RU2520625C2 - Композиция для профилактики или лечения злокачественных новообразований, содержащая в качестве активного ингредиента линию стволовых растительных клеток, полученных из камбия panax ginseng, включая дикий женьшень или женьшень - Google Patents
Композиция для профилактики или лечения злокачественных новообразований, содержащая в качестве активного ингредиента линию стволовых растительных клеток, полученных из камбия panax ginseng, включая дикий женьшень или женьшень Download PDFInfo
- Publication number
- RU2520625C2 RU2520625C2 RU2011122688/15A RU2011122688A RU2520625C2 RU 2520625 C2 RU2520625 C2 RU 2520625C2 RU 2011122688/15 A RU2011122688/15 A RU 2011122688/15A RU 2011122688 A RU2011122688 A RU 2011122688A RU 2520625 C2 RU2520625 C2 RU 2520625C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cell line
- cambium
- ginseng
- cancer
- derived
- Prior art date
Links
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 title claims abstract description 101
- 240000004371 Panax ginseng Species 0.000 title claims abstract description 98
- 235000002789 Panax ginseng Nutrition 0.000 title claims abstract description 41
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 39
- 230000012010 growth Effects 0.000 title claims abstract description 20
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 title claims description 60
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 title claims description 60
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 title claims 3
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 title abstract description 27
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 title description 4
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 41
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 26
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 239
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 56
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 51
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 44
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 36
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 33
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000003617 indole-3-acetic acid Substances 0.000 claims description 14
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 230000008723 osmotic stress Effects 0.000 claims description 13
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 11
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 10
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 9
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 9
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 230000035882 stress Effects 0.000 claims description 9
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 8
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 claims description 8
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims description 7
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 claims description 7
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 6
- JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N indole-3-butyric acid Chemical compound C1=CC=C2C(CCCC(=O)O)=CNC2=C1 JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- OVSKIKFHRZPJSS-UHFFFAOYSA-N 2,4-D Chemical compound OC(=O)COC1=CC=C(Cl)C=C1Cl OVSKIKFHRZPJSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 5
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 239000005595 Picloram Substances 0.000 claims description 3
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- NQQVFXUMIDALNH-UHFFFAOYSA-N picloram Chemical compound NC1=C(Cl)C(Cl)=NC(C(O)=O)=C1Cl NQQVFXUMIDALNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 claims 2
- 235000002791 Panax Nutrition 0.000 claims 1
- 241000208343 Panax Species 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 43
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 10
- 230000036541 health Effects 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 17
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 16
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 13
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 11
- 239000005631 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid Substances 0.000 description 9
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 9
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 9
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 9
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 9
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 8
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 8
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 7
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 7
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 6
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 6
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 6
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 6
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 4
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 4
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 4
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 4
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 4
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 4
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 3
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 3
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 3
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 3
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 239000000401 methanolic extract Substances 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 239000002357 osmotic agent Substances 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 3
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 150000001447 alkali salts Chemical group 0.000 description 2
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 239000007963 capsule composition Substances 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002338 cryopreservative effect Effects 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 235000019264 food flavour enhancer Nutrition 0.000 description 2
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 2
- 229940107131 ginseng root Drugs 0.000 description 2
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 235000021073 macronutrients Nutrition 0.000 description 2
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 2
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 2
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019171 pyridoxine hydrochloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000011764 pyridoxine hydrochloride Substances 0.000 description 2
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M sodium benzoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000004299 sodium benzoate Substances 0.000 description 2
- 235000010234 sodium benzoate Nutrition 0.000 description 2
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 2
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 2
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 2
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 2
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 description 2
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 1
- 206010006002 Bone pain Diseases 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100039397 Gap junction beta-3 protein Human genes 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 101100061841 Homo sapiens GJB3 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 235000019759 Maize starch Nutrition 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 208000036626 Mental retardation Diseases 0.000 description 1
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 1
- NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N N-[2-oxo-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 208000012886 Vertigo Diseases 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 1
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 1
- 230000002744 anti-aggregatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 229940120638 avastin Drugs 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 230000008468 bone growth Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002520 cambial effect Effects 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 208000030381 cutaneous melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000032459 dedifferentiation Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 201000010934 exostosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012595 freezing medium Substances 0.000 description 1
- 235000020510 functional beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 208000037824 growth disorder Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 201000010930 hyperostosis Diseases 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 description 1
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 description 1
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 1
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008816 organ damage Effects 0.000 description 1
- 230000005305 organ development Effects 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 210000003516 pericardium Anatomy 0.000 description 1
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000004161 plant tissue culture Methods 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 201000003708 skin melanoma Diseases 0.000 description 1
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 231100000889 vertigo Toxicity 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/25—Araliaceae (Ginseng family), e.g. ivy, aralia, schefflera or tetrapanax
- A61K36/258—Panax (ginseng)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/005—Methods for micropropagation; Vegetative plant propagation using cell or tissue culture techniques
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/04—Plant cells or tissues
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Abstract
Изобретение относится к композиции для лечения злокачественного новообразования, а также для улучшения состояния при злокачественном состоянии. Фармацевтическая композиция для лечения злокачественного новообразования, которая включает что-либо одно или несколько из числа выбранных из группы, включающей клеточную линию, ее экстракт и ее культуральную среду, где клеточная линия получена из камбия Panax ginseng. Функциональный пищевой продукт для улучшения состояния при злокачественном новообразовании. Вышеописанные композиция и функциональный продукт эффективны для лечения злокачественного новообразования и для улучшения состояния при злокачественном состоянии. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 7 ил., 13 табл., 2 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к композиции для профилактики или лечения злокачественного новообразования, которая содержит в качестве активного ингредиента клеточную линию, полученную из камбия Panax ginseng; ее лизат; ее экстракт; или ее культуральную среду.
Предшествующий уровень техники
Злокачественные новообразования относятся к заболеваниям, которые являются основной причиной смерти современных людей и которые вызваны мутациями в генах, регулирующих нормальный клеточный рост. Они определяются как злокачественная опухоль, которая не следует типовым вариантам дифференцировки и роста клеток.
Традиционно, злокачественные новообразования лечили одной или комбинацией трех основных терапий: хирургией, радиотерапией и химиотерапией. В частности, лечение злокачественных новообразований хирургией, т.е. способом удаления опухолевой ткани, является весьма эффективным при удалении опухолей из конкретных участков, например молочной железы, толстой кишки и кожи. Однако хирургия не подходит для лечения опухолей, находящихся в участках, таких как позвоночник, или для лечения рассеянных опухолей. В некоторых случаях, при хирургической терапии возникает проблема побочных эффектов, например, при удалении органа и невозможности предотвратить метастазирование опухоли.
При этом радиотерапию применяют для острых воспалительных заболеваний, доброкачественных и злокачественных опухолей, дисфункций, аллергических заболеваний и т.п. Как правило, такую радиотерапию применяют для злокачественных опухолей, состоящих из быстро делящихся клеток. Однако радиотерапия может привести к ослаблению или потере функции нормальной ткани и вызвать заболевания кожи в участках лечения, к которым она была применена. Кроме того, в случае младенцев, у которых прогрессирует развитие органов, радиотерапия может вызвать серьезные побочные эффекты, такие как умственная отсталость или нарушения роста костей. Кроме того, она причиняет боль пациенту во время лечения.
Кроме того, также широко применяется химиотерапия при лечении рака молочной железы, легких и яичек путем нарушения репликации и метастазирования злокачественных клеток. Однако известно, что противоопухолевые средства демонстрируют токсичность не только против злокачественных клеток, но и против нормальных клеток пациентов. Кроме того, такая химиотерапия, как правило, страдает от недостатков, заключающихся в том, что в тяжелых случаях требуется стационарное лечение или требуется применение анальгетиков для облегчения боли.
Таким образом, было проведено множество исследований по разработке новых лекарственных препаратов и составов, обладающих противоопухолевой активностью, которая ингибирует рост злокачественных клеток и убивает злокачественные клетки. В частности, большое внимание получили исследования по разработке противоопухолевых средств, полученных из естественных материалов, которые имеют мало побочных эффектов.
Соответственно, авторы предприняли много усилий для разработки противоопухолевой композиции из естественного материала, которая обладает минимальными побочными эффектами по сравнению с обычными противоопухолевыми средствами и демонстрирует прекрасную противоопухолевую активность из-за своего вовлечения в механизм развития злокачественного новообразования. В результате авторы обнаружили, что гомогенная клеточная линия, полученная из камбия Panax ginseng, включающего дикий женьшень или женьшень, ее лизат, ее экстракт и ее культуру, демонстрирует активность, уничтожающую злокачественные клетки, в чем и заключается настоящее изобретение.
Сущность изобретения
Задача настоящего изобретения заключается в обеспечении полученной из естественного материала композиции, которая обладает минимальными побочными эффектами по сравнению с обычным терапевтическим агентом для лечения злокачественного новообразования и демонстрирует активность для профилактики и лечения злокачественного новообразования.
Для достижения указанной задачи, в одном аспекте, настоящее изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию для профилактики или лечения злокачественного новообразования, которая содержит любой или несколько из перечисленного в группе, состоящей из клеточной линии, которая получена из камбия Panax ginseng и имеет представленные ниже характеристики; ее лизата; ее экстракта; и ее культуральной среды:
(a) находится в изначально недифференцированном состоянии;
(b) морфологически характеризуется многочисленными вакуолями.
В другом аспекте настоящее изобретение обеспечивает обладающий функциональными свойствами продукт питания для профилактики злокачественного новообразования или для улучшения состояния при злокачественном новообразовании, который содержит любой или несколько из перечисленного, выбранного из группы, состоящей из указанной клеточной линии; указанного лизата; указанного экстракта; и указанной культуральной среды.
В еще одном аспекте настоящее изобретение обеспечивает применение любого из указанной клеточной линии, указанного лизата; указанного экстракта; и указанной культуральной среды для профилактики или лечения злокачественного новообразования.
В еще одном аспекте настоящее изобретение обеспечивает способ для профилактики или лечения злокачественного новообразования, где способ включает применение любого или нескольких из перечисленного, выбранного из группы, состоящей из указанной клеточной линии; указанного лизата; указанного экстракта; и указанной культуральной среды.
Другие особенности и воплощения настоящего изобретения будут видны из следующего детального описания и из приложенной формулы изобретения.
Краткое описание чертежей
На фиг.1 представлены фотографии, демонстрирующие процесс индукции клеточной линии по настоящему изобретению (а), клеточной линии, полученной из камбия дикого женьшеня ((b)А) и каллюсной клеточной линии, полученной из семядоли женьшеня (центр биологических ресурсов КСТС PC10224).
