KR100605292B1

KR100605292B1 - 신규한 오가피 및 오가피 열매, 가시오가피 다당체, 그제조방법 및 그를 활성성분으로 함유하는 항암제 조성물

Info

Publication number: KR100605292B1
Application number: KR1020030032756A
Authority: KR
Inventors: 곽태환; 박명규; 최미희
Original assignee: 주식회사 엠디바이오알파
Priority date: 2002-05-28
Filing date: 2003-05-23
Publication date: 2007-04-12
Also published as: EP1507544B1; CA2486915A1; JP2005531576A; EP1507544A4; KR20030091665A; AU2003231394A1; JP4861619B2; JP2011093928A; US20060034951A1; KR20030091760A; KR100594353B1; CN1842341A; AU2003231392A1; US7901716B2; WO2003099308A1; WO2003099309A1; KR20050112071A; CA2486915C; CN1842341B; KR20050105435A

Abstract

본발명은 오가피 및 오가피 열매, 가시오가피로부터 분리한 다당체 성분을 활성성분으로 함유하는 항암제, 암전이 억제제 및/또는 조혈촉진작용, 골수방어작용, 방사선민감작용이 탁월한 항암제 또는 항암보조제 조성물에 관한 것이다. 다른 한편으로, 본 발명은 오가피 및 오가피 열매, 가시오가피를 50-180℃에서 0.5-20시간 동안 가열 추출하여 다당체 분획을 수득함을 특징으로 하는 제조되는 오가피 및 오가피 열매, 가시오가피로부터 항암제, 암전이 억제제 및/또는 조혈촉진작용, 골수방어작용, 방사선민감작용이 탁월한 항암제 또는 항암보조제 조성물을 제조하는 방법에 관한 것이다.

오가피, 오가피 열매, 가시오가피, 항암제, 암전이 억제제, 조혈촉진, 골수방어, 방사선민감작용, 항암보조제

Description

신규한 오가피 및 오가피 열매, 가시오가피 다당체, 그 제조방법 및 그를 활성성분으로 함유하는 항암제 조성물 {Active fraction having anti-cancer and anti-metastasis isolated from acanthopanax species and fruits}

도 1. 오가피, 오가피 열매 및 가시오가피 다당체에 의한 폐암 전이 억제 효과 그래프

도 2. 오가피, 오가피 열매 및 가시오가피 다당체에 의한 고형암에 의한 항 종양 효과 그래프

도 3. 경구투여에 의한 오가피, 오가피 열매 및 가시오가피 다당체에 의한 골수세포 증식효과 그래프

도 4. Peyer's patch를 경유한 골수세포 증식 효과 그래프

도 5. 항암제와 오가피 다당체 병용 투여시 조혈 장애 억제 완화 그래프 : 비장세포수

도 6. 항암제와 오가피 다당체 병용 투여시 조혈 장애 억제 완화 그래프 : 골수세포 수

도 7. 방사선에 대한 방어 작용 그래프 : 비장 세포 수

도 8. 방사선에 대한 방어 작용 그래프 : 골수 세포 수

도 9~10. 항암제(Cisplatin) 병용 투여에 의한 부작용 억제 효과.

도 11. 오가피 다당체에 의한 면역세포 활성화 작용

도 12. 오가피 다당체에 의한 항암성 사이토카인 생성작용.

도 13. 항암제(taxol)와 병용 투여시 항암 상승 작용

본 발명은 오가피 및 오가피 열매, 가시오가피로부터 분리한 다당체 성분을 유효성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 NKT 세포, NK세포등 면역세포의 활성화에 의한 항암 및/또는 암전이 억제제 그리고 조혈촉진작용, 골수방어작용, 방사선 민감작용이 탁월한 항암보조제 조성물에 관한 것이다.

다른 한편으로, 오가피 및 오가피 열매, 가시오가피를 50-180℃에서 0.5-20시간 동안 열수 추출하여 다당체 분획을 수득하는 단계를 포함함을 특징으로 하는 오가피 및 오가피 열매, 가시오가피로부터 항암제, 암전이 억제제 및/또는 조혈촉진작용, 골수방어작용, 방사선민감작용이 탁월한 항암보조제 조성물을 제조하는 방법에 관한 것이다. 미국에서 사망자의 약 20%가 암관련 질환에 의하여 사망하고 있다. 비록 화학요법이 암치료의 주요 수단으로 사용되고 있지만 암치료를 위한 효과적인 약물은 그리 많지가 않다.

암으로 인한 대부분의 사망은 일차 암세포의 결과에 의해서 보다는 오히려 암세포 의 전이에 의하여 이루어지는 이차 전이암에 그 원인이 있다. (Fifler, 1991 cancer metastasis. Br. Med. Bull. 47, 157-177). 수많은 실험과 임상연구를 통하여 자연 면역력이 초기 암세포의 전이를 효과적으로 저해하고 치유하는데 중요한 역할을 하는 것으로 확인 되었다. (Schantz et al.,cancer immunol. immunother. 25., 141-148, 1987).

NKT 세포는, T 세포수용체와 함께 NK 세포 수용체도 겸하여 가진 독특한 세포로서, T 세포와 NK 세포라는 별도의 림프구의 특징을 가지고 있다. 이 NKT 세포는 마우스에서 암세포의 간암과 폐암으로의 전이 억제에 중요한 작용세포인 것으로 알려져 있으며 (Hashimoto et al., J. Imunolo., 154, p4333, 1995; Anzai et al., Immunol., 88, p82, 1996), 또한 NKT 세포는 암세포, 기생충 및 리스테리아와 결핵균 등의 세포 내 감염세균의 배제에 중요한 역할을 하는 세포로도 알려져 있다 (Seki et al., Clin. Immunol., 28, p1069, 1996).

한편, 암세포 및 바이러스와 박테리아등의 감염에 대하여 효과적으로 저지할 수 있는 세포는 NKT 세포뿐만 아니라 자연살해세포 (NK), LAK 세포, 그리고 마크로파아지 등이 알려져 있다. 즉 자연살해세포, LAK 세포, 그리고 마크로파지의 효과적인 활성은 암세포 성장의 저지 및 암전이에 효과적인 것으로 확인 되었다. 또한 면역자극제에 의한 자연살해세포의 활성화는 암세포의 전이에 의한 번식을 효과적으로 억제함이 밝혀졌다.(Herberman, 1984 J. invest. Dermatol. 83, 137-140).

이들 면역체계에 의한 항암, 항전이, 항바이러스의 작용들은 면역계는 활성화는 여러가지 사이토카인의 분비에 의해 매개되어진다. 특히 항암, 항전이, 항바이러스와 연관된 사이토카인으로서 대표적으로 알려져 있는 것은 감마인터페론, 종양괴사인자-알파 등이다.

감마인터페론은 주로 T세포에서 만들어져 면역반응을 조절하고 T, B 세포 호중구, 자연살해세포, 대식세포등에 작용하여 활성화 시켜 암세포를 공격하여 만성 골수성 백혈병, 신장암 치료에 치료제로 이용되고 있다. 또한, DNA 합성을 억제하고 세포증식을 직접 억제하는 작용이 강하여 암 치료뿐만 아니라 다른 인터페론처럼 바이러스 및 박테리아의 증식을 억제하여 항바이러스제제 및 다제내성균 및 진균감염증에 임상적용되고 있다.

