KR100418821B1 - 분배제로서카프릴산나트륨을사용하는저온알부민분획법 - Google Patents

Abstract

SNTU 이하의 혼탁도 수준을 갖는 고도로 안정한 혈장-유도된 치료 알부민 용액이 상대적으로 저온에서 카프릴산 나트륨을 코혼 분획 II+III 또는 IV-1 용출액에 가함에 의해 제조될 수 있다. 카프릴산 나트륨은 불필요한 단백질로부터 알부민을 분리하기 위한 분배제로서 작용한다. 바람직한 양태에서, 알부민 공급 용액 온도는 승온되고 pH가 증가되며 초기 용액 콜로이드를 파괴시키고 콜로이드 불필요한 글로블린 및 제조시 파괴층을 유지하는 분산층으로부터 알부민-함유 상등액을 분배하기에 충분한 조건하에서 대략 6시간 동안 반응시킨다. 이것은 스캐빈저 분자일 경향이 있기 때문에, 알부민은 카프릴산 나트륨을 함유하는 완충액에 대해 투석여과에 의해서 선택적으로 안정화되므로써 높은 알부민 단량체 농도와 낮은 혼탁도 수준을 부장한다. 선택적 안정화를 위해 요구되는 양을 알부민 분자상에 이용가능한 결합 부위의 양에 의해 결정된다.

Description

분배제로서 카프릴산 나트륨을 사용하는 저온 알부민 분획법

본 발명은 일반적으로 혈장-유래 치료용 단백질 용액의 제조, 및 더욱 상세하게는 혈청 또는 혈장으로부터 선택적으로 안정화된 동물 또는 사람 혈청 알부민(HSA), 알파-1 프로테아제 억제제(알파-1 PI) 및 안티트롬빈 III(AT III)을 제조하는 방법에 관한 것이다.

에탄올, 온도, pH, 단백질 농도, 이온 강도, 및 알부민을 제조하는 동안 불필요한 단백질을 불용화시키기 위한 시간을 이용하는 콘(Cohn) 분획법은 1946년에 최초로 공개되었고 미합중국에서는 혈장 가공처리에 대한 기본적인 방법으로 남아 있다[참조: Cohn et al., J. Am. Chem. Soc. 68, 459 (1946)]. 티. 제렐로우프(T. Gerelough)는 콘 분획 공정에서 95% 에탄올을 연속적으로 사용하여 요구되는 공정 규모를 크게 감소시킴으로써 상응하는 제조 비용을 감소시켰다. 제렐로우프 법은 또한 혈장 분획에 대해 미합중국에서 인정된 표준법이다[참조: 미합중국 특허제2,710,294호; 제2,710,293호(1955)]. 유럽에서, 에이치. 니참만(H. Nitschamann) 및 피. 키츨러(P. Kistler)는 알부민을 가공처리하는 단기간 방법을 기술하고 있지만, 생성물은 이 기간 동안 미합중국 기관에 의해 부과된 규제 지침을 만족시키지는 못했다[참조: Vox Sang., 5, 272 (1960)].

미합중국에서의 혈장 분획법은 콘 등에 의한 1946년 공개 이후로 콘법을 사용하여 왔다. 결과적으로, 제조업자는 또 다른 알부민 분획법을 모색하려는 관심이나 필요성을 20년 이상 갖지 않았다[참조: M. Steinbuch, Vox Sang., 23, 92 (1972)]. 또한, 통상적인 분획법은 바이러스를 불활성화시키기 위해 성공적으로 저온 살균처리될 수 있는 알부민을 생산하기 때문에 알부민 제조업자들 사이에는 대체법 및 개선된 분획법을 모색하고자 하는 동기 및 관심이 없었다.