На фиг.2 показано значение ЕС50 для клеточной линии, полученной из камбия дикого женьшеня (U2), и значение ЕС50 для 8 экстрактов культивируемого корня дикого женьшеня, что говорит об активности, ингибирующей клеточную пролиферацию опухолевых клеточных линий (НСС:гепатоклеточная карцинома; -:без оценки).
Фиг.3 является изображениями ПЭТ-КТ (позитронно-эмиссионная томография-компьютерная томография) пациентов с лимфомой до (А и С) и после (В и D) введения клеточной линии, полученной из камбия дикого женьшеня.
Фиг.4 является графиком, демонстрирующим количество лейкоцитов и тромбоцитов в крови пациентов с острым миелоидным лейкозом в соответствии с длительностью введения клеточной линии, полученной из камбия дикого женьшеня.
Фиг.5 является изображениями ПЭТ-КТ пациентов с раком легких до (А) и после (В) введения клеточной линии, полученной из камбия дикого женьшеня.
Фиг.6 является изображениями РЕТ-СТ пациентов с раком прямой кишки до (А) и после (В) введения клеточной линии, полученной из камбия дикого женьшеня.
Фиг.7 является изображениями, полученными с помощью гастрофиброскопа у пациентов с раком прямой кишки до (А) и после (В) введения клеточной линии, полученной из камбия дикого женьшеня.
Подробное описание изобретения и предпочтительных вариантов воплощения
Если иное не определено, все технические и научные термины, использованные здесь, имеют тот же смысл, который вкладывается в них обычным специалистом в данной области. Как правило, определения различных терминов, используемых здесь, хорошо известны и традиционно используются в данной области.
Определения основных терминов в подробном описании изобретения заключаются в следующем.
При использовании в данном документе, термин «камбий» относится к ткани, которая утолщает стебель и корень, что позволяет растению расти объемно. Ранее сообщалось, что если камбий, меристема, в которой происходит наиболее активное деление клеток, использовать в качестве экспланта для культуры растительной клеточной ткани, то возможно быстрое и массовое получение клеток (Патент Кореи 10-0533120).
При использовании в данном документе, термин «лизат» относится к клеточному лизату, полученному разрушением клеток химическим способом, например детергентом, или физическим способом. Термин «экстракт» клеточной линии относится к веществу, полученному растворением клеток в растворителе и отделением клеток, при этом экстракт может быть сконцентрирован дистилляцией или выпариванием. В данном документе клеточная линия включает клеточную линию, которая проходит через дифференцировку в состоянии культуры или которая обладает улучшенной способностью продуцировать и/или секретировать полезные вещества. Термин «культуральная среда» клеточной линии при использовании в данном документе относится к среде клеточной линии, в которой клеточную линию удаляют после культивирования клеток.
При использовании в данном документе, термин «врожденно недифференцированный» означает, что клетки не находятся в недифференцированном состоянии в ходе процесса дедифференцировки, но изначально поддерживались в предифференцированном состоянии.
В одном аспекте настоящее изобретение обеспечивает композицию для профилактики или лечения злокачественного новообразования, которая содержит, в качестве активного ингредиента, любое или несколько из перечисленного: клеточную линию, полученную из камбия Panax ginseng, ее лизат, ее экстракт и ее культуральную среду. В настоящем изобретении Panax ginseng включает дикий женьшень или женьшень (Lian M.L. et al., J. Plant Biology, 45:201, 2002; Han J.Y. et al., J. Plant Biology, 49:26, 2006; Teng W.L. et al., Tissue and Organ Culture, 68:233, 2002). В настоящем изобретении, дикий женьшень или женьшень включает растущий в открытом поле настоящий дикий женьшень или женьшень, культивируемый в виде ткани (придаточный корень и клеточная линия, полученная из придаточного корня).
Клеточная линия, полученная из камбия Panax ginseng в соответствии с настоящим изобретением, обладает следующими характеристиками: (а) находится во врожденно недифференцированном состоянии; и (b) морфологически характеризуется большим количеством вакуолей. Полученная из камбия Panax ginseng клеточная линия по настоящему изобретению дополнительно характеризуется тем, что: (а) находится в виде одиночных клеток в суспензионной культуре; (b) имеет слабую чувствительность к механическому воздействию в биореакторе по сравнению с клеточными линиями, полученными из тканей, отличных от камбия Panax ginseng; (с) обладает более высокой скоростью роста по сравнению с клеточными линиями, полученными из тканей, отличных от камбия Panax ginseng, и стабильно культивируется. Кроме того, клеточная линия является гомогенной.
В настоящем изобретении, в котором клеточную линию получают способом выделения, включающим стадии (а) получения ткани, содержащей камбий Panax ginseng; (b) культивирования полученной содержащей камбий ткани в среде, содержащей индол-3-уксусную кислоту (ИУК) или индол-3-маслянную кислоту (ИМК), для индукции полученной из камбия клеточной линии, где осмотический стресс применяют к ткани, содержащей камбий, в ходе, до или после культивирования; и (с) сбора индуцированной, полученной из камбия клеточной линии.
На стадии (b) оригинального способа применение осмотического стресса проводят в целях индукции клеточной линии именно в камбии. Предпочтительно, если стресс осуществляют перед культивированием ткани в содержащей ИУК или ИМК среде, так чтобы основные ткани (т.е. первичная кора, флоэма, ксилема и паренхима), за исключением камбия, теряли способность к делению и таким образом превращались в некроз до обработки камбиальными гормонами для деления, таким как ИУК или ИМК. При этом предпочтительно, если осмотический агент используют в концентрации 0,5-2 М, а осмотический стресс применяют на холоду или при комнатной температуре в течение 16-24 часов, а затем снимают. Однако сфера данного изобретения не ограничивается этим, потому что концентрация, время обработки и температура осмотического агента могут различаться в зависимости от типа растения и состояния ткани. На стадии (b) ИУК или ИМК предпочтительно содержатся в количестве 0,1-5 мг/мл.
Кроме того, предпочтительно, если стадию (с) проводят пролиферацией индуцированной полученной из камбия клеточной линии в среде, содержащей один или несколько из перечисленного: 2,4 D (2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота); пиклорам и ИМК), после чего проводят сбор полученной из камбия клеточной линии. В данном документе, любое из 2,4-D, пиклорама и ИМК предпочтительно применяют в количестве 1-5 мг/л, а более предпочтительно - 2 мг/л.
Среда, применяемая в настоящем изобретении, является обычной средой для культуры растительной ткани, и примеры ее могут включать, не ограничиваясь перечисленным, среду N6, среду SH, среду MS, среду АА, среду LS, среду В5, среду WPM, среду LP, среду White, среду GD, среду DKW, среду DCR и т.д.
В настоящем изобретении экстракт предпочтительно получают с помощью растворителя выбранного из группы, состоящей из дистиллированной воды, спирта, такого как низший спирт или т.п., ацетона, ДМСО (диметилсульфоксида) и их смешанных растворителей. В данном документе низший спирт включает спирты, имеющие от 1 до 5 атомов углерода, такой как метанол и этанол.
В одном примере настоящего изобретения клеточные линии из рака поджелудочной железы, рака легкий, рака печени, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака шейки матки, рака кожи и рака простаты были обработаны экстрактом из клеточной линии, полученной из камбия Panax ginseng в соответствии с настоящим изобретением. В результате было отмечено, что экстракт клеточной линии в соответствии с настоящим изобретением обладает активностью, убивающей злокачественные клетки во всех опухолевых клеточных линиях. Также в другом примере настоящего изобретения наблюдали, что культуральная среда клеточной линии, полученной из камбия Panax ginseng в соответствии с настоящим изобретением, обладает активностью, убивающей злокачественные клетки клеточных линий рака молочной железы и рака поджелудочной железы.
Кроме того, в еще одном примере настоящего изобретения клеточную линию, полученную из камбия Panax ginseng в соответствии с настоящим изобретением, вводили пациентам, которым был поставлен диагноз злокачественное новообразование (например, лимфома, рак легких, рак прямой кишки и рак желудка и т.п.) и затем получали ПЭТ-КТ изображения. В результате наблюдали, что клеточная линия, полученная из камбия Panax ginseng, ингибирует или уменьшает образование опухоли или рост опухоли путем уничтожения клеточной линии in vivo (например, в пациенте), и уровни в крови измеряли после введения пациенту, которому был поставлен диагноз лейкоз, клеточной линии, полученной из камбия Panax ginseng в соответствии с настоящим изобретением. В результате наблюдали, что уровни в крови становились нормальными. Другими словами, клеточная линия в соответствии с настоящим изобретением была эффективной для профилактики и лечения рака поджелудочной железы, рака печени, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака шейки матки, рака кожи, рака простаты, лимфомы, лейкоза, рака легких, рака прямой кишки, рака желудка, без ограничения перечисленным.
Соответственно, было обнаружено, как описано выше, что клеточные линии, их экстракты, и их культуральные среды обладают активностью для профилактики и лечения злокачественных новообразований. Таким образом, хотя в настоящем изобретении нет конкретного примера, показывающего, что композиция, содержащая лизат клеточной линии, демонстрирует эффект профилактики и лечения злокачественного новообразования, для специалиста в данной области будет очевидно, что композиция, содержащая лизат клеточной линии по настоящему изобретению, сможет продемонстрировать эффект профилактики и лечения злокачественного новообразования.
Композиция для профилактики или лечения злокачественного новообразования, содержащая любое или несколько из перечисленного: клеточную линию по настоящему изобретению; ее лизат; ее экстракт; и ее культуральную среду, может быть представлена в виде фармацевтической композиции, содержащей любое или несколько из перечисленного в группе, состоящей из клеточной линии; ее лизата; ее экстракта; и ее культуральной среды отдельно или в комбинации, по меньшей мере, с одним фармацевтически приемлемым носителем, наполнителем или разбавителем. Клеточная линия, ее лизат, ее экстракт или ее культуральная среда может содержаться в виде фармацевтической композиции в фармацевтически эффективном количестве в зависимости от заболевания и его тяжести, возраста пациента, массы, состояния здоровья и пола, пути введения и периода лечения.
При использовании в данном документе термин «фармацевтически приемлемая композиция» относится к композиции, которая является физиологически приемлемой и не вызывает желудочные нарушения, аллергические реакции, такие как вертиго, или подобные реакции, при введении человеку. Примеры указанного носителя, наполнителя или разбавителя включают лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, ксилит, эритрит, малтит, крахмал, акациевую камедь, алгинат, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлозу, метилцеллюлозу, поливинилпирролидон, воду, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стерат магния и минеральные масла.
