CN109432267B - 一种治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及中药技术领域，特别涉及一种治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和应用。该中药组合物由熟地黄、山药、茯苓、山茱萸、泽泻、牡丹皮、肉桂、淫羊藿、石菖蒲和小茴香制成。本发明提供的组合物，通过合理配伍使得各组分产生增效协同作用，对阿尔茨海默症具有显著的疗效。实验结果表明，本发明提供的中药组合物可以降低低糖低氧所致SH‑SY5Y细胞损伤，改善阿尔茨海默病大鼠的空间学习能力和空间探索能力，降低脑组织内乙酰胆碱酯酶AchE含量，抑制CAI区神经细胞凋亡，对阿尔茨海默症具有显著地治疗效果。

Description

一种治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于中药技术领域，尤其涉及一种治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和应用。

背景技术

阿尔茨海默病是(Alzheimer's disease,AD)中枢退行性疾病,与年龄有关,多发于老年人。关于AD发病机制有许多假说,如炎症反应、淀粉样蛋白(Aβ)沉积、tau蛋白异常磷酸化、胆碱能假说、氧化应激反应和细胞凋亡学说等。其中以β淀粉样学说为研究者所公认。该学说认为β淀粉样蛋白(β-amyloid，Aβ)由β淀粉样蛋白前体(β-amyloid precursorprotein，APP)经β-分泌酶(β-secretase)和γ-分泌酶(γ-secretase)切割后产生，Aβ的沉积会引发神经毒性、氧化损伤、炎症反应等一系列的效应，最终导致AD发病。

目前，治疗阿尔兹海默症多以西药为主，如抑制Aβ蛋白形成的药物雌激素、抗炎药物吲哚美辛、作用于胆碱能神经系统的药物他克林等，虽然治疗效果明显，但作用单一，副作用大，随着治疗时间的延长，治疗效果呈降低趋势，长期服用还会导致肝肾毒副作用，因此，亟需提供一种毒副作用小，适宜于日常保健，达到标本兼治，有效防治阿尔兹海默症的中药制剂。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种对阿尔茨海默病治疗效果好、副作用小的中药组合物。

本发明提供了一种中药组合物，熟地黄、山药、茯苓、山茱萸、泽泻、牡丹皮、肉桂、淫羊藿、石菖蒲和小茴香。

具体的，以重量份计，各原料重量份数为：

熟地黄10～20份、山药8～15份、茯苓10～15份、山茱萸10～15份、泽泻10～15份、牡丹皮5～10份、肉桂3～5份、淫羊藿10～20份、石菖蒲5～10份和小茴香5～10份。

