JPH09221314A - 微粒子 - Google Patents
微粒子Info
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- JPH09221314A JPH09221314A JP4963996A JP4963996A JPH09221314A JP H09221314 A JPH09221314 A JP H09221314A JP 4963996 A JP4963996 A JP 4963996A JP 4963996 A JP4963996 A JP 4963996A JP H09221314 A JPH09221314 A JP H09221314A
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- Japan
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- fine particles
- particulates
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- coupling agent
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Abstract
(57)【要約】
【課題】マイクロタイター法用の診断試薬に用いた場合
に判定時間を大幅に短縮することができる微粒子を提供
すること。 【解決手段】シリカ等の無機微粒子をシランカップリン
グ剤で処理したものの表面をポリアクロレインで被覆し
てなる微粒子。
に判定時間を大幅に短縮することができる微粒子を提供
すること。 【解決手段】シリカ等の無機微粒子をシランカップリン
グ剤で処理したものの表面をポリアクロレインで被覆し
てなる微粒子。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は疾病の診断に用いら
れる抗原−抗体反応等を利用する診断試薬用の微粒子等
として有用な微粒子に関する。
れる抗原−抗体反応等を利用する診断試薬用の微粒子等
として有用な微粒子に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、免疫診断試薬用微粒子としては、
ポリスチレン微粒子などの合成ポリマーの微粒子が用い
られてきたが、ポリマーは本質的に無色ないし淡色であ
り、近年、微粒子を着色することにより凝集像が鮮明で
判定が容易になるよう試みられている。しかし、ポリス
チレン微粒子の比重は小さいため、これを用いたマイク
ロタイター法用の診断試薬は、判定に時間がかかるとい
う欠点がある。特公平５ー４８２４５号公報及び特開昭
６４ー１４８号公報には、ポリアクロレイン微粒子また
はポリアクロレイン微粒子を染料にて染色した着色微粒
子が提案されており、これをマイクロタイター法用の診
断試薬に使用した場合、ポリスチレン微粒子よりは比重
が大きいため判定時間は短くはなるが、マイクロタイタ
ー法用の診断試薬は、沈降時間が検査の律速となるた
め、より比重が高く、沈降時間を更に短縮できる微粒子
が望まれている。
ポリスチレン微粒子などの合成ポリマーの微粒子が用い
られてきたが、ポリマーは本質的に無色ないし淡色であ
り、近年、微粒子を着色することにより凝集像が鮮明で
判定が容易になるよう試みられている。しかし、ポリス
チレン微粒子の比重は小さいため、これを用いたマイク
ロタイター法用の診断試薬は、判定に時間がかかるとい
う欠点がある。特公平５ー４８２４５号公報及び特開昭
６４ー１４８号公報には、ポリアクロレイン微粒子また
はポリアクロレイン微粒子を染料にて染色した着色微粒
子が提案されており、これをマイクロタイター法用の診
断試薬に使用した場合、ポリスチレン微粒子よりは比重
が大きいため判定時間は短くはなるが、マイクロタイタ
ー法用の診断試薬は、沈降時間が検査の律速となるた
め、より比重が高く、沈降時間を更に短縮できる微粒子
が望まれている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、特にマイク
ロタイター法用の診断試薬に使用でき、該試薬を用いた
場合の判定時間の短縮を可能とする微粒子を提供するこ
とを目的としている。
ロタイター法用の診断試薬に使用でき、該試薬を用いた
場合の判定時間の短縮を可能とする微粒子を提供するこ
とを目的としている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の問
題点を解決すべく鋭意研究し本発明を完成した。
題点を解決すべく鋭意研究し本発明を完成した。
【０００５】即ち、本発明は、（１）ポリアクロレイン
で被覆された無機微粒子からなる微粒子、（２）無機微
粒子がシリカ微粒子である上記（１）記載の微粒子、
（３）シランカップリング剤で処理したシリカ微粒子の
存在下にアクロレインを重合して得られる上記（２）記
載の微粒子、（４）染料にて染色されている上記