Фармацевтическая композиция может дополнительно содержать наполнители, средства против агрегации, смазывающие вещества, увлажняющие вещества, отдушки, эмульгаторы и консерванты. Также фармацевтическая композиция настоящего изобретения может быть составлена с помощью способа, хорошо известного в данной области, так чтобы она могла обеспечивать быстрый, устойчивый или с замедленным высвобождением активный ингредиент после введения млекопитающим. Состав может быть в форме порошков, гранул, таблеток, эмульсий, сиропов, аэрозолей, твердых или мягких желатиновых капсул, стерильных растворов для инъекции, стерильных порошков, и т.п.
В другом аспекте настоящее изобретение обеспечивает обладающий функциональными свойствами продукт питания для профилактики злокачественного новообразования или улучшения состояния при злокачественном новообразовании, который содержит любой или несколько из перечисленного выбранного из группы, состоящей из указанной клеточной линии, полученной из камбия Panax ginseng; ее лизата; ее экстракта; и ее культуральной среды.
При использовании в данном документе термин «обладающий функциональными свойствами продукт питания» относится к продукту питания, функциональность которого была улучшена добавлением клеточной линии по настоящему изобретению, ее лизата или ее экстракта.
Примеры
Далее по тексту настоящее изобретение будет описано более подробно с отсылкой на примеры. Для специалиста в данной области будет очевидно, что эти примеры приведены исключительно для иллюстративных целей и не должны трактоваться с ограничением сферы применения настоящего изобретения.
В частности, хотя эффекты профилактики злокачественных новообразований и эффекты ингибирования злокачественных новообразований клеточной линии, полученной из камбия дикого женьшеня, ее экстракта и ее культуральной среды, были подтверждены в представленных ниже примерах, специалисту в данной области будет очевидно, что применение лизата клеточной линии может обеспечить такие результаты, что и полученные с помощью клеточной линии или ее экстракта.
Пример 1. Приготовление клеточной линии, полученной из камбия Panax ginseng
1-1: Подготовка растительного материала.
(1) В «А» фиг.1(а) показан типичный признак дикого женьшеня, использованного в настоящем изобретении. Для использования главного корня приобретенного дикого женьшеня главный корень приобретали, после чего промывали его в проточной воде для удаления с его поверхности земли и других загрязнителей и отмывали поверхность главного корня с помощью жидкого детергента. Затем главный корень оставляли в проточной воде. Отмытую ткань помещали в стерильный флакон в ламинаре и стерилизовали 70% этанолом в течение периода времени от 30 секунд до около 1 минуты. Затем ткань споласкивали стерильной дистиллированной водой и обрабатывали дезинфицирующим раствором, содержащим 1-1,5% гипохлорит натрия в течение около 5-15 минут. В этот момент времени, для того чтобы дать дезинфицирующему раствору эффективно проникнуть в ткань, добавляли несколько капель «TWEEN 20» (полиоксиэтиленсорбитан монолаурат, Junsei, Япония)). После этого ткань споласкивали 3-5 раз стерильной дистиллированной водой. Затем, в целях предотвращения потемнения стерилизованной ткани, стерилизованный главный корень помещали в содержащую антиоксиданты среду для ингибирования потемнения (BIM) и культивировали со встряхиванием в течение от около 30 мин до 1 часа. Затем ткань помещали на стерильный фильтр для удаления воды.
Композиция примененной среды для ингибирования потемнения (BIM) и концентрации его компонентов показаны в таблице 1 ниже.
Таблица 1 | |
Композиция среды BIM и концентрации ее компонентов | |
Композиция | Концентрации |
Соль среды для древесных растений (WPM, McCown) | 1/4 дозировки |
Сахароза | 1% (масс./об.) |
ПВП (поливинилпирролидон) | 0,5% (масс./об.) |
Аскорбиновая кислота | 100 мг/л |
Лимонная кислота | 150 мг/л |
Скорректировать до рН 5,8 |
Здесь, соль добавляли в количестве, соответствующем от 1/4 от общего количества. Затем в целях предотвращения потемнения обработанного материала материал помещали в стерилизованную чашку Петри, содержащую CS-раствор (cutting solution) с антиоксидантами (таблица 2), и очищали. Затем материал разрезали на две равные части и каждую часть разрезали до размера 0,5-0,7 см (ширину) × 0,5-0,7 см (длину) × 0,2-0,5 мм (толщину) таким образом, чтобы каждая отрезанная часть содержала часть камбия, обладающего способностью к делению. На "В" фиг.1(а) показан эксплант, приготовленный разрезанием основного корня дикого женьшеня до вышеуказанного размера таким образом, чтобы эксплант содержал камбий.
Таблица 2 | |
CS (cutting solution) | |
Компонент | Концентрация |
Поливинилпирролидон | 0,5% (масс./об.) |
Аскорбиновая кислота | 100 мг/л |
Лимонная кислота | 150 мг/л |
(2) придаточный корень 100-летнего дикого женьшеня, который содержали в биореакторе, подготовили и поместили в стерилизованную чашку Петри, содержащую CS-раствор таблицы 2, а эксплант, содержащий камбий корня дикого женьшеня, был получен таким же образом, как описано выше.
1-2: Обработка экспланта, содержащего камбий основного корня дикого женьшеня осмотическим агентом
Эксплант, подготовленный в примере 1-1, обрабатывали с помощью осмотического стресса в целях некротизации дифференцированных тканей (флоэмы, кслиемы, паренхимы и т.д.) для того, чтобы позволить выжить только меристемному камбию. Содержащий камбий эксплант промокали в среде для предварительного культивирования (среда 1, таблица 3), размещали затем на фильтровальной бумаге, помещали его во флакон, содержащий 1 М раствор сахарозы (Duchefa, Нидерланды), и обрабатывали осмотическим стрессом в холодном состоянии в течение 16-24 часов. Затем эксплант обрабатывали в 0,05 М растворе сахарозы в течение 5 минут и в 0,1 М растворе сахарозы в течение 5 минут для снятия стресса, вызванного высококонцентрированной сахарозой. Содержащий камбий эксплант после снятия осмотического стресса помещали в среду для предварительного культивирования (среда 1) с последующим промоканием фильтровальной бумагой для удаления влаги.
Таблица 3 | |||
Композиция среды для предварительного культивирования (среда 1) | |||
Композиция | мМ | мг/л | |
Макроэлементы | Ca(NO3)2 | 2,35 | 471,26 |
NH4NO3 | 5,00 | 400,00 | |
MgSO4*7H2O | 1,50 | 180,54 | |
K2SO4 | 5,68 | 990,00 | |
CaCl2*2H2O | 0,65 | 72,50 | |
KH2PO4 | 1,25 | 170,00 | |
Композиция | мкМ | МГ/Л | |
Микроэлементы | MnSO4*4H2O | 131,94 | 22,3 |
ZnSO4*7H2O | 29,91 | 8,60 | |
Na2MoO4*2H2O | 1,03 | 0,25 | |
Н2ВО3 | 100,27 | 6,20 | |
CuSO4*5H2O | 1,00 | 0,25 | |
FeNa-EDTA | 100,00 | 36,70 | |
Витамины | Глицин | 26,64 | 2,00 |
Мио-инозитол | 554,94 | 100,00 | |
Никотиновая кислота | 4,06 | 0,50 | |
Пиридоксин-HCl | 2,43 | 0,50 | |
Тиамин-HCl | 2,96 | 1,00 |
1-3: Индукция полученной из камбия гомогенной клеточной линии в экспланте, содержащем камбий основного корня женьшеня.
Для того чтобы индуцировать полученную из камбия гомогенную клеточную линию, обладающую способностью к делению, эксплант, подвергнутый осмотическому стрессу в примере 1-2, переносили в среду для индукции клеточной линии (среда 2, таблица 4). Композиция использованной среды показана в таблице 5 ниже. Перенесенный эксплант культивировали в темноте при температуре 22±1°С.
Таблица 4 | |
Композиция среды (среда 2) для индукции гомогенной клеточной линии полученной из камбия | |
Компонент | Концентрация и состояние |
Соль | полная концентрация среды для древесных растений (WPM) |
Сахароза | 3% (масс./об.) |
IAA (индолил-3-уксусная кислота) | 2 мг/л |
РН | 5,8 |
Гелрит | 0,3% (масс./об.) |
Аскорбиновая кислота | 100 мг/л |
Лимонная кислота | 150 мг/л |
В таблице 5 ниже показано, что в эксплантах, сразу перенесенных в среду для индукции клеточной линии из камбия (среда 2) без проведения обработки осмотическим стрессом, желтая цветная реакция была показана в отношении камбия на начальном стадии (2-3 дня) после переноса, а затем с течением времени весь эксплант желтел. Эксплант, который показал реакцию желтого цвета в отношении камбия, субкультивировали в оптимальной среде (среда 3) для выделения и пролиферации полученной из камбия клеточной линии для того, чтобы индуцировать и пролиферировать полученную из камбия клеточную линию, но феномен потемнения становится серьезным, и любая реакция, отличная от реакции потемнения, не была продемонстрирована с течением времени.
Однако, после приложения и снятия осмотического стресса было отмечено, как показано в таблице 5, что в экспланте, инокулированном в среду для индукции клеточной линии из камбия, гомогенная клеточная линия специфично индуцировалась только в камбии, без какой-либо индукции в других тканях. В частности, было отмечено, что в перенесенном экспланте, обработанном осмотическим стрессом и с которого осмотический стресс был снят, камбий экспланта становится светло-желтым после 3-7 дней в культуре, а через 7-14 дней после этого в части, которая меняет цвет на светло-желтый, индуцируется круглоклеточная линия. В данном документе такие же результаты были получены как для экспланта, содержащего камбий из настоящего женьшеня, растущего под открытым небом, так и для экспланта, содержащего камбий из придаточного корня дикого женьшеня. «С» фиг.1(а) показано, что гомогенную клеточную линию, имеющую специфичную для камбия способность к делению, индуцировали в экспланте, содержащем камбий дикого женьшеня.
При этом эксплант культивировали в среде, содержащей 2,4-D, которая не являлась средой для индукции гомогенной клеточной линии и которую применяли в обычной культуре Panax ginseng, включая женьшень и дикий женьшень. В этом случае было отмечено, что весь эксплант начал желтеть через 7-10 дней культивирования, а через около 7-14 дней клетки индуцировались по всему поперечному сечению.