1972년에 엠. 스테인부흐(M. Steinbuch)는 에탄올 이외에 침전을 통해 혈장 단백질을 분리하는 수개의 시약의 능력을 연구했다. 출발물질로서 콘 분획 III을 사용하여, 스테인부흐는 카프릴산의 침전 능력을 연구하였으며, 카프릴산은 이전부터 알부민을 안정화시킨 후(참조: M. Steinbuch, Vox Sang, 23:92-106, 1972, Yu L. Hao, U.S. Patent 4,222,934, 1980), 지질-외피 바이러스를 불활성화시키는데 사용되었다[참조: Seng et al., U.S. 4,949,176, 1990]. 이들 연구의 결과로 과학자들은 이후에 IgG, IgA, 알파-1 산 당단백질 및 전구 알부민(prealbumin)을 정제하는 수가지 방법을 개발하는 동시에 침전 반응이 높은 온도 및 pH에 의존한다는 것을 밝혔다.

사람 면역글로불린을 제조하는 동안, 온도 및 이온강도와 같은 매개변수가최적화되는 경우에 한해서, 카프릴산은 통상적으로 pH 4.8에서 대부분의 혈장 단백질에 효과적인 침전제로서 인식된다[참조: Steinbuch et al., Preparative Biochemistry, 3(4), 363-373 (1973)]. 따라서, 스테인부흐 등은 pH 4.5 이하는 아니지만 약산성인 pH에서 광범위한 비-면역글로불린 침전이 최상으로 수득된다는 것을 밝혀내고 카프릴산을 사용하여 포유동물 혈청으로부터 IgG를 분리하는 법을 기술하였다[참조: Steinbuch et al., Arch. Biochem. Biophys., 134, 279-294 (1969)].

하비브(Habeeb) 등은 카프릴산 침전법을 사용하여 응집물, 플라스민 및 플라스미노겐이 없고 항보체 활성이 낮고 저장하는 동안 안정한 혈장-유도된 IgG를 수득하였다[참조: Preparative Biochemistry, 14(1), 1-17 (1984)]. 또한, IgA는 pH 4.8에서 존재하는 카프릴산으로 IgA 용해도를 기초로 콘 분획 III으로부터 통상의 분획 부산물로서 제조되었다[참조: Pejaudier et al., Vox Sang. 23, 165-173 (1972)]. 분획 III은 또한 IgM이 풍부한 혈장 분획물을 수득하기 위한 출발 물질을 제공한다.

카프릴산 나트륨은 또한 알부민을 정제하기 위해 사용되어 왔다. 이들 방법에 따르면, 카프릴산 나트륨을 첨가하여 혈장을 가공처리하는데 가공처리 스트림이 고온에 노출될 경우 카프릴산 나트륨이 알부민을 보호한다. 과도한 고온은 가공처리 스트림 글로불린을 변성시키며 네오-항원 오염물을 생성시킨다[참조: Schneider et al., U.S. Patent 4,156,681 (1979); Institute Merieux, U.S. Patent 3,992,367].

또한 콘 분획 III을 카프릴산으로 처리하면 혈장 구리 수송을 촉진시키는 알파 글로불린인 세룰로플라스민이 침전된다. 세룰로플라스민을 수득하기 위해 이러한 방법을 사용하면 에탄올 또는 아세톤이 관여하는 변성 단계는 피할 수 있지만, 이러한 방식으로는 단지 말, 노새, 래빗, 염소, 양 및 비비 혈장으로부터만 세룰로플라스민이 수득되었다[참조: M. Steinbuch, Vox Sang., 23, 92-106 (1972)].

현재, 안정화제로서 카프릴산 나트륨을 사용하는 많은 알부민 제법, 및 혈장-유도된 콘 분획 III으로부터 면역글로불린을 수득하기 위해 카프릴산 침전법을 사용하는 정제기술이 기술문헌 및 특허 문헌에 기재되어 있다. 그러나, 불필요한 글로불린 및 제조시 파괴물로부터 알부민을 분리하기 위해 알부민을 제조하는 동안 분배제로서 카프릴산 나트륨을 사용하는 문헌은 없다.

