KR102082248B1 - 무농약 인삼 농축액, 이의 제조방법, 및 이를 이용한 기능성 식품 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 무농약 재배된 인삼의 뿌리, 줄기, 꽃, 및 잎을 원료로 사용하여, 무농약 원료를 준비하는 단계, 상기 무농약 원료를 추출용매로서 정제수를 이용하여 60~90℃에서 고형분 함량이 63% 이상, 홍삼 성분 50~80mg/g이 되도록 감압 농축시키는 단계, 상기 농축된 농축액을 여과시키고, 여과된 추출액을 90~100℃에서 10~30분간 살균시키는 단계, 및 상기 살균된 농축액을 60~70℃에서 고형분 60~70%가 될 때까지 강압 농축시키는 단계를 포함하는 무농약 인삼 농축액의 제조방법 , 및 상기 무농약 인삼 농축액을 유효성분으로 함유하는 기능성 식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따르면, 무농약 재배되어 사포닌 성분이 다량 포함된 무농약 재배된 인삼의 뿌리, 줄기, 꽃, 및 잎을 사용하여 무농약 인삼 농축액을 제조할 수 있으며, 이에 따라 종래 방법에 비해 원료비를 90% 이상 절감할 수 있는 효과를 가진다. 또한, 본 발명에서는 사포닌 성분이 다량 포함된 무농약 재배된 인삼 원료를 사용함으로써, 최종 제조된 무농약 인삼 농축액은 면역증강, 항산화 및 항암 효과를 가짐으로써 건강기능식품의 기능성 원료로 사용될 수 있다.
본 발명에 따르면, 무농약 재배되어 사포닌 성분이 다량 포함된 무농약 재배된 인삼의 뿌리, 줄기, 꽃, 및 잎을 사용하여 무농약 인삼 농축액을 제조할 수 있으며, 이에 따라 종래 방법에 비해 원료비를 90% 이상 절감할 수 있는 효과를 가진다. 또한, 본 발명에서는 사포닌 성분이 다량 포함된 무농약 재배된 인삼 원료를 사용함으로써, 최종 제조된 무농약 인삼 농축액은 면역증강, 항산화 및 항암 효과를 가짐으로써 건강기능식품의 기능성 원료로 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 무농약 인삼 농축액, 이의 제조방법, 및 이를 이용한 기능성 식품 조성물에 관한 것으로서, 상세하게는 무농약 재배된 인삼의 뿌리, 잎, 꽃을 이용한 무농약 인삼 농축액, 이의 제조방법, 및 이를 건강기능식품의 기능성 원료로 사용할 수 있는 이용한 기능성 식품 조성물을 제공하는 데 있다.
일반적으로 인삼은 그 재배 방법이 매우 까다롭고, 가장 널리 사용되는 6년근 인삼의 경우 재배되는 6년 동안 약 100~120회 정도의 농약을 살포하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 사포닌 성분이 다량 함유되어 있는 것으로 알려진 이러한 인삼의 안전성이 확보되지 않아 국내·외 소비자들에게 점점 소외받고 있는 실정이며, 수출에도 제약이 많은 실정이다.
또한, 사포닌 성분이 포함되어 있더라도 과량의 농약 살포로 인해 인삼 뿌리만 실제 제품의 원료로 사용될 뿐 인삼의 꽃이나 잎, 줄기 등은 버려지고 있어 매우 비효율적이라 할 수 있다. 인삼 뿌리에 있어서도, 원생약이나 가는 뿌리, 및 코르크송은 제거하고 일정 기간(3~6년) 이상의 뿌리만을 원료로 사용했기 때문에 재료비가 많이 들고, 결과적으로 제품의 단가가 올라가는 원인이 되어 온 것이 사실이다.
인삼을 이용한 농축액이나 발효액 등의 제조에 관한 종래 기술을 살피면, 한국공개특허 2009-0064988에서는 인삼에 물 또는 유기용매를 가하여 인삼추출액을 제조하고, 상기 인삼추출액에 펙티나아제 및 베타갈락토시다아제를 가하여 인삼추출액을 발효, 농축시킨 발효인삼농축액 또는 발효인삼분말을 유효성분으로 함유하는 면역증강, 항당뇨 및 항암 효과 중에서 선택된 어느 하나 이상의 효과가 있는 기능성 식품 조성물을 제시하였다.
