el ojo también incluyen gotas para ojos donde el ingrediente activo esta disuelto o suspendido en un vehículo adecuado, especialmente un solvente acuoso para el ingrediente activo.

Los agentes activos pueden utilizarse en formulación en aerosol para ser administrados a través de inhalación.

Los compuestos de las presentes realizaciones pueden formularse en propelentes aceptables presurizados tales como diclorodifluorometano, propano, nitrógeno y similares.

Adicionalmente, los agentes activos pueden hacerse en supositorios mezclándolos con una variedad de bases tales como bases emulsificantes o bases soluble en agua. Los compuestos de las presentes realizaciones pueden administrarse por vía rectal con un supositorio. El supositorio puede incluir vehículos tales como manteca de cacao, carboceras y polietilenglicoles , con un punto de fusión a temperatura corporal, si bien se solidifican a temperatura ambiente .

Para preparaciones orales, los agentes activos pueden utilizarse solos o en combinación con aditivos apropiados para hacer tabletas, polvos, granulos o cápsulas con aditivos convencionales, tales como lactosa, manitol, almidón de maíz o almidón de patata; con enlazantes tales como celulosa cristalina, derivados de celulosa, acacia, almidón de maíz, o gelatinas; con desintegradores, tales como almidón de maíz, almidón de patata o carboximetilcelulosa de sodio; con lubricantes, tales como talco o estearato de magnesio; y si se desea, con diluyentes, agentes reguladores, agentes humidificadores , preservativos y agentes saborizantes . Para enjuagues orales, las preparaciones pueden hacerse de una forma convencional en la técnica.

Pueden proveerse formas de dosificación unitaria para administración oral o rectal tales como jarabes, elixires y suspensiones donde cada unidad de dosificación, por ejemplo, una cucharadita, una cucharada, una tableta o supositorio comprende una cantidad predeterminada de la composición que contiene uno o más inhibidores. De la misma forma, las formas de dosificación unitaria para inyección o administración intravenosa pueden comprender el o los inhibidores en una composición tal como una solución en agua estérilo, solución salina normal u otro vehículo farmacéuticamente aceptable .

Algunos butanos catecólicos son compuestos solubles en agua, o hidrofílicos . Algunas realizaciones incluyen la formulación de compuestos hidrofílicos en un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable y la liberación del detal en forma de formulaciones orales, tales como en la forma de una solución líquida acuosa del compuesto, o los compuestos pueden ser liofilizados y administrados como un polvo, convertido en una tableta, o bien los compuestos pueden ser encapsulados .

Las tabletas aquí pueden ser tabletas con recubrimientos entéricos . Las formulaciones presentes pueden ser de liberación sostenida, bien sea formulaciones de liberación lenta o liberación rápida.

La cantidad de butanos catecólicos que se va a incluir en las formulaciones orales puede ajustarse dependiendo de la dosis deseada que se va a administrar a un sujeto. Tal ajuste está dentro de la habilidad de las personas que son prácticas en la técnica.

Algunos butanos catecólicos son compuestos hidrófobos o lipofílicos. La absorción de compuestos lipofílicos en el intestino puede mejorarse utilizando vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden potenciar la rata o grado de solubilización del compuesto en el fluido acuoso intestinal . Los vehículos lipidíeos son conocidos en la técnica. Las formulaciones presentes pueden ser administradas como líquidos orales o pueden encapsularse en diversos tipos de cápsula.

Las presentes realizaciones incluyen, en un ejemplo, una formulación que contiene butanos catecólicos lipofílicos que se formulan para administración oral mediante disolución de tales compuestos en triacilgliceroles y la formulación se encapsula entonces para administración oral. Los triacilgliceroles son moléculas con ácidos grasos de cadena larga y/o media enlazados a una molécula de glicerol. Los ácidos grasos de cadena larga varían desde aproximadamente Ci4 a C24 , y pueden encontrarse en grasas communes . Los ácidos grasos de cadena media varían desde aproximadamente C6 hasta C12, y pueden encontrarse en aceite de coco o aceite de semilla de palma. Los triacilglicerol adecuados para su uso aquí incluyen lípidos estructurados que contiene mezclas de ácidos grasos bien sea de cadena corta o de cadena media o ambos, esterificados sobre la misma molécula de glicerol.

En otra realización, pueden añadirse uno o más surfactantes a una mezcla de butanos catecólicos y un vehículo lipídico de tal forma que el fármaco esta presente en finas gotitas de una mezcla aceite/surfactante . Los surfactantes pueden actuar para dispersar la formulación acuosa por dilución en el fluido gastrointestinal.

Las presentes realizaciones también incluyen una formulación para administración oral de los butanos catecólicos en forma de una microemulsión que contiene un surfactante hidrofílico y el aceite. Las partículas en microemulsión pueden ser micelios surfactantes que contienen aceite y fármacos solubilizados .

Las formulaciones adecuadas para administración oral pueden presentarse en unidades discretas tales como cápsulas, pildoras o tabletas conteniendo cada una una cantidad predeterminada del ingrediente activo; en forma de polvo o gránulos; en forma de una solución o suspensión en un liquido acuoso o en un liquido no acuoso; o como una emulsión líquida de aceite en agua o una emulsión líquida de agua en aceite. El ingrediente activo también puede presentarse en forma de un bolus, electuario o pasta.

Las preparaciones farmacéuticas que pueden utilizarse oralmente incluyen tabletas, cápsulas de ajuste hechas de gelatina, tales como cápsulas suaves selladas hechas de gelatina y un plastificante , tales como glicerol o sorbitol . Las tabletas pueden hacerse por compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios. Las tabletas comprimidas pueden prepararse comprimiendo en una maquina adeucada el ingrediente activo en una forma de flujo libre tal como polvo o gránulos, mezclado opcionalmente con enlazantes (por ejemplo, povidona, gelatina, hidroxipropilmetilcelulosa) , diluyentes inertes, preservativos, desintegrantes (por ejemplo, glicolato de sodio almidón, povidoma entrecruzada, carboximetilcelulosa de sodio entrecruzada) o agentes lubricantes, actividad suoerficial o dispersantes. Las tabletas moldeadas pueden hacerse moldeando en una máquina adecuada una mezcla humectada del compuesto pulverizado con un diluyente líquido inerte. Las tabletas pueden recubrirse opcionalmente o marcarse y pueden formularse de tal forma que provean liberación lenta o controlada del ingrediente activo que la contiene. Las tabletas pueden proveerse opcionalmente con un recubrimiento entérico, para proporcionar una liberación en partes del intestino diferentes al estómago. Todas las formulaciones para administración oral estarían en dosis adecuada para tal administración. Las cápsulas de ajuste pueden contener los ingredientes activos en mezclas con agentes de relleno tales como lactosa, enlazantes tales como almidones, y/o lubricantes tales como talco o estearato de magnesio y, opcionalmente, estabilizantes. En cápsulas suaves, los compuestos activos pueden disolverse o suspenderse en líquidos adecuados, tales como ácidos grasos, parafina líquida o polietilen glicoles líquidos. Además, pueden añadirse estabilizantes. Los núcleos de grageas se proveen con recubrimientos adecuados. Para este propósito, se pueden utilizar soluciones concentradas de azúcar, las cuales contienen opcionalmente goma ar biga, talco, polivinilpirrolidina, carbopol gel, polietilenglicol y/o dioxido de titanio, soluciones de laqueado, y solventes orgánicos adecuados o mezclas de solventes. Pueden añadirse colorantes o pigmentos a las tabletas o recubrimiento de las grageas para identificación o para caracterizar diferentes combinaciones de dosis del compuesto activo.

También adecuadas para la administración oral son formulaciones de los butanos catecólicos en una preparación de naopartículas lipidíeos sólidas. Las nanopartículas lipidíeos sólidas pueden prepararse de cualquier manera convencional en la técnica.

En una realización, la nanopartículas lipidíeos sólida pueden prepares en un proceso de homogenización en caliente por homogenización de los lípidos fundidos a temperatura elevada. En ese proceso, el lípido sólido se funde y el butano catecólico se disuelve' en el lípido fundido. Se mezcla entonces un medio de dispersión precalentado con el lípido fundido cargado con el fármaco, y la combinación se mezcla en un homogenizador para formar una preemulsion gruesa. Se lleva a cabo una homogenización a alta presión a una temperatura por encima del punto de fusión de los líquidos para producer una nanoemulsión aceite/agua. La nanoemulsión se enfria hasta temperatura ambiente para formar nanopartículas lipidíeos sólidas .

En otra realización, las nanopartículas lipídicas sólidas son preparadas en un proceso de homogenización en frío. En este proceso, el lípido es un fundido y el butano catecólico se disuelve en el lípido fundido. el lípido cargado con el fármaco se solidifea entonces en nitrógeno líquido o hielo seco. El sólido fármaco- lípido es triturado en un molino de potencia para formar partículas de 50 - 100 µp?. las partículas lipídicas se dispersan entonces en un medio de dispersión acuoso frío y se homogenizan a temperatura ambiente o por debajo para formar nanopartículas lipidíeos sólidas .

También se proporciona aquí, en un ejemplo, una formulación de los butanos catecólicos lipofílicos en liposomas o micelas para administración oral. Estas formulaciones pueden hecerse de cualquier manera convencional en la técnica. Las micelas son típicamente vesículas lipidíeos monocapa en las cuales el fármaco hidrófobo se asocial con las regiones hidrófobas en la monocapa. Los liposomas son típicamente vesículas de fosfolípidos bicapa. Un butano catecólico lipofílico típicamente residirá en el centro de estas vesículas.

También se proporcionan aquí, en otro ejemplo, la formulación de butanos catecólicos para administración intravenosa. Los butanos catecólicos pueden formularse para inyección en animales con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Los vehículos incluyen, pero no se limitan a uno o mas agentes solubilizantes y/o un excipiente tal como, por ejemplo: (a) un solvente orgánico soluble en agua diferente al dimetil sulfoxido; dado que cuando el solvente orgánico soluble en agua es propilen glicol, el propilen glicol esta en ausencia de petrolato blanco, en ausencia de goma de xantana (tambié conocida como goma de xantamo y goma de xantamo) y en ausencia de al menos entre glicerina y glicina.

También adecuadas para administración oral son administraciones de los butanos catecólicos en una preparación de nanopartículas lipídicas sólidas. Las nanopartículas sólidas pueden prepararse de cualquier manera convencional en la técnica.

En una realización, la nanopartícula lipídica sólida puede prepararse en un proceso de homogenización en caliente por homogenización de los lípidos fundidos a temperatura elevada. En ese proceso el lípido sólido se funde y el butano catecólico se disuelve en el lípido fundido. Se mezcla entonces un medio de dispersión precalentado con el lípido fundido cargado con el fármaco, y la combinación se mezcla en un homogenizador para formar una preemulsion gruesa. Se lleva a cabo una homogenización a alta presión a una temperatura por encima del punto de fusión de los lípidos para producir una nanoemulsión aceite/agua. La nanoemulsión se enfría hasta temperatura ambiente para formar nanopartículas lipídicas sólidas .

En otra realización, las nanopartículas lipídicas sólidas pueden prepararse en un proceso de homogenización en frío. En este proceso, el lípido es fundido y el butano catecólico se disuelve en el lípido fundido. El lípido cargado con el fármaco se solidifica entonces en nitrógeno líquido o hielo seco. El sólido fármaco - lípido es triturado en un molino de potencia para formar partículas de 50 - 100 pm. las partículas lipídicas se dispersan entonces en un medio de dispersión acuoso frío y se homogenizan a temperatura por debajo para formar nanopartículas lipídicas sólidas .

También se proporciona aquí, en un ejemplo, una formulación de los butanos catecólicos lipofílicos en liposomas o micelas para administración oral. Estas formulaciones pueden hacerse de cualquier manera convencional en la técnica. Las micelas son típicamente vesículas lipídicas monocapa en las cuales el fármaco hidrófobo se asocia con las regiones hidrófobas en la monocapa. Los liposomas son típicamente vesículas de fosfolípidos bicapa. Un butano catecólico lipofílico típicamente residirá en el centro de estas vesículas. También se proporcionan aquí, en otro ejemplo, la formulación de butanos catecólicos para administración intravenosa. Los butanos catecólicos pueden formularse para inyección en animales con un vehículo f rmacéuticamente aceptable. Los vehículos incluyen, pero no se limitan a uno o más agentes solubilizantes y/o un excipiente tal como, por ejemplo: (a) un solvente orgánico soluble en agua diferente al dimetil sulfoxido; dado que cuando el solvente orgánico soluble en agua es propilen glicol, el propilen glicol está en ausencia de petrolato blanco, en ausencia de goma de xantano (también conocida como goma de xantamo y goma de xantamo) y en ausencia de al menos uno entre glicerina y glicina, cuando el solvente orgánico soluble en agua es polietilen glicol, el polietilen glicol está presente en ausencia de ácido ascórbico o hidroxitolueno butilado ( "BHT" ) , y cuando el polietilen glicol es polietilen glicol 400, el polietilen glicol 400 está presente en ausencia de polietilen glicol 8000; (b) una ciclodextrina; (c) un surfactante iónico, no iónico o anfifático, bajo la suposición de que cuando el surfactante es un surfactante no iónico, el surfactante no iónico está presente en ausencia de goma de xantano; (d) una celulosa modificada; € un lipido insoluble en agua o diferente a aceite de castor; o una combinación de cualquiera de los vehículos (a) - (e) . t Las composiciones farmacéuticas pueden estar en la forma de una solución acuosa estéril inyectable. Entre los vehículos y solventes aceptables que pueden emplearse están agua, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro de sodio. La preparación inyectable estéril también puede ser una microemulsión aceite-en-agua estéril inyectable donde el ingrediente activo se disuelve en la fase oleosa. Por ejemplo, el ingrediente activo puede ser primero disuelto en una mezcla de aceite de soja y lecitina. La solución oleosa se introduce luego en una mezcla de agua y glicerol y se procesa para formar una microemulsión. Las soluciones o microemulsiones inyectables pueden introducirse en la corriente sanguínea de un paciente mediante inyección de bolus local. Alternativamente, puede ser ventajoso administrar la solución de microemulsión de tal forma que mantenga una concentración circulante con instante del compuesto presente. Con el fin de mantener tal concentración, puede utilizarse un dispositivo de administración intravenosa continua. Un ejemplo de tal dispositivo es la bomba intravenosa de Deltec CADD-PLUS™ modelo 5400. Las composiciones farmacéuticas pueden estar en la forma de una solución estéril inyectable o suspensión oleaginosa para administración intramuscular y subcutánea. Está suspensión puede formularse de acuerdo con la técnica conocida y utilizando aquellos agentes dispersantes o humedificantes adecuados y agentes de suspensión que han sido mencionados anteriormente. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión' inyectable estéril en un diluyente o solvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, en una solución en 1 , 3 -butanodiol . Además, se emplean convencionalmente aceites estériles fijos como solvente o medio de suspensión. Para este propósito puede emplearse cualquier aceite blando fijo que incluya mono o diglicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos tales como ácido oleico encuentran uso en la preparación de inyectables .

También se proporciona aquí una formulación de los butanos catecólicos para administración intraarterial , acompañando o no la perturbación de una barrera sangre cerebro ( "BBBD" ) , sin oclusión tal como una quimioemobolización de la artería hepática. En resumen, cuando los butanos catecólicos se administran de forma intraarterial con oclusión, las arterias primarias que llegan al sitio objetivo son cateterizadas y los butanos catecólicos pueden aplicarse a través de un catéter. La embolización de las arterias, con el fin de mantener los butanos catecólicos en el sitio objetivo durante un periodo más largo, puede llevarse a cabo utilizando partículas de alcohol polivinilico solas o en combinación con espirales. La administración intraraterial de los butanos catecólicos puede incluir composiciones solubles en agua. Los fármacos o agentes aquí pueden ser disueltos en solución salina antes de la inyección intraarterial y tal inyección puede ser precedida por tratamiento con heparina y sedación.

La perturbación osmótica de la barrera sangre cerebro ("BBB") puesto que es convencional en la técnica puede acompañar la administración intraarterial de los agentes presentes. Tal procedimiento puede utilizarse para incrementar la transferencia de fármacos en el sistema nervioso central ("CNS") preferiblemente justo antes de la administración intraarterial. Para tal perturbación se coloca un catéter en una arteria, usualmente la arteria temporal superficial, que lleva al cerebro y la BBB es perturbada con una solución de manitol . El procedimiento invasivo se lleva a cabo típicamente mientras el paciente está bajo anestesia general. Tal tratamiento puede requerir una hidratación y administración de anticonvulsivo y/o atropina previa.

También se proporciona aquí como en un ejemplo, una formulación de butanos catecólicos para administración intranasal y administración intranasal de los mismos. La administración intranasal puede llevarse a cabo ventajosamente a una concentración más alta de los agentes activos en el cerebro que la que puede ser alcanzada por administración intravenosa. También, este modo de administración evita el problema de pasar primero el metabolismo en el hígado y tracto digestivo del sujeto que esta recibiendo el fármaco.

La cantidad de los agentes activos que pueden absorberse depende parcialmente de la solubilidad del fármaco en el moco, una composición que consiste aproximadamente de 95% de solución en agua de proteínas de suero, glicoproteínas , lípidos y electrolitos. En general, puesto que la lipofilicidad de los agentes activos aquí se incrementa, la concentración de fármacos en el CSF también se incrementa.

Los butanos catecólicos hidrofilicos pueden disolverse en un vehículo farmacéuticamente aceptable tal como solución salina, regulador de fosfato, o solución salina regulada con fosfato. En una realización, puede utilizarse como vehículo regulador de fosfato 0.05 M a pH 7.4.

La administración intranasal de los presentes agentes puede utilizarse ajustando la posición del sujeto cuando se administran los agentes. Por ejemplo, la cabeza del paciente puede ser posicionada de manera diversa hacia arriba de 90°, en posición supina a 90°, supina a 45° o supina a 70°, para obtener un máximo efecto.

El vehículo de la composición de los butanos catecólicos puede ser de cualquier material sea farmacéuticamente aceptable compatible con los agentes activos de la composición. Cuando el vehículo es un líquido, puede ser hipotónico o isotónico con los fluidos nasales y dentro del pH de aproximadamente 4.5 a aproximadamente 7.5. cuando el vehículo está en forma pulverizada también está dentro de un rango de pH aceptable .

La composición de vehículo para administración intranasal puede contener opcionalmente sustancias lipofílicas que puedan potenciar la absorción de los agentes activos a través de la membrana nasal y así al cerebro a través de la ruta neural olfatoria. Ejemplos de tales sustancias lipofílicas incluyen, pero no se limitan a, gangliósidos y fosf tidilserina . Pueden incluirse uno o varios adyuvantes lipofilicos en la composición tales como, en la forma de micelas. La composición farmacéutica de los agentes activos para la administración intranasal a un sujeto para el tratamiento de las enfermedades, trastornos o condiciones presentes pueden formularse de manera convencional en la técnica tal como se describe en, por ejemplo, la patente de los Estados Unidos No. 6,180,603 que se incorpora aquí como referencia. Por ejemplo, la composición puede formularse como polvo, gránulos, solución, aerosol, gotas, nanopartículas o liposomas. Además de los agentes activos, la composición puede contener adyuvantes apropiados, reguladores, preservativos, sales. Las soluciones tales como gotas nasales pueden contener antioxidantes, reguladores y similares. Los butanos catecólicos pueden administrarse a un sujeto para tratamiento mediante implantación quirúrgica en un sitio deseado, tal como por implantación de un polímero biodegradable que contiene el butano catecólico.

Así, el polímero biodegradable presente puede ser cualquier polímero o copolímero que se disolvería en el fluido intersticial, sin ninguna toxicidad o efecto adverso en los tejidos huésped. Preferiblemente, el polímero o monómeros a partir de los cuales se sintetiza el polímero esta aprobado por la Food y Drug Administration para administración en humanos. Se prefiere un copolímero que tenga monómeros de diferentes propiedades de disolución de manera que se controle la dinámica de la degradación, tal como mediante el incremento de la proporción de un monómero sobre el otro para controlar la rata de disolución.

En una realización, el polímero es un copolímero de 1,3-bis- (p-carboxifenoxi) propano y ácido sebacico [p(CPP.SA)], tal como se describe en Fleming A. B. y Saltzam, . . , Pharmacokinetics de the Carmustine Implant, Clin.

Pharmacokinet, 41: 403 - 419 (2002), y Brem, H. y Gabikian, P. (2001) . En otra realización, el polímero es un copolímero de polietilen glicol ("PEG") y ácido sebácico, tal como se describe en Fu, J. et al., (2002) Biomaterials , 23: 4425 -4433.

Los sistemas de administración poliméricos son aplicables a la administración tanto de butanos catecólicos hidrófobos como hidrofílieos descritos aquí. Los butanos catecólicos pueden combinarse con los polímeros biodegradables e implantarse quirúrgicamente en el sitio deseado o afectado. Algunas composiciones poliméricas también son utilizables para terapia intravenosa o por inhalación aquí .

Los butanos catecólicos pueden administrarse sistémicamente y/o localmente por administración a los pulmones a través de la inhalación. La administración por inhalación de fármacos a sido bien aceptada como método para alcanzar una concentración alta de fármaco en los tejidos pulmonares sin disparar la toxicidad sistémica sustancial, así como método para alcanzar una circulación sistémica del fármaco. Las técnicas para producir tales formulaciones son convencionales en el arte. La eficacia co9ntra las enfermedades pulmonares puede verse bien con butanos catecólicos hidrófobos o hidrofilicos , administrados de esta forma .

Para administración pulmonar a través de inhalación, los butanos catecólicos pueden formularse en polvos secos, soluciones acuosas, liposomas, nanopartículas o polímeros y administrarse, por ejemplo, en forma de aerosoles. Las formulaciones hidrofílicas también pueden tomarse a través de las superficies alveolares y dentro de la corriente sanguínea para aplicaciones sistémicas .

En una realización, los polímeros que contienen los agentes activos aquí se hacen y utilizan como se describen en Fu, J. et al., (2002) supra . Por ejemplo, los polímeros aquí pueden ser polímeros del ácido sebácico y polietilen glicol ("PEG") o pueden ser ácido poli ( láctico-co-glicólico) ( "PLGA" ) , o polímeros de polietilenimina ("PEI") o poli-L-lisina ( "PLL" ) .

En otra realización, los butanos catecólicos para administración por inhalación pueden disolverse en solución salina o etanol antes de la nebulización y luego administrarse .

En una realización adicional, los agentes aquí también son efectivos cuando se administran en forma de un polvo seco, preparado de la manera convencional en la técnica.

En una realización, la administración de compuestos NDGA puede lograrse mediante la ayuda de microprocesadores embebidos en los dispositivos de administración de fármacos, tales como por ejemplo, SmartMist y AERx .

La dosis apropiada para ser administrada depende del sujeto que se va a tratar, así como de la salud general del sujeto, la edad del sujeto, el estado de la enfermedad o condición, el peso del sujeto, el tamaño del tumor, por ej emplo .

Pueden formularse composiciones farmacéuticas para una ruta de administración tal como, por ejemplo, administración intranasal; administración oral; administración por inhalación; administración subcutánea; administración transdérmica; administración intraarterial , con o sin oclusión; administración intracraneal; administración intraventricular; administración intravenosa; administración bucal, administración intraperitoneal ; administración intraocular; administración intramuscular; administración por implantación; y administración venosa central. En una realización el butanos catecólico se formula para administración oral. En otra realización, el butano catecólico se formula para administración intravenosa.

Un agente activo puede administrarse en una dosis individual, o más típicamente en dosis múltiples. Las dosificaciones preferidas para un agente dado se determina fácilmente para una persona de experiencia en la técnica mediante una variedad de métodos. Otras dosificaciones efectivas pueden determinarse fácilmente mediante una persona experimentada en la técnica a través de pruebas de rutina que establecen curvas de respuesta a las dosis. La cantidad de agente, por supuesto variara dependiendo del agente particular usado.

La frecuencia de administración del agente activo, así como sucede con las dosis, será determinada por el médico con base en la edad, peso, estado de la enfermedad, estado de salud y respuesta del paciente. Así, los agentes pueden administrarse una o más veces al día, semanalmente , mensualmente o según sea apropiado tal como se determine de forma convencional. Los agentes pueden ser administrados de forma intermitente, tal como durante un periodo de días, semanas o meses, luego sin repetir hasta que cierto tiempo haya transcurrido, tal como 3 o 6 meses, y luego administrarse de nuevo durante un periodo de días, semana o meses .

Las formas de dosificación unitarias para la inyección o administración intravenosa puede comprender el API en una composición tal como una solución en agua estérilo, solución salina normal u otro vehículo farmacéuticamente aceptable.

MECANISMO DE LOS BUTANOS CATECÓLICOS Sin pretender limitarse por un mecanismo de acción, los presentes inventores han descubierto que los compuestos aquí descritos tienen propiedades antiproliferativas a través de la inhibición dual de las tiroxina quinasas receptoras (RTKs) EGFR e IGF-IR. el mecanismo de acción del fármaco está relacionado con su capacidad para actuar como inhibidor dual de la quinasa de EGFR e IGF- IR.

Hay múltiples medios de interacción entre el receptor (IGF-1R) similar a la insulina del factor de crecimiento 1 y el receptor epidérmico del factor de crecimiento (EGFR) de forma que juntos tienen un impacto significativo sobre la biología del tumor y la terapia para el cáncer. La interacción viene de un grado de redundancia en su función, señalizando ambos receptores a través de rutas proliferativas y de supervivencia compartidas. Además, existe una comunicación entre las dos rutas de señalización de los dos receptores, de tal forma que la señalización a través de un receptor puede activar el otro receptor a través de mecanismos ligando-dependientes o independientes.

Esta redundancia y entrecruzamiento presenta problemas significativos para terapias anticáncer dirigidas. Las intervenciones dirigidas hacia el bloqueo de la función del EGFR puede limitarse en su eficacia en células para las cuales la señalización del IGF- IR puede activar muchas de las moléculas efectoras corrientes abajo involucradas en la mediación de los efectos de EGFR. La sensibilidad reducida a la inhibición de IGF-IR puede deberse también a una expresión o activación incrementadas de EGFR. De forma más importante, la resistencia a los fármacos que se desarrolla en el tratamiento de EGFR y HER2 está asociada con una superregulación de la ruta de señalización de IGF- IR. este potenciamiento en la señalización de IGF- IR puede rodear la inhibición de EGFR proveyendo una proliferación alternativa y señales de supervivencia, y también incrementando la producción de los ligandos de EGFR o estimulando independientemente la activación de EGFR a través de la fosforilación .

El papel del IGF- IR en la resistencia desarrollada a los agentes dirigidos a EGFR sugiere tanto una terapia prometedora nueva para las poblaciones resistentes a los fármacos, como una estrategia mejorada para tratar los tumores impulsados por la actividad de EGFR. El soporte de este método, las líneas celulares con resistencia desarrollada a Gefitinib (Iressa®) presentan una superregulación de la señalización de IGF- IR y una sensibilidad incrementada a las terapias dirigidas a IGF- IR.

Aunque el NDGA es conocido predominantemente como un inhibidor de las enzimas lipoxigenasa 5' y 12', los presentes inventores han mostrado que esta molécula inhibe directamente la actividad de la tiroxina quinasa de IGF- IR y EGFR purificados con mayor afinidad que sus acciones contra la lipoxigenasa purificada. Véase la figura 1. El NDGA es un agente prometedor para el tratamiento de tumores que sobreexpresan EGFR e IGF-IR para prevenir la circunvalación del EGFR.

La inhibición de la actividad de EGFR y/o IGF- IR incluye reducir la actividad de estas moléculas. El término "inhibe" y sus conjugaciones gramaticales, tales como "inhibidor!, no pretenden requerir la reducción completa de actividad de EGFR y/o IGF- IR. Tal reducción puede ser al menos de aproximadamente 10%, al menos aproximadamente 15%, al menos aproximadamente 20%, al menos aproximadamente 25%, al menos aproximadamente 30%, al menos aproximadamente 35%, al menos aproximadamente 40%, al menos aproximadamente 45%, al menos aproximadamente 50%, al menos aproximadamente 75%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 85%, al menos aproximadamente 90%, o al menos aproximadamente 95% de la actividad de la molécula en ausencia del efecto inhibidor, por ejemplo, en usencia de un inhibidor, tal como un butano catecólico descrito aquí. El término también se refiere a una reducción observable o medible en la actividad. En escenarios de tratamiento, preferiblemente la inhibición es suficiente para producir un beneficio terapéutico y/o profiláctico en la condición que esta siendo tratada. La frase "no inhibe" y sus conjugaciones gramaticales no requieren una falta completa de efecto sobre la actividad. Por ejemplo, se refiere a situaciones donde es menos de aproximadamente 50%, menos de aproximadamente 40%, menos de aproximadamente 30%, menos de aproximadamente 20%, menos de aproximadamente 10%, o menos de aproximadamente 5% de reducción en la actividad de EGFR y/o IGF- IR en presencia de un inhibidor tal como un butano catecólico descrito aquí.

USOS DE BUTANOS CATECOLICOS Los butanos catecólicos pueden sensibilizar el cáncer u otras enfermedades proliferativas frente a terapias convencionales así como resensibilzar el cáncer u otras enfermedades proliferativas después que han adquirido resistencia a tales terapias convencionales. Las realizaciones aquí descritas proporcionan un método para inhibir tanto EGFR como IGF-IR en una células, comprendiendo poner en contacto una célula en la cual se desea la inhibición de tanto EGFR como de IGF-IR con un butano catecólico tal como se describe aquí. Puesto que los compuestos descritos aquí son inhibidores de quinasa duales, son herramientas de investigación útiles para el estudio in vitro del papel de EGFR e IGF- IR en procesos biológicos.

Verificación Se proporcionan aquí métodos para seleccionar sujetos para niveles de actividad de IGF-lR y de EGFR tiroxina quinasa, que comprenden: (i) analizar una muestra obtenida de un sujeto que comprende niveles de medición de IGF- IR y EGFR; y (ii) comparar los nivels de IGF-lR y EGFR en la muestra con los niveles en un control.

Se proporcionan aquí métodos para determinar un tratamiento de una enfermedad, que comprende: (i) analizar una muestra obtenida de un sujeto que comprende niveles de medición de IGF- IR y EGFR, y (ii) comparar los niveles del IGF-IR y EGFR en la muestra con los niveles en un control; donde los niveles incrementados de IGF- IR, EGFR o ambos en comparación con el control indican que el sujeto debe ser tratado con un inhibidor dual de tiroxina quinasa. En una realización, el inhibidor dual de tiroxina quinasa es un butano catecólico tal como se describe aquí .

En una realización, el nivel de expresión de EGFR esta a niveles de línea base o mayores que los niveles de línea base y el nivel de expresión de IGF- IR esta a niveles de línea base o mayor que a niveles de línea base. En otra realización, el nivel de expresión de EGFR está a niveles de línea base y el nivel de IGF-IR en su expresión es don veces mayor que los niveles de línea base o más. En otra realización, el nivel de expresión de IGF-1R está a niveles de línea base y el nivel de expresión de EGFR es dos veces mayor que los niveles de línea base o mayor. En otra realización, el nivel de expresión de IGF- IR es dos veces mayor que los niveles de línea base o más y el nivel de expresión de EGFR es dos veces mayor que los niveles de línea base o más .

En un aspecto, el IGF- IR y el EGFR pueden analizarse (a) introduciendo en un sujeto un anticuerpo marcado dirigido contra IGF- IR y un anticuerpo marcado dirigido contra EGFR y (b) detectando dichos anticuerpos marcados mediante técnicas de imágenes estándar. Un anticuerpo puede ser marcado con un marcador radioactivo cuya presencia y localización en un sujeto puede detectarse mediante técnicas de imágenes estándar. En una realización, el marcador radioactivo es diferente para dicho anticuerpo dirigido contra IGF- IR y dicho anticuerpo dirigido contra EGFR.

En un aspecto, el método puede comprender adicionalmente la administración a un sujeto de un compuesto farmacéutico capaz de inhibir la actividad de tiroxina quinasa de IGF- IR y EGFR, donde dicho compuesto farmacéutico es un butano catecólico que inhibe IGF- IR y EGFR.

Para verificar la expresión del biomarcador celular de la célula tumoral, pueden utilizarse muestras de pacientes que contienen células tumorales, o proteínas o ácidos nucléicos producidos por estas células tumorales en métodos descritos, por ejemplo, en la publicación de los Estados Unidos No'. 20070065858, la cual se incorpora en su totalidad como referencia aquí. En resumen, el nivel de expresión del biomarcador puede establecerse verificando la cantidad (por ejemplo, cantidad o concentración absoluta) del marcador en una muestra de célula tumoral, por ejemplo, una biopsia de tumor obtenido de un paciente, u otra muestra de un paciente que contiene material derivado del tumor (por ejemplo, sangre, suero, orina u otros fluidos corporales o excreciones tal como se describe aquí más arriba) . La muestra celular puede desde luego, estar sometida a una variedad de técnicas preparativas y de almacenamiento post recolección bien conocidas (por ejemplo, extracción de ácidos nucléicos y/o proteínas, fijación, almacenamiento, congelación, ultrafiltración, concentración, evaporación, centrifugación, etc.) antes de verificar la cantidad del marcador en la muestra. De la misma forma, las biopsias de tumores pueden también ser sometidas a técnicas preparativas y de almacenamiento post recolección, por ejemplo fijación.

Se puede detectar la expresión de proteínas biomarcadoras que tienen al menos una porción que se presentan en la superficie de las células tumorales que la expresan. Se puede determinar si una proteína marcadora o una porción de la misma esta expuesta sobre la superficie celular. Por ejemplo, pueden utilizarse métodos inmunológicos para detectar tales proteínas en células completas, o métodos de análisis de secuencia basados en ordenador bien conocidos que se pueden utilizar para predecir la presencia de al menos un dominio extracelular (esto es, incluyendo tanto las proteínas secretadas como las proteínas que tienen al emnos un dominio en la superficie celular) . La expresión de un proteína marcadora que tiene al menos una porción que se presenta sobre la superficie de una célula que la expresa puede ser detectada sin someter necesariamente a lisis la célula tumoral (por ejemplo, utilizando un anticuerpo marcado que se enlaza específicamente con un dominio de la superficie celular de la proteína) .

La expresión de los biomarcadores puede establecerse por medio de una amplia variedad de métodos bien conocidos para detectar la expresión de un ácido nucleico o proteína transcritos. Ejemplos no limitantes de tales métodos incluyen, por ejemplo, lo métodos inmunológicos para la detección de proteínas secretadas, de la superficie celular, citoplasmáticas o nucleares, métodos de purificación de proteínas, pruebas para función o actividad proteínica, métodos para hibridización de ácidos nucléicos, métodos para la transcripción reversa de ácidos nucléicos, y métodos para la amplificación de ácidos nucléicos o cualquier otro método conocido en la técnica.

La expresión de un biomarcador puede verificarse utilizando un anticuerpo (por ejemplo, un anticuerpo radio marcado con cromoforo, marcado con fluoroforo, o marcado con una enzima) un derivado de anticuerpo (por ejemplo, un anticuerpo derivado con un sustrato o con la proteína oligando de un par proteína-ligando) por ejemplo, biotina-estreptavidina) , o un fragmento de anticuerpo (por ejemplo, un anticuerpo de cadena sencilla, un dominio hipervariable de un anticuerpo aislado, etc.) que se enlaza específicamente a una proteína biomarcadora o un fragmento de la misma, incluyendo una proteína biomarcadora que ha sufrido todas o una porción de las modificaciones post traslacionales a las cuales normalmente está sujeta en la célula tumoral (por ejemplo, glicosilación, fosforilación, metilación, etc.).

La expresión de un biomarcador también puede verificarse preparando ARNm/ADNc (esto es, un polinucleótido transcrito) a partir de células en una muestra del paciente, e hibridizando el ARNm/ADNc por un polinucleótido de referencia que es un complemento de un ácido nucleico biomarcado, o un fragmento del mismo, pudiéndose opcionalmente amplificar el ADNc utilizando cualquiera de una variedad de métodos de reacción en cadena de polimerasa antes de la hibridización con el polinucleótido de referencia. La expresión de uno o más biomarcadores puede detectarse de la misma forma utilizando PCR cuantitativo para verificar el nivel de expresión de uno o más de los biomarcadores. Alternativamente, cualquiera de los muchos métodos conocidos para detectar mutaciones o variantes (por ejemplo, polimorfismos simples de nucleótidos, eliminaciones, etc.) de un biomarcador puede utilizarse para detectar la presencia de un biomarcador en un paciente.

Una mezcla de polinucleótidos transcritos obtenidos de la muestra puede ponerse en contacto con un sustrato que ha sido fijado a un polinucleótido complementario a u homologo con al menos una porción (por ejemplo, al menos 7, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 100, 500 o más residuos de nucleótidos) de un ácido nucleico biomarcador. Si los polinucleótidos complementarios a, u homólogos con son detectables de forma diferencial sobre el sustrato (por ejemplo, detectables utilizando diferentes cromóforos o fluoróforos, o fijados a posiciones seleccionadas diferentes) , entonces los niveles de expresión de una pluralidad de biomarcadores pueden verificarse simultáneamente utilizando un sustrato (por ejemplo, una microdisposición "chip de gene" o polinucleótidos fijados en posiciones seleccionadas) . Cuando se utiliza un método para verificar la expresión del biomarcador que involucra la ibridización de un ácido nucleico con otro, la hibridización puede llevarse a cabo bajo condiciones de hibridización restrictivas.