놀랍게도, 본 발명자들은 또한 불필요한 물질로부터 알부민을 분리시키기 위해 에탄올 침전제를 사용하는 대신 카프릴산 나트륨을 사용하여 알부민을 제조하면 상당한 이점이 있다는 것을 발견하였다. 첫째, 카프릴산 나트륨은 통상적인 알부민 제조방법을 단축시키며, 이것은 생성물 처리를 감소시켜 이에 상응하게 알부민 회수율이 25% 이상 향상된다. 수득한 알부민 생성물은 필수적으로 알루미늄이 없고 97% 이상의 단량체 수준을 나타낸다. 둘째, 카프릴산 나트륨 분배법은 알부민 제조를 완결시키는데 필요한 시간을 상당히 감소시킴으로써 장치-관련 제조 비용을 65% 이상 감소시킨다. 셋째, 카프릴산 나트륨 분배법은 콘 분획 II+III으로부터 알파-1 PI 및 AT-III 수율을 향상시키고 일반적으로 혈장 제품의 통상적인 제법보다 더욱 에너지 효율적이다. 마지막으로, 아마도 가장 중요하게는 카프릴산 나트륨 분배법은 에탄올 사용을 상당히 감소시키고, 알부민을 제조하는 동안 아세톤의 사용을 완전히 제거하므로, 유독하고 환경적으로 유해한 용매 잔류물에 의한 환경오염을 피할 수 있다. 본 발명은 하기에서 상세하게 논의되고 설명된다.

본 발명은 분배제로서 카프릴산 나트륨을 사용하여 필수적으로 단량체성 알루미늄-비함유 알부민을 제조하는 방법을 제공한다.

카프릴산 나트륨의 사용으로 콘 분획 II+III 또는 분획 IV-1 용출 단계에서 통상적인 혈장의 분획화가 불필요하게 된다. 본 발명에 따라 목적하는 알부민, 및 불필요한 비-알부민 단백질 및 오염물을 포함하는 콜로이드성 용출 물질에 카프릴산 나트륨을 가한다.

온도 및 pH를 상승시킨 후, 혼합물을 대략 6시간 동안 항온처리하여, 콜로이드 용액이 알부민을 함유하는 상등액과 불필요한 비-알부민 단백질(예: 글로불린) 및 제조시 파괴물을 함유하는 분산층으로 분리되도록 카프릴산 나트륨이 분배제로서 작용하도록 한다. 그런 다음, 카프릴산 나트륨-처리된 현탁액을 원심분리하고, Deae 세파덱스를 가하여 여과를 보조한다. 그런 다음, 현탁액을 여과하고, 12% 단백질까지 한외여과하고 0.02M 카프릴산 나트륨으로 투석 여과하고, 수거하여 멸균 여과하기 위해 벌크화시킨다. 멸균 벌크가 멸균 시험을 통과하면, 알부민을 최종 용기에 충전시킨다.

제1도: 흐름도

제1도는 콘 분획 방법에 따른 통상적인 알부민 제조로부터 본 발명을 특징화시키는 흐름도이다. 흐름도는 기술되고, 요약된 알부민 제법을 연장된 콘 분획법과구별하는데 필수적인 콘 분획 단계만을 강조한다. 선행 기술방법에 대한 가공처리 시간은 20 샤플스(Sharples) 원심분리를 기준으로 하고 대부분의 다른 시간은 가공처리중의 혈장 1000ℓ를 기준으로 한다.

용어의 정의

1. 본원에서 사용되는 "분배제"는 알부민을 제조하는 동안 혈장 단백질 혼합물에 가할 경우, 알부민을 함유하는 상등액과 알파 및 베타 글로불린을 포함하여 응집된 단백질 입자를 함유하는 유백색 분산상인 두 개의 분리된 상으로 이루어진 현탁액 콜로이드를 생성시키는 물질을 의미한다.

2. 본원에서 사용되는 "침전제"는 알부민을 제조하는 동안 혈장 단백질 혼합물에 가할 경우, 용액 pH가 특정범위내에 있을 경우 가역적으로 용액물질을 불용화시킬 수 있는 물질을 의미한다.

3. 본원에서 사용되는 "비-알부민 단백질"은 모든 비-알부민 단백질, 주로 알파 글로불린, 베타 글로불린, 감마 글로불린 및 산 당단백질을 의미한다.