（１）、（２）又は（３）記載の微粒子、（５）診断試
薬用の上記（１）、（２）、（３）又は（４）記載の微
粒子、（６）マイクロタイター法に用いるための上記
（５）記載の微粒子、に関する。
で被覆された無機微粒子からなる微粒子、（２）無機微
粒子がシリカ微粒子である上記（１）記載の微粒子、
（３）シランカップリング剤で処理したシリカ微粒子の
存在下にアクロレインを重合して得られる上記（２）記
載の微粒子、（４）染料にて染色されている上記
（１）、（２）又は（３）記載の微粒子、（５）診断試
薬用の上記（１）、（２）、（３）又は（４）記載の微
粒子、（６）マイクロタイター法に用いるための上記
（５）記載の微粒子、に関する。
【０００６】
【発明の実施の形態】無機微粒子としては、例えば、シ
リカ（二酸化ケイ素）、アルミナ、炭酸カルシウム、炭
酸マグネシウム、硫酸バリウム等の微粒子が挙げられ、
特にシリカ微粒子が好ましい。無機微粒子の平均粒径は
０. ０５〜１０μｍであることが好ましく、特に０. ２
〜５μｍであることが好ましい。
リカ（二酸化ケイ素）、アルミナ、炭酸カルシウム、炭
酸マグネシウム、硫酸バリウム等の微粒子が挙げられ、
特にシリカ微粒子が好ましい。無機微粒子の平均粒径は
０. ０５〜１０μｍであることが好ましく、特に０. ２
〜５μｍであることが好ましい。
【０００７】無機微粒子を被覆しているポリアクロレイ
ンの量は、核となる無機微粒子１００重量部に対して５
〜３０重量部の範囲であることが好ましく、特に８〜２
０重量部の範囲であることが好ましい。本発明の微粒子
（ポリアクロレインで被覆された無機微粒子）の平均粒
径は０. ０５〜１２μｍであることが好ましく、特に
０. ２〜７μｍであることが好ましい。
ンの量は、核となる無機微粒子１００重量部に対して５
〜３０重量部の範囲であることが好ましく、特に８〜２
０重量部の範囲であることが好ましい。本発明の微粒子
（ポリアクロレインで被覆された無機微粒子）の平均粒
径は０. ０５〜１２μｍであることが好ましく、特に
０. ２〜７μｍであることが好ましい。
【０００８】本発明の微粒子は、無機微粒子の表面にア
ミノ基、ビニル基、メタアクリル基等の官能基を導入
し、表面に官能基が導入された無機微粒子の存在下にア
クロレインを水、アルコール水溶液等の溶媒中で重合す
ることにより得ることができる。無機微粒子の表面に官
能基を導入する方法としては、例えば、無機微粒子をシ
ランカップリング剤で処理する方法、ハロゲン化する方
法等がある。
ミノ基、ビニル基、メタアクリル基等の官能基を導入
し、表面に官能基が導入された無機微粒子の存在下にア
クロレインを水、アルコール水溶液等の溶媒中で重合す
ることにより得ることができる。無機微粒子の表面に官
能基を導入する方法としては、例えば、無機微粒子をシ
ランカップリング剤で処理する方法、ハロゲン化する方
法等がある。
【０００９】ここで、例として、無機微粒子をシランカ
ップリング剤で処理する方法について説明する。この処
理は、水、アルコール水溶液、アセトン水溶液、トルエ
ン等の媒体中で無機微粒子とシランカップリング剤を混
合することにより行うことができる。この処理は、ｐＨ
３〜７であることが好ましく、特にｐＨ３〜５で行うの
が好ましい。
ップリング剤で処理する方法について説明する。この処
理は、水、アルコール水溶液、アセトン水溶液、トルエ
ン等の媒体中で無機微粒子とシランカップリング剤を混
合することにより行うことができる。この処理は、ｐＨ
３〜７であることが好ましく、特にｐＨ３〜５で行うの
が好ましい。
【００１０】シランカップリング剤は、無機微粒子に対
して１〜５０重量％使用するのが好ましく、特に１０〜
４０重量％使用するのが好ましい。一般的にシランカッ
プリング剤で無機材料を処理する場合、表面を単分子膜
で被覆したときに最高の効果が発揮され、無機材料に対
して、次の計算式で導き出される量用いるのが適当とさ
れている。 しかしながら、本発明の微粒子を得る場合は、上記の計
算式より導き出される量よりも多い量のシランカップリ
ング剤を用いるのが好ましく、特に、上記の計算式で導
き出される量の３〜７倍量のシランカップリング剤を用
いるのが好ましい。これにより、無機微粒子を多量のポ
リアクロレインで被覆することが可能となり、染料にて
染色した場合、効率良く濃染色が可能になる。
して１〜５０重量％使用するのが好ましく、特に１０〜
４０重量％使用するのが好ましい。一般的にシランカッ
プリング剤で無機材料を処理する場合、表面を単分子膜
で被覆したときに最高の効果が発揮され、無機材料に対
して、次の計算式で導き出される量用いるのが適当とさ
れている。 しかしながら、本発明の微粒子を得る場合は、上記の計
算式より導き出される量よりも多い量のシランカップリ
ング剤を用いるのが好ましく、特に、上記の計算式で導
き出される量の３〜７倍量のシランカップリング剤を用
いるのが好ましい。これにより、無機微粒子を多量のポ
リアクロレインで被覆することが可能となり、染料にて