Cuando se utiliza una pluralidad de biomarcadores en los métodos aquí descritos, el nivel de expresión de cada biomarcador en una muestra de paciente puede compararse con el nivel de expresión normal de cada uno de la pluralidad de biomarcadores en muestras no cancerosas del mismo tipo, bien sea en una mezcla de reacción sencilla (esto es, utilizando reactivos, tales como diferentes sondas fluorescentes, para cada biomarcador) o en mezcla de reacciones individuales correspondientes a uno más de los biomarcadores.

El nivel de expresión de un biomarcador en un tejido humano normal (esto es, no canceroso) puede verificarse en una variedad de formas. Este nivel normal de expresión puede establecerse verificando el nivel de expresión del biomarcador en una porción de células que parezcan no ser cancerosas, y luego comparando el nivel normal de expresión con el nivel de expresión en una porción de las células tumorales . Como información adicional que se hace disponible como resultado' de la ejecución rutinaria de los métodos aquí descritos, pueden utilizarse los valores de promedio de población de expresión normal de los biomarcadores . Alternativamente, el nivel normal de expresión de un marcador puede determinarse verificando la expresión de biomarcador en una muestra de paciente obtenida a partir de un paciente no afligido por cáncer, a partir de una muestra de paciente obtenida de un paciente antes de la aparición sospechosa de cáncer en el paciente, y a partir de muestras archivadas de pacientes, y similares.

Un método de ejemplo para detectar la presencia o ausencia de una proteína o un ácido nucleico biomarcador en una muestra biológica involucra la obtención de una muestra biológica (por ejemplo, un fluido corporal asociado con el tumor) a partir de un sujeto de prueba y poner en contacto la muestra biológica con un compuesto o un agente capaz de detectar el polipéptido o ácido nucleico (por ejemplo, ARNm, ADN genómico o ADNc) . Los métodos de detección pueden, ser usados entonces para detectar ARNm, proteína, ADNc, o ADN genómico, por ejemplo en una muestra biológica in vitro así como in vivo. Las técnicas in vitro para la detección de ARNm incluyen, por ejemplo, hibridizaciones Northern e hibridizaciones in situ. Las técnica in vitro para las detección de una proteína biomarcadora incluyen, pero no se limitan' a, pruebas de inmunosorbentes enlazado con enzimas (ELISA) , siembras Western, inmunoquímica, inmuno-precipitación e inmunofluorescencia . Las técnicas in vitro para la detección de ADN genómico incluyen, por ejemplo, hibridizaciones Southern. Las técnicas in vivo para la detección de AR m incluyen, por ejemplo, la reacción en cadena de polimerasa (PCR) , hibridizaciones Northern e hibridizaciones in situ. Adicionalmente , las técnica in vivo para la detección de una proteína biomarcadora incluyen introducir en un sujeto un anticuerpo marcado dirigido contra la proteína o fragmento de la misma. Por ejemplo, el anticuerpo puede ser marcado con un marcador radioactivo cuya presencia y localización en un sujeto pueda detectarse mediante técnicas estándar de imágenes .

Un principio general de tales ensayos diagnósticos y prognósticos incluyen la preparación de una mezcla o mezcla de reacción que puedan contener un biomarcador, y üna sonda, bajo condiciones apropiadas y por un tiempo suficiente para permitir que el biomarcador y la sonda interactúen y se enlacen, formando así un complejo que pueda ser retirado y/o detectado en la mezcla de reacción. Estas pruebas pueden llevarse a cabo en una variedad de formas.

Por ejemplo, un método para llevar a cabo tales pruebas involucra el anclaje del biomarcador o sonda sobre un soporte de fase sólida, también denominado como sustrato, y detectar los complejos objetivo biomarcador/sonda anclados sobre la fase sólida al final de la reacción. En una realización de tal método, una muestra del sujeto que se va a probar en cuanto a la presencia y/o concentración del biomarcador puede anclarse sobre un soporte transportador de fase sólida. En otra realización, es posible la situación inversa, en la cual la sonda puede ser anclada a una fase sólida y una muestra del sujeto puede dejarse reaccionar como un componente no anclado de la prueba.

Hay varios métodos establecidos para anclar los componentes de prueba a una fase sólida. Incluyen, sin limitación, moléculas de biomarcadores o sonda que se inmovilizan a través de la conjugación de la biotina y la estreptavidina . Tales componentes de ensayo biotinilados pueden prepararse a partir de biotin-NHS (N-hidroxi-succinimida) utilizando técnicas conocidas en la técnica (por ejemplo, kit de biotinilación, de Pierce Chemical, Rockford, 111.), y se inmovilizan en los pozos de placa de 96 pozos recubiertos con estreptavidina (Pierce Chemical) . En ciertas realizaciones, las superficies con componentes de prueba inmovilizados pueden prepararse con anticipación y almacenarse. Otros vehículos o soportes de fase sólida adecuados para tales pruebas incluyen cualquier material capaz de enlazar la clase de molécula a la cual pertenece el biomarcador o la sonda. Soportes bien conocidos o vehículos incluye, pero no se limitan a, vidrio, poliestireno, nilón, polipropileno, polietileno, dextrano, amilasas, celulosas naturales y modificadas, poliacrilamidas , gabbros, y magnetita. Con el fin de llevar a cabo ensayos con las metodologías antes mencionadas, el componente no inmovilizado se añade a la fase sólida a la cual se ancla el segundo componente. Después de que la reacción a terminado, los componentes no complejados pueden retirarse (por ejemplo, por lavado) bajo condiciones tales que cualquier complejo formado permanecerá inmovilizado sobre la fase sólida. La detección de los complejos de biomarcador/sonda anclados a la fase sólida puede llevarse a cabo con un cierto número de métodos delineados aquí. En una realización, la sonda cuando es el componente de prueba no anclado, puede marcarse para propósitos de detección y lectura de la prueba, bien sea directa o indirectamente, con marcadores detectables discutidos aquí que son bien conocidos para una persona experimentada en la técnica.

También es posible detectar directamente la formación de complejos biomarcador/sonda sin manipulación adicional o mareaje de cualquiera de sus componentes (biomarcador o sonda), por ejemplo utilizando la técnica de transferencia de energía de fluorescencia (esto es FET, véase por ejemplo, Lakowicz et al., U. S. Pat . No . 5,631,169, y Stavrianopoulos , et al., U. S. Pat. No. 4,868,103). Un marcador fluoroforo sobre una molécula donadora se selecciona de tal manera que, por excitación con un incidente de longitud de onda apropiado, su energía fluorescente emitida sea absorbida por un marcador fluorescente sobre una molécula aceptora, la cual a su vez es capaz de fluorescer debido a la energía absorbida. Alternativamente, la molécula de proteína donadora puede utilizar simplemente la energía fluorescente natural de los residuos de triptófano. Los marcadores se escogen de tal forma que emitan diferente longitudes de onda de luz de tal forma que el marcador de la molécula aceptora puede diferenciarse del de la molécula donadora. Puesto que la eficiencia de la transferencia de energía entre los marcadores está relacionada con la distancia que separa las moléculas, puede establecerse la relación espacial entre las moléculas. En una situación en la cual ocurra enlazamiento entre las moléculas, la emisión fluorescente del marcador de la molécula aceptora en la prueba debería ser máximo. Un evento de enlazamiento FET puede medirse convenientemente a través de medios de detección fluorométricos estándar bien conocidos en la técnica (por ejemplo, usando un fluorímetro) .

En otra realización, la determinación de la capacidad de una sonda para reconocer un biomarcador puede lograrse sin marcar ningún componente de la prueba (sonda o biomarcador) utilizando una tecnología tal como el Análisis de Interacción Biomolecular en tiempo real (BIA; véase, por ejemplo, Sjolander, S. y Urbaniczky, C. , 1991, Anal. Chem. 63: 2338 -2345 y Szabo et al., 1995, Curr. Opin. Struct . Biol . 5: 699 -705) . Tal como se utiliza aquí, "BIA" o "resonancia de plasmón en superficie" se refiere a una tecnología para estudiar interacciones bioespecificas en tiempo real, sin marcar ninguno de los interactuantes (por ejemplo, BIAcore) . Los cambios en la masa en la superficie de enlazamiento (indicativos de un evento de enlazamiento) dan como resultado alteraciones del índice de refracción de la luz cerca de la superficie (el fenómeno óptico de la resonancia de plamón en superficies (SPR) , que da como resultado una señal detectable que puede utilizarse como indicador de las reacciones en tiempo real entre las moléculas biológicas .

Alternativamente, en otra realización, pueden llevarse a cabo pruebas análogas diagnósticas y prognósticas con el biomarcador y la sonda como solutos en una fase líquida. En tal prueba, el biomarcador y la sonda complejados se separan de los componentes no complejados por cualquiera de un cierto número de técnicas estándar, que incluyen pero no se limitan a: centrifugación diferencial, cromatografía, electroforesis e inmunoprecipitación. En la centrifugación diferencial, los complejos bioraarcador/sonda pueden separarse a partir de componentes de prueba no complejados a través de pruebas de una serie de etapas de centrifugación, debido a los diferentes equilibrios de sedimentación de los complejos con base en sus diferentes tamaños y densidades (véase, por ejemplo, Rivas, G. , y Minton, A. P., 1993, Trends Biochem Sci. 18 (8) : 248 - 7) . También pueden utilizarse técnicas cromatográficas estándar para separar moléculas complejadas de otras no complejadas, por ejemplo, la cromatografía por filtración en gel separa moléculas con base en su tamaño, y a través de la utilización de una resina de filtración por gel apropiado en un formato de columna, por ejemplo, el complejo relativamente más grande puede separarse de los componentes no complejados que son relativamente más pequeños. De la misma forma, las propiedades de carga relativamente diferente del complejo biomarcador/sonda en comparación con los componentes no complejados pueden explotarse para diferenciar el complejo de los componentes no complejados por ejemplo a través de la utilización de resinas de cromatografía de intercambio iónico. Tales resina y técnicas cromatográficas son bien conocidas para los expertos en la técnica (véase, por ejemplo, Heegaard, N. H., 1998, J., Mol. Recognit Winter 11 (1 - 6): 141 - 8; Hage , D. S., y Tweed, S. A. J. Chromatogr B Biomed Sci Appl Oct . 10, 1997; 699 (1 -2 ): 499 - 525) . La electroforesis en gel también puede emplearse para separar componentes de prueba complejados de compuestos no enlazados (véase por ejemplo, Ausubel et al., ed., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York, 1987 - 1999) . En está técnica, los complejos de proteína o ácidos nucléicos se separan con base en el tamaño o carga, por ejemplo. Con el fin de mantener la interacción de enlazamiento durante el proceso de electroforesis , se usan típicamente materiales y condiciones de la matriz en gel no desnaturalizantes en la ausencia de agente reductor. Las condiciones apropiadas para el ensayo particular y los componentes del mismo serán bien conocidas para una persona experimentada en la técnica. En una realización, el nivel de biomarcador ARNm puede determinarse en formatos tanto in situ como in vitro en una muestra biológica utilizando métodos conocidos en la técnica, el término "muestra biológica" pretende incluir tejidos (incluyendo, pero no limitándose a, biopsias de tejido) células, fluidos biológicos y aislados de los mismos, aislados de un sujeto asi como tejidos, células y fluidos presentes dentro de un sujeto. Muchos métodos de detección de la expresión utilizan ARN aislado. Para métodos in vitro, puede utilizarse cualquier técnica de aislamiento de ARN que no seleccione contra el aislamiento del ARNm para la purificación del ARN a partir de células tumorales (véase, por ejemplo, Ausubel et al., ed., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York, 1987 - 1999) . Adicionalmente , pueden procesarse fácilmente números grandes de muestras de tejido utilizando técnicas bien conocidas para los expertos en la técnica, tales como, por ejemplo, el proceso de etapa sencilla de aislamiento de ARN de Chomczynski (1989, U.S. Pat . No. 4, 843,155).

El ARNm aislado puede utilizarse en pruebas de hibridización o amplificación que incluyen, pero no se limitan a, análisis Southern o Northern, análisis por reacción de polimerasa en cadena y ensayos de sonda. Un método diagnostico para la detección de los niveles de ARNm involucra poner en contacto el ARNm aislado con una molécula de ácido nucleico (sonda) que puede ser hibridizada al ARN codificado por el gen que está siendo detectado. La sonda de ácido nucleico puede ser, por ejemplo, un ADNc de longitud completa, o una porción del mismo, tal como un oligonucleótido de al menos 7, 15, 30, 50, 100, 250 o 500 nucleótidos de longitud y suficiente para hibridizar específicamente bajo condiciones restrictivas a un ARNm o a un ADN genómico que codifica un biomarcador descrito aquí. La determinación de la capacidad de restricción apropiada puede identificarse a través de pruebas de rutina de acuerdo con técnicas moleculares convencionales. Se describen aquí otras sondas adecuadas para uso en pruebas de diagnóstico. La hibridización de un ARNm con la sonda indica que un biomaírcador en cuestión está siendo expresado.

En un formato, el ARNm se inmoviliza sobre una superficie sólida y se pone en contacto con una sonda, por ejemplo corriendo el ARNm aislado sobre un gel de agarosa y transfiriendo el ARNm del gel a una membrana tal como nitrocelulosa . En un formato alternativo, la sonda o sondas son inmovilizadas sobre una superficie sólida y el ARNm se pone en contacto con las sondas como por ejemplo, en una disposición de chip de gen Affymetrix de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Un técnico especializado puede fácilmente conocer métodos de detección de ARNm para uso en la detección del nivel de ARNm codificado por los biomarcadores descritos aquí.

Un método alternativo para determinar el nivel de biomarcador ARNm en una muestra involucra el proceso de amplificación de ácidos nucléicos, por ejemplo, por transcriptasa reversa-reacción en cadena de polimerasa (RT -PCR; poe ejemplo, la realización experimental presentada en Mullís, 1987, U. S. Pat. No. 4,683,202), reacción en cadena de ligasa (por ejemplo, Barany, 1991, Proc . Nati. Acad. Sci. USA, 88: 189 - 193), la replicación en secuencias autosostenida (por ejemplo, Guatelli et al., 1990, Proc.

Nati. Acad. Sci. USA, 87: 1874 - 1878), sistema de amplificación transcripcional (por ejemplo, Kwoh et al., 1989, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 86: 1173 - 1177), replicación en circulo rotación (Lizardi et al., 1988, Bio/Technology 6: 1197), o cualquier otro método de amplificación de ácidos nucléicos, seguido por la detección de las moléculas amplificadas utilizando técnicas bien conocidas para los expertos en la técnica, estos esquemas de detección son especialmente útiles para la detección de moléculas de ácidos nucléicos y tales moléculas están presentes en números muy bajos. Tal como se usa aquí, los cebadores de amplificación se definen como parte de un par de moléculas de ácidos nucléicos que pueden formar anillacion en las regiones 5' o 3' de un gen (cadenas más y menos, respectivamente, o viceversa) y contiene una región corta en medio. En general, los cebadores de amplificación van desde aproximadamente 10 hasta 30 nucleótidos de longitud y flanquean una región desde aproximadamente 50 hasta 200 nucleótidos de longitud. Bajo condiciones apropiadas y con reactivos apropiados, tales cebadores permiten la amplificación de una molécula de ácido nucleico que comprende la secuencia de nucléotidos flanqueada por los cebadores.

Para los métodos in situ, el ARNm no necesita ser aislado de las células tumorales antes de la detección. En tales métodos, se prepara/procesa una célula o tejido utilizando métodos histológicos conocidos. La muestra se inmoviliza luego sobre un soporte, típicamente una lamina de vidrio, y luego se pone en contacto con una sonda que puede hibridizar hasta AR m el cual codifica el biomarcador.

Como una alternativa para hacer determinaciones con base en el nivel de expresión absoluto del biomarcador, las determinaciones . pueden basarse en el nivel de expresión normalizado del biomarcador. Los niveles de expresión se normalizan corrigiendo el nivel de expresión absoluto de un biomarcador comparando su expresión con la expresión de ungel en que no es un biomarcador, por ejemplo, un gen de mantenimiento que se expresa constitutivamente. Los genes adecuados para la normalización incluyen genes de mantenimiento tales como el gen actina, o genes epiteliales específicos de las células. Esta normalización permite la comparación del nivel de expresión en una muestra, por ejemplo, una muestra de un paciente, con otra muestra, por ejemplo, una muestra no tumoral, o entre muestras de diferentes fuentes.

Alternativamente, el nivel de expresión puede proveerse como un nivel de expresión relativo. Para determinar un nivel de expresión relativo de un biomarcador (por ejemplo, un biomarcador mesenquimal) el nivel de expresión del bioraarcador se determina para 10 o más, 20 o más, 30 o más, 40 o más, o 50 o más muestras de aislados de células normales versus cancerosas antes de la determinación del nivel de expresión para la muestra en cuestión. El nivel de expresión medio de cada uno de los genes probados en el número más grande de muestras se determina y se usa como nivel de expresión de linea base para el biomarcador. El nivel de expresión del biomarcador determinado para la muestra de prueba (nivel absoluto de expresión) se divide entonces por el valor de expresión medio obtenido para ese biomarcador. Esto proporciona un nivel de expresión relativo.

En otra realización, se detecta una proteína biomarcadora . Un tipo de agente para detectar la proteína biomarcadora es un anticuerpo capaz de enlazarse a tal proteína o a un fragmento de la misma tal como, por ejemplo, un anticuerpo marcado de forma detectable . Los anticuerpos pueden ser policlonales o monoclonales . Un anticuerpo intacto, o un fragmento que enlaza un antígeno del mismo (por ejemplo, Fab, F(ab')2, Fv, scFv, polipéptido de cadena de enlazamiento sencilla) puede utilizarse en este caso. El término "marcado" con respecto a la sonda o anticuerpo, pretende abarcar la marcación directa de la sonda o anticuerpo por acoplamiento (esto es enlazamiento físico) de una sustancia detectable a la sonda o anticuerpo, así como una marcación indirecta de la sonda o anticuerpo mediante su reactividad con otro reactivo que está marcado directamente. Ejemplos de marcación indirecta incluyen la detección de un anticuerpo primario utilizando un anticuerpo secundario marcado de forma fluorescente y la marcación de un extremo de una sonda de ADN con biotina de tal forma que pueda ser detectada con estreptavidina marcada con fluorescencia.

Las proteínas de las células tumorales pueden aislarse utilizando técnicas que son bien conocidas para los expertos en la técnica. Los métodos de aislamiento de proteínas empleados pueden, por ejemplo, ser tales como los descritos en Harlow y Lañe (Harlow y Lañe, 1988, Antibodies : A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y.).

Puede emplearse una variedad de formatos para determinar si una muestra contiene una proteína que se enlaza a un anticuerpo dado. Ejemplos de tales formatos incluyen, pero no se limitan a, inmunoensayo enzimático (EIA) , radioinmunoensayo (RIA) , análisis por Western blot, inmunohistoquímica y ensayo inmunoabsorbente enlazado con enzima (ELISA) . Un técnico experimentado puede adaptar fácilmente los métodos de detección conocidos de proteína/anticuerpo para utilizarlos para determinar si las células tumorales expresan un biomarcador.

En un formato, pueden utilizarse anticuerpos o fragmentos de anticuerpos o derivados en métodos tales como Western blod o técnicas de inmunofluorescencia para detectar las proteínas expresadas. En tales usos, bien sea el anticuerpo o las proteínas pueden inmovilizarse en un soporte sólido. Soportes o vehículos de fase sólida adecuados incluyen cualquier soporte capaz de enlazar un antígeno o un anticuerpo. Soportes o vehículos bien conocidos incluyen vidrio, poliestireno, polipropileno, polietileno, dextrano, nilón, amilasas, celulosas naturales y modificadas, poliacrilamidas , gabros y magnetita. Se podrán conocer, o determinar, otros vehículos adecuados para enlazamiento de anticuerpos o antígenos, y se podrán adaptar tales soportes para uso en los presentes métodos. Por ejemplo, las proteínas aisladas de las células tumorales pueden correr sobre una electroforesis en gel de poliacrilamida e inmovilizarse sobre un soporte de fase sólida tal como nitrocelulosa . El soporte puede ser lavado entonces con reguladores adecuados seguidos por un tratamiento con el anticuerpo marcado de forma detectable. El soporte de fase sólida puede lavarse entonces con el regulador una segunda vez para eliminar el anticuerpo no enlazado. La cantidad de marcación de enlaces sobre soporte sólido puede detectarse entonces por medios convencionales .

Para pruebas de ELISA, los pares de enlazamiento específico pueden ser del tipo inmune o no inmune. Los pares de enlazamiento de tipo inmune son ejemplificados por sistemas antígeno-anticuerpo o sistemas hapteno/antihapteno . Pueden mecionarse fluoresceína/antifluoresceína, dinitrofenilo/antidinitrofenilo, biotina/antibiotina, péptido/antipéptido y similares. El miembro anticuerpo del par de enlazamiento específico puede producirse por métodos habituales familiares para los experimentados en la técnica. Tales métodos involucran la inmunización de un animal con el miembro antígeno del par de enlazamiento específico. Si el miembro antígeno del par de enlazamiento específico no es inmunogénico, por ejemplo, un hapteno, puede acoplarse de forma covalente a una proteína transportadora para hacerlo inmunogénico. Los pares de enlazamiento no inmunes incluyen sistemas donde los dos componentes comparten una afinidad natural uno por el otro pero no son anticuerpos. Ejemplos de pares no inmunes son biotina-estreptavidina, factor intrínseco-vitamina B12, ácido fólico- proteína enlazadora del folato y similares.

Está disponible una variedad de métodos para marcar de forma covalente anticuerpos con miembros de pares de enlazamiento específicos. Los métodos se seleccionan con base en la naturaleza del miembro del par de enlazamiento específico, el tipo de enlace deasdo, y la tolerancia del anticuerpo a las diversas químicas de conjugación. La biotina puede ser acoplada de forma covalente a anticuerpos utilizando derivados activos comercialmente disponibles. Algunos de estos son biotin-N-hidroxi-succinimida la cual se enlaza a grupos amina en las proteínas; biotin hidrazida la cual se enlaza a unidades estructurales carbohidrato, aldehidos y grupos carboxilo a través de un acoplamiento carbodiimida; y biotin maleimida y yodoacetil biotina los cuales se enlazan a grupos sulfhidrilo. La fluoresceína puede acoplarse con grupos amino de las proteínas utilizando isotiocianato de fluoresceína. Los grupos dinitrofenilo pueden acoplarse a grupos amino de proteínas utilizando sulfato de 2 , 4 -dinitrobenzeno o 2 , 4-dinitrofluorobenzeno . Pueden emplearse otros métodos estándar de conjugación para acoplar anticuerpos monoclonales a un miembro del par de enlazamiento específico incluyendo dialdehídos, acoplamiento con carbodiimidas , entrecruzamiento homofuncional , y entrecruzamiento heterobifuncional . El acoplamiento con carbodiimidas es un método efectivo para acoplar grupos carboxilos sobre una sustancia a grupos amino en otra. El acoplamiento con carbodiimida se facilita utilizando el reactivo disponible comercialmente l-etil-3- (dimetil-aminopropil) -carbodiimida (EDAC) .

Los agentes de entrecruzamiento homobifuncionales , incluyendo los imidoésteres bifuncionales y los ásteres de N-hidroxisuccinimida bifuncionales , están disponibles comercialmente y se emplean para acoplar grupos amino sobre una sustancia con grupos amino en otra. Los agentes de entrecruzamiento heterobifuncionales son reactivos que poseen diferentes grupos funcionales. Los agentes de entrecruzamiento heterobifuncionales disponibles comercialmente más comunes tienen un éster de N-hidroxisuccinimida reactivo a aminas como grupo funcional, y un grupo reactivo al sulfhidrilo como segundo grupo funcional. Los grupos reactivos al sulfidrilo más comunes son maleimidas, disolfuros de piridilo y halógenos activos. Uno de los grupos funcionales un arilnitreno fotoactivo, el cual por irradiación reaccionan con una variedad de grupos.

Un anticuerpo marcado de forma detectable o un miembro marcado de forma detectable del par de enlazamiento específico pueden prepararse a través del acoplamiento con un informador, el cual puede ser un material isótopo radiactivo, enzima, fluorogénico, quiminoluminiscente o electroquímico. Dos siótopos radiactivos utilizados comúnmente son 125I y 3H. Los procedimientos de marcación isotópica radiactiva estándar incluyen la cloramina T, lactoperoxidasa y métodos de Bolton-Hunter para 125I y metilación reductora para 3H. El término "marcado de forma detectable" se refiere a una molécula marcada de tal manera que puede ser fácilmente detectada por la actividad enzimática intrínseca del marcador o por enlazamiento del marcador de otro componente, el cual por si mismo puede ser detectado fácilmente.

Las enzimas adecuadas para uso en este método incluyen, pero no se limitan a, peroxidasa de rábano, fosfatasa alcalina, ß-galactosidasa, glucosa oxidasa, luciferasas, incluyendo luciérnaga y renilla, ß-lactamasa, ureasa, proteína fluorescente verde (GFP) y lisozima. La marcación con enzimas se facilita utilizando dialdehídos, acoplamiento con carbodiimida, agentes de entrecruzamiento homobifuncional y agentes de entrecruzamiento heterobifuncional tal como se describieron anteriormente para el acoplamiento de un anticuerpo con un miembro de un par de enlazamiento específico .

El método de marcación escogido depende de los grupos funcionales disponibles en la enzima y del material que va a ser marcado, y la tolerancia de ambos a las condiciones de conjugación. El método de marcación usado puede ser uno de, pero no limitándose a, cualquier método convencional empleado actualmente incluyendo los descritos por Engvall y Pearlmann, Inmunochemistry8 , 871 (1971) , Avrameas y Temynck, inmunochemistry 8, 1175 (1975), Ishikawa et al., J.

Inmunoassay 4 (3): 209 - 327 (1983) y Jablonski, Anl . Biochem, 148: 199 (1985).

La marcación puede lograrse por métodos indirectos tales como el uso de espaciadores u otros miembros de los pares de enlazamiento específico. Un ejemplo de esto es la detección de un anticuerpo biotilado con estreptavidina no marcada y enzima biotinilada, con estreptavidina y enzima biotinilada añadiéndose bien sea secuencial o simultáneamente. Así, un anticuerpo utilizado para detección puede ser marcado de forma detectable directamente con un informador o indirectamente con un miembro de un par de enlazamiento específico. Cuando el anticuerpo se acopla con un primer miembro de un par de enlazamiento específico, la detección se efectúa entonces haciendo reaccionar el primer miembro del anticuerpo o de un complejo de enlazamiento específico con el segundo miembro del par de enlazamiento que está marcado o no marcado tal como se mencionó más arriba.

Adicionalmente, el anticuerpo detector no marcado puede detectarse haciendo reaccionar el anticuerpo no marcado con un anticuerpo marcado específico para el anticuerpo no marcado. En este caso, "marcado de forma detectable" tal como se utilizo más arriba se entiende que indica que contiene un epítope mediante el cual un anticuerpo específico para el anticuerpo no marcado puede enlazarse. Tal como un antianticuerpo puede ser marcado directa o indirectamente utilizando cualquiera de las metodologías discutidas más arriba. Por ejemplo, el antianticuerpo puede acoplarse con biotina la cual es detectada haciendo reaccionar el sistema estreptavidina-peroxidasa de rábano discutido más arriba. Así, en una realización, se utiliza biotina. El anticuerpo bitinilado se hace reaccionar a su vez con el complejo estreptavidina-peroxidasa de rábano. Para la detección cromogénica pueden usarse ortofenildiamina,- -cloro-naftol , tetrametilbenzidina (TMB) , ABTS, BTS o ASA.

En un formato de inmunoensayo, se utiliza una disposición de avance en sandwich en el cual el reactivo de captura ha sido inmovilizado, utilizando técnicas convencionales sobre la superficie del soporte. Los soportes adecuados utilizados en los ensayos incluyen soportes poliméricos sintéticos, tales como polipropileno, poliestireno, poliestireno sustituido, por ejemplo, poliestireno aminado o carboxilado, poliacrilamidas , poliamidas, polivinilcloruro, perlas vidrio, agarosa o nitrocelulosa .

Una combinación de dos o más de los ensayos descritos más arriba pueden utilizarse también para verificar uno o más biomarcadores .

Los valores obtenidos de las muestras de prueba y/o control se procesan estadísticamente utilizando cualquier método adecuado de análisis estadístico para establecer un nivel de línea más adecuado utilizando métodos estándar en la técnica para establecer tales valores. El significado estadístico puede determinarse fácilmente como se describió más arriba, por ejemplo, en la solicitud de Patente de los Estados Unidos No. 11/781,946. Solamente a manera de ejemplo, en una realización, el significado estadístico es al menos p<0.05.

Tratamiento de enfermedades proliferativas Se describen aquí compuestos, composiciones farmacéuticas y métodos para tratar un paciente que sufre una enfermedad proliferativa administrando una cantidad efectiva de un butano catecólico (esto es, un compuesto individual que es un inhibidor dual de la quinasa) como se describe aquí, solo o en combinación con uno o más ingredientes activos adicionales (por ejemplo agentes anticancerígenos) y/o regímenes de tratamiento (por ejemplo, cirugía) .

La presente solicitud se relaciona en general con métodos de tratamiento de enfermedades utilizando un butano catecólico (o un derivado del mismo) descrito aquí. A manera de ejemplo se relaciona con el uso del butano catecólico NDGA o de una sal, solvato, isómero, tautómero, metabolito, análogo o profármaco del mismo en el tratamiento de una enfermedad proliferativa inhibiendo IGF- IR y EGFR.

Se proporcionan aquí métodos para tratar una enfermedad que comprende administrar una cantidad efectiva de un compuesto farmacéutico capaz de inhibir la actividad de la tirosina quinasa tanto de IGF- IR como EGFR, donde el compuesto farmacéutico es un butano catecólico descrito aquí (esto es, un compuesto que es un inhibidor dual de la quinasa) .

También se proporcionan aquí métodos para tratar una enfermedad en un sujeto que ha desarrollado resistencia a uno o más inhibidores de EGFR o inhibidores de IGF-IR' que comprende administrar una cantidad efectiva de un compuesto farmacéutico capaz de inhibir la actividad de la tirosina quinasa tanto de IGF- IR como de EGFR, donde el compuesto farmacéutico es un butano catecólico (esto es, un inhibidor dual de la quinasa) .

En una realización la enfermedad es una enfermedad proliferativ .

Una enfermedad proliferativa incluye pero no se limita a, un cáncer maligno, premaligno o benigno. Los cánceres que van a ser tratados utilizando los métodos divulgados incluyen, por ejemplo, un tumor sólido, un linfoma o una leucemia. En una realización, un cáncer puede ser, por ejemplo, un tumor cerebral (por ejemplo, un tumor maligno, premaligno o benigno del cerebro tal como por ejemplo, un glioblastoma, un astrocitoma, un meningioma, un neuroblastoma o un .tumor neuro ectodérmico periférico) , un carcinoma (por ejemplo, un carcinoma de la vesícula biliar, un carcinoma bronquial, un carcinoma de las células básales, un adenocarcinoma, un carcinoma de células escamosas, un carcinoma de células pequeñas, un carcinoma no diferenciado de células grandes, adenomas, cistadenomas , etc.), un basalioma, un teratoma, un retinoblastoma, un coroideomelanoma, un seminoma, un sarcoma (por ejemplo, sarcoma de Ewing, rabdomiosarcoma, craneofaringeoma, osteosarcoma, condrosarcoma, miosarcoma, liposarcoma, fibrosarcoma, leimiosarcoma, tumor de Askin, linfosarcoma, neurosarcoma, sarcoma de Kaposi, dermatofibrosarcoma, angiosarcoma, etc.), un plasmocitoma, un tumor de cabeza y cuello (por ejemplo, oral, laríngeo, nasof ríngeo, esofágico, etc.) un tumor en el hígado, un tumor de riñon, un tumor de células renales, un carcinoma de células escamosas, un tumor uterino, un tumor óseo, un tumor de próstata, un tumor de seno incluyendo, pero no limitándose a un tumor de seno que es Her2- y/o ER- y/o PR- , un tumor de vejiga, un tumor pancreático, un tumor del endometrio, un carcinoma de células escamosas, un tumor del estómago, gliomas, un tumor colorrectal, un tumor testicular, un tumor de colon, un tumor rectal, un tumor ovarico, un tumor cervical, un tumor de ojo, un tumor en el sistema nervioso central (por ejemplo, linfornas CNS primarios, tumores del eje espinal, gliomas del tallo cerebral, adenomas de la pituitaria, etc.), un tumor tiroideo, un tumor de pulmones (por ejemplo, cáncer de pulmones de células no pequeñas (NSCLC) o cáncer de pulmón de células pequeñas) , una leucemia o un linforna (por ejemplo, linfornas de células T cutáneas (CTCL) , linfornas de células T periféricas no cutáneas, linfornas asociados con virus linfotrofico de células T humanas (HTLV) tal como una leucemia/linforna (ATLL) , de células de T adultas, linforna de células B, leucemias no linfocíticas agudas, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielógena crónica, leucemia mielógena aguda, linfornas y mielomas múltiples, linforna diferente a Hodgkin, leucemia aguda linfática (ALL) , leucemia crónica linfática (CLL) , linfoma de Hodgkin, linfoma de Burkitt, linfoma de leucemia de células T adultas, leucemia mieloide aguda (AML) , leucemia mieloide crónica (CML) , o el carcinoma hepatocelular, etc.), un mieloma múltiple, un tumor de piel (por ejemplo, carcinomas de células básales, carcinomas de células escamosas, melanomas tales como melanomas malignos, melanomas cutáneos o melanomas intraoculares , dermatofibrosarcoma protuberans, carcinoma de células de Merkel o sarcoma de kaposi) , un tumor ginecológico (por ejemplo sarcomas uterinos, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma de la cérvix, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, etc.), enfermedad de Hodgkin, un cáncer del intestino delgado, un cáncer del sistema endocrino (por ejemplo, un cáncer de tiroides, paratiroides o glándulas adrenales, etc.), un mesotelioma, un cáncer de la uretra, un cáncer del pene, tumores relacionados con el síndrome de Gorlin (por ejemplo, meduloblastomas , meningioma, etc.), un tumor de origen desconocido; o metástasis de cualquiera de los anteriores.

En otras realizaciones, el cáncer es un tumor de pulmón, un tumor de seno, un tumor de colon, un tumor colorrectal, un tumor de cabeza y cuello, un tumor de hígado, un tumor prostático, un glioma, un glioblastoma multiforme, un tumor ovárico o un tumor de tiroides; o metástasis de cualquiera de los anteriores.

En aún otra realización, el cáncer es un tumor de endometrio, un tumor de vejiga, mieloma múltiple, melanoma, tumor renal, sarcoma, tumor cervical, leucemia y neuroblastoma .

Los tumores tal como se proporcionan aquí pueden ser tumores primarios o metástasis. Los cánceres también pueden ser cánceres con base epitelial. En una realización, las. células de los tumores pueden expresar EGFR. En otra realización, las células de los tumores pueden expresar IGF-1R. En aún otra realización, las células de los tumores pueden expresar EGFR e IGF- IR.

Se proporcionan aquí métodos para tratar un cáncer maligno, premaligno o benigno, que comprende la administración de una cantidad efectiva de un compuesto farmacéutico capaz de inhibir la actividad de la tirosina quinasa de IGF- IR y EGFR, donde el compuesto farmacéutico es un butano catecólico (esto es, un compuesto individual que es un inhibidor dual de la quinasa) .

Se proporcionan aquí métodos para seleccionar sujetos para tratamiento con un butano catecólico capaz de inhibir la actividad de tirosina quinasa tanto de IGF- IR como de EGF-R donde dicho sujeto se identifica por tener niveles de IGF- IR, EGFR o ambos en niveles de línea base de 2 o más veces mayor de línea base en comparación con niveles de control.

En un aspecto, un sujeto a sido tratado previamente con un inhibidor de EGFR o un inhibidor de IGF- IR.

En otro aspecto, el sujeto puede ser resistente al tratamiento con al menos un inhibidor de tirosina quinasa, por ejemplo, un inhibidor de EGFR solo o un inhibidor de IGF-1R solo o un inhibidor de IGF- IR y EGFR.

Se proporcionan aquí métodos para degradar, inhibir el crecimiento de o matar células cancerosas de origen epitelial que comprende poner en contacto las células con una cantidad de butano catecólico efectivo para degradar, inhibir el crecimiento de o matar las células cancerosas .

Se proporcionan aquí métodos para inhibir el incremento del tamaño de tumores, reducir el tamaño de un tumor, reducir la proliferación tumoral o prevenir la proliferación tumoral en un individuo qué comprende administrar a dicho individuo una cantidad efectiva de un butano catecólico descrito aquí para inhibir un incremento en el tamaño de un tumor, reducir el tamaño de un tumor, reducir la proliferación tumoral o prevenir la proliferación tumoral. El tratamiento de los tumores en algunos casos incluye la estasis de los síntomas, esto es, tratando el paciente, evitando el empeoramiento del cáncer y prolongar la supervivencia del paciente.

Los pacientes pueden verificarse con respecto a los síntomas en uno o más puntos múltiples del tiempo incluyendo antes de, durante y después de los regímenes de tratamiento. El tratamiento puede dar como resultado la mejora de la condición del sujeto y puede verificarse determinando si a ocurrido o uno o más de los siguientes eventos: tamaño de tumor disminuido, proliferación de las células tumorales disminuida, disminución del número de células, neovascularización disminuida y/o apoptosis incrementada. Uno o más de estos eventos puede, en algunos casos, dar como resultado una eliminación parcial del cáncer y la prolongación de la supervivencia del paciente. Alternativamente, para cánceres en etapa terminal, el tratamiento puede dar como resultado la estasis de la enfermedad, mejor calidad de vida y/o prolongación de la supervivencia. Otros métodos para verificar el tratamiento son conocidos en la técnica y se contemplan aquí.