4. 본원에서 사용되는 "제조시 파괴물"은 비-단백질 오염물을 의미하며, 주로 알루미늄과 같은 다가 금속 이온 및 에탄올과 같은 제조 용매를 포함한다.

5. 본원에서 사용되는 "알부민-함유 용액"은 콘 분획 II+III 용출물, 또는 콘 분획 IV-1 용출물을 의미한다.

재료 및 방법

재료:

1. 본 발명을 위한 출발물질인 콘 분획 IV-1 용출물은 통상적인 콘 혈장 분획법에 따라서 제조되고 노스케롤라이나주 클레이톤의 마일즈 인코포레이티드(Miles Inc. in Clayton, North Carolina)에 의해 분획된 원료 혈장으로부터 유도되었다.

2. 원료 혈장은 마일즈의 현행 스크리닝 공정에 따라 완전히 스크리닝된 혈장으로부터 제조되었는데, 이 공정은 마일즈사의 허가를 받은 노스케롤라이나주 클레이톤 시설내에서 수행되었다.

3. 이 공정을 지지하기 위해 단지 최종적으로-가열된 샘플을 평가했다. 당해 분야의 전문가는 저온살균의 최종 처리 동안의 단백질 변이는 현재의 시험 방법으로 예상될 수 없다는 것을 알고 있다.

4. CBER 및 외국 정부 법규에 의해 요구되는 시험은 최종 용기 시험 기준을 제공했다.

방법:

1. 순도 측정

A. 셀룰로즈 아세테이트 전기영동법(CAE)을 사용하여 알부민 이외의 다른 단백질의 존재에 대해 측정했다.

B. 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 사용하여 응집체의 존재 여부 및 다른 단백질의 분자량을 측정했다.

C. 해취(Hach) 네펠로 측정계를 사용하여 알부민 여액의 혼탁도를 국제 혼탁도 단위로 측정했다.

실시예 I

개선된 알부민 제법은 4개의 표준 콘 분획화 단계로 시작한다. 우선, 사람 혈장을 모으고 해동시켜 원심분리한다. pH 4.0 아세트산 완충액(완충액 A)을 함유하는 95% 에탄올을 가하면서 용출액의 온도를 약 -2℃까지 저하시키면서, 형성된 저온 침전물을 수거하고 가공처리하여 인자(factor) VIII 농축액을 생산한다.

알콜 첨가가 종료되면, 생성된 현탁액인 콘 분획 I은, 염수 또는 증류수를 사용하여 1:5로 희석할 경우 pH 7.3에서 대략 8용적%의 에탄올이다. 대부분의 혈장 피브리노겐은 2시간 반응시간내에 침전된다.

분획 I 8%를 원심분리하여 형성된 고체를 제거한다. 그 후, 용출 분획 I에 완충액 A를 함유하는 에탄올을 천천이 가해 분획 II+III 20%가 되게 하고, 상기 물질의 온도를 약 -5℃로 저하시킨다. 최종 혈장 pH는 약 6.8이다. 대략 2시간 반응시킨 후, 분획 II+III 20%를 원심분리하여 감마 글로불린 분획을 함유하는 조악한 II+III 페이스트를 분리한다. 이후에 상기 페이스트를 가공처리하여 IGIV 및 ISG를 제조한다.

그 다음, 생성된 콘 분획 II+III 용출물을 냉 아세트산 완충액으로 처리하여, 증류수를 사용하여 1:10로 희석할 경우 현탁액의 pH가 약 5.2에 도달하도록 한다. 용출물을 약 6시간의 반응시간 동안 항온처리하여 침전 및 변성이 일어나도록 한다. 그런 다음, 알파 글로불린 및 다른 불용성 단백질을 수거하고 생성된 침전물을 사용하여 알파-I PI 및 AT III을 제조한다.

통상적인 분획법에 따라서, 분획 IV-1 용출물을 추가로 콘 분획 IV-4로 가공 처리하는데, 주로 열 분안정성 알파 및 베타 글로불린을 제거한 다음 아세톤 건조,동결 건조, 박막 증발, 또는 한외여과 및 투석여과하기 전에 4회 연속으로 에탄올로 침전시킨다.

