CN102670956A - 一种中药组合物在制备抗心肌细胞凋亡和/或抗心肌细胞凋亡相关疾病的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中药组合物在制备抗心肌细胞凋亡和/或抗心肌细胞凋亡相关疾病的药物中的应用，其中所述中药组合物是由按照下述重量配比的中药材制备而成：地黄1～10份，鸡血藤1～10份，麦冬1～7份，甘草1～7份，制何首乌1～7份，阿胶1～7份，五味子1～7份，党参1～7份，龟甲1～5份，大枣1～5份，桂枝0.1～2份。

Description

一种中药组合物在制备抗心肌细胞凋亡和/或抗心肌细胞凋亡相关疾病的药物中的应用

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及一种中药组合物在制备抗心肌细胞凋亡和/或抗心肌细胞凋亡相关疾病的药物中的应用。 

背景技术

通脉养心丸是一种治疗缺血性心脏病的中成药，由生脉散与炙甘草汤加减而成，具有养心补血，通脉止痛的功效。通脉养心丸针对胸痹本虚标实的病理状态重用生地黄滋阴养血为君，《名医别录》谓地黄“补五脏内伤不足，通血脉，益气力”。方中炙甘草、党参、大枣益气，健脾；生地黄、阿胶、麦冬甘润滋补心阴心血；桂枝、鸡血藤温通血脉，与益气养阴药相配，亦可使气血流通，脉道通利。诸药相合可达阴血足而血脉充，阳气复而心脉通，气血充沛，血脉畅通则悸可定，脉可复。现代药理学研究证实，地黄水提液具有降压、抗炎等作用；其浸膏具有强心、利尿等作用。党参具有抗氧化作用。麦冬、桂枝具有改善心肌收缩力的作用。鸡血藤具有抗动脉粥样硬化等药理作用。临床应用过程中显示出了较强的心肌保护作用，但其作用机制研究尚不完善。 

研究发现，细胞凋亡是心肌缺血过程中心肌组织坏死的机制之一。细胞凋亡信号的异常表达使心肌细胞数量不可逆地减少，引起心脏疾病发生或在原有疾病的基础上导致病情加剧。细胞凋亡程序一旦启动，使得相当一些原本可修复的心肌细胞也走向死亡过程，造成有功能的心肌细胞数目和功能下降、加重了心肌缺血损伤。其发生凋亡的机制可能与长时间缺氧产生细胞内钙超载有关。钙离子作为多种死亡信号转导的第二信使与细胞线粒体凋亡有着错综复杂的关系，心肌缺血发生时，大量钙离子内流，同时钙离子的排出受到抑制，导致心肌细胞钙超载。此时，线粒体可释放CytC，CytC与脱氧腺普三磷酸相互作用，并与Apaf-1结合，激活白细胞介素-1，3转化酶(Caspase-9)，被激活的Caspase-9又激活Caspase-3，促使细胞发生凋亡。化学缺氧(叠氮化物)触发的新生大鼠心肌细胞凋亡受钙调节的蛋白酶调制，阻断细胞 外钙流入或细胞内钙释放都可有效地抑制心肌细胞凋亡。 

发明内容

本发明目的在于提供一种抗心肌细胞凋亡和/或抗心肌细胞凋亡相关疾病的药物中的应用。本发明所述心肌细胞凋亡相关疾病包括，但不限于冠心病，心绞痛以及其它由于心肌细胞缺氧引起的心脏疾病。 

本发明所述的抗心肌细胞凋亡和/或抗心肌细胞凋亡相关疾病的应用，其中所述中药组合物抗心肌细胞凋亡和/或抗心肌细胞凋亡相关疾病的作用是通过抑制心肌细胞钙超载实现的。 

本发明所述的中药组合物是由按照下述重量配比的中药材制备而成： 

地黄1～10份，鸡血藤1～10份，麦冬1～7份，甘草1～7份，制何首乌1～7份，阿胶1～7份，五味子1～7份，党参1～7份，龟甲1～5份，大枣1～5份，桂枝0.1～2份。 