Debería entenderse que los sistemas de clasificación y definición de etapas descritos aquí pueden utilizarse para establecer el tratamiento de los cánceres aquí descritos; adicionalmente, otros esquemas de clasificación de etapas son conocidos en la técnica y pueden utilizarse en relación con los métodos aquí descritos. A manera de ejemplo solamente, la clasificación T M de los tumores malignos puede utilizarse como un sistema de definición de etapas de cáncer para describir el alcance del cáncer en el cuerpo del paciente. T describe el tamaño del tumor y si ha invadido el tejido cercano, N describe los nodulos linfáticos regionales que están involucrados y M describe la metástasis distante. El TNM es mantenido por la International Union Against Cáncer (UICC) y se utiliza por el American Joint Committe on C ncer (AJCC) y la International Federation de Gynecology y Obstetrics (FIGO) . Se debería entender que no todos los tumores tienen clasificación TNM tales como, por ejemplo, los tumores cerebrales. En general, T (a,is, (0), 1 - 4) se mide como el tamaño o el alcance directo del tumor primario. N (0 - 3) se refiere al grado de esparcimiento de los nodulos linfáticos regionales: NO significa que las células tumorales están ausentes de los nodulos linfáticos regionales, NI significa que las células tumorales se han esparcido hacia lo números más cercanos o pequeños de los nodulos linfáticos regionales, N2 significa que las células tumorales se esparcen en un grado entre NI y N3 ; N3 significa que las células tumorales se esparcen a nodulos linfáticos regionales más distantes o numerosos. M (0/1) se refiere a la presencia de metástasis: M0 significa que no hay metástasis distante presente; MI significa que la metástasis ha ocurrido en órganos distantes (más allá de los nodulos linfáticos regionales). También pueden verificarse otros parámetros. G (1 - 4) se refiere al grado de las células cancerosas (esto es, son de bajo grado y parecen similares a las células normales, y de alto grado si aparecen pobremente diferenciadas) . R (0/1/2) se refiere a la terminación de una operación (esto es, fronteras de recepción libres de células cancerosas o no) . L (0/1) se refiere a la invasión en vasos linfáticos. V (0/1) se refiere a la invasión en venas. C (1 -4) se refiere a un modificador de la certeza (calidad) de V.

Cáncer de seno En un aspecto, se proporciona aquí un método para tratar el cáncer de seno, tal como un carcinoma ductal en tejido de ductos en una glándula mamaria, un cáncer de seno que es Her2- y/o ER- y/o PR- .

Existen varios tipos de canceres de seno que pueden tratarse por los métodos aquí descritos. Un carcinoma lobular in situ y un carcinoma ductal in situ son canceres de seno que se han desarrollado en los lóbulos y ductos, respectivamente, pero que no se han esparcido al tejido graso que rodea el seno u otras áreas del cuerpo. Los carcinomas lobulares y ductales. infiltrados (o invasivos) son canceres que se han desarrollado en los lóbulos y ductos, respectivamente, y se han esparcido bien sea al tejido graso del seno y/o otras partes del cuerpo. Otros canceres del seno que se beneficiarían del tratamiento por los métodos son carcinomas medulares, carcinomas coloides, carcinomas tubulares y cáncer de seno inflamatorio.

En una realización, el cáncer de seno se clasifica en etaps de acuerdo con el sistema TNM. La prognosis está enlazada cercanamente con los resultados de la clasificación por etapas, y la clasificación por etapas también se utiliza para asignar a los pacientes tratamientos tanto en pruebas clínicas como en la práctica clínica.

En resumen la información para la clasificación por etapas es como sigue: TX: No puede verificarse el tumor primario. TO : No hay evidencia del tumor. Tis: Carcinoma in situ, sin invasión; TI : El tumor es de 2 cm o menos; T2 : El tumor es de más de 2 cm pero no más de 5 cm; T3 : El tumor es de más de 5 cm; T4 : Hay un tumor de cualquier tamaño creciendo en la pared del pecho o la piel, o un cáncer de seno inflamatorio.

NX: No pueden verificarse nodulos linfáticos cercanos. NO : el cáncer no se ha esparcido a nodulos linf ticos regionales. NI: El cáncer se ha esparcido a 1 a 3 nodulos linfático de las axilas o nodulo interno. N2 : El cáncer se ha esparcido a 4 a 9 nodulos linfáticos de las axilas o nodulos linfáticos mamarios internos múltiples. N3 : Uno de los siguientes aplica: el cáncer se ha esparcido a 10 o más nodulos linfáticos axilares o el cáncer se ha esparcido a los nodulos linfáticos bajo la clavícula (hueso collar) , o el cáncer se ha esparcido a los nodulos linfáticos por encima de la clavícula, o el cáncer involucra nodulos linfáticos y a agrandado los nodulos linfáticos mamarios internos, o el cáncer involucra 4 o más nodulos linfáticos axilares, y pequeñas cantidades de cáncer se encuentran en los nodulos linfáticos mamarios internos en una biopsia de nodulos linfáticos centinela.

MX: la presencia de esparcimiento distante (metástasis) no puede ser verificada. MO : no hay esparcimiento distante. MI: se esparce a órganos distantes (no incluyendo el nodulo linfático supraclavicular) .

Los métodos previstos aquí pueden prever un efecto beneficioso para pacientes con cáncer de seno, por administración de un butano catecólico o una combinación de la administración de un butano catecólico y uno o más tratamientos anticancerosos .

Cáncer ovárico En otro aspecto, se proporciona aquí un método para tratar cáncer ovárico, incluyendo tumores ováricos epiteliales. Preferiblemente, el método trata un cáncer ovárico seleccionado de los siguientes: un adenocarcinoma en el ovario y un adenocarcinoma que migrado desde el ovario hacia la cavidad abdominal.

Los métodos descritos aquí pueden proveer un efecto benéfico para pacientes con cáncer ovárico, mediante administración de un butano catecólico o una combinación de administración butano catecólico y uno o más tratamientos anticancerosos .

Cáncer cervical En otro aspecto, el método trata el cáncer cervical, preferiblemente un adenocarcinoma en la cérvix epitelial.

Existen dos tipos principales de este cáncer: carcinoma de células escamosas y adenocarcinomas . El primero constituye aproximadamente el 80 - 90% de todos los canceres cervicales y se desarrolla donde la ectocérvix (porción más cercana a la vagina) y la endocérvix (porción más cercana al útero) se unen. Este último se desarrolla en las célulsa glandulares que producen las mucosidades en la endocérvix. Algunos canceres cervicales tienen características de ambos de estos y se denominan carcinomas adenoescamosos o carcinomas mixtos.

Los métodos provistos aquí pueden proveer un efecto benéfico para pacientes con cáncer cervical, mediante la administración de un butano catecólico o una combinación de administración de un butano catecólico y uno o más tratamientos anticancerosos.

Cáncer de próstata En un aspecto, se proporciona aquí un método para tratar el cáncer de próstata, preferiblemente un cáncer de próstata seleccionado de uno de los siguientes: un adenocarcinoma o un adenocarcinoma que ha migrado hacia el hueso. El cáncer de próstata se desarrolla en el órgano prostático en los hombres, el cual rodea la primera parte de la uretra. La próstata tiene varios tipos de células pero el 99% de los tumores son adenocarcinomas que se desarrollan en las células glandulares responsables por la generación del fluido seminal .

Hay dos esquemas utilizados comúnmente para clasificar el cáncer de próstata. El más común es el sistema T , el cual evalúa el tamaño del tumor, el grado de nodulos linfáticos involucrados y cualquier metástasis (esparcimiento distante) . Como con mucho otros canceres, estos se agrupan frecuentemente en cuatro Etapas (I - IV) . Otro esquema, utilizado con menos frecuencia, es el de las etapas Whitmore-Je ett .

En resumen, la enfermedad en etapa es un cáncer que se encuentra incidentalmente en una pequeña parte de la muestra cuando se retira tejido prostático por otras razones, tales como para hipertrofia prostática benigna, y las células recuerdan cercanamente células normales y las glándulas se sienten normales al examen con dedo. En la Etapa II más parte de la próstata está involucrada y puede sentirse un bulto dentro de. la glándula. En la Etapa III, el tumor se ha esparcido a través de la cápsula prostática y el bulto puede sentirse en la superficie de la glándula. En la enfermedad en Etapa IV, el tumor ha invadido estructuras cercanas, se ha esparcido a nodulos linfáticos u otros órganos. La graduación se basa en el contenido celular y en la arquitectura de los tejidos con base en biposias (Gleason) , lo cual proporciona un estimativo del potencial destructivo y de la prognosis final de la enfermedad.

Los métodos provistos aquí pueden proporcionar un efecto benéfico para los pacientes con cáncer de próstata, mediante administración de un butano catecólico. o una. combinación de administración de un butano catecólico y uno o más tratamientos anticancerosos .

Cáncer pancreático En otro aspecto, se proporciona aquí un método para tratar cáncer pancrático, preferiblemente un cáncer pancreático seleccionado de los siguientes: un carcinoma epiteliode en el tejido del ducto pancreático y un adenocarcinoma en un ducto pancreático. El tipo más común de cáncer pancreático es adenocarcinoma, el cual se presenta en el recubrimiento del ducto pancreático.

Los métodos provistos aquí pueden proveer un efecto benéfico para los pacientes con cáncer pancreático, mediante administración de un butano catecólico o una combinación de administración de un butano catecólico y uno o más tratamientos anticancerosos.

Cáncer de vejiga En otro aspecto, se proporciona aquí un método para tratar cáncer de vejiga, preferiblemente un carcinoma celular transicional en la vejiga urinaria. Los canceres de vejiga son carcinomas uroteliales (carcinomas de células transicionales) o tumores en las células uroteliales que recubren la vejiga. Los casos restantes de cáncer de vejiga son carcinomas de células escamosas, adenocarcinomas y cánceres de células pequeñas. Existen varios subtipos de carcinomas uroteliales dependiendo de si son no invasivos o invasivos y de si son papilares o planos. Los tumores no invasivos están en el urotelio, La capa más interna de la vejiga, mientras que los tumores invasivos se esparcen desde el urotelio a capas más profundas de la pared muscular principal de la vejiga. Los carcinomas uroteliales papilares invasivos son proyecciones delgadas en forma de dedo que se ramifican en el centro hueco de la vejiga y también crecen hacia afuera en la pared de la vejiga. Los tumores uroteliales papilares no invasivos crecen hacia el centro de la vejiga. Mientras que un tumor no invasivo urotelial plano (también llamado un carcinoma plano in situ) esta confinado a la capa de células más cercana a la parte hueca interna de la vejiga, un carcinoma urotelial plano invasivo invade la capa más profunda de la vejiga, particularmente la capa muscular.

Los métodos proporcionados aquí pueden proveer un efecto benéfico para pacientes con cáncer de vejiga, mediante administración de un butano catecólico o una combinación de administración de butano catecólico y uno o más tratamientos anticancerosos .

Leucemia mieloide aguda En toro aspecto, se proporciona aquí un método para tratar leucemia mieloide aguda (AML) , preferiblemente leucemia promileocítica aguda en sangre periférica. La AML comienza en la médula ósea pero puede esparcirse a otras partes del cuerpo incluyendo los nodulos linfáticos', hígado, bazo, sistema nervioso central y testículos. Es aguda en el sentido de que se desarrolla rápidamente y puede ser fatal si no se trata en pocos meses. La AML se caracteriza por ser células de médula ósea inmaduras usualmente granulocitos o monocitos, que continúan reproduciéndose y acumulándose.

Hay otros tipos de leucemias que pueden tratarse por los métodos provistos aquí incluyendo pero no limitándose a, leucemia linfocitica aguda, leucemia mielode aguda, leucemia linfocitica crónica, leucemia mieloide crónica, leucemia de células capilares, mielodisplasia y trastornos mieloproliferativos .

Los métodos provisto aquí pueden proveer un efecto benéfico para los pacientes con leucemia, mediante la administración de un butano catecólico o una combinación de administración de un butano catecólico y uno o mas tratamientos anticancerosos.

Cáncer de pulmón En otro aspecto, se proporciona aquí un método para tratar cáncer de pulmón. El tipo más común de cáncer de pulmón es el cáncer de células pulmonares no pequeñas (NSCLC) el cual representa aproximadamente 80 - 85% de los canceres de pulmón y está dividido en carcinomas de células escamosas, adenocarcinomas y carcinomas no diferenciados de células grandes. El cáncer pulmonar de células pequeñas representa 15 - 20% de los canceres de pulmón.

La clasificación del cáncer de pulmón es una verificación del grado de esparcimiento del cáncer desde su fuente original . Es un factor importante que afecta la prognosis y el tratamiento potencial del cáncer de pulmón. Un carcinoma de pulmón de células no pequeñas se clasifica desde IA ("uno A"; mejor prognosis) hasta IV ("cuatro"; peor prognosis) . El carcinoma pulmonar de células pequeñas se clasifica como de etapas limitadas y está confinado a una mitad del pecho y dentro del alcance de un campo de radioterapia simple de lo contrario, es una etapa extensa.

El cáncer de pulmón puede clasificarse utilizando EUS (ultrasonido endoscópico) o T M. La clasificación es una parte de la verificación de pacientes con carcinoma de pulmón de células no pequeñas. Estos parientes pasan por la clasificación como parte del proceso de consideración de la prognosis y tratamiento. La AJCC recomienda la clasificación TNM seguida agrupamiento posterior.

Tumor primario (T) : TX: El tumor primario no puede ser verificado, o hay otras células malignas en el esputo o en el lavado broncoalveolar pero no se ven por imágenes o por broncoscopía; Tis: Carcinoma in situ.

TO : No hay evidencia de tumor primario.

TI: Tumor menor de 3 cm en su dimensión mayor, rodeado por pleura pulmonar o visceral y sin invasión broncoscopica en los bronquios principales.

T2 : Un tumor con cualquiera de : más de 3 cm en su dimensión mayor; se extiende desde los bronquios principales (pero más de 2 cm de distancia a la carina), y neumonitis obstructiva (pero que no involucra el pulmón completo) .

T3 : Un tumor con cualquiera de: invasión de la pared del pecho, diafragma, pleura medisatinal, o pericardio parietal; se extiende en los bronquios principales, a menos de 2 cm de la carina, pero no involucra la carina; y neumonitis obstructiva en el pulmón completo.

T : Un tumor con cualquiera de: invasión del mediastinum, corazón, vasos mayores, tráquea, esófago, vertebras o carina; nódulos tumorales separados en el mismo lóbulo; y efusión pleural maligna.

Nódulos linfáticos (N) : NX: No pueden verificarse nodulos linfáticos; NO: no hay nodulos linfáticos involucrados; NI: Metástasis hacia nodulos linfáticos ipsilaterales periobronquiales o ipsilaterales hilares; N2 : Metástasis a nodulos linfáticos ipsilaterales mediastinales o subcarinales ; y N3 : Metástasis a cualquiera de: nodulos linfáticos ipsilaterales supraclaviculares ; nodulos linfáticos ipsilaterales del escaleno; y nodulos linfáticos contralaterales .

Metástasis distante (M) : MX: No puede verificarse metástasis distante; MO : No hay metástasis distantes; y MI: Está presente la metástasis distante.

Los métodos previstos aquí pueden proporcionar un efecto benéfico para los pacientes con cáncer de pulmón, mediante la administración de un butano catecólico o una combinación de administración de un butano catecólico y uno o más tratamientos anticancerosos.

Cáncer de piel En otro aspecto, se proporciona aquí un método para tratar cáncer de piel. Hay diferentes tipos de cáncer que comienzan en la piel. Los tipos más comunes son carcinomas de células básales y carcinoma de células escamosas, los cuales son canceres de piel no melanomicos. La queratosis actínica es una condición de la piel que ha veces se desarrolla en carcinoma de células escamosas. Los canceres de piel no melanomicos raramente se esparce a otras partes del cuerpo. El melanoma, la forma más rara de cáncer de piel, más probablemente invadirá los tejidos cercanos y se esparcirá a otras partes del cuerpo.

Los métodos provistos aquí pueden proporcionar un efecto benéfico para pacientes con cáncer de piel, mediante administración de un butano catecólico o una combinación de administración de un butano catecólico y uno o más tratamientos anticancerosos.

Cáncer de ojo, retinoblastoma En otro aspecto, se proporciona aquí un método para tratar retinoblastoma ocular. El retinoblastoma es un tumor maligno de la retina. Aunque el retinoblastoma puede presentarse en cualquier edad, frecuentemente se presenta en niños más jóvenes, usualmente antes de la edad de 5 años. El tumor puede ser en uno solo o en ambos ojos. El retinoblastoma está confinado usualmente al ojo y no se esparce a tejidos cercanos u otras partes del cuerpo. Los métodos provistos aquí pueden proporcionar un efecto benéfico para pacientes con retinoblastoma, mediante administración de un butano catecólico o una combinación de administración de un butano catecólico y uno o más tratamientos anticancerosos.

Cáncer de ojo, melanoma intraocular En otro aspecto, se proporciona aquí un método para tratar melanoma intraocular (del ojo) . El melanoma intraocular, un cáncer raro, es una enfermedad en la cual las células cancerosas se encuentran en la parte del ojo llamada la úvea. La úvea incluye el iris, el cuerpo ciliar y el coroide . El melanoma intraocular ocurre más frecuentemente en personas de edad mediana.

Los métodos provistos aquí pueden proporcionar un efecto benéfico para pacientes con melanoma intraocular, mediante la administración de un butano catecólico o una combinación de un butano catecólico y uno o más tratamientos anticáncer.

Cáncer del endometrio En otro aspecto, se proporciona aquí un método para tratar cáncer del endometrio. El cámcer del endometrio es un cáncer que comienza en el endometrio, el recubrimiento interno del útero. Algunos de los ejemplos de cáncer de útero y endometrio, incluye, pero no se limitan a adenocarcinomas , adenocantomas , carcinomas adenoescamosos , adenocarcinomas papilares serosos, adenocarcinomas de células claras, sarcomas uterinos, sarcomas estromales, tumores mesodérmicos mixtos malignos y leiomiosarcomas .

Los métodos proporcionados aquí pueden proveer un efecto benéfico para pacientes con cáncer en el endometrio, mediante administración de un butano catecólico o una combinación de administración de un butano catecólico y uno o más tratamientos anticáncer.

Cáncer del hígado En otro aspecto, se proporciona aquí un método para tratar cáncer de hígado primario (cáncer que comienza en el hígado) . El cáncer de hígado primario puede presentarse tanto en adultos como en niños.

Los métodos provistos aquí pueden proveer un efecto beneficioso para pacientes con cáncer de hígado, mediante administración de un butano catecólico o una combinación y administración de un butano catecólico y uno o más tratamientos anticáncer.

Cáncer de riñon En otro aspecto, se proporciona aquí un método para tratar el cáncer de riñon. Cáncer de riñon (también llamado cáncer renal o adenocarcinoma renal) es una enfermedad en la cual se encuentran células malignas en el recogimiento de los túbulos en el riñon.

Los métodos provistos aquí pueden proporcionar un efecto beneficioso para los pacientes con cáncer de riñon; mediante la administración de un butano catecólico o una combinación de administración de un butano catecólico y uno o más tratamientos anticáncer.

Cáncer tiroide En otro aspecto, se proporciona aquí un método para tratar cáncer tiroide. El cáncer tiroide es una enfermedad en la cual se encuentran células cancerosas (malignas) en los tejidos de la glándula tiroide. Los cuatro principales tipos de cáncer tiroide son papilar, folicular, medular y anaplástico.

Los métodos provistos aquí pueden proporcionar un efecto benéfico para tratar pacientes con cáncer tiroide, mediante administración de un butano catecólico o una combinación de administración de un butano catecólico y uno o más tratamiento anticáncer.

Canceres relacionados con el Sida Se proporcionan aquí métodos para tratar canceres relacionados con el sida incluyendo, pero no limitándose a linfoma y sarcoma de Kaposi relacionados con el Sida. Los métodos aquí provistos pueden proporcionar un efecto benéfico para canceres relacionados con el -sida, por administración de un butano catecólico o una combinación o administración de un butano catecólico o una combinación de administración de un butano catecólico y uno o más tratamientos anticancer.

Linfoma relacionado con el sida En otro aspecto, se proporciona aquí un método para tratar linfornas relacionados con el sida. El linfoma relacionado con el sida es una enfermedad en la cual las células malignas se forman en el sistema linfático de los pacientes que han adquirido síndrome de inmunodeficiencia (SIDA) . El sida es causado por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) , el cual ataca y debilita el sistema inmune del cuerpo. El sistema inmune es entonces incapaz de luchar contra la infección y las enfermedades que invaden el cuerpo. Las personas con enfermedad de VIH tienen un riesgo incrementado de desarrollar infecciones, linfornas y otros tipos de cáncer. Los linfornas son cáncer que afectan los glóbulos rojos del sistema linfático. Los linfornas se dividen en dos tipos generales: linforna de Hodgkin y linfornas no Hodgkin. Tanto los linfornas de Hodgkin como los linfornas no Hodgkin pueden presentarse en pacientes con sida, pero los linfornas no hodgkin son más comunes. Cuando una persona con sida tiene linfomas no Hodgkin, se denomina linfoma relacionado con sida. Los linfomas no Hodgkin pueden ser indolentes (de crecimiento lento) o agresivos (de crecimiento rápido) . Los linfomas relacionados con el sida son usualmente agresivos. Los tres principales tipos de linfoma relacionados con el sida son linfomas de células B grandes difusos, linfomas inmunoblasticos de células B y linfoma de células pequeñas no escindidas.

El tratamiento del linfoma relacionado con sida combina el tratamiento de linfoma con tratamientos para sida. Los pacientes con sida tienen sistemas inmunes debilitados y el tratamiento puede causar daño adicional. Por está razón, los pacientes que tienen linfoma relacionado con el sida se tratan usualmente con dosis inferiores de fármacos que los pacientes con linfoma que no tienen sida. Se utiliza una terapia antirretroviral altamente activa (HAART) para hacer más lenta la progresión de VIH. También se utilizan medicinas para prevenir y tratar las infecciones, las cuales pueden ser serias .

Sarcoma de Kaposi En otro aspecto, se proporciona aquí un método para tratar el sarcoma de Kaposi. El sarcoma de Kaposi es una enfermedad en la cual las células cancerosas se encuentra en los tejidos bajo la piel o membranas mucosas que recubren la boca, nariz y ano. El sarcoma de Kaposi clásico se presenta usualmente en hombres mayores de herencia judía, italiana o mediterránea. Este tipo de sarcoma de Kaposis progresa lentamente, a veces durante 10 a 15 años. El sarcoma de Kaposi puede ocurrir en personas que están tomando inmunosupresores . El sarcoma de Kaposi en pacientes que tienen el Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirido (SIDA) , se llama sarcoma de Kaposi epidémico. El sarcoma de Kaposi en personas con sida usualmente se esparce más rápidamente que otra clase de sarcomas de Kaposi y frecuentemente se encuentran en muchas partes del cuerpo.

Los métodos proporcionados aquí pueden proveer un efecto benéfico para el sarcoma de Kaposi, mediante la administración de un butano catecólico o una combinación de un butano catecólico y uno o más tratamientos anticancer.

Canceres inducidos por virus En otro aspecto, se proporciona aquí un método para tratar canceres inducidos por virus. Varios virus comunes son clara o probablemente factores causales en la etiología de malignidades específicas. Estos virus normalmente establecen latencia o algunos pocos pueden convertirse en infecciones persistentes. La oncogénesis esta relacionada probablemente con un nivel potenciado de activación viral en el huésped infectado, reflejando dosis virales grandes o el control inmune comprometido. Los sistemas virus malignidad principales incluyen virus de hepatitis B (HBV) , virus de hepatitis C (HCV) , y carcinoma hepatocelular; el virus linfotropico humano tipo 1 (HTLV-1) y la leucemia/linforna de células T en adultos; y el virus del papiloma humano (HPV) y cáncer cervical. En general, estas malignidades ocurren de forma relativamente temprana en la vida, típicamente alcanzando su máxima edad madiana o antes .

Carcinoma hepatocelular inducido por virus La relación causal entre el HBV y el HCV y el carcinoma hepatocelular o cáncer de hígado se establece a través de evidencia epidemiológica sustancial . Ambos parecen actuar a través de la replicación crónica en el hígado causando la muerte celular y la regeneración susbsecuente.

Leucemia/linfoma de células T en adultos inducidas por virus La asociación entre el HTLV-1 y la leucemia de células t en adultos (ATL) esta establecida firmemente. A diferencia de otros virus oncogénicos encontrados en el mundo, el HTLV-1 está altamente restringido geográficamente, encontrándose primariamente en el sur de Japón, el Caribe, África occidental y central, y las islas del Pacífico sur. La evidencia para la causalidad incluye la integración monoclonal del genoma viral en casi todos los casos de ATL importadores. Los factores de riesgo para HTLV-1 asociados a la malignidad parecen ser infección perinatal, alta carga viral, y tener sexo masculino. La leucemia de células T en adultos es un cáncer de la sangre y de la médula ósea.

Cáncer cervical inducido por virus La infección de la cérvix con papilomavirus humano (HPV) es la causa más común de cáncer cervical . No todas las mujeres con HPV, sin embargo, desarrollaran cáncer cervical. El cáncer cervical se desarrolla usualmente de forma lenta con el tiempo. Antes de que el cáncer aparezca en la cérvix, las células de la cérvix sufren cambios conocidos como displasia, en la cual comienzan a aparecer células que no son normales en el tejido cervical. Más adelante, las células cancerosas comienzan a crecer y esparcirse más profundamente en la cérvix y en las áreas que las rodean.

Los métodos provistos aquí pueden proveer un efecto benéfico para los canceres inducidos por virus, mediante la administración de un butano catecólico o una combinación de administración de un butano catecólico y uno o más tratamientos anticancer.

Canceres del sistema nervioso central (CNS) Los tumores cerebrales y de la médula espinal son crecimientos anormales del tejido encontrado dentro del cráneo o de la columna vertebral, que son los componentes primarios del sistema nervioso central (CNS) . Los tumores benignos son no cancerosos, los tumores malignos son cancerosos. El CNS está alojado dentro de cuartos óseos rígidos (esto es el cráneo y la columna vertebral) , de manera que un crecimiento anormal, bien sea benigno o maligno, puede ejercer presión sobre tejidos sensibles e impedir funciones. Los tumores que se originan en el cerebro y en la médula espinal se llaman tumores primarios. La mayor parte de los tumores primarios son causados por un crecimiento fuera de control entre células que rodean y soportan las neuronas . En un pequeño número de individuos, los tumores primarios pueden resultar a partir de una enfermedad genética específica (por ejemplo, neurofibromatosis , esclerosis tuberosa) o a partir de exposición a radiación o a agentes químicos productores de cáncer. La causa de la mayor parte de los tumores primarios sigue siendo un misterio.

La primera etapa para diagnosticar los tumores en el cerebro y la columna espinal es un examen neurológico. Se emplean también técnicas especiales de imágenes (tomografía computarizada, e imágenes por resonancia magnética nuclear, tomografía por emisión de positrones) . Las pruebas de laboratorio incluyen el EEG y la palpación espinal. Una biopsia, un procedimiento quirúrgico en el cual se toma una muestra de tejido de un tumor sospechoso, ayuda a los doctores a diagnosticar el tipo de tumor.

Los tumores se clasifican de acuerdo con la clase de célula a partir de la cual parece originarse el tumor. El tumor de cerebro primario más común en adultos proviene de células en el cerebro llamadas astrocitos que constituyen la barrera sangre-cerebro y contribuyen a la nutrición del sistema nervioso central. Estos tumores se denominan gliomas (astrocitoma, astrocitoama anaplástico o glioblastoma multiforme) y representan aproximadamente el 65% de todos los tumores primarios del sistema nervioso central. Algunos de los tumores son, pero no se limitan a oligodendroglioma , ependimoma, meningioma, linfoma, Schwanoma, y meduloblastoma . Tumores neuroepiteliales del CNS Los tumores astrociticos , tales como astrocítoma, astrocitoma anaplásico (maligno) , tales como hemisférico, diencef lico, óptico, del tallo cerebral, cerebellar; glioblastoma multiforme; astrocitoma pilocítico, tal como hemisférico, diencefálico, óptico, del tallo cerebral, cerebelar,- astrocitoma de células gigantes subependimales ; y xantrocitoma pleomorfico. Tumores oligodendrogliales , tales como oligodendroglioma; y oligodendrogliorna anaplásico (maligno). Tumores celulares ependimiales , tales como ependimoma; ependimoma anaplastico; ependimoma mixopapilar ; y suependimoma . Gliomas mixtos, tales como oligoastrocitoma mixto; oligoastrocitoma anaplásico (maligno) ; y otros (por ejemplo, epéndimo-astrocitoma) . Tumores neuroepiteliales de origen incierto, tales como espongioblastoma polar; astroblastoma; y gliomatosis cerebro. Tumores del plexo coroides, tales como papiloma del plexo coroide; y carcinoma del plexo coroide (papiloma del plexo coroide anaplastico) . Tumores neuronales y mixtos neuronales-gliales , tales como gangliocitoma; gangliocitoma displásico del cerebelo (Lhermitte-Duelos) ; ganglioglioma ; ganglioglioma anaplásico (maligno) ; ganglioglioma infantildesmoplastico , tal como astrocitoma desmoplastico infantil; neurocitoma central; tumor neuroepitelial disembrioplásico; neuroblastoma olfatorio (estesioneuroblastoma) . Tumores pineal parenquímales , tales como pineocitoma; pineoblastoma; y pineocitoma/pineoblastoma mixtos; tumores con elementos neuroblasticos o glioblasticos (tumores embrionales) , tales como meduloepitelioma; tumores neuroectodermicos primitivos con diferenciación multipotente , tales como meduloblastoma ; tumor neuroectodérmico primitivo cerebla; neuroblastoma; retinoblastoma; y ependimoblastoma.

Otros neuplasmas de CNS Tumores de la región Sellar, tal como adenoma de la pituitaria; carcinoma de la pituitaria, y craneofaringioma . Tumores hematopoyéticos , tales como linfornas malignos; plasmacitomas ; y sarcoma granulocitico . Tumores germinales celulares, tales como germinoma,- carcinoma embrional; tumor de saco de yema (tumor del seno endodérmico) ; coriocarcinoma; teratoma; y tumores de células germinales mixtos. Tumores de las meninges, tales como meningioma; meningioma atípico; y meningioma anaplásico (maligno) . Tumores no meningoteliales de las meninges, tales como mesenquimal benigno; mesenquimal maligno; lesiones melanociticas primarias; neoplasmas hemopoyéticos ; y tumores de histogénesis incierta, tales como hemangioblastoma (hemangioblastoma capilar) . Tumores de los nervios craneanos y espinales, tales como schwannoma (neurinoma, neurilemoma) ; neurofibroma; tumor del nervio periférico maligno (schwannoma maligno) , tal como epiteliode, diferenciación mesenquimal o epitelial divergente, y melanotico. Extensiones locales de regiones tumorales; tales como paraganglioma (quemodectoma) ; cordoma; codroma; condrosarcoma; y carcinoma. Tumores metastáticos , tumores no clasificados y quistes y lesiones similares a tumores, tales como quiste de Rathke; epidermoide ; quiste coloide del tercer ventrículo; quiste enterogéno; quiste neuroglial; tumor de células granulares (coristoma, pituicitoma) ; amartoma neuronal hipotálamico; herterotopia glial nasal; y granuloma de las células plásmaticas.

Los métodos provistos aquí pueden proporcionar un efecto benéfico para neoplasmas del CNS, mediante la administración de un butano catecólico o una combinación de administración de un butano catecólico y uno o más tratamientos anticancer.

Cánceres del sistema nervioso periférico (PNS) El sistema nervioso periférico consiste de los nervios que se ramifican desde el cerebro y la médula espinal. Estos nervios forman la red de comunicación entre el CNS y las partes del cuerpo. El sistema nervioso periférico se subdivide adicionalmente en el sistema nerviosos somático y el sistema nerviosos autonómico. El sistema nerviosos somático consiste de nervios que van hasta la piel y los músculos y esta involucrado en las actividades consientes. El sistema nervioso autónomo consiste de nervios que conectan el CNS con los órganos viscerales tales como el corazón, estómago e intestinos. Media en las actividades no consientes.

Los neuromas acústicos son crecimientos fibrosos benignos que surgen del medio del balance, también denominado el octavo nervio craneano o nervio vestíbulo coclear. Estos tumores son no malignos, lo que quiere decir que no se esparcen o hacen metástasis a otras partes del cuerpo. La localización de estos tumores es profunda dentro del cráneo, adyacentes a centros vitales del cerebro en el tallo cerebral. A medida que los tumores se agrandan, se involucran en rodear estructuras' que tienen que ver con funciones vitales. La - mayoría de los casos estos tumores crecen lentamente durante un periodo de años .

El tumor maligno del sistema nervioso periférico (MPNST) es la contraparte maligna a los tumores de tejido suave benigno tales como neurofibroma y schwannomas . Es más común en el tejido suave profundo, usualmente en proximidad cercana del tronco nervioso, los sitios más comunes incluyen el nervio ciático, plexo braquial y plexo sarcal . El síntoma más común es dolor el cual usualmente lleva a una biopsia. Es un neoplasma orbital, raro, agresivo y letal que usualmente surge a partir de ramificaciones sensoriales del nervio trigémino en adultos. El tumor PNS maligno se esparcea lo largo de los nervios hasta involucrar el cerebro, y la mayoría de los pacientes mueren dentro de los 5 años siguientes al diagnostico clínico. El MPNST puede clasificarse en las tres principales categorías con características epitelioides , mesenquimales o glandulares. Algunos de los MPNST se incluyen pero se limitan a schwannoma epitelioide maligno subcutáneo con diferenciación cartilaginosa, schwannoma maligno glandular, tumor maligno del sistema nervioso periférico con diferenciación perineurial, tumor maligno del sistema nervioso epitelioide cutáneo con características raboides, MPNST epiteliode superficial, tumor tritón (MPNST con diferenciación rabdomioblastica) , schwannoma con diferenciación rabdomioblastica . Casos raros de MPNST contienen tipos de tejidos sarcomatosos múltiples especialmente osteosarcoma, condrosarcoma y angiosarcoma . Estos a veces se hacen distinguibles del mesenquimoma maligno del tejido suave.

Otros tipos de cánceres PNS incluyen pero no se limitan a citoma fibroso maligno, histiocitoma fibroso maligno, meningioma maligno, mesotelioma maligno y tumor Mülleriano mixto maligno.

Los métodos provistos aquí pueden proveer efectos benéficos para canceres de de PNS, mediante la administración de un butano catecólico o una combinación de administración de un butano catecólico y uno o más tratamientos anticáncer.

Cáncer de cavidad oral y orofaríngea El manejo de pacientes con canceres deis sistema nerviosos central (CNS) sigue siendo una tarea formidable. Los cánceres tales como el cáncer hipofaringeal , cáncer laríngeo, cáncer nasofaríngeo, cáncer orofaringeo, pueden tratarse dando los compuestos aquí descritos.

Estos métodos provistos aquí pueden proporcionar efecto benéfico para cáncer de cavidad oral y orofaríngea, mediante la administración de un butano catecólico o una combinación de administración de un butano catecólico y uno o más tratamientos anticancer.

Cáncer del estómago El cáncer del estómago es el resultado de cambios celulares en el recubrimiento del estomago. Hay tres tipos principales de cáncer de estomago: linfornas, tumores estromales gástricos y tumores carcinoides. Los linfornas son cánceres del tejido del sistema inmune que a veces se encuentran en las paredes del estomago. Los tumores estromales gástricos se desarrollan del tejido de la pared del estomago. Los tumores carcinoides son tumores de células productoras de hormonas del estómago. Las causas del cáncer del estomago continúan debatiéndose. Una combinación de herencia y ambiente (dieta, fumar, etc.) se cree que juegan todas un papel .

Los métodos provistos aquí pueden proporcionar un efecto benéfico para el cáncer de estomago, mediante la administración de un butano catecólico o una combinación de administración de un butano catecólico y uno o más tratamientos anticancer.

Cáncer testicular El cáncer testicular es un cáncer que típicamente se desarrolla en uno o ambos testículos en hombres jóvenes. Los canceres de testículo se desarrollan en ciertas células conocidas como las células germinales . Los dos tipos principales de tumores de células germinales (GCT) que se presentan en los hombres son seminomas (60%) y no seminomas (40%) . Los tumores también pueden surgir en tejidos que soportan y producen hormonas, o estromas, de los testículos. Tales tumores se conocen como tumores estromales gonadales . Los 2 principales tipos son tumores de células Leydig y tumores de células Sertoli. Los tumores testiculares secundarios son los que se inician en otro órgano y luego se esparcen al testículo. El linfoma es el cáncer testicular secundario más común.

Los métodos provistos aquí pueden proporcionar un efecto benéfico para el cáncer testicular, mediante la administración de un butano catecólico o una combinación de administración de un butano catecólico y uno o mas tratamientos anticancer.