종양괴사인자-알파는 주로 대식세포에 의하여 생산되어지는데 염증반응 등 다양한 면역반응에 관여하며 특히 암세포에 대하여 강력한 독성을 나타내며 현재 일본에서 피부암치료제로 임상시험을 거쳐 등록 전 상태에 있다.

그러나, 항암요법에 이러한 사이토카인을 직접 사용하는 방법은 예기치 못한 염증반응, 구토 등 부작용을 야기시키며, 따라서 최근엔 특정 사이토카인만의 처리하는 방법이 아니라 전반적인 면역계를 활성화 시키는 물질을 찾아내려는 시도가 많이 이루어지고 있다.

그러나, 지금까지 개발되어 보고되어진 자연살해세포를 포함한 면역세포의 활성화에 효과적인 것으로 밝혀진 천연물을 그리 많지 않은 상황인데 그 중 밝혀진 중요한 소재를 보면 참나무과의 식물에 기생하여 사는 상기생 추출물의 렉틴성분이 암치료의 대체요법으로 일부 사용되어지고 있으며 버섯류에 함유되어 잇는 베타글루칸 계열에 속하는 다당류들이 자연살해세포의 활성화에 관여하는 것으로 알려져 있다.

오가피는 두릅나무(Araliaceae)과의 오가피속에 속하는 낙엽성 활엽관목으로 오가피(Acanthopanax sessiliflorum)와 줄기마다 잔가시가 많이 돋아있는 가시오가피(Acanthopanax senticosus, 일명 'Siberian Ginseng')으로 나뉜다. 오가피속 식물은 세계적으로 주로 동북 아시아와 남아프리카 지역에 분포한다. 대표적인 약리작용으로 진정작용, 항 스트레스작용, 평활근이환 작용, 소염작용, anaphylaxis 억제작용 등이 보고되어 있으며, 신경통, 중풍, 당뇨병, 고혈압, 저혈압, 및 불면증 등에 탁월한 효과를 지니고 있어 애용 되어왔다. 이들의 효과를 나타내는 주요 성분은 사포닌계통의 물질들과 Acanthoic acid 에 의하여 주로 이루어지고 있는 것으로 알려지고 있다. 가시오가피에는 Acanthoic acid라는 성분이 있어 혈소판 응집 억제, 염증 억제, 활성산소 억제(Kang,H.S, Cell Immuno. Vol. 170, No.2. 1996)등을 지니며, tripenoid계의 배당체(Eleutheroside A,B,C,D,E,F,G)와 Aconthoside(A,B,C,D),스테롤, 쿠마린, 리구닌, 플라보노이드, 후타레인 등의 배당 체가 함유되어 뇌하수체를 자극함으로써 여러 호르몬의 분비를 촉진시켜 강장, 강정효과가 있는 것으로 드러났다. 이용된 사례를 보면, 가시오가피를 이용하여 여드름 및 뾰루지 치료(특허 공개 2000-9820), 발기 부전 치료 효과(특허 공개 2000-74868), 항 스트레스 조성물 함유(특허 160402), 신경보호 작용 효과(공개 2000-0077717)등이 있으며, 그 외에도 각 종 건강식과 차류 등에 빠지지 않고 첨가되는 등 그 효능은 이미 널리 알려져 있다.

따라서 오가피, 오가피 열매 및 가시오가피에서 현재까지 시도된 바 없는 면역활성 및 항 전이 활성을 지닌 다당체를 분리하여, 면역 증강, 항 전이 및 항 암 치료 보조제로 이용하고자 한다.

본 발명자들은 오가피, 오가피 열매 및 가시오가피로부터 추출 분리한 다당체 분획이 자연살해 T세포, 자연살해세포, 대식세포 등의 면역세포를 활성화 시키고 인터페론 감마, 종양억제 인자 알파 등 사이토카인의 분비를 촉진하여 암세포의 성장 저지 및 암전이에 매우 효과적이며, 또한 조혈촉진작용과 기존 항암제 및 방사선 치료의 부작용을 완화시키는 효과가 있음을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다. 따라서, 본 발명의 목적은 오가피, 오가피 열매 및 가시오가피로부터 다당체 분획을 추출, 수득함으로써 제조되는 오가피, 오가피 열매 및 가시오가피 추출물을 제공하는 것이며,

다른 한편으로 상기 추출물과 이를 포함하는 약제학적 조성물의 암세포저지 및 암 전이 를 경감시키는 항암제, 암전이 억제제, 및/또는 조혈촉진제, 방사선 부작용 억제제, 항암제 부작용 억제제, 자가면역치료제로의 신규한 용도를 제공하기 위한 것이다.

또 다른 한편으로 오가피, 오가피 열매 및 가시오가피를 열수 추출 분리하여 암세포의 성장 저지 및 암전이에 매우 효과적인 오가피, 오가피 열매 및 가시오가피 추출물 및/또는 활성 다당체 분획의 제조방법을 제공하기 위한 것이다.

면역 활성능 및 항 암 활성이 우수한 다당체를 회수하고자 본 발명에서는 오가피 줄기의 건조 중량 대비 10~15배의 증류수를 넣어 50-180℃에서 0.5-20시간동안, 바람직하게는 80-120℃ 내외에서약 1-10시간동안 가열 추출한다.더욱 바람직하게는 100℃ 내외에서 약 3-4시간 동안 가열 추출한다. 일반적으로 천연물의 열수 추출물에는 alkaloids, flavonoide 및 terpenoide와 같은 저분자 물질과 다당류, 단백질, tannin 등과 같은 고분자 물질이 다양하게 혼재하게 되므로, 다당체(polysaccharide)를 회수하기 위하여 추출물에 3~4배 정도의 에탄올을 첨가하게 되면, 다당체들이 침전되고 침전물을 회수함으로서 조다당 획분을 수득할 수 있다.

본 발명자들은 열수 추출 상등액을 회수하여 pH를 알칼리 조건으로 조정한 후 이온교환 수지를 통과시킨 후 에탄올 침전시켜 다당을 회수하였고, 투석하여 이온 교환 수지에 흡착시킨다. 0.5M NaCl로 용출하여 이를 투석하고 동결건조하여 면역 활성 및 항 암 활성이 탁월한 다당을 회수할 수 있었다.

이하 본 발명을 보다 상세히 설명하면 하기와 같다.

