JPS62109802A - 重合体粒子の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は疎水性粒子表面を有し、かつ水媒体中で分散安
定性のよ層重合体粒子の製造方法である。特に酵素、蛋
白質、及び免疫活性物質などを吸着固定化して診断用試
薬とじて好適に使用し得る重合体粒子の製造方法を提供
するものである。

〔従来の技術及び発明が解決しようとする問題点〕

抗原・抗体反応を利用する免疫学的検査において、凝集
反応は沈降反応、補体結合反応と共に、あるいけこれら
に比して著しく簡便かつ鋭敏な反応として利用されて訃
り、遊離細胞や細菌膜表面に局在する抗原を検出する反
応と共に、抗原精製技術の進歩により特異性の高い抗血
清が得られることによって、特異性の高い抗体を血球粒
子、ベントナイト粒子、カオリン粒子、ラテックス粒子
などの粒子担体に固定させておき、対応する抗原を凝集
反応によって検査するなど、臨床検査における応用範囲
が著しく拡大して込る。

免疫学的凝集反応用としての担体は種々のものが公知で
、該担体を使用した種々の診断用試薬ｂ″−知られてい
る。これらを大別すると免疫活性物質を物理的に吸着し
た診断用試薬と免疫活性物質を共有結合で結合させた診
断用試薬になる。これらの試薬にはそれぞれ一長一短が
あり現在な訃完全に満足出来る診断用試薬は存在しない
。

しかも近年、抗原の精製技術の進歩、特異性の高い抗体
の開発、更には定量分析の発展と共に免疫学的凝集反応
は鋭敏性と迅速性が増加し、非特異的凝集反応が起こら
ない、しかもより保存安定性に優れた等の性状を有する
診断用試薬の開発が要望されている。

診断用試薬の担体としては、一般に重合体粒子が用いら
れており、診断用試薬に適した重合体粒子の製造方法の
開発が望まれている。

重合体粒子の製造方法としては、例えば、高分子論文集
３８巻４８５〜４９１頁（１９８１年）には、乳化剤の
存在下にグリシジルメタアクリレートとエチルアクリレ
ート麿■■■−一１な水媒体中で乳化重合した（第１段
重合工程）後に、エチルアクリレート を添加して重合を行なう（第２段重合工程）方法が記載
されている。しかしながら、この方法により得られた重
合体粒子に免疫活性物質を吸着させて診断用試薬として
使用することは困難である。１１２０ち、得られた重合
体粒子の遠心分離による洗浄工程で重合体粒子同志の融
着がおこり、再分散が極めて困難になる。

例え、再分散させても凝集した粒子が多いために鋭敏性
９分散安定性に著しく劣る。

〔問題を解決するための手段〕

本発明者らは、免疫診断用試薬の担体として好適な重合
体粒子の製造方法について鋭意研究を重ねてきた結果、
驚くべきことに、特定の疎水性ビニル系単量体を用いる
ことによって、得られた重合体粒子に免疫活性物質を吸
着した診断用試薬の分散安定性が著しく向上し、しかも
診断用試薬として極めて重要な性質である鋭敏性及び迅
速性が侵れることを見い出し本発明を完成するに至った
。

即ち、本発明は水１００重量部に対する溶解度が６重量
部以下であり、且つガラス転移温度ｈ″−４０℃以上の
重合体を与える疎水性ビニル系単量体とグリシジル（メ
タ）アクリレートとを乳化剤及び水溶性ラジカル開始剤
の存在下、水媒体中で重合を行なう第１段重合と、該第
１段重合で得られた重合体の存在下に上記の疎水性ビニ
ル系単量体の重合を行なう第２段重合とよりなる重合体
粒子の製造方法である。

本発明の方法により得られた重合体粒子は、エポキシ基
が重合体粒子の特定部位に局在化しており、またガラス
転移温度が４０°Ｃ以上の重合体となる疎水性ビニル系
単量体からなる重合体粒子であるため、免疫活性物質の
吸着固定化に有効な疎水性表面が保たれ、かつ洗浄工ａ
Ｋ於ける重合体粒子の融着が無いために、免疫血清学的
凝集反応の鋭敏性と迅速性が大きい。また、該重合体粒
子のエポキシ基を加水分解してジヒドロキジル基に変換
スることにより分散安定性が向上するという特徴がある
。