Cáncer del timo El timo es un órgano pequeño localizado en la porción superior/barra frontal del pecho, que se extiende desde la base de la garganta hacia el frente del corazón. El timo contiene 2 tipos principales de células, células timicas epiteliales y linfocitos. Las células timicas epiteliales pueden dar origen a timomas y carcinomas tímicos. Los linfocitos, estando bien en el timo o en los nodulos linfáticos, pueden hacerse malignos y desarrollar canceres denominados enfermedad de Hodgkin y linfornas no Hodgkin. El timo también contiene otro tipo de células mucho menos común denominadas células Kulchitsky o células neuroendocrinas , que normalmente liberan ciertas hormonas. Estas células pueden dar lugar a cáncer, denominados carcinoides o tumores carcinoides que frecuentemente liberan el mismo tipo de hormonas, y son similares a otros tumores que surgen de las células neuroendocrinas en cualquier lugar del cuerpo.

Los métodos proporcionados aquí pueden proveer un efecto benéfico para el cáncer de timo, mediante la administración de un butano catecólico o una combinación de administración de un butano catecólico y uno o más tratamientos anticancer.

Se proporcionan aquí métodos para tratar un desorden de la piel, que comprende la administración de una cantidad efectiva de un compuesto farmacéutico capaz de inhibir la actividad de la tirosina quinasa de origen IGF- IR y EGFR, donde la composición farmacéutica es un butano catecólico.

En un aspecto, el trastorno de la piel es por ejemplo, un tumor, queratosis actínica, acné, psoriasis, lesiones en la piel, verrugas, infecciones bacterianas, infecciones fúngicas o infecciones virales. Las infecciones virales incluyen, pero no se limitan a, una infección con VIH, una infección con VPH y una infección con VSH. Los tumores incluyen, pero no se limitan, a carcinomas de las células básales, carcinomas de células escamosas, melanomas, dermatofibrosarcomas protuberans, carcinoma celular de Merkel y sarcoma de Kaposi.

Cáncer de colon y cáncer colorrectal El cáncer colorrectal también denominado cáncer de colon o cáncer del intestino grueso, incluye crecimiento canceroso en el colon, recto y apéndice. Con 655,000 muertes en todo el mundo al año, es la tercera forma más común y la segunda causa de muerte relacionada con el cáncer en el mundo occidental. Muchos canceres colorrectales se cree que surgen a partir de pólipos adenomatosos en el colon. Estos crecimientos similares a champiñones son usualmente benignos, pero algunos pueden convertirse en cáncer con el tiempo. En otra realización, puede utilizarse la clasificación de Dukes para clasificar el cáncer colorrectal con base en las etapas A - D. La etapa A se refiere al cáncer colorrectal que se limita a la mucosa (esto es, que no ha invadido a través de la pared del intestino) . La etapa Bl se refiere a la extensión en la muscularis propia, pero no penetrando a través de la misma (esto es, los nodulos linfáticos no han sido invadidos) ; mientras que el cáncer de etapa B2 ha penetrado a través de la muscularis propria, ha penetrado la muscularis propria pero no ha pasado a través de ella (esto es, los nodulos linfáticos no han sido invadidos) . La etapa Cl se refiere a un cáncer que se extiende dentro de la muscularis propia, pero no pasa a través de ella (esto es, los nodulos linfáticos están involucrados) ; mientras que la etapa C2 se refiere a un cáncer que se extiende dentro de la muscularis propia y penetra a través de la misma (esto es, los nodulos linfáticos están involucrados) . La etapa D se refiere a esparcimiento metastático al instante. El sistema TN también puede utilizarse para establecer etapas del cáncer colorrectal de acuerdo con medios convencionales conocidos en la técnica.

Los métodos provistos aquí pueden proporcionar un efecto benéfico para el cáncer colorrectal, mediante administración de un butano catecólico o una combinación de administración de un butano catecólico y uno o más tratamientos anticancer.

Dosificación Un médico o veterinario puede determinar fácilmente y prescribir la "cantidad efectiva" (ED50) de una composición requerida para inhibir tanto EGFR como IGF-IR. poe ejemplo, el médico o veterinario puede iniciar dosis de los compuestos empleados en la composición a niveles inferiores que los requeridos con el fin de alcanzar el efecto terpéutico deseado e incrementar gradualmente la dosificación hasta que se logre el efecto deseado.

Una "cantidad terapéuticamente efectiva" tal como se utiliza aquí, es una cantidad que alcanza al menos parcialmente un efecto terapéutico o profiláctico deseado en un órgano o tejido. En un ejemplo, la cantidad de un inhibidor para proporcionar prevención y/o tratamiento terapéutico de la enfermedad no está fijada per se. La cantidad de inhibidor administrada variara con el tipo de enfermedad, grado de la enfermedad, y tamaño de las especies del mamífero que sufre de la enfermedad.

Una realización contempla el uso de composiciones descritas aquí para hacer un medicamento para tratar una condición, enfermedad o trastorno descritos aquí. Los medicamentos se pueden formular con base en las características físicas del paciente/sujeto que necesita el tratamiento, y pueden formularse en formulaciones individuales o múltiples con base en la etapa de la condición, enfermedad o trastorno. Los medicamentos pueden empacarse en un empaque adecuado con etiquetas apropiadas para la distribución en hospitales y clínicas donde la etiqueta es útil para la indicación del tratamiento de un sujeto que tiene una enfermedad descrita aquí. Los medicamentos pueden empacarse en unidades individuales o múltiples. Las instrucciones para la dosificación y administración de las composiciones pueden incluirse dentro de los paquetes como se describe en otros lugares aquí.

Las composiciones farmacéuticas para las presentes realizaciones pueden formularse para dosificación por cualquier ruta de administración tal como, por ejemplo, administración intranasal; administración oral; o administración por inhalación; administración subcutánea; administración transdérmica; administración intraarterial , con o sin oclusión; administración intracraneal; administración intraventricular; administración intravenosa; administración bucal; administración intraperitoneal ; administración intraocular; administración intramuscular; administración por implantación; y administración venosa central. En una realización, el butano catecólico se formula para administración oral. En otra realización, el butano catecólico se formula para administración intravenosa.

Los butanos catecólicos pueden administrarse en unas cantidades de aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 375 mg/kg por dosis; de aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 250 mg/kg por dosis de aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 200 mg/kg por dosis; de aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 150 mg/kg por dosis; de aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg por dosis; de aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 75 mg/kg por dosis; de aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 50 mg/kg por dosis. Alternativamente los butanos catecólicos pueden administrarse en una dosis plana de un butano catecólico en una cantidad que va desde aproximadamente 1500 mg por día hasta aproximadamente 2500 mg por día; desde aproximadamente 1800 mg por día hasta aproximadamente 2300 mg por día; o aproximadamente 2000 mg por día. En una realización, un butano catecólico puede ponerse en contacto con células objetivo en una concentración' en un rango que va desde aproximadamente 1 µ? hasta aproximadamente 30 µ?. En otra realización, un butano catecólico puede ponerse en contacto con células objetivo en una concentración en un rango de aproximadamente 1 µ? hasta aproximadamente 10 µ?.

En otra realización, el NDGA puede administrarse en dosificaciones y programaciones de administración diferente tales como, por ejemplo: (1) administración oral dos veces al día en los días 1 - 28. El tratamiento se repite cada 28 días en ausencia de progresión de la enfermedad o toxicidad no aceptable; (2) 2000 mg una vez al día por administración oral; (3) IV los días 1 - 5, el tratamiento se repite cada 28 días en ausencia de progresión de la enfermedad o toxicidad inaceptable; (4) escalamiento de la dosis con una programación de inicio hasta un objetivo de 20 mg/cm3 de volumen de tumor y luego, cortes de pacientes nuevos que hayan tenido su programación extendida para administración semanal durante 4 semanas. La escalamiento de dosis continuará, asumiendo la tolerancia, de tal manera que las cohortes serán tratadas durante 6 semanas, y finalmente 8 semanas; (5) IV semanalmente a lo largo de 24 horas, comenzando las dosis con 100 mg/hora (2400 mg en un periodo de 24 horas) con escalamiento en 5 cohortes de 3 a 6 pacientes con incrementos de 25 mg por hora hasta un máximo de 200 mg/hora (4800 mg en un. periodo de 24 horas) o hasta que se defina el TD; (6) aplicación tópica a la cérvix; y (7) escalamiento de dosis con infusión IV durante 5 días consecutivos cada 28 días.

En una realización, una composición farmacéutica puede administrarse más frecuentemente que una vez cada 6 días durante un periodo de tiempo, o más frecuentemente que una vez cada 2 días durante un periodo de tiempo. En una realización, una composición farmacéutica se administra diariamente durante 4 semanas. En otra realización, una composición farmacéutica se administra tres veces diariamente durante tres semanas con un hiato de una semana antes de iniciar el nuevo ciclo. En otra realización, se administra una composición farmacéutica diariamente durante una semana seguida por un hiato de una semana. En otra realización, se administra una composición farmacéutica diariamente durante dos semanas seguida por un hiato de dos semanas . En otra realización, se administra una composición farmacéutica una vez o dos veces diariamente en forma continua o con un hiato de una semana antes de iniciar un nuevo ciclo. En aún otra realización, se administra una composición farmacéutica una vez por semana o dos veces por semana. Se entenderá que, según se necesite, cuando se consideran los ciclos de tratamiento, puede estudiarse el caso de un paciente y repetirse el tratamiento según se necesite.

En diversas realizaciones, un butano catecólico puede prepararse como una base libre o una sal, solvato, polimorfo, éster, tautómero o Profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. También se describen composiciones farmacéuticas que comprenden un butano catecólico o una sal, solvato, polimorfo, éster, tautomero o Profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Los compuestos y composiciones aquí descritos pueden administrarse bien solos o en combinación con vehículos, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables, en una composición farmacéutica, de acuerdo con la práctica farmacéutica estándar.

Además de los ejemplos antes mencionados y de las realizaciones de dosificaciones, ciclos y programaciones de ciclos, se contemplan aquí numerosas permutaciones de las dosificaciones, ciclos y programaciones antes mencionadas de los ciclos para la coadministración de un compuesto con un segundo compuesto quimioterapéutico, radioterapia o cirugía y puede administrarse de acuerdo con el paciente, tipo de cáncer y/o una programación apropiada de tratamiento según se determine por parte de profesionales médicos qualificados .

En diversas realizaciones, se usa una cantidad terapéuticamente equivalente de una dosis de un butano catecólico descrito aquí.

En diversas realizaciones, el butano catecólico se dosifica de tal manera que minimice la toxicidad hacia el paciente. En algunas realizaciones, el butano catecólico se dosifica de una manera adaptada para proveer parámetros farmacocinéticos particulares (PK) en un paciente humano. En algunas realizaciones, el butano catecólico se dosifica de una manera adaptada para proporcionar una concentración en sangre particular máxima (Cmax) del butano catecólico. En algunas realizaciones el butano catecólico se dosifica de una forma adaptada para proveer un tiempo particular (Tmax) en el cual se obtiene la concentración máxima en sangre del butano catecólico. En algunas realizaciones, el butano catecólico se dosifica de una manera tal que se adapte para proveer un área particular bajo la curva de concentración en plasma sanguíneo (AUC) para el butano catecólico. En algunas realizaciones, el butano catecólico se dosifica de una manera que provea una rata de eliminación particular (CL/F) o un tiempo de vida media particular (T¾) para el butano catecólico. A menos de que se especifique aquí otra cosa, los parámetros PK ya citados aquí, incluyendo las reivindicaciones anexas, se refieren a valores PK medios para una cohorte de al menos 3 pacientes bajo la misma dosificación de programación. Así, a menos que se especifique otra cosa: AUC = AUC medio para un cohorte de al menos 3 pacientes; Cmax = Cmax medio para una cohorte de al menos 3 pacientes; Tmax = Tmax medio para una cohorte de al menos 3 pacientes; Ti/2 = ??/2 medio para una cohorte de al menos 3 pacientes; y CL/F = CL/F medio para una cohorte de al menos 3 pacientes. En algunas realizaciones, la media es una cohorte de al menos 6 pacientes, o al menos 12 pacientes o al menos 24 pacientes o al menos 36 pacientes. Cuando se buscan otros valores diferentes de los PK medios, se indicará que el valor pertenece a individuos únicamente. También, al menos que se indique otra cosa aquí, AUC se refiere al AUC medio para la cohorte de al menos 3 pacientes, extrapolado hasta el infinito siguiendo un modelo de eliminación estándar. Si se busca un AUC para un tiempo determinado, los tiempos de inicio (x) y de terminación (y) se indicarán por la apelación del sufijo a "AUC" (por ejemplo, AUCX, y) .

TERAPIA DE COMBINACIÓN Un aspecto de las realizaciones aquí descritas proporciona métodos para tratar cáncer utilizando métodos de diferentes combinaciones de regímenes de tratamiento. Por ejemplo, tales compuestos de butano catecólico en conjunción con uno o más agentes quimioterapéuticos antineoplásticos, quimiopreventivos , agentes limitadores de los efectos colaterales, y/o tratamientos antineoplasticos (por ejemplo, cirugía) .

En cualquiera de tales métodos provistos aquí, un sujeto puede recibir adicionalmente la administración de uno o más agentes anticancer adicionales. Tal como se describió más arriba, estas terapias adicionales para el cáncer, pueden ser, cirugía, terapia con radiación, administración de agentes químioterapéuticos y combinación de cualquier dos o todos de estos métodos . Los tratamientos de combinación pueden presentarse secuencial o concurrentemente, y las terapias de combinación pueden ser terapias neoadyuvantes o terapias adyuvantes. Los agentes anticancer incluyen, pero no se limitan a, agentes para deterioro del ADN, inhibidores de topoisomerasa o inhibidores mitóticos . Se conoce actualmente en la técnica muchas quimioterapias y pueden utilizarse en combinación con los compuestos descritos aquí . En algunas realizaciones, la quimioterapéutica es seleccionada del grupo consistente de inhibidores mitóticos, agentes alquilantes, antimetabolitos , antibióticos intercalantes, inhibidores del factor de crecimiento, inhibidores del ciclo celular, enzimas, inhibidores de la topoisomerasa, modificadores de la respuesta biológica, antihormonas, inhibidores de la angiogénesis y antiandrógenos .

En una realización, el sujeto que va a tratarse puede ser resistente a un tratamiento con al menos un inhibidor de tirosina quinasa como por ejemplo, un inhibidor de EGFR solo, un inhibidor de IGF-IR solo, o un inhibidor de EGFR y un inhibidor de IGF- IR.

Tal como se utilizan aquí, los términos "tratamiento para cáncer" , "terapia para cáncer" y similares abarcan tratamientos tales como cirugía, tal como corte, abrasión, ablación (por medios físicos o químicos, o una combinación de medios físicos o químicos) sutura, tratamiento con láser o cualquier otro que físicamente cambie los tejidos corporales y los órganos) , terapia por radiación, administración de agentes quimioterapéuticos o combinación de cualquiera dos o todos de estos métodos. Los tratamientos de combinación pueden presentarse secuencial o concurrentemente. Los tratamientos, tales como terapia por radiación y/o quimioterapia, que se administran antes de la cirugía se denominan como terapia neoadyuvante . Los tratamientos tales como terapia por radiación y/o quimioterapia, administrados después de la cirugía se denominan aquí como terapia adyuvante. Ejemplos de cirugías que pueden utilizarse para el tratamiento del cáncer incluye, pero no se limitan a prostatectomia radical, crioterapia, mastectomía, lunpectomia, resección transuretral de la próstata y similares .

Se conocen muchos agentes quimioterapéuticos y operan a través de una amplia variedad de modos de acción. En algunas realizaciones no limitantes, el agente quimioterapéutico es un agente citotóxico, un agente antiproliferativo, un agente de objetivo (tal como inhibidores de quinasa y reguladores del ciclo celular) , o un agente biológico (tal como citoquinas, vacunas, agentes virales y otros inmunoestimulantes tales como BCG, hormonas, anticuerpos monoclonales y ARNsi) . La naturaleza de una terapia de combinación que involucra la administración de un agente quimioterapéutico dependerá del tipo de agente que esta siendo usado.

Cuando se contemplan tratamientos de combinación, no se pretende que un inhibidor sea limitado por la naturaleza particular de la combinación. Por ejemplo, un inhibidor puede ser administrado en combinación como mezclas simples así como híbridos químicos. Un ejemplo de este último es cuando el compuesto está enlazado de forma covalente a un vehículo transportador o a un producto farmacéutico activo. El enlazamiento covalente puede lograrse de muchas maneras tales, como, pero no limitándose a, el uso de un compuesto de entrecruzamiento comercialmente disponible.

Tal como se utilizan aquí, los términos "combinación farmacéutica", "administrar una terapia adicional", "administrar un agente terapéutico adicional" y similares se refieren a una terapia farmacéutica que resulta de la mezcla o combinación de dos o más de un ingrediente activo e incluye tanto combinaciones fijas como no fijas de los ingredientes activos. El término "combinación fija" significa que un inhibidor, y al menos un coagente, se administran a un paciente de forma simultánea en la forma de una entidad o dosificación individual. El término "combinación no fija" significa que un inhibidor, y al menos un coagente, se administran a un paciente como entidades separadas bien de forma simultánea, concurrente o secuencial con limites de tiempo variables, donde tal administración proporciona niveles efectivos de los dos o más compuestos en el cuerpo del paciente. Esto también se aplica a terapias coctel, por ejemplo, la administración de tres o más ingredientes activos.

Tal como se utilizan aquí, los términos "coadministración" , "administrado en combinación con" y sus equivalentes gramaticales o similares pretenden abarcar la administración de los agentes terapéuticos seleccionados a un paciente individual, y pretenden incluir regímenes de tratamiento en los cuales los agentes se administran por la misma o diferente ruta de administración o en el mismo o diferentes tiempos. En algunas realizaciones, un inhibidor será coadministrado con otros agentes. Estos términos abarcan administración de dos o más agentes a un animal de tal manera que ambos agentes y/o sus metabolitos que están presentes en el animal al mismo tiempo. Incluyen administración simultánea en composiciones separadas, administración en diferentes tiempos en composiciones separadas, y/o administración de una composición en la cual están presentes ambos agentes. Así, en algunas realizaciones, un inhibidor y los otros agentes se administran en una composición individual. En algunas realizaciones, un inhibidor y el otro agente se mezclan en la composición.

Tal como se utiliza aquí, "agentes o tratamientos anticáncer" se refieren a, pero no se limitan a, un agente quimioterapéutico, un agente para deterioro de ácidos nucleicos, un tratamiento para daño de ácidos nucléicos, un anticeurpo anticancer, un agente antiproliferativo, o un tratamiento antiproliferativo al sujeto, se entenderá que el listado de regímenes terapéuticos que se presenta más abajo representa terapias convencionales, pero las realizaciones presentes abarcan otros regímenes terapéuticos conocidos que no se divulgan específicamente aquí.

Los agentes antineoplásticos quimioterpaéuticos adecuados para usarse en los presentes métodos incluyen, pero no se limitan a, agentes alquilantes, antimetabolitos , agentes antineoplasticos naturales, agentes antineoplásticos hormonales, inhibidores de la angiogénesis , reactivos diferenciadores , inhibidores de ARN, anticuerpos o agentes inmunoterapéuticos , agentes para terapia genética, inhibidores enzimáticos de moléculas pequeñas, modificadores de la respuesta biológica, y agentes antimetástaticos .

Agentes alquilantes Los agentes alquilantes son conocidos por actuar a través de la alquilación de macromoléculas tales como el ADN de células cancerosas, y son usualmente electrófilos fuertes. La actividad puede perturbar la síntesis de ADN en la división celular. Ejemplos de agentes alquilantes adecuados para su uso aquí incluyen mostazas de nitrógeno y sus análogos y derivados que incluyen ciclofosfamida, y fosfamida, cloranbucilo, estramustina, mecloretamina clorhidrato, melfalan y uracil mostaza. Otros ejemplos de agentes alquilantes incluyen sulfonatos de alquilo (por ejemplo, bususlfan) , nitrosoureas (por ejemplo, carmustina, lomustina y estreptozocina) , triacenos (por ejemplo, dacarbazina y temozolomida) , etileniminas/metilmelaminas (por ejemplo, altretamina y tioteopa) y derivados de la metilhidrazina (por ejemplo, procarbazinas ) . Se incluyen el grupo de agentes alquilantes los fármacos que contienen platino similares a los alquilantes que comprenden carboplatino, cisplatino y oxaliplatino .

Antimetabolitos Los agentes antineoplásicos antimetabolicos recuerdan estructuralmente los metabolitos naturales, y están involucrados en los proceso metabolicos normales de las células cancerosas tales como la síntesis de ácidos nucléicos y proteínas. Difieren suficientemente de los metabolitos naturales de manera que pueden interferir con los procesos metabolicos de las células cancerosas. Los agentes antineoplasticos antimetabolicos adecuados para usarse en los presentes métodos pueden clasificarse de acuerdo con los procesos metabolicos que afectan, y pueden incluir, pero no se limitan a, análogos y derivados del ácido fólico, pirimidinas, purinas y citidinas . los miembros del grupo del ácido fólico de agentes adecuados para uso aquí incluyen, pero no se limitan a, metotrexato (ametopterina) , pemetrexed y sus análogos y derivados. Agentes de pirimidina adecuados para uso aquí incluyen, pero no se limitan a, citarabina, fluxoridina, fluorouracil (5-fluorouracil) , capecitabina, gemcitabina y sus análogos y derivados. Agentes purínicos adecuados para su uso aquí incluyen, pero no se limitan a, mercaptopurina (6-mercaptopurina) , pentostatina, tiogaunina, cladribina, y sus análogos y derivados. Agentes de citidina adecuados para su uso aquí incluyen, pero no se limitan a, citarabina (citocina arabinosido) , azacitidina (5-azacitidina) y sus análogos y derivados.

Agentes antineoplásticos naturales Agentes antineoplásticos naturales comprenden agentes antimitóticos , agentes antineoplásticos antibióticos, agentes captotecina análogos, y enzimas. Agentes antimitóticos adecuados para su uso aquí incluyen, pero no se limitan a, alcaloides vinca como vinblastina, vincristina, vindesina, vinorelbina y sus análogos y derivados . Se derivan de la planta pervinca de Madagascar y son usualmente específicos para un ciclo celular de la fase M, enlazándose a la tubulina en los microtúbulos de las células cancerosas. Otros agentes antimitóticos para su uso aquí son las podofilotoxinas , que incluyen, pero no se limitan a etoposido, tenoposido y sus análogos y derivados. Estos reactivos predominantemente apuntan al G2 y a la fase S tardía del ciclo celular.

También se incluye dentro de los agentes antineoplásticos naturales los agentes antineoplásticos antibióticos. Los agentes antineoplásticos antibióticos son fármacos antimicrobianos que tiene propiedades antitumorales usualmente a través de la interacción con el ADN de las células cancerosas. Los agentes antineoplásticos antibióticos adecuados para uso aquí incluyen, pero no se limitan a, belomicina, dactinomicina, doxorubicina, idarubicina, epirubicina, mitomicina, mitoxantrona, pentostatin, plicamicina y sus análogos y derivados.

La clasificación del agente antineoplástico natural también incluye análogos de la captotecina y derivados que son adecuados para su uso aquí e incluyen camptotecina, topotecan e irinotecan. Estos agentes actúan primariamente apuntando hacia la enzima topoisomerasa Inuclear. Otras subclases bajo los agentes antineoplásticos naturales es la enzima L-asparaginasa . y sus variantes. La L-asparaginasa actúa privando a las células cancerosas de L-asparagina catalizando la hidrólisis de la asparagina circulante a ácido aspártico y amoniaco.

Agentes antineoplásicos hormonales Los agentes antineoplásicos hormonales actúan predominantemente sobre células cancerosas dependientes de hormonas asociadas con tejido prostático, tejido de seno, tejido endometrial, tejido ovárico, linfoma y leucemia. Tales tejidos pueden responder y depender de tales clases de agentes tales como glucocorticoides, progestinas, estrógenos y andrógenos . Tanto análogos como derivados que son agonistas o antagonistas son adecuados para tratar tumores. Ejemplos de agonistas/antagonistas glucocorticoides adecuados para su uso aquí incluyen dexametasona, cortisol, corticosterona, prednisona, mifepristona (RU486) , sus análogos y derivados. La subclase agonista/antagonista de la progestina de agentes adecuados para su uso aquí incluye, pero no se limita a, hidroxiprogesterona, medroxiprogesterona, acetato de megestrol, mifepristona (RU486) , ZK98299, sus análogos y derivados. Ejemplos de la subclase de agonistas/antagonistas de estrógeno de agentes adecuados para su uso aquí incluyen, pero no se limitan a, estrógeno, tamoxifen, toremifeno, RU58668, SR16234, ZD164384, ZK191703, fulvestran, sus análogos y derivados. Ejemplos de inhibidores de aromatasa adecuados para uso aquí, que inhiben la producción de estrógenos, incluyen, pero no se limitan a, androstenediona, formestaño, exemestano, aminoglutetimida, anastrazol, letrozol, sus análogos y derivados. Ejemplos de la subclase agonista/antagonista de andrógenos de agentes adecuados para uso aquí incluye, pero no se limitan a, testosterona, dihidrotestosterona, fluximesterona, testolactona , enantato de testosterona, propionato de testosterona, agonistas antagonistas de la hormona de liberación de gonadotropina (por ejemplo, leuprolido, goserelina, triptorelina, buserelina) , dietiletilbestrol , abarelix, ciproterona, flutamida, nilutamida, bicalutamida, sus análogos y derivados .

Inhibidores de la angiogénesis Los inhibidores de la angiogénesis trabajan inhibiendo la vascularización de los tumores. Los inhibidores de angiogénesis abarcan una amplia variedad de agentes que incluyen agentes de moléculas pequeñas, agentes anticuerpos, y agentes que apuntan a la función del ARN. Ejemplos de inhibidores de angiogénesis adecuados para uso aquí incluyen, pero no se limitan a, ranibizumab, bevacizumad, SU11248, PTK787, ZK222584, CEP-7055, angiozima, dalteparin, talidomide, suramina, CC-5013, combretastatina A4 fosfato, LY317615, isoflavones de soja, AE-941, alfa interferon, PTK787/ZK222584, ZD6474, EMD 121974, ZD6474, BAY 543-9006, celecoxib, bromhidrato de halofuginona, bevacizumab, sus análogos, variantes o derivados.

Reactivos de diferenciación Los agentes de diferenciación inhiben el crecimiento tumoral a través de mecanismos que inducen a las células cancerosas a diferenciarse. Una tal subclase de estos agentes adecuados para su uso aquí incluye, pero no se limita a, análogos de la vitamina A o retinoides, y agonistas del receptor activado por el proliferador de la peroxisoma (PPARs) . Retinoides adecuados para uso aquí incluyen, pero no se limitan a, vitamina A, vitamina A aldehido (retinal) , ácido retinoico, fenretinida, ácidos 9-cis retinoide , ácido 13-cis retinoide, ácido todo-trans-retinoico, isotretionina, tretionina, palmitato de retinilo, sus análogos y derivados. Los análogos de PPARs adecuados para su uso aquí incluyen, pero no se limitan a, troglitazona, ciglitazona, tesaglitazar, sus análogos y derivados.

Inhibidores del ARN Ciertos agentes inhibidores de RNA pueden utilizarse para inhibir la expresión o translación del ARN mensajero ( "ARNm" ) que está asociado con un fenotipo de cáncer. Ejemplos de tales agentes adecuados para su uso aquí incluyen, pero no se limitan a, ARN de interferencia corto ("ARNs"), ribozimas y oligonucleótidos antisentido. Ejemplos específicos de agentes inhibidores de ARN adecuados para uso aquí incluyen, pero no se limitan a Cand5 , Sirna-027, fomivirsen y angiozima.

Agentes anticuerpos/inmunoterapéuticos Los agentes anticuerpo apuntan selectivamente expresados en células cancerosas y pueden bien utilizar un conjugado para matar las células, o elicitar la respuesta inmune del cuerpo para destruir las células cancerosas. Los agentes inmunoterapéuticos pueden bien estar comprendidos de anticuerpos policlonales o monoclonales . Los anticuerpos pueden estar comprendidos de componentes animales no humanos (por ejemplo ratón) y componentes humanos, o pueden consistir de componentes completamente humanos ( "anticuerpos humanizados")- Ejemplos de agentes inmunoterapéuticos monoclonales adecuados para uso aquí incluyen, pero no se limitan a, rituximab, tosibtumomab, ibritumomab, que apunta a la proteína CD-20. Otros ejemplos adecuados para este uso incluyen trastuzumab, edrecolomab, bevacizumab, cetuximab, carcinoembrionic antigéno anticuerpo, gemtuzumab, alemtuzumab, mapatumumab, panitumumab, EMD 72000, TheraCIM Hr3, 2C4, HGS-TR2J, y HGS-ETR2.

Agentes de terapia genética Los agentes de terapia genética insertan copias de los genes en un conjunto específico de células del paciente, y pueden apuntar tanto a células cancerosas como células cancerosas. El objetivo de la terapia genética puede ser reemplazar genes alterados con genes funcionales, para estimular una respuesta inmune del paciente al cáncer, para hacer que las células del cáncer sean más sensibles a la quimioterapia, para situar genes "suicidas" en las células cancerígenas, o para inhibir angiogénesis . Los genes pueden administrarse a células objetivo utilizando virus, liposomas u otros vehículos o vectores . Esto puede hacerse inyectando la composición que porta el gen en el paciente directamente, o ex vivo, reintroduciendo células infectadas dentro de un paciente. Tales composiciones son adecuadas para su uso en los presentes métodos.

Inhibidores enzimáticos de moléculas pequeñas Ciertos agentes terapéuticos para moléculas pequeñas son capaces de apuntar a la actividad enzimática de la tirosina quinasa o a las señales de transducción corriente debajo de ciertos receptores celulares tales como el receptor de factor de crecimiento epidérmico ("EGFR") o el factor de crecimiento endotelial vascular ( "VEGFR" ) . Tal direccionamiento mediante una terapia de moléculas pequeñas podrá dar como resultado efectos anticancerosos. Ejemplos de tales agentes adecuados para uso aquí incluye, pero no se limitan a, imatinib, gefitinib, erlotinib, lapatinib, canertinib, ZD6474, sorafenib (BAY 43-9006), ERB-569, y sus análogos y derivados.

Modificadores de la respuesta biológica Ciertos agentes de proteínas o moléculas pequeñas pueden utilizarse en terapia anticáncer bien a través de efectos antitumorales directos o efectos indirectos. Ejemplos de agentes de acción directa adecuados para uso aquí incluyen pero no se limitan a reactivos diferenciadores tales como retinoides y derivados de retinoides. Los agentes de acción indirecta adecuados para uso aquí incluyen, pero no se limitan a, agentes que modifican o potencian el sistema inmune u otros sistemas tales como interferones , interleucinas , factores de crecimiento hematopoyéticos (por ejemplo, eritropoyetina) , y anticuerpos (monoclonales y policlonales) .

Agentes antimetastásicos El proceso mediante el cual las células cancerosas se esparcen desde el sitio del tumor original a otras localizaciones alrededor del cuerpo se denomina metástasis del cáncer. Ciertos agentes tienen propiedades antimetástásicas , diseñados para inhibir la dispersión de las células cancerosas. Ejemplos da tales agentes adecuados para uso aquí incluyen, pero no se limitan a, marimastat, bevacizumab, trstuzumab, rituximab, erlotinib, MMI-166, GRN163L, péptidos cazadores-matadores , inhibidores de tejido de las metaloproteínasas (TIMP) , sus análogos derivados y variantes .

Agentes quimiopreventivos Ciertos agentes farmacéuticos pueden utilizarse para prevenir la ocurrencia inical de cáncer, para prevenir la recurrencia o la metástasis. La administración de tales agentes quimiopreventivos en combinación con uno o más otros agentes anticáncer incluyendo los butanos catecólicos pueden actuar para tratar en conjunto y prevenir la recurrencia del cáncer. Ejemplos de agentes quimiopreventivos adecuados para uso aquí incluyen, pero no se limitan a, tamoxifen, raloxifeno, tibolona, bisfosforato, ibandronato, moduladores receptores del estrógeno, inhibidores de la aromatasa (letrozol, anastrozol) , agonistas de la hormona liberadora de la hormona luteinizante , gocerelina, vitamina A, retinol, ácido retinoico, fenretinide, ácido 9-cis-retinoide, ácido 13-cis-retinoide, ácido todo-trans-retinoico, isotretinoina, tretinoide, vitamina B6, vitamina B12, vitamina C, vitamina D, vitamina E, inhibidores de ciclooxogenasa, fármacos antiinflamatorios no esteroidales (NSAID) , aspirina, iboprufeno, celecoxib, polifenoles, polifenol E, extracto de té verde, ácido fólico, ácido glucárico, interferon alfa, anetol ditioletiona, . zinc, piridoxina, finasteride, doxazosin, selenio, indol-3-carbinal, alfa-difluorometilormitina, carotenoides , beta caroteno, licopoeno, antioxidantes, coenzima Q 10, flavonoides, quercetina, curcumina, catequinas, epigalocatequina galato, N-acetilcisteina, indol-3 -carbinol, inositol hexafosfato, isoflavonas, ácido glucánico, romero, soja, palma boba y calcio.

Agentes limitantes de efectos colaterales El tratamiento del cáncer con butanos catecólicos solo o en combinación con otros compuestos antineoplásticos pueden acompañarse con la administración de otros agentes farmacéuticos que puedan alivisr los efectos colaterales producidos por los agentes antineoplásticos. Tales agentes adecuados para uso aquí incluyen, pero no se limitan a, antieméticos, agentes antimucosíticos , agentes para el manejo del dolor, agentes para el control de la infección, agentes antianemia/antitrombocitopenia. Ejemplos de antieméticos adecuados para uso aquí incluyen, pero no se limitan a, antagonistas del receptor 3 de 5 -hidroxitriptamina, metoclopramide , esteroides, loracepam, ondasetron, cannabinoides , sus análogos y derivados. Ejemplos de agentes antimucosíticos adecuados para uso incluyen, pero no se limitan a, palifermina (factor de crecimiento de queratinocitos) , péptido 2 similar al glucagón, teduglútido, L-glutamina, amifostina, y factor 20 de crecimiento de fibroblastos. Ejemplos de agentes de manejo de dolor adecuados para su uso aquí incluyen, pero no se limitan a. opiodes, opiatos y compuestos antiinflamatorios no esteroidales . Ejemplos de agentes utilizados para el control de la infección adecuados para su uso aquí incluyen, pero no se limitan a antibacterianos tales como aminoglicósidos , penicilians, cefalosporinas , tetraciclinas , clindamicina, lincomicina, macrólidos, vancomicina, carbapenems, monobactams, fluoroquinolonas , sulfonamidas , nitrofurantoinas sus análogos y derivados. Ejemplos de agentes que puden tratar la anemia o la trombocitopenia asociada con la quimioterapia adecuada para uso aquí incluye, pero no se limitan a, eritropoyetina y trombopoyetina .

Varias otras terapias adecuadas para uso en combinación con los butanos catecólicos y otros compuestos descritos aquí también están disponibles. Por ejemplo, véase Goodman & Gilman The Pharmacological Basis de Therapeutics llth ed. Brunton LL, Lazo JS , y Parker KL, ed. McGraw-hill, New York, 2006.

Cáncer de ovario En una realización, el cáncer es cáncer de ovario y el uno o más tratamientos terapéuticos es cirugía, quimioterapia (por ejemplo, doxorubicina, doxilo, gemcitabina, rubitecam, y quimioterapéutica basada en platino tal como cisplatino, carboplatino y oxaliplatino) , melfalan, paclitaxel, inhibidores de la topisomerasa I tales como topotecan e iridotecan, terapia basada en taxano, hormonas, terapia de radiación, hipotermia corporal completa, derivados de isoflavona tales como fenoxodial, macrólidos citotóxicos tales como epotilones, inhibidores de la angiogénesis tales como bevacizumab, inhibidores de transducción de señales tales como transtuzumab, terapia genética, terapia con AR i, inmunoterapia, anticuerpos monoclonales , inhibidores de la quinasa similares al fosfatidilinositol tales como rapamicina, o cualquier combinación de los mismos. En aún otras realizaciones el tratamiento terapéutico es un inhibidor del receptor de VEGF. Ejemplos no limitantes de inhibidores del receptor de VEGF incluyen bevacizumab (AVASTIN®) , ranibizumab (LUCENTINS®) , VEGF-Trap, sunitinib (SUTENT®) , sorafenib ( EXAVAR®) , axitinib, pegaptanib y pazopanib .

Cáncer de hígado En una realización, el cáncer es cáncer de hígado y el uno o más tratamientos anticáncer es, por ejemplo, cirugía, inmunoterapia, terapia por radiación, quimioterapia en inyección de etanol percutánea. Los tipos de cirugías que pueden utilizarse son criocirugía, hepatectomia parcial, hepatectomia total y ablación por radiofrecuencia. La terapia por radiación puede ser una terapia por radiación de haces externos, braquiterapia, radiosensibilizadores y anticuerpos radiomarcados . Otros tipos de tratamiento incluyen terapia de hipertermia e inmunoterapi .

Cáncer de piel Hay disponibles diferentes tipos de tratamiento para pacientes con cáncer de piel de tipo no melanoma y melanoma y queratosis actínica incluyendo cirugía, terapia por radiación, quimioterapia y terapia fotodinámica . Algunas opciones quirúrgicas posibles para el tratamiento del cáncer de piel son cirugía micrográfica Mohs, excisión simple, electrodesecación y curetaje, criocirugía, cirugía con láser. La terapia por radiación puede ser terapia de radiación de haces externos o braquiterapia . Otros tipos de tratamientos que están siendo probados en las pruebas clínicas son la terapia biológica o la inmunoterapia, quimioinmunoterapia, quimioterapia tópica con fluorouracil y terapia fotodinámica .