본 발명에서 사용할 수 있는 원료는 두상오갈피 계통의 단경오가피나무, 지리산오가피나무, 서울 오가피나무, 털오가피나무, 참오가피나무, 가시오가피 계통의 가시오가피나무, 왕가시오가피나무, 민가시오가피나무, 개오가피나무, 섬오가피 계통의 섬오가피나무, 오가나무 계통의 당오갈피나무 등의 뿌리, 줄기 및 열매들이 있으며, 이것을 1종 또는 2종 이상을 혼합하여 사용할 수 있다. 오가피 줄기에 건조 중량에 10~15배의 증류수를 넣고 3~4시간 동안 열수 추출한다. 사용된 오가피 줄기의 원료는 분말(powder)상태로 추출하는 것이 보다 바람직하다. 거즈를 이용하거나 연속 원심 분리기(decanta)로 추출액과 슬러지를 분리하고 추출액에 존재하는 잔사를 제거하기 위하여 원심분리(7000 rpm, 20 min)하여 상등액만 분리한다. 추출 상등액의 pH는 약 4.5 ~ 6 사이이므로 NaOH를 이용하여 상등액의 pH를 8로 조정한 후, 부피 대비 0.5M이 되도록 NaCl을 첨가한다. 이 상등액을 음이온 교환수지(상품명: PA312 강 염기성 음이온 교환수지,Diaion사)컬럼에 통과 시킨다. 이 음이온 교환수지 컬럼은 0.5M NaCl이 들어있는 Tris-HCl(pH 8.0) 버퍼로 미리 평형(equilibrium)시켜, 본 오가피 줄기 다당체가 음이온 교환수지에 흡착되는 것을 방지하고, 색(color)이나 불순물만 흡착시킬 수 있게 한다. loading한 시료가 더 이상 나오지 않을 때가지 충분히 사용 버퍼(0.5M NaCl/10 mM Tris-HCl)로 washing 다음 나온 액의 부피에 약 3배 부피의 에탄올(95%)를 첨가시켜 다당만을 효과적으로 침전시켜 농축할 수 있다. 이 다당을 회수하기 위하여 원심분리(5000 rpm, 15 min)하여 투석한다. 이 용액의 pH를 8로 조정하고 다시 음이온 교환수지(상품명: Q sepharose FF Phamacia Biotech.)칼럼에 loading하고 충분히 버퍼로 washing 한 후, 0.5M NaCl 로 elution 시킨다. 용출시킨 액에 에탄올을 약 3배 부피로 첨가하여 다당을 침전시키고 회수한 다음, 투석하여 남은 에탄올을 제거시킨 후 동결건조 한다.

상기의 정제 초기 공정에서 분리된 추출물의 시료를 분석한 결과, 오가피 다당체의 중성당 함량은 69.81(평균값)%, 산성당 함량은 30.07(평균값)%, KDO like material은 0.07(평균값)%, 단백질은 0.01(평균값)%로 검출되었다. 오가피 열매 다당체의 경우, 중성당 함량이 37.43(평균값)%, 산성당 함량은 62.49(평균값)%, KDO like material은 0.07(평균값)%, 단백질 함량은 0.01(평균값)%로 나타났다. 또한 가시오가피 다당체의 경우, 중성당은 66.23(평균값)%, 산성당은 33.15(평균값)%, KDO like material은 0.23(평균값)%, 단백질은 0.39%로 나타났다.

한편 오가피 및/또는 가시오가피의 종류,부위 및 함량비 그리고 정제단계에 따라 당함량 및 조성은 다양하게 나타났으며, 구체적으로 당함량의 조성비는 중성당의 경우 20 내지 80%이고, 산성당 함량은 20 내지 75%, 그리고 단백질함량은 0.0001 내지 2%로 구성되어 있으며, 구성당은 람노스, 2-메틸퓨코스,퓨코스, 아라비노스, 2-메틸자일로스,자일로스, 아피노스, 아세릭산, 만노스, 글루코스, 갈락토스, 갈락투론산, 글루큐론산, DHA(d-deoxy-D-lyxo-2-heptulosaric acid) 그리고 KDO(2-keto-3-deoxyocturosonic acid) 등으로 이루어져 있다.

오가피 다당체는 분자량이 대략 250,000 Da에서 6,000 Da정도를 지니며, 140,000 Da에서 main peak로 검측되었다. 오가피 열매는 분자량이 758,000 Da 정도에서 3,000 Da 사이이며 130,000 Da에서 main peak로 검측되었으며, 또한, 가시오가피 다당체의 경우는 758,000 Da에서 1,600 Da정도를 나타내며 150,000 Da에서 main peak로 나타났다.

상기와 같이 수득한 오가피, 오가피 열매 및 가시오가피 추출물 또는 다당체를 함유하는 조성물은 NKT 세포, NK세포, 대식세포, T세포, B 세포등 전반적인 면역계를 활성화 시키고 항암과 연관된 사이토카인등의 분비를 촉진시켜 암세포의 증식 및 전이를 현저하게 경감 시키는 효과를 가지므로 항암제 및 항전이의 치료제로 사용할 수 있으며 또한 항암제 및 방사선 치료로 생긴 백혈구 감소증등의 부작용을 억제함으로써 항암제 및 방사선치료의 보조제로 유용 하게 사용할 수 있다

이러한 목적을 위하여 본 발명의 조성물은 그자체로 또는 약제학적 분야에서 통상적으로 허용되는 담체와 함께 배합하여 약제학적 분야에서 통상적인 제제, 예를들면 정제, 캅셀제, 액제, 현탁제등의 경구투여용제제, 주사용제제 또는 현탁액 등의 다양한 제제로 제형화 할 수 있다. 또한 경구투여시 약제가 위산에 의해 분해하는 것을 방지하기 위하여 제산제를 병용하거나 정제등의 경구투여용 고형제제를 장용피로 피복한 제제로 제형화하여 투여할 수도 있다.

본 발명에 따르는 오가피, 오가피 열매 및 가시오가피 추출물의 다당체 분획의 인체에 대한 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 불활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별 및 상태에 따라 적절히 사용하여야 하나, 일반적으로 성인에게 1일 100ug-6000mg, 바람직하게는 20-5000mg의 양이 투여되도록 한다.

이하 본 발명을 발명의 구성 및 효과를 나타내기 위하여 실시예에 의거 보다 상세하게 설명하고자 하나, 이는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것 일뿐 본 발명의 범위를 제한하고자 하는 것은 아니다.

실시예 1: 오가피( Acanthopanax sessiliflorum )줄기로부터 다당의 제조

오가피 줄기 500 g을 증류수 5 L로 100℃에서 3시간 동안 가열 추출하였다. 이 때 시료는 분말로 된 것이 보다 추출율을 좋게 한다. 열수 추출 후, 거즈를 이용하여 슬러지를 분리한 하고 추출액을 원심분리(5000 rpm, 20min)하여 상등액을 분리해 낸다. 상등액의 pH는 약 4.5 ~ 6 사이이므로 NaOH를 이용하여 상등액의 pH를 8로 조정한 후, 부피 대비 0.5M NaCl/10mM Tris-HCl(pH 8.0)이 되도록 한다. 이 상등액을 음이온 교환수지(상품명: PA312 강 염기성 음이온 교환수지,다이아이온사)컬럼에 통과 시킨다. 이 음이온 교환수지 컬럼은 0.5M NaCl이 들어있는 Tris-HCl(pH 8.0) 버퍼로 미리 평형(equilibrium)시켜, 본 오가피 줄기 다당체가 음이온 교환수지에 흡착되는 것을 방지하고, 색(color)이나 불순물만 흡착시킬 수 있게 한다. loading한 시료가 더 이상 나오지 않을 때가지 충분히 버퍼(0.5M NaCl/10 mM Tris-HCl)로 washing 다음 나온 액의 부피에 약 3배 부피의 에탄올(95%)를 첨가시켜 다당만을 효과적으로 침전시켜 농축할 수 있다. 침전된 다당체들을 원심분리(5000 rpm, 15 min)하고 투석하여 음이온 교환수지(상품명: Q sepharose FF, Phamacia Biotech.사)에 15 ml/min으로 흡착시킨다. 사용버퍼(10 mM Tris-HCl, pH 8)로 충분히 washing 한 다음 0.5 M NaCl/10 mM Tris-HCl 버퍼로 elution 한다. 이 용출액에 에탄올을 첨가하여 다당체를 침전시킨다. 이 다당체를 회수하고 투석하여 동결건조하여 1g(0.2%)의 오가피 줄기 다당체를 획득할 수 있었다