本発明で使用するグリシジル（メタ）アクリレートの使
用ｔは、特に限定されないが、得られた重合体粒子を診
断用試薬として用込石場合、その分散安定性、鋭敏性及
び迅速性の観点から、全単量体に対して０．０１〜５０
モル％の範囲にあることが好１しく、０．０１〜３モル
％、更には０．１〜１モル％の範囲にあることがより好
ましい。

本発明で使用する疎水性ビニル系単量体は水１００重量
部に対して溶解度が３重量部以下でなければならない。

水１００重量部に対する溶解度が３重量部より大きいビ
ニル系単量体を用いると、エポキシ基を粒子の特定箇所
に局在化させられないばかりでなく、粒度分布の揃った
重合体粒子を得ることができなくなるので、本発明の効
果が得られない。該疎水性ビニル系単量体としては、水
１００重量部に対する溶解度が１重量部以下であるもの
が好ましｔｎ、また、該疎水性ビニル系単量体は、重合
体のガラス転移温度が４０℃以上、好ましくは６０°Ｃ
以上となる単量体でなければならない。ガラス転移温度
が４０℃より低い場合には重合体粒子の洗浄工程あるい
は免疫活性物質を吸着固定化するインキュベーションの
間に非特異的に凝集してもはや再分散できなくなるので
好ましくない。本発明で用いられる疎水性ビニル系単量
体の代表的なも（１’）ヲ挙ケレｉｌｌ’、スチレン、
ビニルトルエン。

クロルメチルスチレン、クロルスチレン等のアリール基
又は・・ロゲン化アリール基を有するビニル化合物；塩
化ビニル等の・・ロゲン化ビニル化合物；メチルメタア
クリレート、エチルメタチクリレート、シクロヘキシル
メタクリレート等のアクリレート又はメタクリレート；
ターシャリブトキシエチレン、ネオペンチルオキシエチ
レン等のビニルエーテル等である。これらの単１体は単
独あるいけ混合して用いることができる。これらの疎水
性ビニル系単量体の中でも了り−ル基又はハロゲン化ア
リール基を有するビニル化合物は、得られる重合体粒子
を免疫診断用試薬として用いたときに、鋭敏性及び迅速
性に優れているため忙好適に用いられる。

第１段重合に於すては、上記の疎水性ビニを混合して重
合することができる。例えば、メタクリル酸、アクリル
酸、スチレンスルホン酸、スチレンスルホン酸ナトリウ
ム、２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、ビニ
ルビσリドン、ホＩＪエチレンタリコール（トに対して
０〜２０モル％の範囲で添加することができる。

第１段重合で重合する疎水性ビニル系単量体とグリシジ
ル（メタ）アクリレートの合計ｔは、第１段重合及び第
２段重合で重合する全単量体の２〜５０重量％、さらに
５〜２０重量％であることが好ましい。上記の合計量が
２重量％より少ない時には粒度分布が悪くなることがあ
る。また５０重量％より多い時には、グリシジル（メタ
）アクリレ−トド疎水性ビニル系単量体のランダム共重
合体と類似し、グリシジル（メタ）アクリレート含量の
多い重合体粒子で鋭敏性ｈ′−低下することがある。

本発明に用いる水溶性ラジカル開始剤は特に限定的でな
（公知のものが使用されろ。例えば、過硫酸ナトリウム
、過硫酸カリウム。

過硫酸アンモニウム等の過硫酸塩、又は過硫酸塩とチオ
硫酸ナトリウム、チオ硫酸カリウム、チオ硫酸水素ナト
リウム等のチオ硫酸化合物及び銅イオン、鉄イオン等の
分解促進剤を組み合わせたレドｌクス系触媒ｈ″−好適
に使用される。水溶性ラジカル開始剤の濃度は重合温度
、嘔量体濃度に依存するために限定的　・でないが、０
．０５乃至２０ミリモル／ｌの範囲が好適に採用される
。

