JPS61111304A - 重合体粒子の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は疎水性粒子衣ｌ勿有し、かつ水媒体中で分散安
定性のよい嵐合体粒子の製造方法に関する。待に＆＃素
、虫白負、及び免役ｒＩ５性″４１４買など會吸着固定
化して診曲用試薬として好適に使用し侍りＭせ体収子の
＃！遺方法ケ提快するものである。

（従来の技術及び発明が解決しようとする問題点）抗原
・抗体反応をネ１１用する兇便字的俣査に２いて、縦集
反応は沈降反応、葡体粕せ反応と共に、あるいにこれら
に比して着しく細ｊ便２７為つ祝電な反応として利用さ
れていり。そして、縦集ｉ応は、遊離細胞や細困族次圓
に局在する抗原　　　ｔｓ出する反応と共に、抗原相製
孜何の進歩により特異性の畠い抗皿悄が得らｔＬること
によって、特異性の烏い抗俸忙血球粒子、ベントナイト
粒子、カオリン枚子、ラテックス板子などの梓子担俸に
１芝ちぜて分き、対応する抗原忙縦果反応によって検査
するなど、−木検査における応用軸−が著しく拡大して
いる。

免役字的倹果反応用として（り担捧は株々のものが公知
で、該担体を便用した棟々の診研用試業が仰らｊしてい
る。こｔ′Ｌすを犬別丁心と免役枯性物負を物理的に吸
着した診断用試薬と免役活性’ａｒｃ共有結合で結付さ
せた診断用試薬になる。これらの試楽にはそれぞれ一長
一短がりり玩在なお完全に満足出来る診断用試薬は存在
しない。

診断用試薬の担体としては、一般に１．合体粒子が用い
られてお９、診断用試薬に遇した重合体粒子の製造方法
の開発が望まれている。カルボキシル基ｔ−待った水浴
性ビニル糸単重体と疎水性ビニル系単量体七用いたムせ
捧粒子の製造方法としては、例えば、特公昭４７−６０
６号公報には、（メタ）アクリル酸６Ｏ−１００１Ｌｉ
［とスチレン、アクリロニトリル寺の緘水注ビニル系単
量体Ｏ〜４０凰ｔ％とｅｘ甘して得られる水浴性の騰状
電せ体を乳化剤として、味水怪ビニル系単量体金乳化惠
せする方法が１躯１　　　されている。しかしながら、
この方法により得られｆｃ電甘せ粒子は粒度分布が非常
に広いだけでなく、ｌｊＬ甘体せ子表曲が憾めて親水化
さｔしるたりに、Ｘ曾俸粒子に完投活性物質を吸有させ
て診断用試薬として用いても、免投字的凝楽反応の祝敵
性の上で満足でさる結果が侍られないＯまた、高分子−
又集３３巷５６５〜５７４負（１９７６年）には、乳化
剤不伴仕下にアクリル酸とエチルアクリレートの混せｍ
ｔ水ｉ＋中で不拘−賞せした鏡に、スチレノＩＣ除加し
て皿せする方法が記載されている。この方法により得ら
れた塩曾体粒子は均一な粒子でりるが、譲重合体粒子に
免投法性物賞を吸着させてｍ−［用試桑として用いても
、遠心分離工程での再分散性りるいは憬存時の分淑宥足
注の上で胸是できる結果が得られない。この原因として
、第１反目１甘で得られたアクリル酸とエチルアクリレ
ート共重せ俸は鵞曾体粒子表闇に改紬３れる１唄同が強
く、かつカラス私移ｍ度が低く未もかいたのに、遠心分
離による精製工程で夏合体粒子を稍製すると、重合体粒
子同志の噛右がνころ　　　　へことが考えられる。ま
た、この貞台坏程子に完投活性ｖ；３買を吸着固定化し
た診断用試榮も同様に遠心分離工程たけでなく９に＃中
に者しい非符異的な凝集反応が２こる九め、分散安定性
が劣ると考えられる。

（関題点ｔ″解決するための手段） 不発間者らは、上記の重合体粒子の製造方法の欠点を克
服すべく鋭意研究ｔ−真ねてさた結果、鴬〈べきことに
、特定量の水浴性ビニル系卑菫体と単独］１会体のガラ
ス転移温度が４０℃以上となるような疎水性ビニル系単
量体の混合物を乳化剤不存在下に東会し、次いで該疎水
性ビニル系単量体をＸ曾することによって、得られたに
＠ｒ体粒子に完投活性物質を吸着固定化した診断用試薬
の分散安定性が著しく同上し、しかも診断用試薬として
極めてＸ要な性質でりる鋭敏性が優れたものとなること
勿見い出し不発ｔｑｒ完成するに至った。

