PT753582E

PT753582E - Imunopotenciador e processo para o fabrico do mesmo

Info

Publication number: PT753582E
Application number: PT95402171T
Authority: PT
Inventors: Hiroshi Maeda; Ghoneum H Mamdooh
Original assignee: Daiwa Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1995-07-12
Filing date: 1995-09-27
Publication date: 2000-08-31
Also published as: US5560914A; JP3519187B2; KR970005304A; DE69516681T2; KR100344755B1; DE69516681D1; JPH0923895A; ES2147270T3; BR9603030A; EP0753582A1; EP0753582B1

Description

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DESCRIÇÃO "IMUNOPOTENCIADOR E PROCESSO PARA O FABRICO DO MESMO" A presente invenção refere-se a um imunopotenciador e a um processo para a modificação de um polissacárido solúvel em água de um material de tecido de plantas de um membro da família da planta Poaceae e em particular farelo de arroz utilizando um complexo de enzima produzido pelo "Hyphomytes" de modo a se obter o imunopotenciador.

Os imunopotenciadores possuem uma variedade de aplicações como produtos alimentares e medicamentos. É conhecido que o envelhecimento e a tensão baixam a imunidade animal e dessa forma as pessoas sofrerão mais facilmente de várias doenças. Encontra-se numa nova fase de desenvolvimento, relativamente â importância da medicina preventiva, uma nova cadeia de química nutricional que tenta fortificar a imunidade humana melhorando a dieta diária. Numa terapia de cancro, a utilização de um imunopotenciador com um · medicamento de quimioterapia e radioterapia demonstrou um excelente efeito terapêutico. O presente inventor descobriu a eficácia da modificação de um material natural utilizando um "Hyphomytes" no desenvolvimento e activação de células mortíferas naturais (células NK) num sistema imunitário humano. É já conhecido um processo para a metabolização de um material natural, isto é, um material de fibras de plantas numa solução de cultura (Patente Japonesa em estudo n° 1-153701). Nesta técnica anterior, o farelo de arroz é 1 *7 utilizado como a matéria prima. 0 farelo de arroz é desengordurado e desninhizado e é tratado com uma substância alcalina de baixa concentração, produzindo assim uma hemicelulose bruta de farelo de arroz. Utilizando esta substância, o "Hyphomytes" é cultivado para metabolizar e decompor parcialmente a hemicelulose.

Espera-se que o material obtido pelo processo acima mencionado cause vários efeitos no corpo humano. No processo acima mencionado, contudo, uma vez que o material de fibra de plantas é obtido por metabolização, não pode ser obtido um produto com uma qualidade estável. 0 produto resultante não é suficiente para produzir uma actividade eficaz das células NK. No processo acima mencionado, o cultivo do "Hyphomytes" é moroso. Este processo não é sempre adequado como um processo de fabrico industrial.

Resumo da Invenção

Constitui um objecto da presente invenção proporcionar um material estável susceptível de produzir e activar as células NK e possivelmente outras populações de glóbulos brancos, e um processo industrialmente utilizado para fabricar este material.

Para atingir o objecto da presente invenção acima indicado, é proporcionado um processo para a produção de um imunopotenciador, compreendendo as fases de: 1) extrair-se um material de tecido de plantas a partir de um membro da família da planta Poaceae com água quente, filtrar-se um material insolúvel e tratar-se um seu filtrado com glucoamilase para decompor um amido, obtendo-se assim um polissacárido solúvel em água, 2) adicionar-se sulfato de amónio a uma cultura de filtrado obtido pela cultura de qualquer um de Asp Oryzae de Aspergillaceae e de Lentinus edodes dos Basidiomicetas para se obter um complexo de enzima 2

a partir de um seu precipitado, e 3) adicionar-se o polissacárido solúvel em água obtido na fase 1) e o complexo de enzima obtido na fase 2) em conjunto para que os mesmos sejam feitos reagir a um pH de 4,5 durante 30 a 60 minutos e em seguida a um pH de 6,0 durante 3 0 a 60 minutos, modificando biologicamente assim o polissacárido solúvel em água obtido na fase 1).