그러나, 상기 특허에서 사용된 인삼은 미삼, 백삼, 수삼, 건삼, 홍삼, 태극삼, 이들의 추출액, 이들의 분말 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 것으로, 모두 인삼 뿌리만을 원료로 사용하고 있음을 알 수 있다.
또한, 한국공개특허 2009-0078379에서는 활용도가 낮은 인삼의 줄기와 잎을 세척하여 건조시켜 원료를 준비하고, 준비된 원료를 가온 추출, 감압 농축, 및 숙성 살균 과정을 포함하는 홍삼농축액 제조방법을 제시하였다.
상기 특허에서는 그 활용도가 낮은 인삼의 줄기나 잎을 이용하여 홍삼 농축액을 제조하므로 가격이 저렴하면서도 충분한 홍삼의 효능을 제공할 수 있는 홍삼농축액 제조방법을 제공하는 데, 그 목적이 있다고 하였으나, 상기 특허에서는 어떤 방식으로 제조된 인삼의 줄기나 잎을 사용한 것인지에 대해서는 어떠한 기재나 시사도 없을뿐만 아니라, 단순히 활용도가 낮은 것을 사용했다는 기재만으로는 재배시 사용된 과량의 농약이 잔류되어 있을 가능성이 높다. 또한, 상기 특허의 실시예에서도 최종 제조된 홍삼 농축액에 어떤 성분이 포함되어 있는지에 대한 구체 결과가 제시되지 못하고 있다.
따라서, 종래 재배된 인삼뿌리만을 사용하여 사포닌 성분이 다량 포함된 나머지 인삼의 꽃, 잎, 줄기 등을 인삼을 이용한 제품에 사용할 수 있는 방법이 필요하다 하겠다.
Food Chem Toxicol. 2012:2565
이에 본 발명에서는 종래 제조된 홍삼과 사포닌 구성이 상이한 무농약 재배된 인삼의 뿌리, 잎, 줄기, 및 꽃을 이용하여 인삼 농축액을 제공하는 데 그 목적이 있다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 특징을 가지는 인삼 농축액의 제조방법을 제공하는 데도 있다.
또한, 본 발명은 상기 인삼 농축액을 유효 성분으로 포함하는 항산화 작용. 산화적 스트레스를 유도하는 항암제에 대한 감수성 증진, 및 항암면역 촉진 효능을 가지는 기능성 식품 조성물을 제공하는 데도 있다.
본 발명에 따른 무농약 인삼 농축액은 무농약 재배된 인삼의 뿌리, 줄기, 꽃, 및 잎을 원료로 사용하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명에 따른 무농약 인삼 농축액의 제조방법은 무농약 재배된 인삼 뿌리, 줄기, 꽃, 및 잎의 이물질을 제거하여 무농약 원료를 준비하는 단계, 상기 무농약 원료를 추출용매로서 정제수를 이용하여 60~90℃에서 고형분 함량이 63% 이상, 홍삼 성분 50~80mg/g이 되도록 감압 농축시키는 단계, 상기 농축된 농축액을 여과시키고, 여과된 추출액을 90~100℃에서 10~30분간 살균시키는 단계, 및 상기 살균된 농축액을 60~70℃에서 고형분 함량이 60~70%가 될 때까지 강압 농축시키는 단계를 포함하여 이루어질 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 무농약 재배된 인삼의 뿌리, 줄기, 꽃, 및 잎을 원료로 사용한 무농약 인삼 농축액을 유효성분으로 함유하는 기능성 식품 조성물을 제공할 수 있다.
상기 기능성 식품 조성물은 항산화 작용, 산화적 스트레스를 유도하는 항암제에 대한 감수성 증진, 및 항암면역 촉진 효능을 가질 수 있다.
본 발명에 따르면, 무농약 재배되어 사포닌 성분이 다량 포함된 무농약 재배된 인삼의 뿌리, 줄기, 꽃, 및 잎을 사용하여 무농약 인삼 농축액을 제조할 수 있으며, 이에 따라 종래 인삼뿌리만을 사용하는 방법에 비해 원료비를 절감할 수 있는 효과를 가진다.
또한, 본 발명에서는 사포닌 성분이 다량 포함된 무농약 재배된 인삼 원료를 사용함으로써, 최종 제조된 무농약 인삼 농축액은 항산화 작용, 산화적 스트레스를 유도하는 항암제에 대한 감수성 증진, 및 항암면역 촉진 효능을 가짐으로써 건강기능식품의 기능성 원료로 사용될 수 있다.