即ち、本＠明は＾水１００！ｉｔ部に対する溶解度が１
０３！Ｅｔ部以上の水＃性ビニル系隼ｆ坏ｌ〜５ｏｘｔ
壬と、■水１ｏｏｘ麓都に対する溶解度が３厘麓錦以−
ドで、且つ、単独ｌ曾俸のカラス転移温度が４０℃以上
の疎水性ビニル糸単瀘体９９〜５０′Ｍ菫係の混曾物を
乳化卸Ｊ不存在下の水媒体中で、水浴性ラジカル嵐せ開
始剤の存在下にＸ甘を竹なって（第１段目亘せ）水に不
溶性の重合体を得、欠いで該重合体の存在下に、上記■
の疎水性ビニル禾卑菫俸ｔｊｋせする（第２反目″Ｍ、
奮）こと全特徴とする電せ俸粒子の製造方法でるる。

本発明の方法により得られゐ皿せ捧粒子金用いた診断用
試薬の分散安定性の同上に框、嵐貧体粒子衣血の親水基
の嬢度が大さく蕾与しているものと考えられるが、−万
、栽水丞の増大に伴って免投活性物貞の亜せ俸粒子衣ｌ
への吸着領域が著しく狭くなり、診断用試薬の耽販注は
低下すると考えられる。

しかしながら、上記の予想に反して本祐明で得られた＊
合体粒子は、親水基＠反が瑠カロしても免役活性物質を
吸着固定化でさる１幼な疎水性表面が保たれ、兜役血清
学的縦果反応の睨畝性が大さい。その理由は１３Ｉ４Ｌ
−）かでないが、本晃＃！Ａ省らは次のよう１こ他山１
１シている。第ｌ収目ｌ甘で得られたｌ［背体は水不溶
性であることと・親水基が’Ｍ８体表血に存在している
ために、第２獣目惠甘で用いる疎水性ビニル系単量体で
は膨部するが、該疎水性ポリマーとの相溶性が乏しくな
り相分離が起こり易くなると考えられる。

そのため、親水性の大きい第１段目の′Ｎ台体はＸ曾体
粒子の粒子表面にぶり多く龜１むし、かつ粒子衣曲層で
部分的に局在化していることが考えられる。従って、ｌ
曾体粒子の表面で、免役活性物員を吸湯固定化するに必
要な疎水性部分の占有向槓會保つたま＼ｌ曾合体子の栽
水基衾此を増〃口さぜることができると推御１される。

かかる理由によプ、本発明で得られる電τ体粒子は免投
字的凝集反応用担体として宜／した特注ｔ″発揮きる。

本発明のＸ曾体粒子の製造方法は、乳化剤不！　　存在
下に水媒体中で不拘−重せすることが極めて必要である
。乳化剤を添加すると本＠明の効果が得られない。

本発明で使用する水浴性ビニル系単量体は水１００ムを
部に対する浴触度が１０重、求部以上でりることが必要
でるる。水ＶＣ対する陪屏度が１０３ｉ慮都より小さい
と得らｒした富曾俸粒子の親水性が低くなり、分散安定
性が低下する欠点がｂ◇ので好ましくない。本発明にお
いて便用される水浴性ビニル糸車を体は、ビニル基の他
に、水浴性を付与するためにカルボキシル基、ヒドロ午
シル基、スルホン鈑基、ホスホン欽基、又はアミノ基を
有していることが好ましい。この内、カルボキシル基又
はヒドロキシルｍｔ’Ｍする水溶性ビニル系単量体が特
に好適であるＯ譲水浴性ビニル未単量体の代表的なｔ（
１）をＩａけれは、アクリル欲、１−クロルアクリル酸
、２−メチルアクリル敵、メタクリル叡、マレイン歌、
スチレンスルホン酸、２−アクリルアミド−２−１ｆル
プロパンスルホン激、アクリルアミド、Ｎ−（２−ヒド
ロキシプロピル）メタクリルアミド、２−ヒドロキクエ
チルメタアクリレート、グリセロールモノメタクリレー
トアリルアルコール、ポリエチレングリコールモノメタ
クリレート等でめる。

これらの単量体は単独°めるいは混貧して用いるとよい
。これらの中で、アクリル酸、メタクリル酸、グリセロ
ールモノメタクリレート、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピ
ル）メタクリルアミド、ポリエチレングリコールモノメ
タクリレート等のヒドロキシル基又はカルボキシル基ｔ
−”！する単量体が好適に採用される。さらにまた、不
発明の水溶性ビニル糸車を体のｉ＠１段目Ｘ甘でせ用す
る割付は１〜ｓｏｎｇｓでめ９、好ましくは５〜４０重
を暢が好適に採用ちれる。水浴性ビニル系単量体が１１
［ｔ％より低いＪ＃甘にはｉｌ！、　＠体粒子の分散安
定性が低下する場せがわるので好ましくない。ま７’Ｃ
５０嵐量係より多い４曾にはＸ曾体粒子が安定的に得ら
れないことが多いたけでなく、診断用試染とした礪せの
鋭敏性が著しく低くなるので好ましくない。不発明に於
いて、第１段目Ｘ付で得られるＸ＃坏が水に不溶性にな
ることが必要でめる＠嵐合体が、水にａＪ　！でろる礪
せには第２獣目惠甘で侍らｎる嵐背体粒子の粒匿分布が
広くなるたけでなく、免役活性′ａ３［金吸着固定化し
た診断用夙楽の鋭敏性が低下するので好ましくない。便
って、水浴性ビニル系単重体の疹加ｔは、水浴性ビニル
系単量体の水に対する浴ｐ＃度及び疎水性ビニル系単重
体の水に対する浴無度にも依存する。