优选地，本发明所述的中药组合物是由按照下述重量配比的中药材制备而成： 

地黄3～8份，鸡血藤3～8份，麦冬2～5份，甘草2～5份，制何首乌2～5份，阿胶2～5份，五味子2～5份，党参2～5份，龟甲1～3份，大枣1～3份，桂枝0.5～1.5份。 

最优选地，本发明中药组合物是按照下述重量配比的中药材制备而成： 

地黄5份，鸡血藤5份，麦冬3份，甘草3份，制何首乌3份，阿胶3份，五味子3份，党参3份，龟甲2份，大枣2份，桂枝1份。 

其中，为了达到更好的治疗效果，所述的龟甲为醋制龟甲。 

因此，本发明的中药组合物是由按照下述重量配比的中药材制备而成： 

地黄1～10份，鸡血藤1～10份，麦冬1～7份，甘草1～7份，制何首乌1～7份，阿胶1～7份，五味子1～7份，党参1～7份，龟甲(醋制)1～5份，大枣1～5份，桂枝0.1～2份。 

优选地，本发明的中药组合物是由按照下述重量配比的中药材制备而成： 

地黄3～8份，鸡血藤3～8份，麦冬2～5份，甘草2～5份，制何首乌2～5份，阿胶2～5份，五味子2～5份，党参2～5份，龟甲(醋制)1～3份，大枣1～3份，桂枝0.5～1.5份。 

最优选地，本发明中药组合物是由按照下述重量配比的中药材制备而成： 

地黄5份，鸡血藤5份，麦冬3份，甘草3份，制何首乌3份，阿胶3份，五味子3份，党参3份，龟甲(醋制)2份，大枣2份，桂枝1份。 

前述中药组合物可以按照现有技术中任一常规的方法加工，得到的提取物皆具有抗心肌细胞缺氧损伤的作用。为了便于理解，现举例如下，但对于本发明保护范围不构成影响。 

方法一、本发明中药组合物按照下述方法制备而成，包括： 

步骤1、按照上述重量配比取11味药材； 

步骤2、取龟甲加水煎煮后，加入鸡血藤、党参、大枣继续煎煮，滤过，滤液浓缩后，加入乙醇进行沉淀，取适量上清液，加入阿胶后加热使溶解，并入上述乙醇溶液中，混匀，静置，滤过，滤液备用； 

步骤3、其余6味药材，加入乙醇浸渍后，渗漉，收集渗滤液与步骤2中得到的提取液合并，静置，滤过，滤液减压回收乙醇，得到终产品。 

其中，在步骤2中，所述龟甲加水煎煮2小时后加入鸡血藤等药材；加入鸡血藤、党参和大枣等药材后继续煎煮2次，第一次4小时，第二次2小时；所述滤液浓缩至相对密度为1.05～1.15(50℃)；加入80％乙醇进行沉淀，使乙醇含量达到60％；取适量上清液(以能够完全溶解阿胶药材为限)；静置24小时。 

步骤3中，采用80％的乙醇浸渍48小时；静置24小时。 

优选地，本发明中药组合物按照下述方法制备而成：包括 

步骤1、按照上述重量配比取11味药材； 

步骤2、取龟甲加水煎煮2小时后，加入鸡血藤、党参、大枣继续煎煮2次，第一次4小时，第二次2小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.15(50℃)后，加入80％乙醇进行沉淀使含醇量达到60％，取适量上清液，加入阿胶后加热使溶解，并入上述乙醇溶液中，混匀，静置24小时，滤过，滤液备用； 

步骤3、其余6味药材，加入80％乙醇浸渍48小时后，渗漉，收集渗滤液与步骤2中得到的提取液合并，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，得到终产品。 

