KR100344755B1

KR100344755B1 - 면역력증강물질및그제조방법

Info

Publication number: KR100344755B1
Application number: KR1019950044236A
Authority: KR
Inventors: 맘두흐에이치.고네움; 히로아끼마에다
Original assignee: 다이와 야꾸힝 가부시키가이샤
Priority date: 1995-07-12
Filing date: 1995-11-28
Publication date: 2002-11-04
Also published as: PT753582E; US5560914A; ES2147270T3; EP0753582A1; DE69516681D1; JP3519187B2; EP0753582B1; JPH0923895A; BR9603030A; KR970005304A; DE69516681T2

Abstract

식물조직원료를 열수로 추출하고, 불용물을 여별하며, 그 여액을 글루코아 미라제로 처리하여 전분을 분해하여 수용성 다당체를 얻는 과정과, 고지곰팡이과(Aspergillaceae)의 Asp Oryzae, 담자균류(Basidiomycetes)의 Lentinus edodes를 배양한 배양여액에 유산암모니움을 가해 그 침전물로부터 효소의 복합체를 얻는 과정 및, 상기 수용성 다당체와 상기 효소의 복합체를 가해 pH 4.5 에서 30∼60 분 반응시키는 것에 의해 상기 다당체에 생물학적 수식을 주는 면역력증강물질의 제조방법.

Description

면역력증강물질및 그 제조방법

(산업상의 이용분야)

본 발명은 면역력을 증강시키는 물질및 이를 얻기 위한 예컨데 벼과식물, 특히 미당(米糖)등의 식물조직원료의 수용성다당체를 사상균의 생산하는 효소복합체에 의해 수식(修飾)을 행하는 방법에 관한 것이다.

(종래의 기술)

면역력증강물질은 식품으로, 또는 약품으로 넓은 용도가 있다.

나이를 들거나 스트레스등에 의해 면역력이 저하되어 여러질병에 고통받기 쉽다는 것은 일반적으로 알려져 있다.

일상의 식생활에 있어서 면역력을 강화시키도록 하는 새로운 영양화학의 고려방법이 예방의학의 중요성과 서로 작용하여 새로운 전개를 보여주고 있다.

또 암의 치료에 있어 화학치료제, 방사선치료법과 면역증강제의 병용이 높은 치료효과를 높히고 있다.

본 발명자는 면역계에서의 내츄널 킬러(natural killer)세포(이하 NK세포라 칭함)를 증가시켜, 활성화시키기 위해 천연의 소재를 사상균을 이용하여 수식시키는 것이 유효한 것을 알았다.

천연의 소재, 즉 식물섬유소재를 사상균의 배양액으로 자화(資化)하는 방법이 이미 알려져 있다(일본국 특개평 1 - 153701). 이 종래의 기술에서는 소재를 미당을 이용하고 이를 탈지하면서 탈니그닌한 다음, 저농도알카리로 처리하여 미당쌍헤미셀룰로오스를 작성하며, 이를 이용하여 사상균을 배양하는 것에 의해 헤미셀룰로오스를 자화시켜 부분분해하고 있다.

상기 방법에 의해 얻어진 물질이 인체에 대해 여러가지 유효한 효과를 기대할 수 있다. 따라서, 상기 공개특허공보에 기재된 방법에서는 식물섬유소재를 자화에 의해 얻고 있음으로, 품질의 안정한 것이 얻어지지 않았다.

또 얻어진 제품도 NK세포의 증가, 활성화에 관해서는 충분하지 않았다.

또한 상기 방법에서는 사상균을 배양하는 것에 시간이 많이 걸려 공업적으로 제조하는 방법으로는 반드시 적절한 것이라고 말할 수 없다.

(발명이 해결하고자 하는 과제)

본 발명은 NK세포를 증가시켜 활성화시킬 수 있는 안정한 물질을 제공함과 더불어 이를 제조하는 공업적으로 이용할 수 있는 방법을 제공함에 그 목적이 있다.

(과제를 해결하기 위한 수단)

본 발명의 방법은 하기와 같이 3 공정으로 이루어져 있다.

1) 식물조직수용성 다당체의 조정

벼과등의 식물조직, 특히 미당을 열수로 추출하고, 불용물을 여별(濾別)하며, 그 여액을 글루코아미라제(glucoamylase)로 처리하여 전분을 분해하여 수용성다당체를 얻는다.

2) 사상균의 세포외효소의 조정

고지곰팡이과(Aspergillaceae)의 Asp Oryzae, 담자균류(Basidiomycetes)의 Lentinus edodes 을 10 일내지 14 일간 배양한 배양여액에 유산암모니움를 가해 그 침전물로 부터 효소의 복합체를 얻는다.