また、水溶性ラジカル開始剤は、第１段重合で添加した
単量体の重合速度を増加させて、第２段重合に添加した
単１体の、第１段重合で重合した重合体への吸収をよく
するために、第１段重合に全量添加することが望プしい
が、第１段重合の重合速度が充分大きくなる条件を設定
すれば、第１段重合と第２段重合に分割して添加しても
よい。

本発明釦用いる乳化剤としては特に限定的でなく公知の
ものが使用される。例えば、オレイン酸ナトリウム、樹
脂酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ドデシルベ
ンゼンスルホン酸ナトリウム、モノブチルフェニルフェ
ノールスルホン酸ナトリウム、ジアシルスルホン化フハ
ク酸ナトリウム、ジー２−エチルへキシルスルホコハク
酸ナトリウム、ポリエチレングリコールモノラウレート
、ポリエチレングリコールノニルフェニルエーテル。

オレイルホリエチレングリコールエーテル等が挙げられ
る。乳化剤の使用量は、特に制限されず、通常の乳化重
合で用いられる竜で良いが、得られる重合体粒子の収率
を増加させるためには、全単量体１００重量部に対して
０．００１〜１重量部、さらに０．００５〜０．５重量
部の範囲から選択することが好ましい。

第１段重合に添加する単量体の水に対する濃度は、添加
した単量体の重合速度が小さくならないようにすること
が好ましく、重合温度、開始剤濃度に依存する６’−１
通常水忙対して０．５乃至２０容量％、より好ましくは
１乃至１０容量％が望ｉしい。

第１段重合では、グリシジル（メタ）アクリレートの５
０モル％以上、好ましくけ７０モル％以上の重合を行な
うことが好適である。

本発明において重合温度は４０℃乃至８５°Ｃ１より好
オしくは５０℃乃至８０”Ｃがよい。

第１段重合の重合温度と第２段重合の重合温度は同じで
あることが重合操作上好ましいが、単量体組成によって
は異なってもよい。また第１段重合の重合時間は、重合
温度、単量体の種類と濃度などによって異なるが、一般
には１０分乃至５時間、より好ブしくけ２０分乃至３時
間が好適に採用される。

第２段重合は、第１段重合に引き続いて、同じ重合槽中
で行なわれることが好４しＩｎが、ｗｃ１段重合で得ら
れた重合体を分離した後、別の重合槽で第２段重合を行
なうこともできる。第２段重合は、第１段重合で得られ
た重合体の存在下に行なわれる。

第２段重合に添加する疎水性ビニル系単量体は、第１段
重合で得られた重合体によく吸収されるように、疎水性
ビニル系単量体の重合速度より速い速度で滴々添加する
ことが望ましいが、第１段重合に添加した単量体の割合
が多い場合には短時間で添加することもできる。

第２段重合には疎水性ビニル系単量体成分単独で添加す
ることが望ましいが、疎水性ビニル系単量体に対して０
〜２モル％のグリシジル（メタ）アクリレートを混合し
て使用することもできる。

第２段重合の重合時間け、添加する疎水性ビニル系単量
体の種類と濃度によって異なるが、一般には３０分乃至
５０時間、より好オ（〜〈は１時間乃至３０時間が好適
に採用される。

本発明において均一な重合体粒子を得ろことと、第２段
重合に添加する単量体が＠１段重合で生成した重合体粒
子に効率よく吸収されろように、効率のよい不断の攪拌
が好ましい。

本発明において、第１段重合と第２段重合の重合順序は
極ぬで重要である。即ち、本発明の疎水性ビニル系単量
体を水媒体中で乳化剤存在下に水溶性ラジカル開始剤を
添加して重合を行ない、次いでグリシジル（メタ）アク
リレートと本発明の疎水性ビニル系単量体との混合物を
添加して重合を行なっても、安定的に重合体粒子が得ら
れないばかりか、たとえ重合体粒子が得られても極めて
性質の異なった重合体粒子の混合物が得られたりするの
で、本発明の効果が発揮されない。