Cáncer del endometrio En una realización, el cáncer es cáncer de endometrio y el uno o más tratamientos anticáncer es, por ejemplo cirugía, terapia por radiación, quimioterapia, terapia genética, terapia fotodinámica, terapia por angiogénesis e inmunoterapia o una combinación de los mismos.

Cáncer renal/de riñon En una realización, el cáncer es cáncer renal/de riñon y el uno o más tratamientos terapéuticos es cirugía, quimioterapia, bevacizumab (AVASTIN®) , ranibizumab (LUCENTIS®) , VEGF-Trap, sinitinib (SUTENT®) , sorafenib (NEXAVAR®) , axitinib, pegaptanib, pazopanib, interferon-alfa, IL-2, o cualquier combinaciónde los mismos.

Cáncer testicular En una realización, el cáncer es cáncer testicular y el uno o más tratamientos anticáncer es, por ejemplo, cirugía, inmunoterapia, quimioterapia, terapia por radiación, combinación de quimioterapia y terapia por radiación o terapia biológica. Se utilizan típicamente varios fármacos para tratar el cáncer testicular: platinol (cisplatina) , Vepesid o VP-16 (etoposide) y Blenoxane (sulfato de bleomicina) . Adicionalmente , pueden utilizarse Ifex (ifosamida), Velban (sulfato de vinblastina) y otros.

Cáncer de estómago En una realización, el cáncer es cáncer testicular y el uno o más tratamientos anticáncer es, por ejemplo, cirugía, inmunoterapia, quimioterapia, terapia de radiación, combinación de quimioterapia y terapia de radiación o terapia biológica.

Cáncer de timo En una realización, el cáncer es cáncer de timo y el uno o más tratamientos anticáncer es, por ejemplo, cirugía, inmunoterapia, quimioterapia, terapia por radiación, combinación de quimioterapia y terapia por radiación o terapia biológica. Los fármacos anticáncer que han sido utilizados en el tratamiento de timomas y carcinomas más tímicos son doxorubicina (Adriamicina) , cisplatina, ifosfamida, y corticosteroides (prednisona) . A menudo, estos fármacos se dan en combinación para incrementar su efectividad. Las combinaciones utilizadas para tratar el cáncer tímico incluyen cisplatina, doxorubicina, etoposido y ciclofosfamida, y la combinación de cisplatina, doxorubicina, ciclofosfamida y vincristina.

Mieloma En una realización, el cáncer es mieloma y el uno o más tratamientos terapéuticos es cirugía, radioterapia, VELCADE®, lenalidomida o talinomida o una combinación de los mismos. En una realización, el tratamiento es VELCADE®. Las dosificaciones para cualquiera de estas terapias son conocidas en la técnica y pueden ajustarse concordantemente con terapia de combinación.

Cáncer de próstata En una realización, el cáncer es cáncer de próstata y el uno o más tratamientos terapéuticos es cirugía, radioterapia (por ejemplo, haz externo o braquiterapia) , deprivación hormonal (supresión de andrógenos) , choque por calor, inhibidores proteína 90 (HSP90), quimioterapia (por ejemplo, docetaxel, quimioterapia basada en platino tal como cisplatina, carboplatina, satraplatina y oxaliplatina, taxano, estramustina) , prednisona o prednisolona, fármacos para la disminución del colesterol tales como estatinas, agonistas de la hormona de liberación hormonal leutinizante (LHRH) , terapia con ARNi, células tumorales completas modificadas genéticamente para secretar el macrófago de los granulocitos-factor estimulante de colonia (GM-CSF) (también conocido como GVAX) , o cualquier combinación de los mismos. En aún otra realización, el uno o más tratamientos terapéuticos es un inhibidor del sector de VEGF. Ejemplos no limitantes de inhibidores del receptor de VEGF incluyen bevacizumab (AVASTIN®) , ranibizumab (LUCENTIS®) , VEGF-Trap, sunitinib (SUTENT®) , sorafenib ( EXAVAR®) , axitinib, pegaptanib y pazopanib.

Cáncer de pulmón En una realización, el cáncer es cáncer de pulmón y el uno o más tratamientos terapéuticos es cirugía, radioterapia (por ejemplo, radioterapia torácica, terapia de radiación con partículas cargadas, Uracil-tegafur y terapia basada en platino (por ejemplo, cisplatino, carboplatino, oxiplatino, etc.) y vinoreblina, Erlotinib (TARCEVA®) , Gefitinib (IRESSA®) , anticuerpos del receptor del factor de crecimiento antiepidérmico (por ejemplo, Cetuximab) , anticuerpos del factor de crecimiento endotelial antivascular (por ejemplo, Bevacizumab) , inhibidores de moléculas pequeñas de tirosina quinasas, inhibidores directos de las proteínas involucradas en la proliferación de las células cancerosas de pulmón, inhibidores de la aurora quinasa, termoterapia inducida por láser, terapia con ARNi, células tumorales completas modificadas genéticamente para secretar macrófagos de granulocitos-factor estimulante de colonias (GM-CSF) (también conocido como GVAX) , bevacizumab (AVASTINE®) , ranibizumab (LUCENTIS®) , VEGF-Trap, sunitinib (SUTENT®) , sorafenib ( EXAVAR®) , axitinib, pegaptanib y pazopanib, o cualquier combinación de los mismos. Los tratamientos terapéuticos adicionales incluyen Taxol y permetrexed. Las dosificaciones para cualquiera de estas terapias son conocidas en la técnica y pueden ajustarse concordantemente con la terapia de combinación .

Cáncer de seno En una realización, el cáncer es cáncer del seno y el uno o más tratamientos terapéuticos es cirugía, anticuerpos monoclonales (por ejemplo, anticuerpos Her-2, herceptina, bevacizumab (AVASTIN®) , ranibizumab (LUCENTIS®) , sunitinib (SUTENT®) , sorafenib ( EXAVAR®) , axitinib, pegaptanib y pazopanib) , quimioterapia adyuvante tal como quimioterapia con un agente individual o quimioterapia de combinación (por ejemplo, poliquimioterapias basadas en antraciclina y taxano, taxol o trastuzumab específico de un objetivo con o sin manipulación endocrina con o sin PMRT, vinorelbina) , VEGF-Trap, xeloda, taxotere, adriamicina, ciclofosfamida, xeloda, taxotere, moduladores del receptor de estrógenos selectivos tales como Taxomifeno y Raloxifeno, moduladores del receptor de estrógeno alosterico tal como Trilostano, radiación (por ejemplo, braquiterapia intersticial, dispositivo Mammosite, radiación externa conformacional en 3 dimensiones y radioterapia intraoperatoria) . Inhibidores de aromatasa que suprimen la síntesis total en el cuerpo (por ejemplo, anastrozol, exemestano y letrozol) , terapia con ARNi, análogos intravenosos de la rapamicina que son inmunosupresores y antiproliferativos tales como Temsirolimus (CCI779) , o cualquier combinación de los mismos. Las dosificaciones de cualquiera de estas terapias son conocidas en la técnica y pueden ajustarse concordantemente con la terapia de combinación.

Cáncer de colon En una realización, el cáncer es cáncer de colon y el uno o más tratamiento terapéutico es cirugía, terapia de radiación y quimioterapia (por ejemplo, 5. fluorouracilo, levamisol, leucovorin o semustin (metil CCNU) , N- [2-(dimetilamino) etil] acridin-4-carboxamida y otros fármacos anticáncer relacionados con la1 carboxamida; inhibidores de la non topoisomerasa II, irinotecan, topotecan liposomal, clases de ' taxano de agentes anticáncer (por ejemplo, paclitaxel o docetaxel) un compuesto de la clase del ácido acético xantenona (por ejemplo, ácido 5 , 6-dimetilantenona-4-acético-PMAA, ácido folínico (FA) , Gemcitabine, Ara-C, agentes quimioterapéuticos basados en platino tales como cisplatino, carboplatino y oxaliplatino, un inhibidor de la fosfodiesterasa específico para cGMP, o cualquier combinación de los mismos. Las dosificaciones de cualquiera de estas tres terapias son conocidas en la técnica y pueden ajustarse concordantemente con terapias de combinación.

Cáncer pancreático En una realización, el cáncer es cáncer pancreático y el uno o más tratamiento terapéutico es cirugía, terapia de radiación (RT) , Fluorouracil (5-FU) y RT, terapia sistémica, injertos, Gemcitanbina (GEMZAR®) , Gemcitabina y RT, Cetuximab, erlotinib (TARCEVA®) , quimiorradiación, bevacizumab (AVASTIN®) o cualquier combinación de los mismos.

Las dosificaciones para cualquiera de estas terapias no conocidas en la técnica y pueden ajustarse en concordancia con la terapia de combinación.

Cáncer cervical En una realización, el cáncer es cáncer cervical y el uno o más tratamientos anticáncer incluyen pero no se limitan a, cirugía, inmunoterapia, terapia de radiación y quimioterapia. Algunas posibles opciones quirúrgicas son criocirugías , una histerectomía y una histerectomía radical. La terapia de radiación para los pacientes con cáncer cervical incluyen terapia con radiación de haces externos o braquiterapia . Los fármacos anticáncer que pueden administrarse como parte de la quimioterapia para tratar cáncer cervical incluyen cisplatino, carboplatino, hidroxiurea, irinotecan, bleomicina, vincristina, mitomicina, ifosfamida, f luorouracilo, etposido, metotrexato y combinaciones de los mismos.

Cáncer de tiroides En otra realización, el cáncer es cáncer de tiroides y en uno o más tratamientos anticáncer incluyen, pero no se limita a, cirugía, inmunoterapia, terapia de radiación, terapia hormonal y quimioterapia. La cirugía es el tratamiento más común del cáncer de tiroides. Algunas opciones quirúrgicas posibles para el tratamiento de cáncer de tiroides son lobectomía, tiroidectomía casi total, tiroidectomía total y disección de nodulo linfático. La terapia de radiación puede ser terapia de radiación externa o puede requerir el consumo de un líquido que contenga yodo radioactivo. La terapia hormonal usa hormonas para detener las células cancerosas en su crecimiento. Al tratar el cáncer de tiroides, pueden utilizarse hormonas para impedir que el cuerpo siga fabricando otras hormonas que puedan hacer que crezcan otras células cancerosas.

Resistencia al inhibidor de EGFR e inhibidores de EGFR La sobreexpresión del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) , o su ligando TGF , está asociada frecuentemente por ejemplo, con cáncer de seno, pulmón y cabeza y cuello, y se cree que contribuye al crecimiento maligno de estos tumores. El desarrollo de compuestos que inhiben la actividad de quinasa del EGFR, así como los anticuerpos que bloquean la activación del EGFR, para uso como agentes antitumorales es un área de esfuerzo investigativo intenso.

El factor de crecimiento epidérmico (EGF) , actuando a través de su receptor EGFR, es un mitogeno y factor de supervivencia para la células epiteliales (Rheinwald, J. G. and Green, H., 1977, Nature 265, 421; Rodeck, U. et al., 1997, J. Cell Science 110, 113) . Así, existe el potencial de que los inhibidores de EGFR en la quimioterapia interfieran con la renovación normal de la piel y otros tejidos epiteliales tales como la córnea y el recubrimiento del tracto gastrointestinal: la toxicidad de los tejidos proliferativos tales como la piel y el tracto GI es frecuentemente un efecto lateral limitador de la dosis de los agentes citotóxicos. Tal toxicidad puede manifestarse, entre otros síntomas, como irritación de la piel, diarrea, adelgazamiento de la córnea, atrofia o pérdida del cabello, displasia del folículo velloso, degeneración, necrosis o inflamación, hiperplasia epidérmica interfolicular, o un fallo en la curación o curación retardada después de una herida .

Tal como se usa aquí, el término "inhibidor de EGFR" se refiere a cualquier inhibidor de EGFR que es conocido actualmente en la técnica o que será identificado en el futuro, e incluye una entidad, que por administración a un paciente, da como resultado la inhibición de una actividad biológica asociada con la activación del EGFR en el paciente, incluyendo cualquiera de los efectos biológicos corriente abajo resultantes del enlazamiento de un EGFR de su ligando natural . Tales inhibidores incluyen cualquier agente que pueda bloquear la activación de EGFR o cualquiera de los efectos biológicos corriente debajo de la activación de EGFR que sean relevantes para tratar el cáncer en un paciente. Tal inhibidor puede actuar enlazándose directamente al dominio intracelular del receptor e inhibiendo su actividad de quinasa. Alternativamente, tal inhibidor puede actuar ocupando el sitio de enlazamiento del ligando o una porción del mismo del receptor EGFR o una porción del mismo, haciendo que el receptor sea inaccesible a su ligando natural de manera que su actividad biológica normal se evite o reduzca. Los inhibidores de EGFR incluyen pero no se limitan a inhibidores de bajo peso molecular, anticuerpos o fragmentos de anticuerpos, constructos antisentido y ribozomas . En una realización preferida, el inhibidor de EGFR es una molécula orgánica pequeña o un anticuerpo que se enlaza específicamente al EGFR humano.

Los inhibidores de EGFR que pueden usarse de acuerdo con los presentes métodos incluyen, pero no se limitan a, aquellos clasificados en la técnica como inhibidores de EGFR de quinazolina, in hibidores de EGFR de pirido-pirimidina, inhibidores de EGFR de pirimido-pirimidina, inhibidores de EGFR de pirrolo-pirimidina, inhibidores de EGFR de pirazolo-pirimidina, inhibidores de EGFR de fenilamino-pirimidina, inhibidores de EGFR de oxindole, inhibidores de EGFR de indolocarbazol , inhibidores de EGFR de ftalazina, inhibidores de EGFR de isoflavona, inhibidores de EGFR de quinalona, e inhibidores de EGFR de tirfostin.

Ejemplo no limitantes de inhibidores de EGFR de bajo peso molecular útiles en la práctica de los presentes métodos incluyen cualquier inhibidor de EGFR descritos en las siguientes solicitudes de patente, y todas las sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de dicho inhibidores de EGFR: . 1992. Ejemplos no limitantes adicionales de inhibidores de EGFR de bajo peso molecular incluyen cualquiera de los inhibidores de EGFR descritos en Traxler, P., 1998, Ex . Opin. Ther. Patents 8 (12) : 1599 - 1625.

Ejemplos preferidos específicos de inhibidores de EGFR de bajo peso molecular que pueden utilizarse de acuerdo con los presentes métodos incluyen [6, 7 -bis Inhibidores de EGFR basados en anticuerpos incluyen cualquier anticuerpo anti EGFR o fragmento enlazante al antígeno del mismo que pueda parcial o completamente bloquear la activación del EGFR por su ligando natural. Ejemplos no limitantes de inhibidores de EGFR basados en anticuerpos incluyen los descritos en Modj tahedi , H. et al., 1993, Br. J. Cáncer 67: 247 - 253; Teramoto, T. et al., 1996, Cáncer 77: 639 - 645; Goldstein et al., 1995, Clin. Cáncer Res. 1: 1311 - 1318; Huang, S. M . , et al., 1999, Cáncer Res. 15: 59 (8): 1935 - 40; y Yang, X., et al., 1999, Cáncer Res. 59: 1236 -1243. Así, el inhibidor de EGFR puede ser un anticuerpo monoclonal Mab E7.6.3 (Yang, 1999 supra) , o Mab C225 (ATCC Accession No. HB-8508) o un anticuerpo o un fragmento enlazante a un anticuerpo del mismo que tiene la especificidad de enlace del mismo. Otros ejemplos de inhibidores de EGFR rebasados en anticuerpos incluyen, por ejemplo, TARCEVA® (Erlotinib) , ERBITUX® (Cetuximab) , e Iressa® (Gefitinib) .

Inhibidores de EGFR basados en anticuerpos pueden ser obtenidos de acuerdo con métodos conocidos por la administración de un antigeno apropiado o epitopo a un animal huésped seleccionado, por ejemplo, cerdos, vacas, caballos, conejos, cabras, ovejas y ratones entre otros. Pueden utilizarse diversos adyuvantes conocidos en la técnica para potenciar la producción de anticuerpos (tales como, por ejemplo, hidróxido de aluminio, adyuvante de Freund completo, adyuvante Freund incompleto, etc.) .

No obstante los anticuerpos útiles en la práctica de los métodos incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos policlonales , monoclonales, humanizados, quiméricos-, humanos y genéticamente manipulados .

Los términos "porción enlazante a un antigeno de un anticuerpo", "fragmento enlazante a un antigeno", "dominio enlazante a un antigeno", "fragmento de un anticuerpo" o "fragmento funcional de un anticuerpo" se utilizan de forma intercambiable aquí para referirse a uno o más fragmentos de un anticuerpo que pueden retener la capacidad de enlazarse específicamente a un antígeno. Ejemplos no limitantes de fragmentos de un anticuerpo incluidos dentro de tales términos incluyen, pero no se limitan a, un fragmento Fab, un fragmento F(ab' )2, un fragmento Fd que consiste de los dominios VH y CH1, un fragmento Fv, un scFv, un scFv2 (una unión en tándem de dos moléculas de scFv de cabeza a cola en una cadena), un fragmento dAb (Ward et al., (1989) Nature 341: 544 - 546) : un CDR aislado, un AVIMER™, un VH, un VL, y un polipéptido de enlazamiento de cadena sencilla (un scFv fusionado con una inmunoglobulina Fe) . Incluidos adicionalmente en esta definición están anticuerpos "de una mitad" que comprenden una cadena pesada sencilla y una cadena liviana sencilla. También se abarcan aquí otras formas de anticuerpos de cadena sencilla, tales como los diacuerpos .

Las unidades estructurales "F(ab')2" y "Fab" puede producirse tratando una Ig con una proteasa tal como pepsina y papaína, e incluyen fragmentos de anticuerpos generados por la digestión de inmunoglobulinas cerca de los enlaces disulfuro que existen entre las regiones bisagra en cada una de las dos cadenas pesadas. Por ejemplo, la papaina rompe la IgG corriente arriba de los puentes disulfuro existente entre las regiones bisagra en cada una de las dos cadenas pesadas para generar dos fragmentos de anticuerpos homólogos en los cuales una cadena liviana compuesta de VL y CL (región constante de cadena liviana) , y un fragmento de cadena pesada compuesto de VH y CHyl (región yl en la región constante de la cadena pesada) se conectan en sus regiones terminales C a través de un puente de disulfuro. Cada uno de estos dos fragmentos de anticuerpos homólogos se denominan Fab'. La pepsina también rompe la IgG corriente debajo de los puentes de disulfuro existentes entre las regiones bisagra en cada una de las dos cadenas pesadas para generar un fragmento de anticuerpo ligeramente más grande que el fragmento en el cual los dos Fab' antes mencionados se conectan en la región bisagra. Este fragmento de anticuerpo se denomina un F(ab')2- El fragmento Fab también contiene el dominio constante de la cadena ligera y el primer dominio constante (CH1) de la cadena pesada. Los fragmentos Fab' difieren de los fragmentos Fab por la adición de unos pocos recibos en el término carboxilo del dominio de la cadena pesada CH1 incluyendo una o más cisternas de la región bisagra del anticuerpo. Fab'-SH es la designación aquí para el Fab1 en el cual el o los residuos de cisteína de los dominios constantes portan un grupo tiol libre. Los fragmentos de anticuerpos F(ab')2 fueron producidos finalmente como pares de fragmentos Fab' que tienen cisteína bisagra entre ellos. También son conocidos otros acoplamientos químicos de fragmentos de anticuerpos .

"Fv" se refiere a un fragmento de anticuerpos que contiene un sitio de reconocimiento de antígeno completo y de enlazamiento de antígeno. Esta región consiste de un dímero de un dominio de una cadena pesada y una cadena liviana variable en asociación estrecha no covalente . Es en esta configuración que los tres CDR de cada dominio variable interactúa para definir un sitio de enlazamiento del antígeno sobre la superficie del dímero VH-VL. Colectivamente, una combinación de un CDR de cada una de las cadenas VH y VL confiere especificidad de enlazamiento al antígeno al anticuerpo. Por ejemplo, se entendería que, por ejemplo, el CDRH3 y el CDRL3 serian suficientes para conferir especificidad de enlazamiento al antígeno a un anticuerpo cuando se transfiere a cadenas VH y VL de un anticuerpo receptor o un fragmento de enlazamiento al antígeno del mismo y esta combinación de CDR puede ser probada en cuanto a enlazamiento, afinidad, etc., utilizando cualquiera de las técnicas aquí descritas. Aún un dominio variable sencillo (o la mitad de un Fv que comprende solamente tres CDR específicos para el antígeno) tiene la capacidad de reconocer y enlazarse al antígeno, aunque probablemente con una afinidad inferior que cuando se combina con un segundo dominio variable. Adicionalmente, aunque los dos dominios de un fragmento Fv (VL y VH) , son codificados por genes separados, pueden unirse utilizando métodos separados mediante un enlazante sintético que les permite configurarse como una cadena de proteína sencilla en la cual el par de regiones VL y VH forman moléculas monovalentes (conocidas como cadenas sencillas Fv (scFv) ; Bird et al., Science 242: 423 - 426 (1988); Huston et al., Proc . Nati. Acad. Sci. USA 85: 5879 - 5883 (1988); y Osboum et al., Nat . Biotechnol . 16: 778 (1998) ) . Tales scFv también pretenden ser abarcados dentro del término "porción enlazante al antígeno" de un anticuerpo. Cualquier secuencia de VH y VL de scFv especifica puede ser enlazada a una región Fe ADNc o secuencias genómicas con el fin de generar vectores de expresión que codifican moléculas de Ig completas (por ejemplo, IgG) u otros isotipos. VH y VL también pueden utilizarse en la generación de Fab, Fv u otros fragmentos de Igs utilizando bien sea tecnología de química de proteínas o de ADN recombinante .

Los fragmentos de "cadena sencilla Fv" o "sFv" comprenden los dominios VH y VL de un anticuerpo, donde esos dominios están presentes en una cadena de polipéptidos sencilla. En algunas realizaciones, el polipéptido Fv comprende adicionalmente un enlazador de polipéptido entre los dominios VH y VI que permite que el sFv forme la estructura deseada para el enlazamiento del antígeno. Para una revisión de sFv véase por ejemplo Pluckthun in The Pharmacology de Monoclonal Antibodies, Vol . 113, Rosenburg y Moore eds . Springer-Verlag, New York, pp. 269 - 315 (1994).

El término "Avimer™" se refiere a una clase de proteínas terapéuticas de origen humano, que no están relacionadas con anticuerpos y fragmentos de anticuerpos, y que están compuestas de varios dominios de enlazamiento modulares y reutilizables , denominados como dominios A (también denominados como módulo clase A, repetición tipo complementaria, o dominios clase A del receptor LDL) . Fueron desarrollados a partir de dominios del receptor extracelular humano por conexión con un exón in vitro y presentación de fagos (Silverman et al., 2005, Nat. Biotechnol. 23: 1493 -1494; Silverman et al., 2006, Nat. Biotechnol. 24: 220). Las proteínas resultantes pueden contener múltiples dominios de enlazamiento independientes que pueden exhibir una afinidad mejorada (en algunos casos, sub-nanomolar) y especificidad comparada con proteínas de enlazamiento de epítope individual. Véase, por ejemplo, la Publicación de Solicitud de Patente de los Estados Unidos Nos. 2005/0221384, 2005/0164301, 2005/0053973 y 2005/0089932, 2005/0048512, y 2004/0175756, cada una de las cuales se incorpora aquí como referencia en su totalidad.

Cada uno de los 217 dominios A humanos conocidos comprende aproximadamente 35 aminoácidos (aproximadamente 4 kDa) ; y los dominios están separados por enlazantes que tiene en promedio 5 aminoácidos de longitud. Los dominios A nativos se doblan rápidamente y eficientemente para formar una estructura uniforme estable mediada primariamente por enlazamientos con calcio y formación de disulfuros. Una estructura en andamio conservada de solamente 12 aminoácidos se requiere para está estructura común. El resultado final es una cadena de proteínas sencilla que contiene múltiples dominios, cada uno de los cuales representa una función separada. Cada dominio de las proteínas se enlaza independientemente y las contribuciones genéticas de cada dominio son aditivas. Estas proteínas fueron llamadas "Avimers™" por su avidez a los multímeros.

El término "diacuerpos" se refiere a pequeños fragmentos de anticuerpos con dos sitios de enlazamiento a los antígenos, cuyos fragmentos comprenden un dominio variable de cadena pesada (VH) conectado con un dominio variable de cadena liviana (VL) en la misma cadena de polipéptidos (VH-VL) . Utilizando un enlazante que es demasiado corto para permitir el apareamiento entre los dos dominios en la misma cadena. Los dominios son forzados a aparearse con los dominios complementarios de otra cadena y crear dos sitios de enlazamiento al antígeno. Los diacuerpos están descritos completamente, por ejemplo, en EP 404,097, WO 93/11161; y Hollinger et al., Proc . Nati. Acad. Sci. USA 90: 6444 6448 (1993) .

Los polipéptidos de enlazamiento a los antígenos también incluyen dimeros de cadenas pesadas tales como, por ejemplo, anticuerpos de camélidos y tiburones. Los anticuerpos de camélidos y tiburones comprenden un par homodimérico de dos cadenas de dominio similares a V y a C (ninguno tiene una cadena liviana) . Puesto que la región VH del diméro IgG de cadena pesada en un camélido no tiene que hacer interacciones hidrófobas con una cadena liviana, la región en la cadena pesada puede entrar en contacto normalmente con una cadena ligera que puede entrar en contacto con una cadena ligera se cambia con residuos de aminoácidos hidrofilicos en un camélido. Los dominios VH de los dimeros IgG de cadena pesada se denominan dominios VHH. La Ig-NARs de tiburón comprende un homodímero de un dominio variable (denominado dominio V-NAR) y cincos dominios constantes similares a C (dominio C-NAR) . En los camélidos, la diversidad del repertorio de anticuerpos está determinada por los CDRs 1, 2 y 3 en las regiones VH o VHH. El CDR3 en la región VHH del camello se caracteriza por su longitud relativamente larga, en promedio de 16 aminoácidos (Muyldermans et al., 1994, Protein Engineering 7 (9) : 1129) . Esto está en contraste con las regiones CDR3 de anticuerpos de muchas otras especies. Por ejemplo el CDR3 de ratón VH tiene un promedio de 9 aminoácidos. Las bibliotecas de regiones variables anticuerpo derivada de camélidos, que mantienen la diversidad in vivo de las regiones variables de un camélido, pueden hacerse, por ejemplo, de acuerdo con los métodos descritos en la solicitud de patente serial No. 20050037421.

Las formas "humanizadas" de anticuerpos no humanos (por ejemplo, murinicos) , incluyen anticuerpos quiméricos que contiene una secuencia mínima derivada de una Ig no humana. Para la mayor parte, los anticuerpos humanizados son Igs de humanos (anticuerpo receptor) en el cual uno o más de los CDR del receptor son reemplazados por CDR de un anticuerpo de una especie no humana (anticuerpo donante) tal como un ratón, rata, conejo o un primate no humano que tiene la especificidad, afinidad y función de enlazamiento deseadas. En algunos casos, uno o más residuos de aminoácidos FR de la Ig humana son reemplazados por residuos de aminoácidos no humanos correspondientes. Adicionalmente, los anticuerpos humanizados pueden contener residuos que no se encuentran en el anticuerpo receptor o en el anticuerpo donante. Estas modificaciones pueden hacerse para refinar el rendimiento del anticuerpo, si es necesario. Un anticuerpo humanizado puede comprender sus ancialmente todos de al menos uno, y en algunos casos dos, dominios variables, en los cuales todas o sustancialmente todas las regiones hipervariables corresponden con aquellas de una inmunoglobulina no humana y todas, o sustancialmente todas, de las FR son las de una secuencia de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado puede incluir opcionalmente al menos una porción de una región constante de la inmunoglobulina (FC) , típicamente la de una inmunoglobulina humana. Para detalles véase Jones et al., Nature 321: 522 - 525 (1986); Reichmann et al., Nature 332: 323 - 329 (1988); y Presta, Curr . Op . Struct . Biol . 2: 593 - 596 (1992) .

Los anticuerpos monoclonales contra EGFR pueden prepararse y aislarse utilizando cualquier técnica que proporcione la producción de moléculas y anticuerpos por línea celulares continuas en cultivo. Las técnicas para producción y aislamiento incluyen pero no se limitan a la técnica del hibridoma descrito originalmente por Kohler y Milstein (Nature, 1975, 256: 495 - 497); la técnica de hibridoma de células B humanas (Kosboer et al., 1983, Inmunology Today 4: 72; Cote et al., 1983, Proc . Nati. Acad. Sci. USA 80: 2026 - 2030); y la técnica de hibridoma EBV (Colé et al., 1985. Monoclonal Antibodies y C ncer Therapy, Alan R. Liss, Inc., p . 77 -96).

Alternativamente, las técnicas descritas para la producción de anticuerpos de cadena sencilla (véase, por ejemplo, la patente de los Estados Unidos No. 4,946,778) puede adaptarse para producir anticuerpos de cadena sencilla anti EGFR. Los inhibidores de EGFR basados en anticuerpos útiles en la práctica de los presentes métodos también incluyen fragmentos de anticuerpos anti EGFR que incluyen pero no se limitan a fragmentos F(ab' ) 2/ que pueden generarse por digestión con pepsina de una molécula de anticuerpo intacta, y fragmentos Fab, que pueden generarse reduciendo los puentes de disulfuro de los fragmentos F (ab' ) 2. Alternativamente, las bibliotecas de expresión de Fab y/o scFv pueden construirse (véase, por ejemplo Huse et al., 1989, Science 246: 1275 - 1281) para permitir una identificación rápida de los fragmentos que tienen la especificidad deseada para EGFR.

Las técnicas para la producción y aislamiento de anticuerpos monoclonales y fragmentos de anticuerpos son bien conocidas en el arte, y se describen adicionalmente , entre otros lugares en Harlow y Lañe, 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, y in J. . Goding, 1986, Monoclonal Anti-bodies: Principies y Practice, Academic Press, Londres. Los anticuerpos y los fragmentos de anticuerpos anti EGFR humanizados también pueden prepararse con técnicas conocidas tales como las descritas en Vaughn, T. J. et al., 1998, Nature Biotech. 16: 535 - 539 y referencias citadas en el mismo, y tales anticuerpos o fragmentos de los mismos pueden ser útiles en la práctica de los métodos presentes .

Los ARN inhibidores pequeños (ARNsi) también pueden funcionar como inhibidores de EGFR para uso en los métodos presentes. La expresión del gen de EGFR puede reducirse poniendo en contacto el tumor, sujeto o célula con un ARN de doble cadena pequeño (ARNds) , o un vector o constructo que cause la producción de un ARN de doble cadena pequeño, de tal forma que la expresión del EGFR se inhiba específicamente (ARN de interferencia o ARNi) . Los métodos para seleccionar un ARNds o un vector que codifique ARNds también conocidos en la técnica para genes cuya secuencia es conocida (por ejemplo, véase Tuschi et al., (1999) Genes Dev. 13 (24): 3191 - 3197; Elbashir, S. . et al., (2001) Nature 411: 494 - 498; Hannon, G. J. (2002) Nature 418: 244 - 251; McManus, M.T. y Sharp, P. A. (2002) Nature Reviews Genetics 3: 737 - 747; Bremmelkamp, T. R. et al., (2002) Science 296: 550 - 553; Patentes de los Estados Unidos Nos. 6,573,099 y 6,506,559; y Publicaciones Internacionales de Patente Nos. O 01/36646, WO Las ribozimas también pueden funcionar como inhibidores de EGFR para uso en los presentes métodos. Las ribozimas son moléculas de ARN enzimáticas capaces de catalizar la ruptura específica del ARN. El mecanismo de acción de la ribozima involucra la hibridización específica de la secuencia de la molécula de ribozima hacia un ADN objetivo complementario, seguida por la ruptura endonucleolítica . Las moléculas de ribozima manipuladas en horquilla o con estructura de cabeza de martillo que cataliza específica y eficientemente la ruptura endonucleolítica de las secuencias de EGFR ARNm son útiles por lo tanto dentro del alcance de los presentes métodos. Los sitios de ruptura específicos de la ribozima con cualquier ARN objetivo potencial se identifican inicialmente por el barrido de la molécula objetivo por los sitios de ruptura de la ribozima, lo que típicamente incluye las siguientes secuencias, GUA, GUU, y GUC. Una vez identificadas, las secuencias de ARN cortas de entre aproximadamente 15 y 20 ribonucleótidos correspondientes a la región del gen objetivo que contiene el sitio de ruptura pueden evaluarse para predecir características estructurales, tales como estructuras secundarias que pueden hacer que la secuencia de un oligonucleótido sea inadecuada. La adecuación de los objetivos candidato puede evaluarse también probando su accesibilidad, a la hibridización con oligonucleótidos complementarios, utilizando, por ejemplo, pruebas de protección de ribonucleasa .

Pueden introducirse diversas modificaciones a los oligonucleótidos de los métodos como medio para incrementar la estabilidad y vida media intracelular . Las modificaciones posibles incluyen pero no se limitan a adición de secuencias de flanqueamiento de ribonucleótidos y desoxirribonucleótidos en los extremos 5' y/o 3' de la molécula, o el uso de fosforotioato o 21 -O-metilo en vez de las uniones fosforodiesterasa dentro del esqueleto del oligonucleótido .

Los constructos de oligonucleótidos antisentido, A Ns y los ribosomas adecuados para uso con los presentes métodos pueden sintetizarse mediante una variedad de métodos conocidos o métodos que se desarrollen en el futuro. Por ejemplo, se pueden utilizar métodos de síntesis química tales como los que emplean la tecnología ACE® de propiedad de Dharmacon, Inc. Alternativamente, también se pueden utilizar métodos de síntesis dependientes del patrón. La síntesis puede llevarse a cabo utilizando bases modificadas o no modificadas, naturales o no naturales tales como las divulgadas aquí. Adicionalmente, pueden llevarse a cabo síntesis con o sin un esqueleto de ácido nucleico modificado o no modificado tal como se divulga aquí.

Además, los constructos de oligonucleótidos anti sentido, ARNsi y las ribozimas pueden sintetizarse en una célula huésped mediante una variedad de métodos conocidos y los que se desarrollen en el futuro, para sintetizar los constructos de oligonucleótidos antisentido, ARNsi, y moléculas de ribozimas en una célula huésped. Por ejemplo, los constructos de oligonucleótidos antisentido, ARNsi y ribozimas pueden expresarse a partir de un vector de ADN circular o lineal recombinante utilizando cualquier promotor adecuado. Los promotores adecuados para expresar las moléculas de ARN antisentido o inhibitorias a partir de un vector adecuado para uso con los métodos incluyen, por ejemplo, las secuencias de promotores U6 o Hl ARN pol III y el promotor del citomegalovirus . La selección de otros promotores adecuados esta dentro del conocimiento de la técnica, los vectores adecuados para uso con los métodos objetivo incluyen aquellos descritos en la patente de los Estados Unidos No. 5,624,803, cuya descripción se incorpora aquí en su totalidad. Los plásmidos recombinantes de las realizaciones también pueden comprender promotores inducibles o regulables para la expresión de los constructos de oligonucleótidos antisentido, ARNsi, y ribozimas en un tejido particular o en un ambiente intracelular particular.

Los constructos de oligonucleótidos antisentido, ARNsi y las ribozimas de las realizaciones descritas aquí pueden expresarse a partir de un vector de ácido nucleico recombinante bien como dos moléculas separadas complementarias de ADN o como una molécula individual de ARN con dos regiones complementarias. La selección de los vectores adecuada para la expresión de los constructos de oligonucleótidos antisentido, AR s, y las ribozimas en el vector, y los métodos para administrar el vector recombinante a las células de interés están dentro del conocimiento de la técnica. véase por ejemplo, Tuschl, T. (2002), Nat . Biotechnol. 20: 446 - 448: Brummelkamp T R et al., (2002), Science 296: 550 - 553; Miyagishi M et al., (2002), Nat. Biotechnol. 20: 497 - 500; Paddison P J et al., (2002), Genes Dev. 16: 948 - 958; Lee N S et al., (2002), Nat. Biotechnol. 20: 500 - 505; y Paul C P et al., (2001), Nat. Biotechnol.. 20: 505 - 508, divulgaciones completas de las cuales que se incorporan aquí como referencia. Se describen otros métodos para la administración y expresión intracelular en por ejemplo, las publicaciones de solicitud de patente de los Estados Unidos Nos. 20040005593, 20050048647, 20050060771, cuyas divulgaciones completas se incorporan aquí como referencia .

En una realización, después de poner en contacto las células con un butano catecólico, los inhibidores de EGFR pueden inhibir la actividad de EGFR en al menos aproximadamente 2 veces, al menos aproximadamente 5 veces, al menos aproximadamente 10 veces, al menos aproximadamente 20 veces, al menos aproximadamente 25 veces, al menos aproximadamente 50 veces, al menos aproximadamente 100 veces o más. En otra realización los inhibidores pueden inhibir la actividad de EGFR en al menos aproximadamente 5%, al menos aproximadamente 10%, al menos aproximadamente 15%, al menos aproximadamente 20%, al menos aproximadamente 50%, al menos aproximadamente 60%, al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 90%, al menos aproximadamente 95%, o al menos aproximadamente 100%. En otra realización, la inhibición del EGFR da como resultado la estasis de los síntomas de un paciente que ha recibido la administración de una combinación de un butano catecólico y un inhibidor de EGFR.