本発明で使用する疎水性ビニル糸華ｉｔ俸は水１００１
を部に対して浴牌度が３１量部以下でなければならない
。水１００恵を部に対する溶解度が３憲瀘郡より大きい
ビニル系単量体を用いると、親水基を粒子表１層に誂１
ｌｌＪδぜられないばかりでなく、粒度分布の揃うｆｃ
１甘俸曾俸金得ることができなくなるので、本発明の効
果が得られない。該疎水性ビニル糸車を棒としては、水
ｔｏｏｘｔ都に対する溶解度が１基量部以下でるるもの
が好ましい。また、該疎水性ビニル系単量体は単ａ重付
体のガラス転移温度が４０℃以上でめゐことが必要でめ
る。卑独凰せ体のカラス転移温良が４０Ｃ工り低い嬌せ
には、！曾俸粒子會遠心分隘して棺製する噛せにはしば
しは重合体粒子同志の融層がおこり再分散が困難になる
だけでなく、免役活性物質を吸暑固定化した診断用試薬
の保存安定性が著しく低下することかめるので好ましく
ない。譲味水性ビニル系単量体は、ビニル基と、疎水性
基としてアリール基、ハロゲン化アリール基、アルキル
エステル基又はハロゲン原子を有するものが好ましい。

特に疎水性基としてアリール基又はノ・ロゲン化アリー
ルＮＩｔ−有するものが↓り好ましく使用ちれる。水１
００重量部に対する浴解度が３ｉｔ部以下でかつ単独１
曾体のカラス転移温度が４０℃以上でろる疎水性ビニル
系単量体の代表的なものｆｔ挙げれば、スチレン、ビニ
ルトルエン、クロルスチレン、クロルメチルスチレン、
塩化ビニル、メチルメタクリレート、エチルメタクリレ
ート、グリシジルメタクリレ−１ト、りるいは４−クロ
ルフェニルアクリレート等でるる、これらの中で、スチ
レン、ビニルトルエン、クロルスチレン、クロルメチル
スチレン等のアリール基又はハロゲン化アリール−ｈｔ
もつビニル糸車を俸か好適に採用６れゐ〇不８明Ｖこお
いて、第１ｐｊ目鋤台と弔２段目恵せの頁せ順序は憔め
でに矢でるる。即ら、本発明の疎水性ビニル糸卑蓋庫ｒ
水媒坏中で乳化剤不存在下に水浴性ラジカル開始剤τレ
ノして厘曾會竹ない、欠いて水浴性ビニル糸琲蔵俸と疎
水性ビニル糸車ｉｔ本との混せ妨を冷カムして重合を行
なっても、安定的に重合体粒子が侍Ｌ−）１ないはかり
か、たとえ重合体粒子が侍らｎても憔めて注員の異なっ
た′ＢＬ甘捧せ子の混せ物が侍ら／’Ｌ罠すするので、
本発明の効果が発弾δれない０本９Ｉ３明Ｖこ用いる水
浴性ラジカル開始剤（１特に限定的でなく公知のものが
１史用さｒしる。νりんば、過ｋｇナトリウム、　＊億
［カリウム、ｙｔ！！＊休ｒＭア体モニウム等の過硫酸
塩、父は過懺ぼ塩とチオ抗酸ナトリウム、チオｍｔＴＲ
カリウム、チオｗは水系ナトリウム寺のチオ−ぼ化せ物
及び銅イオン、妖イオン寺の分解　　　敬促ａ剤ｋＡ１
＋曾わせたレドヴクス禾態媒が好適に使用さｎ／！３、
水浴性ラジカル開妬細の改良は］Ｃ曾温度、単重体酸腋
に依存する丸めに唄定的でないが、０．０５乃至２０　
ミ！Ｊモル／ｌの範囲が好適ｖｃ採用される。

また、水浴性ラジカル開始剤は、ｔ４１段目で重台する
単量体の重合速度を壇〃Ｉさせて、第２段目で重合する
単量体の１＠１段目で！会した重合体への吸収ｔよくす
るために、第１戚目に全量重加することが望ｌしいが、
ｇ１段目の１１Ｌ台速匿が充分大きくなる条件を設定す
れは、第１段目と第２段目に分割して添刀ｌしてもよい
。

不発明に２いて重合温度は４０℃乃至８５℃より好まし
くは５０℃乃至８０℃がよい。第１段目の電曾温度と１
Ｉ４２段目の′ＸＬ会温度は同じでおることが重付操作
上好ましいが、単量体組成に二っては異なってもよい。