그 후, 본 발명에 따라서, 카프릴산 나트륨을 콘 분획 IV-1 용출물에 가하여 습윤시키거나 불필요한 단백질인 알파 및 베타 글로불린으로부터 알부민을 분리함에 의해 알파 및 베타 글로불린을 불용화시킨다. 카프릴산 나트륨은 또한 항바이러스제로서 작용하고, 추가로 알부민의 기계적 분리를 허용한다.

1ℓ당 카프릴산 나트륨 대략 10g을 분획 IV-1 용출물에 가하고, 용액의 pH를 약 5.4 내지 5.8로 증가시키면서 약 25 내지 35℃까지 가열시킨다. pH를 약 5.3 내지 5.6, 그러나 바람직하게는 5.4로 유지하는 동안 6시간 이상내에 반응을 완결시킨다.

용액의 온도를 증가시키면 카프릴산 나트륨을 용해시켜 반응을 완결시키는데 도움이 된다. 약 5.4 보다 낮은 pH 수준은, 바람직한 pH 보다 낮고 알부민이 손실될 수 있는 알부민의 등전점 범위에 근접하므로 pH를 증가시키면 알부민 회수율이 향상된다. 그러나, 약 5.8 이상인 pH 수준은 열 불안정한 글로불린을 용해시켜서 이들이 최종 생성물에 혼입될 수 있게 할 것이다. 카프릴산 나트륨을 가한 다음 총 항온처리 시간은 약 6시간이다.

그 후, 카프릴산 나트륨-처리된 용액을 약 18℃까지 냉각시키거나 더 냉각시켜 세균 성장을 억제시키고 원심분리한다. 그런 다음, Deae 세파덱스 약 1g을 용출액에 가하여 여과를 보조한다. 그런 다음, 카프릴레이트 용출물을 두께가 0.2 마이크론인 막 여과기에 통과시켜 Deae 여액을 생성한다(참조: 제1도). 그런 다음 생성된 여액의 pH를 탄산나트륨으로 중성(pH 6.8 내지 7.2)까지 증가시킨다.

통상적인 방법에 따르면, 산 여액 pH를 중성까지 증가시키면, 용액 혼탁도가 향상된다. 통상적으로는 12NTU 이상의 혼탁도 수준이 pH 5.5에서 발생되고 pH가 5.5 위로 상승되면 약 8NTU까지 감소한다. 이러한 현상은 오염성 글로불린의 등전점으로부터 벗어남으로써 야기되는 것이다.

그러나, 본 발명에 따르면, Deae 여액 혼탁도가 약 3NTU 이하이고, pH가 6.8까지 상승하는 경우, 60℃에서 10시간 이상 지난후에 조차도 의미있는 혼탁도 수준의 변화는 없다.

그러므로, 카프릴산 나트륨-처리된 여액의 pH를 중성까지 증가시키는 것은 혼탁도 수준에 영향을 주지 않는다. 오히려, 여액에 카프릴산 나트륨으로 항온처리시킨 후 오염된 글로불린이 본질적으로 없기 때문에, 카프릴산 나트륨-처리된 IV-1 용출물로부터 생성된 여액은 상승된 pH에서 조차도 5NTU 이하의 혼탁도 수준을 유지한다.

그런 다음, Deae-세파덱스 정화된 여액을 로미콘(Rhomicon)-유형 한외여과기로 한외여과하고 카프릴산 나트륨 투석여과 완충액의 7용적 이상에 대하여 투석여과하여 금속 오염물, 에탄올 및 염을 제거한다. 투석여과 완충액을 최종 용기 알부민 농도에 따라 제조한다. 예를 들면, 목적으로 하는 최종 알부민 농도가 25%이면, 0.02M 카프릴산 나트륨 투석여과 완충액을 사용한다. 최종 알부민 농도가 5%일 경우, 0.004M 카프릴산 나트륨 투석여과 완충액이 필요하다. 30,000 분자량(MWCO) 한외여과 매질을 사용하면 우수한 유량 속도가 생성된다.