Tal como acima descrito, a fase de obtenção de um polissacárido solúvel em água de um tecido de plantas e a fase de obtenção de um complexo de enzima são independentemente executados sob determinadas condições. A modificação biológica da presente invenção é executada por uma reacção e hidrólise de enzimas utilizando uma carbohidrase. Por esta razão, o material resultante possui sacáridos de constituição pré-determinados, e a sua actividade é éstável. A fase de obtenção de um complexo de enzima, que requer a fase de cultivo durante 10 a 14 dias é executada independentemente da fase de obtenção . de um polissacárido solúvel em água de um tecido de plantas. O complexo de enzima pode ser previamente preparado, diminuindo assim o tempo de fabrico e reduzindo o custo.

Além disso, o material obtido pelo processo da presente invenção é o xilano possuindo principalmente uma cadeia de xilopiranose β-1,4. Na presente invenção, uma vez que não está contido nenhum material que decomponha a ligação de xilose, a enzima acima mencionada é utilizada para ligações de hidrólise com a excepção da ligação de xilose, e apenas a ligação de xilose é excluída. Por conseguinte, de acordo com o processo da presente invenção, à medida que a modificação biológica progride, o conteúdo de xilose aumenta.

Descrição da Realização Preferida 3

Foram adicionados cinco litros de água a 1.000 g de farelo de arroz, a mistura resultante foi sujeita a extracção com água quente a 100°C durante 60 minutos, e o produto insolúvel foi filtrado. Efectuou-se a hidrólise do amido no filtrado para se obter um extracto de polissacárido solúvel em água do farelo de arroz.

Em geral, a hemicelulose de uma planta Poaceae é excelente.

Nesta realização, são produzidos dois tipos de complexos de enzima. Um deles é um complexo de enzima obtido pela cultura de Asp Oryzae da Aspergillaceae, e o outro é Lentinus edodes de Basidiomicetas.

As composições do meio seguintes. 1) Composição de meio para Água destilada

Glucose

Peptona KH2P04

NaCl

CaCl2

FeCl3

As condições de cultura são 2) Composição de meio para Água destilada

Sacarose

Na4VN03 KH2P04

MgS04

FeS04

As condições, de cultura são para estes produtos são as Asp Oryzae l 1 40 g 6 g 0.1 g quantidade pequena quantidade pequena quantidade pequena pH 3,5, 3 0 ° C e 14 dias. Lentinus Edodes 1 1 5 g 10 g 5 g 2.5 g quantidade pequena pH 4,5, 20°C e 14 dias. 4

Após a cultura nestes meios, foi adicionado sulfato de amónio a cada filtrado de cultura para se obter 50% de saturação. Os precipitados resultantes foram filtrados para se obter um complexo de enzima Asp Oryzae (Enzima-AO) e o complexo de enzima Lentinus edodes (Enzima-LE).

Por fim, adicionaram-se 3 g da Enzima-AO a 4,5 1 do extracto de polissacárido solúvel em água de farelo de arroz. Após o ajustamento do pH da solução para 4,5, a solução foi feita reagir a 40°C durante 30 minutos. Após o pH da solução ter sido reajustado para 6,0, continuou-se a reacção durante 30 minutos para preparar um polissacárido solúvel em água de farelo de arroz (RBX-AO) modificado com uma exoenzima Asp Oryzae. De forma semelhante, adicionou-se a Enzima-LE ao extracto de polissacárido solúvel em água de farelo de arroz, e a solução resultante foi submetida a uma reacção para se obter polissacárido solúvel em água de farelo de arroz (RBX--LE) modificado com a exoenzima Lentinus edodes. Cada um dos materiais resultantes contém xileno tendo uma cadeia xilopiranose β-1,4 como um componente principal.

Cada produto pode ser esterilizado e condensado para ser directamente utilizado como um medicamento liquido. Além disso, o produto é granulado por liofilização ou secagem por atomização para se obter comprimido ou granulado.

As características físico-químicas do RBX-AO e do RBX-LE são as seguintes:

RBX-AO RBX-LE

Peso Molecular 650,000 daltons 600,000 daltons Médio

Sacárido de arabinose 22% arabinose 26% Constituição xilose 54% xilose 48% galactose 5% galactose 7% glucose 6% glucose 6% 5

Manose 8% manose 9 Outros 5% Outros 4

Foi medida a actividade de células NK de pacientes para determinar os efeitos dos RBX-LE e RBX-AO acima indicados. Para eliminar a influência de outros medicamentos, inibiu-se a administração de todos os medicamentos durante um mês antes da medição. Foram administrados por via oral seis gramas do RBX-LE para cada paciente por dia. No inicio, a actividade das células NK foi de 34,5 LU. A actividade subiu para 66,5 LU em duas semanas. Mesmo quando a administração foi interrompida, a actividade manteve-se a um nível elevado (64 LU) durante dois meses. 0 mesmo resultado foi obtido para o RBX-AO.