本発明において第１段目で１合する単を俸の第１段目及
び第２段目で重付する全車重体に対する栴成量は、特に
限定されないが、第１段目蓋会で生成した重合体粒子に
５ｇ２段目で重付する疎水注ビニル糸単童俸が効率よく
吸収姑れる工うに選択することが好ましい。通常に１乃
至４０重′Ｉｋ％、より好ＩＬ、＜は２乃至２０重量係
の範囲から選択することが好適でおる。

本発明において水浴性ビニル糸単童俸の全車を体に対す
る割付は０．０２〜２０重量％、好ましくは０．０５〜
１０１（ｔ％が好適に採用される。

１１ｇ１段目で憲曾する単量体の水に対する酸度は、単
量体の憲せ速腿が小さくならないようにすることが好ま
しく、電曾温度、開始酌駿度に依存するが、通常水に対
して０．５乃至２０容童悌、よシ好ましくは１乃至１０
谷被憾が望ましい。

第１段目￥に会では、ビニル糸車ｔＫ−の５０モル係以
上、好ましくは８０モル優以上の電曾を行なうことが好
適でめる。

上記のような重付を行なうために採用される＠１段目の
Ｎ置時間は、″ｊＪＬ甘温腿せ単量体の種類と酸度など
に工って異なるが、一般には２０分乃至５時間、より好
ましくは３０分乃至３時間が好適に採用石れる。

第２段目］［曾は、′５ｇ１段−皇甘に引せ続いて、同
じＭ曾槽中で疎水性ビニル系単量体を奈カロして行なう
ことが好デしいが、第１段目重置で得られた′ＭＬ廿体
ｒ分離した後、別の惠曾情に得られた重合体を添加して
第２段目凰せを行なうこともでさる。

第２段目Ｘ盆は、第１段目重曾で得ら才した恵曾体の存
在下に行なわれる。

第２段目で重置する疎水性ビニル糸単菫坏は、第１段目
で１合し７ｔ　ｍ　ｆｔ体によく吸収されるように、疎
水性ビニル糸車蓋体の重付違反より速い走置で１１！Ｉ
Ｉ　ｋ象〃軸することが望ましいが、第１段目で憲会し
た単を体の＠甘が多い横付には短時間で添加することも
できる。

４１ｇ２段目の重付時１司は、１会する疎水性ビニル系
単量体の極類と改変によって異なるが、一般にｒｉ３０
分乃至５０時間、基９好ましくは１１　°゛“′１°°
″″″”Ｍ″′″″″′−“６゜不発明において均一な
１１！、合体粒子を得ることと、第２ｈＬ目で１賞する
単量体が第１段目１曾で生成し友１せ体粒子に効率よく
ａ収嘔れる工うに、効率のよい不断の撹拌が好ましい。

本発明により得られた３ｓ甘合体子は、水媒体中での疎
水性′＠′愼化甘物せａ書割、生俸内での６櫨細胞、組
執によ／ｂ貫賞作用の欽祭用ａ士、及びｍ累、蛋白ｊ［
めゐいは免役活性物質の吸着固定用粒子、寺に応用でさ
、符に免役活性ａＸｔ＠−看固定化した診曲用拭楽は免
ｌｓ２活性吻買０　　、。

吸看固定化量が大きいために免役字的凝集反五６性が大
きいにけでなく、分散安定性と保存安定性に優れる特徴
がろゐ。

以下に、不発明で得られた息せ捧粒子を診断用試薬と７
して用いた礪曾について説明する。

本発明で得られた凰曾坏程子に物理収右によって固定化
する完投活性＠買としては、符に限定的でなく公知のも
のが１更用出来る。代表的なものを例示すれば、例えば
、変性ガンマグロブリン、リフマチ因子、抗残因子、ヒ
トアルブミン、抗ヒトアルブミン抗体、イムノグロブリ
ンＧ（ＩｒＧ）、、イムノグロプリ／Ａ（Ｉ’Ａ）、イ
ムノグロブリンＭ（Ｉｆｙｌ）、ストレプトリジンＯ１
抗ストレプトリジン０抗体、Ｃ−反応性蛋白、抗Ｃ−反
応性蛋白抗体、アルファーフェトプロティン（ＡＦＰ　
）　、抗ＣＥＡ抗体、知胎児性抗原（ＣｇＡ）、抗ＣＥ
Ａ抗体、ヒト胎盤ラクトゲン（）ＩＰＩ、）、抗）ＩＰ
Ｌ、抗体、ヒト繊毛性ゴナドトロピン（）ｉＣＧ）、抗
ＣＥ抗体、抗エストロゲン抗体、抗イノシェリン抗体、
Ｂ型肝炎表面抗原（）ｆＢｓ）、抗ＨＢＳ抗体、佛毒ト
レボネーマ抗原、風参仇涼、袖体酸分Ｃ抗輛体成分Ｃ＋
ｑ？Ｌ坏、Ｉｑ　　ゝ 等の公知の免役活性物質ｔあげることができる。