染色した場合、効率良く濃染色が可能になる。
【００１１】シランカップリング剤としては、例えばア
ミノ基を有するシランカップリング剤（γーアミノプロ
ピルトリエトキシシラン、Ｎ−β( アミノエチル) γー
アミノプロピルメチルジメトキシシラン、Ｎ−β( アミ
ノエチル) γーアミノプロピルトリメトキシシラン
等）、ビニル基を有するシランカップリング剤（ビニル
エトキシシラン、ビニルトリス( βーメトキシエトキ
シ) シラン等）、メタアクリル基を有するシランカップ
リング剤（γーメタアクリロキシプロピルトリメトキシ
シラン等）が挙げられる。但し、ビニル基を有するシラ
ンカップリング剤やメタアクリル基を有するシランカッ
プリング剤による処理はトルエン等の有機溶媒中で行う
ため、カップリング処理後の溶剤洗浄と乾燥に難点があ
り、適正な設備、機器等が必要となる。
ミノ基を有するシランカップリング剤（γーアミノプロ
ピルトリエトキシシラン、Ｎ−β( アミノエチル) γー
アミノプロピルメチルジメトキシシラン、Ｎ−β( アミ
ノエチル) γーアミノプロピルトリメトキシシラン
等）、ビニル基を有するシランカップリング剤（ビニル
エトキシシラン、ビニルトリス( βーメトキシエトキ
シ) シラン等）、メタアクリル基を有するシランカップ
リング剤（γーメタアクリロキシプロピルトリメトキシ
シラン等）が挙げられる。但し、ビニル基を有するシラ
ンカップリング剤やメタアクリル基を有するシランカッ
プリング剤による処理はトルエン等の有機溶媒中で行う
ため、カップリング処理後の溶剤洗浄と乾燥に難点があ
り、適正な設備、機器等が必要となる。
【００１２】シランカップリング剤による処理等により
表面に官能基が導入された無機微粒子（以下、「処理済
無機微粒子」という）の存在下に溶媒中でアクロレイン
を重合する際、アクロレインは処理済無機微粒子に対し
て５０〜２００重量％用いるのが好ましく、特に７５〜
１５０重量％用いるのが好ましい。又、アクロレインは
溶媒に対しては１０〜３０重量％の範囲になるようにす
るのが好ましい。更に、アクロレインの重合を促進し、
得られる微粒子のアクロレインの刺激臭を減少させ、未
反応アクロレイン及び副性する可溶性重合体の除去を容
易にするために重合開始剤を使用するのが好ましい。重
合開始剤はアクロレインに対して０. ０１〜２重量％用
いるのが好ましく、重合開始剤としては、過硫酸塩、ア
ゾ化合物、過酸化ベンゾイル等、公知の重合開始剤が使
用できる。
表面に官能基が導入された無機微粒子（以下、「処理済
無機微粒子」という）の存在下に溶媒中でアクロレイン
を重合する際、アクロレインは処理済無機微粒子に対し
て５０〜２００重量％用いるのが好ましく、特に７５〜
１５０重量％用いるのが好ましい。又、アクロレインは
溶媒に対しては１０〜３０重量％の範囲になるようにす
るのが好ましい。更に、アクロレインの重合を促進し、
得られる微粒子のアクロレインの刺激臭を減少させ、未
反応アクロレイン及び副性する可溶性重合体の除去を容
易にするために重合開始剤を使用するのが好ましい。重
合開始剤はアクロレインに対して０. ０１〜２重量％用
いるのが好ましく、重合開始剤としては、過硫酸塩、ア
ゾ化合物、過酸化ベンゾイル等、公知の重合開始剤が使
用できる。
【００１３】このようにして得られる本発明の微粒子
は、更に他の共重合可能なモノマーを共重合させること
もできる。他の共重合可能なモノマーとしては、メチル
（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレート、
ブチル（メタ）アクリレート、２ーエチルヘキシル（メ
タ）アクリレート、スチレン、（メタ）アクリレート等
が挙げられる。微粒子に他の共重合可能なモノマーを共
重合する場合、アクロレインの重合途中又は重合がほと
んど終了した後に反応系に該モノマーを加え重合開始剤
で重合させればよい。この際に用いる重合開始剤は、過
硫酸塩、アゾ化合物、過酸化ベンゾイル等が適当であ
る。
は、更に他の共重合可能なモノマーを共重合させること
もできる。他の共重合可能なモノマーとしては、メチル
（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレート、
ブチル（メタ）アクリレート、２ーエチルヘキシル（メ
タ）アクリレート、スチレン、（メタ）アクリレート等
が挙げられる。微粒子に他の共重合可能なモノマーを共
重合する場合、アクロレインの重合途中又は重合がほと
んど終了した後に反応系に該モノマーを加え重合開始剤
で重合させればよい。この際に用いる重合開始剤は、過
硫酸塩、アゾ化合物、過酸化ベンゾイル等が適当であ
る。
【００１４】本発明の微粒子を染料にて染色したものを
用いて得た診断試薬（特にマイクロタイター法用の）は
凝集像が鮮明で判定が容易になる。微粒子の染色に使用
される染料は染色可能な染料なら何でも良く酸性染料、
直接染料、分散染料、反応染料等の大部分の染料は使用