方法二、本发明中药组合物按照下述方法制备而成，包括： 

步骤1、按照上述重量配比取11味药材； 

步骤2、鸡血藤、党参、五味子、大枣、龟甲加水煎煮，合并滤液，滤过，浓缩成稠膏； 

步骤3、其余药材6味药分碎成细粉，加入步骤1得到的稠膏，均匀，干燥，分碎成细粉，得到终产品。 

其中，步骤2中，药材煎煮2次，每次3小时。 

优选地，本发明中药组合物按照下述方法制备而成：包括 

步骤1、按照上述重量配比取11味药材； 

步骤2、鸡血藤、党参、五味子、大枣、龟甲加水煎煮2次，每次3小时，合并滤液，滤过，浓缩成稠膏； 

步骤3、其余药材6味药分碎成细粉，加入步骤1得到的稠膏，均匀，干燥，分碎成细粉，得到终产品。 

本发明所述的中药组合物，根据需要可以含有药物可接受的载体，其中所述的化合物作为药物活性成分，其在制剂中所占重量百分比可以是0.01-99.99％，其余为药物可接受的载体。本发明的中药组合物，以单位剂量形式存在，所述单位剂量形式是指制剂的单位，如片剂的每片，胶囊的每粒胶囊，口服液的每瓶，颗粒剂每袋，注射剂的每支等。本发明所述的中药组合物可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括：滴丸剂、片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。本发明所述的中药组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸 丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常规的香味剂或着色剂。对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。本发明所述的中药组合物，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载体，所述药物可接受的载体选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。本发明的中药组合物在使用时可以根据病人的情况确定用法用量，本领域的普通技术人员可以很容易地确定。 

现代药理学实验表明，本发明中药组合物通过抗心肌细胞凋亡起到保护心肌的作用，其作用机制是抑制心肌细胞钙超载。本发明的药物组合物均可通过抑制心肌细胞钙超载这种机制达到抗心肌细胞凋亡从而起到保护心肌的作用。以下仅以所述药物组合物的最优选实施方式为例，验证本发明的药物组合物的抗心肌细胞凋亡作用。 

试验例本发明的中药组合物(下称“通脉养心丸”)对心肌细胞凋亡的影响 

主要采用大鼠心肌细胞原代培养的方法获得实验用正常心肌细胞并建立缺氧损伤细胞模型，从抑制心肌细胞钙超载的角度探讨本发明的药物组合物通脉养心丸抗细胞凋亡保护心肌的作用机理，为临床应用提供科学依据。 

1实验材料 

1.1实验动物 

Wistar大鼠，50只，体重300±20g，雄性，购于中国医学科学院协和动物研究所。 

Wistar大鼠，20只，1-3日龄，雌雄不拘，购于中国医学科学院放射研究所。 

1.2药品与试剂 

本发明中药组合物(下称“通脉养心丸”，天津中新药业集团股份有限公司乐仁堂制药厂提供，按照本发明实施例1的方法制备，每10丸重1g，批号：C107074)；DMEM/F12培养基(Hyclone，NUH0180)；胰蛋白酶(1∶250，sigma)；II型胶原酶(Gibco，461699)；5’-溴脱氧尿苷(brdu，sigma)；FLIPR Calcium 4Assay Kit(Molecular Devices，122625)；AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡试剂盒(BD，批号：18354)；其它试剂为国产分析纯。 

1.3主要仪器 

37℃5％CO₂培养箱(THERMO，FORMA3111型，美国)；37℃94％N₂-5％CO₂-1％O₂培养箱(THERMO，FORMA3131型，美国)；倒置相差显微镜(LEICA DMIL，德国)；台式高速低温离心机(Biofuge primo R，美国)；多功能读板机(Multiskan Ascent，THERMOLABSYSTEMS，美国)；流式细胞仪(FACS，美国)。 

2实验方法 

2.1含药血清的制备 

将50只Wistar大鼠随机分为空白对照组、通脉养心丸1g/kg、2g/kg、4g/kg、8g/kg(日给药量)剂量组，连续给药三天，于末次给药1h后腹主动脉取血，56℃水浴孵育30min灭活补体，3000rpm离心15min后取血清，无菌条件下过滤分装入冻存管中，-20℃保存备用。 