本発明で得られた東曾体粒子に成層で固定化される該完
投活性物質の童は、各検量項目に適している割付で恵曾
体粒子に固定化させれば工く、−概に限定されない。一
般には、譲免＆活性物賞の量が多い程、診断用試薬の鋭
敏性及び迅速性が上がるたの、成畝性及び迅速性金喪氷
する礪曾には、画一のム曾体粒子に飽和丁ゐ迄、免役活
性物買を成層させることが好ましい。

本発明の方法により製造したｍ−置体粒子は、免役＠注
物實の結昶吸粛量が多く　、ｌｌ’ｌｊえは、ヒ）ＩＰ
Ｇの飽沌吸省ｔは、重合体枚子の単位表血穎当り１ｑ／
−以上の１１ｒボすつ 本ｘＡ明により得られた貞合体粒子は疎水性と親水性の
バランスが憾めて良＜ａ４ｍｇｒしているので、咳］［
曾体粒子表曲に比軟的多量の免役活性物ｉｔ極めて容易
に物理吸着法で固定化できる特徴かめる。例えば、抗原
又は抗体とＭ−８−俸粒子ｔ−＊衝敵又は生理食塩水な
どの水媒体中で混貧し、抗原又は抗体が化学的に変化し
ないように、でしてそれらの兇役学的性買を株持させる
ように、非′ｇに温和な条件ドに抗原又は抗体ｔ−１［
曾体粒子表曲に成層さぜることがでさる。

重合体粒子表面に吸看された免役油性物置の意は、重置
俸粒子の疎水基の成層部位を飽和又はプロツタさ扛るよ
うに遇ふことか好ましいが、ＩｊＭ、′；＃、する成層
部位を過当な初買、例えば兄没字的に不活性な午血首ア
ルブミン、ゼラチン尋でプロブク嘔せることができる。

（効果ｌ 不党明で得られたＮ　＠″俸粒子は、その精製工程に於
ける遠心分離操作を経ても、再分散性が良好でるる。ま
た、上記の惠合体粒子に免役活性初買を吸着固定化した
診断用試薬は、感作の僅に精製するために遠心分離操作
を経ても分散安定性と株存安定性が著しく優れている。

特に、Ｘ屏實を多葉に含む緩衝漱中で十分安定でめるた
め、免役活性物質の固定は成解實會言む緩衝敵中で行な
える。便って、上記の診断用試染は被俣坏欣と混合時に
非特異的凝集を防止でさるという特徴をも鳴している。

しかも免投学的縦果反応の＠散性と迅速性も良好でろる
特徴を有する。

以下に、実施例及び比較例を挙げて本祐明ｔｌ　　　嘔
らに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定
されるものではない。

実施例１〜８及び比較例１〜７ 攪拌付きカラス製フラスコｔ　ｉｔ！’、累ＷＬ侠した
鏡に、蒸留水２７００　（！ｅ　　ｋ／Ｊｔｌ＆て７０
℃ＶＣ％ｔ、　ッた仮に、窒素雰囲気下、撹拌ドｖｃ過
ｗ賊カリウムに５．０ミリモル／を酸度になる工うに確
〃１した。仄いて７０℃に加温した第１表にボす卑皺体
混曾ｖ！４を爾１表に示す割付で硝／ＪＬＩ　して、７
０℃で５１！１次に下す如く第１ｗｉ目の皇せτ何なっ
友−その後第２段目１合のスチレンｔ−第１表に示す割
付で定型ポンプで間々姫〃口してから、所定時間、７０
℃で撹拌ドに重付した。１甘恢、室温まで冷却してから
、侍られた惠合体靭子を謙紙（Ｎ１２）で瞳別して大さ
な凝集体を床いた。

更に粗い真曾体粒子を運Ｉし分離で光分に除いた後、水
蒸気＃留を３時間行なうことによって残存する単量体を
除い罠０久いで遠心分離、蒸留水への再分散の操作を繰
返した後に、イオン交換ａ４脂で脱イオン操τＦ、τ竹
ない、更に遠ｌｕ分能と洗１’Ｆを行なって菖曾俸粒子
Ｃ梢裂した。併られ九惠合体靭子の祝十楼ｔ−第１次に
示す。

■　ヒトＩｆＧｔ−固定化したｍ曾体粒子の調製０）ム
曾体粒子の調製で得られた本発明の嵐曾体粒子ｔｉ！ｉ
ｌＩ型分―腿１憾でグリシ／緩慟敵に分散した。本発明
に於いてグリシン緩衝液とはグリシン０．０５モル及び
食＠０．０５モルを水１ｔに浴解し、次いで２現定水敵
化す）　ＩＪウム水溶液でｐＨを８．２に調製し、もら
にアジ化ナトリウムｔ１ｆ添加したものでるる。