실시예 2. 오가피( Acanthopanax sessiliflorum )열매의 다당체 분리

오가피 열매 500g의 중량 대비 10배의 증류수로 약 3~5시간동안 열수추출 한다. 이 때 오가피 열매는 분쇄기로 분쇄시켜 분말화 된 것이 추출율이 좋다. 열수추출 후, 거즈를 이용하여 슬러지를 분리한 다음 액을 원심분리(5000 rpm, 20min)하여 상등액을 분리해 낸다. 추출액의 pH는 약 4.5 ~ 6 사이이므로 NaOH를 이용하여 상등액의 pH를 8로 조정한 후, 부피 대비 0.5M NaCl/10 mM Tris-HCl(pH 8)이 되도록한다. 이 상등액을 음이온 교환수지(상품명: PA312 강 염기성 음이온 교환수지, 다이아이온사)컬럼에 통과 시킨다. 이 음이온 교환수지 컬럼은 0.5M NaCl이 들어있는 Tris-HCl(pH 8.0) 버퍼로 미리 평형(equilibrium)시켜, 본 오가피 열매 다당체가 음이온 교환수지에 흡착되는 것을 방지하고, 색(color)이나 불순물만 흡착시킬 수 있게 한다. loading한 시료가 더 이상 나오지 않을 때가지 충분히 버퍼(0.5M NaCl/10 mM Tris-HCl)로 washing 다음 나온 액의 부피에 약 3배 부피의 에탄올(95%)를 첨가시켜 다당만을 효과적으로 침전시켜 농축할 수 있다. 침전된 다당체들을 원심분리(5000 rpm, 15 min)하고 투석하여 음이온 교환수지(상품명: Q sepharose FF, Phamacia Biotech사.)에 15 ml/min으로 흡착시킨다. 사용버퍼(10 mM Tris-HCl, pH 8)로 충분히 washing 한 다음 0.5M NaCl/10 mM Tris-HCl 버퍼로 elution 한다. 이 용출액에 에탄올을 첨가하여 다당체를 침전시킨다. 이 다당체를 회수하고 투석하여 동결건조하여 오가피 열매 다당체를 1.2g(0.24%)을 획득하였다.

실시예 3. 가시오가피( Acanthopanax senticosus )다당체의 분리

가시오가피 500g의 중량 대비 10배의 증류수로 약 3~5시간동안 열수추출 한다. 이 때 가시오가피 줄기는 분쇄기로 분쇄시켜 분말화 된 것이 추출율이 좋다. 열수추출 후, 거즈를 이용하여 슬러지를 분리한 다음 액을 원심분리(5000 rpm, 20min)하여 상등액을 분리해 낸다. 이 상등액의 pH는 약 4.5 ~ 6 사이이므로 NaOH를 이용하여 상등액의 pH를 8로 조정한 후, 부피 대비 0.5M NaCl/10 mM Tris-HCl이 되도록한다. 이 상등액을 음이온 교환수지(상품명: PA312 강 염기성 음이온 교환수지,다이아이온사)컬럼에 통과 시킨다. 이 음이온 교환수지 컬럼은 0.5M NaCl이 들어있는 Tris-HCl(pH 8.0) 버퍼로 미리 평형(equilibrium)시켜, 본 가시오가피 줄기 다당체가 음이온 교환수지에 흡착되는 것을 방지하고, 색(color)이나 불순물만 흡착시킬 수 있게 한다. loading한 시료가 더 이상 나오지 않을 때가지 충분히 버퍼(0.5M NaCl/10 mM Tris-HCl)로 washing 다음 나온 액의 부피에 약 3배 부피의 에탄올(95%)를 첨가시켜 다당만을 효과적으로 침전시켜 농축할 수 있다. 침전된 다당체들을 원심분리(5000 rpm, 15 min)하고 투석하여 음이온 교환수지(상품명: Q sepharose FF, Phamacia Biotech.사)에 15 ml/min으로 흡착시킨다. 사용버퍼(10 mM Tris-HCl, pH 8)로 충분히 washing 한 다음 0.5 M NaCl/10 mM Tris-HCl 버퍼로 elution 한다. 이 용출액에 에탄올을 첨가하여 다당체를 침전시킨다. 이 다당체를 회수하고 투석하여 동결건조하여 가시오가피 다당체를 1.5g(0.3%)을 획득하였다.

실시예 4 : 오가피, 오가피 열매 그리고 가시오가피의주사제용 시료의 제조방법

오가피, 오가피열매 및 가시오가피의 시료를 실시예 1, 2, 3에서 두번째 음이온교환수지인 Q-sepharose 수지에서 용출된 액을 발열성물질의 제거를 위하여 실리카겔이 충진된 컬럼을 통과시킨 후 에탄올을 3배 부피로 첨가하여 다당을 침전시키고 원심분리하여 회수하고 95%에탄올로 2회 세척하여 불순물을 제거한 후3차 증류수에 용해시킨 후 분자량 6,000으로 투석하여 에탄올을 제거한 후 무균화 를 위하여 0.2um여과장치를 통과시켜 발열반응물질이 없는 무균의 시료를 제조한다. 무균화된 시료를 3ml vial에 일정량씩 분주하여 냉동시킨 후 동결건조하였다. 건조된 시료는 생리식염수에 용해하여 시험을 수행하는데 사용하였다.

실시예 5. 다당체의 당 조성 분석 및 분자량 확인

총 당 함량은 galatose를 표준물질로 하여 phenol-sulfuric acid 법(Dubois et al, Anal. chem., 28, 350, 1956)으로 하여 산성당 함량은 D-galacturonic acid를 표준물질로 하여 m-hydroxybiphenyl 법(Blumenkrantz et al, Anal. biochem., 54, 484, 1973)으로 KDO(2-keto-3-deoxyocturosonic acid) 함량은 tiobarbituric acid법으로 단백질 함량은 bovine serum albumin을 표준물질로 하여 브래드포드법(Bio-Rad protein assay)의 microassay 법으로 각 각 정량 분석하였으 며, 시료의 농도는 1 ~ 10 mg/ml의 농도로 녹여 분석하였다. 최종 정제단계를 거친 오가피 또는 가시오가피 추출물을 분석(산술평균값)한 결과, 오가피 다당체의 중성당 함량은 51.3%, 산성당 함량은 46.9%, KDO like material은 1.83%, 단백질은 검출되지 않거나 0.01% 정도 미량 검출되었다. 오가피 열매 다당체의 경우, 중성당 함량이 37.43%, 산성당 함량은 62.49%, KDO like material은 0.07%, 단백질 함량은 0.01%로 나타났다. 또한 가시오가피 다당체의 경우, 중성당은 48.03%, 산성당은 49.83%, KDO like material은 2.14%, 단백질은 0.01%로 나타났다.