1-4: Пролиферация выделенной гомогенной клеточной линии, полученной из камбия дикого женьшеня.
Полученной из камбия гомогенной клеточной линии, обладающей способностью к делению, индуцированной в примере 1-3, позволяли пролиферировать. Для пролиферации использовали оптимальную среду (таблица 7) для пролиферации полученной из камбия гомогенной клеточной линии, обладающей способностью к делению, которая содержала композицию основных солей (таблица 6). 2,4-D в таблице 7 использовали для пролиферации гомогенной клеточной линии, полученной из камбия выращиваемого в открытом поле истинного дикого женьшеня, а ИМК в таблице 7 применяли для пролиферации гомогенной клеточной линии, полученной из придаточного корня дикого женьшеня.
Таблица 6 | |||
Композиция основных солей оптимальной среды для выделения и пролиферации полученной из камбия гомогенной клеточной линии, обладающей способностью к делению | |||
Композиция | мМ | мг/л | |
Макроэлементы | CaCl2*2H2O | 2,99 | 332,02 |
KH2PO4 | 1,25 | 170 | |
KNO3 | 18,79 | 1900 | |
MgSO4 | 1,50 | 180,54 | |
NH4NO3 | 20,61 | 1650 | |
Композиция | мкМ | мг/л | |
Микроэлементы | CoCl2*6H2O | 0,11 | 0,025 |
CuSO4*5H2O | 0,10 | 0,03 | |
FeNa-EDTA | 100,00 | 36,7 | |
Н3ВО3 | 100,27 | 6,2 | |
KI | 5,00 | 0,83 | |
MnSO4*4H2O | 100,00 | 16,9 | |
Na2MoO4*2H2O | 1,03 | 0,25 | |
ZnSO4*7H2O | 29,91 | 8,6 | |
Витамины | Глицин | 26,64 | 2 |
Мио-инозитол | 554,94 | 100 | |
Никотиновая кислота | 4,06 | 0,5 | |
Пиридоксин-HCl | 2,43 | 0,50 | |
Тиамин-HCl | 0,30 | 0,1 |
Таблица 7 | |
Композиция оптимальной среды (среды 3) для выделения и пролиферации полученной из камбия гомогенной клеточной линии, обладающей способностью к делению | |
Компонент | Концентрация и состояние |
Соль | полная концентрация MS |
Сахароза | 3% (масс./об.) |
2,4-D (2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота) | 2 мг/л |
РН | 5,8 |
Гелрит | 0,3% (масс./об.) |
Аскорбиновая кислота | 100 мг/л |
Лимонная кислота | 150 мг/л |
Как показано в «С» фиг.1(а), после того как гомогенная клеточная линия была специально индуцирована только в камбии с помощью обработки осмотическим стрессом и средой 2, гомогенную клеточную линию субкультивировали в среде 3, как показано в таблице 7. В результате обладающая способностью к делению гомогенная клеточная линия, полученная из камбия, постоянно делилась и пролиферировала, и таким образом, полученную из камбия гомогенную клеточную линию, обладающую способностью к делению, можно выделить через около 10-20 дней культивирования. Выделенной таким образом гомогенной клеточной линии, полученной из камбия дикого женьшеня, вновь было позволено пролиферировать при культивировании в той же самой среде. На «D» фиг.1(а) показано, что изолированной камбий-специфичной гомогенной клеточной линии было позволено пролиферировать в среде 3, представленной в таблице 7.
1-5: Наблюдение характеристик изолированной клеточной линии
Полученную из камбия дикого женьшеня гомогенную клеточную линию помещали во флаконы, содержащие жидкую среду, представленную в таблице 8. После этого клеточную линию культивировали во вращающемся шейкере на скорости 100 об/мин в темноте при 25±1°С. В данном случае интервал пересевания был установлен равным 2 неделям, так чтобы культивируемые клетки могли всегда поддерживать высокую живучесть в экспоненциальной фазе роста. 2,4-D в таблице 8 применяли для пролиферации гомогенной клеточной линии, полученной из камбия выращиваемого в открытом поле настоящего дикого женьшеня, а ИМК в таблице 8 применяли для пролиферации гомогенной клеточной линии, полученной из придаточного корня дикого женьшеня.
При этом каллюс, полученный из семядоли женьшеня, также культивировали в среде 4 таблицы 8 и культивируемый каллюс сравнивали с гомогенной клеточной линией, полученной из камбия дикого женьшеня настоящего изобретения.
Таблица 8 | |
Суспензионная среда для Panax ginseng (среда 4) | |
Компонент | Концентрация и состояние |
Соль | полная концентрация MS |
Сахароза | 3% (масс./об.) |
ИМК (индол-3-уксусная кислота) или 2,4-D (2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота) | 2 мг/л |
РН | 5,8 |
Количественную оценку клеточной агрегации осуществляли с помощью оптического микроскопа (биологический микроскоп СХ31, Olympus, Япония). В результате было отмечено, что, как показано в таблице 9 ниже, более чем 95% клеток клеточной линии, полученной из растущего под в открытом поле настоящего дикого женьшеня, обработанной 2,4-D по настоящему изобретению, находились в одноклеточном состоянии в суспензионной культуре, и более чем 60% клеток клеточной линии, полученной из камбия придаточного корня, обработанной ИМК по настоящему изобретению, также находились в одноклеточном состоянии, что подтверждает факт того, что клеточная линия по настоящему изобретению характеризуются тем, что она находится в одноклеточном состоянии в суспензионной культуре. Также, как показано в «А» фиг.1(b), можно отметить, что клеточная линия, полученная из камбия растущего в открытом поле настоящего дикого женьшеня, обработанная 2,4-D, и клеточная линия, полученная из камбия придаточного корня, обработанная ИМК, морфологически характеризовались множественными вакуолями и находились в недифференцированном состоянии. С другой стороны, в каллюсе, полученном из семядоли женьшеня (Центр Биологических Ресурсов КСТС PC 10224), множественные вакуоли не наблюдались, а наблюдалась одиночная большая вакуоль, как показано в «В» фиг.1(b).
Таблица 9 | ||||
Тип клеточных агрегатов длительных культур Panax ginseng | ||||
Большие клеточные агрегаты | Средние клеточные агрегаты | Малые клеточные агрегаты | Одноклеточная популяция | Источник экспланта |
90% | 7% | 2% | 1% | Семядоля |
0 | 0 | 5% | 95% | камбий (обработка 2,4-D) |
5% | 10% | 25% | 60% | камбий (обработка ИМК) |
Большие клеточные агрегаты, размер больше чем 1,5×103 мкм;
Средние клеточные агрегаты, 1×103 мкм;
Малые клеточные агрегаты, 4×102 мкм<размер <1×103 мкм
При этом для оценки возможности масштабирования выращивания культуры каллюс, полученный из семядоли женьшеня, и клеточная линия, полученная из камбия дикого женьшеня настоящего изобретения, культивировали в аэрлифтном биореакторе (Swig-Won Cytec, Корея) с внутренним объемом 3 л. Используемую в культуре жидкую среду, представленную в таблице 8, выдерживали в темноте при 25±1°С.
В результате, как показано в таблице 10 ниже, время удвоения клеточной культуры, полученной из семядоли женьшеня, составило 21 день в колбе, а в биореакторе - 28 дней. Другими словами, было видно, что при культивировании во флаконах гомогенная клеточная линия, полученная из камбия по настоящему изобретению, демонстрировала в около 3-5 раз более высокую скорость роста по сравнению с клеточными линиями, полученными из других тканей, а при культивировании в реакторе клеточная линия, полученная из камбия по настоящему изобретению, демонстрировала в 5-9 раз более высокую скорость роста по сравнению с клеточными линиями, полученными из тканей, отличных от камбия. Считается, что так происходит, потому что жизнеспособность клеток быстро уменьшается из-за образования кольца роста в реакторе, из-за агрегации растительных клеток в культуре и из-за чувствительности твердых клеточных стенок к механическому воздействию.
При этом время удвоения гомогенной клеточной культуры, полученной из камбия дикого женьшеня, выращенного в открытом поле, обработанной 2,4-D по настоящему изобретению, составило 3-4 дня в реакторе, а время удвоения гомогенной клеточной культуры, полученной из придаточного корня дикого женьшеня, обработанной ИМК, составило 5-6 дней в реакторе, что не отличалось от времени удвоения в колбе или даже было меньше по сравнению со временем удвоения в колбе. Гомогенная клеточная линия, полученная из камбия, формирует очень небольшие по площади кольца роста в биореакторе, и кольца на внутренней стенке легко удалялись простым путем - встряхиванием среды в биореакторе. Также было показано, что клеточная линия настоящего изобретения обладала низкой способностью к агрегации и содержала большое количество вакуолей и, таким образом, обладала низкой чувствительностью к механическому воздействию, так что жизнеспособность клеток не уменьшалась.
Другими словами, было видно, что полученная из камбия клеточная линия по настоящему изобретению обладала низкой чувствительностью к механическому воздействию, которое являлось результатом встряхивания в биореакторе для масштабной культуры, и, таким образом, клеточная линия может быть произведена в биореакторе быстро в больших количествах. Соответственно, было видно, что полученная из камбия клеточная линия по настоящему изобретению обладала в 5-9 раз более низкой чувствительностью к механическому воздействию по сравнению с клеточными линиями, полученными из тканей, отличных от камбия.
Таблица 10 | ||
Время удвоения клеточных линий, полученных из камбия и из семядоли женьшеня в жидкой суспензионной культуре и в биореакторе | ||
Источник экспланта | время удвоения (дни) | |
колба | Биореактор | |
Семядоля | 21 | 28 |
камбий (обработка 2,4-D) | 5 | 3-4 |
камбий (обработка ИМК) | 7 | 5-6 |
При этом криоконсервировали гетерогенный каллюс, полученный из семядоли (центр биологических ресурсов КСТС PC 10224), и полученную из камбия гомогенную клеточную линию. Суспензионную культуру инкубировали в течение 6-8 дней, после чего переносили в 5 мл криопробирки (Duran, США) в криконсервирующее средство - среду, содержащую 0,5 М глицерин (DUCHEFA, Нидерланды) и 0,5 М ДМСО (DUCHEFA, Нидерланды). Концентрация клеток, перенесенных в криоконсервант, составляла 200 мг/мл. Суспендированные клетки, обработанные криоконсервантом, замораживали путем помещения их в холодильник на 30 минут, после чего их переносили в холодильник глубокой заморозки на 3 часа, а затем выдерживали в жидком азоте.