本！６明に於いてヒトＩ　ｆＧμ、ヒト血清を飽和蝋女
で塩析し、さらに透析全行ない精製したもの金用い友。

ヒトＩｔＧをグリシン緩衝液により希釈し１／ｌｖ／Ｔ
ＲｔＫ′ｖ＠姫する。欠いで１ｆ数希釈法によりヒトＩ
ＰＧをグリシン緩＠漱にょシ希釈してヒトエｔＧ希釈醜
′ｔ−調製する。１係嫌度の重置坏粒子分散漱１答にヒ
トＩｆＧ布躯歇１容を〃ｌえ撹拌し、室温下２蕗間放置
する。欠いてクシ血悄アルブミンｔｌ係のａ反になるよ
うに添加し、４℃に株５１仮数直してヒトエ？Ｇを固定
化した里合体粒子に４＠た０仄いで遠心分騙、グリシン
緩衝液への再分散の操τＦｋ１Ｍ９返え丁ことによりヒ
トＩ　ｔＧｔ−固疋化した電置体粒子を抗陸した。

さらに遠心分離しｆｃ僕、ヒ）ＩｒＧｉ固定化した］ｌ
′曾合体子τウシ皿前アルブミン２０．１％の酸度で添
加したグリシン緩悔敵に８寸散し固型分酸度ｔ−０，５
％に調整し、４℃に憬ら株存した。

６）　抗原・抗体反応 ヒトｌｔＧ’＜ウサキに免役して得た仇ヒトＩＰＧり丈
キ全血清を６０℃、３０分丼鯛化処理を行なった０この
血清を以下仇ヒ）　Ｉ　ＰＧウサギ血清と呼ぶ。

抗ヒトＩｔＧウサギ血ｆｆ？グリシン緩＃敵で２０倍に
希釈したものｒＭａとし、倍数希釈法により抗ヒトＩｆ
Ｇウサギ血清をグリ７ン緩慟故で希釈して抗と）ＩｆＵ
ウサキ血ｒｕ′８釈敵會１！１４製する・抗原・仇坏反
化、を行なうたりにカラス製１０穴のホールグクスを用
意し、グリ７ン稜伽敵で希釈した抗ヒ）　Ｉ　ｆＧｒ７
”ｊギ血−ｔＷ＊谷ホールに０．０４−加える。次いで
ヒトＩｆＧｋ固定化した電合体粒子のグリシン緩ｇＲ故
分散敵を各ホールに０．０４　ｍ加える。この後＠５に
平沢製作Ｉ５Ｔ製テーバ一式撹拌慎によシホールグラス
會１分間に１２０１１；！ｌｋの速度で水平回転し攪拌
を行なう。抗原・抗体反応によｐｘ甘せ程子の蒐集が餡
められるまでに資する時間、すなわち凝集像出現暗闇及
び所定時間撹拌後の東曾俸粒子の＠巣のＭ無〃為ら、ヒ
）　Ｉ　ｆＧｔ−固定化した’ｉ、甘体粒体粒子注でり
る迅速性及び鋭敏性を評価した。ホールグラスを用いた
Ｔ１．電体粒子の縦果試験の結果を図１に示す。図１は
１０分間の攪拌後の凝集状１１に示す。凝集が全く認め
られない嶺せ（−）、凝集の１′無が判定しがたい横付
（ト）、明らかに＃ｌ！巣がｔａｏられる場曾、Ｉ！Ｒ
楽の強い唄に÷、←、十と判定し皮。図中Ｃは抗！　　
　原もしくは抗体を全く含まないことｔ示す。凝集試験
の結果、明らかに凝集の認められたホールに於ける抗と
）ＩｆＧウサギ血償希釈液の販＾希釈倍数をもって、惠
曾体粒子の睨躯江を評価した。

１、置体粒子の特性とし又、６らｒｃ＊甘庫せ子の分散
安定性を評価しｒｃａすなわち、＊曾俸粒子にヒトＩｆ
Ｇ希釈敵ｔ　７ＪＬｌえ、室温で２時間放置した鏡の嶌
置体粒子の分散状態でもって亘置体粒子のヒ）ＩｆＧｔ
！ｔｌ定化時の分散安定性を評価した。又ヒトＩｔＧ向
定化倣３ケ月姓過した後の１＃会体粒子の分散状態ｔも
ってヒトｌｔＧ　・を固定化しｆｃ１ｊＬ曾坏粒子の株
存中の分敢安定注七評１曲した。

尚、比較例として、ジー２−エナルヘキシルスルホコハ
ク＠　１．５　？　ｆｔ乳化剤として用いた他は拠施例
１と同様に重付を竹ない、その結果を第１表の比較例１
に示し友。また、５１４１表に示す条件で一１段目蔦仕
付今を打なった以外は央り例１と同様に！ｌ甘を行ない
、そり結果も併せて第１表の比較例２〜７に示し友。

実り例９ 攪拌蝋付きガラス製フラスコを窒素ｔｌｔ侠した衾に、
無留水２７００ｃｃ　　ｔ−加えて７５℃に保った倣に
、窒素雰囲気下、攪拌ｆに過硫鈑カリワム５ミリモル／
ｌ、チオ懺ハナトリクム５ミリモル／　ｌ　、　懺に銅
０．２５ミリモル／Ｌ、及びα−メルカプトエタノール
１．Ｏｃｃを冷／Ｉｕ　した。