Os conteúdos de xilose podem ser medidos para determinar o desenvolvimento da reacção de enzima. Foram medidos os conteúdos do RBX-LE e do RBX-AO em relação aos 4,5 1 do extracto de farelo arroz, que exibiu os valores máximos do conteúdo de xilose, e os resultados são a seguir resumidos. Tal como na realização acima mencionada, os produtos foram e 60°C durante 30 minutos e a um AO 38% 48% 49% 48% LE 31% 43% 44% 44% feitos reagir a um pH de 4,5 pH de 6,0 durante 30 minutos.

Conteúdo de Xilose para o RBX 1.5 g 3.0 g 4.5 g 6.0 g

Conteúdo de Xilose para o RBX 1.5 g 3.0 g 4.5 g 6.0 g 6 ο~>

Tal como acima descrito, o conteúdo máximo de xilose é obtido com um conteúdo de 3,0 g de RBX-LE ou RBX-AO. Mesmo quando o RBX-LE ou o RBX-AO é adicionado numa quantidade que exceda 3,0 g, o conteúdo de xilose já não aumenta. 0 resultado do exame para o tempo de reacção é seguinte. 0 tempo representa períodos durante os quais exame foi realizado a pHs de 4, 5 e 6,0. Tempo (min) 30 60 90 120 RBX-LE 48% 54% 55% 53% RBX-AO 43% 48% 49% 48%

Em qualquer caso, o valor máximo é obtido em 60 minutos, e o conteúdo de xilose não aumenta mais mesmo se a reacção for continuada durante um período que exceda 60 minutos.

Tal como acima descrito, a fase de obtenção de um polissacárido solúvel em água de um tecido de plantas e a fase de obtenção de um complexo de enzima são independentemente realizadas sob determinadas condições. A modificação biológica da presente invenção é realizada por uma reacção e hidrólise de enzimas utilizando uma carbohidrase. Por esta razão, o material resultante possui sacáridos de constituição pré-determinados e a sua actividade é estável. A fase de obtenção de um complexo de enzima, que requer a fase de cultura durante 10 a 14 dias é executada independentemente da fase de obtenção de um polissacárido solúvel em água de um tecido de plantas. 0 complexo de enzima pode ser previamente preparado, diminuindo assim o tempo de fabrico e reduzindo o custo.

Além disso, o material obtido pelo processo da presente invenção é o xilano tendo uma cadeia de xilopiranose β-1,4. Ele contém uma grande quantidade de xilose para produzir e 7 activar as células NK e possivelmente outras populações de célula tais como as células T e B.

Lisboa, 04 de Maio de 2000

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Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Processo para a produção de um imunopotenciador compreendendo as fases de: 1) extrair-se um material de tecido de plantas a partir de um membro da família da planta. Poaceae com água quente, filtrar-se um material insolúvel e tratar-se um seu filtrado com glucoamilase para decompor o amido, obtendo-se assim um polissacárido solúvel em água; 2) adicionar-se sulfato de. amónio a uma cultura de filtrado obtido pela cultura de qualquer um de entre Asp Oryzae da Aspergillaceae e de Lentinus edodes dos Basidiomicetas para se obter um complexo de enzima a partir de um seu precipitado; e 3) adicionar-se o polissacárido solúvel em água obtido na fase 1) e o complexo de enzima obtido na fase 2) em conjunto para que os mesmos sejam feitos reagir a um pH de 4,5 durante 30 a 60 minutos e em seguida a um pH de 6,0 durante 30 a 60 minutos, modificando assim biologicamente o polissacárido solúvel em água obtido na fase 1) e produzindo um imunopotenciador.
2. Imunopotenciador produzido pelo processo de acordo com a reivindicação 1.
3. Processo de acordo com reivindicação 1 em que o material de tecido de plantas é farelo de arroz. Lisboa, 04 de Maio de 2000 p ÍG&MTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL

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