在一个具体实施例中，以重量份计，所述中药组合物中各原料重量份数为：

熟地黄15份、山药10份、茯苓13份、山茱萸15份、泽泻13份、牡丹皮10份、肉桂3份、淫羊藿15份、石菖蒲8份和小茴香5份。

在另一个具体实施例中，以重量份计，所述中药组合物中各原料重量份数为：

熟地黄10份、山药8份、茯苓10份、山茱萸10份、泽泻10份、牡丹皮8份、肉桂5份、淫羊藿20份、石菖蒲10份和小茴香10份。

在另一个具体实施例中，以重量份计，所述中药组合物中各原料重量份数为：

熟地黄20份、山药15份、茯苓13份、山茱萸13份、泽泻13份、牡丹皮5份、肉桂4份、淫羊藿10份、石菖蒲5份和小茴香8份。

在另一个具体实施例中，以重量份计，所述中药组合物中各原料重量份数为：

熟地黄20份、山药15份、茯苓15份、山茱萸10份、泽泻15份、牡丹皮10份、肉桂3份、淫羊藿10份、石菖蒲5份和小茴香8份。

本发明还提供了所述中药组合物的制备方法。

在一些实施方案中，所述中药组合物的制备方法为：取肉桂、淫羊藿、石菖蒲、小茴香水蒸气蒸馏提取，收集挥发油，将挥发油制成挥发油β-环糊精包合物；

取牡丹皮水蒸汽提取，提取液过滤，滤液中加入盐酸，析出结晶，得牡丹皮提取物；

将所述挥发油、牡丹皮提取物与粉碎后的熟地黄、山药、茯苓、山茱萸、泽泻混合。

在一些实施方案中，挥发油的制备方法为：取肉桂、淫羊藿、石菖蒲、小茴香与6～10倍质量的水混合，水蒸气蒸馏提取4～6小时。

具体地，所述挥发油β-环糊精包合物的制备方法为：

取所述挥发油用等体积的无水乙醇溶解，滴加至β-环糊精水溶液中，40～60℃下搅拌2～4小时，4℃下冷藏24小时，抽滤，沉淀物于40℃下真空干燥4～6h。

在一些实施方案中，以ml/g计，所述挥发油与β-环糊精的体积质量比1:4～1:8。

在一些实施方案中，β-环糊精水溶液的浓度为0.05～0.125g/ml。

在一些实施方案中，牡丹提取物的制备方法为：取牡丹皮加10～15倍质量的水，水蒸气蒸馏提取6小时，提取液过滤，滤液中加入1mol/L的盐酸溶液，析出结晶，滤过，结晶用水洗涤，低温干燥，粉碎成细粉。

在一些实施方案中，所述牡丹皮提取物的制备方法为：取牡丹皮与10～15倍质量的水混合，水蒸气蒸馏提取5～8小时，收集提取液，干燥、粉碎。

在一个具体实施例中，本发明通过MTT比色法考察了本发明组合物对SH-SY5Y细胞损伤对的保护作用，结果显示，本发明组合物可以明显降低低糖低氧所致SH-SY5Y细胞损伤，中、高剂量组细胞存活率为95～100％。

因此，本发明提供了所述中药组合物在制备预防和/或修复低糖低氧所致SHSY5Y细胞损伤药物中的应用。

在一个具体实施例中，本发明建立阿尔茨海默模型大鼠，考察了本发明组合物对行为学及脑内的神经递质的影响。结果显示，本发明组合物能够明显改善阿尔茨海默病大鼠的空间学习能力和空间探索能力，降低脑组织内乙酰胆碱酯酶AchE含量，抑制CAI区神经细胞凋亡，对阿尔茨海默症具有显著地治疗效果。

因此，本发明提供了所述中药组合物在制备治疗和/或预防阿尔茨海默症药物中的应用。

本发明还提供一种用于治疗和/或预防阿尔茨海默病的药物，包含本发明中药组合物以及药学上可接受的辅料。本领域技术人员可根据制备不同剂型是所需的各种药学上常规的辅料，按照常规工艺制成不同剂型，如颗粒剂、片剂、胶囊剂、等，包括但不限于此。

在一些实施方案中，所述药学上可接受的辅料选自蔗糖、糊精、淀粉、硬脂酸镁中的一种或两种以上。

在一个具体实施例中，所述药物为片剂，包括本发明中药组合物以及淀粉、硬脂酸镁等辅料。

在一个具体实施例中，所述药物为颗粒剂，包括本发明组合物以及蔗糖、糊精等辅料。

本发明提供的中药组合物以熟地黄、山药、茯苓、山茱萸、泽泻、牡丹皮、肉桂、淫羊藿、石菖蒲和小茴香制成。本发明选择多种具有补肝益肾作用的中药进行复配，通过合理配伍使得各组分产生增效协同作用，不仅具有补益肝肾、安神益智功效，尤其对阿尔茨海默症表现出显著疗效。实验结果表明，本发明提供的中药组合物可以降低低糖低氧所致SH-SY5Y细胞损伤，改善阿尔茨海默病大鼠的空间学习能力和空间探索能力，降低脑组织内乙酰胆碱酯酶AchE含量，抑制CAI区神经细胞凋亡，对阿尔茨海默症具有显著地治疗效果。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1示AD大鼠海马区形态变化图(尼氏染色×40)；其中图1(A)为空白组，(B)为模型组(C)为尼麦角林片组，(D)为六味地黄胶囊组，(E)为温肾前列胶囊组，(F)为实施例1低剂量组，(G)为实施例1中剂量组，(H)为实施例1高剂量组。