도 1과 도 2는 무농약인삼 농축액 (GE)와 sulfasalazine (SASP) 처치에 의한 Huh7 세포 내 글루타치온의 상대적 양 변화를 나타낸 것이고,
도 3은 무농약인삼 농축액 (GE) 단독 처치에 의한 NMuMG 세포와 Huh7 세포의 생존률 변화를 나타낸 것이고,
도 4는 무농약인삼 농축액 (GE)와 sulfasalazine (SASP) 병용 처치에 의한 Huh7 세포의 생존률 변화를 나타낸 것이고,
도 5는 무농약인삼 농축액 (GE)이 NECA 유도성 cAMP 축적에 미치는 영향을 나타낸 것이다.
도 3은 무농약인삼 농축액 (GE) 단독 처치에 의한 NMuMG 세포와 Huh7 세포의 생존률 변화를 나타낸 것이고,
도 4는 무농약인삼 농축액 (GE)와 sulfasalazine (SASP) 병용 처치에 의한 Huh7 세포의 생존률 변화를 나타낸 것이고,
도 5는 무농약인삼 농축액 (GE)이 NECA 유도성 cAMP 축적에 미치는 영향을 나타낸 것이다.
이하에서 본 발명을 더욱 상세하게 설명하면 다음과 같다.
본 명세서에서 사용된 용어는 특정 실시예를 설명하기 위하여 사용되며, 본 발명을 제한하기 위한 것이 아니다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 단수 형태는 문맥상 다른 경우를 분명히 지적하는 것이 아니라면, 복수의 형태를 포함할 수 있다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 경우 "포함한다(comprise)" 및/또는 "포함하는 (comprising)"은 언급한 형상들, 숫자, 단계, 동작, 부재, 요소 및/또는 이들 그룹의 존재를 특정하는 것이며, 하나 이상의 다른 형상, 숫자, 동작, 부재, 요소 및/또는 그룹들의 존재 또는 부가를 배제하는 것이 아니다.
본 발명은 무농약 인삼 농축액과 이의 제조방법, 상기 무농약 인삼 농축액을 유효 성분으로 포함하는 기능성 식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 무농약 인삼 농축액은 무농약 재배된 인삼의 뿌리, 줄기, 꽃, 및 잎을 원료로 사용하는 것을 특징으로 한다.
다음 표 1은 본 발명에서 사용된 무농약 6년근 인삼(뿌리)과 잎, 꽃에서의 사포닌 성분을 비교한 결과로서, 이를 참조하면, 독감 면역 증강 효과, TG와 LDL 억제 및 동맥경화 예방효과, 항산화 및 항염증작용(위보호), 신경계 작용(정신안정) 효과를 가지는 사포닌 성분인 Rd가 인삼잎에서, 6년근 인삼 뿌리보다 132배가 많이 나오는 것을 알 수 있다.
또한, 혈압, 혈당 강화(당뇨병), 세포막 보호, 세포 노화방지 등의 효과를 가지는 사포닌 성분인 Re는 6년근 인삼(뿌리)보다 인삼 꽃에 21배가 많게 함유하고 있음을 알 수 있다.
| mg/g | Rg | Re | Rf | Rg2 | Rh1 | Rb1 | Rc | Rb2 | Rb3 | Rd |
| 6년근 인삼뿌리 |
6.594 | 2.551 | 1.872 | 0.413 | 0.490 | 3.923 | 1.195 | 0.874 | 0.334 | 0.396 |
| 잎 | 22.091 | 32.692 | 0.930 | 2.433 | 0.491 | 1.304 | 8.643 | 8.075 | 0.961 | 52.493 |
| 인삼꽃 | 5.186 | 54.041 | 4.927 | 1.516 | 0.818 | 5.253 | 5.528 | 5.575 | 0.997 | 18.094 |
그럼에도 불구하고, 종래에는 재배시 사용된 과량의 농약 때문에 사포닌 성분이 제일 많은 인삼잎과 줄기, 및 꽃을 버려왔다. 본 발명에서는 상기와 같이 무농약 재배되어 사포닌 성분이 다량 포함된 무농약 재배된 인삼의 뿌리, 줄기, 꽃, 및 잎을 사용하여 제조된 인삼 농축액에 특징이 있다.