本発明で得られた重合体粒子は、エポキシ基を加水分解
し７てジヒドロキジル基に変換することにより、疎水性
の物質を吸着し易（かつ水媒体中で分散安定性がよいと
いう特徴を発揮する。エポキシ基の加水分解方法は、公
知の方法が採用される。例えば、重合体粒子を弱酸性ま
たは弱塩基性の水媒体に浸漬する方法、又は８０°Ｃ以
上に加熱する方法等り一挙げられる。

本発明で得られた重合体粒子の粒子径は一般に０．０１
乃至０．５／ｊｍである。

本発明により得られた重合体粒子はエポキシ基を加水分
解した後、水媒体中での疎水性有機化合物の吸着剤、生
体内での各種細胞。

組織による貧食作用の観察用粒子、及び酵素。

蛋白質あるいは免疫活性物質の吸着固定用粒子等に応用
でき、特に免疫活性物質を吸着固泥化した診断用試薬は
免疫活性物質の吸着固定化量が大きいために、免疫学的
凝集反応性が大きいだけでなく、分散安定性と保存安定
性に優れる特徴がある。さらにオた、本発明により得ら
れた重合体粒子は粒子表面のエポキシ基の反応性を利用
した応用（例えば、反応性アミン基を有する染料を結合
した標識粒子）もできる。

以下に、本発明で得られた重合体粒子を診断用試薬とし
て用いた場合につｂて説明する。

本発明で得られた重合体粒子忙物理吸着によって固定化
する免疫活性物質としては、特に限定的でなく公知のも
のが使用出来る。代表的なものを例示すれば、例えば、
変性ガンマグロブリン、リウマチ因子、抗咳因子、ヒト
アルブミン、抗ヒトアルブミン抗体、イムノグロブリン
Ｇ（ＩｇＧ）、イムノグロブリンＡ（ＩｇＡ）、イムノ
グロブリンＭ（ＩｇＭ）。

ストレプトリジンＯ，抗ストレプトリジン０抗体、Ｃ−
反応性蛋白、抗Ｃ−反応性蛋白抗体、アルファーフェト
プロティン（ＡＦＰ）。

抗ＡＦＰ抗体、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、抗ＣＥ　Ａ抗
体、ヒト胎盤ラクトゲン（ＨＰＬ）。

抗ＨＰＬ抗体、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＣ））
、抗Ｔ−Ｔ（”Ｇ抗体、抗エストロゲン抗体、抗インシ
ュリン抗体、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢＳ）、抗ＨＢ８抗
体、梅毒トレボネーマ抗原、風疹抗原、補体成分Ｃ１１
，抗補体成分Ｃ１，抗体６等の公知の免疫活性物質をあ
げることができる。

本発明で得られた重合体粒子に吸着で固定化される該免
疫活性物質の量は、各検査項目に適している割合で重合
体粒子に固定化させハばよ（、−概に限定されない。一
般には、該免疫活性物質の量が多す程、診断用試薬の鋭
敏性及び迅速性が上がるため、鋭敏性及び迅速性を要求
する場合には、前記の重合体粒子に飽和する迄、免疫活
性物質を吸着させることが好ましい。

本発明により得られた重合体粒子は疎水性と親水性のバ
ランスが極めて良く調節されて込るので、該重合体粒子
表面に比較的多量の免疫活性物質を極めて容易に物理吸
着法で固定化できる特徴がある。例えば、抗原又は抗体
と重合体粒子を緩衝液又は生理食塩水などの水媒体中で
混合し、抗原又は抗体が化学的に変化しないように、そ
してそれらの免疫学的性質を保持させるように、非常に
温和な条件下に抗原又は抗体を重合体粒子表面に吸着さ
せることができる。重合体粒子表面に吸着された免疫活
性物質の量は、重合体粒子の疎水基の吸着部位を飽和又
はブロックされるように選ぶことが好ましいが、残存す
る吸着部位を適当な物質、例えば免疫学的に不活性な牛
血清アルブミン、ゼラチン等でブロックさせろことがで
きる。