Resistencia al inhibidor IGF-1R e inhibidores El IGF-1R (receptor del factor de crecimiento tipo 1 similar a a la insulina) es un RTK de transmembrana que se enlaza primariamente a IGF-1 pero también a IGF- II ya la insulina con afinidad inferior. El enlazamiento del IGF-1 a su receptor da como resultado efectos celulares múltiples incluyendo la oligomerización del receptor, activación de tirosina quinasas, autofosforilación del receptor intermolecular y fosforilación de sustratos celulares tal como IRS1 y Shc . El IGF- IR activado por ligando también induce actividad mitogénica en células normales y juega un papel importante en el crecimiento anormal . Un papel fisiológico principal del sistema IGF-1 es la promoción de crecimiento y regeneración normales. La sobreexpresion de IGF- IR puede iniciar la mitogénesis y promover la transformación neoplática dependiente de los ligandos. Adicionalmente , el IGF- IR está involucrado en el establecimiento y mantenimiento del fenotipo maligno. Varios oncógenos han demostrado afectar la expresión de IGF-1 e IGF-1R y una reducción de la expresión IGF- IR se correlaciona con una resistencia a la transformación. La exposición de células al ARNm antisentido al IGF-1R AR evita el crecimiento en agar blando de diversas líneas celulares de varios tumores humanos. El IGF-1R promueve la progresión hasta la apoptosis, pero in vivo e in vitro, y un descenso en el nivel de IGF- IR por debajo de los niveles tipo silvestre produce la apoptosis de células tumorales in vivo.

La sobreexpresion del IGF- IR se encuentra frecuentemente en diversos tumores (seno, colon, pulmón, sarcoma) y se asocia frecuentemente con un fenotipo agresivo. Concentraciones de IGF-1 altas circulantes también está correlacionadas con riesgo de cáncer de próstata, pulmón y seno. Adicionalmente, el IGF- IR está implicado con el establecimiento y mantenimiento del fenotipo transformado in vitro e in vivo (Baserga R. Exp. Cell. Res., 1999, 253, 1 -6) . La actividad de quinasa del IGF- IR participa en la actividad transformadora de varios oncógenos tales como EGFR, PDGFR, antígeno SV40 T, Ras, Raf, y v-Src activados. La expresión IGF- IR en fibroblastos normales induce fenotipos neoplásticos, que pueden luego formar tumores in vivo. La expresión de IGF- IR juega un papel importante en el crecimiento dependiente del anclaje. El IGF-IR también ha demostrado proteger las células de la apoptosis inducida por quimioterapia, radiación y citoquina. Por el contrario, la inhibición del IGF- IR endógeno por un IGF-IR renegativo dominante, formación de hélice triple o vector de expresión antisentido ha mostrado reprimir la actividad transformadora in vitro en crecimientos tumorales en el modelos animales . De la misma forma que los inhibidores de EGFR, los tumores/cánceres pueden desarrollar de forma similar resistencia a los inhibidores de ING-1R.

En una realización, los presentes métodos se relacionan para usar compuestos inhibidores de IGF-IR.

Tal como se utiliza aquí, el término "inhibidor de IGF-1R" se refiere a cualquier número de inhibidores de IGF- IR, tales como cualquier entidad química (por ejemplo, molécula pequeña) o biológica (por ejemplo, anticuerpos, proteínas enlazantes, oligonucleótidos , etc.) que por administración a un paciente dan como resultado la inhibición de una actividad biológica asociada con la activación del receptor de IGF-1 en el paciente, incluyendo cualquiera de los efectos biológicos corriente abajo que de otra manera resultan del enlazamiento del IGF- IR de su ligando natural. Los inhibidores de quinasa de IGF-IR incluyen agentes que pueden bloquear la activación del IGF-1R o cualquiera de los efectos biológicos corriente debajo de la activación del IGF- IR que son relevantes para el tratamiento del cáncer en un paciente, modos de ejemplo de acción de tales inhibidores incluyen, pero no se limitan a, enlazamiento directo al dominio intracelular del receptor e inhibición de su actividad quinasa. Alternativamente, los inhibidores de IGF-IR pueden actuar ocupando el sitio de enlazamiento del ligando o una porción del mismo del receptor IGF-1, haciendo por lo tanto el receptor inaccesible a su ligando natural de forma que su actividad biológica normal se evita o reduce. Alternativamente, los inhibidores de IGF-IR pueden actuar modulando la dimerización de los polipéptidos IGF-1R, o la interacción del polipéptido de IGF-1R con otras proteínas, o potenciando la ubiquinación y degradación endocitótica de IGF-IR. un inhibidor de IGF-IR también puede actuar reduciendo la cantidad de IGF-1 disponible para activar IGF-IR mediante, por ejemplo, la antagonización del enlace de IGF-1 a su receptor, reduciendo el nivel de IGF-1 o promoviendo la asociación de IGF-1 con proteínas diferentes al IGF- IR tales como proteínas de enlazamiento de IGF (por e emplo, IGFBP3) . Los inhibidores de IGF-IR incluyen pero no se limitan a inhibidores de bajo peso molecular, anticuerpos o fragmentos de anticuerpos, constructos antisentido, AR y pequeños inhibidores (por ejemplo, ARN de interferencia por ARNds ; ARNi) , y ribozimas. En una realización, el inhibidor de IGF- IR es una molécula orgánica pequeña o un anticuerpo monoclonal que se enlaza específicamente a IGF-1R humano.

En una realización, un inhibidor de IGF- IR es una molécula pequeña. Ejemplos de inhibidores de IGF- IR incluye, pero no se limitan a, inhibidores de IGF-1R quinasa de imidazopirazina, inhibidores de IGF- IR quinasa de quinazolina, inhibidores de IGF- IR quinasa de pirido-pirimidina, inhibidores de IGF-IR quinasa de pirimido-pirimidina, inhibidores de IGF- IR quinasa de pirrólo . pirimidina, inhibidores de IGF- IR quinasa de pirazolo-pirimidina, inhibidores de IGF- IR quinasa de fenilamino-pirimidina, inhibidores de IGF-1R quinasa de oxindole, inhibidores de IGF- IR quinasa de indolocarbazole , inhibidores de IGF- IR quinasa de ftalazina, inhibidores de IGF-IR quinasa de isoflavona, inhibidores de IGF-IR quinasa de quinalona, e inhibidores de IGF-1R quinasa de tirfostin, y todas las sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de tales inhibidores que quinasa de IGF- IR.

Ejemplos adicionales de inhibidores de IGF- IR incluyen los de la publicación de patente internacional No. WO 05/037836, (inhibidores de quinasa de IGF- IR de imidazopiracina) , solicitudes de patente internacional Nos. WO 03/018021 y WO 03/018022, (compuestos basados en pirimidinas y compuestos basados en pirimidina) , publicaciones de patente internacional Nos. WO 02/102804 y WO 02/102805, (ciclolignanos) , publicación de patente internacional No. WO 02/092599, (pirrolopirimidinas) , publicación internacional de patentes No. WO 01/72751 (pirrolopirimidinas) , y en la publicación de patente internacional No. WO 00/71129 (inhibidores de pirrolotriazina) y en la publicación de patente internacional No. WO 97/28161 (pirrólo [2 , 3 -d] pirimidinas ) , Parrizas et al., (tirfostinas con actividad inhibidora de IGF-1R in vitro e in vivo (Endocrinology, 138: 1427 - 1433 (1997)), publicación de patente internacional No. WO oo/35455, (heteroarilaril ureas) , publicación de patentes internacional No. WO 03/048133, (derivados de pirimidina), publicación de patente internacional No. WO 03/024967, WO 03/035614, WO 03/035615, WO 03/035616 y WO 03/035619 (compuestos químicos con efectos inhibidores hacia las proteínas quinasas) , publicación de patente internacional No. WO 03/068265, (composiciones para tratar condiciones hiperproliferativas) , publicación de patente internacional No. WO 00/17203, (pirrilopirimidinas) , publicación de patente japonesa No. JP 07/133280, (compuesto cefem) , y Albert, A. et al., Journal of the Chemical Society, 11: 1540 - 1547 (1970), (pteridinas y pteridinas no sustituidas en la posición 4) .

Otros inhibidores de moléculas pequeñas de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, OSI-906 (OSI) y XL228 (Exelixis) . En un aspecto, un inhibidor de IGF-1R puede ser un inhibidor de molécula pequeña. Inhibidores de molécula pequeña de ejemplos incluyen, pero no se limitan a, OSI-906 (OSI) y XL228 (Exelixis) .

El OSI-906 (OSI) puede administrarse en diferentes dosis y programaciones de administración tales como por ejemplo: (1) una vez al día oralmente y en dosis crecientes hasta una progresión de la enfermedad o toxicidad inaceptable (hasta 21 días) ; y (2) el tratamiento se abre con SI (días QD 1 - 3 cada 14 días) , con inicio de S2 (días QD 1 - 5 cada 14 días) que se presentan por observación de una toxicidad relacionada significativa clínicamente >= grado 2 en S2. De la misma forma el inicio de S3 (días QD 1 -7 cada 14 días) se presenta por observación de toxicidad relacionada significativa clínicamente >= grado 2 en S2. En cada programación se administrara una dosis individual en cada uno de los días especificados seguida por un periodo libre de fármaco hasta el día 14.

El XL228 (Exelixis) puede administrarse en diferentes programaciones de dosificación y administración tales como por ejemplo: IV semanalmente durante 1 hora.

Ejemplos específicos adicionales de los inhibidores de IGF- IR que pueden utilizarse de acuerdo con los presentes métodos incluyen h7C10 (Centre de Reacherche Pierre Fabre) , un antagonista de IGF-1; EM-164 (ImmunoGen Inc.), un modulador de IGF-1R; cp-751871 (Pfizer Inc.), un antagonista de IGF-1; lanreotido (Ipsen) , un antagonista de IGF-1R; oligonucleótidos de IGF-1R (Lynx Therapeutics Inc.); oligonucleótidos de IGF-1 (National Cáncer Institute) ; inhibidores de proteína tirosina quinasa de IGF-IR desarrollado por Novartis (por ejemplo, NVP-AE 541 , García-Echeverria, C. et al., (2004) Cáncer Cell 5: 231 - 239; o NVP-ADW72, Mitsiades, C.S. et al., (2004) C ncer Cell 5: 221 - 230) ; Inhibidores de IGF-1R de proteína quinasa tirosina (Ontogen Corp); AG-1024 (Camirand, A. et al., (2005) Breast Cáncer Research 7: R570 - R579 (DOI 10.1186/bcrl028 ) ; Camirand, A. y Pollak, M. (2004) Brit . J. Cáncer 90: 1825 -1829; Pfizer Inc.), un antagonistas de IGF-1; las tirofostinas AG-538 e I-OMe-AG 538; BMS-536924, un inhibidor de molécula pequeña de IGF-IR; y PNU-145156E (Pharmacia & Upjohn SpA) , un antagonista de IGF-1.

Los inhibidores de IGF-IR basados en anticuerpos incluyen cualquier anticuerpo anti-IGF-lR o fragmento enlazante del antígeno del mismo que puede parcial o completamente bloquear la activación de IGF-IR por su ligando natural. Los inhibidores de IGF- IR basados en anticuerpos también ' incluyen cualquier anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IGF-1 que pueden parcial o completamente bloquear la activación del IGF-IR. Ejemplos no limitantes de inhibidores de IGF-IR basados en anticuerpos incluyen los descritos en Larsson, O. et al (2005) Brit . J. Cáncer 92: 2097 - 2101 e Ibrahim, Y. H. y Yee, D. (2005) Clin. Cáncer Res. 11; 944s - 950s; el anticuerpo monoclonal IMC-A12 desarrollado y probado por el National Cáncer Institute; anticuerpos comercialmente desarrollados que incluyen anticuerpos de Imclone (por ejemplo, A12) , Amgen (AMG479) , o por el Schering-Plough Research Institute (por ejemplo 19D12) ; y anticuerpos descritos en las publicaciones de solicitud de patente de los Estados Unidos Nos. US 2005/01360663 Al y US 2004/0018191A1) . El inhibidor de IGF-IR puede ser un anticuerpo monoclonal, anticuerpo monoclonal, o un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que tenga la especificidad de enlazamiento del mismo. Anticuerpos monoclonales de ejemplo incluyen, pero se limitan a, AMG-479 (Amgen) , BIIB022 (Biogen) , IMC-A12 (ImClone) , CP-751,871 (Pfizer) , SCH-717454 (Schering) , R-1507 (Roche) y K-0646 (Merck) .

Los términos "porción enlazante al antígeno de un anticuerpo" , "fragmento enlazante al antígeno" , "dominio enlazante al antígeno" , " fragmento del anticuerpo" o un "fragmento funcional de un anticuerpo" se utilizan de forma intercambiable aquí para referirse a uno o más fragmentos de un anticuerpo que retiene la capacidad de enlazarse específicamente a un antígeno. Ejemplos no limitantes de fragmentos de anticuerpos incluidos dentro de tales términos incluyen, pero no se limitan a, fragmento Fab, un fragmento F(ab')2, un fragmento Fd que consiste de los dominios VH y CH1, un fragmento Fv, un scFv, un scFv2 (un enlace tándem de dos moléculas de scFv de cabeza a cola en una cadena) , un fragmento dAb (Ward et al., (1989) Nature 341: 544 - 546); un CDR aislado, un AVIMER™, un VH, un VI, y un polipéptido de enlazamiento de cadena sencilla (un scFv fusionado a una inmunoglobulina Fe) . Adicionalmente incluidos en esta definición están los anticuerpos de "una mitad" que comprenden una cadena pesada sencilla y una cadena liviana sencilla. Otras formas de anticuerpos de cadena sencilla, tales como diacuerpos son abarcadas aquí .

Las unidades estructurales "F(ab')2" y "Fab" se producen mediante tratamiento de una Ig con una proteasa tal como pepsina y papaína, e incluyen fragmentos de anticuerpos generados por la digestión de inmunoglobulinas cerca de los puentes disulfuro existentes entre las regiones bisagra en cada una de las dos cadenas pesadas. Por ejemplo, la papaina rompe la IgG corriente arriba de los puentes disulfuro existente entre las regiones bisagra en cada una de las dos cadenas pesadas para generar dos fragmentos de anticuerpos homólogos en los cuales una cadena liviana compuesta de VL y CL (región constante de cadena liviana) , y un fragmento de cadena pesada compuesto de VH y CHyl (región ?? en la región constante de la cadena pesada) se conectan en sus regiones terminales C a través de un puente de disulfuro. Cada uno de estos dos fragmentos de anticuerpos homólogos se denominan Fab'. La pepsina también rompe la IgG corriente debajo de los puentes de disulfuro existentes entre las regiones bisagra en cada una de las dos cadenas pesadas para generar un fragmento de anticuerpo ligeramente más grande que el fragmento en el cual los dos Fab' antes mencionados se conectan en la región bisagra. Este fragmento de anticuerpo se denomina un F(ab')2- El fragmento Fab también contiene el dominio constante de la cadena ligera y el primer dominio constante (CH1) de la cadena pesada. Los fragmentos Fab' difieren de los fragmentos Fab por la adición de unos pocos recibos en el término carboxilo del dominio de la cadena pesada CHl incluyendo una o más ciste nas de la región bisagra del anticuerpo. Fab'-SH es la designación aquí para el Fab' en el cual el o los residuos de cisteína de los dominios constantes portan un grupo tiol libre. Los fragmentos de anticuerpos F(ab')2 fueron producidos finalmente como pares de fragmentos Fab' que tienen cisteína bisagra entre ellos. También son conocidos otros acoplamientos químicos de fragmentos de anticuerpos .

"Fv" se refiere a un fragmento de anticuerpos que contiene un sitio de reconocimiento de antígeno completo y de enlazamiento de antígeno. Esta región consiste de un dímero de un dominio de una cadena pesada y una cadena liviana variable en asociación estrecha no covalente. Es en esta configuración que los tres CDR de cada dominio variable interactúan para definir un sitio de enlazamiento del antígeno sobre la superficie del dímero VH-VL. Colectivamente, una combinación de un CDR de cada una de las cadenas VH y VL confiere especificidad de enlazamiento al antígeno al anticuerpo. Por ejemplo, se entendería que, por ejemplo, el CDRH3 y el CDRL3 serian suficientes para conferir especificidad de enlazamiento al antígeno a un anticuerpo cuando se transfiere a cadenas VH y VL de un anticuerpo receptor o un fragmento de enlazamiento al antígeno del mismo y esta combinación de CDR puede ser probada en cuanto a enlazamiento, afinidad, etc., utilizando cualquiera de las técnicas aquí descritas. Aún un dominio variable sencillo (o la mitad de un Fv que comprende solamente tres CDR específicos para el antígeno) tiene la capacidad de reconocer y enlazarse al antígeno, aunque probablemente con una afinidad inferior que cuando se combina con un segundo dominio variable. Adicionalmente , aunque los dos dominios de un fragmento Fv (VL y VH) , son codificados por genes separados, pueden unirse utilizando métodos separados mediante un enlazante sintético que les permite configurarse como una cadena de proteína sencilla en la cual el par de regiones VL y VH forman moléculas monovalentes (conocidas como cadenas sencillas Fv (scFv) ; Bird et al., Science 242: 423 - 426 (1988); Huston et al., Proc . Nati. Acad. Sci. USA 85: 5879 - 5883 (1988); y Osboum et al., Nat . Biotechnol . 16: 778 (1998)). Tales scFv también pretenden ser abarcados dentro del término "porción enlazante al antígeno" de un anticuerpo. Cualquier secuencia de VH y VL de scFv especifica puede ser enlazada a una región Fe ADNc o secuencias genómicas con el fin de generar vectores de expresión que codifican moléculas de Ig completas (por ejemplo, IgG) u otros isotipos. VH y VL también pueden utilizarse en la generación de Fab, Fv u otros fragmentos de Igs utilizando bien sea tecnología de química de proteínas o de ADN recombinante .

Los fragmentos de "cadena sencilla Fv" o "sFv" comprenden los dominios VH y VL de un anticuerpo, donde esos dominios están presentes en una cadena de polipéptidos sencilla. En algunas realizaciones, el polipéptido Fv comprende adicionalmente un enlazador de polipéptido entre los dominios VH y VI que permite que el sFv forme la estructura deseada para el enlazamiento del antígeno. Para una revisión de sFv véase por ejemplo Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol . 113, Rosenburg and Moore eds . Springer-Verlag, New York, pp. 269 - 315 (1994) .

El término "Avimer™" se refiere a una clase de proteínas terapéuticas de origen humano, que no están relacionadas con anticuerpos y fragmentos de anticuerpos, y que están compuestas de varios dominios de enlazamiento modulares y reutilizables , denominados como dominios A (también denominados como módulo clase A, repetición tipo complementaria, o dominios clase A del receptor LDL) . Fueron desarrollados a partir de dominios del receptor extracelular humano por conexión con un exón in vitro y presentación de fagos (Silverman et al., 2005, Nat . Biotechnol . 23: 1493 -1494; Silverman et al., 2006, Nat. Biotechnol. 24: 220). Las proteínas resultantes pueden contener múltiples dominios de enlazamiento independientes que pueden exhibir una afinidad mejorada (en algunos casos, sub-nanomolar) y especificidad comparada con proteínas de enlazamiento de epítope individual. Véase, por ejemplo, la Publicación de Solicitud de Patente de los Estados Unidos Nos. 2005/0221384, 2005/0164301, 2005/0053973 y 2005/0089932, 2005/0048512, y 2004/0175756, cada una de las cuales se incorpora aquí como referencia en su totalidad.

Cada uno de los 217 dominios A humanos conocidos comprende aproximadamente 35 aminoácidos (aproximadamente 4 kDa) ,· y los dominios están separados por enlazantes que tiene en promedio 5 aminoácidos de longitud. Los dominios A nativos se doblan rápidamente y eficientemente para formar una estructura uniforme estable mediada primariamente por enlazamientos con calcio y formación de disulfuros. Una estructura en andamio conservada de solamente 12 aminoácidos se requiere para está estructura común. El resultado final es una cadena de proteínas sencilla que contiene múltiples dominios, cada uno de los cuales representa una función separada. Cada dominio de las proteínas se enlaza independientemente y las contribuciones genéticas de cada dominio son aditivas. Estas proteínas fueron llamadas "Avimers™" por su avidez a los multímeros.

El término "diacuerpos" se refiere a pequeños fragmentos de anticuerpos con dos sitios de enlazamiento a los antígenos, cuyos fragmentos comprenden un dominio variable de cadena pesada (VH) conectado con un dominio variable de cadena liviana (VL) en la misma cadena de polipéptidos (VH-VL) . Utilizando un enlazante que es demasiado corto para permitir el apareamiento entre los dos dominios en la misma cadena. Los dominios son forzados a aparearse con los dominios complementarios de otra cadena y crear dos sitios de enlazamiento al antígeno. Los diacuerpos están descritos completamente, por ejemplo, en EP 404,097, WO 93/11161; y Hollinger et al., Proc . Nati. Acad. Sci . USA 90: 6444 6448 (1993) .

Los polipéptidos de enlazamiento a los antígenos también incluyen dímeros de cadenas pesadas tales como, por ejemplo, anticuerpos de camélidos y tiburones. Los anticuerpos de camélidos y tiburones comprenden un par homodimérico de dos cadenas de dominio similares a V y a C (ninguno tiene una cadena liviana) . Puesto que la región VH del diméro IgG de cadena pesada en un camélido no tiene que hacer interacciones hidrófobas con una cadena liviana, la región en la cadena pesada puede entrar en contacto normalmente con una cadena ligera que puede entrar en contacto con una cadena ligera se cambia con residuos de aminoácidos hidrofílicos en un camélido. Los dominios VH de los dimeros IgG de cadena pesada se denominan dominios VHH. La Ig-NARs de tiburón comprende un homodímero de un dominio variable (denominado dominio V-NAR) y cincos dominios constantes similares a C (dominio C-NAR) . En los camélidos, la diversidad del repertorio de anticuerpos está determinada por los CDRs 1, 2 y 3 en las regiones VH o VHH. El CDR3 en la región VHH del camello se caracteriza por su longitud relativamente larga, en promedio de 16 aminoácidos (Muyldermans et al., 1994, Protein Engineering 7 (9) : 1129) . Esto está en contraste con las regiones CDR3 de anticuerpos de muchas otras especies. Por ejemplo el CDR3 de ratón VH tiene un promedio de 9 aminoácidos. Las bibliotecas de regiones variables anticuerpo derivada de camélidos, que mantienen la diversidad in vivo de las regiones variables de un camélido, pueden hacerse, por ejemplo, de acuerdo con los métodos descritos en la solicitud de patente serial No. 20050037421.

Las formas "humanizadas" de anticuerpos no humanos (por ejemplo, murinicos) , incluyen anticuerpos quiméricos que contiene una secuencia mínima derivada de una Ig no humana. Para la mayor parte, los anticuerpos humanizados son Igs de humanos (anticuerpo receptor) en el cual uno o más de los CDR del receptor son reemplazados por CDR de un anticuerpo de una especie no humana (anticuerpo donante) tal como un ratón, rata, conejo o un primate no humano que tiene la especificidad, afinidad y función de enlazamiento deseadas. En algunos casos, uno o más residuos de aminoácidos FR de la Ig humana son reemplazados por residuos de aminoácidos no humanos correspondientes. Adicionalmente , los anticuerpos humanizados pueden contener residuos que no se encuentran en el anticuerpo receptor o en el anticuerpo donante. Estas modificaciones pueden hacerse para refinar el rendimiento del anticuerpo, si es necesario. Un anticuerpo humanizado puede comprender sustancialmente todos de al menos uno, y en algunos casos dos, dominios variables, en los cuales todas o sustancialmente todas las regiones hipervariables corresponden con aquellas de una inmunoglobulina no humana y todas, o sustancialmente todas, de las FR son las de una secuencia de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado puede incluir opcionalmente al menos una porción de una región constante de la inmunoglobulina (Fe) , típicamente la de una inmunoglobulina humana. Para detalles véase Jones et al., Nature 321: 522 - 525 (1986); Reichmann et al., Nature 332: 323 - 329 (1988); y Presta, Curr . Op . Struct . Biol . 2: 593 - 596 (1992) .

Los anticuerpos monoclonales contra IGF- IR pueden prepararse y aislarse utilizando cualquier técnica que proporcione la producción de moléculas y anticuerpos por línea celulares continuas en cultivo. Las técnicas para producción y aislamiento incluyen pero no se limitan a la técnica del hibridoma descrito originalmente por Kohler y Milstein (Nature, 1975, 256: 495 - 497); la técnica de hibridoma de células B humanas (Kosboer et al., 1983, Inmunology Today 4: 72; Cote et al., 1983, Proc . Nati. Acad. Sci. USA 80: 2026 - 2030); y la técnica de hibridoma EBV (Colé et al., 1985. Monoclonal Antibodies y Cáncer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp . 77 -96).

Alternativamente, las técnicas descritas para la producción de anticuerpos de cadena sencilla (véase, por ejemplo, la patente de los Estados Unidos No. 4,946,778) puede adaptarse para producir anticuerpos de cadena sencilla anti IGF-IR. Los inhibidores de IGF-IR basados en anticuerpos útiles en la práctica de los presentes métodos también incluyen fragmentos de anticuerpos anti IGF- IR que incluyen pero no se limitan a fragmentos F(ab' )2/ que pueden generarse por digestión con pepsina de una molécula de anticuerpo intacta, y fragmentos Fab, que pueden generarse reduciendo los puentes de disulfuro de los fragmentos F (ab')2. Alternativamente, las bibliotecas de expresión de Fab y/o scFv pueden construirse (véase, por ejemplo Huse et al., 1989, Science 246: 1275 - 1281) para permitir una identificación rápida de los fragmentos que tienen la especificidad deseada para IGF-IR.

Las técnicas para la producción y aislamiento de anticuerpos monoclonales y fragmentos de anticuerpos son bien conocidas en el arte, y se describen adicionalmente, entre otros lugares en Harlow y Lañe, 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, y in J.W. Goding, 1986, Monoclonal Anti-bodies: Principies y Practice, Academic Press, Londres. Los anticuerpos y los fragmentos de anticuerpos anti EGFR humanizados también pueden prepararse con técnicas conocidas tales como las descritas en Vaughn, T. J. et al., 1998, Nature Biotech. 16: 535 - 539 y referencias citadas en el mismo, y tales anticuerpos o fragmentos de. los mismos pueden ser útiles en la práctica de los métodos presentes .

En un aspecto, un inhibidor de IGF-IR puede ser un anticuerpo monoclonal o un fragmento de enlazamiento del antígeno del mismo. Anticuerpos monoclonales de ejemplo incluye, pero no se limitan a, AMG-479 (Amgen) , BIIB022 (Biogen) , IMC-A12 (ImClone), CP-751,871 (Pfizer), SCH-717454 (Schering) , R-1507 (Roche) y MK-0646 (Merck) .

AMG-479 (Amgen) puede administrarse en dosis en escalamiento intravenoso (IV) durante 1 hora en los días 1, 15 y 29. Los pacientes se evalúan en la semana 8 y aquellos que demuestren una respuesta objetivo al tumor o una enfermedad estable continua en el tratamiento comenzando en el día 57. El tratamiento se repite cada 2 semanas en ausencia de progresión de la enfermedad o toxicidad inaceptable .

El BIIB022 (Biogen) puede administrarse IV una vez cada 3 semanas hasta progresión de la enfermedad o toxicidad inaceptable .

IMC-A12 (ImClone) puede administrarse en dosificaciones y programaciones de administración diferente tal como, por ejemplo: (1) administración de una dosis de 10 mg/kg IV durante 1 hora cada 2 semanas. Los pacientes continuaran el tratamiento hasta que se desarrolle progreso o toxicidad inaceptable; (2) 10 mg/kg IV durante 1 hora cada 2 semanas; (3) 6 mg/kg IV en los días 1, 8 y 15 en un ciclo de 21 días; (4) 3 mg/kg IV semanalmente durante 60 minutos; (5.) IV durante una hora en los días 1, 8, 15 y 22. Los transcursos de los tratamientos se repetirán cada 28 días hasta por 2 años en ausencia de progresión de la enfermedad o toxicidad inaceptable; (6) IV durante una hora una vez a la semana; el tratamiento continua en ausencia de progresión de la enfermedad o toxicidad inaceptable ; o (7) IV durante una hora en los días 1, 8 y 15. Los transcursos se repiten cada 21 días en ausencia de progresión de la enfermedad o toxicidad inaceptable .

CP-751,871 (Pfizer) puede administrarse en diferentes programaciones de dosificación y administración tales como, por ejemplo: 419 El SCH-717454 (Schering) puede administrarse en diferentes programaciones de dosificación y administración tales como, por ejemplo: IV una vez cada 2 semanas hasta progresión de la enfermedad.

El R-1507 (Roche) puede administrarse en diferentes programaciones de dosificación y administración tales como, por ejemplo: (1) 3 o 9 mg/kg IV semanalmente o una dosis derivada del Pk, que no exceda 16 mg/kg IV semanalmente; (2) IV bien sea semanalmente o 3 veces semanalmente, en dosis en escalación, comenzando en 1 mg/kg; y (3) 9 mg/kg IV semanalmente .

El MK-0646 (Merck) puede administrarse en diferentes programaciones de dosificación y administración tales como, por ejemplo: (1) 10 mg/kg IV semanalmente durante una hora; (2) 7.5, 10 o 15 mg/kg IV durante 1 hora; (3) niveles de dosificación crecientes de 1.25, 2.5, 5.0, 10.0, 15.0 y 20.0 mg/kg IV semanalmente durante 1 a 2 horas . Cada tres pacientes reciben niveles de dosificación crecientes. Luego los pacientes entran en un régimen de dosificación diferente de una dosificación de semana de por medio, o dosificación cada tres semanas; (4) en la fase I, 5 mg/kg IV semanalmente con escalación a 10 mg/kg semanalmente siguiendo la toxicidad limitante de las dosis, luego la dosis será considerada. En la fase II; 5 mg/kg IV semanalmente ; (5) 5 a 10 mg/kg IV una vez a la semana durante 4 semanas consecutivas; (6) niveles de dos crecientes de 1.25, 2.5, 5.0, 10.0, 15.0 y 20.0 mg/kg IV semanalmente durante 1 a 2 horas durante 4 semanas consecutivas; (7) niveles de dosificación crecientes consistentes de una dosis de carga (2.5, 5.0. 10.0, 15.0, 20.0 y 30.0 mg/kg) seguida por una dosis subsecuente de mantenimiento una semana de por medio ( de al menos 2.5 mg/kg) empezando dos semanas después de la terminación de la dosis de carga.

Los inhibidores de quinasa de IGF-IR para uso en los presentes métodos pueden pasarse alternativamente en constructos de oligonucleótidos . Los oligonucleótidos antisentido, incluyendo las moléculas de ARN antisentido y las moléculas de ADN antisentido, actuarían directamente para bloquear la translación del ARNm del IGF-IR enlazándose al mismo y así evitando la traducción de proteínas o la degradación creciente del ARNm, disminuyendo el nivel de proteína quinasa de IGF-1R, y así la actividad, en una célula. Por ejemplo, los polinucleótidos antisentido de al menos 15 bases y complementarios a regiones únicas de la secuencia del transcripto de ARNm que codifica el IGF-1R pueden sintetizarse, por ejemplo, por técnicas de fosfodiéster convencionales y administrarse por ejemplo por inyección intravenosa o infusión. Los métodos para utilizar las técnicas antisentido para inhibir específicamente la expresión de genes cuya secuencia es conocida son bien conocidos en la técnica (véase la patente de los estados Unidos Nos. 6,566,135; 6,566,131; 6,365,354; 6,410,323; 6,107,091; 6,107,091; 6,046,321; y 5,981,732).

Los ARN inhibidores pequeños (ARNsi) pueden funcionar como inhibidores de la quinasa de IGF- IR para uso en los presentes métodos. La expresión genética de IGF- IR puede reducirse poniendo en contacto el tumor, sujeto o célula con un ARN pequeño de doble cadena (ARNds) o un vector constructo que causa la producción de un ARN pequeño de doble cadena, de tal forma que la expresión IGF- IR se inhiba específicamente (esto esARN de interferencia o ARNi) . Los métodos para seleccionar un ARNds o vector que codifica ARNds apropiado son bien conocidos en la técnica para genes cuya secuencia es conocida (por ejemplo, véase Tuschi, T. , et al. (1999) Genes Dev. 13 (24): 3191 - 3197; Elbashir, S.M. et al., (2001) Nature 411: 494 - 498; Hannon, G. J. (2002) Nature 418: 244 -251; McManus, M. T. y Sharp, P. A. (2002) Nature Reviews Genetics 3: 737 - 747; Bremmelkam , T. R . et al., (2002) Science 296: 550 - 553; patente de los Estados Unidos Nos. 6,573,099 y 6,506,559; y publicaciones de patente internacional Nos. WO 01/36646, WO 99/32619 y WO 01/68836) .

Las ribozimas también pueden funcionar como inhibidores de IGF- IR para uso en los presentes métodos. Las ribozimas son moléculas de ARN enzimáticas capaces de catalizar la ruptura específica del ARN. El mecanismo de acción de la ribozima involucra la hibridización específica de la secuencia de la molécula de ribozima hacia un ADN objetivo complementario, seguida por la ruptura endonucleolítica . Las moléculas de ribozima manipuladas en horquilla o con estructura de cabeza de martillo que cataliza específica y eficientemente la ruptura endonucleolítica de las secuencias de IGF-IR ARNm son útiles por lo tanto dentro del alcance de los presentes métodos. Los sitios de ruptura específicos de la ribozima con cualquier ARN objetivo potencial se identifican inicialmente por el barrido de la molécula objetivo por los sitios de ruptura de la ribozima, lo que típicamente incluye las siguientes secuencias, GUA, GUU, y GUC. Una vez identificadas, las secuencias de ARN cortas de entre aproximadamente 15 y 20 ribonucleótidos correspondientes a la región del gen objetivo que contiene el sitio de ruptura pueden evaluarse para predecir características estructurales, tales como estructuras secundarias que pueden hacer que la secuencia de un oligonucleótido sea inadecuada. La adecuación de los objetivos candidato puede evaluarse también probando su accesibilidad a la hibridización con oligonucleótidos complementarios, utilizando, por ejemplo, pruebas de protección de ribonucleasa .

Pueden introducirse diversas modificaciones a los oligonucleótidos de los métodos como medio para incrementar la estabilidad y vida media intracelular . Las modificaciones posibles incluyen pero no se limitan a adición de secuencias de flanqueamiento de ribonucleótidos y desoxirribonucleótidos en los extremos 5' y/o 3' de la molécula, o el uso de fosforotioato o 2 ' -O-metilo en vez de las uniones fosforodiesterasa dentro del esqueleto del oligonucleótido.

Los constructos de oligonucleótidos antisentido, ARNs y los ribosomas adecuados para uso con los presentes métodos pueden sintetizarse mediante una variedad de métodos conocidos o métodos que se desarrollen en el futuro. Por ejemplo, se pueden utilizar métodos de síntesis química tales como los que emplean la tecnología ACE® de propiedad de Dharmacon, Inc. Alternativamente, también se pueden utilizar métodos de síntesis dependientes del patrón. La síntesis puede llevarse a cabo utilizando bases modificadas o no modificadas, naturales o no naturales tales como las divulgadas aquí. Adicionalmente, pueden llevarse a cabo síntesis con o sin un esqueleto de ácido nucleico modificado o no modificado tal como se divulga aquí.

Además, los constructos de oligonucleótidos anti sentido, A Nsi y las ribozimas pueden sintetizarse en una célula huésped mediante una variedad de métodos conocidos y los que se desarrollen en el futuro, para sintetizar los constructos de oligonucleótidos antisentido, ARNsi, y moléculas de ribozimas en una célula huésped. Por ejemplo, los constructos de oligonucleótidos antisentido, ARNsi y ribozimas pueden expresarse a partir de un vector de ADN circular o lineal recombinante utilizando cualquier promotor adecuado. Los promotores adecuados para expresar las moléculas de ARN antisentido o inhibitorias a partir de un vector adecuado para uso con los métodos incluyen, por ejemplo, las secuencias de promotores U6 o Hl ARN pol III y el promotor del citomegalovirus . La selección de otros promotores adecuados esta dentro del conocimiento de la técnica, los vectores adecuados para uso con los métodos objetivo incluyen aquellos descritos en la patente de los Estados Unidos No. 5,624,803, cuya descripción se incorpora aquí en su totalidad. Los plásmidos recombinantes de las realizaciones también pueden comprender promotores inducibles o regulables para la expresión de los constructos de oligonucleótidos antisentido, ARNsi, y ribozimas en un tejido particular o en un ambiente intracelular particular.

Los constructos de oligonucleótidos antisentido, ARNsi y las ribozimas de las realizaciones descritas aquí pueden expresarse a partir de un vector de ácido nucleico recombinante bien como dos moléculas separadas complementarias de ADN o como una molécula individual de ARN con dos regiones complementarias. La selección de los vectores adecuada para la expresión de los constructos de oligonucleótidos antisentido, ARNs, y las ribozimas en el vector, y los métodos para administrar el vector recombinante a las células de interés están dentro del conocimiento de la técnica. véase por ejemplo, Tuschl, T. (2002), Nat. Biotechnol . 20: 446 - 448: Brummelkamp T R et al., (2002), Science 296: 550 - 553; Miyagishi M et al., (2002), Nat. Biotechnol. 20: 497 - 500; Paddison P J et al., (2002), Genes Dev. 16: 948 - 958; Lee N S et al., (2002), Nat. Biotechnol. 20: 500 - 505; y Paul C P et al., (2001), Nat. Biotechnol.. 20: 505 - 508, divulgaciones completas de las cuales que se incorporan aquí como referencia. Se describen otros métodos para la administración y expresión intracelular en por ejemplo, la publicación de solicitud de patente de los Estados Unidos Nos. 20040005593, 20050048647, 20050060771, cuyas divulgaciones completas se incorporan aquí como referencia .