2.2心肌细胞原代培养及缺氧损伤模型的制备 

2.2.1心肌细胞原代培养 

参照文献方法加以改良进行心肌细胞的原代培养：取1-3日龄Wistar大鼠经75％酒精消毒30秒，无菌条件下取出心脏，预冷的D-Hanks液中洗去残血，去除大血管，将心室肌剪成1-2mm³的组织块，用0.1％胶原酶和0.06％胰蛋白酶1∶1混合液，37℃振摇消化5min，弃去上清，将剩余的组织块如上法消化3-4次，分别收集细胞悬液200目网筛滤过，1000r/min，4℃离心10min，悬于含10％胎牛血清的DMEM/F12培养液中，接种于75cm²培养瓶中，差速贴壁培养1h。收集未贴壁的细胞悬液并调整细胞浓度至5×10⁵/ml，接种于培养板中，于5％CO₂培养箱中培养48小时后换液。前3天用0.1mmol/L5’-溴脱氧尿苷(Brdu)以抑制非心肌细胞生长。 

2.2.2分组及缺氧损伤模型的制备 

取稳定生长的单层心肌细胞，用无血清DMEM/F12培养液培养48h，使细胞生长同步化，并将细胞分为六组：正常对照组、缺氧损伤组、通脉养心丸1g/kg、2g/kg、4g/kg、8g/kg剂量组。采用MODEL3131型三气培养箱，94％N₂-5％CO₂-1％O₂条件下缺氧孵育24h，正常对照组于原条件下培养。 

2.3检测指标 

2.3.1MTT比色法测定心肌细胞活力：吸去细胞培养板中的培养液，每孔加入0.5mg/ml MTT溶液100μl。于37℃，5％CO₂培养箱中孵育4小时后，弃上清，每孔加入DMSO100μl，待蓝紫色结晶溶解后，于570nm波长下读取OD值。以此作为缺氧损伤模型成功的标志。 

2.3.2心肌细胞胞浆内钙离子浓度检测：取稳定搏动的心肌细胞(约5×10⁴细胞/孔)，按组别分别加入用DMEM/F12培养基稀释后(浓度为10％)的含药血清干预并于缺氧条件下培养(正常对照组加入空白血清并于正常条件下培养)。24h后每孔加入100μL FLIPR Calcium 4荧光试剂，37℃继续缺氧孵育1h，再向每孔分别加入50μL不同剂量组的含药血清(浓度为50％)，实时检测的各组细胞的荧光值变化(Ex485nm、Em525nm)，检测时程为5min。数据用每孔细胞再次加药后荧光值占空白组荧光值的百分率(％)表示。 

2.3.3心肌细胞凋亡率检测：将种植于6孔板的心肌细胞每孔用0.04％EDTA和0.125％的胰蛋白酶混合液2ml消化2-3min，加含2％的FBS的PBS终止消化，将细胞悬液于4℃1000rpm离心5min，再将细胞重悬于PBS中1000rpm离心5min以除去细胞碎片等杂质，最后将细胞悬浮于连接缓冲液中，并加入含AnnexinV-Flous和PI的孵育缓冲液于4℃孵育15min。流式细胞仪检测AnnexinV和PI标记的细胞，以不含AnnexinV和PI的孵育缓冲液的心肌细胞作阴性对照，计算凋亡细胞百分率(％)。 

2.4统计学处理 

数据用均数±标准差( 

)表示，采用SPSS11.0软件进行统计分析，组间比较采用单因素方差分析。 

3实验结果 

3.1通脉养心丸对心肌细胞活力的影响 

心肌细胞在缺氧条件下孵育后，其活力下降，与正常对照组比较差异极显著(P＜0.01)。 证明缺氧损伤模型建立成功。通脉养心丸各个剂量组均能不同程度提高缺氧损伤心肌细胞活力，其中1g/kg剂量组与缺氧损伤组比较差异显著(P＜0.05)；通脉养心丸2g/kg、4g/kg、8g/kg剂量组与缺氧损伤组比较差异极显著(P＜0.01)。实验结果见表1。 

表1通脉养心丸对心肌细胞活力的影响 

注：与空白对照组比较，^##P＜0.01 

与缺氧损伤组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01 

3.2通脉养心丸对缺氧损伤心肌细胞胞浆中钙离子浓度变化的影响 

缺氧孵育24h后(即荧光检测的起始点处)缺氧损伤组胞浆中钙离子浓度与正常对照组比较差异极显著(P＜0.01)。再次加药后，约在40s后各组细胞胞浆内钙离子浓度达到峰值，各给药组峰值与缺氧损伤组比较差异极显著(P＜0.01)，其中8g/kg组效果最为明显。再次加药80s至300s各组钙离子浓度逐渐趋于稳定，此时各给药组钙离子浓度仍显著低于缺氧损伤组(P＜0.01)。结果见图1：通脉养心丸对缺氧心肌细胞钙离子荧光强度的影响(注：与空白对照组比较^##P＜0.01，与缺氧损伤组比较^**P＜0.01)。 