본 발명의 명세서 전반에서 사용된 “사포닌”은 특별하게 다른 언급이 없는 한, 진세노사이드, 즉 인삼 사포닌과 동일한 의미로 사용되는 것이다.
이러한, 본 발명에 따른 무농약 인삼 농축액의 제조방법은 무농약 재배된 인삼 뿌리, 줄기, 꽃, 및 잎의 이물질을 제거하여 무농약 원료를 준비하는 단계, 상기 무농약 원료를 추출용매로서 정제수를 이용하여 60~90℃에서 고형분 함량이 63% 이상, 홍삼 성분 50~80mg/g이 되도록 감압 농축시키는 단계, 상기 농축된 농축액을 여과시키고, 여과된 추출액을 90~100℃에서 10~30분간 살균시키는 단계, 및 상기 살균된 농축액을 60~70℃에서 고형분 함량이 60~70%가 될 때까지 강압 농축시키는 단계를 포함하여 제조된다.
본 발명에 따른 무농약 인삼 농축액 제조에 사용된 “인삼”은 백삼, 홍삼, 수삼, 흑삼, 미삼, 산삼, 장뇌삼 및 산양삼과 같은 다양한 종류를 포함하는 의미이며, 이는 당업자들에게 자명한 정도이다.
또한, 본 발명의 제조방법에서 고형분 함량은 전체 중량을 100%로 기준으로 했을 때의 값을 의미한다.
첫 번째 단계는 무농약 재배된 인삼 뿌리, 줄기, 꽃, 및 잎의 이물질을 제거하여 무농약 원료를 준비하는 과정이다. 본 발명에서는 3~6년근의 일체의 농약을 사용하지 않고 재배된 인삼의 뿌리, 줄기, 꽃, 및 잎을 모두 사용하는 데 특징이 있다.
또한, 본 발명에서는 국산 인삼을 사용하는 것이 바람직하며, 상기 원료의 배합은 특별히 한정되는 것은 아니나, 인삼 농축액에 사용되는 전체 100중량% 기준으로 무농약 인삼의 뿌리 30~60%, 잎 20~40%, 줄기 10~20%, 및 꽃 0.1~10%로 포함될 수 있다.
본 발명에서와 같이 일체의 농약을 사용하지 않고 재배된 인삼의 뿌리, 줄기, 꽃, 및 잎을 모두 사용함으로써 종래 방법에 비해 원료비를 절감할 수 있는 효과를 가진다.
뿐만 아니라, 상기 표 1에서 확인한 바와 같이 사포닌 성분이 종래 주원료로 사용되던 6년근 인삼뿌리보다 모두 높게 포함되어 있기 때문에, 이를 원료로 사용하여 제조된 인삼 농축액 역시 그 효과가 우수할 것임은 당업자에게도 자명한 정도이다.
본 발명에 따른 무농약 인삼 농축액을 제조하는 두 번째 단계는 이물질이 제거된 준비된 무농약 인삼 원료를 추출용매로서 정제수를 이용하여 60~90℃에서 고형분 함량이 63% 이상, 홍삼 성분 50~80mg/g이 되도록 감압 농축시키는 과정이다.
본 발명에서는 추출용매로서 정제수를 사용하는 것이 바람직하며, 이 단계에서 고형분 함량이 63% 이상, 바람직하기로는 65~70%의 고형분이 포함되도록 하는 것이 고사포닌 성분을 위해 필요하다. 또한, 이 단계에서 홍삼 성분은 50~80mg/g이 되도록 감압 농축시키는 것이 고농축 사포닌 성분을 얻기 위한 면에서 바람직하다.
상기 단계에서 사용되는 정제수 함량은 고형분 함량과 홍삼 성분의 함량이 상기 범위에 드는 범위에서 적절히 조절할 수 있으며, 감압 농축 방법은 상기 정제수가 포함된 무농약 인삼 원료를 그대로 농축시키거나, 원심 분리하여 상등액만을 취해 농축할 수 있으며 통상적으로 사용하는 진공감압농축기를 사용하여 수행할 수 있으나, 그 방법이 특별히 한정되는 것은 아니다.
세 번째 단계는 상기 농축된 농축액을 여과시키고, 여과된 추출액을 90~100℃에서 10~30분간 살균시키는 과정을 거친다.
마지막으로 상기 살균된 농축액을 60~70℃에서 고형분 함량이 60~70%가 될 때까지 감압 농축시키면 본 발명에 따른 무농약 인삼 농축액을 얻게 된다.