En una realización, después de poner en contacto las células con un butano catecólico, los inhibidores de IGF-1R pueden inhibir la actividad de IGF-IR en al menos aproximadamente 2 veces, al menos aproximadamente 5 veces, al menos aproximadamente 10 veces, al menos aproximadamente 20 veces, al menos aproximadamente 25 veces, al menos aproximadamente 50 veces, al menos aproximadamente 100 veces o más. En otra realización los inhibidores pueden inhibir la actividad de IGF-1R en al menos aproximadamente 5%, al menos aproximadamente 10%, al menos aproximadamente 15%, al menos aproximadamente 20%, al menos aproximadamente 50%, al menos aproximadamente 60%, al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 90%, al menos aproximadamente 95%, o al menos aproximadamente 100%. En otra realización, la inhibición del IGF-1R da como resultado la estasis de los síntomas de un paciente que ha recibido la administración de una combinación de un butano catecólico y un inhibidor de IGF-IR.

Dosificación de inhibidores de EGFR e inhibidores de IGF- IR Mientras que las dosificaciones de las diversas realizaciones de inhibidores de IGF-IR e inhibidores de EGFR se describen anteriormente, debería entenderse que pueden utilizarse otros regímenes de dosificación. En diversas realizaciones, hay sinergia entre un butano catecólico y el inhibidor de IGF- IR y/o inhibidor de EGFR lo que permite que se administre una dosis menor del butano catecólico, del inhibidor de IGF- IR y/o del inhibidor de EGFR. En algunas realizaciones, la sinergia entre el inhibidor de IGF- IR y/o el inhibidor de EGFR ¦ permite una dosis menor del butano catecólico que se va a dosificar. En algunas realizaciones, la sinergia entre el inhibidor de IGF- IR y/o el inhibidor de EGFR y el butano catecólico permite una dosis inferior tanto del inhibidor de IGF- IR y/o del inhibidor de EGFR y el butano catecólico que se van a dosificar. En algunas realizaciones, la sinergia entre el inhibidor IGF-IR y/o el inhibidor EGFR y el butano catecólico permiten que el inhibidor de IGF- IR y/o el inhibidor de EGFR sean dosificados con menos frecuencia. En algunas realizaciones, la sinergia entre el inhibidor de IGF- IR y/o el inhibidor de EGFR y el butano catecólico permite que el butano catecólico sea dosificado con menos frecuencia. En algunas realizaciones, la sinergia entre el inhibidor de IGF- IR y/o el inhibidor de EGFR y el butano catecólico permite que tanto el inhibidor de IGF-1R y/o el inhibidor de EGFR y el butano catecólico sean dosificados con menos frecuencia.

En algunas realizaciones, se administra al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva del inhibidor de IGF-1R y/o del inhibidor de EGFR. En algunas realizaciones, la administración puede ser repetida, por ejemplo, en una programación de dos veces al día, una programación semanal, o cualquier otra programación diaria, una programación cada tres días, una programación cada cuatro días, una programación semanal, una programación bisemanal, una programación mensual, etc. En algunas realizaciones, el inhibidor de IGF- IR y/o el inhibidor de EGFR se administran en una de las programaciones antes mencionadas durante 1, 2, 3, 4, 5, 6 o más semanas. En algunas realizaciones, esta ronda de dosificaciones se guía por un periodo en el cual no se administra inhibidor de IGF-IR y/o inhibidor de EGFR (periodo de lavado), que puede ser de 1, 2, 3, 4 o más semanas. En algunas realizaciones, el periodo de lavado es desde aproximadamente 1 día hasta aproximadamente 3 semanas, o aproximadamente 3 días hasta aproximadamente 1 semana, o aproximadamente 1 semana hasta aproximadamente 2 semanas, o aproximadamente 2 semanas hasta aproximadamente 3 semanas. En algunas realizaciones, el inhibidor de IGF- IR y/o el inhibidor de EGFR se administra dos veces semanalmente durante 4 semanas, seguido por un periodo de 1, 2 o 3 semanas de lavado. En algunas realizaciones, el inhibidor de IGF-IR y/o el inhibidor de EGFR se administra cada 2, 3 o 4 días durante cuatro semanas, seguido por un periodo de lavado de 1, 2 o 3 semanas. En algunas realizaciones, el inhibidor de IGF-IR y/o el inhibidor de EGFR se administra una vez a la semana hasta cuatro semanas seguido por un periodo de 1, 2 o 3 semanas de lavado. En algunas realizaciones, el inhibidor de IGF-1R y/o el inhibidor de EGFR, se administra dos veces semanalmente durante 6 semanas seguido por un periodo de lavado de 1, 2 o 3 semanas. En algunas realizaciones, el inhibidor de IGF-1R y/o el inhibidor de EGFR se administra cada 2, 3 o 4 días durante 6 semanas, seguido por un periodo de lavado de 1, 2 o 3 semanas. En algunas realizaciones, el inhibidor de IGF-1R y/o el inhibidor de EGFR se administra una vez a la semana durante 6 semanas seguido por un periodo de lavado de 1, 2 o 3 semanas. En algunas realizaciones, el inhibidor de IGF-1R y/o el inhibidor de EGFR se administra dos veces semanalmente durante 2 semanas, seguido por un periodo de lavado de 1, 2 o 3 semanas. El algunas realizaciones, el inhibidor de IGF- IR y/o el inhibidor de EGFR se administra cada 2, 3 o 4 días durante 2 semanas seguido por un periodo de lavado de 1 , 2 o 3 semanas. En algunas realizaciones, el inhibidor de IGF- IR y/o el inhibidor de EGFR se administra una vez a la semana durante 2 semanas seguido por un periodo de lavado de 1 , 2 o 3 semanas .

En algunas realizaciones, puede emplearse la dosificación plana del inhibidor de IGF-IR y/o del inhibidor de EGFR. Las dosis planas adecuadas contempladas aquí son aproximadamente 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75 mg/m2 , o cualquier entero abarcado entre ellos, del inhibidor de IGF- IR y/o inhibidor de EGFR por dosis. Alternativamente, las dosis planas contempladas aquí son aproximadamente 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200 mg/kg o cualquier entero abarcado entre ellos, del inhibidor de IGF- IR y/o del inhibidor de EGFR por dosis. Tales dosis pueden administrarse en una de las programaciones de dosificación descritas aquí. En algunas realizaciones, se administra una dosis de aproximadamente 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75 mg/m2 del inhibidor de IGF-IR y/o del inhibidor de EGFR en una programación de dosificación diaria, cada tercer día, dos veces a la semana, semanalmente (una vez por semana) o bisemanalmente (una vez cada tercer semana) , opcionalmente con un periodo de descanso introducido después de cierto número de ciclos de dosificación. En otras realizaciones, se administra una dosis de aproximadamente 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200 mg/kg, o cualquier entero abarcado entre ellos en una programación de dosificación diaria, cada tercer día, dos veces a la semana, semanalmente (una vez a la semana) o bisemanalmente (una semana de por medio) , opcionalmente con un periodo de descanso (hiato) introducido después de un cierto número de ciclos de dosificación .

En algunas realizaciones, el rango de dosificación total semanal es aproximadamente 14 mg/m2 hasta aproximadamente 525 mg/m2. En varias realizaciones, el rango de dosificación semanal total es aproximadamente 12 mg/m2 hasta aproximadamente 450 mg/m2, o aproximadamente 10 mg/m2 hasta aproximadamente 375 mg/m2, o aproximadamente 8 mg/m2 hasta aproximadamente 300 mg/m2. En algunas realizaciones, el rango de dosificación semanal total es aproximadamente 6 mg/m2 hasta aproximadamente 225 mg/m2. En algunas realizaciones, el rango de dosificación semanal esta aproximadamente 4 mg/m2 hasta aproximadamente 50 mg/m2, o aproximadamente 2 mg/m2 hasta aproximadamente 75 mg/m2. En algunas realizaciones, el rango de dosificación semanal es aproximadamente 3.5 mg/m2 hasta aproximadamente 350 mg/m2, o aproximadamente 3.0 mg/m2 hasta aproximadamente 300 mg/m2, o aproximadamente 2.5 mg/m2 hasta aproximadamente 250 mg/m2, o aproximadamente 2.0 mg/m2 hasta aproximadamente 200 mg/m2, o aproximadamente 1.5 mg/m2 hasta aproximadamente 150 mg/m2, o aproximadamente 1.0 mg/m2 hasta aproximadamente 100 mg/m2, o aproximadamente 0.5 mg/m2 hasta aproximadamente 50 mg/m2.

En ciertas realizaciones, la cantidad terapéuticamente efectiva del inhibidor de IGF- IR y/o del inhibidor de EGFR es aproximadamente 0.5 - 50 mg/m2. En algunas realizaciones, la cantidad terapéuticamente efectiva del inhibidor de IGF-IR y/o del inhibidor de EGFR es aproximadamente 2 - 75 mg/m2. Un butano catecólico puede administrarse al mismo tiempo que un inhibidor de IGF- IR y/o un inhibidor de EGFR. Alternativamente, un butano catecólico puede administrarse antes de un inhibidor de IGF-IR y/o de un inhibidor de EGFR.

En algunas realizaciones, las dosificaciones adecuadas de un inhibidor de IGF-IR y/o un inhibidor de EGFR se dan de forma intravenosa durante 3 horas cada 8 horas durante 3 días y se repite cada 6 semanas. En algunas realizaciones, las dosificaciones varían desde 45 mg/m2 por transcurso hasta 135 mg/m2 por transcurso.

Kits Los compuestos aquí descritos pueden empacarse en un kit. En algunas realizaciones, se proporciona aquí un kit que incluye un butano catecolico en una forma de dosificación especialmente una forma de dosificación para administración oral o administración intravenosa. En algunas realizaciones, el kit incluye adicionalmente un inhibidor de IGF-IR en una forma de dosificación, especialmente una forma de dosificación para administración oral o administración intravenosa. Adicional o alternativamente, el kit incluye adicionalmente un inhibidor de EGFR en una forma de dosificación, especialmente una forma de dosificación para administración oral o administración intravenosa.

En realizaciones específicas, el butano catecolico y el inhibidor de IGF-IR/EGFR están en formas de dosificación separada. En algunas realizaciones, el kit incluye una o más dosis de un butano catecolico en forma de tableta para administración oral. En otras realizaciones, sin embargo, la dosis o dosis de un butano catecolico pueden estar presentes en una variedad de formas de . dosificación, tales como cápsulas, tabletas, cápsulas de gel, polvos para suspensión, etc. En algunas realizaciones, el kit incluye una o más dosis de un inhibidor de IGF-IR/EGFR en tabletas para administración oral. En otras realizaciones, sin embargo, la dosis o las dosis de un inhibidor.de IGF-1R/EGFR pueden estar presentes en una variedad de formas de dosificación, tales como cápsulas, tabletas, cápsulas de gel, polvos para suspensión, etc.

Los medios de contenedor de los kits generalmente incluyen al menos un vial, tubo de ensayo, frasco, botella, jeringa y/o otros medios de contenedor, entre los cuales puede colocarse al menos un polipéptido, y/o preferiblemente dispuesto en alícuotas adecuadamente. Los kits pueden incluir medios para contener al menos una proteína de fusión, una unidad estructural detectable, una molécula detectora, y/o cualquier otro contenedor de reactivos en confinación cercana para venta comercial. Tales contenedores pueden incluir contenedores para inyección y/o contenedores plásticos moldeados los cuales se almacenan los viales deseados . Los kits también incluir material impreso para uso de los materiales del kit.

Los empaques y kits pueden incluir adicionalmente un agente regulador, un agente preservativo y/o estabilizante en una formulación farmacéutica. Cada componente del kit puede incluirse dentro de un contenedor individual y todos los diversos contenedores pueden estar en un empaque sencillo. Los kits pueden ser diseñados para almacenamiento en frío o almacenamiento a temperatura ambiente .

Adicionalmente, las preparaciones pueden contener estabilizantes (tales como albúmina de suero bovino (BSA) ) para incrementar la vida media de los kids . Cuando las composiciones están liofilizadas , el kit puede contener preparaciones adicionales de soluciones para reconstituir las preparaciones liofilizadas . Soluciones para reconstitución aceptable son bien conocidas en la técnica e incluyen, por ejemplo, solución salin regulada con fosfato farmacéuticamente aceptable (PBS) .

Adicionalmente, los empaques o kits provistos aquí pueden incluir adicionalmente una cualquiera de las unidades estructurales provistas aquí tales como, por ejemplo, una o más moléculas informadoras y/o una o más unidades estructurales/agentes detectables .

Los empaques y kits pueden incluir adicionalmente uno o más componentes para una prueba, tal como, por ejemplo, una prueba ELISA, una prueba de citotoxicidad, una prueba de actividad de ADP-Ribosiltransferasa, ETC. Las muestras que se van a probar en esta aplicación incluyen, por ejemplo, sangre, plasma, y secciones de tejido y secreciones, orina, linfa y productos de las mismas. Los empaques y kits pueden incluir adicionalmente uno o más componentes para recolección de una muestra (por ejemplo, una jeringa, una copa, un hisopo, etc . ) .

Los empaques y kits pueden incluir adicionalmente una etiqueta que especifica, por ejemplo, una descripción del producto, modo de administración y/o indicación del tratamiento. Los empaques provistos aquí pueden incluir cualquiera de las composiciones tal como se describen aquí para tratamiento de cualquiera de las indicaciones aquí descritas .

El término "material de empaque" se refiere a una estructura física que aloja los componentes del kit. El material de empaque puede mantener los componentes en forma estérilo, y puede sr hecho de un material comúnmente utilizado para tales propósitos (por ejemplo, papel, fibra corrugada, vidrio, plástico, lamina, ampollas, etc.). La etiqueta o inserto del empaque puede incluir instrucciones apropiadas escritas. Los kits, por lo tanto, pueden incluir adicionalmente etiquetas o instrucciones para utilizar los componentes del kit en cualquier método descrito aquí. Un kit puede incluir un compuesto en un paquete, o un dispensador junto con instrucciones para administrar el compuesto en un método descrito aquí .

En algunas realizaciones, un kit incluye al menos tres formas de dosificación, una que comprende un butano catecólico, una que comprende un inhibidor de IGF-IR y otra que comprende un inhibidor de EGFR. En algunas realizaciones, el kit incluye dosis suficientes para un periodo de tiempo. En algunas realizaciones, cada una de las dosis está separada físicamente en un compartimiento, en el cual cada dosis está segregada de las otras .

En algunas realizaciones, el kit incluye al menos dos fajos de dosificación una de las cuales comprende un butano catecólico y otra que comprende un inhibidor de IGF-IR o un inhibidor de EGFR. En algunas realizaciones, el kit incluye dosis suficientes para un periodo de tiempo. En algunas realizaciones específicas, cada una de las dosis esta separada físicamente en un compartimiento, en el cual cada dosis esta segregada de las otras.

En realizaciones particulares, el kit puede ser ventajosamente un empaque de ampollas, los empaques de ampollas más conocidos en la técnica, incluyen generalmente un lado claro que tiene compartimientos (ampollas o burbujas), que separadamente contienen las diversas dosis, y un respaldo, tal como papel, lamina de aluminio, lamina de papel u otro respaldo, que se retira fácilmente de tal manera que cada dosis pueda ser extraída separadamente del paquete de ampollas sin perturbar las otras dosis. En algunas realizaciones, el kit puede ser un paquete de ampollas en el cual cada dosis del butano catecólico, el inhibidor de IGF-1R y el inhibidor de EGFR se segregan de las otras dosis en ampollas o burbujas separadas. En algunas de tales realizaciones, el empaque de ampollas puede tener perforaciones, que permiten que cada dosis diariamente sea separada de las otras desprendiéndola del resto de paquetes de ampollas. Las formas de dosificación separada pueden estar contenidas en ampollas separadas. La segregación de los ingredientes farmacéuticamente activos en ampollas separadas puede ser ventajosa puesto que previene que las formas de dosificación separadas (por ejemplo, tabletas y cápsulas) entren en contacto y se dañen una a otra durante el embarque y manipulación. Adicionalmente , las formas de dosificación separadas pueden ser alcanzadas y/o etiquetadas para administración al paciente en diferentes momentos.

En algunas realizaciones, el tercer ingrediente farmacéuticamente activo puede estar en la forma de un líquido o un polvo reconstituible , el cual puede estar sellado separadamente (por ejemplo, en un vial o ampolla) y luego empacado junto con un paquete de ampollas que contiene dosis separadas del butano catecólico, del inhibidor IGF- IR y del inhibidor EGFR. En algunas realizaciones, el inhibidor de IGF- IR y el inhibidor de EGFR están en la forma de un líquido o polvo reconstituible que esta sellado separadamente (por ejemplo, en un vial o ampolla) y luego empacado junto con un empaque de ampollas que contienen dosificaciones separadas del butano catecólico. Estas realizaciones serian especialmente útiles en la definición química donde las dosis prescritas del butano catecólico, del inhibidor de IGF-1R y del inhibidor de EGFR serian usadas en una programación de dosificación en la cual el butano catecólico se administra en ciertos días, el inhibidor de IGF- IR se administra en los mismos o en diferentes días y el inhibidor de EGFR se administra en los mismos o en diferentes días. Tal combinación de empaque en ampollas también podrían incluir instrucciones para administración de cada uno de los agentes activos en una programación de dosificación adaptada para proveer un efecto sinérgico o de tratamiento de secuelas.

En otras realizaciones, el kit puede ser un contenedor que tiene compartimientos separados con tapas separadas para ser abiertas de acuerdo con una programación particular. Por ejemplo, un kit puede comprender una caja (o un contenedor similar) que tenga siete compartimientos, cada uno para un día separado de la semana, y cada compartimiento marcado para indicar a que día de la semana corresponde. En algunas realizaciones específicas, cada compartimiento esta subdividido adicionalmente para permitir la segregación de un ingrediente farmacéutico activo de otro. Como se estableció más arriba, tal segregación es ventajosa en cuanto que previene el daño de las formas de dosificación y permite la dosificación en tiempos diferentes y el etiquetado para ese efecto. Tal contenedor podría incluir también instrucciones para administrar uno o más agentes activos de acuerdo con una programación de dosificación adaptada para proveer un efecto sinérgico o de tratamiento de secuelas.

Los kits también pueden incluir instrucciones que enseñan el uso del kit de acuerdo con los diversos métodos y metodologías descritas aquí. Tales kits opcionalmente incluyen información, tal como referencias de literatura científica, materiales de insertos en el empaque, resultados de pruebas químicas y/o resúmenes de estas y similares, los cuales indican o establecen las actividades y/o ventajas de la composición, y/o los cuales describen la dosificación, administración, efectos colaterales, interacciones de los fármacos, estado de la enfermedad para el cual la composición debe ser administrada, u otra información útil para la persona que proporciona el cuidado de salud. Tal información puede estar basada en los resultados de diversos estudios, por ejemplo, estudios que utilizan animales experimentales que involucran modelos in vivo y estudios basados en ensayos clínicos con humanos. En diversas realizaciones, los kits descritos aquí pueden ser provistos, comercializados y/o promovidos para los suministradores de salud, incluyendo médicos, enfermeras, farmaceutas, oficiales de formulación y similares. Los kits pueden, en algunas realizaciones, ser comercializados directamente al consumidor. En ciertas realizaciones, el material de empaque comprende adicionalmente un contenedor para alojar la composición y opcionalmente una etiqueta fijada al contenedor. El kit opcionalmente comprende componentes adicionales, tales como pero no limitándose a jeringas para la administración de la composición.

Las instrucciones pueden incluir instrucciones para practicar cualquiera de los métodos descritos aquí incluyendo métodos de tratamiento. Las instrucciones pueden incluir adicionalmente indicaciones de un punto final clínico satisfactorio de cualquier síntoma adverso que pueda presentarse o información adicional requerida por las agencias reguladoras tales como la Food y Drug Administration para uso en un sujeto humano.

Las instrucciones pueden estar sobre "material impreso" , por ejemplo, papel o cartón dentro de o fijadas al kit, o sobre una etiqueta fijada al kit o material de empaque, o adherida a un vial o tubo que contiene un componente del kit. Las instrucciones pueden adicionalmente estar incluidas en un medio legible por ordenador, tal como un disco (disco flexible o disco duro) , CD óptico tal como CD o DVD-ROM/RAM, cinta magnética, medios de almacenamiento electrónico tal como RAM y ROM, tipo IC e híbridos de estos tales medios de almacenamiento magnéticos/ópticos .

En algunas realizaciones, un kit puede comprender reactivos para la detección de ADN, ARN o niveles de expresión proteínica en una muestra de células tumorales de un paciente que va a ser tratado.

Los kits pueden, en algunos aspectos, contener reactivos y materiales para llevar a cabo cualquiera de los ensayos descritos aquí .

EJEMPLOS La solicitud puede ser mejor entendida con referencia a los siguientes ejemplos no limitantes, los cuales se proveen como realizaciones de ejemplo de la solicitud. Los siguientes ejemplos se presentan en orden para ilustrar de forma más completa las , realizaciones y de ninguna manera deben considerarse como restrictivos, ni tampoco como limitantes del alcance amplio de la solicitud. Mientras que aquí se han demostrado y descrito ciertas realizaciones de la presente solicitud, será obvio que tales realizaciones se proveen solamente a manera de ejemplo. Pueden presentarse numerosas variaciones, cambios y sustituciones para los expertos en la técnica. Se entiende que las diversas alternativas a las realizaciones descritas aquí pueden emplearse en la práctica de los métodos aquí descritos.

EJEMPLO 1: Tratamiento de epitelioma celular basal El ejemplo describe la actividad neoplástica de composiciones que contienen butanos catecólicos en estudios con pacientes humanos diagnosticados con epitelioma celular basal .

Los butanos catecólicos pueden prepararse para administración tópica para el tratamiento de epitelioma celular basal.

La superficie de las lesiones es cubierta con cinta antes de cada aplicación. La medicación de prueba se aplica directamente a la lesión con un recubrimiento de aproximadamente 2 mm de espesor y se cubre con un vendaje. Después de un mínimo de siete (7) días, se aplica una segunda aplicación a discreción del investigador. La dosis varía desde 20 -350 mg/cm2 con tanto como 500 mg/cm2 utilizado para tumores profundos. Para determinar el efecto del compuesto de prueba sobre el neoplasma maligno, se obtiene una biopsia por excisión 30 días después del tratamiento inicial.

EJEMPLO 2: Tratamiento de queratosis actínica Los pacientes humanos diagnosticados con queratosis actínica se tratan con composiciones de butano catecólico preparadas para aplicación tópica.

La composición de prueba se aplica directamente a la lesión con un recubrimiento de aproximadamente 2 mm y se confina al margen de la lesión. Se aplica un vendaje a la lesión. Se lleva a cabo un examen visual y medición de la lesión 7 y 14 días después del tratamiento inicial. A discreción del investigador, puede aplicarse un segundo tratamiento con el mismo compuesto de prueba.

Con el fin de determinar si el compuesto de prueba erradico el neoplasma premaligno, se hace una biopsia por punción de 30 - 60 días después del tratamiento inicial. Si el reporte de la biopsia es negativo, es decir no hay tumor, el paciente se examina cada 6 meses durante un periodo de 12 meses en búsqueda de recurrencia.

EJEMPLO 3: Tratamiento de lesiones tumorales Los pacientes caninos con diversa lesiones tumorales se tratan con composiciones que contienen un butano catecólico preparado para aplicación tópica.

Los animales son restringidos en su movimiento durante dos horas físicamente o con sedativos (por ejemplo, 0.03 mg de oximorfona/lb2 con sulfato de atropina) . Después de pinzamiento, lavado y medición del tamaño del tumor la superficie de la piel es sometida a abrasión hasta que se presenta sangrado. Para potenciar la penetración de las composiciones de prueba para tumores grandes o subdérmicos, se utiliza una aguja de calibre 20 o 22 para hacer punción en el tumor. Después de limpiar la piel de sangre seca, el sitio del tumor es recubierto con un¦ recubrimiento de 1 - 2 mm de la composición de prueba extendiendo los 5 mm periféricamente. Después de 2 horas, el compuesto es retirado del área y suavemente limpiada. La composición de prueba se aplica hasta tres veces dentro de un intervalo de dos semanas o hasta que el tumor desaparezca.

EJEMPLO 4 : Inhibición del crecimiento de HÜVEC y prueba de incorporación de 3H-timidina Hay disponible un cierto número de ensayos para establecer la inhibición del crecimiento celular.

En un ejemplo, se cultivan HUVEC en matraces de 75 cm2 (Falcon, Becton-Dickinson, Franklin Lakes, NJ) en una incubadora con C02 a 37 °C bajo condiciones subconfluentes . Las células se desprenden incubando con solución salina balanceada de Hanks con EDTA 15 mM en regulador HEPES 25 mM, pH 7.3, a 37 °C durante 15 minutos. Después de lavar dos veces con PBS enfriado con hielo, las células se redesuspenden en un medio de crecimiento para células endoteliales a una concentración de 25000 células/ml. En experimentos adicionales, se suspenden células endoteliales de la vena umbilical humana (HUVEC) y se cultivan en un medio de cultivo de células endoteliales libre de FBS y con extracto de cerebro bovino. Se siembra una alícuota de 200 µ? de suspensión celular en cada pozo de placas de cultivo de 96 pozos. Las células se cultivan a 37 °C en una incubadora con C02 durante la noche antes de que se añada NDGA o PBS estéril en triplicado. Las placas de cultivo se mantienen en incubadora durante 72 horas, durante las cuales se reemplaza con medio fresco y NDGA/PBS cada 24 horas. Se agrega 3H-timidina (1 Ci) a cada pozo y luego las placas se incuban durante 20 horas. Las células se lavan con PBS seguido por tratamiento con 100 µ?/???? de tripsin-EDTA (0.05% de tripsina, EDTA 0.53 m ) a 37 °C durante 15 minutos. Las células son recolectadas sobre filtros de fibra de vidrio (Wallac Printed FiltermatA) utilizando el Harvester 96 (TOMTEC, Hamden, CT) y la radioactividad de 3H se determina en un Trilux 1540 MicroBeta Liquid Scintillation y Luminescence Counter (Wallac, Turku, Finlandia) .

EJEMPLO 5: Tratamiento in vivo de adenocarcinoma de seno humano El efecto antitumoral in vivo de los butanos catecólicos se determina contra células MX-1 (adenocarcinoma de seno humano) .

Se utilizan ratones BALB/c atínicos machos o hembras, de seis a ocho semanas de edad y pesos de 20 a 35 gramos. Las células MX-1 se cultivan en el medio estándar RPMI-1640 y se implantan subcutáneamente en el flanco del ratón desnudo con el fin de propagar la línea tumoral . Los ratones desnudos son implantados con 25 mg de fragmentos sólidos del tumor MX-1. Se utilizan tumores que alcancen el rango de 25 - 100 mm2 para el experimento. El compuesto de prueba (0.1 mL) se inyecta directamente en el tumor.

Los tumores se miden periódicamente para determinar su peso calculado utilizando la mitad del producto de longitud (L) por la anchura (W) por la altura del tumor (H) . el procedimiento se repite a intervalos regulares hasta 60 días después del tratamiento inicial o cuando todos los ratones hayan muerto. Los ratones que no muestren evidencia de tumores se mantienen durante 60 días para evaluar el potencial de recurrencia del tumor tiempo en el cual las características del tumor, si lo hay, son registradas.

EJEMPLO 6 : Terapia anticáncer de tumores cancerosos de seno humano preformados Los efectos de los butanos catecólicos descritos aquí pueden establecerse con respecto a su efecto anticáncer sobre tumores cancerosos en seno humano preformados en piel humana injertada en ratones SCID.

Para resumir, se trasplantan células MCF-7 (8xl06 células en 0.1 mi de PBS) intradérmicamente en piel humana de espesor completo, injertada en ratones SCID donde los injertos no muestran signos de inflamación, contracción o rechazo. Los ratones de dejan sin tratamiento hasta que aparezcan tumores palpables distinguibles (3 a 6 mm de diámetro en la mayoría de los casos) . Los ratones con tumores distinguibles se dividen en grupos para los estudios terapéuticos. Se administra a lo9s animales de control PBS intravenoso (i.v.) a través de la vena de la cola. Los grupos de animales de prueba (4 ratones por grupo) reciben la administración de 5 mg/kg, 10 mg/kg, 25 mg/kg o 50 mg/kg de butano catecólico por vía intravenosa (i,v,) a través de la vena de la cola. La administración es como sigue: una vez por semana; dos veces por semana; tres veces al día durante tres semanas con una semana de hiato; dos veces al día durante tres semanas con una semana de hiato; o una vez al día durante tres semanas con una semana de hiato.

Pueden añadirse grupos adicionales de ratones a las pruebas para la terapia de combinación de butanos catecólicos con un inhibidor de EGFR, un inhibidor de IGF-1R o ambos.

Durante el tratamiento, los ratones se monitorean diariamente en cuanto a tamaño de tumor y morbilidad. Los ratones se pesan dos veces a la semana utilizando una balanza electrónica (OHAUS™ modelo GT210) . El tamaño del tumor se mide tres veces a la semana utilizando un calibre electrónico (calibre PRO-MAX de 6 pulgadas; Fowler Co. , Newton, Mass.) conectado a un ordenador utilizando el software OptoDemo™ (Fowler Co.). los diámetros medidos del tumor se convierten en volumen de tumor utilizando la siguiente fórmula: V = longitud X anchura X altura X pi/6. El análisis estadístico de los datos para la comparación de los diferentes grupos de ratones se lleva a cabo utilizando la prueba de Student.

EJEMPLO 7 : Modelo de ratón SCID para cáncer ovárico Para determinar la capacidad de los butanos catecólicos para tratar el cáncer ovárico, puede utilizarse una línea celular de cáncer ovárico en ratones SCID.

En resumen, las células de cáncer ovárico se implantan en ratones SCID para generar tumores ováricos . Se tratan los grupos de ratones que portan tumores establecidos por administración i.v. de dosis en escalamiento (empezando en 5 mg/kg de peso corporal) de butano catecólico. Los animales de control se tratan con PBS estéril. Pueden agregarse grupos adicionales de ratones a la prueba para terapia de combinación de los butanos catecólicos con un inhibidor de EGFR, con un inhibidor de IGF-IR, o ambos.

Los ratones se monitorean y se mide el crecimiento tumoral a través del sacrificio de los animales en una base semanal. Los tumores se miden como se describió más arriba.

EJEMPLO 8: Modelo de ratón SCID para cáncer de riñon Para determinar la capacidad de los búlanos catecólicos para tratar el cáncer de riñon, se utiliza una línea celular de cáncer de riñón en ratones SCID.

En resumen, las células de cáncer de riñón se implantan en ratones SCID para generar tumores de riñón. Se tratan los grupos de ratones que portan tumores establecidos mediante administración i.v. de dosis en escalamiento (comenzando a 5 m9/kg de peso corporal) de butano catecólico. Los animales de control se tratan con PBS estéril. Pueden agregarse grupos adicionales de ratones a la prueba para terapia de combinación de los butanos catecólicos con un inhibidor de EGFR, con un inhibidor de IGF-1R, o ambos.

Los ratones se monitorean y se mide el crecimiento tumoral a través del sacrificio de los animales en una base semanal. Los tumores se miden como se describió más arriba.

EJEMPLO 9: Modelo de ratones SCID para mielorna Para determinar la capacidad de los butanos catecólicos para tratar el mieloma, se utiliza una línea celular de mieloma en ratones SCID.

En resumen, las células de cáncer de mieloma se implantan en ratones SCID para generar tumores de mieloma. Se tratan los grupos de ratones que portan tumores establecidos mediante administración i.v. de dosis en escalamiento (comenzando a 5 mg/kg de peso corporal) de butano catecólico. Los animales de control se tratan con PBS estéril . Pueden agregarse grupos adicionales de ratones a la prueba para terapia de combinación de los butanos catecólicos con un inhibidor de EGFR, con un inhibidor de IGF- IR, o ambos.

Los ratones se monitorean y se mide el crecimiento tumoral a través del sacrificio de los animales en una base semanal. Los tumores se miden como se describió más arriba.

EJEMPLO 10: Toxicología en monos Cynomolgus Se utilizan monos Cynomolgus en un estudio para establecer la toxicología de NDGA.

En resumen, los monos se dosifican semanalmente durante tres semanas con 5.0 mg/kg, 10.0 mg/kg, 25.0 mg/kg, 50 mg/kg o 100 mg/kg de NDGA.

Los animales placebos se dosifican con la misma programación con una solución apropiada en ausencia de NDGA. Las dosis se administran en bolos intravenosos durante 30 a 60 minutos y al menos se dosifican 6 animales en cada nivel de dosis. Se establece la toxicología a través de una o más de las siguientes indicaciones: mediciones del peso corporal, mediciones de la fisiología clínica básica, química de suero en serie, evaluaciones hematológicas y evaluaciones histopatológicas .

EJEMPLO 11: Prueba clínica en humanos de la seguridad y eficacia de un butano catecólico Objetivo: Establecer la seguridad y la farmacocinética de un butano catecólico administrado (por ejemplo, NDGA) .

Diseño del estudio: Este será un estudio de fase I, de centro sencillo, de etiqueta abierta, aleatorio con escalación de dosis seguido por un estudio en fase II en pacientes con cáncer con una enfermedad que pueden ser sometidos a biopsia. Los pacientes no deberían haber tenido exposición al butano catecólico (por ejemplo NDGA) antes del inicio del estudio. Los pacientes no deben haber recibido tratamiento para su cáncer durante dos semanas antes del inicio del ensayo. Los tratamientos incluyen el uso de quimioterapia, factores de crecimiento hematopoyéticos , y terapia biológica tal como anticuerpos monoclonales . La excepción es el uso de hidroxiurea para pacientes con un conteo de glóbulos blancos (WBC) de >30 % x 103/pL. Esta duración de tiempo parece adecuada para la eliminación debida a la naturaleza de acción relativamente corta de la mayoría de los agentes antileucemia. Los pacientes deben haberse recuperado de todas las toxicidades (hasta grado 0 o 1) asociadas con el tratamiento previo. Todos los sujetos son evaluados en cuanto a la seguridad y todas las recolecciones de sangre para análisis farmacocinético hacen según la programación. Todos los estudios se llevan a cabo con la aprobación del comité ético institucional y el consentimiento de los pacientes.

Fase I: Los pacientes reciben butano catecólico (por ejemplo NDGA) de acuerdo con un régimen de dosificación predeterminado. Cohortes de 3 - 6 pacientes reciben dosis en escalamiento de NDGA hasta que se determina la dosis máxima tolerada (MTD) para la combinación de NDGA. Los rangos de dosificación se determinan inicialmente a través de los rangos de dosificación individual establecidos para NDGA. La MTD se define como la dosis precedente a la cual 2 de 3 o 2 de 6 pacientes experimentan toxicidad limitante de la dosis. Las toxicidades que limitan la dosis se determinan de acuerdo con las definiciones y estándares establecidos por el National Cáncer Institute (NCI) Common Términology for Adverse Events (CTCAE) versión 3.0 (agosto 9, 2006).

El NDGA puede administrase en diferentes programaciones de dosificación y administración.

Se administra un butano catecólico (por ejemplo, NDGA) en una cantidad para proporcionar un área media bajo la curva de concentración en plasma sanguíneo de aproximadamente 25 hasta aproximadamente 700 ng.h/mL. También puede administrarse un butano catecólico (por ejemplo, NDGA para proveer una concentración en plasma máxima' media de entra aproximadamente 1 y aproximadamente 50 ng/mL. Los rangos de dosis de prueba se determinan inicialmente a través de los rangos de dosis individuales establecidos para un paciente.

Para el tratamiento de cáncer de próstata los pacientes reciben administración oral de NDGA dos veces al día en los días 1 - 28; el tratamiento se repite cada 28 días en ausencia de progresión de la enfermedad o toxicidad inaceptable. Alternativamente, los pacientes pueden recibir la administración oral de 2000 mg de NDGA una vez al día. Alternativamente, los pacientes reciben la administración de NDGA IV en los días 1 -5. El tratamiento se repite cada 28 días en ausencia de progresión de la enfermedad o toxicidad inaceptable .

Para tratamientos de tumores sólidos de origen epitelial, los pacientas reciben administración de NDGA por vía intravenosa semanalmente durante 24 horas. La dosis comienza con 100 mg/hora (2400 mg en un periodo de 24 horas) con escalamiento en 5 cohortes desde 3 a 6 pacientes con incrementos de 25 mg por hora hasta máximo de 200 mg/hora (4800 mg en un periodo de 24 horas) o hasta que se defina el MTD.

Para el tratamiento de tumores sólidos refractarios (tumores malignos de cabeza y cuello) , los pacientes reciben administración de NDGA por vía intravenosa una vez por semana, inicialmente durante tres semanas. Las dosis se escalaran sobre la programación de partida hasta un objetivo de 20 mg/cm3 de volumen tumoral . El escalamiento de dosis continuara, asumiendo la tolerancia, de tal forma que las cohortes serán tratadas durante 6 semanas, y finalmente, durante 8 semanas. Alternativamente, los pacientes pueden recibir la administración de NDGA por vía intravenosa durante cinco días consecutivos cada 28 días a pacientes con tumores sólidos refractarios a los inhibidores de EGFR o inhibidores de IGF-IR.