具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1本发明组合物

组方：熟地黄150g、山药100g、茯苓130g、山茱萸150g、泽泻130g、牡丹皮100g、肉桂30g、淫羊藿150g、石菖蒲80g重量份、小茴香50g。

制备方法：

(1)取上述熟地黄、山药、茯苓、山茱萸、泽泻粉碎成细粉，备用；

(2)取上述牡丹皮加15倍质量的水，水蒸气蒸馏提取5小时，过滤，滤液中加入1mol/L的盐酸溶液，析出结晶，滤过，结晶用水洗涤，低温干燥，粉碎成细粉，备用；

(3)取上述重量份肉桂、淫羊藿、石菖蒲、小茴香加10倍质量的水，水蒸气蒸馏提取4小时，收集挥发油；

(4)挥发油用等体积量的无水乙醇溶解，滴加至β-环糊精水溶液中，40℃下搅拌4小时，4℃下冷藏24小时，抽滤，沉淀物在40℃下真空干燥6h，得挥发油β-环糊精包合物，粉碎成细粉，备用；其中，β-环糊精水溶液中β环糊精和水的质量体积比为1:15(g/ml)，挥发油与β-环糊精的体积质量比为1:4(ml/g)。

(5)取步骤(1)、(2)、(4)制备的细粉混合均匀，获得本发明中药组合物。

实施例2本发明组合物

组方：熟地黄100g、山药80g、茯苓100g、山茱萸100g、泽泻100g、牡丹皮80g、肉桂50g、淫羊藿200g、石菖蒲100g重量份、小茴香100g。

制备方法：

(1)取上述熟地黄、山药、茯苓、山茱萸、泽泻粉碎成细粉，备用；

(2)取上述牡丹皮加12倍水，水蒸气蒸馏提取6小时，过滤，滤液中加入1mol/L的盐酸溶液，析出结晶，滤过，结晶用水洗涤，低温干燥，粉碎成细粉，备用；

(3)取上述重量份肉桂、淫羊藿、石菖蒲、小茴香加12倍质量的水，水蒸气蒸馏提取5小时，收集挥发油；

(4)挥发油用等体积量的无水乙醇溶解，滴加至β-环糊精水溶液中，60℃下搅拌2小时，4℃下冷藏24小时，抽滤，沉淀物在40℃下真空干燥5h，得挥发油β-环糊精包合物，粉碎成细粉，备用；其中，β-环糊精水溶液中β-环糊精与水的质量体积比为1g:8ml，挥发油与β-环糊精的体积质量比为1ml:6g。

(5)取步骤(1)、(2)、(4)制备的细粉混合均匀，获得本发明中药组合物。

实施例3本发明组合物

组方：熟地黄200g、山药150g、茯苓130g、山茱萸130g、泽泻130g、牡丹皮50g、肉桂40、淫羊藿100g、石菖蒲50g重量份、小茴香80g。

制备方法：

(1)取上述熟地黄、山药、茯苓、山茱萸、泽泻粉碎成细粉，备用；

(2)取上述牡丹皮加10倍质量的水，水蒸气蒸馏提取5小时，过滤，滤液中加入1mol/L的盐酸溶液，析出结晶，滤过，结晶用水洗涤，低温干燥，粉碎成细粉，备用；

(3)取上述重量份肉桂、淫羊藿、石菖蒲、小茴香加10倍质量的水，水蒸气蒸馏提取4小时，收集挥发油；

(4)挥发油用等体积量的无水乙醇溶解，滴加至β-环糊精水溶液中，50℃下搅拌3小时，4℃下冷藏24小时，抽滤，沉淀物在40℃下真空干燥4h，得挥发油包合物，粉碎成细粉，备用；其中，β-环糊精水溶液中β环糊精和水的质量体积比为1:6(g/ml)，挥发油与β-环糊精的体积质量比为1:8(ml/g)。

(5)取步骤(1)、(2)、(4)制备的细粉混合均匀，获得本发明组合物。

实施例4

本实施例中实验分组中采用的温肾前列胶囊、六味地黄胶囊、尼麦角林片，具体组成如下：

温肾前列胶囊的配方：熟地黄150g，淫羊藿150，山药100g，茯苓130g，山茱萸80g，泽泻130g，牡丹皮100g，肉桂30g，附子30g，牛膝100g，虎杖130g，扁蓄130g，瞿麦130g，车前子100g。