仄いて７５℃に加温したメタクリル酸１．３　ｆ及びメ
チルメタクリレート２（ＨＦの混曾物勿巧≦刀口して７
５℃で３０分間撹拌ＦＫＭ曾した。その後、・　メチル
メタクリレート２３０ｔｆ定菫ポンプで１繭々添７ＪＬ
Ｉ　して、更に７５℃で２陰間撹拌下に買付した。その
鏡の操作は実施例１と同様の操作を行なっ友。得られ７
’？−ｉｋ甘せ程子の粒子径は０．１８ミクロンでりっ
た。この−曾捧粒子を央ＩＭ例１と同様の操作でヒトＩ
ｆＧ金吸書して固定化し、抗ヒトエｔＧウサギ血清との
抗原・抗体反応を行なった。その結果、ｍ散性は１８恢
Ｘ１２８Ｑ、３ケ月ｆｉＸ１２８０、また分散安１；　
　　　　定ｇ、は１日ｆｆ１ｖｃ１本、３ケ月仮に２本
非特異凝集が酩のらｊした。

実施？１Ｊ１０ 撹件憎付さカンス製フラスコｒ輩素直侠した僕に、盛餉
水２７０Ｕｃｃ　　ｔ−加えて７０℃に株りた鐘に、蝋
素芥囲気ド、償件下にＳ佃を数カすウム２ｔｏミリモル
／を殴題にｌ◇ように確加した。仄いて７０℃に刀口龜
したポリエチレングリコールモノメタクリレート（エチ
レングリコール単位９ｆｉ俸）２４ｆとクロルメテルス
チレ７４Ｑｆの′８１．甘物を添刀ｌして７０℃で１．
５時間撹拌下に車台した。その後クロルメナルステレ７
３００ｔ＆（ｊジビニルベンセン６ｖの混合物ｒ定型ポ
ンプで逐欠縫加して、史に１０Ｃで３０蕗ｔ−ｆｘ押押
下嵐甘し之。七のイ友の操作は実施例１と同様の操作を
行なった。侍らｎ比重曾体粒子を実施例１と同様の操作
でヒトｉ　ｔｔ、を成層して固定化し、抗ヒト■ｆＧウ
サギ皿悄との抗原・抗体反応上付な−）友。七〇輔来、
成畝性は１８仮Ｘ１２８０・　３７月仮ゝ１２８０・　
　　、、また分散安定性は１８倣及び３ヶ月佐共に保存
　　　亀中に全く非特異的縦来反応が泌ｊＩ）りれなρ
１つ九〇実施９１１１１ 撹拌愼付さカラス表オートクレーブを臘素直侠した鏡に
、ｓ＆協氷水２７００ｃｃ２加て６５℃に保った後に、
窒素雰囲気下に：＠蝋欧カリウム１０ミリ七ル／を幽匿
になるように鉦刀口した０久いで６５℃に加温したＮ−
（２−ヒドロキシプロピル）メタクルアミド１．５ｔ、
２−ヒドロキ７メタクリレート２７及び塩化ビニルモノ
マー１４ｔの混せ物ｆ：窒素圧でオートクレーブに圧入
して６５℃に攪拌Ｆに１．５路間Ｍ甘した。

そのイ淀塩化ビニルモノマー１４０ｆｊ＆：逐久龜〃０
して６５Ｃで４＠間撹拌下に富含した０仄いて残存する
未反応の塩化ビニルモノマーｔノく一ジしてから、僧ら
ｎ　ｆｃｍ、会俸粒子を銀紙（随２）で他励して大さな
凌集俸會瀕いｆｃ、−史に粗い夏せ俸梓子を遠ｌＬ？分
離で光分に除いた。欠いてセロファン族で１ケ月間透ｖ
Ｔ紫行なった僕に、イオン父換樹脂で脱イオン操作七何
ない、史に迎心分鼎と抗＃を竹なって１．曾体粒子金精
製した。

かくして骨られた′ＩＫ廿体粒子’ｔ［［？１１１と同
様の操作でヒ）ＩｆＧ會吸右成層固定化し、抗ヒトｌｆ
Ｇクサギ血悄との抗原・抗体反応ｒ行なツ７′ｃｏその
結果、ｖＲ蝦性は１日＃ｌＸ　２５６０．３久月後ｘ２
５６０．また分散安定性は１８做１本、及び３ケ月＃ｔ
１本の非特典的叔集反応が！のられた。