できる。染料について、具体的に染料名を挙げると、 Ｋａｙａｒｕｓ Ｓｕｐｒａ Ｂｌｕｅ ＢＲＬ Ｋａｙａｒｕｓ Ｓｕｐｒａ Ｒｅｄ ６ＢＬ Ｋａｙａｃｒｙｌ Ｂｌｕｅ ＧＲＬ Ｋａｙａｎｏｌ Ｍｉｌｌｉｎｇ Ｒｅｄ ６ＢＷ Ｋａｙａｌｏｎ Ｐｏｌｙｅｓｔｅｒ Ｂｌｕｅ ２Ｒ
−ＳＦ Ｋａｙａｌｏｎ Ｐｏｌｙｅｓｔｅｒ Ｒｕｂｉｎｅ
ＧＬ−ＳＥ Ｋａｙａｃｉｏｎ Ｒｅｄ Ａ−３Ｂ Ｋａｙａｃｉｏｎ Ｂｌｕｅ Ａ−５Ｒ （以上 日本化薬（株）製） 等が挙げられる。しかし、染料はブルー系、赤系に限ら
れるものではなく、例えば、Ｋａｙｌｏｎ Ｐｏｙｅｓ
ｔｅｒ Ｌｉｇｈｔ Ｙｅｌｌｏｗ ５ＧＳ（黄色）、
Ｆｕｃｈｓｉｎ（赤系）、Ｍａｌａｃｈｉｔｅ Ｇｒｅ
ｅｎ（緑系）、（以上 和光純薬（株）製）等でも当然
非常に良く染色できる。また染料の混合によって中間色
に染色することも可能である。
用いて得た診断試薬（特にマイクロタイター法用の）は
凝集像が鮮明で判定が容易になる。微粒子の染色に使用
される染料は染色可能な染料なら何でも良く酸性染料、
直接染料、分散染料、反応染料等の大部分の染料は使用
できる。染料について、具体的に染料名を挙げると、 Ｋａｙａｒｕｓ Ｓｕｐｒａ Ｂｌｕｅ ＢＲＬ Ｋａｙａｒｕｓ Ｓｕｐｒａ Ｒｅｄ ６ＢＬ Ｋａｙａｃｒｙｌ Ｂｌｕｅ ＧＲＬ Ｋａｙａｎｏｌ Ｍｉｌｌｉｎｇ Ｒｅｄ ６ＢＷ Ｋａｙａｌｏｎ Ｐｏｌｙｅｓｔｅｒ Ｂｌｕｅ ２Ｒ
−ＳＦ Ｋａｙａｌｏｎ Ｐｏｌｙｅｓｔｅｒ Ｒｕｂｉｎｅ
ＧＬ−ＳＥ Ｋａｙａｃｉｏｎ Ｒｅｄ Ａ−３Ｂ Ｋａｙａｃｉｏｎ Ｂｌｕｅ Ａ−５Ｒ （以上 日本化薬（株）製） 等が挙げられる。しかし、染料はブルー系、赤系に限ら
れるものではなく、例えば、Ｋａｙｌｏｎ Ｐｏｙｅｓ
ｔｅｒ Ｌｉｇｈｔ Ｙｅｌｌｏｗ ５ＧＳ（黄色）、
Ｆｕｃｈｓｉｎ（赤系）、Ｍａｌａｃｈｉｔｅ Ｇｒｅ
ｅｎ（緑系）、（以上 和光純薬（株）製）等でも当然
非常に良く染色できる。また染料の混合によって中間色
に染色することも可能である。
【００１５】微粒子を染色する方法は、織布を染色する
ときと同様にして行なうことができる。染料は０. ００
１〜５％重量％の濃度となるように水に溶かすか又は分
散させて用いるのが好ましく、被染色物である微粒子の
濃度は０. １〜２０重量％の範囲とするのが好ましい。
染色温度は常温〜１００℃が好ましく、３０分〜５時間
で染色される。
ときと同様にして行なうことができる。染料は０. ００
１〜５％重量％の濃度となるように水に溶かすか又は分
散させて用いるのが好ましく、被染色物である微粒子の
濃度は０. １〜２０重量％の範囲とするのが好ましい。
染色温度は常温〜１００℃が好ましく、３０分〜５時間
で染色される。
【００１６】本発明の微粒子に、例えば抗原又は抗体を
感作することにより診断試薬が得られる。抗原又は抗体
による感作は、一般的な感作方法によって行なうことが
できる。即ち、リン酸等の緩衝生理食塩水中で微粒子と
抗原又は抗体を接触させることにより感作を行なうこと
ができる。
感作することにより診断試薬が得られる。抗原又は抗体
による感作は、一般的な感作方法によって行なうことが
できる。即ち、リン酸等の緩衝生理食塩水中で微粒子と
抗原又は抗体を接触させることにより感作を行なうこと
ができる。
【００１７】本発明の特に染料で染色した微粒子に抗原
又は抗体を感作して得たものを診断試薬としてマイクロ
タイター法で検査した場合、判定の凝集像が鮮明で判定
が容易になる。また、染料 で染色した微粒子を長期保
存した場合、染色前のものより分散性は良好であり、診
断試薬にした場合も染料で染色したものを用いた場合の
方が長期安定性が良好である。即ち、染色することで保
存安定性が向上する。これは、微粒子表面が染料で覆わ
れることにより安定化したためと思われる。これは、ア
クロレインモノマーの重合に際してビニル重合のみなら
ず共役するカルボニル二重結合も重合に関与した結果と
して、構造が複雑になり不安定な結合を持ち、これが染
料によって表面処理され、染料分子と結合したり、染料
による強い親和力等によって安定化したためと考えられ
る。
又は抗体を感作して得たものを診断試薬としてマイクロ
タイター法で検査した場合、判定の凝集像が鮮明で判定
が容易になる。また、染料 で染色した微粒子を長期保
存した場合、染色前のものより分散性は良好であり、診
断試薬にした場合も染料で染色したものを用いた場合の
方が長期安定性が良好である。即ち、染色することで保
存安定性が向上する。これは、微粒子表面が染料で覆わ
れることにより安定化したためと思われる。これは、ア
クロレインモノマーの重合に際してビニル重合のみなら
ず共役するカルボニル二重結合も重合に関与した結果と
して、構造が複雑になり不安定な結合を持ち、これが染
料によって表面処理され、染料分子と結合したり、染料
による強い親和力等によって安定化したためと考えられ
る。
【００１８】本発明の染料で染色された微粒子は比重が
高く（例えば、実施例３で得られる微粒子の比重は１.