六味地黄胶囊的配方：熟地黄1408g，酒萸肉704g，牡丹皮528g，山药704茯苓528g，泽泻528g。

尼麦角林片主要成分为：尼麦角林，化学名为10α-甲氧基-1，6-二甲基麦角林-8β-甲醇基-5-溴烟酸酯。

1.对低糖低氧所致SHSY5Y细胞损伤的影响

1.1低糖低氧损伤模型的建立及给药

试验分为正常血清对照组、1％DMSO对照组、模型组、六味地黄丸组、温肾前列胶囊组和实施例1组(高、中、低剂量)。

正常血清对照组：换以正常大鼠血清；

六味地黄胶囊组、温肾前列胶囊组和实施例1组：换以无糖Earle液后，加入含对应药物的血清，再加人终浓度为0.1mmol/L的连二亚硫酸钠。置培养箱继续培养24h后测定。

1.2 MTT比色法

神经细胞经正常血清对照及含药血清处理24h后(血清添加量为8％)，每孔加入5mg/mL MTT液10μl(终浓度0.5mg/mL)，继续培养4h，吸取上清液，加入100％DMSO 100μL，室温放置30min，待培养孔内颗粒完全溶解后，在酶联免疫吸附仪上测570nm处吸光度(A)。

1.3实验结果

表1对细胞损伤的保护作用

注：与空白对照组比较，###P<0.001，与模型组比较**P<0.01，***P<0.001。

结果表明，中药组合物低、中、高剂量组OD值明显增加，细胞存活率分别为76、95、100％，与模型组比较，有显著差异(P<0.01或P<0.001)，量效关系显著。在相同剂量下效果显著优于温肾前列胶囊组和六味地黄胶囊组。

2对阿尔茨海默模型大鼠行为学及脑内的神经递质的影响

2.1建立阿尔茨海默病大鼠模型

将5只SD大鼠在标准环境适应性饲养1周后，连续6周皮下注射D-半乳糖150mg/(kg·d)，第7周双侧海马注射4nmol/L的β淀粉样肽25-35，复制老年阿尔茨海默病模型。造模前及造模后2周，采用Morris水迷宫实验方法大鼠的学习记忆改变情况，证实造模成功

2.2实验分组及干预情况

取80只SD大鼠，随机选择其中10只作为正常组，不进行任何干预或处理；取另外70只按照上述方法建立阿尔茨海默病模型，造模成功(即造模2周后)后即刻随机分7组，模型组、尼麦角林片组、六味地黄胶囊组、温肾前列胶囊组、实施例1高、中、低剂量组，每组10只，模型组不干预，实验组移植胎盘间充质干细胞，大鼠用体积分数10％水合氯醛腹腔注射麻醉，麻醉生效后固定在立体定位仪上，备皮、消毒，在头皮正中线做切口，观察骨缝，找到囟点，根据动物脑立体定位图谱，确定双侧海马齿状回位置为细胞移植点，将5μL胎盘间充质干细胞悬液(细胞浓度1×10⁸/L，每个移植点5μL)通过微量进样器注射至移植点，进针速度控制在0.5μL/min，注射结束后留针10min，然后缓慢退出针头，缝合头皮，术后连续7d腹腔注射青霉素预防感染。实验结束后，实验动物单笼饲养。

2.3主要观察指标

2.3.1行为学检测：细胞移植4周后，进行水迷宫实验。

2.3.1.1定位航行实验：将SD大鼠面向池壁，置于水池内进行实验，记录大鼠找到平台的时间，以逃避潜伏期作为反映大鼠学习记忆障碍的指标，分别于每天上午和下午进行实验，每次实验时间1min，历时4d，记录动物逃避潜伏期；逃避潜伏期越短说明大鼠学习记忆能力越好。

2.3.1.2空间探索实验：定位航行实验结束后，撤去平台，将大鼠头向池壁置于池内，使其在池内游泳1min，记录动物在目标象限的活动路程；在目标象限的活动路程越长说明大鼠学习记忆能力越好。