3) 상기 1)에서 얻어진 수용성다당체와 상기 2)에서 얻어진 효소의 복합체를 가해 pH 4.5 에서 30 - 60 분 반응시키고, 또한 pH 6.0 에서 30 - 60 분 반응시키는 것에 의해 1)에서 얻어진 다당체에 생물학적 수식을 주다.

상기 방법에 의해 얻어진 물질은 β-1.4 크실로피라노스(xylopyranose)쇠사슬을 주로 하는 크실란(xylane)이다.

(작용)

상기한 바와 같이 본 발명의 방법에서는 식물조직의 수용성다당체를 얻는 공정과, 효소의 복합체를 얻는 공정을 각각의 공정으로 하고, 이들을 일정한 조건하에서 반응시키고 있다. 따라서, 본 발명에 따른 생물학적 수식은 효소반응, 탄수화물 분해효소군에 따른 가수분해하기 위해, 이 제법에 의해 얻어지는 물질은 일정의 구성당의 것이 얻어져, 그 활성은 일정하게 된다. 또 10 일 - 14 일정도 걸린 배양공정을 필요로 하는 효소의 복합체를 얻는 공정을 식물조직의 수용성다당체를 얻는공정과는 별도로 행하는 것으로 되어 효소의 복합체를 미리 준비하여 놓는 것이 가능하게 되고, 시간의 단축을 기하고 코스트절감에 유용하게 쓸 수 있다.

또한 본 발명의 방법에서 얻어진 물질은 β-1.4 크실로피라노스쇠사슬을 주로 하는 크실란이다. 본 발명에 있어서는 크실로스(xylose)결합을 분해하는 것은 함유되어 있지 않음으로, 상기 효소를 작용시키는 것에 의해 크실로스결합이외의 결합이 가수분해되고, 크실로스결합이 남아있음으로 본 발명의 방법에서 생물학적 수식이 진보되는 정도 제품에는 크실로스가 높은 비율로 포함되고 있다.

(실시예)

미당 1000 g 에 물 5 리터를 가해 100℃ 로 60분 열수추출을 행한 다음 불용물을 여별한다. 여액중의 전분을 글루코아미라제로 가수분해한 것에 의해 미당수용성 다당체추출액을 얻는다.

미당이외에도 헤미셀룰로오스로 있으면 사용하여 얻는다. 특히 벼과의 식물의 헤미셀룰로오스는 원료로 하여 우수해지고 있다.

본 실시예에 있어서는 2종류의 효소복합체를 작성한다. 한 종류는 고지곰팡이과(Aspergillaceae)의 Asp Oryzac 를 배양한 효소복합체이고, 다른 한 종류는 담자균류(Basidiomycetes)의 Lentinus edodes 을 배양한 효소복합체이다.

이들의 배지조성은 하기와 같다.

1) Asp Oryzae의 배지조성

배양조건 pH 3.5, 30 ℃, 14 일간.

2) Lentinus edodes 의 배지조건

배양조건 pH 4.5, 20℃, 14 일간.

이들 배지에서의 배양후, 배양여액에 유산암모니움을 50% 포화로 되도록 가해, 생겨진 침전물을 분별하고 Asp Oryzae 의 효소복합체(Enzyme - AO)와 Lentinus edodes 의 효소복합체(Enzyme - LE)를 얻는다.

최후에 상기 미당수용성 다당체추출액 4.5 리터에 Enzyme - AO 를 3 g 가해, 최초로 pH 를 4.5 에 조정하고, 40℃ 로 30분 반응시키고, 또한 pH 를 6.0 에 조정하여 30분 반응시켜 Asp Oryzae 의 균체외효소에 의해 수식된 미당수용성 다당체(RBX - AO)를 작성한다.

미당수용성 다당체추출액에 Enzyme - LE 를 가해 마찬가지로 반응시켜 Lentinus edodes 의 균체외효소에 의해 수식된 미당수용성 다당체(RBX - LE)를 작성한다. 이들 물질의 주성분은 β-1.4 크실로피라노스쇠사슬을 주로 하는 크실란(xylane)이다.

이를 제균, 멸균하여 그대로 농축하고, 액제(液劑)로 하여 사용할 수 있고, 또한 동결감상이나 스프레이 드라이(spray drying)에 의해 분체화하여 정제, 과립으로 하여 사용할 수 있다.

이들 RBX - AO 와 RBX - LE 의 이화학적 성질은 하기와 같다.