８）、そのため、これを用いて得た診断試薬をマイクロ
タイター法で使用した場合、判定時間は３０分〜１時間
程度で短時間判定が可能になる。従来の着色したポリア
クロレイン微粒子は比重１. ３２のため判定時間は１時
間〜２. ５時間必要であった。
高く（例えば、実施例３で得られる微粒子の比重は１.
８）、そのため、これを用いて得た診断試薬をマイクロ
タイター法で使用した場合、判定時間は３０分〜１時間
程度で短時間判定が可能になる。従来の着色したポリア
クロレイン微粒子は比重１. ３２のため判定時間は１時
間〜２. ５時間必要であった。
【００１９】本発明の染料で染色された微粒子は、マイ
クロタイター法のみならず、粒径の小さい微粒子を用い
ることでラテックス凝集比濁法、スライドテスト法にも
応用することが可能である。
クロタイター法のみならず、粒径の小さい微粒子を用い
ることでラテックス凝集比濁法、スライドテスト法にも
応用することが可能である。
【００２０】
【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明
する。但し、本発明はこれら実施例に限定されるもので
はない。
する。但し、本発明はこれら実施例に限定されるもので
はない。
【００２１】製造例１ シリカ微粒子（シーホスターＫＥ−Ｐ１００，平均粒径
1.０μｍ，日本触媒（株）製）１０ｇを含有する５０％
エタノール水溶液５０ｇにシランカップリング剤として
γーアミノプロピルトリエトキシシランを２ｇ添加し、
酢酸でｐＨ４.６に調整後、４０℃で２時間攪拌する。
その後、エタノール水溶液を除去するため、遠心分離機
（１５００ｒｐｍ×５分）によりカップリング処理した
シリカ微粒子のみ沈殿させ蒸留水で２回洗浄後、１００
℃で乾燥してカップリング処理したシリカ微粒子を得
た。
1.０μｍ，日本触媒（株）製）１０ｇを含有する５０％
エタノール水溶液５０ｇにシランカップリング剤として
γーアミノプロピルトリエトキシシランを２ｇ添加し、
酢酸でｐＨ４.６に調整後、４０℃で２時間攪拌する。
その後、エタノール水溶液を除去するため、遠心分離機
（１５００ｒｐｍ×５分）によりカップリング処理した
シリカ微粒子のみ沈殿させ蒸留水で２回洗浄後、１００
℃で乾燥してカップリング処理したシリカ微粒子を得
た。
【００２２】製造例２ シリカ微粒子（シーホスターＫＥ−Ｐ１００，平均粒径
1.０μｍ，日本触媒（株）製）１０ｇを含有するトルエ
ン５０ｇにシランカップリング剤としてγーメタアクリ
ロキシプロピルトリメトキシシランを１ｇ添加し、８０
℃で２時間攪拌する。冷却後、遠心分離機（１５００ｒ
ｐｍ×５分）により上清のトルエンを除去する。沈渣の
カップリング処理したシリカ微粒子を５０％エタノール
５０ｇ中に添加し攪拌し、遠心分離機（１５００ｒｐｍ
×５分）により５０％エタノールによる上清の交換を２
回行いトルエンの洗浄を行う。次に沈殿物に蒸留水５０
ｇ添加し、同様の操作でエタノール洗浄を行った後、１
００℃で乾燥してカップリング処理したシリカ微粒子を
得た。
1.０μｍ，日本触媒（株）製）１０ｇを含有するトルエ
ン５０ｇにシランカップリング剤としてγーメタアクリ
ロキシプロピルトリメトキシシランを１ｇ添加し、８０
℃で２時間攪拌する。冷却後、遠心分離機（１５００ｒ
ｐｍ×５分）により上清のトルエンを除去する。沈渣の
カップリング処理したシリカ微粒子を５０％エタノール
５０ｇ中に添加し攪拌し、遠心分離機（１５００ｒｐｍ
×５分）により５０％エタノールによる上清の交換を２
回行いトルエンの洗浄を行う。次に沈殿物に蒸留水５０
ｇ添加し、同様の操作でエタノール洗浄を行った後、１
００℃で乾燥してカップリング処理したシリカ微粒子を
得た。
【００２３】実施例１ 製造例１で得たカップリング処理したシリカ微粒子１０
ｇを含有する水１００ｇにアクロレインモノマー１５ｍ
ｌを添加し、窒素ガスを導入して酸素を追い出し、２％
過硫酸アンモニウム水溶液１ｍｌ添加し、５０℃で５時
間反応させ、更に２％過硫酸アンモニウム水溶液１ｍｌ
添加後、７０℃で２時間、後反応を行う。得られた微粒
子中の少量の未反応アクロレイン及び可溶性重合体を除
去するため、遠心分離機（１５００ｒｐｍ×５分）によ
り微粒子のみ沈殿させ分散媒を水と交換してポリアクロ
レインで被覆された微粒子（固形分濃度１０ｗｔ％に調
製しておく）が得られた。得られた微粒子の平均粒径は
１. ０８μｍであり、ポリアクロレイン量はシリカ微粒
子に対して１４. ２重量％であった。
ｇを含有する水１００ｇにアクロレインモノマー１５ｍ
ｌを添加し、窒素ガスを導入して酸素を追い出し、２％
過硫酸アンモニウム水溶液１ｍｌ添加し、５０℃で５時
間反応させ、更に２％過硫酸アンモニウム水溶液１ｍｌ
添加後、７０℃で２時間、後反応を行う。得られた微粒