〔効果〕

本発明により得られた重合体粒子は、特定の疎水性ビニ
ル系単量体を用いたために洗浄王権における重合体粒子
同志の凝集がおこらない。着た、粒子径が比較的良くそ
ろっており、粒子径の分散値は１０％以下である。

従って、本発明により得られた重合体粒子を担体とする
免疫診断用試薬は、非特異的な凝集を起こすことなく、
分散安定性が極めて良好であり、且つ鋭敏性にも優れる
という特徴を有している。

さらに、乳化剤を添加しない不均一重合（ソープフリー
重合）では、親水性千ツマ−であるグリシジル（メタ）
アクリレートのｆｉｔを少な（して粒子径を肌３μｍ以
下の重合体粒子を製造する場合、単量体濃度を著しく減
少しなければ重合体粒子同志の凝集が生じる。

即ち、グリシジル（メタ）アクリレート含量が小さく、
例えば、３モル％以下でかつ粒子径が０．３μｍ以下の
重合体粒子をソープフリー重合で製造するためには、単
量体濃度を下げなければならず、極めて収率が悪くなる
欠点がある。しかしながら、本発明の乳化重合になるの
で、経済的に極めて効率がよい。壕だ、本発明の重合体
粒子は他の乳化重合法により得られた粒子と比べて粒子
径がそろうという特徴があるので、粒子径が［１，３μ
ｍ以下の重合体粒子の製造に極めて好適である。

よって一本発明の方法は、医療分野において、各種の診
断に用いられる免疫診断用試薬の担体を提供する方法と
して極めて優れた方法であり、また、工業的にも有利な
方法である。

実施例１〜４及び比較例１〜４ 攪拌機付きガラス製フラスコを窒素置換した後に、蒸留
水２７００ＣＣを加えて７０℃に保った後に、窒素雰囲
気下、攪拌下に第１表ニ示ス割合のジー２−エチルへキ
シルスルホコハク酸ナトリウムを４ミリモルｌｔａ度に
なるように過硫酸カリウムを添加した。次いで７０℃に
加温したグリシジルメタクリレートとスチレン（重合体
のガラス転移温度＝１００℃）の混合物を第１表に示す
割合で添加して、７０℃で第１表に示す如ぐ第１段重合
を行なった。その後第２段重合のスチレンを第１表に示
す割合で定量ポンプで滴々添加してから、所定時間、７
０℃で攪拌下に重合した。重合後、室温オで冷却してか
ら、得られた重合体粒子を濾紙（＆２）で濾別して大き
な凝集体を除いた。更に粗い重合体粒子を遠心分離で充
分に除いた後、水蒸気蒸留を６時間行なうことによって
重合体粒子上のエポキシ基をジヒドロキジル基に変換し
た。この加熱条件で全てのエポキシ基が加水分解してジ
ヒドロキジル基が生成していることが赤外吸収スペクト
ル及び塩酸付加法によるエポキシ基の分析で確認された
。次いでイオン交換水で透析を７日間毎日回分処理した
後遠心分離、蒸留水への再分散の操作を繰返した後に、
イオン交換樹脂で脱イオン操作を行なり、更に遠心分離
と洗浄を行なって重合体粒子を精製した。得られた重合
体粒子の粒子径を第１表に示す。

ヒトＩｙＧを固定化した重合体粒子の調製重合体粒子の
調製で得られた本発明の重合体粒子を固型分濃度１％で
グリシン緩衝液に分散した。本発明に於いてグリシン緩
衝液とはグリシン０．１モル及び食塩０．０５モルを水
１ｔに溶解し、次いで２規定水酸化すｈ　ＩＩウム水溶
液で、Ｈを８．３に調製し、さらにアジ化ナトリウムを
１ｇ添加したものである。