3.3通脉养心丸对缺氧损伤心肌细胞凋亡率的影响 

心肌细胞经缺氧损伤后，细胞凋亡率明显升高，与空白对照组相比较差异极显著(P＜0.01)；通脉养心丸4g/kg、8g/kg剂量组能明显降低缺氧心肌细胞凋亡率，与缺氧损伤组比较差异极显著(P＜0.01)。实验结果见表2。 

表2通脉养心丸对缺氧心肌细胞凋亡率的影响 

注：与空白照组比较△△P＜0.01；与缺氧损伤组比较^**P＜0.01 

4讨论 

通脉养心丸全方由生脉散与炙甘草汤加减而成，具有养心补血，通脉止痛的功效。临床应用过程中显示出了较强的心肌保护作用，但其作用机制研究尚不完善。因此发明人选择能否抑制钙超载为切入点来研究通脉养心丸抗细胞凋亡保护心肌的作用机制。 

本实验结果显示，缺氧条件可使心肌细胞胞浆内钙离子浓度显著升高，通脉养心丸4g/kg、8g/kg剂量组可以明显抑制心肌细胞内钙离子浓度升高，一定程度上减轻了心肌细胞钙超载。此外，通脉养心丸4g/kg、8g/kg剂量组可明显降低缺氧损伤引起的大鼠心肌细胞凋亡的发生率，对缺氧损伤的心肌细胞具有明显的保护作用。为了明确心肌细胞凋亡率、胞浆内钙离子浓度的变化以及给药剂量之间是否存在着一定的相关性，发明人首先对凋亡率以及胞浆内钙离子浓度进行了相关性的考察与回归分析，结果显示二者的相关系数为0.945，呈明显的正相关；回归分析中P＝0.0155(置信度95％)，即可认为二者存在线性回归关系，均与前述文献报道一致。其次我们对凋亡率、钙离子浓度与给药剂量分别进行了相同的统计分析，结果显示给药剂量与凋亡率及钙离子浓度间存在着一定的负相关关系(相关系数分别为-0.894和-0.971)，这表明通脉养心丸的剂量与疗效间可能存在着一定的依赖关系。 

附图说明

图1是通脉养心丸对缺氧心肌细胞钙离子荧光强度的影响图，横坐标是时间，纵坐标是荧光浓度(相对于对照荧光浓度的百分比)，TMYXW指通脉养心丸组。 

具体实施方式

下述通过具体实施方式对于本发明进行进一步的描述，并不对其保护范围构成限定。 

实施例1 

步骤1、取下列药材：地黄100g，鸡血藤100g，麦冬60g，甘草60g，制何首乌60g， 阿胶60g，五味子60g，党参60g，龟甲(醋制)40g，大枣40g，桂枝20g； 

步骤2、鸡血藤、党参、五味子、大枣、龟甲加水煎煮2次，每次3小时，合并滤液，滤过，浓缩成稠膏； 

步骤3、其余药材6味药分碎成细粉，加入步骤1得到的稠膏，均匀，干燥，分碎成细粉，过筛，用水泛丸，干燥，包衣，得到丸剂。 

实施例2 

与实施例1的方法相同，除了药材的组成不同：地黄200g，鸡血藤200g，麦冬138g，甘草138g，制何首乌138g，阿胶138g，五味子138g，党参138g，龟甲(醋制)100g，大枣100g，桂枝40g。 

实施例3 

与实施例1的方法相同，除了药材的组成不同：地黄20g，鸡血藤20g，麦冬20g，甘草20g，制何首乌20g，阿胶20g，五味子20g，党参20g，龟甲(醋制)20g，大枣20g，桂枝10g。 