子中の少量の未反応アクロレイン及び可溶性重合体を除
去するため、遠心分離機（１５００ｒｐｍ×５分）によ
り微粒子のみ沈殿させ分散媒を水と交換してポリアクロ
レインで被覆された微粒子（固形分濃度１０ｗｔ％に調
製しておく）が得られた。得られた微粒子の平均粒径は
１. ０８μｍであり、ポリアクロレイン量はシリカ微粒
子に対して１４. ２重量％であった。
【００２４】実施例２ 製造例２で得たカップリング処理したシリカ微粒子１０
ｇを用い、実施例１と同様にして反応を行いポリアクロ
レインで被覆された微粒子が得られた。得られた微粒子
の平均粒径は１. ０７μｍであり、ポリアクロレイン量
はシリカ微粒子に対して１３. ３重量％であった。
ｇを用い、実施例１と同様にして反応を行いポリアクロ
レインで被覆された微粒子が得られた。得られた微粒子
の平均粒径は１. ０７μｍであり、ポリアクロレイン量
はシリカ微粒子に対して１３. ３重量％であった。
【００２５】実施例３ 実施例１で得たポリアクロレインで被覆された微粒子
（固形分濃度１０ｗｔ％）１００ｇに対して、Ｋａｙａ
ｌｏｎ Ｐｏｌｙｅｓｔｅｒ Ｒｕｂｉｎｅ ＧＬ−Ｓ
Ｅ（日本化薬（株）製）０. ４ｇを１００ｍｌの蒸留水
に溶解したものを混合して酢酸でｐＨ５に調整後、９５
℃で２時間攪拌した。冷却後、遠心分離機（１５００ｒ
ｐｍ×５分）により蒸留水による上清の交換を３回行
い、その後沈殿物を酢酸１ｍｌを含む蒸留水２００ｍｌ
中に分散し、９５℃で３０分攪拌した。冷却後、遠心分
離機（１５００ｒｐｍ×５分）により蒸留水による上清
の交換を５回行い洗浄して、濃赤色に着色した微粒子
（固形分濃度１０ｗｔ％に調製しておく）が得られた。
（固形分濃度１０ｗｔ％）１００ｇに対して、Ｋａｙａ
ｌｏｎ Ｐｏｌｙｅｓｔｅｒ Ｒｕｂｉｎｅ ＧＬ−Ｓ
Ｅ（日本化薬（株）製）０. ４ｇを１００ｍｌの蒸留水
に溶解したものを混合して酢酸でｐＨ５に調整後、９５
℃で２時間攪拌した。冷却後、遠心分離機（１５００ｒ
ｐｍ×５分）により蒸留水による上清の交換を３回行
い、その後沈殿物を酢酸１ｍｌを含む蒸留水２００ｍｌ
中に分散し、９５℃で３０分攪拌した。冷却後、遠心分
離機（１５００ｒｐｍ×５分）により蒸留水による上清
の交換を５回行い洗浄して、濃赤色に着色した微粒子
（固形分濃度１０ｗｔ％に調製しておく）が得られた。
【００２６】実施例４ 実施例２で得たポリアクロレインで被覆された微粒子
（固形分濃度１０ｗｔ％）１００ｇを実施例３と同様に
染色して、濃赤色に着色した微粒子（固形分濃度１０ｗ
ｔ％に調製しておく）が得られた。
（固形分濃度１０ｗｔ％）１００ｇを実施例３と同様に
染色して、濃赤色に着色した微粒子（固形分濃度１０ｗ
ｔ％に調製しておく）が得られた。
【００２７】実施例５ 実施例１で得たポリアクロレインで被覆された微粒子
（固形分濃度１０ｗｔ％）１００ｇに対して、Ｋａｙａ
ｎｏｌ Ｍｉｌｌｉｎｇ Ｒｅｄ ６ＢＷ（日本化薬
（株）製）０. ２ｇを用い、実施例３と同様に染色し
て、濃赤色に着色した微粒子（固形分濃度１０ｗｔ％に
調製しておく）が得られた。
（固形分濃度１０ｗｔ％）１００ｇに対して、Ｋａｙａ
ｎｏｌ Ｍｉｌｌｉｎｇ Ｒｅｄ ６ＢＷ（日本化薬
（株）製）０. ２ｇを用い、実施例３と同様に染色し
て、濃赤色に着色した微粒子（固形分濃度１０ｗｔ％に
調製しておく）が得られた。
【００２８】試験例 着色微粒子の診断試薬への応用として梅毒抗体検査法を
例として説明する。但し、これらの検査項目に限定され
るものではない。
例として説明する。但し、これらの検査項目に限定され
るものではない。
【００２９】１．梅毒抗原の調製 ＴＰ菌（Ｎｉｃｈｏｌｓ株）をウサギ睾丸内で増殖さ
せ、摘出した睾丸からクエン酸緩衝液で抽出、円心分画
して集菌し、菌数１〜２×１０9Cells／ｍｌとなるよう
にＰＢＳに再浮遊した。このＴＰ菌浮遊液５ｍｌをＰＢ
Ｓで１０倍に希釈し、超音波破砕器（久保田商事（株）
２０１型）を用い、９ｋＨｚ、１８０Ｗで２０分処理し
てＴＰ菌体成分を含む抗原液を得た。
せ、摘出した睾丸からクエン酸緩衝液で抽出、円心分画
して集菌し、菌数１〜２×１０9Cells／ｍｌとなるよう
にＰＢＳに再浮遊した。このＴＰ菌浮遊液５ｍｌをＰＢ
Ｓで１０倍に希釈し、超音波破砕器（久保田商事（株）
２０１型）を用い、９ｋＨｚ、１８０Ｗで２０分処理し
てＴＰ菌体成分を含む抗原液を得た。
【００３０】２．抗原感作、試薬の調製 着色微粒子（固形分１０ｗｔ％）１ｍｌをＰＢＳ １０
ｍｌに分散させ、ＴＰ抗原液４ｍｌ添加し３７℃で３０
分間ゆっくり攪拌した。その後、２ｗｔ％牛血清アルブ
ミン（ＢＳＡと略す）ーＰＢＳ １０ｍｌをさらに添加
し、３７℃で１時間ゆっくり攪拌した。これを、遠心分
離機（１５００ｒｐｍ×５分）により分離し上清を捨
て、０. ５ｗｔ％ＢＳＡーＰＢＳで２回同様に遠心して