実施例１２と比較例８〜９ ｐ）１８．２　　に鉤製し友クリ７ン軟伽故に央ｈＶす
２で用いた頁曾体粒子ｆｔ０．５　’ｉ　ｖｃなるエラ
分散ぜせた。次いで６０℃で１０分間加熱処理したヒト
Ｉ　ｔｕｅグリシ／緩伽欣に工り布がしｉｔダ／−に制
振した。０．５％礎度の里せ庫粒千分散故１容に熱変性
したヒ１−ＩｆＧ布机敵ｌ答を刀Ｕえ、攪拌し、呈温下
２時間城直した。その倹つシ血悄アルブミンｔ１％の改
良になるようＶＣ添加し、４℃に保′ｃ）１佼敢直しで
熱変性ヒトｉ　ｙＧ＊固定化した］Ｌ置体を得た。次い
で迷心分陥、グリシン＃＆伽敵への台分散の操作を蛛返
して況伊した彼、熱変性ヒトＩｔＧｔ固疋化した皇せ坏
杖子金ウシ皿信アルプミノを０．１％の敵度−〇硝〃口
したグリシン威泗欣に台分散し、１ｌｉ８ＩＩ型分一度
【０．５％に鉤蟹した、 横座として非創化友性関即すウｉチ患省プール血清をグ
リシノ緩衝液で２０借に希釈したものｔ涼叡として、実
施例１と同様にしてガラス袈１０穴のホールグラスにグ
リシノ緩衝液で希釈した良性関部リウマチ患者血清を各
ホールに０．０４Ｔｎｔｋ７ＪＬｌえ、久いで熱変性ヒ
トＩｔＧｌ：ＩＭＪ定化した車置体粒子金グリシン駿伽
叡で希釈した分散販を各ホールに０．０４−加えて実施
例１尚、比軟例８として比較例１で得られた蔦置体粒子
紫用いてよ４０１例と同様の操作でテストすると、鋭敏
性は×６４０でめった。

さらにまた、比較例９として比較例２で得られた電合体
粒子を用いて上記央り例と同様の操１　　、ｈｆヶ−Ｘ
）−ｊ、６＆、＊に’ａｌｌ’！　Ｘ　８０　Ｔ　ａ）
　ｖ　７’ｃ。

＄−ｊＭ例１３と比較例１０ ｐＭ８．２に調製したグリノン緩衝故に実施例７で用意
したＭ、　８　ｆ＋Ｈ子ｔ１．υ％ＶＣなるように分散
させた。、次いで水兄の産生じたアルファーフェトプロ
ティン（以下α−ＦＰと略す）の抗体ｔアフィニティー
クロマトグラフィーにより精製して得た相線α−ＦＰ抗
体ｔ、グリシノ緩衝液で１０μｔ／−の改良に希釈した
。厭せ体粒子分散敵１谷と精製α−ＦＰ抗体の布躯欣１
谷とｆｆｉ　７Ｊ［ｌえ、撹拌し、室温丁２＃に＃闇放
直した０その後ウシ血清アルブミンｉ１％の嫌反になる
ように姫７ＪＬＩ　Ｌ、４℃に保ち１伎放直してα−Ｆ
Ｐ抗体を固定化した嵐せ坏枚子忙侍た。仄いで遠心分離
、グリシノ緩衝液への台分散の操Ｆ′Ｆ、金繰り返して
洸伊した衾、（Ｘ　−Ｆ　Ｐ抗体を固定化したｊＫ甘せ
枚子をウシ血清アルフミン（ｚ　Ｕ、　１％の磯度で奈
／ＪＵ　ｌ、たグリシン級ｇ＃故に何分散し、固型分酸
度ｔＯ０５％にｖＩ４歪した。

アルファーフェトプロティンの胛Ｊ芝 検体としてヒト血清中のα−ＦＰ（１）級友が１０００
μＶ／−でりるｔのｔ原欣とし、グリシノ緩衝液で１０
借ごとの希釈系列を調製した。

実施Ｖす１と同様にして、カラスｆｆ１Ｏ穴のホールグ
ラスにグリシノ緩衝液で希釈したα−ＦＰを谷ホールに
０．０４−加え、次いでα−ＦＰ抗体で固定化した凰置
体粒子の分ｔａ金各ホールに０．０４−刀ｌえて、実施
ψす１と１司様の操作で鋭敏性、分散安定性ｔ′Ａべた
。その結果、鋭敏性は１日イ掟２０μｔ／−でおった。

向、比較例１Ｏとして比較例１で得られた重付坏粒子を
用いて上記実施例と同様の操作で試験すると、鋭敏性は
１８後１００μｒ　／　ａｔ　でめった。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例１で得られたＮせ坏粒十全用いた診断
用試楽の凝集状態を示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （Ａ）水１００重量部に対する溶解度が１０重量部以上
   の水浴性ビニル系単量体１〜５０重量％と （Ｂ）水１００重量部に対する溶解度が３重量部以下で
   、且つ、単独重合体のガラス転移温度が４０℃以上の疎
   水性ビニル系単量体９９〜５０重量％ の混合物を乳化剤不存在下の水媒体中で、水溶性ラジカ
   ル重合開始剤の存在下に重合を行なって水に不溶性の重
   合体を得、次いで該重合体の存在下に、上記（Ｂ）の疎
   水性ビニル系単量体を重合することを特徴とする重合体
   粒子の製造方法。