그러나, 오가피 및/또는 가시오가피의 종류,부위 및 함량비 그리고 정제단계에 따라 당함량 및 조성은 다양하게 나타났으며, 보다 구체적으로 당함량의 조성비는 중성당의 경우 20 내지 80%이고, 산성당 함량은 20 내지 75%, 그리고 단백질함량은 0.0001 내지 2%로 구성되어 있었다.

최종 정제공정을 거친 오가피 및/또는 가시오가피의 구성당은 람노스 1-10 %, 2-메틸퓨코스 0.1-5%, 퓨코스 0.1-2%, 2-메틸자일로스 0.1-2%, 아라비노스1-20%, 크실로스 0.1-5%, 아피노스 0.05-1%, 아세릭산 0.05-1%, 만노스 0.1-10%, 글루코스 0.5-10%, 갈락토스 10-40%, 갈락투론산과 글루큐론산 30-60%, 그리고 KDO(2-keto-3-deoxyocturosonic acid)와 DHA(d-deoxy-D-lyxo-2-heptulosaric acid) 즉, KDO like material은 0.5-5% 등으로 이루어져 있다.

분자량은 HPLC(영린)로 확인하였으며 컬럼은 GS-520HQ, GS-320HQ, GS-220HQ(Shodex Asaipack GS series, showa denko사)컬럼을 차례로 연결하여 측정하였다. 오가피 다당체는 분자량이 대략 250,000 Da에서 6,000 Da정도를 지니며, 140,000 Da에서 main peak로 검측되었다. 오가피 열매는 분자량이 758,000 Da 정도에서 3,000 Da 사이이며 130,000 Da에서 main peak로 검측되었으며, 또한, 가시오가피 다당체의 경우는 758,000 Da에서 1,600 Da정도를 나타내며 150,000 Da에서 main peak로 나타났다.

실시예 6. 폐로 전이된 암 세포 억제 효과

colon 26-M.3.1 cancer cell을 100 mm cell culture petri dish에서 Eagles MEM에서 단층 배양한다. 오가피 , 오가피 열매 다당체 및 가시오가피 줄기 다당체를 Balb/c mouse(6~7weeks, female)의 미 정맥에 10 mg/Kg의 농도로 주사하고, 2일 후 폐 전이 암 세포주인 colon 26-M3.1 cancer cell을 1.35X105cells/Head로 주사하였다. (Yoo et al, 1994. vaccine 12, 175-180) 1일 뒤에 다시 10 mg/Kg 농도로 다당체를 주사한다. 시료는 PBS(phosphate buffered saline, pH 7.3)에 용해시키고, 0.2 ㎛ filter로 여과한다. 14일 경과 후 mouse의 폐를 적출하여 Bouin's solution으로 고정시켜 폐로 전이된 암 세포 수를 계수한다.

그 결과, 시료를 처리하지 않은 군의 폐에 생긴 암 세포수는 평균 175개 정도로 나타났으나, 오가피 열매 다당체를 처리한 군은 암 세포수가 평균 5개로 암세포 전이율을 97.1% 억제시켰다. 또한 오가피나 가시오가피의 다당체도 92%, 90%의 전이 억 제율을 나타냄으로서 탁월한 암 전이 억제 능력이 있음을 의미하였다. (도면 1)

실시예 7. 고형암에 의한 항종양효과

BALB/c 누드(nu+/nu+)마우스(20마리/군)에 비상피성 종양유래 세포주인 sarcoma 180 또는 상피성 종양 유래 세포주인 UV2237P 세포를 마우스당 1x106cells로 복강투여 한 후 3일째부터 오가피, 오가피 열매 및 가시오가피 다당체를 10mg/Kg의 농도로 매일 10회 복강투여하고 4주후에 종양의 크기를 대조군과 비교하였다. 그 결과, sacoma 180 암세포의 경우 오가피 다당체가 65%, 오가피 열매 다당체가 70%, 가시오가피 다당체가 63%의 억제율을 나타냈고, 상피성 암 세포인 UV2237P에서는 오가피 다당체가 70%, 오가피 열매 다당체가 88%, 가시오가피 다당체가 82%의 억제율을 나타냈다.(도 2)

실시예 8. 경구투여 의한 골수세포 증식 효과

C3H/HeN mouse(6weeks, female)에 증류수에 녹인 시료를 250 mg/Kg으로 10일 동안 매일 경구 투여한다. 최초 경구 투여 후 11일 째에 마우스를 경추탈구 시키고, 무균적으로 마우스의 소장에서 Peyer's patch를 잘라내어 RPMI 1640 배지에 담근다. Peyer's patch를 살균된 금속체(100 mesh)로 눌러주어 Peyer's patch 내 림프구를 방출시킨다. 이 세포 현탁액을 여과하고 washing 한 다음 RPMI1640(with 10% FBS)배지를 이용하여 2.0X106 cells/ml로 조정한다. 이 세포용액을 96 well plate에 200 ㎕ 씩 분주한 후 37℃, 5% CO2 incubator에서 5일간 배양하였다. 이 배양 상등액을 취하여 골수세포 증식활성 측정용으로 사용하였다. 5일 후 동일 종의 mouse 대퇴부에서 골수세포를 회수한 후, 위와 같이 여과하고 washing 한 다음, 세포농도를 2.5X105 cells/ml로 조정하여 이 세포용액 100 ㎕와 Peyer's patch cell과 시료와 반응시킨 배양 상등액 50 ㎕, RPMI1640(with 10% FBS)배지 50 ㎕를 각 각 96 well plate에 분주하고 mixing 한 다음 37℃, 5% CO2 incubator에서 6일간 배양한다. 배양 종료 15시간 전에 각 well에 AlamarBlue 시약을 20㎕씩 첨가하고, 발색되는 정도를 형광 분석기 excitation 544 nm와 Emission 590 nm에서 측정 또는 ELISA reader(570 nm)로 측정하였다.