沈渣を洗浄する。その後、この沈渣に０. ５ｗｔ％ＢＳ
ＡーＰＢＳ ４０ｍｌ添加し、よく攪拌して固形分０.
２５ｗｔ％のＴＰ抗原感作微粒子分散液（試薬）を得
た。
ｍｌに分散させ、ＴＰ抗原液４ｍｌ添加し３７℃で３０
分間ゆっくり攪拌した。その後、２ｗｔ％牛血清アルブ
ミン（ＢＳＡと略す）ーＰＢＳ １０ｍｌをさらに添加
し、３７℃で１時間ゆっくり攪拌した。これを、遠心分
離機（１５００ｒｐｍ×５分）により分離し上清を捨
て、０. ５ｗｔ％ＢＳＡーＰＢＳで２回同様に遠心して
沈渣を洗浄する。その後、この沈渣に０. ５ｗｔ％ＢＳ
ＡーＰＢＳ ４０ｍｌ添加し、よく攪拌して固形分０.
２５ｗｔ％のＴＰ抗原感作微粒子分散液（試薬）を得
た。
【００３１】なお、着色微粒子としては、前記実施例３
〜５で得た着色微粒子及び特開昭６４ー１４８号公報の
実施例４と同様にして作製した従来の着色ポリアクロレ
イン微粒子を使用した。得られた試薬を以下のとおり、
それぞれＡ，Ｂ，Ｃ，Ｄとした。 試薬Ａ：実施例３の着色微粒子（固形分１０ｗｔ％）を
用いたもの 試薬Ｂ：実施例４の着色微粒子（固形分１
０ｗｔ％）を用いたもの 試薬Ｃ：実施例５の着色微
粒子（固形分１０ｗｔ％）を用いたもの 試薬Ｄ：従来
の着色ポリアクロレイン微粒子（固形分１０ｗｔ％）を
用いたもの
〜５で得た着色微粒子及び特開昭６４ー１４８号公報の
実施例４と同様にして作製した従来の着色ポリアクロレ
イン微粒子を使用した。得られた試薬を以下のとおり、
それぞれＡ，Ｂ，Ｃ，Ｄとした。 試薬Ａ：実施例３の着色微粒子（固形分１０ｗｔ％）を
用いたもの 試薬Ｂ：実施例４の着色微粒子（固形分１
０ｗｔ％）を用いたもの 試薬Ｃ：実施例５の着色微
粒子（固形分１０ｗｔ％）を用いたもの 試薬Ｄ：従来
の着色ポリアクロレイン微粒子（固形分１０ｗｔ％）を
用いたもの
【００３２】３．感作微粒子の評価 ＴＰ抗原感作微粒子を用いてマイクロタイター法にて検
査を行った。Ｕ型マイクロプレートの第１管目に０. ５
ｗｔ％ＢＳＡーＰＢＳを１００μｌ、２管目以降に２５
μｌずつ滴下し、第１管目に血清２５μｌを加えた。こ
れをダイリューターにて１管目より連続２倍希釈した。
ＴＰ抗原感作微粒子（試薬Ａ〜Ｄ）を第２管目以降に２
５μｌずつ滴下し、プレートミキサーで１分間振とう
後、フタをして静置した。管底の凝集像で陰性か陽性を
判定した。この場合、最終希釈倍数は、２管目が２０
倍、第３管目以降は倍々の希釈倍数となり、ＴＰＨＡと
同様に４０倍をカットオフ値とした。８０倍以上で凝集
が認められたものは陽性となる。結果は表１に示した。
査を行った。Ｕ型マイクロプレートの第１管目に０. ５
ｗｔ％ＢＳＡーＰＢＳを１００μｌ、２管目以降に２５
μｌずつ滴下し、第１管目に血清２５μｌを加えた。こ
れをダイリューターにて１管目より連続２倍希釈した。
ＴＰ抗原感作微粒子（試薬Ａ〜Ｄ）を第２管目以降に２
５μｌずつ滴下し、プレートミキサーで１分間振とう
後、フタをして静置した。管底の凝集像で陰性か陽性を
判定した。この場合、最終希釈倍数は、２管目が２０
倍、第３管目以降は倍々の希釈倍数となり、ＴＰＨＡと
同様に４０倍をカットオフ値とした。８０倍以上で凝集
が認められたものは陽性となる。結果は表１に示した。
【００３３】
【表１】 検体の欄の数値は、凝集が認められた検体最終希釈倍数を意味する。 ＴＰＨＡ（Ｆ社製）については、測定操作は能書通りに実施した。
【００３４】４．結論 上記結果から明らかなように、本発明の着色微粒子を用
いたＴＰ抗原感作微粒子は、赤血球を担体としたＴＰＨ
Ａと同等の感度に判定され大幅に判定時間を短縮した。
いたＴＰ抗原感作微粒子は、赤血球を担体としたＴＰＨ
Ａと同等の感度に判定され大幅に判定時間を短縮した。
【００３５】
【発明の効果】本発明の微粒子を用いることにより、従
来品に比べ保存安定性が良好で、大幅に判定時間の短縮
した診断試薬を提供することができる。
来品に比べ保存安定性が良好で、大幅に判定時間の短縮
した診断試薬を提供することができる。
Claims (6)
- 【請求項１】ポリアクロレインで被覆された無機微粒子
からなる微粒子。 - 【請求項２】無機微粒子がシリカ微粒子である請求項１
記載の微粒子。 - 【請求項３】シランカップリング剤で処理したシリカ微
粒子の存在下にアクロレインを重合して得られる請求項
２記載の微粒子。 - 【請求項４】染料にて染色されている請求項１、２又は
３記載の微粒子。 - 【請求項５】診断試薬用の請求項１、２、３又は４記載
の微粒子。 - 【請求項６】マイクロタイター法に用いるための請求項