한편, 본 발명은 상기 무농약 재배된 인삼의 뿌리, 줄기, 꽃, 및 잎을 원료로 사용한 무농약 인삼 농축액을 유효성분으로 함유하는 기능성 식품 조성물을 제공하는 데도 그 특징이 있다.
본 발명의 “기능성 식품 조성물” 이란 면역증강, 항산화, 및 항암 효과와 같은 기능을 가지는 식품 조성물을 포함하는 의미이다.
본 발명에 따른 무농약 인삼 농축액은 그대로 첨가하거나 당업자에게 공지된 방법에 따라 가공하여, 다른 식품 성분을 추가적으로 첨가함으로서 제조될 수도 있다.
인삼은 정상 세포에서는 항산화 효소들의 전사적 발현을 조절하는 Nrf2를 활성화킴으로써 항산화 작용을 유도하는 반면, 암세포에서는 Nrf2 활성을 억제함으로써 산화적 스트레스를 유발하는 항암제의 효능을 증폭시킬 수 있는 것으로 알려져 있다(비특허문헌 1 참조).
특별히 본 발명에서는 기존 6년근 홍삼에 비해 사포닌 구성이 차별적이며, Re, Rd 등을 높은 함량으로 포함하고 있는 무농약 인삼 재료들을 사용하여 무농약 인삼농축액을 제조하고, 이를 유효 성분으로 포함하는 경우 차별적인 항산화 작용, 항암제에 대한 감수성 증진, 및 항암면역 촉진 효능과 같은 기능성을 가지는지를 확인하였다.
본 발명에 의한 무농약 인삼농축액은 사용되는 기능성 식품 조성물의 사용 목적에 따라 적절히 조절될 수 있으며, 특별히 항산화 작용, 항암제에 대한 감수성 증진, 및 항암면역 촉진 효능과 같은 기능성 조성물에 포함되는 경우 전체 조성물 중 200 ㎍/ml 이내의 함량 범위 내에서 세포 활성을 유지할 수 있어 바람직하다.
본 발명에 의한 무농약 인삼농축액은 사용되는 기능성 식품 조성물의 사용 목적에 따라 적절히 조절될 수 있으며, 특별히 면역증강, 항산화, 및 항암 효과와 같은 기능성 조성물에 포함되는 경우 전체 조성물 중 200 ㎍/ml 이내의 함량 범위 내에서 세포 활성을 유지할 수 있어 바람직하다.
또한, 본 발명의 기능성 식품 조성물에 첨가될 수 있는 다른 성분으로는 본 발명에 의한 무농약 인삼농축액과 혼합하는 경우 부작용을 일으키지 않는 성분이라면 이에 제한되지 않는다.
이하에서 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 이하의 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 또한, 이하의 실시예에서는 특정 화합물을 이용하여 예시하였으나, 이들의 균등물을 사용한 경우에 있어서도 동등 유사한 정도의 효과를 발휘할 수 있음은 당업자에게 자명하다.
실시예 1 : 무농약 인삼 농축액(액상 차)의 제조
전체 중량 100%를 기준으로, 4년근 무농약 인삼 뿌리 50%, 인삼 잎 30%, 인삼 줄기 15%, 인삼 꽃 5%로 구성된 국산 무농약 인삼 재료를 준비하고, 이물질 등을 제거하고 세척하였다.
상기 준비된 무농약 인삼 재료를 추출기에 넣고 정제수(인삼 원료 대비 5배)로 조정하여 70℃에서 감압 농축시켜 고형분 함량 63%, 홍삼성분 70mg/g이 되도록 하였다.
상기 감압 농축시킨 농축액을 여과필터를 통해 여과시키고, 농축기로 이송한 다음, 여과된 추출액을 98℃에서 20분간 살균시켰다. 상기 살균된 농축액을 60℃에서 고형분 63%까지 강압 농축시켜 본 발명에 따른 무농약 인삼 농축액을 제조하였다.
실험예 1 : 항산화 조절 효능 평가
글루타치온은 조직과 세포의 산화 스트레스에 대한 세포 방어에 중요한 역할을 하는 세포 내 저분자 티올로 알려져 있다. 따라서, 본 발명에서는 무농약 인삼 농축액이 암세포 중에서 글루타치온 양에 미치는 영향을 평가하였다.