Затем для оттаивания культивируемые клетки, выдержанные в жидком азоте в течение 20 или более минут, вынимали и размещали в водяной бане с постоянной температурой 40°С и размораживали 1-2 минуты. Для возобновления роста клеток клеточную суспензию фильтровали через стерилизованные воронку и фильтровальную бумагу. Отфильтрованные клетки помещали на твердую питательную среду с фильтровальной бумагой и стабилизировали при комнатной температуре в течение 30 минут, а затем переносили в свежую твердую питательную среду.
В результате гетерогенная клеточная линия, полученная из семядоли женьшеня, не восстановилась, а клеточная линия, полученная из камбия, напротив через 4 недели начала расти и пролиферировать без какой-либо разницы в скорости роста до и после криоконсервации.
Пример 2. Высушивание клеточной линии, полученной из камбия дикого женьшеня, и приготовление экстракта клеточной линии
Клеточную линию, полученную из придаточного корня дикого женьшеня примера 1, сушили и экстрагировали следующим образом.
(1) Приготовление высушенной клеточной линии
(i) клеточную линию, от которой отделяли культуральную среду, лиофилизировали или высушивали нагретым воздухом.
(ii) высушенную клеточную линию размельчали с помощью дробилки.
(2) Приготовление дистиллированного водного экстракта
(i) По 500 г клеточной линии, от которой отделяли культуральную среду, и лиофилизированной или высушенной горячим воздухом клеточной линии экстрагировали в 5000 мл дистиллированной воды с перемешиванием в течение 24 часов.
(ii) После окончания экстракции клеточный раствор центрифугировали при 3000 g в течение 10 минут и надосадочную жидкость собирали, получая, таким образом, дистиллированное водорастворимое вещество.
(iii) Полученное дистиллированное водорастворимое вещество концентрировали в условиях сниженного давления с помощью роторного вакуумного концентратора.
(3) Приготовление этанольного экстракта
(i) По 500 г клеточной линии, от которой отделяли культуральную среду, и лиофилизированной или высушенной горячим воздухом клеточной линии экстрагировали в 5000 мл этанола с перемешиванием в течение 24 часов.
(ii) После окончания экстракции клеточный раствор центрифугировали при 3000 g в течение 10 минут и надосадочную жидкость собирали, получая, таким образом, этанолрастворимое вещество.
(iii) Полученное этанолрастворимое вещество концентрировали в условиях сниженного давления с помощью роторного вакуумного концентратора.
(4) Приготовление метанольного экстракта
(i) По 500 г клеточной линии, от которой отделяли культуральную среду, и лиофилизированной или высушенной горячим воздухом клеточной линии экстрагировали в 5000 мл метанола с перемешиванием в течение 24 часов.
(ii) После окончания экстракции клеточный раствор центрифугировали при 3000 g в течение 10 минут и надосадочную жидкость собирали, получая, таким образом, метанолрастворимое вещество.
(iii) Полученное метанолрастворимое вещество концентрировали в условиях сниженного давления с помощью роторного вакуумного концентратора.
Экспериментальный пример 1: In vitro цитостатическая активность клеточной линии, полученной из камбия Panax ginseng (1)
Для подтверждения цитостатического воздействия на опухолевую клеточную линию клеточной линии, полученной из камбия Panax ginseng, проводили измерение эффективности ингибирования путем добавления метанольного экстракта примера 2-(4) к 8 видам опухолевых клеточных линий.
В этом эксперименте использовали AsPC-1 (рак поджелудочной железы), А549 (рак легких) SK-Hep1 (рак печени), НТ-29 (рак толстой кишки), MDA-MB-231 (рак молочной железы), HeLa (рак шейки матки), А375Р (меланома кожи), Du-145 (рак простаты), предоставленные KCLB (Korean Cell Line Bank), и среды RPM1640 и DMEM, дополненные 10% телячьей сывороткой.
Вначале каждую клеточную линию рассевали на 96-луночный планшет в различных концентрациях в зависимости от скорости роста клеточной линии и культивировали при 37°С в течение 16-24 часов. Затем экстракт в метаноле примера 2-(4) и экстракт растущего в открытом поле истинного дикого женьшеня для контрольной группы разводили в дозы 12 категорий и обрабатывали ими. Экстракт растущего в открытом поле истинного дикого женьшеня предназначен для сравнения эффекта на клеточную линию в соответствии с настоящим изобретением, при этом обычный растущий в открытом поле истинный дикий женьшень и экстракт в метаноле лиофилизированного растущего в открытом поле истинного дикого женьшеня перед использованием готовили так же, как в примере 2-(4).
Через 72 часа 15 мкл раствора красителя МТТ (Promega Corp.) добавляли к каждой лунке и инкубировали в течение 4 часов при 37°С. Затем 100 мкл раствора для солюбилизации/стоп-смеси вносили в каждую лунку и осуществляли инкубирование при 37°С в течение ночи. Поглощение в каждой лунке считывали при 570 нм после подтверждения того, что окрашенный продукт - формазан - был прекрасно солюбилизирован. Поглощение рассчитывали как процент на основе обработанной растворителем группы и представляли как концентрацию образца (ЕС50), когда поглощение образца уменьшалось на 50% по сравнению с обработанной растворителем группой.
В результате, как показано на фиг.2, было подтверждено, что экстракт клеточной линии, полученной из Panax ginseng в соответствии с настоящим изобретением, ингибирует пролиферацию 8 видов опухолевых клеточных линий в концентрации значительно более низкой, чем при использовании придаточных корней дикого женьшеня. В частности, экстракт клеточной линии, полученной из камбия Panax ginseng, демонстрирует активность ингибирования клеточной пролиферации клеточной линии рака толстой кишки, на которой экстракт растущего в открытом поле дикого женьшеня даже при высокой концентрации не давал значение ЕС50.
Соответственно, подтверждено, что клеточная линия, полученная из камбия Panax ginseng, обладает значительно более высокой цитостатической активностью по отношению к опухолевой клеточной линии по сравнению с экстрактом растущего в открытом поле истинного дикого женьшеня и может быть применена в качестве прекрасного противоопухолевого средства.
Экспериментальный пример 2: In vitro цитостатическая активность культуральной среды клеточной линии, полученной из камбия Panax ginseng (2)
В целях проверки активности уничтожения злокачественных клеток культуральной средой клеточной линии, полученной из камбия Panax ginseng, эксперимент проводили в виде следующих процедур.
В этом эксперименте культуральную среду, которую выделяли в процессе получения экстракта клеточной линии в примере 2-(4), применяли в качестве образца, MDA-MB-231 (рак молочной железы) and AsPC-1 (рак поджелудочной железы), предоставленные KCLB, применяли в качестве групп опухолевых клеточных линий, а RPM1640, содержащую 10% телячью сыворотку, и среду DMEM применяли в качестве сред.
Вначале каждую клеточную линию рассевали на 96-луночный планшет в различных концентрациях в зависимости от скорости роста клеточной линии и культивировали при 37°С в течение 16-24 часов. Затем культуральную среду разводили на дозы 12 категорий и обрабатывали ими. Через 72 часа 15 мкл раствора красителя МТТ (Promega Corp.) добавляли к каждой лунке и инкубировали в течение 4 часов при 37°С. Затем 100 мкл раствора для солюбилизации/стоп-смеси вносили в каждую лунку и осуществляли инкубирование при 37°С в течение ночи. Поглощение в каждой лунке считывали при 570 нм после подтверждения того, что окрашенный продукт - формазан - был прекрасно солюбилизирован. Поглощение рассчитывали как процент на основе обработанной растворителем группы и представляли как концентрацию образца (ЕС50), когда поглощение образца уменьшалось на 50% по сравнению с обработанной растворителем группой.
В результате для MDA-MA-231 (рак молочной железы) и AsPC-1 (рак поджелудочной железы) получили значения ЕС50>7,57 мг/мл и >1,0 мг/мл соответственно. Таким образом, подтвердили, что культуральная среда клеточной линии, а также клеточная линия сама по себе в соответствии с настоящим изобретением обладают цитостатической активностью по отношению к опухолевой клеточной линии.
Экспериментальный пример 3: Наблюдение эффекта профилактики и лечения злокачественного новообразования с помощью полученной из камбия Panax ginseng (1) клеточной линии.
Для наблюдения эффекта профилактики и лечения злокачественного новообразования клеточной линией, полученной из камбия Panax ginseng в соответствии с настоящим изобретением, размельченную клеточную линию, полученную в примере 2-(1), вводили в виде порошка пациенту, у которого было диагностировано злокачественное новообразование. Введение осуществляли перорально по 1 г перорально растворенной в воде формы, 3 раза в день (утром, днем и вечером), а подробная дозировка и период даны ниже. При этом было отмечено отсутствие побочного эффекта в течение введения.
3-1: Введение пациенту с лимфомой
Пациентке (г-же Ким, 1957 года рождения), которой 9 января 2004 года поставили диагноз лимфома, перорально вводили порошок сухой клеточной линии по 3 г в день в течение 2 месяцев и не комбинировали с другой противоопухолевой терапией в течение введения. Для наблюдения in vivo активности по уничтожению злокачественных клеток осуществляли ПЭТ-КТ в Медицинском центре университета Ханьяна (Hanyang), до введения и через 2 месяца после введения, соответственно, и сравнивали результаты ПЭТ-КТ.
В результате, как показано на фиг.3, до введения, часть, демонстрирующую аномальный и повышенный метаболизм, детектировали в полости малого таза и в брюшной полости слева. Также злокачественная опухоль была продемонстрирована в перикарде, брюшине и правой почке (фиг.3А и С). Напротив, через 2 месяца введения в соответствии с этим изобретением было отмечено, что часть, демонстрирующая аномальный и повышенный метаболизм, исчезла (фиг.3В и D). Следовательно, эти экспериментальные результаты подтверждают, что клеточная линия в соответствии с настоящим изобретением обладает эффектом профилактики и лечения посредством активности, убивающей злокачественные клетки.
Известно, что в течение введения противоопухолевого средства, как правило, отмечаются побочные эффекты, такие как аномальное увеличение уровней печени и почек. В связи с этим уровни печени и почек определяли регулярно в течение введения клеточной линии в соответствии с настоящим изобретением следующим образом. Как показано в таблице 12, Bil, ALP, AST, ALT и LDH являлись маркерами для уровня печени, a BUN и CRE являлись маркерами для значения печени, и все они были измерены в медицинском центре университета Ханьяна (Hanyang). BUN и CRE измеряли методом определения креатинина сыворотки (Метод Фолин-Ву) AST, ALT и LDH измеряли с помощью «ATBA-200FR» и «HITACHI 7170 Auto Analyzer», ALP измеряли методом детекции сыворотки, а Т.В11 измеряли с помощью тестового раствора «Asanset bilirubin test solution» (Asan Pharm. Co.).