实施例4 

步骤1、取下列药材：地黄100g，鸡血藤100g，麦冬60g，甘草60g，制何首乌60g，阿胶60g，五味子60g，党参60g，龟甲(醋制)40g，大枣40g，桂枝20g； 

步骤2、取龟甲加水煎煮2小时后，加入鸡血藤、党参、大枣继续煎煮2次，第一次4小时，第二次2小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.15(50℃)后，加入80％乙醇进行沉淀使含醇量达到60％，取适量，加入阿胶后加热使溶解，并入上述乙醇溶液中，混匀，静置24小时，滤过，滤液备用； 

步骤3、其余6味药材，加入80％乙醇浸渍48小时后，渗漉，收集渗滤液1200ml与步骤2中得到的提取液合并，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇至相对密度1.01～1.05(50℃)，加入蜂蜜160g、苯甲酸3g，加水至总量为1000ml，混匀，静置，静置7天，滤过得到产品。 

实施例5 

与实施例4的方法相同，除了药材的组成不同：地黄200g，鸡血藤200g，麦冬138g，甘草138g，制何首乌138g，阿胶138g，五味子138g，党参138g，龟甲(醋制)100g，大枣100g，桂枝40g。 

实施例6 

与实施例4的方法相同，除了药材的组成不同：地黄20g，鸡血藤20g，麦冬20g，甘草20g，制何首乌20g，阿胶20g，五味子20g，党参20g，龟甲(醋制)20g，大枣20g，桂枝10g。 

Claims (9)

1.一种中药组合物在制备抗心肌细胞凋亡和/或抗心肌细胞凋亡相关疾病的药物中的应用，其中所述中药组合物是由按照下述重量配比的中药材制备而成：地黄1～10份，鸡血藤1～10份，麦冬1～7份，甘草1～7份，制何首乌1～7份，阿胶1～7份，五味子1～7份，党参1～7份，龟甲1～5份，大枣1～5份，桂枝0.1～2份。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述中药组合物抗心肌细胞凋亡和/或抗心肌细胞凋亡相关疾病的作用是通过抑制心肌细胞钙超载实现的。

3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述中药组合物是由按照下述重量配比的中药材制备而成：地黄3～8份，鸡血藤3～8份，麦冬2～5份，甘草2～5份，制何首乌2～5份，阿胶2～5份，五味子2～5份，党参2～5份，龟甲1～3份，大枣1～3份，桂枝0.5～1.5份。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述中药组合物是由按照下述重量配比的中药材制备而成：地黄5份，鸡血藤5份，麦冬3份，甘草3份，制何首乌3份，阿胶3份，五味子3份，党参3份，龟甲2份，大枣2份，桂枝1份。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述龟甲为醋制龟甲。

6.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述中药组合物是按照下述方法制备而成的，包括：

步骤1、按照权利要求1所述重量配比取11味中药材；

步骤2、取龟甲加水煎煮后，加入鸡血藤、党参、大枣继续煎煮，滤过，滤液浓缩后，加入乙醇进行沉淀，取适量，加入阿胶后加热使溶解，并入上述乙醇溶液中，混匀，静置，滤过，滤液备用；

步骤3、其余6味药材，加入乙醇浸渍后，渗漉，收集渗滤液与步骤2中得到的提取液合并，静置，滤过，滤液减压回收乙醇，得到终产品。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于在步骤2中，所述龟甲加水煎煮2小时后加入鸡血藤等药材；加入鸡血藤、党参和大枣等药材后继续煎煮2次，第一次4小时，第二次2小时；所述滤液浓缩至在50℃时相对密度为1.05～1.15；加入80％乙醇进行沉淀，使乙醇含量达到60％；静置24小时；步骤3中，采用80％的乙醇浸渍48小时；静置24小时。

8.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述中药组合物中药组合物按照下述方法制备而成，包括：

步骤1、按照权利要求1所述重量配比取11味药材；

步骤2、鸡血藤、党参、五味子、大枣、龟甲加水煎煮，合并滤液，滤过，浓缩成稠膏；

步骤3、其余药材6味药分碎成细粉，加入步骤1得到的稠膏，均匀，干燥，分碎成细粉，得到终产品。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于步骤2中，药材煎煮2次，每次3小时。

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