구체적으로는, 본 발명에 따라 제조된 무농약 인삼 농축액(GE)과 sulfasalazine (SASP) 처치에 의한 Huh7 세포 내 글루타치온 양의 상대적인 양 변화를 Glutathione Detection Kit (Biovision)를 이용하여 평가하였으며, 그 결과를 다음 도 1과 도 2에 나타내었다.
다음 도 1을 참조하면, 간암세포주인 Huh7 세포에서 50 ~ 200 ㎍/ml 무농약 인삼 농축액을 단독으로 24 시간동안 처치한 경우 세포 내 글루타치온의 양의 변화량은 10% 이내였다.
또한, 글루타치온 고갈을 유도하는 약물인 sulfasalazine에 대한 감수성이 무농약 인삼농축액에 의해 증폭되는지 여부를 평가하였다. 50 μM sulfasalazine을 24시간 동안 처치하였을 때 세포 내 글루타치온의 농도는 용매 처치군에 비해 78%였는데, 50 μM sulfasalazine과 50 ~ 200 ㎍/ml 무농약 인삼농축액을 병합처치 하였을 경우 세포 내 글루타치온의 농도는 80, 50, 50%로 감소됨을 알 수 있다.
또한 도 2에서 50, 100, 200 μM sulfasalazine을 24시간 동안 처치하였을 때 세포 내 글루타치온의 농도는 용매 처치군에 비해 농도 의존적으로 각각 88, 56, 22%로 감소하는 것으로 확인되었다.
특히, 100 ㎍/ml 무농약 인삼농축액과 sulfasalazine을 각각 50, 100, 200 μM으로 병합처치 하였을 경우 세포 내 글루타치온의 농도는 45, 16, 6%로 감소됨을 알 수 있다.
따라서, 무농약인삼 농축액은 Huh7 세포주에서 단독으로는 글루타치온의 양을 변화시키지 않으나, sulfasalazine에 의한 글루타치온 고갈을 증폭시킴을 확인하였다.
실험예 2 : 항암면역 효능평가 - 항암제 민감성 효능 평가
무농약 인삼 농축액이 암세포 성장에 미치는 영향을 평가하였으며, 항암제 유도성 산화적 스트레스에 대한 감수성을 증진시키는지 평가하기 위하여 sulfasalazine에 의한 세포사멸에 미치는 영향을 평가하였다. 세포 생존률은 CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay Kit (Promega)를 이용하여 측정하였으며, 그 결과를 다음 도 3과 도 4에 나타내었다.
본 실험에서는 본 발명에 따른 무농약 인삼 농축액(GE)과 시판되고 있는 홍삼 농축액(RGE)를 사용하여 그 효과를 비교하였으며, 글루타치온 고갈을 유도하는 약물인 sulfasalazine와 병용에 따른 실험도 같이 수행하였다.
다음 도 3을 참조하면, 생쥐 유선상피세포인 NMuMG 세포에 무농약인삼 농축액을 72시간 동안 처치하였을 때, 200 ㎍/ml 농도까지 세포 생존률에 큰 변화가 없었으며, 400 ㎍/ml의 농도에서만 25%의 감소가 나타났다. 반면, 간암세포인 Huh7 세포에서는 50 ㎍/ml 부터 400 ㎍/ml까지 약 15%~40%의 세포 생존률 감소가 관찰되었다.
따라서, 무농약인삼농축액을 3일간 처치하였을 때 200 ㎍/ml 농도 범위까지 정상 세포의 성장에는 큰 영향을 주지 않음을 확인하였다.
다음 도 4를 참조하면, Hun7 세포에 무농약 인삼 농축액(GE)을 농도 의존적으로 48시간동안 처치하였을 때 무농약 인삼 농축액(GE)의 농도가 200 ㎍/ml까지 세포 생존률에 영향을 미치지 않음을 확인하였다.
200 μM의 Sulfasalazine은 무농약인삼 농축액 없이 단독으로 처치하였을 때 세포 생존률을 50%로 감소시킨다.(0 ug/ml의 검은 동그라미) 25, 50, 100, 200 ㎍/ml의 무농약 인삼 농축액을 200 μM sulfasalazine과 병용처치 시 세포 생존률은 각각 34, 23, 15, 10%로 감소하는 것으로 확인되었다.(25, 50, 100, 200 ㎍/ml의 검은 동그라미)
반면 대조군으로 사용한 홍삼농축액(RGE)은 sulfasalazine과의 병용처치 시 세포 사멸률을 증가시키지 않는 것으로 확인되었다.