本発明に於いてヒトＴｇＧは、ヒト血清を飽和硫安で塩
析し、さらに透析を行ない精製したものを用いた。

ヒトＩｙＧをグリシン緩衝液により希釈し１ｆｆ９／−
に調整する。次いで倍数希釈法によりヒト１ｙＧをグリ
シン緩衝液により希釈してヒトＩｇＧ希釈液を調製する
。１％濃度の重合体粒子分散液１容にヒトＩｇＧ希釈液
１容を加え攪拌し、室温下２時間放置する。次いでウシ
血清アルブミンを１％の濃度になるように添加し、４℃
に保ち１夜放置してヒトＩｇＧを固定化した重合体粒子
を得た。次いで遠心分離、グリシン緩衝液への再分散の
操作を繰り返えすことによりヒｋＩｇＯを固定化した重
合体粒子を洗浄した。

さらに遠心分離した後、ヒトｒ９Ｇを固定化した重合体
粒子をウシ血清アルブミンを０１％の濃度で添加したグ
リシン緩衝液に再分散し固型分濃度を０．５％に調整し
、４℃に保ち保存ｌ−だ。

抗原・抗体反応 ヒトｊｙＧをウサギに免疫して得た抗ヒトＩｇＧウサギ
血清を６０’Ｃ，３０分非動化処理を行なった。この血
清を以下抗ヒトｏｇＯウサギ血清と呼ぶ。

抗ヒトＩｇＧウサギ血清をグリシン緩衝液で２０倍に希
釈したものを原液とし、倍数希釈法により抗ヒトＩｇＧ
ウサギ血清をグリシン緩衝液で希釈して抗ヒトｌｌ１（
）ウサギ血清希釈液を調製する４、抗原・抗体反応を行
なうためにガラス製１０穴のホールグラスを用意ｌ７、
グリシン緩衝液で希釈した抗ヒトＩｇＧウサギ血清を各
ホールに０．０４−加える。次いでヒトＩｇＣ）を固定
化した重合体粒子のグリシン緩衝液分散液を各ホールに
０．０４−加える。この後直ちに平沢製作所製テーバ一
式攪拌機によりホールグラスを１分間に１２０回転の速
度で水平回転し攪拌を行なう。抗原・抗体反応により重
合体粒子の凝集が認められる１でに要する時間、すなわ
ち凝集像出現時間及び所定時間攪拌後の重合体粒子の凝
集の有無から、ヒトエｇＧを固定化した重合体粒子の特
性である迅速性及び鋭敏性を評価した。ホールグラスを
用いた重合体粒子の凝集試験の結果を図１に示す。図１
は１０分間の攪拌後の凝集状態を示す。凝集が全く認め
られない場合（−）、凝集の有無が判定しがたい場合（
±）、明らかに凝集が昭められる場合凝集の強い順に＋
＋＋　、　＋＋　、＋　と判定した。

図中Ｃけ抗原もしくは抗体を全く含まないことを示す。

凝集試験の結果、明らかに凝集の認められたホールに於
ける抗ヒトＩｇＣ）ウサギ血清希釈液の最高希釈倍数を
もって、重合体粒子の鋭敏性を評価した。

重合体粒子の特性として、さらに重合体粒子の分散安定
性を評価した。すなわち、重合体粒子にヒトＩＩＩＣ）
希釈液を加え室温で２時間放置した後の重合体粒子の分
散状態をもって重合体粒子のヒＩ−ＩｇＧ固泥化時の分
散安定性を評価した。又ヒｈＩｇｏ固泥化後３ケ月経過
１．た後の重合体粒子の分散状態をもってヒト１ｇＧを
固定化した重合体粒子の保存中の分散安定性を評価した
。その結果を第１表に示す。

実施例　５ 攪拌機付きガラス製フラスコを窒素置換した後に、蒸留
水２７００ＣＣ及びドデシルスルホン酸ンーダ０．２ｇ
を加えて７５℃に保った後に、窒素雰囲気下、攪拌下に
過硫酸カリウム３ミリモル／１．千オ硫酸ナトリウム６
ミリモル／１．硫酸鋼０．２ミリモル／１．及びα−メ
ルカプトエタノール０．５　ｃｃヲ添加した。

次いで７５℃に加温したグリシジルアクリレート２５ミ
リモル及びメチルメタクリレート（重合体のガラス転移
温度＝１０５℃）５００ミリモルの混合物を添加して７
５℃で３０分間攪拌下に重合した。その後、メチルメタ
クリレート５モルを定量ポンプで滴々添加して、更に７
５°Ｃで２時間攪拌下に重合した。その後の操作は実施
例１と同様の操作を行なった。