2.3.2脑内神经递质检测

细胞移植4周迷宫实验结束后，麻醉处死所有大鼠，取双侧海马组织，称质量，采用冰冷生理盐水冲洗脑组织，滤纸滤干后，准确称取质量。采用脑组织与9倍脑组织质量的生理盐水放入匀浆机研碎，制成10％脑组织匀浆液，4℃条件下3000r/min离心10min，取上清液，保存于4℃冰箱中。严格按照ELISA试剂盒说明书进行操作，检测上清液中乙酰胆碱酯酶、胆碱乙酰转移酶和单胺氧化酶水平。

2.3.3细胞凋亡的检测采用法

大鼠麻醉状态下，剪开胸腔，暴露心脏，从心尖插管，剪开右心耳，经升主动脉先灌注生理盐水，待右心耳流出清水时灌注多聚甲醛，待大鼠尾巴完全僵直时断头取脑，取出脑组织，甲醛固定24小时，常规石蜡包埋、厚连续冠状切片，参照试剂盒说明；

(1)常规脱蜡、复水，后续过程在湿盒内进行；

(2)3％H₂O₂阻断内源性辣根过氧化物酶30min；

(3)用0.15mol/L的PBS洗2次，每次5min；

(4)切片浸入2×SSC溶液(80℃)20min；

(5)用0.15mol/L的PBS洗2次，每次5min；

(6)用蛋白酶K消化5min；

(7)用0.15mol/L的PBS洗2次，每次5min；

(8)TDT缓冲液孵育10min；

(9)TDT反应液37℃下孵育1h；

(10)切片浸入2×SSC溶液10min，以终止反应；

(11)用0.15mol/L的PBS洗2次，每次5min；

(12)用链卵白素标记的辣根过氧化物酶孵育30min；

(13)用0.15mol/L的PBS洗2次，每次5min；

(14)用0.04％的DAB显色10min；

(15)苏木素复染5min，常规复水、透明、封片；镜检，在海马区的神经细胞层，分别选择个相邻视野，以个视野为单位，结果取个视野的平均值，然后在光学显微镜下拍片。

2.3.4组织病理检查细胞移植4周，迅速取双侧海马组织，以体积分数10％中性甲醛固定送病理检验。

2.4实验结果

2.4.1定位航行实验：

结果见表2。结果显示，与正常组相比，模型组大鼠实验不同时间点的逃避潜伏期明显延长(P＜0.05，P＜0.01)，证实造模成功；与模型组相比，中药组合物低、中、高剂量组不同时间点的逃避潜伏期明显缩短(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)，说明实验组大鼠的空间学习能力有很大的提高，作用明显优于效果优于六味地黄胶囊组、温肾前列胶囊组、尼麦角林片组。

表2细胞移植4周后各组平均逃避潜伏期的比较(

n＝10)

注：与正常组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

2.4.2空间探索实验结果

表3撤除平台后大鼠在原平台象限游泳时间和路径与总游泳时间和路径比

(x±s，n＝10)

注：与正常组比较^##P＜0.01；与模型组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01。

从表3可以看出，随着训练次数的增加，所有大鼠寻找平台的潜伏期都呈下降趋势。与空白组比较，模型组大鼠在原平台象限游泳时间和路径与总游泳时间和路径比明显缩短(P＜0.01)；与模型组相比，脑复康组和实施例1组高、中剂量组能提高大鼠在原平台象限游泳时间和路径与总游泳时间和路径比(P＜0.01，P＜0.05)，说明实验组大鼠学习记忆能力明显增强，作用效果优于六味地黄胶囊组和温肾前列胶囊组。

2.4.3大鼠脑组织内乙酰胆碱酯酶AchE含量结果比较，结果见表4。

表4大鼠脑组织内乙酞胆碱酯酶含量比较(x±s，n＝10)

注：与正常组比较#P＜0.05；与模型组比较*P＜0.05。

结果显示，与空白组比较，模型组AchE酶活明显升高，有一定差异(P＜0.05)，说明模型制备成功。与模型组相比，尼麦角林片组、中药组合物高、中剂量组，脑组织乙酰胆碱脂酶含量有所降低(P<0.05)，作用效果优于六味地黄胶囊组和温肾前列胶囊组。