그런 다음, 목적으로 하는 최종 용기 알부민 농도를 성취하기 위해 통상적인 기술을 사용하여 알부민을 한외여과한다. 목적 농도는 투석 여과 완충액으로 장치가 세정되기에 충분해야 하며, 그런 다음 최종 알부민 농도 25%, 20%, 7% 또는 5%를 수득한다. 최종적으로, 농축물을 멸균 여과하고 방출 시험을 위해 벌크화시키고 최종 용기에 충전시킨다.

본 발명에 영향을 주는 많은 조건은 온도, pH, 카프릴산 나트륨 농도, 및 반응시간이다. 카프릴레이트 반응의 이상적인 온도를 확립하기 위해 한 번에 1개의 매개변수를 변화시켜서 콘 분획 용출물 IV-1에 대해 실험을 수행했다. 20℃ 범위의 온도에서 시행하여 혼탁한 최종 용기를 생성한다는 것을 밝혀냈다. 또한, 큰 용적의 알부민을 가공처리하는 것은 반응을 완결하기 위해 필요한 시간이 다양하기 때문에 임의로 6시간의 반응시간을 측정했다.

본 발명은 상술한 시험 및 알부민에 대한 열의 효과에 의존했다.

실시예 II

벤치(bench) 로트는 콘 분획 IV-1 용출물 100 내지 200ℓ로 이루어졌다. 수개의 벤치 로트를 가공처리하여 바람직한 매개변수를 획득했다. 허용도의 최종 시험은 알부민을 60℃에서 10시간 가열시킨 후의 혼탁도를 기준으로 했다.

알부민의 스케일 업 로트를 콘 분획 IV-1으로부터 가공처리했다. 이 로트에서, 용출물 콘 분획 IV-1의 1100ℓ를 실시예 1에서 기술한 방법을 사용하여 25% 알부민 최종 용기까지 가공처리했다.

결과

본원에 기술된 공정으로 스케일 업을 통해 하기 데이터를 수득했다.

단백질 농도 : 24.03% 단백질

CAE : 100% 알부민

pH : 6.78

열안정성 중복

(50시간 @57) : 통과

알루미늄 : 7.53ppb

PKA : 참조용의 1%

시트레이트 : 5ppm 미만

혼탁도 : 2.6NTU

나트륨 : 152Meq/L

HPLC :

단량체 : 97.58%

이량체 : 2.42%

점도 : 7.98CPS

밀도 : 1.0699

발열성 물질(3 래빗) : 총 0.2

카프릴레이트 : 0.086M 선택적 결합*

* 2용적 CWFI 투석여과는 이 수준을 약 0.07몰까지 감소시킨다.

검토

본 발명자들은, 불필요한 단백질 및 제조시 파괴물로부터 알부민을 분리하기 위해 카프릴산 나트륨을 사용함으로써 널리 사용되는 치료제인 사람 혈청 알부민을 더 신속하고, 좀 더 효율적이며 저렴하게 제조할 수 있음을 입증했다. 부가적으로, 본원에 기술된 카프릴산 나트륨 알부민 분획법은 아세톤과 같은 용매를 사용하지 않아도 되므로, 화학 용매에 의한 환경 오염을 피하고; 제조 및 장치 비용을 절감하고; 알부민 최종 용기 생산 시간을 단축시키고; 알부민, 및 알파-1 PI 및 AT III와 같은 다른 혈장-유도된 생성물의 수율을 증가시킨다.

또한, 본 발명자들은 알부민이 천연적으로 최종 알부민 용액에 잔류하는 카프릴산 나트륨의 양을 선택하고 분자 인력에 의해 결합한다는 것을 밝혔다. 카프릴산 나트륨을 가한 후에, 알부민 용액의 혼탁도 수준은 후속적인 여과, 한외여과, 투석여과 및 약 60℃에서 10시간 동안 저온살균한 후에도 5NTU 미만으로 유지된다. 결과적으로, 카프릴산 나트륨은 이것을 가한 후 낮은 혼탁도 수준에 의해 입증되는 바와 같이, 제조 공정 동안 생성물 안정성을 증가시키고; 장기간의 보관동안 혼탁도의 증가를 방지하는, 최종 고열 저온 살균 동안 열 분해로부터 알부민을 보호한다.