Таблица 11 | ||||||
Нормальное значение | 1 месяц после введения | 38 дней после введения | 45 дней после введения | 75 дней после введения | 105 дней после введения | |
BUN | 7~20 (мг/мл) | 17 | 11 | 14 | 9 | 13 |
CRE | 0,6~1,8 (мг/мл) | 0,9 | 0,9 | 1,0 | 0,9 | 1,1 |
T, Bil | 0,2~1,2 (мг/мл) | 0,3 | 0,2 | 0,2 | 0,4 | 0,2 |
ALP | 30~110 (ЕД./л) | 79 | 78 | 71 | 76 | 75 |
AST | 5~40 (ЕД./л) | 10 | 10 | 18 | 14 | 17 |
ALT | 5~45 (ЕД./л) | 15 | 11 | 23 | 16 | 13 |
LDH | 60~200 (ЕД./л) | 127 | 117 | 139 | 156 | 144 |
В результате, как показано выше в таблице 11, было отмечено, что уровни печени и почек остались на нормальном уровне, что тем самым подтверждает, что клеточная линия в соответствии с настоящим изобретения была нетоксична.
3-2: Введение пациенту с острым миелолейкозом
Пациентке, которой был поставлен диагноз острый миелолейкоз (г-же Ли, 1995 года рождения), перорально вводили по 3 г в день в течение 8 месяцев. Кроме того, для проверки эффекта лечения злокачественного новообразования in vivo измеряли количества лейкоцитов и тромбоцитов до введения и через 1 месяц после введения с помощью автоматического анализатора крови «Celldyn3000» (Abbott, Висбаден, Германия) в соответствии с инструкцией производителя.
Таблица 12 | ||
Количество лейкоцитов | Количество тромбоцитов | |
Нормальное значение | (4,000~10,000/мм5) | (141,000~316,000/мм3) |
1 сентября | 600 | 73000 |
2 сентября | 500 | 42000 |
3 сентября | 400 | 24000 |
4 сентября | 400 | 52000 |
5 сентября | 500 | 36000 |
6 сентября | 400 | 22000 |
7 сентября | 500 | 16000 |
8 сентября | 500 | 58000 |
9 сентября | 300 | 40000 |
10 сентября | 300 | 27000 |
11 сентября | 400 | 40000 |
12 сентября | 600 | 26000 |
13 сентября (дата начала введения клеточной линии) | 300 | 13000 |
14 сентября | 400 | 51000 |
15 сентября | 400 | 33000 |
16 сентября | 400 | 16000 |
17 сентября | 400 | 50000 |
18 сентября | 600 | 30000 |
19 сентября | 1000 | 23000 |
20 сентября | 1700 | 18000 |
21 сентября | 1400 | 57000 |
22 сентября | 6700 | 41000 |
23 сентября | 3900 | 45000 |
26 сентября | 3400 | 121000 |
27 сентября | 4400 | 117000 |
28 сентября | 3400 | 142000 |
29 сентября | 3000 | 164000 |
2 октября | 3000 | 165000 |
17 октября | 4400 | 200000 |
Как показано выше на фиг.4 и в таблице 12, количество лейкоцитов до введения составляло 2000/мм3, и оно значительно повысилось через 9 дней после введения. Через 1 месяц введения количества лейкоцитов и тромбоцитов детектировались на нормальных уровнях (нормальный диапазон количества лейкоцитов: 4000-10000/мм3; нормальный диапазон тромбоцитов: 141000-316000/мм3). Соответственно, можно утверждать, что клеточная линия по настоящему изобретению является эффективной при облегчении симптомов и лечении лейкоза.
3-3: Введение пациенту с острым лимфобластным лейкозом
Пациенту, которому был поставлен диагноз острый лимфобластный лейкоз (г-ну Чхве, 2001 года рождения), перорально вводили по 3 г в день в течение 14 месяцев. Кроме того, для проверки эффекта лечения злокачественного новообразования in vivo измеряли количества лейкоцитов и тромбоцитов до введения и через 1 месяц после введения с помощью автоматического анализатора крови «celldyn3000» (Abbott, Висбаден, Германия) в соответствии с инструкцией производителя.
Таблица 13 | |
Уровни гемоглобина | |
(нормальное значение) | (13,6~17.4 г/дл) |
До введения | 3,6 г/дл |
После введения | 12,8 г/дл |
Как показано выше в таблице 13, уровни гемоглобина после введения повысились до нормальных уровней по сравнению с уровнями до введения.
В основе лейкоза лежит пролиферация незрелых клеток без входа в стадию клеточной дифференцировки в связи с прекращением определенных стадий в ходе процесса дифференцировки, и при лейкозе пролиферируют незрелые клетки, обладающие обычным иммунологическим фенотипом (In-sang Chun, Medical postgraduates 33, 2005). Острый лимфобластный лейкоз вызывает снижение уровней нормальных клеток в крови из-за злокачественной пролиферации клеток-предшественников лейкоцитов, незрелых клеток, которые приводят к повторяющейся анемии, геморрагии, инфекциям и т.п. Это также вызывает боль в костях и гипертрофию печени, селезенки и т.п. из-за инвазии органа и приводит к повреждениям органов.
Перед введением уровень гемоглобина пациента составлял всего лишь 3,6 г/дл, что подтверждает, что пациент страдал от острой анемии. Однако после введения клеточной линии по настоящему изобретению измеренные уровни гемоглобина стали ровняться 12,8 г/дл, увеличились до нормальных уровней, что подтверждает, что симптом лейкоза ослаблен. Следовательно, было подтверждено, что введение клеточной линии в соответствии с настоящим изобретением было эффективно при облегчении симптомов лейкоза.
Дополнительно пероральное введение также было объединено с другой противоопухолевой терапией. При этом противоопухолевую терапию осуществляли непрерывно со времени изначального диагностирования лейкоза, что тем самым подтверждает, что противоопухолевая терапия не влияет на результаты до и после введения.
3-4: Введение пациенту с раком легких
(1) Пациентке (г-же Юн, 1939 года рождения), которой 3 июля 2006 года был поставлен диагноз рак легких, перорально вводили по 3 г ежедневно в течение 13 месяцев и лечение не объединяли с другой противоопухолевой терапией. Для наблюдения in vivo активности уничтожения злокачественных клеток в Медицинском центре университета Сеула осуществляли ПЭТ-КТ, до введения и через 13 месяцев после введения, соответственно, и сравнивали результаты ПЭТ-КТ.
В результате, как показано на фиг.5, при сравнении результатов до введения (фиг.5А) и после введения (фиг.5В) было отмечено, что непрозрачность снизилась. Следовательно, было признано, что размер опухоли также уменьшился.
Соответственно, эти экспериментальные результаты подтверждают, что клеточная линия в соответствии с настоящим изобретением обладает эффектом профилактики и лечения посредством активности, убивающей злокачественные клетки.
(2) Дополнительно 62-летнему пациенту с раком легких (г-ну Дж. 1946 года рождения), получавшему противоопухолевую терапию (авастин, Genentech Inc.), вводили клеточную линию в соответствии с настоящим изобретением по 3 г в день в течение 3 месяцев. Для наблюдения активности уничтожения злокачественных клеток с помощью КТ измеряли диаметр опухоли.
В результате было отмечено, что диаметр опухоли уменьшился с 7 см (до введения) до 5,6 см (после введения). Следовательно, эти экспериментальные результаты подтверждают, что клеточная линия в соответствии с настоящим изобретением обладает эффектом профилактики и лечения посредством активности, убивающей злокачественные клетки.
Кроме того, введение авастатина было объединено с пероральным введением. До перорального введения клеточной линии размер опухоли непрерывно увеличивался, несмотря на введение авастатина отдельно, из чего можно сделать вывод, что противоопухолевая терапия не оказывает влияние на результаты до и после введения.
3-5: Введение пациенту с раком прямой кишки
Пациентке (г-же Квон, 1949 года рождения), которой 13 ноября 2007 года был поставлен диагноз рак прямой кишки, перорально вводили по 3 г ежедневно и лечение не объединяли с другой противоопухолевой терапией. Для наблюдения in vivo активности уничтожения злокачественных клеток осуществляли ПЭТ-КТ в госпитале университета Чонбука, до введения и через 49 дней после введения, соответственно, и сравнивали результаты ПЭТ-КТ.
В результате, как показано на фиг.6, при сравнении результатов до введения (фиг.6А) и после введения (фиг.6В) было отмечено, что непрозрачность снизилась. Таким образом, было признано, что злокачественные клетки были убиты.
Соответственно, подтверждается, что клеточная линия в соответствии с настоящим изобретением обладает эффектом профилактики и лечения посредством активности, убивающей злокачественные клетки.
3-6: Введение пациенту с раком желудка
Пациенту (г-ну Ли, 1967 года рождения), которому 5 октября 2007 года был поставлен диагноз рак желудка, перорально вводили по 3 г ежедневно и лечение не объединяли с другой противоопухолевой терапией. Для наблюдения in vivo активности, убивающей злокачественные клетки, размер опухолей измеряли с помощью гастрофиброскопа в госпитале Ульсана, до введения и через 4 месяца введения, соответственно, и сравнивали результаты.
В результате, как показано на фиг.7, размер опухоли был равен 7 см на момент начала введения (фиг.7(а)) и стал 2 см через четыре месяца введения (фиг.7(b)), и, таким образом, размер опухоли резко уменьшился.
Соответственно, подтверждается, что клеточная линия в соответствии с настоящим изобретением обладает эффектом профилактики и лечения посредством активности, убивающей злокачественные клетки.
Экспериментальный пример 4: Наблюдение эффекта профилактики и лечения злокачественного новообразования с помощью полученной из камбия Panax ginseng (2) клеточной линии.
Для наблюдения эффекта профилактики и лечения злокачественного новообразования клеточной линией, полученной из камбия Panax ginseng в соответствии с настоящим изобретением, размельченную клеточную линию, полученную в примере 2-(1), вводили в виде порошка пациенту, у которого было диагностировано злокачественное новообразование. Введение осуществляли перорально по 1 г растворенной в воде формы, 3 раза в день (утром, днем и вечером). При этом было отмечено отсутствие побочного эффекта в течение введения.