상기한 RBX - LE 및 RBX - AO 의 효과를 측정하기 위한 환자의 NK 세포의 활성화를 측정한다. 최초 다른 약에 의한 영향을 제거하기 위한 1 개월간 모든 약의 투여를 중지하고, 그 후 RBX - LE 를 구경에서 1 일 6 g 준 결과 당초의 NK 세포의 활성화가 34.5 LU 로 있지만, 2 주간후 66.5 LU 로 상승하고 있다.

그 후 투여를 중지해도 6 개월간 고레벨(64 LU)로 유지한다.

RBX - AO 에서도 거의 마찬가지다.

상기 NK 세포의 활성화에는 크실로스가 관여하고 있는 것으로 사료된다. 거기서 이 크실로스가 최고의 값을 나타낸 미당추출액 4.5 리터에 대한 RBX - LE 및 RBX - AO 의 비율에 대해 검토한 결과를 하기에 나타난다.

상기 실시예와 마찬가지로 최초로 pH 4.5, 60 ℃에서 30 분 반응시키고, 그후 pH 6.0,으로 30 분 반응시킨다.

RBX - AO 의 경우 크실로스의 함유비율

RBX- LE 의 경우 크실로스의 함유비율

상기한 바와 같이, 어느 쪽에도 3.0 g 으로 최고값에 달해 그 이상의 RBX - LE 이나 RBX - AO 를 작용시켜도 크실로스의 함유량은 증가하지 않는다.

이어 반응시간에 대해 검토한 결과는 하기와 같다.

시간은 어느 쪽에도 pH 4.5 경우와 pH 6.0 경우 각각이 나타난 시간과 같이 행해지는 것을 나타난다.

어느 쪽에도 60 분에서 최고값에 달하며 60 분이상 반응시켜도 크실로스의 함유량은 증가하지 않는다.

본 발명의 방법은 식물조직의 수용성다당체를 얻는 공정과, 효소의 복합체를 얻는 공정을 각각의 공정으로 하고, 효소반응을 행하고 있음으로 탄수화물 분해효소군에 따른 가수분해하기 위해, 본 발명의 제법에 의해 얻어지는 물질은 일정의 구성당의 것으로 되고, 그 활성은 일정하게 된다.

본 발명에 있어서는, 10 일 - 14 일 필요로 하는 배양공정을 다당체 공정과는 별도로 하고 있음으로 효소의 복합체를 미리 준비하여 놓는 것이 가능하게 되고, 제품을 얻기 위한 공정으로는 실질적으로 다당체를 얻는 공정의 시간과 효소반응의 시간만으로 좋으므로 전체로서의 시간의 단축을 기하고 코스트절감에 유용하게 쓸 수 있다.

또한, 본 발명의 방법에서 얻어진 물질은 β-1.4 크실로피라노스쇠사슬을 주로 하는 크실란이고, 크실로스를 다량으로 함유하여 NK 세포를 증가시켜 활성화 시킬 수 있다.

Claims

1) 벼과의 식물조직원료를 열수로 추출하고, 불용물을 여별하며, 그 여액을 글루코아미라제로 처리하여 전분을 분해하여 수용성다당체를 얻는 과정과,

2) 고지곰팡이과(Aspergillaceae)의 Asp Oryzae, 담자균류(Basidio-mycetes)의 Lentinus edodes 를 배양한 배양여액에 유산암모니움을 가해 그 침전물로부터 효소의 복합체를 얻는 과정 및,

3) 상기 1)에서 얻어진 수용성다당체와 상기 2)에서 얻어진 효소의 복합체를 가해 pH 4.5 에서 30 - 60 분 반응시키고, 또한 pH 6.0 에서 30 - 60 분 반응시키는 것에 의해 1)에서 얻어진 다당체에 생물학적 수식을 주는 것을 특징으로 하는 면역력증강물질을 생성하는 방법.

1) 벼과의 식물조직원료를 열수로 추출하고, 불용물을 여별하며, 그 여액을 글루코아미라제로 처리하여 전분을 분해하여 수용성다당체를 얻고

2) 고지곰팡이과(Aspergillaceae)의 Asp Oryzae, 담자균류(Basidio-mycetes)의 Lentinus edodes 를 배양한 배양여액에 유산암모니움을 가해 그 침전물로부터 효소의 복합체를 얻으며,

3) 상기 1)에서 얻어진 수용성다당체와 상기 2)에서 얻어진 효소의 복합체를 가해 pH 4.5 에서 30 - 60 분 반응시키고, 또한 pH 6.0 에서 30 - 60 분 반응시키는 것에 의해 1)에서 얻어진 다당체에 생물학적 수식을 주는 방법에서 생성한 면역력증강물질.