2.4.4对细胞凋亡的影响

表5各组实验动物海马CAI区神经细胞凋亡情况

注：与正常组比较^##P＜0.01；与模型组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01。

结果显示，与空白组相比，模型组海马CAI区细胞凋亡数目明显增加(P＜0.01)；与模型组相比，各给药组海马CAI区细胞凋亡数目不同程度减少，其中，实施例1高剂量组海马CAI区神经细胞凋亡显著减少(P＜0.01)，脑复康组、实施例1中剂量组海马CAI区神经细胞凋亡明显减少(P＜0.05)，作用效果明显优于六味地黄胶囊组和温肾前列胶囊组。

2.4.5各组大鼠脑海马组织病理学观察

细胞移植4周后苏木精-伊红染色观察大鼠脑海马组织形态，结果见图1。

结果显示：正常组海马结构完整，神经细胞形态正常，着色均匀，细胞核为圆形或椭圆形；与正常组比较，模型组神经细胞数量明显减少，细胞间隙增大，胞体发生退化，细胞核出现固缩，核仁不明显，部分细胞出现空泡；与模型组比较，处理组神经细胞形态较为完整，趋于正常，偶见空泡变性形成，神经细胞数量有所增加。其中，实施例1组细胞形态完整程度明显优于六味地黄胶囊组和温肾前列胶囊组。

取本发明实施例2～3中药组合物进行上述实验，结果与实施例1相同或或相近(P＞0.05)。

由上述结果可知，本发明公开的中药组合物可以明显降低低糖低氧所致SH-SY5Y细胞损伤，改善阿尔茨海默病大鼠的空间学习能力和空间探索能力，降低脑组织内乙酰胆碱酯酶AchE含量，抑制CAI区神经细胞凋亡，对阿尔茨海默症具有显著地治疗效果。

实施例5本发明胶囊剂

取实施例1所述中药组合物，干燥，装入胶囊，制成胶囊剂。

实施例6本发明颗粒剂

取实施例2所述中药组合物，干燥，加入蔗糖、糊精等进行湿法制粒，制成颗粒剂。

实施例7本发明片剂

取实施例2所述中药组合物，干燥，加入淀粉、硬脂酸镁等辅料，压片，制成片剂。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种中药组合物，其特征在于，以重量份计，由如下重量份数的原料制成：

熟地黄10～20份、山药8～15份、茯苓10～15份、山茱萸10～15份、泽泻10～15份、牡丹皮5～10份、肉桂3～5份、淫羊藿10～20份、石菖蒲5～10份和小茴香5～10份。

2.根据权利要求1所述中药组合物，其特征在于，以重量份计，各原料重量份数为：

熟地黄15份、山药10份、茯苓13份、山茱萸15份、泽泻13份、牡丹皮10份、肉桂3份、淫羊藿15份、石菖蒲8份和小茴香5份。

3.权利要求1或2所述中药组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

取肉桂、淫羊藿、石菖蒲、小茴香水蒸气蒸馏提取，收集挥发油，将挥发油制成挥发油β-环糊精包合物；

取牡丹皮水蒸气 提取，提取液过滤，滤液中加入盐酸，析出结晶，得牡丹皮提取物；

将所述挥发油、牡丹皮提取物与粉碎后的熟地黄、山药、茯苓、山茱萸、泽泻混合。

4.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，所述挥发油β-环糊精包合物的制备方法为：

取所述挥发油用等体积的无水乙醇溶解，滴加至β-环糊精水溶液中，40～60℃下搅拌2～4小时，4℃下冷藏24小时，抽滤，沉淀物于40℃下真空干燥4～6h。

5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，以ml/g计，所述挥发油与β-环糊精的体积质量比1:4～1:8。

6.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述β-环糊精水溶液浓度为0.05～0.125g/ml。

7.权利要求1或2所述中药组合物或权利要求3～6任一项所述制备方法制得的中药组合物在制备预防和/或修复低糖低氧所致SHSY5Y细胞损伤药物中的应用。

8.权利要求1或2所述中药组合物或权利要求3～6任一项所述制备方法制得的中药组合物在制备治疗和/或预防阿尔茨海默病药物中的应用。

9.一种用于治疗和/或预防阿尔茨海默病的药物，其特征在于，包含权利要求1或2所述中药组合物或权利要求3～6任一项所述制备方法制得的中药组合物以及药学上可接受的辅料。

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