Введение было начато 1 июля 2008 года, и через около 1 год, 15 июля 2009 года, была проведена КТ грудной клетки в медицинском центре Dongsan университета Keimyung для наблюдения эффекта профилактики и лечения злокачественного новообразования клеточной линией, полученной из камбия Panax ginseng в соответствии с изобретением. В результате было отмечено, что размер предполагаемой массы в LLL латерального базального сегмента составил 26×20 мм до введения и резко уменьшился до 14×14 мм впоследствии. Кроме того, размер множественных метастатических узлов в обоих легких заметно уменьшился.
Соответственно, было получено подтверждение, что клеточная линия из камбия Рапса ginseng в соответствии с настоящим изобретением уменьшает размер злокачественных опухолей и поэтому клеточная линия является эффективной при профилактике и лечении злокачественного новообразования.
Пример получения 1. Приготовление фармацевтических составов
Состав 1: Приготовление состава в виде таблеток
100 мг экстракта клеточной линии, приготовленного в примере 2, смешивали со 100 мг маисового крахмала, 100 мг лактозы и 2 мг стеарата магния, смесь спрессовывали в таблетки в соответствии с обычным способом таблетирования.
Состав 2: Приготовление состава в виде капсул
500 мг экстракта клеточной линии, полученного в примере 2, вносили в капсулы из мягкого желатина для приготовления состава в виде капсул.
Состав 3: Приготовление состава в виде сиропа
1 г клеточной линии, приготовленной в примере 1, смешивали с 10 мг изомеризованного сахара, 5 г маннита и подходящим количеством очищенной воды и доводили смесь сиропного состава до 100 мл в соответствии с обычным способом.
Состав 4: Приготовление раствора для инъекций
200 мг экстракта клеточной линии, приготовленного в примере 2, нагревали и растворяли в 200 мг физиологического раствора, содержащего полиоксиэтилен-гидрогенированное касторовое масло, таким образом получали раствор для инъекций, содержащий смешанный экстракт в концентрации 0,1%.
Пример приготовления 2. Препарат функционального продукта питания - Препарат функционального напитка
Препарат 1: 200 мг клеточной линии, приготовленной в примере 1, разводили в 96 мл воды, затем добавляли в него в качестве добавки 500 мг витамина С, по 1 г лимонной кислоты и олигосахарида в качестве усилителя вкуса и 0,05 г бензоата натрия в качестве консерванта. Затем к этому добавляли очищенную воду, получив таким образом 100 мл функционального напитка.
Препарат 2: 200 мг клеточной линии, приготовленной в примере 2, разводили в 96 мл воды и затем добавляли в него 500 мг витамина С в качестве добавки, по 1 г лимонной кислоты и олигосахарида в качестве усилителя вкуса и 0,05 г бензоата натрия в качестве консерванта. Затем к этому добавили очищенную воду, приготовив таким образом 100 мл функционального напитка.
Промышленная применимость
Как описано выше, клеточная линия по настоящему изобретению, ее лизат, ее экстракт и ее культуральная среда получены из природного сырья и обладают минимальными побочными эффектами по сравнению с обычными терапевтическими лекарственными средствами, и, таким образом, безопасны для человеческого организма. Также они напрямую оказывают влияние на рост злокачественного новообразования путем эффективной индукции смерти злокачественных клеток и демонстрируют противоопухолевую активность путем ингибирования или уменьшения образования опухоли или роста опухоли. Соответственно, клеточная линия, ее лизат, ее экстракт, и ее культуральная среда полезны при профилактике, лечении и ослаблении симптомов злокачественного новообразования.
Хотя настоящее изобретение описано в деталях со ссылкой на специфические особенности, для специалиста в данной области будет очевидно, что это описание является всего лишь предпочтительным воплощением и не ограничивает сферу применения настоящего изобретения. Таким образом, реальная сфера применения настоящего изобретения будет определяться приложенной формулой изобретения или ее эквивалентами.
Claims (10)
1. Фармацевтическая композиция для лечения злокачественного новообразования, которая включает что-либо одно или несколько из числа выбранных из группы, включающей клеточную линию, ее экстракт и ее культуральную среду, где клеточная линия получена из камбия Panax ginseng и имеет следующие характеристики:
(a) находится в изначально недифференцированном состоянии; и
(b) морфологически характеризуется многочисленными вакулями.
(a) находится в изначально недифференцированном состоянии; и
(b) морфологически характеризуется многочисленными вакулями.
2. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой клеточная линия дополнительно характеризуется тем, что: (а) находится в виде одиночных клеток в суспензионной культуре; (b) имеет слабую чувствительность к механическому воздействию в биореакторе по сравнению с клеточными линиями, полученными из тканей, отличных от камбия Panax ginseng, и (с) обладает более высокой скоростью роста по сравнению с клеточными линиями, полученными из тканей, отличных от камбия Panax ginseng, и стабильно культивируется.
3. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой клеточная линия получена с помощью способа выделения, включающего следующие стадии:
(а) получение запасающей ткани корня, содержащей камбий Panax ginseng;
(b) культивирование полученной камбий-содержащей ткани в среде, содержащей индол-3-уксусную кислоту (ИУК) или индол-3-маслянную кислоту (ИМК), для индукции получаемой из камбия клеточной линии, где осмотический стресс применяют к запасающей ткани корня в ходе, до и после культивирования; и
(c) сбор индуцированной полученной из камбия клеточной линии.
(а) получение запасающей ткани корня, содержащей камбий Panax ginseng;
(b) культивирование полученной камбий-содержащей ткани в среде, содержащей индол-3-уксусную кислоту (ИУК) или индол-3-маслянную кислоту (ИМК), для индукции получаемой из камбия клеточной линии, где осмотический стресс применяют к запасающей ткани корня в ходе, до и после культивирования; и
(c) сбор индуцированной полученной из камбия клеточной линии.
4. Фармацевтическая композиция по п.3, в которой стадия (с) проводится пролиферацией индуцированной, полученной из камбия клеточной линии в среде, содержащей один или несколько из перечисленного: 2,4 D (2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота); пиклорам и ИМК; после чего проводится сбор полученной из камбия клеточной линии.
5. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой экстракт получают с помощью растворителя, выбранного из группы, состоящей из дистиллированной воды, спирта, ацетона, ДМСО (диметилсульфоксида) и смесей этих растворителей.
6. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-5, в которой злокачественное новообразование выбирается из группы, состоящей из рака поджелудочной железы, рака печени, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака шейки матки, рака кожи, рака простаты, лимфомы, лейкоза, рака легких, рака прямой кишки и рака желудка.
7. Функциональный пищевой продукт для улучшения состояния при злокачественном новообразовании, который включает что-либо одно или несколько из числа выбранных из группы, включающей клеточную линию, ее экстракт и ее культуральную среду, где клеточная линия получена из камбия Panax ginseng и имеет следующие характеристики:
(a) находится в изначально недифференцированном состоянии; и
(b) морфологически характеризуется многочисленными вакулями.
(a) находится в изначально недифференцированном состоянии; и
(b) морфологически характеризуется многочисленными вакулями.
8. Функциональный пищевой продукт по п.7, в котором клеточная линия дополнительно характеризуется тем, что: (а) находится в виде одиночных клеток во время суспензионной культуры; (b) имеет слабую чувствительность к механическому воздействию в биореакторе по сравнению с клеточными линиями, полученными из тканей, отличных от камбия Panax ginseng; (с) обладает более высокой скоростью роста по сравнению с клеточными линиями, полученными из тканей, отличных от камбия Panax ginseng, и стабильно культивируется.
9. Функциональный пищевой продукт по п.7, в котором клеточная линия получена с помощью способа выделения, включающего следующие стадии:
(а) получение запасающей ткани корня, содержащей камбий Panax ginseng;
(b) культивирование полученной камбий-содержащей ткани запасающего корня в среде, содержащей индол-3-уксусную кислоту (ИУК) или индол-3-маслянную кислоту (ИМК), для того, чтобы индуцировать получаемую из камбия клеточную линию; и
(c) сбор индуцированной полученной из камбия клеточной линии.
(а) получение запасающей ткани корня, содержащей камбий Panax ginseng;
(b) культивирование полученной камбий-содержащей ткани запасающего корня в среде, содержащей индол-3-уксусную кислоту (ИУК) или индол-3-маслянную кислоту (ИМК), для того, чтобы индуцировать получаемую из камбия клеточную линию; и
(c) сбор индуцированной полученной из камбия клеточной линии.