그 결과, 시료를 투여하지 않은 군과 비교하여 오가피, 오가피 열매 다당체 및 가시오가피 다당체를 투여한 군에서는 현저하게 높은 골수세포 증식이 일어났음을 확인하였고, 이는 경구투여 시 Peyer's patch를 경유한 골수세포 증식이 일어남을 의미하는 것이다.(도면 3)

실시예 9. Peyer's patch를 경유한 골수세포 증식 효과

무균적으로 C3H/HeN mouse(6weeks, female)의 소장에서 Peyer's patch를 잘라내어 RPMI 1640 배지에 담근다. Peyer's patch를 살균된 금속체(100 mesh)로 눌러주어 Peyer's patch 내 림프구를 방출시킨다. 이 세포 현탁액을 여과하고 washing 한 다음 RPMI1640 배지(with 10% FBS)를 이용하여 2.0X106 cells/ml로 조정한다. 이 세포용액을 96 well plate에 180 ㎕ 씩 분주하고, 시료는 PBS로 1 mg/ml의 농도로 용해시켜 0. 2 um로 여과한 후, 각 well 에 20 ㎕씩 분주하여 37?, 5% CO2 incubator 에서 5일간 배양하였다. 이 배양 상등액을 취하여 골수세포 증식활성 측정용으로 사용하였다. 5일 후 동일 종의 mouse 대퇴부에서 골수세포를 회수한 후, 위와 같이 여과하고 washing 한 다음, 세포농도를 2.5X105 cells/ml로 조정하여 이 세포용액 100 ㎕와 Peyer's patch cell과 시료와 반응시킨 배양 상등액 50 ㎕, RPMI1640(with 10% FBS)배지 50 ㎕를 각 각 96 well plate에 분주하고 mixing 한 다음 37℃, 5% CO2 incubator에서 6일간 배양한다. 배양 종료 15시간 전에 각 well에 AlamarBlue 시약을 20㎕씩 첨가하고, 발색되는 정도를 형광 분석기 excitation 544 nm와 Emission 590 nm에서 측정 또는 ELISA reader(570 nm)로 측정하였다.

그 결과, 대조군에 비해 오가피나 오가피 열매, 가시오가피에서 분리한 다당체을 처리한 군이 높은 골수세포 증식도를 나타냄을 확인하였다.(도 4)

실시예 10. 항암제(cyclophosphamide) 유발 조혈 장애 억제 작용

항암제(cyclophosphamide)를 처리하게 되면 체내 면역 억제제로 작용되어 각 종 면역기관의 세포수가 감소하는 부작용이 수반된다. 그러므로 항암제(cyclophosphamide)투여 후 나타나는 부작용을 격감시키는 것은 매우 중요하다. 오가피 다당체를 10 mg/Kg, 20 mg/Kg의 농도로 PBS에 용해시켜 0.20 um filter로 여과하고, 항암제 투여 2일 전 투여군, 항암제 투여 1일 후 투여군으로 나누어 Balb/c mouse(female,8weeks)에 군당 3마리씩 나누어 복강 투여하였다. 항암제인 cyclophosphamide는 시료 투여 후, 2일 후에 복강에 250 mg/Kg의 농도로 PBS에 녹여 0.20 um filter로 여과하여 복강 투여한다. 항암제 투여 7일 후, 마우스를 치사 하고 비장과 대퇴부를 적출하여 비장 세포와 골수세포를 tryphan blue를 이용하여 계수하였다.

10-1. 비장 세포 수 변화

항암제만 단독으로 처리한 마우스의 비장 세포수는 정상 군의 69.1% 감소하여 나타났으며, 항암제 처리 2일 전에 오가피 다당체를 20 mg/Kg 처리한 군에서는 항암제 처리군보다 비장 세포수가 22.7% 증가하였다. 또한 항암제 투여 1일 후 20 mg/Kg으로 투여한 군에서는 정상군에 비하여 21.5% 만이 감소되었기 때문에 실질적으로 오가피 다당체가 항암제에 의한 부작용을 47.6% 격감시키 주는 것을 의미한다. (도면 5)

10-2. 골수세포 수 변화

골수세포 수의 변화에서도 위와 유사한 결과를 얻을 수 있었다. 항암제 처리군의 골수세포 수는 정상 군보다 51.7% 감소하여 나타난 반면, 항암제 처리 후 오가피 다당체를 20 mg/Kg 처리한 군에서는 정상군으로 거의 회복하는 것으로 나타났다. 또한 항암제 처리 2일 전에 시료를 처리한 군에서도 항암제 처리군보다 25.9% 상승되는 것으로 나타나, 오가피 다당체에 의해 항암제 부작용 감소 및 조혈 장애억제효과를 나타낸다는 것을 의미한다.(도면 6)

실시예 11. Irradiation에 의한 조혈 방어 작용

항 암 치료시 병행되는 방사선 조사는 골수세포를 파괴시키고 정상적인 면역 세포들의 생산 및 분화과정에 영향을 주어 조혈 및 면역기능의 악화를 초래하게 된다. 따라서 방사선 치료 과정에서 오가피 다당체의 병용 투여가 면역력 악화를 완충시키는 작용을 하는지 확인하고자 한다.

오가피 다당체를 10 mg/Kg, 20 mg/Kg의 농도로 PBS에 용해시켜 0.20 um filter로 여과하고, 방사선 조사 2일 전 투여군, 1일 후 투여군으로 나누어 Balb/c mouse(female,8weeks)에 군당 3마리씩 나누어 복강 투여한다. 방사선 조사는 mouse에 4.5 Gy의 코발트(60Co)감마선을 전신에 조사한다. 방사선 조사 5일 후와 9일 후에 마우스를 치사하여 비장 및 대퇴부를 적출하고 비장세포 및 골수세포를 회수한 후 tryphan blue를 이용하여 계수 하였다.

11-1. 오가피 다당체 처리에 의한 비장 세포 수 변화

방사선 조사 5일 후 마우스를 치사하여 세포수를 계수한 결과, 정상 마우스의 비장 세포수는 6.2 X 105cells/ml 이나 방사선 조사를 한 마우스는 2.5X104cells/ml로 정상 마우스 보다 96%의 세포수가 감소하였다. 그러나 오가피 다당체를 방사선 조사 2일 전에 10 mg/Kg의 농도로 투여한 마우스의 세포수는 방사선 처리군 마우스보다 7.2%가 증가하여 나타났다. 이는 오가피 다당체의 방사선 방어 효과라고 판단된다. 또한 9일 째의 경우도 동일 군에서 28%의 세포 수 증가가 이루어졌으며 오가피 다당체를 방사선 처리 후 처리한 군에서 위와 유사한 회복 효과를 보여 주었다. 이는 오가피 다당체가 생체 내에서 방사선 조사 시 방어작용에 효과적이라는 것을 의미한다. (도면 7)

11-2. 오가피 다당체 처리에 의한 골수세포 수 변화.