Para el tratamiento de gliomas recurrentes de alto grado, los pacientes reciben la administración intravenosa de NDGA. Las cohortes de 3 - 6 pacientes reciben dosis en escalamiento de NDGA hasta que se determina la MTD. La MTD es la dosis precedentes a la cual 2 o 3 de 6 pacientes que experimentan toxicidad limitante de la dosis.

Para el tratamiento de leucemia, los pacientes reciben la administración de NDGA por vía intravenosa durante 6 horas por semana durante dos semanas seguidas por una semana de descanso. Los eventos adversos y la toxicidad se establecen antes de cada ciclo de tratamiento y en tiempo que se indican clínicamente. Las dosis máximas toleradas (MTD) y la dosis limitante de la toxicidad (DLT) se determinan en este momento. Las dosis serán escaladas desde 1000, hasta 1500 y 2200 mg o desescaladas desde 500 mg si 1000 mg excede la MTD.

Fase II: Los pacientes reciben el NDGA como en la fase I en la MTD determinada en la fase I. el tratamiento se administra como se describe arriba en la fase I en ausencia de progresión de la enfermedad o toxicidad inaceptable. Después de la terminación de uno o más transcursos de la terapia en estudio, los pacientes que alcancen una respuesta completa o parcial pueden recibir uno o más transcursos adicionales de tratamiento. Los pacientes que mantienen la enfermedad estable por más de 2 meses después de la terminación de la terapia de estudio pueden recibir uno o más transcursos adicionales de tratamiento en el momento de progresión de la enfermedad, bajo la suposición de que satisfacen los criterios de elegibilidad originales.

Muestra de sangre. La sangre en serie es extraída por punción directa de la vena antes y después de la administración del butano catecólico. Las muestras de sangre venosa (5 mL) para la determinación de las concentraciones en el suero se obtienen aproximadamente a 10 minutos antes de la dosificación y a aproximadamente de los siguientes tiempos después de la dosificación: días 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 14. Las muestras también pueden tomarse en puntos del tiempo posteriores. Cada muestra de suero se divide en dos alícuotas. Todas las muestras de suero se almacenan a -20°C. las muestras de suero se empacan sobre hielo seco.

Farmacocinética : Los pacientes sufren recolección de muestras de plasma/suero para evaluación farmacocinética antes de comenzar el tratamiento en los días 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 14. Las muestras también pueden tomarse en puntos del tiempo posteriores . Los parámetros farmacocinéticos se calculan por métodos independientes de modelación en un ordenador Digital Equipment Corporation VAX 8600 utilizando la última versión del software BIOAVL. Se determinan los siguientes parámetros farmacocinéticos : pico de concentración de suero (Craax) ; tiempo para el pico de concentración en suero (tmax) ; área bajo la curva concentración-tiempo (AUC) desde tiempo cero hasta tiempo del último muestreo de sangre (AUC0-72) calculado con el uso de la regla trapezoidal lineal; y eliminación terminal de vida media (ti/2) , calculado a partir de la constante de rata de eliminación. La constante de rata de eliminación se estima por regresión lineal de puntos de datos consecutivos en la región lineal terminal de la gráfica logarítmica- lineal concentración-tiempo. La desviación estándar media (SD) , y el coeficiente de variación (CV) de los parámetros farmacocinéticos se calculan para cada tratamiento. Se calcula la relación de los promedios de los parámetros (formulación preservada/formulación no preservada) .

Respuesta del paciente a la terapia: La respuesta del paciente se establece a través de imágenes con rayos X, barridos CT y/o MRI, y las imágenes se llevan a cabo antes de comenzar el estudio y al final del primer ciclo, llevando a cabo imágenes adicionales cada cuatro semanas o en el final de los ciclos subsecuentes . Las realizaciones de imágenes se escogen con base en el tipo de cáncer y en la factibilidad/disponibilidad, y se utiliza la misma realización de imagen para tipos de cáncer similares así como a través del transcurso del estudio de cada paciente. Las ratas de respuesta se determinan utilizando los criterios RECIST. (Therasse et al., J. Nati. Cáncer Inst. 2000 Feb 2 ; 92 (3) : 205 - 16; y el sitio en la red: ctep.cancer.gov/forms/TherasseRECISTJNCI.pdf). Los pacientes también sufren biopsias de cáncer/tumor para establecer los cambios en el fenotipo de las células cáncer progenitoras y el crecimiento clonogénico por citometría de flujo, Western blotting, e IHC, y para cambios en citogenética por FISH. Después de terminar el tratamiento de estudio, los pacientes son seguidos periódicamente durante 4 semanas . Se establece el significado estadístico de los resultados de la prueba.

EJEMPLO 12: Prueba clínica para mielorna Este ejemplo describe un estudio en fase II aleatorio, ciego, controlado por placebo, multicentro diseñado para proveer un establecimiento preliminar de la seguridad y eficacia del NDGA en pacientes con mieloma. Aproximadamente se involucran de 100 - hasta aproximadamente 800 pacientes asignándose aproximadamente 50 - aproximadamente 400 pacientes a un grupo de tratamiento y aproximadamente 50-aproximadamente 400 pacientes a un grupo de placebo. La prueba consistirá en la administración de intravenosa o administración oral de NDGA como se describió anteriormente en el ejemplo 11. El marco de tiempo del estudio se estima en aproximadamente 6 meses, a aproximadamente 5 años, con terapia continuada para los que responden según se indica al final del estudio inicial. Las medidas adicionales de inicio son como sigue: Medida primaria de inicio: Rata de respuesta global. Una meta del estudio es demostrar un incremento en la rata de respuesta global de aproximadamente 40% con placebo hasta aproximadamente 60% (o más) con NDGA.

Las medidas de resultados secundario que pueden establecerse incluyen la duración de la respuesta, tiempo para la progresión del tumor, supervivencia global, efectos adversos serios y no serios. Por ejemplo, un tratamiento puede prevenir la progresión de la enfermedad (esto es, la estasis) o puede dar como resultado una mejora. Alternativamente, o además, pueden medirse otros objetivos con respecto a uno o más de los siguientes : carga tumoral disminuida, neovascularización disminuida, efectos laterales reducidos, reacciones adversas reducidas y/ cumplimiento incrementado del paciente.

EJEMPLO 13: Prueba clínica de cáncer de riñon Este ejemplo describe un estudio de fase II, aleatorio, ciego, controlado por placebo, multicentro diseñado para proveer un establecimiento preliminar de la seguridad . y eficacia del NDGA con cáncer de células renales (cáncer de riñon) . Se involucra aproximadamente alrededor de 100 alrededor de 800 pacientes, con aproximadamente 50 -aproximadamente 400 pacientes asignados a un grupo de tratamiento y aproximadamente 50 - aproximadamente 400 pacientes asignados a un grupo placebo. La prueba consistirá de la administración intravenosa o administración oral de NDGA tal como se describió arriba en el ejemplo 11. El marco de tiempo del estudio se estima aproximadamente 6 meses, aproximadamente 5 años, con terapia continuada para los que responden según se indica al final del estudio inicial. Las medidas de inicio adicionales son como siguen: Medida de inicio primario: Supervivencia libre de progresión. Una meta del estudio es demostrar un incremento en la supervivencia libre de progresión desde aproximadamente 9 - 13 meses en el grupo de placebo hasta aproximadamente 14 - 18 meses (o más) en el grupo con NDGA.

Las medición de resultados secundarios que pueden establecerse incluyen la duración de la respuesta, tiempo para la progresión del tumor, supervivencia general, efectos adversos serios y no serios. Por ejemplo, un tratamiento puede prevenir la progresión de la enfermedad (esto es, estasis) o puede dar como resultado un mejoramiento. Alternativamente, o además, pueden medirse otros objetivos con respecto a uno o más de los siguientes : carga tumoral disminuida, neovascularización disminuida, efectos laterales reducidos, reacciones adversas disminuidas y/o cumplimiento del paciente incrementado.

EJEMPLO 14: Prueba clínica para cáncer hepatocelular Este ejemplo describe un estudio de fase II, aleatorio, ciego, controlado por placebo, multicentro diseñado para proveer un establecimiento preliminar de la seguridad y eficacia del NDGA con cáncer de células renales (cáncer de riñon) . Se involucran aproximadamente alrededor de 100 alrededor de 800 pacientes, con aproximadamente 50 aproximadamente 400 pacientes asignados a un grupo de tratamiento y aproximadamente 50 - aproximadamente 400 pacientes asignados a un grupo placebo. La prueba consistirá en la administración intravenosa o administración oral de NDGA tal como se describió arriba en el ejemplo 11. El marco de tiempo del estudio se estima aproximadamente 6 meses aproximadamente 5 años, con terapia continuada para los que responden según se indica al final del estudio inicial. Las medidas de resultados adicionales son como siguen: Medida de resultados primario: Supervivencia libre de progresión. Una meta del estudio es demostrar un incremento en la supervivencia libre de progresión desde aproximadamente 3 - 9 meses en el grupo de placebo hasta aproximadamente 6 -12 meses (o más) en el grupo con NDGA.

Las medición de resultados secundarios que pueden establecerse incluyen la duración de la respuesta, tiempo para la progresión del tumor, supervivencia general, efectos adversos serios y no serios. Por ejemplo, un tratamiento puede prevenir la progresión de la enfermedad (esto es, estasis) o puede dar como resultado un mejoramiento. Alternativamente, o además, pueden medirse otros objetivos con respecto a uno o más de los siguientes: carga tumoral disminuida, neovascularización disminuida, efectos laterales reducidos, reacciones adversas disminuidas y/o cumplimiento del paciente incrementado.

EJEMPLO 15: Prueba clínica para cáncer ovárico Este ejemplo describe un estudio de fase II, aleatorio, ciego, controlado por placebo, multicentro diseñado para proveer un establecimiento preliminar de la seguridad y eficaci del NDGA con cáncer ovárico. Se involucra aproximadamente alrededor de 100 - alrededor de 800 pacientes, con aproximadamente 50 - aproximadamente 400 pacientes asignados a un grupo de tratamiento y aproximadamente 50 - aproximadamente 400 pacientes asignados a un grupo placebo. La prueba consistirá de la administración intravenosa o administración oral de NDGA tal como se describió arriba en el ejemplo 11. El marco de tiempo del estudio se estima aproximadamente 6 meses, aproximadamente 5 años, con terapia continuada para los que responden según se indica al final del estudio inicial. Las medidas de inicio adicionales son como siguen: Medida de resultado primario: Supervivencia libre de progresión. Una meta del estudio es demostrar un incremento en la supervivencia libre de progresión desde aproximadamente 3 - 6 meses en el grupo de placebo hasta aproximadamente 4 -12 meses (o más) en el grupo con NDGA.

Las medidas de resultados secundarios que pueden establecerse incluyen la duración de la respuesta, tiempo para la progresión del tumor, supervivencia general, eventos adversos serios y no serios. Por ejemplo, un tratamiento puede prevenir la progresión de la enfermedad (esto es, estasis) o puede dar como resultado un me oramiento. Alternativamente, o además, pueden medirse otros objetivos con respecto a uno o más de los siguientes : carga tumoral disminuida, neovascularización disminuida, efectos laterales reducidos, reacciones adversas disminuidas y/o cumplimiento del paciente incrementado.

EJEMPLO 16: prueba clínica para terapia de combinación para cáncer ovárico Este ejemplo describe un estudio de fase II, aleatorio, ciego, controlado por placebo, multicentro diseñado para proveer un establecimiento preliminar de la seguridad y eficacia de combinar NDGA con topotecan en pacientes con cáncer ovárico. Aproximadamente alrededor de 100 - alrededor de 800 pacientes están involucrados, con aproximadamente 50 - aproximadamente 400 pacientes asignados a un grupo de tratamiento y aproximadamente 50 - aproximadamente 400 pacientes asignados a un grupo de placebo. La prueba consistirá de la administración de dosis intravenosa repetitiva de NDGA tal como se describió arriba en el ejemplo 11 en combinación con topotecan a aproximadamente 1.5 mg/m2 por infusión intravenosa en los días 1 - 5 de un transcurso de 21 días, con transcursos repetitivos a través del estudio. Los pacientes de control reciben la administración de topotecan con placebo. El marco de tiempo del estudio se estima en aproximadamente 6 meses -aproximadamente 5 años, con terapia continuada para los que responden según se indica al final del estudio inicial. Las medidas de inicio adicionales son como siguen: Medida de resultado primario: Supervivencia libre de progresión. Una meta del estudio es demostrar un incremento en la supervivencia libre de progresión desde aproximadamente 3 - 6 meses en el grupo de placebo hasta aproximadamente 6 - 12 meses (o más) en el grupo de topotecan más NDGA.

Las medidas de resultados secundarios que pueden establecerse incluyen la duración de la respuesta, tiempo para la progresión del tumor, supervivencia general, eventos adversos serios y no serios. Por ejemplo, un tratamiento puede prevenir la progresión de la enfermedad (esto es, estasis) o puede dar como resultado un mejoramiento. Alternativamente, o además, pueden medirse otros objetivos con respecto a uno o más de los siguientes : carga tumoral disminuida, neovascularización disminuida, efectos laterales reducidos, reacciones adversas disminuidas y/o cumplimiento del paciente incrementado.

EJEMPLO 17: Inhibición in vitro de objetivos múltiples anticáncer por DGA (TT-100) La inhibición de la actividad de la lipoxigenasa se detérmino mediante el uso de un kit de prueba de selección del inhibidor de la lipoxigenasa (Cayman Chemicals, Ann Arbor, MI) . Se incubo 15-LOX purificada (soja) con concentraciones variables de TT-100 antes de la adición de los sustratos de ácido araquidonico o linoleico. La actividad de LOX se detérmino mediante la cantidad de hidroperóxidos producidos, según se cuantificaron por lectura colorimétrica . La inhibición de la actividad de RTKfue determinada por ELISA como sigue. Se incubo TT-100 con proteínas recombinantes que representan el dominio de quinasa de IGF- IR o EGFR (Cell Signaling Technology, Danvers, MA) durante 5 minutos antes de la adición de ATP (10 µ?) y sustrato de péptidos conjugados con biotina (secuencia IRS-1 o PTP1B, respectivamente) (0.2 µ?) para una reacción de 45 minutos. La reacción fue detenida con EDTA 50 mM, y se capturo el sustrato conjugado con biotina en una placa de 96 pozos recubierta con estreptavidina . La fosforilación con tirosina del sustrato capturado fue determinada por incubación con el anticuerpo antifosfotirosina conjugado a HRP (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) y lectura colorimétrica sobre un lector de placas de 96 pozos.

El NDGA (TT-100) inhibe directamente la actividad de tirosina quinasa de IGF-1R y EGFR purificadas, y una afinidad que sus acciones contra la lipoxigenasa purificada (LOX) .

EJEMPLO 18: Inhibición in vitro de células NSCLC resistentes a Iressa mediante NDGA (TT-100) Se incubaron células NSCLC H1975 que expresaban la mutación EGFR T790M en presencia de Iressa 10 µ? o 10 µ? TT-100 durante 3 días. El contenido celular fue medido y mostrado como el crecimiento porcentual de las células de control incubadas en la ausencia de Iressa y TT-100. Como se muestra en la Figura 2, el TT-100 inhibió la proliferación de células NSCLC resistentes a Iressa que expresaban la mutación EGFR T790M. La proliferación de las células H1975 NSCLC fue reducida en aproximadamente 50% en presencia de TT-100.

Las células H1299 NSCLC fueron incubadas en ausencia o presencia de Iressa 1 µ? con o sin TT-100 10 µ? o 20 µ? durante 3 días . El contenido celular fue medido y presentado como el crecimiento porcentual de las células de control incubadas en ausencia de Iressa y TT-100. Como se muestra en la Figura 3, las células H1299 NSCLC fueron resistentes a las concentraciones clínicamente administrables de Iressa. El TT-100 solo inhibió la proliferación de las células H1299 NSCLC, especialmente cuando se utilizo a 20 µ?. Adicionalmente, el TT-100 y su sinergia con las concentraciones clínicas de Iressa en estas células NSCLC resistentes al fármaco puesto que la proliferación celular fue reducida adicionalmente en presencia de tanto Iressa como TT-100.

Las células H1975 resistentes a Iressa o H1299 NSCLC también fueron cultivadas en agar suave en ausencia o presencia de TT-100 5 µ? o 30 µ? durante 8 días, la conformación de colonias se estableció y se comparo con el crecimiento de células de control en ausencia de TT-100. Como se muestra en la figura 4, el TT-100 inhibe la formación de colonias de células H1975 resistentes a Iressa y H1299 NSCLC. La proliferación celular fue reducida más significativamente cuando se utilizo TT-100 en una dosis más alta.

En conclusión, estos experimentos demuestran la inhibición de las células NSCLC resistentes a Iressa por parte del TT-100.

EJEMPLO 19: La terapia in vivo con TT-100 inhibe el crecimiento de activación de IGF- IR y HER2 en tumores de seno Se utilizó un modelo de cáncer de seno singeneico MCNeuA para establecer el efecto del TT-100 in vivo. Se implantaron células MCNeuA en ratones transgénicos MMTVneu para inducir crecimiento tumoral.' Se administro TT-100 a 100 mg/kg por deglución (oral) o 37.5 mg/kg i.p., tres veces a la semana. Se monitoreo el crecimiento del tumor y se midió el tamaño del tumor en diversos puntos del tiempo. El tumor fue escindido el día 28, 2 horas después del tratamiento final con TT-100. Se midió la fosforilación de IGF- IR y HER2 por ELISA.

La figura 5 muestra que la terapia con TT-100, tanto vía oral como por administración i.p., inhibió el crecimiento de los tumores de seno HER2 subcutáneos in vivo. La figura 6 muestra la fosforilación del receptor de IGF- IR y HER2 en comparación con el control tratado con el vehículo. La terapia con TT-100 inhibió significativamente la fosforilación de HER2 e IGF-1R y por lo tanto la activación de HER2 e IGF-IR en tumores de seno in vivo..

Estos experimentos demuestran la eficacia in vivo del TT-100 en la inhibición del crecimiento y activación de IGF-1R y HER2 en tumores de seno.

Los aspectos de está solicitud pueden incorporarse en otras formas o llevarse a cabo de otras maneras sin apartarse del espíritu o características esenciales de la misma. La presente divulgación por lo tanto se considera en todo sus aspectos ilustrada y no restrictiva, y todos los cambios que vengan dentro del significado y rango de equivalencia se entiende que están abarcados dentro de la misma.

Claims (40)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES

1. Un método para tratar una enfermedad en un sujeto, en donde el sujeto ha desarrollado resistencia al tratamiento con uno o más inhibidores de tirosina quinasa, caracterizado porque comprende la administración de una cantidad efectiva de un compuesto farmacéutico capaz de inhibir la actividad de tirosina quinasa tanto de IGF-IR como de EGFR.

2. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque el sujeto ha desarrollado resistencia a uno o más de un inhibidor de EGF-R o un inhibidor de IGF-IR.

3. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque la enfermedad es un cáncer maligno, premaligno o benigno .

4. El método de la reivindicación 3, caracterizado porque el cáncer se selecciona del grupo consistente de tumor cerebral, carcinoma, basalioma, carcinoma celular basal, teratoma, retinoblastoma, neuroblas oma, melanoma, coroidea melanoma, Dermatofibrosarcoma protuberans, carcinoma celular de Merkel o sarcoma de Kaposi, seminoma, sarcoma, plasmocitoma, tumor de cabeza y cuello, tumor de hígado, tumor de riñon, tumor de células renales, carcinoma de células escamosas, tumor uterino, tumor endometrial, tumor óseo, tumor de próstata, tumor de seno, tumor de vejiga, tumor pancreático, tumor del endometrio, carcinoma celular escamoso, tumor del estomago, gliomas, glioblastoma multiforme, tumor colorrectal, tumor testicular, tumor de colon, tumor de recto, tumor ovárico, tumor cervical, tumor de ojo, tumor del sistema nervioso central, tumor de tiroides, tumor de pulmones, leucemia o linfoma, mieloma múltiple, tumor de piel, un tumor ginecológico, enfermedad de Hodgkin, cáncer del intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, mesotelioma, cáncer de la uretra, cáncer del pene, tumores relacionados con el síndrome de Gorlin, y tumores de origen desconocido; y metástasis de los mismos.

5. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque el compuesto farmacéutico comprende un butano catecólico de formula I, sales farmacéuticamente aceptables del mismo, solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo, metabolitos del mismo, tautómeros del mismo o profármacos del mismo: en donde Rl y R2 son independientemente H, alquilo inferior, o acilo inferior; R3, R4, R5, R6, RIO, Rll, R12 y R13 son independientemente H o alquilo inferior; y R7, R8 y R9 son independientemente H, hidroxi, alcoxi inferior o aciloxi inferior.

6. El método de la reivindicación 5, caracterizado porque el butano catecólico se selecciona del grupo consistente de 1, 4-bis (3 , 4 -dihidroxfenil) -2 , 3 -dimetilbutano; 1, 4 -bis (3 , 4-dihidroxifenil) butano; l,4-bis(3,4-dimetoxifenil) -2, 3 -dimetilbutano; 1, 4-bis (3 , 4-dietoxifenil) -2 , 3 -dimetilbutano ; 1,4 -bis (3,4 -dipropoxifenil ) -2,3-dimetilbutano ; 1- ( 3 , 4 -dihidroxifenil) -4 - (3,4,5-trihidroxifenil ) butano; 1, 4-bis (3 , 4 -diacetoxifenil ) -2 , 3-dimetilbutano; 1 , 4-bis (3 , 4 -dipropioniloxifenil) -2,3-dimetilbutano; 1, 4-bis (3 , 4 -dibutiroiloxifenil) -2 , 3-dimetilbutano; 1 , -bis (3 , 4-divaleroiloxifenil) -2,3-dimetilbutano; 1, 4-bis (3 , 4 -dipivaloiloxifenil ) -2,3-dimetilbutano; 1 , 4 -bis (3 , -dineopentilcarboxilfenil ) -2,3-dimetilbutano; 1- (3 , 4 -dihidroxifenil) -4-fenilbutano; l-(3,4-dihidroxifenil) -4- (2 , 5 -dihidroxifenil ) butano, ácido nordihydroguayarético (NDGA) , tetra-O-metil NDGA; tetraglicinil NDGA; tetra-dimetilglicinil NDGA o una sal del mismo; o tri-O-metil NDGA; tetrapivalato del ácido nordihidroguayarético,-' tetrapropionato del ácido nordihidroguayarético y todas las configuraciones ópticas de los mismos .

7. El método de la reivindicación 5, caracterizado porque el butano catecólico es ácido nordihidroguayarético.

8. Un método para tratar cáncer en un sujeto, caracterizado porque dicho sujeto ha desarrollado resistencia al tratamiento con uno o mas inhibidores de tirosina quinasa, que comprende la administración de una cantidad efectiva de una composición farmacéutica capaz de inhibir la actividad de tirosina quinasa tanto de IGF-1R como de EGFR, donde la composición farmacéutica comprende un butano catecólico.

9. El método de la reivindicación 8, caracterizado porque el sujeto ha desarrollado resistencia a uno o más inhibidores de EGF-R o inhibidores de IGF- IR.

10. El método de la reivindicación 8, caracterizado porque el cáncer es seleccionado del grupo consistente de un tumor sólido, linfoma, leucemia, cáncer de base epitelial, tumor cerebral, carcinoma, basalioma, carcinoma celular basal,. teratoma, retinoblastoma, neuroblastoma, melanoma, coroidea melanoma, Dermatofibrosarcoma protuberans, carcinoma celular de Merkel o sarcoma de Kaposi, seminoma, sarcoma, plasmocitoma, tumor de cabeza y cuello, tumor de hígado, tumor de riñon, tumor de células renales, carcinoma de células escamosas, tumor uterino, tumor endometrial, tumor óseo, tumor de próstata, tumor de seno, tumor de vejiga, tumor pancreático, tumor del endometrio, carcinoma celular escamoso, tumor del estomago, gliomas, glioblastoma multiforme, tumor colorrectal, tumor testicular, tumor de colon, tumor de recto, tumor ovárico, tumor cervical, tumor de ojo, tumor del sistema nervioso central, tumor de tiroides, tumor de pulmones, leucemia o linfoma, mieloma múltiple, tumor de piel, un tumor ginecológico, enfermedad de Hodgkin, cáncer del intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, mesotelioma, cáncer de la uretra, cáncer del pene, tumores relacionados con el síndrome de Gorlin, y tumores de origen desconocido; y metástasis de los mismos.

11. El método de la reivindicación 8, caracterizado porque la composición farmacéutica comprende un butano catecólico de la formula I, sales farmacéuticamente aceptables del mismo, solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo, metabolitos del mismo, tautómeros del mismo o profármacos del mismo: R2O R7 en donde Rl y R2 son independientemente inferior, o acilo inferior; R3, R4, R5, R6, RlO, Rll, R12 y R13 son independientemente H o alquilo inferior; y R7, R8 y R9 son independientemente H, hidroxi, alcoxi inferior o aciloxi inferior

12. El método de la reivindicación 8, caracterizado porque la composición farmacéutica comprende un butano catecólico de formula II, sales farmacéuticamente aceptables del mismo, solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo, metabolitos del mismo, tautómeros del mismo o profármacos del mismo : R2O R? en donde R5, RlO, R6 , y R13 son independientemente licuando R3 es H, Rll es alquilo inferior; o cuando R3 es alquilo inferior, Rll es licuando R4 es H, R12 es alquilo inferior; o cuando R4 es alquilo inferior, R12 es H; dos de R7, R8 , y R9 son hidroxi, el otro es H, y uno de los grupos hidroxi está en la posición 3 y el otro grupo hidroxi está en la posición 4 con respecto al susituyente aquileno .

13. El método de la reivindicación 8, caracterizado porque el butano catecólico es seleccionado del grupo consistente de 1 , 4 -bis (3 , 4-dihidroxfenil) -2 , 3 -dimetilbutano ; 1, 4 -bis (3 , 4-dihidroxifenil) butano; l,4-bis(3,4-dimetoxifenil) -2, 3 -dimetilbutano; 1, 4-bis (3 , 4-dietoxifenil) -2, 3 -dimetilbutano; 1, 4-bis (3 , 4-dipropoxifenil) -2 , 3-dimetilbutano; 1- (3 , 4-dihidroxifenil) -4- (3,4,5-trihidroxifenil) butano; 1, 4-bis (3 , 4 -diacetoxifenil ) -2 , 3-dimetilbutano; 1 , 4 -bis (3 , 4 -dipropioniloxifenil) -2,3-dimetilbutano ; 1, 4-bis (3 , 4 -dibutiroiloxifenil) -2,3-dimetilbutano; 1, 4-bis (3 , 4 -divaleroiloxifenil) -2 , 3-dimetilbut no ; 1 , 4 -bis ( 3 , 4 -dipivaloiloxifenil) -2,3-dimetilbutano; 1, 4-bis (3 , 4 -dineopentilcarboxilfenil ) -2,3-dimetilbutano ; 1- (3 , 4 -dihidroxifenil ) -4 - fenilbutano; l-(3,4-dihidroxifenil) -4- (2 , 5-dihidroxifenil) butano, ácido nordihidroguayarético (NDGA) , tetra-O-metil NDGA; tetraglicinil NDGA; tetra-dimetilglicinil NDGA o una sal del mismo; o tri-O-metil NDGA; tetrapivalato del ácido nordihidroguayarético; tertapropionato del ácido nordihidroguayarético y todas las configuraciones ópticas de los mismos .

14. El método de la reivindicación 8, caracterizado porque el butano catecólico es ácido nordihidroguayarético.

15. El método de la reivindicación 8, caracterizado porque el butano catecólico se administra en una cantidad seleccionada del grupo consistente de aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 375 mg/kg por dosis; aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 250 mg/kg por dosis; aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 200 mg/kg por dosis; aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 150 mg/kg por dosis; aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg por dosis; aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 75 mg/kg por dosis; y aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 50 mg/kg por dosis.

16. El método de la reivindicación 8, caracterizado porque el butano catecólico se administra en una cantidad seleccionada del grupo consistente desde aproximadamente 1500 mg por día hasta aproximadamente 2500 mg por día, desde aproximadamente 1800 mg por día hasta aproximadamente 2300 mg por día; y aproximadamente 2000 mg por día.

17. El método de la reivindicación 8, caracterizado porque comprende además administrar uno o más agentes anticáncer adicionales.

18. El método de la reivindicación 17, caracterizado porque dicho uno o más agentes anticáncer adicionales se seleccionan del grupo consistente de inhibidores de EGFR, inhibidores de IGF- IR, agentes de deterioro del ADN, inhibidores de topoisomerasa e inhibidores mitóticos.

19. El método de la reivindicación 8, caracterizado porque la composición farmacéutica se administra más frecuentemente que una vez cada 6 días durante un periodo de tiempo, o más frecuentemente que una vez cada 2 días durante un periodo de tiempo.

20. Un método para determinar un tratamiento de una enfermedad, caracterizado porque comprende: (i) analizar una muestra obtenida de un sujeto que comprende niveles de medición de IGF-IR y EGFR, y (ii) comparar los niveles de IGF- IR y EGFR en la muestra con los niveles en un control; en donde los niveles incrementados de IGF-IR, EGFR, o ambos en comparación con el control indican que el sujeto va a ser tratado con un inhibidor dual de tirosina quinasa.

21. El método de la reivindicación 20, caracterizado porque el nivel de expresión del EGFR está a niveles de línea base o mayor de los niveles de línea base y en donde el nivel de expresión de IGF- IR está en niveles de línea base o mayor que los niveles de línea base.

22. El método de la reivindicación 21, caracterizado porque el nivel de expresión de EGFR está en niveles de línea base y el nivel de expresión de IGF-IR es dos veces mayor que los niveles de línea base o más; el nivel de expresión de IGF- IR está en niveles de línea base y el nivel de expresión de EGFR es dos veces mayor que los niveles de línea base o más; o el nivel de expresión de IGF- IR es dos veces mayor que los niveles dé línea base o más y el nivel de expresión de EGFR es dos veces mayor que los niveles de línea base o más .

23. El método de la reivindicación 20, caracterizado porque el inhibidor dual de tirosina quinasa es un butano catecólico .

24. El método de la reivindicación 23, caracterizado porque el butano catecólico se selecciona del grupo consistente de 1, 4-bis (3 , 4 -dihidroxfenil) -2 , 3 -dimetilbutano ; 1 , 4 -bis ( 3 , 4-dihidroxifenil) butano; l,4-bis(3,4-dimetoxifenil) -2 , 3-dimetilbutano; 1, 4-bis (3 , 4-dietoxifenil) -2 , 3 -dimetilbutano; 1 , 4-bis (3,4 -dipropoxifenil ) -2,3-dimetilbutano; 1- (3,4 -dihidroxifenil) -4- (3,4,5-trihidroxifenil) butano; 1 , 4 -bis (3 , 4 -diacetoxifenil) -2 , 3 -dimetilbutano; 1 , 4-bis (3 , 4 -dipropioniloxifenil) -2,3-dimetilbutano; -1,4 -bis (3 , 4 -dibutiroiloxifenil) -2,3-dimetilbutano; 1 , 4 -bis (3 , 4-divaleroiloxifenil) -2,3-dimetilbutano ; 1 , 4 -bis (3 , 4-dipivaloiloxifenil ) -2,3-dimetilbutano; 1, 4-bis (3 , 4-dineopentilcarboxilfenil) -2 , 3 -dimetilbutano; 1- (3 , 4 -dihidroxifenil) -4-fenilbutano; l-(3,4-dihidroxifenil) -4- (2 , 5-dihidroxifenil) butano, áido nordihidroguayarético (NDGA) , tetra-O-metil NDGA; tetraglicinil NDGA; tetra-dimetilglicinil NDGA o una sal del mismo; o tri-O-metil NDGA; tetrapivalato del ácido nordihidroguayarético; tetrapropionato del ácido nordihidroguayarético y todas las configuraciones ópticas de los mismos.

25. El método de la reivindicación 23, caracterizado porque el butano catecólico se administra en una cantidad seleccionada del grupo consistente de aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 375 mg/kg por dosis; aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 250 mg/kg por dosis; aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 200 mg/kg por dosis; aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 150 mg/kg por dosis; aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg por dosis; aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 75 mg/kg por dosis; y aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 50 mg/kg por dosis.

26. El método de la reivindicación 23, caracterizado porque el butano catecólico se administra en una cantidad seleccionada del grupo consistente desde aproximadamente 1500 mg por día hasta aproximadamente 2500 mg por día, desde aproximadamente 1800 mg por día hasta aproximadamente 2300 mg por día; y aproximadamente 2000 mg por día.

27. El método de la reivindicación 23, caracterizado porque el butano catecólico se administra más frecuentemente que una vez cada 6 días durante un periodo de tiempo, o más frecuentemente que una vez cada 2 días durante un periodo de tiempo.

28. El método de la reivindicación 20, caracterizado porque comprende administrar adicionalmente uno o más agentes anticáncer adicionales.

29. El método de la reivindicación 28, caracterizado porque dicho uno o más agentes anticáncer adicionales se seleccionan del grupo consistente de inhibidores de EGFR, inhibidores de IGF-1R, agentes de deterioro del ADN, inhibidores de topoisomerasa e inhibidores mitóticos .

30. Un método para seleccionar un sujeto para un tratamiento con un inhibidor dual de tírosina quinasa capaz de inhibir la actividad de tirosina quinasa tanto de IGF- IR como de EGF-R, caracterizado porque dicho sujeto se identifica por tener niveles de IGF-1R, EGFR, o ambos en niveles de línea base o dos veces mayores que los niveles de línea base en comparación con los niveles de control .

31. El método de la reivindicación 30, caracterizado porque el nivel de expresión de EGFR está en niveles de línea base y el nivel de expresión de IGF-IR es dos veces mayor que los niveles de línea base o más; el nivel de expresión de IGF- IR esta en niveles de línea base y el nivel de expresión de EGFR es dos veces mayor que los niveles de línea base o más; o el nivel de expresión de IGF-IR es dos veces mayor que los niveles de línea base o más y el nivel de expresión de EGFR es dos veces mayor que los niveles de línea base o m s.

32. El método de la reivindicación 30, caracterizado porque dicho sujeto es resistente a tratamiento con al menos un inhibidor de tirosina quinasa.

33. El método de la reivindicación 32, caracterizado porque el sujeto ha desarrollado resistencia o uno o más de los inhibidores de EGF-R o inhibidores de IGF- IR.

34. El método de la reivindicación 30, caracterizado porque el inhibidor dual de tirosina quinasa es un butano catecólico .

35. El método de la reivindicación 34, caracterizado porque el butano catecólico se selecciona del grupo que. consiste de l , 4 -bis (3 , 4-dihidroxifenil) -2 , 3-dimetilbutano; 1, 4-bis (3 , 4-dihidroxifenil) butano; 1 , -bis (3 , 4 -dimetoxifenil) -2 , 3-dimetilbutano; 1 , 4-bis (3 , 4 -dietoxifenil) -2,3-dimetilbutano; 1, 4-bis (3 , 4-dipropoxifenil) -2 , 3 -dimetilbutano ; 1- (3 , 4-dihidroxifenil) -4 - (3 , 4 , 5-trihidroxifenil) butano; 1,4-bis (3 , 4-diacetoxifenil) -2 , 3 -dimetilbutano; l,4-bis(3,4-dipropioniloxifenil) -2 , 3 -dimetilbutano; 1, 4-bis (3,4-dibutiroiloxifenil) -2, 3 -dimetilbutano ; 1, 4-bis (3,4-divaleroiloxifenil) -2, 3 -dimetilbutano; 1, 4-bis (3,4-dipivaloiloxifenil ) -2 , 3-dimetilbutano ,· 1 , 4 -bis ( 3 , 4 -dineopentilcarboxilfenil) -2 , 3 -dimetilbutano; 1- (3,4- dihidroxifenil) -4-fenilbutano; 1- (3 , 4-dihidroxifenil) -4- (2, 5-dihidroxifenil) butano, ácido nordihidroguayarético (NDGA) , tetra-O-metil NDGA; tetraglicinil NDGA; tetra-dimetilglicinil NDGA o una sal del mismo; o tri-O-metil NDGA; tetrapivalato del ácido nordihidroguayarético; tetrapropionato del ácido nordihidroguayarético y todas las configuraciones ópticas de los mismos .

36. El método de la reivindicación 34, caracterizado porque el butano catecólico se administra en una cantidad seleccionada del grupo consistente de aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 375 mg/kg por dosis; aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 250 mg/kg por dosis; aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 200 mg/kg por dosis; aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 150 m9í/kg Por dosis; aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg por dosis; aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 75 mg/kg por dosis; y aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 50 mg/kg por dosis.

37. El método de la reivindicación 34, caracterizado porque el butano catecólico se administra en una cantidad seleccionada del grupo consistente de desde aproximadamente 1500 mg por día hasta aproximadamente 2500 mg por día, desde aproximadamente 1800 mg por día hasta aproximadamente 2300 mg por día; y aproximadamente 2000 mg por día.

38. El método de la reivindicación 34, caracterizado porque el butano catecólico se administra más frecuentemente que una vez cada 6 días durante un periodo de tiempo, o más frecuentemente que una vez cada 2 días durante un periodo de tiempo.

39. El método de la reivindicación 30, caracterizado porque comprende adicionalmente la administración de uno o más agentes anticáncer adicionales.

40. El método de la reivindicación 39, caracterizado porque dicho uno o más agentes anticáncer adicionales se seleccionan del grupo consistente de inhibidores de EGFR, inhibidores de IGF- IR, agentes de deterioro del ADN, inhibidores de topoisomerasa e inhibidores mitóticos.