得られた重合体粒子の粒子径は０．１２９ミクロンであ
った。また、粒子径の分散値は４．２％であった。この
重合体粒子を実施例１と同様の操作でヒｋＩｙＧを吸着
して固定化し、抗ヒト１ｇＧウサギ血清との抗原・抗体
反応を行なった。その結果、鋭敏性は１口径×６４０．
３ケ月後Ｘ１２８０、また分散安定性は１日後及び６ケ
月後共に保存中に全く非特異的凝集が認められなかった
。

実施例　６ 攪拌機付きガラス製フラスコを窒素置換した後に、蒸留
水２７００ＣＣ及びジー２−エチルへキシルスルホコハ
クｆ１１０．６１９ヲ加、ｔテア０℃に保った後に、窒
素雰囲気下、攪拌下に過硫酸カリウム５ミリモル／１＠
度になるように添加した。次いで７０℃に加温ｌ−たグ
リシジルメタクリレート３０ミリモルとビニルトルエン
（重合体のガラス転移温度＝９３℃）６７０ミリモルの
混合物を添加して７０℃で１．５時間攪拌下に重合した
。その後ビニルトルエン３．６モルを定量ポンプで逐次
添加して、更に７０℃で１時間攪拌下に重合した。その
後の操作は実施例１と同様の操作を行なった。

得られた重合体粒子の平均粒子径は、肌１４４ミクロン
であり、粒子径の分散値は４．２％であった。この重合
体粒子を実施例１と同様の操作でヒト１ｇＧを吸着１７
て固定化し、抗ヒトｒｇａウサギ血清との抗原・抗体反
応を行なった。その結果、鋭敏性は１口径Ｘ１２８０゜
３ケ月後ｘ１２８０、また分散安定性は１日後及び３ケ
月後共に保存中に全く非特異的凝集反応が認められなか
った。

実施例　７ 攪拌機付きガラス製オートクレーブを窒素置換した後に
、蒸留水２７００ＣＣとジー２−エチルへキシルスルホ
コハク酸ｏ、ｓｙヲ加、ｔで６５℃に保った後に、窒素
雰囲気下に過硫酸カリウム７ミリモル／を濃度になるよ
うに添加した。次いで６５℃に加温したグリシジルメタ
クリｌ／　−トｊｉ　０８１モルと塩化ビニルモノマー
（重合体のガラス転移温度＝８１℃）５６０８１１モル
の混合物を窒素圧でオートクレーブに圧入して６０℃に
攪拌下に３０分間重合した。その後塩化ビニルモノマー
４．４モルを逐次添加して６０°Ｃで５時間攪拌下に重
合した。次いで残存する未反応の塩化ビニルモノマーを
パージしてから、得られた重合体粒子を濾紙（罵２）で
濾別して大きな凝集体を除いた。更に粗い重合体粒子を
遠心分離で充分に除いた後に１．Ｈ＝３の酸性水溶液中
で重合体粒子上のエポキシ基を加水分解してジヒドロキ
ジル基に変換した。次いでセロファン膜で１ケ月間透析
を行なった後に、イオン交換樹脂で脱イオン操作を行な
い、更に遠心分離と洗浄を行なって重合体粒子を精製し
た。かぐして得られた重合体粒子の平均粒子径０．２５
５　ミクロンであり１粒子径の分散値は８．８％であっ
た。この重合体粒子を実施例１と同様の操作でヒ）Ｉｇ
Ｇウサギ血清との抗原・抗体反応を行なった。その結果
、鋭敏性は１８後Ｘ、１Ｓ４０，３ケ月後Ｘ：１２８０
゜オた分散安定性は１日後０本、及び３ケ月後１本の非
特異的凝集反応が認められた。