방사선 조사 5일 후, 방사선 조사 마우스의 골수세포 수는 정상 군보다 96.03% 감 소한 채 나타났다. 반면, 방사선 조사 1일 후 시료를 10 mg/Kg의 농도로 투여한 군에서는 방사선 단독 조사군보다 골수 세포수가 6.3% 증가하였다. 또한 방사선 조사 9일 후, 시료를 10 mg/Kg 투여한 경우 방사선 단독 투여군보다 마우스의 골수세포 수가 19% 높게 나타났다. 이것은 오가피 다당체에 의해서 방사선 처리된 마우스의 골수세포 보호 및 회복작용을 한다는 것을 의미한다. (도면 8)

실시예 12. 항암제(Cisplatin) 병용투여에 의한 부작용 억제 효과

C57BL/6 마우스에 cancer cell line B16-BL6를 마우스 당 1X105 cells로 피내(i.d)주사한다. 시료는 오가피 줄기, 오가피 열매 다당체 그리고 가시오가피 줄기 다당체로 사용하였고, 마우스 당 200 ug의 농도로 0.2 um filter로 여과한 후 암 주사 1일 후부터 3일 간격으로 4회 미 정맥주사 하였다. 항암제(Cisplatin)은 마우스당 50ug, 20ug의 농도로 암 주사 1일 후부터 3일 간격으로 4회 미정맥 주사 하였으며, 항암제 단독처리군과 시료와 병용투여한 군으로 나누어 tumor size와 체중을 비교하였다. Cisplatin을 20 ug를 단독처리한 군에서는 뚜렷한 암의 size 감소는 나타나지 않았으며, 시료와 병용투여한 군에서는 오가피, 오가피 열매 및 가시오가피 다당체 모두 암 억제율 낮게 나타냈다. 반면, Cisplatin 50 ug을 단독으로 투여한 군에서는 마우스의 체중감소나 운동성 저하 등 심각한 부작용이 관찰되었다. 그러나 Cisplatin 50ug과 시료의 병용처리 군에서는 오가피, 오가피 열매 및 가시오가피 다당체 모두 약 60%, 90%, 70%의 암 억제율을 보였으며, 운동성이 활발하고 항암제 단독 투여군에 비해 체중을 회복하는 등 Cisplatin에 의한 부작용을 극복하는 현상이 관찰되었다. 이러한 이유는 이들의 조혈계 자극 및 면역자극활성에 기인하는 것이라고 판단된다.(도 9,10)

실시예 13. 면역세포 활성화 작용 및 항암성 사이토카인 생성

C57/BL6 마우스에 오가피 다당체를 10mg/kg 농도로 복강투여한 후 시간에 따라 비장세포를 회수 한 후 FACS를 통해 비장세포에서 면역세포의 초기면역활성정도를 면역활성인자인 CD69를 비교해보았다.주황색그래프:대조군, 초록색 실선:실험군) 분석 결과, 도 11에서와 같이 NK세포, NKT세포와 T세포에서 대조군에비해 오가피 처리군이 면역활성을 보이며 각세포들의 활성된 정도는 표를 통해 비교해볼수 있다. (도 11)

NK cells	Cell (%)	Mean	NKT cells	Cell (%)	Mean	Tcells	Cell (%)	Mean
control	46	9.49	control	78.43	11.96	control	46.75	9.44
오가피	95.5	22.67	오가피	88.24	31.51	오가피	55.6	17.15

각 면역세포에서 분비되는 사이토카인을 측정하기 위하여 오가피 다당체를 10 mg/kg 으로 C57/BL6 마우스에 처리한 후 16시간 뒤에 비장세포를 회수한 후 각 형광표지된 면역세포의 수용기와 사이토카인 항체를 이용하여 각 면역세포에서 나온 사이토카인을 intracellular staining 방법을 통하여 측정하였다.

그 결과, 도 12에서 보는 바와 같이 비장의 NK세포에서의 GM-CSF발현정도를 확인한 결과, GM-CSF발현정도에 따른 세포분포는 대조군이 35.6%인데 비해 실험군이 57.39%이며, Mean 값이 8.84인 대조군에 비해 오가피 다당체를 주사한 실험군은 10.65이였다

간(liver)의 NKT세포에서의 GM-CSF 발현정도를 확인 한 결과, GM-CSF발현정도에 따른 세포분포는 대조군이 64.2%인데 비해 실험군이 84.5%이며, Mean 값이 21.9인 대조군에 비해 오가피 다당체를 주사한 실험군은 29이였다.

간의 대식세포 및 수상세포에서의 IL12 발현정도는 오가피 다당체를 복강주사한 후 간세포의 대식세포와 수지상세포에서의 IL12 사이토카인의 발현정도가 대조군에 비해 실험군에서 증가함을 보였다. IL12발현정도가 증가된 세포는 대조군에서32.87%이며, 실험군에서는 54.45%로 증가하였으며, 그에 따른 Mean값은 9.89에서 12.05로 증가함을 보였다.

비장에서의 NK 세포의 IFNr발현정도는 오가피를 복강주사 한 후 비장세포에서의 IFNr 사이토카인의 발현정도가 대조군에 비해 실험군에서 증가함을 보였다. IFNr 발현정도가 증가된 세포는 대조군에서47.38%이며, 실험군에서는 68.91%로 증가하였으며, 그에 따른 Mean값은 4.21에서 5.38로 증가함을 보였다 . (도 12)

실시예 14. 항암제(taxol)와 병용 투여시 항암 상승 작용

Athymic nude mouse(male)을 대상으로 항암제(taxol), 시료단독 투여, 병용투여 군으로 나누어 항암 상승작용을 tumour size로 확인하였다. 항암제는 12.5 mg/Kg의 농도로 tumour 주사 6일 후부터 마우스의 상태와 독성을 고려하여 3일 간격으로 7회 투여, 시료는 10 mg/Kg의 농도로 암 주사 2일 전 1회, 암 투여 후 3일 간격으로 복강투여 하였다. 사용된 cancer cell line은 PC-3며 마우스당 2x106 cells 의 농도로 피하주사 하였다. 암 주사후 14일 후 부터 31일까지 tumor size를 관찰한 결과, 항암제와 시료를 병용 투여한 군에서는 항암제(taxol)를 단독 투여한 군보다 암세포가 더 작게 형성함을 관찰 할 수 있었다. 이것은 항암제와 오가피 다당체의 병용투여에 의해 면역계가 활성화도어 항암 상승 작용을 유도하는 것이라고 판단된다. (도 13)

실시예 15: 정제의 제조

옥수수전분34g

결절성셀룰로오즈10g

맥주효모40g

마그네슘스테아래이트1g

실시예1의 다당체분획15g

계100g

상기한 처방에 따라 각 성분을 균일하게 혼합한 다음 타정기에서 압축 성형하여 1정당 500mg의 정제를 제조하였다.

실시예 1 6 : 분말제의 제조

맥주효모45g

마그네슘스테아레이트5g

실시예1의 다당체분획50g

계100g

상기 처방을 균일하게 혼합한 후 조립기를 이용하여 조립하여 충진캅셀에 500mg이 되도록 충진하였다.

본 발명은 따른 오가피 및 오가피 열매, 가시오가피를 추출하여 추출물 또는 다당체 분획을 수득함으로써 제조되는 오가피 및 오가피 열매, 가시오가피 의 추출물 또는 다당체 분획물은 암세포의 전이를 효과적으로 경감시키는 효과를 가짐으로써 항암치료제, 암전이 예방 및 치료제 또는 항암치료를 나타내는 의약품 및 방사선치료의 보조제로 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 오가피 및 오가피 열매, 가시오가피추출물 또는 이로부터 수득한 다당체 분획을 활성성분으로 함유하는 조성물은 NKT 세포, NK세포, 대식세포, T세포, B 세포등 전반적인 면역계를 활성화시키고 항암과 연관된 사이토카인등의 분비를 촉진시켜 암세포의 증식 및 전이를 현저하게 경감시키는 효과를 가지므로 항암제 및 항전이의 치료제로 사용할 수 있으며 또한 항암제 및 방사선치료로 생긴 백혈구 감소증 등의 부작용을 억제함으로써 항암제 및 방사선치료의 보조제로 유용하게 사용할 수 있다.