이상의 결과로부터, 본 발명에 따른 무농약 인삼 농축액이 암세포주에서 sulfasalazine에 의해 유도되는 글루타치온의 감소와 세포 사멸을 증폭시킬 수 있음을 확인하였다.
무농약 인삼 농축액은 단독으로 세포내 글루타치온의 양과 정상 세포 생존률을 변화시키지는 않았기 때문에, 선택적 항산화 조절제로서의 작용할 가능성이 있음을 나타내며, 이와 같은 효과는 6년근 홍삼 농축액에서는 관찰되지 않았다.
실험예 3 : 항암면역 활성 평가
최근 암 조직 내 항암면역 활성이 암의 치료에 매우 중요하며, 항암면역 분자를 타겟으로 하는 항암제 개발이 주목받고 있음. 인삼은 전통적으로 면역증강 효과가 있음이 알려져 있으므로, 본 발명에서는 종양 면역모델에서 항암면역 효능을 평가하였다.
아데노신은 종양 미세환경에서 증가되어 있으며 면역세포의 활성을 억제함이 보고되고 있으며, 아데노신 수용체인 adenosine receptor A2A, A2B의 길항제는 면역항암제로 활발히 개발되고 있다. 따라서, 본 발명에서는 무농약인삼 농축액이 아데노신 수용체 활성화에 미치는 영향을 평가하고자 하였다.
아데노신의 수용체인 A2R은 아데노신 수용체 효능제인 5′-N-Ethylcarboxamidoadenosine (NECA)에 의해 Gαs-protein kinase A-cAMP 회로를 활성화시킨다. 이에 아데노신 수용체의 활성화에 따른 cAMP 축적에 무농약인삼 농축액이 미치는 영향을 평가하였다.
A2AR을 발현하고 있는 A431 세포주에 0, 25, 100, 400 ㎍/ml 무농약인삼 농축액을 24시간 동안 반응시킨 후 NECA와 30분간 반응시켰다. 세포를 용해시키고 cAMP-GloTM Assay (Promega)를 이용하여 HTS Multi-Label Reader (Perkin Elmer)로 발광을 측정하였으며, 그 결과를 다음 도 5에 나타내었다.
다음 도 5의 결과를 참조하면, 본 발명에 따른 무농약 인삼 농축액(GE)은 농도 의존적으로 NECA에 의한 cAMP 생성을 억제시키는 것을 알 수 있다. 즉, 무농약 인삼 농축액(GE)의 농도가 각각 25, 100, 400 ㎍/ml 로 증가될수록 농축액에 의한 세포 내 cAMP는 용매군 대비 각각 68, 51, 34%로 측정되었다.
Claims (4)
- 전체 100중량%를 기준으로 일체의 농약을 사용하지 않고 재배된 4년근의 무농약 인삼 뿌리 50%, 인삼 잎 30%, 인삼 줄기 15%, 인삼 꽃 5%로 구성된 무농약 인삼 재료를 원료로 하여 상기 원료 중에서 이물질을 제거하여 무농약 인삼 원료를 준비하는 단계,
상기 무농약 인삼 원료를 추출기에 넣고 추출용매로서 정제수를 상기 무농약 인삼 원료 대비 5배로 첨가하고, 60~90℃에서 고형분 함량이 63~70%, 홍삼 (사포닌) 성분이 50~80mg/g이 되도록 상기 정제수가 포함된 무농약 인삼 원료를 그대로 감압 농축시키는 단계,
상기 농축된 농축액을 여과시키고, 여과된 추출액을 90~100℃에서 10~30분간 살균시키는 단계, 및
상기 살균된 농축액을 60~70℃에서 고형분 63%가 될 때까지 감압 농축시키는 단계를 거쳐 제조된 무농약 인삼 농축액으로서,
상기 농축액 중 홍삼(사포닌) 성분은 50~80mg/g, 고형분 함량은 63%인 것을 특징으로 하는 무농약 인삼 농축액.
- 삭제
- 제 1 항에 따른 무농약 인삼 농축액을 전체 조성물 중 25~200 ㎍/ml의 유효성분으로 함유하여, 면역증강, 항산화 작용, 및 항암 기능을 가지는 것을 특징으로 하는 기능성 식품 조성물.
- 삭제
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