５記載の微粒子。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04963996A JP3717582B2 (ja) | 1996-02-14 | 1996-02-14 | 微粒子 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04963996A JP3717582B2 (ja) | 1996-02-14 | 1996-02-14 | 微粒子 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09221314A true JPH09221314A (ja) | 1997-08-26 |
| JP3717582B2 JP3717582B2 (ja) | 2005-11-16 |
Family
ID=12836790
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP04963996A Expired - Fee Related JP3717582B2 (ja) | 1996-02-14 | 1996-02-14 | 微粒子 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3717582B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006273588A (ja) * | 2005-03-25 | 2006-10-12 | Toyo Tire & Rubber Co Ltd | 表面改質シリカ、それを含むゴム組成物及びシリカの改質方法 |
| WO2009054538A1 (ja) * | 2007-10-22 | 2009-04-30 | Alfresa Pharma Corporation | 免疫学的微小粒子の凝集反応を用いる検体のアクロレイン付加体の測定方法および測定用キット |
| JP2009274923A (ja) * | 2008-05-15 | 2009-11-26 | Furukawa Electric Co Ltd:The | 粒子表面にアミノ基を有するシリカ粒子の製造方法、粒子表面にアミノ基を有するシリカ粒子、及びそれを用いた複合粒子 |
| US20220127157A1 (en) * | 2020-10-23 | 2022-04-28 | Miyoshi America, Inc. | Titanate crystals and surface treated titanate crystals |
-
1996
- 1996-02-14 JP JP04963996A patent/JP3717582B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006273588A (ja) * | 2005-03-25 | 2006-10-12 | Toyo Tire & Rubber Co Ltd | 表面改質シリカ、それを含むゴム組成物及びシリカの改質方法 |
| WO2009054538A1 (ja) * | 2007-10-22 | 2009-04-30 | Alfresa Pharma Corporation | 免疫学的微小粒子の凝集反応を用いる検体のアクロレイン付加体の測定方法および測定用キット |
| JP2009274923A (ja) * | 2008-05-15 | 2009-11-26 | Furukawa Electric Co Ltd:The | 粒子表面にアミノ基を有するシリカ粒子の製造方法、粒子表面にアミノ基を有するシリカ粒子、及びそれを用いた複合粒子 |
| US20220127157A1 (en) * | 2020-10-23 | 2022-04-28 | Miyoshi America, Inc. | Titanate crystals and surface treated titanate crystals |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3717582B2 (ja) | 2005-11-16 |
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| Date | Code | Title | Description |
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Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20040928 |
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| A131 | Notification of reasons for refusal |
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