Claims

오가피 또는 가시오가피 속 식물의 추출물을 활성성분으로 포함하는 항암 및/또는 항암보조제 조성물로서, 상기 오가피 속 식물은 Acanthopanax sessiliflorum 이고, 가시오가피 속 식물은 Acanthopanax senticosus (Siberian Ginseng)이며, 상기 추출물은 이들의 뿌리, 잎, 줄기 및/또는 열매로부터 열수추출된 중성당, 산성당 및/또는 단백질이 포함된 단백다당을 포함하는 다당체로 구성된 것을 특징으로 하는 조성물.
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
제1항에 있어서, 상기 다당체의 당 구성은 람노스, 퓨코스, 아라비노스, 크실로스, 만노스, 글루코스, 갈락토스, 갈락투론산, 글루큐론산, 및 KDO(2-keto-3-deoxyocturosonic acid)를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제7항에 있어서, 상기 조성물은 암세포 성장저해 및/또는 암전이 억제 활성을 갖는 것임을 특징으로 하는 조성물.
제8항에 있어서, 상기 조성물은 상피성 또는 비상피성 유래의 고형암에 대한 치료 활성을 갖는 것임을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제7항에 있어서, 상기 조성물은 암 예방 및/또는 치료 활성을 갖는 것임을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제7항에 있어서, 상기 조성물은 조혈촉진, 골수방어, 면역증강, 방사선 치료보조, 항바이러스, 항진균활성 중 적어도 하나 이상의 활성을 갖는 것임을 특징으로 하는 조성물.
제11항에 있어서, 상기 조성물은 조혈촉진 활성을 갖는 것임을 특징으로 하는 조성물
제11항에 있어서, 상기 조성물은 백혈구나 혈소판 감소증 등 항암제의 부작용을 억제하는 활성을 갖는 것임을 특징으로 하는 조성물
제11항에 있어서, 상기 조성물은 방사선으로부터 골수 및 비장을 보호하는 활성을 갖는 것임을 특징으로 하는 조성물
제11항에 있어서, 상기 조성물은 자연살해 T 세포, 자연살해세포, 대식세포, T세포, B 세포의 면역계의 활성을 증강시키는 것을 특징으로 하는 조성물
제11항에 있어서, 상기 조성물은 면역증강된 자연살해 T 세포, 자연살해세포, 대식세포, T세포, B 세포의 항암물질인 종양괴사인자, 감마인터페론 및 인터루킨1의 분비를 촉진시켜 항암활성, 항진균 및 항바이러스성을 보이는 것을특징으로 하는 조성물
제1항 또는 제7항에 있어서, 제2의 항암제 및/또는 항암보조제를 추가로 포함함을 특징으로 조성물.
상기 제17항에 있어서, 제 2 의 항암제는 탁솔 또는 시스플라틴(Cisplatin) 중에서 선택된 하나 이상인 것임을 특징으로 하는 조성물
삭제
삭제
제1항 또는 제7항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 것임을 특징으로 하는 조성물.
제21항에 있어서, 식용음료 또는 식품의 형태로서 제제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제7항에 따른 조성물을 활성성분으로 포함하고 선택적으로 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 조혈 촉진제, 골수방어제, 면역증강제, 항암보조제, 방사선치료보조제, 항바이러스제, 항진균제, 암 예방 및 치료용 제제.
제23항에 있어서, 제산제를 추가로 포함함을 특징으로 하는 제제
제23항에 있어서, 상기 제제가 정제, 산제, 경질 또는 연질 캅셀제, 현탁제, 주사용 제제, 유화액, 비경구 투여용의 단위 투여형 또는 수회 투여형 제제인 것을 특징으로 하는 조혈촉진제, 골수 방어제, 면역증강제, 항암보조제, 방사선치료보조제, 항바이러스제, 항진균제, 암 예방 및 치료용 제제.
제23항 내지 제25항 중 어느 하나에 있어서, 활성성분의 함량이 성인 체중 1Kg 당 0.1~6000 mg/일 범위로 투여됨을 특징으로 하는 조혈촉진제, 골수방어제, 면역증강제, 항암보조제, 방사선치료보조제, 항바이러스제, 항진균제, 암 예방 및 치료용 제제.
a) 오가피, 가시오가피 속 식물의 잎, 줄기 및/또는 열매를 가열처리하여 조 추출물을 얻는 단계, b) 선택적으로, 상기 추출물을 농축하는 단계, c) 저급알콜을 사용하여 조 추출물에 포함된 다당체를 침전, 분리시키는 단계, 및 d) 저급알콜을 제거하여 다당체 분획을 얻는 단계를 포함하는, 조혈촉진제, 골수방어제, 면역증강제, 항암보조제, 방사선치료보조제, 암 예방 및 치료용 성분으로서 제1항에 따른 오가피 또는 가시오가피 속 식물의 추출물의 제조방법.
제 27항에 있어서, 상기 c)단계 및/또는 d)단계 이전에 음이온 교환 크로마토그래피법에 의한 정제단계와 투석단계를 추가로 포함함을 특징으로 하는 방법
제27항에 있어서, 상기 가열 처리는 오가피 또는 가시오가피 속 식물의 잎, 줄기 및/또는 열매에 증류수를 넣어 50 내지 180℃ 온도범위에서, 0.5 내지 20 시간 동안 가열추출하는 것임을 특징으로 하는 제조방법.
삭제
삭제
제27항 내지 제29항 중 어느 하나에 따른 제조방법에 의해서 제조된 오가피, 가시오가피속 식물 추출물로서, 상기 추출물은 중성당 함량이 20 내지 80%이고, 산성당 함량은 20 내지 75%, 그리고 단백질함량은 0.0001 내지 2%로 구성됨을 특징으로 하는 추출물.
삭제
제32항에 있어서, 상기 추출물은 오가피 및/또는 가시오가피 다당체로서, 중성당 함량이 40 내지 80 중량%이고, 산성당 함량은 20 내지 60 중량%, 그리고 단백질 함량은 0.0001 내지 1 중량%로 구성됨을 특징으로 하는 추출물.
제34항에 있어서, 상기 오가피 다당체의 분자량은 250,000 Da 내지 6,000 Da 임을 특징으로 하는 추출물.
제34항에 있어서, 상기 가시오가피 다당체의 분자량은 758,000 Da 내지 1,600 Da 임을 특징으로 하는 추출물.
제32항에 있어서, 상기 추출물은 오가피 열매 다당체로서, 중성당 함량이 20 내지 40 중량%, 산성당 함량은 55 내지 75 중량%, 그리고 단백질 함량은 0.0001 내지 1 중량%로 구성됨을 특징으로 하는 추출물.
제37항에 있어서, 상기 오가피 열매 다당체의 분자량은 758,000 Da 내지 3,000 Da 임을 특징으로 하는 추출물.