10. Функциональный пищевой продукт по п.9, в котором стадия (с) проводится пролиферацией индуцированной, полученной из камбия клеточной линии в среде, содержащей что-либо одно или несколько из перечисленного: 2,4-D (2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота); пиклорам и ИМК; после чего проводится сбор полученной из камбия клеточной линии.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR20080110086 | 2008-11-06 | ||
KR10-2008-0110086 | 2008-11-06 | ||
PCT/KR2009/006523 WO2010053314A2 (ko) | 2008-11-06 | 2009-11-06 | 산삼 또는 인삼을 포함한 인삼류의 형성층 유래 식물줄기세포주를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 조성물 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2011122688A RU2011122688A (ru) | 2012-12-20 |
RU2520625C2 true RU2520625C2 (ru) | 2014-06-27 |
Family
ID=42153401
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2011122688/15A RU2520625C2 (ru) | 2008-11-06 | 2009-11-06 | Композиция для профилактики или лечения злокачественных новообразований, содержащая в качестве активного ингредиента линию стволовых растительных клеток, полученных из камбия panax ginseng, включая дикий женьшень или женьшень |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9314492B2 (ru) |
EP (1) | EP2353603A4 (ru) |
JP (1) | JP5690984B2 (ru) |
KR (1) | KR101128953B1 (ru) |
CN (1) | CN102209550B (ru) |
AU (1) | AU2009311799A1 (ru) |
BR (1) | BRPI0916043A2 (ru) |
CA (1) | CA2742950A1 (ru) |
RU (1) | RU2520625C2 (ru) |
WO (1) | WO2010053314A2 (ru) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8053238B2 (en) | 2005-10-31 | 2011-11-08 | Unhwa Corporation | Isolated population of plant single cells and method of preparing the same |
KR101064518B1 (ko) * | 2007-09-21 | 2011-09-19 | 주식회사 운화 | 저장근을 가지는 초본식물의 형성층 유래 식물줄기세포주 및 이의 분리방법 |
KR101179171B1 (ko) | 2008-08-14 | 2012-09-03 | 주식회사 운화 | 산삼 또는 인삼을 포함한 인삼류의 형성층 유래 식물줄기세포주를 유효성분으로 함유하는 간질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
EP2363137A4 (en) * | 2008-09-30 | 2012-08-01 | Unhwa Corp | COMPOSITION FOR THE PREVENTION OR TREATMENT OF AIDS WITH PLANT GINSENG VEGETABLE GAMBLING LINE FROM THE BAMBIUM OF PANAX GINSENG OR GINSENG AS AN ACTIVE SUBSTANCE |
WO2012052854A2 (en) * | 2010-10-23 | 2012-04-26 | Unhwa Corporation | Plant cell lines and methods of isolating the same |
CN103509749A (zh) * | 2012-06-29 | 2014-01-15 | 鹭港生物药业有限公司 | 人参形成层干细胞分离及培养方法 |
KR101821702B1 (ko) * | 2014-08-22 | 2018-01-24 | 웰키 홀딩스 리미티드 | 희귀 진세노사이드를 고함유하는, 산삼 또는 인삼을 포함하는 인삼류 추출물, 인삼류 형성층 유래 식물줄기세포 또는 이의 추출물 제조방법 |
KR101951194B1 (ko) * | 2015-04-30 | 2019-02-25 | 주식회사 씨엔에이치코퍼레이션 | 생약 성분을 포함하는 소화기암 예방 또는 치료용 조성물 |
CN109022343B (zh) * | 2017-06-12 | 2021-10-08 | 厦门鹭港兆康生物科技有限公司 | 一种人参干细胞的制备方法 |
CN111135219A (zh) * | 2020-01-15 | 2020-05-12 | 好牧人干细胞生物科技有限公司 | 一种溶通血栓消解癌变细胞、肿瘤的植物干细胞组合物 |
Family Cites Families (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS61109732A (ja) * | 1984-10-31 | 1986-05-28 | Wakunaga Seiyaku Kk | 殺腫瘍性物質誘発剤 |
US4795742A (en) * | 1985-09-24 | 1989-01-03 | Yaguang Liu | Therapeutic composition from plant extracts |
JPH1052295A (ja) * | 1996-08-09 | 1998-02-24 | Nippon Oil Co Ltd | タキサン類化合物の製造方法(ii) |
US6555527B1 (en) * | 1999-08-27 | 2003-04-29 | Korea Atomic Energy Research Institute | Hematopoietic, myeloprotecting, antitumor immune cells generating and radiosensitizing polysaccharide isolated from Panax ginseng |
US6911221B2 (en) * | 2001-04-02 | 2005-06-28 | Hongfen Li | Anti-neoplastic drug |
KR100478213B1 (ko) | 2002-01-23 | 2005-03-22 | 손성호 | 인삼류의 잎과 줄기를 이용한 캘러스 및 부정근 유도와 그증식방법 |
AU2003202159A1 (en) * | 2002-04-08 | 2003-10-27 | Ginseng Science Inc. | Extract of processed panax genus plant, the preparation method thereof, and compositions containing the same |
KR100594353B1 (ko) * | 2002-05-28 | 2006-07-03 | 주식회사 엠디바이오알파 | 신규한 인삼잎 및 줄기 다당체, 그 제조방법 및 그를활성성분으로 함유하는 항암제 및 항암보조제 조성물 |
JP2004290082A (ja) * | 2003-03-27 | 2004-10-21 | Nitto Denko Corp | 薬用人参カルスの培養方法 |
KR100533120B1 (ko) | 2003-06-16 | 2005-12-14 | 주식회사 운화 바이오텍 | 형성층을 이용한 식물세포배양 방법 |
KR100456089B1 (ko) | 2004-07-15 | 2004-11-09 | 박용진 | 항암 활성을 갖는 산삼 추출정제액을 정제하는 방법 및이를 함유하는 조성물 |
US8053238B2 (en) * | 2005-10-31 | 2011-11-08 | Unhwa Corporation | Isolated population of plant single cells and method of preparing the same |
AU2006309568B8 (en) * | 2005-10-31 | 2012-04-05 | Wellkey Holdings Limited | Stability of secondary metabolite mass production through synchronized plant cell cultures |
KR101064518B1 (ko) * | 2007-09-21 | 2011-09-19 | 주식회사 운화 | 저장근을 가지는 초본식물의 형성층 유래 식물줄기세포주 및 이의 분리방법 |
KR101068971B1 (ko) * | 2007-09-21 | 2011-09-30 | 주식회사 운화 | 분열지연중심부 유래 식물줄기세포주 및 이의 분리방법 |
AU2008202078B2 (en) * | 2007-10-10 | 2012-05-31 | Wellkey Holdings Limited | Stability of secondary metabolite mass production through synchronized plant cell cultures |
KR101100867B1 (ko) * | 2008-05-14 | 2012-01-02 | 주식회사 운화 | 주목의 형성층 또는 전형성층 유래 식물줄기세포주를 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염증 또는 항노화용 조성물 |
-
2009
- 2009-11-06 CA CA2742950A patent/CA2742950A1/en not_active Abandoned
- 2009-11-06 WO PCT/KR2009/006523 patent/WO2010053314A2/ko active Application Filing
- 2009-11-06 CN CN2009801441850A patent/CN102209550B/zh active Active
- 2009-11-06 KR KR1020090106902A patent/KR101128953B1/ko active IP Right Grant
- 2009-11-06 EP EP09824997A patent/EP2353603A4/en not_active Withdrawn
- 2009-11-06 JP JP2011535513A patent/JP5690984B2/ja active Active
- 2009-11-06 RU RU2011122688/15A patent/RU2520625C2/ru active
- 2009-11-06 US US13/127,750 patent/US9314492B2/en active Active
- 2009-11-06 AU AU2009311799A patent/AU2009311799A1/en not_active Abandoned
- 2009-11-06 BR BRPI0916043A patent/BRPI0916043A2/pt not_active Application Discontinuation
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
FARIN KAMANGAR et all. Ginseng intake and gastric cancer risk in the shanghai women,s health study cohort // Cancer Epidemiol Biomarkers and Prev., 2007, vol. 16, no 3, p.629-630. SHIBATA S. Chemistry and cancer preventing activities of ginseng saponins and some related triterpenoid compounds //J. Korean Med. Sci, 2001, s.28-37 * |
TAIK-KOO YUN et all. Epidemiological study on cancer prevention by Ginseng: are all kinds of cancers preventable by ginseng? //J. Korean Med Sci 2001, 16 (Suppl): S19-27. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN102209550B (zh) | 2013-10-16 |
WO2010053314A3 (ko) | 2010-08-12 |
WO2010053314A2 (ko) | 2010-05-14 |
EP2353603A4 (en) | 2012-08-01 |
JP2012507579A (ja) | 2012-03-29 |
US20110229443A1 (en) | 2011-09-22 |
US9314492B2 (en) | 2016-04-19 |
EP2353603A2 (en) | 2011-08-10 |
KR101128953B1 (ko) | 2012-03-22 |
BRPI0916043A2 (pt) | 2015-11-10 |
KR20100051032A (ko) | 2010-05-14 |
CN102209550A (zh) | 2011-10-05 |
CA2742950A1 (en) | 2010-04-14 |
RU2011122688A (ru) | 2012-12-20 |
AU2009311799A1 (en) | 2010-05-14 |
JP5690984B2 (ja) | 2015-04-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2520625C2 (ru) | Композиция для профилактики или лечения злокачественных новообразований, содержащая в качестве активного ингредиента линию стволовых растительных клеток, полученных из камбия panax ginseng, включая дикий женьшень или женьшень | |
RU2440820C2 (ru) | Противораковая композиция, включающая линию клеток, полученную из камбия и прокамбия стебля тисса (taxus) | |
RU2662953C1 (ru) | Способ получения экстрактов из рода panax, включая дикий женьшень или женьшень, либо камбиальных меристематических клеток, происходящих из рода panax, или их экстрактов, содержащих редкие гинсенозиды в большом количестве | |
US8617621B2 (en) | Composition for enhancing immunity containing plant stem cell line derived from cambium of Panax ginseng including wild ginseng or ginseng as an active ingredient | |
RU2699011C2 (ru) | Фармацевтическая композиция, содержащая силибин и l-карнитин | |
KR100699790B1 (ko) | 댕댕이나무 추출물을 포함하는 간 질환 예방 및 치료효과를 가지는 약제학적 조성물 | |
CN112741849A (zh) | 一种肿瘤免疫辅助治疗药物及其应用 | |
KR101829637B1 (ko) | 참옻나무 목심 추출물을 함유하는 항암치료 부작용에 따른 소화기능장애, 백혈구 감소증 및 골수부전증의 개선, 예방 또는 치료용 조성물 | |
CN112370496A (zh) | 枸杞叶有效成分在制备预防或治疗肝纤维化药物中的应用 | |
KR101317668B1 (ko) | 멀꿀 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 관절염 치료 또는 예방용 약학 조성물 | |
KR101556443B1 (ko) | 잣나무잎 추출물을 함유하는 항암 조성물 | |
US7229652B2 (en) | Extract from the leaves of Toona sinensis Roem., and the preparation process and uses thereof | |
KR20110138595A (ko) | 야관문 추출물 및 이를 포함하는 조성물 | |
CN101744806B (zh) | 松属素外消旋体在制备治疗脑卒中药物中的用途 | |
KR20130067037A (ko) | 산삼 또는 인삼을 포함한 인삼류의 형성층 유래 식물줄기세포주를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 조성물 | |
CN109432267B (zh) | 一种治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和应用 | |
KR102286429B1 (ko) | 연잎 유래 다당 분획물을 함유하는 골 관련 질환의 개선, 예방 또는 치료용 조성물 | |
JP2016079163A (ja) | 腫瘍を処置するための組成物およびその製造方法 | |
KR101852583B1 (ko) | 현사시나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 허혈성 뇌혈관 질환 예방용 조성물 | |
KR100573375B1 (ko) | 으름덩굴 종자 추출물을 포함하는 항암 조성물 및 그의제조방법 | |
JP6739730B2 (ja) | 皮膚および骨の活性化を促進するための医薬組成物およびその製造方法 | |
JP5441023B2 (ja) | 腫瘍を処置するための組成物およびその製造方法 | |
JP2008044905A (ja) | 固形腫瘍を処置するための組成物およびその利用 | |
WO2012040919A1 (zh) | 黄芩素在制备预防和治疗帕金森病药物中的应用 | |
TWI235664B (en) | Extract from the leaves of Toona sinensis Roem., and the preparation process and uses thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HZ9A | Changing address for correspondence with an applicant | ||
PD4A | Correction of name of patent owner | ||
PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20170801 |