実施例　８ 熱変性ヒトＩｐＯの固定化 、）（８，３に調製したグリシン緩衝液に実施例１で用
いた重合体粒子を０．５％になるよう分散させた。次い
で６０℃で１０分間加熱処理したヒトＩ、ｐ（）をグリ
シン緩衝液により希釈し１η／−に調整した。０，５％
濃度の重合体粒子分散液１容に熱変性したヒトＩ、ｐｃ
）希釈液１容を加え、攪拌し、室温下２時間放置１７た
。その後ウシ血清アルブミンを１％の濃度になるように
添加し、４℃に保ち１夜放置して熱変性ヒトＩ、ｐＧを
固定化した重合体を得た。次いで遠心分離、グリシン緩
衝液への再分散の操作を繰返して洗浄した後、熱変性ヒ
ト１ｇＧを固定化した重合体粒子をウシ血清アルブミン
を０．１％の濃度で添加したグリシン緩衝液に再分散し
、固型分濃度を０．５％に調整した。

リウマチ因子の測定 検体として非動化慢性関節リウマチ患者ブール血清をグ
リシン緩衝液で２０倍に希釈したものを原液として、実
施例１と同様にしてガラス製１０穴のホールグラスにグ
リシン緩衝液で希釈した慢性関節リウマチ患者血清を各
ホールに０．０４−を加え、次いで熱変性ヒトＩｙＧを
固定化した重合体粒子をグリシン緩衝液で希釈した分散
液を各ホールに０．０４−加えて実施例１と同様の操作
で鋭敏性、迅速性及び分散安定性を調べた。その結果、
鋭敏性は１８後Ｘ６４０．３ケ月後Ｘ６４０゜及び分散
安定性は１日後及び３ケ月後共に保存中に全く非特異的
凝集反応が認められなかった。

実施例　９ アルファーフェトプロティンの抗体の固定化ｐＨ８，３
に調製したグリシン緩衝液に実施例２で用意した重合体
粒子を１．０％になるように分散させた。次いで家兎の
産生じたアルファーフェトプロティン（以下α−ＦＰと
略ス）の抗体をアフィニティークロマトグラフィーによ
り精製して得た精製α−ＦＦ抗体を、クリシン緩衝液で
５００μｙ／−の濃度に希釈した。重合体粒子分散液１
容と精製α−ＦＦ抗体の希釈液１容とを加え、攪拌し、
室温下２時間放置した。その後ウシ血清アルブミンを１
％の濃度になるように添加し、４℃に保ち１夜放置して
α−ＦＦ抗体を固定化した重合体粒子を得た。次いで遠
心分離、グリシン緩衝液への再分散の操作を繰り返して
洗浄した後、α−ＦＦ抗体を固定化した重合体粒子をウ
シ血清アルブミンを０．１％の濃度で添加したグリシン
緩衝液に再分散し、固型分濃度を０．５％に調整した。

アルファーフェトプロティンの測定 検体としてヒト血清中のα−ＦＰの濃度が１０００μＩ
／−であるものを原液とし、グリシン緩衝液で希釈系列
を調製した。実施例１と同様にして、ガラス製１０穴の
ホールグラスにグリシン緩衝液で希釈したα−ＦＰを各
ホールに０．０４−加え、次いでα−ＦＦ抗体を固定化
した重合体粒子の分散液を各ホールに０．０４−加えて
、実施例１と同様の操作で鋭敏性９分散安定性を調べた
。その結果、鋭敏性は１８後３０μｇ／ｌ、３ケ月後５
０μｐ／−であった。分散安定性は１日後及び３ケ月後
共に保存中に全く非特異的凝集反応が認められなかった
。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例１で得られた重合体粒子を用いた診断
用試薬の凝集状態を示す。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）水１００重量部に対する溶解度が３重量部以下で
   あり、且つガラス転移温度が４０℃以上の重合体を与え
   る疎水性ビニル系単量体とグリシジル（メタ）アクリレ
   ートとを乳化剤及び水溶性ラジカル開始剤の存在下、水
   媒体中で重合を行なう第１段重合と、該第１段重合で得
   られた重合体の存在下に上記の疎水性ビニル系単量体の
   重合を行なう第２段重合とよりなる重合体粒子の製造方
   法。