통상적인 알부민 제조방법은 보통 알부민을 안정화시키기 위해 아세틸-dl-트립토판, 추정된 칼시노겐 또는 염화나트륨을 사용한다. 그러나, 트립토판 또는 염화나트륨은 단기 및 장기의 알부민 안정성을 모두 증가시킬 수 없다. 알부민은 트립토판에 결합하지는 않지만, 그럼에도 불구하고 트립토판은 고온 노출 동안 알부민의 구조적 완전성을 보호한다. 이와 반대로, 알부민은 염화나트륨에 강하게 결합하지만 염화나트륨은 고온에 노출되는 동안 알부민을 보호하지 못한다. 그러므로, 불필요한 물질로부터 알부민을 분리하는 것 외에, 카프릴산 나트륨은 제조공정 동안 및 이후 모두에서 알부민의 안정성을 향상시키고 유지시키는 이중적 기능을 한다.

실시예 및 상기 논의의 관점에서, 본 발명의 몇가지 가능한 변형 및 변화가 당해 분야의 전문가에게 가능할 것이다. 결국, 실시예는 본 발명을 단지 설명하는 것이며 본 발명은 하기 청구범위에 의해서만 제한되어야 한다.

제1도는 선행 기술의 흐름도이다.

제2도는 본 발명의 흐름도이다.

Claims (11)

1. (a) pH 약 5.3 내지 5.6에서 알부민, 비-알부민 단백질 및 오염성 제조시 파괴물을 포함하는 혈장 단백질의 혼합물에 분배제로서 카프릴산 나트륨을 사용하여 알부민 상과 비-알부민 상의 별개의 상이 생성되도록 하는 단계; 및

   (b) 비-알부민 상으로부터 알부민 상을 분리하는 단계를 포함하여, 알부민, 비-알부민 단백질 및 오염성 제조시 파괴물을 포함하는 혈장 단백질의 혼합물로부터 알부민을 분리하는 방법.
2. 제1항에 있어서, 비-알부민 단백질이 감마-글로불린, 알파-글로불린, 베타-글로불린 및 산 당단백질을 포함하는 용액으로부터 선택되는 방법.
3. 제1항에 있어서, 제조시 파괴물이 다가 금속 이온과 용매를 포함하는 방법.
4. 제1항에 있어서, 약 20 내지 30℃ 범위의 온도에서 카프릴산 나트륨을 혈장 단백질의 혼합물에 가하는 방법.
5. 제1항에 있어서, 카프릴산 나트륨을 약 0.04M 내지 0.08M 카프릴산 나트륨 범위의 양으로 혈장 단백질의 혼합물에 가하는 방법.
6. 제1항에 있어서, 카프릴산 나트륨-처리된 용액을 약 2 시간 내지 8시간 범위의 기간동안 항온처리하는 방법.
7. 제1항에 있어서, 혈장 단백질의 혼합물을 약 5.4 내지 5.6의 pH수준으로 만들고, 약 20 내지 30℃ 온도까지 승온시키고, 약 0.04M 내지 0.08M의 농도가 되도록 카프릴산 나트륨을 가하면서 혼합시키고, 약 2 내지 8시간 동안 항온처리하는 방법.
8. 제1항에 있어서, 혈장 단백질의 혼합물이 콘 분획 II+III 용출물 또는 콘 분획 IV-1 용출물을 포함하는 방법.
9. 제1항에 있어서, 혈장 단백질의 혼합물이 콘 분획 IV-1 용출물을 포함하는 방법.
10. 제1항에 있어서, 혈장 단백질의 혼합물이 콘 분획 II+III 용출물을 포함하는 방법.
11. 제7항에 있어서, 혈장 단백질의 혼합물을 약 pH 5.4로 만들고, 약 30℃까지 가열하고, 약 0.06M 카프릴산 나트륨으로 처리하고, 약 6시간 동안 항온처리하는 방법.