JPH05180842A - 抗原・抗体反応による生体内物質の測定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 生体内物質の臨床検査を短時間に、微量の
試料で、定量可能にする 【構成】 （１） 磁性を有する粒子と磁性を有しない着色粒子
に、抗体又は抗原を担持させた混合粒子に、前記混合粒
子の抗体と生体内物質中の抗原、又は前記混合粒子の抗
原と生体内物質中の抗体を反応させる工程 （２） 前記反応混合物に磁場を付与する工程 （３） 集磁されない着色粒子の量を、３５０ｎｍ以上
で、透過スペクトル差の最大波長で測定し、定性又は定
量する工程を順次経て生体内物質を測定する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、磁性を有する粒子と磁
性を有しない着色粒子とを用いて、生体内物質の抗原・
抗体測定法において、極めて短時間に高感度、高信頼性
の得られる測定方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】生体内の各種抗体、抗原、細菌、ウィル
スあるいは癌マーカー等の測定は、多数の検体を短時間
で感度よく、しかも再現性等の信頼性も高くなければな
らない。しかも分析コストの点から、少量の検体や試薬
による少量分析が望まれている。抗原又は抗体を固定し
た特定の磁性粒子を用いる各種の方法が採用されてい
る。

【０００３】特開平１−１９３６４７号公報では、磁性
体含有不溶性担体粒子と磁性体を含有していない不溶性
担体粒子を用いる抗原・抗体の測定方法において、不溶
性担体粒子が、色素を含有する有機高分子物質よりなる
粒子を用いる事が記載されている。

【０００４】特開平３−５９４５９号公報では、磁性体
含有不溶性担体粒子と磁性体を含有していない不溶性担
体粒子を用いる抗原・抗体の測定方法において、前記粒
子の平均粒径、使用割合及び測定波長を特定する事が記
載されている。生体内物質の測定は、高感度ですなわち
微少の試料でも精度を高く定量的に測定しなければなら
ない。前記特開平１−１９３６４７号公報では、色調を
持つ不溶性担体粒子は、２種以上の抗原又は抗体を同時
に測定するとき、実施例においてＡＦＰ，ＣＥＡを同時
に検出する場合、集磁後の反応液の色合いを定性的に目
視観察したもので、定量測定ではない。また測定波長範
囲を３００〜１０００ｎｍに設定し、吸光度、或いは散
乱光で抗原または抗体などの生体内物質を測定している
が、測定波長を決定する根拠についての意図がない。ま
た特開平３−５９４５９号公報では、磁性体を含有しな
い不溶性担体粒子の着色についての記載はなく、実施例
のラテックスから白の無彩色粒子と判断され、吸光度又
は散乱光強度の測定領域が、６００〜１０００ｎｍの範
囲で、感度の高い測定としては、不十分である。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明は前記
した従来技術の測定における問題点を解決し、感度が高
く、信頼性の高い生体内物質の定性又は定量測定方法を
開発することを目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段及び作用】本発明に従えば （１）磁性を有する粒子と磁性を有しない着色粒子に、
抗体又は抗原を担持させた混合粒子に、前記混合粒子の
抗体と生体内物質中の抗原、又は前記混合粒子の抗原と
生体内物質中の抗体を反応させる工程 （２）前記反応混合物に、磁場を付与する工程 （３）集磁されない粒子の量を、３６０ｎｍ以上で、透
過スペクトル差の最大波長で測定し、生体内物質中の抗
原又は抗体を、定性又は定量する工程を順次経る抗原・
抗体反応による生体内物質の測定方法が提供される。

【０００７】本発明の方法では、表層に磁性を有する粒
子と磁性を有しない粒子を用い、さらに磁性を有しない
粒子を着色化する事によって、着色化していない場合の
無彩色の白に比べて透過スペクトルが高くなる領域があ
り、その高くなる領域の内、差が最大の波長で測定する
事により感度の高い測定をする事ができることを見い出
し、本発明を完成したものであ

【０００８】本発明で用いる磁性を有しな着色粒子は、
架橋重合体粒子、有機高分子物質や無機微粉末等が用い
られる。架橋重合体粒子の製法としては各種の方法が提
案されているが、その一つはエチレン性不飽和単量体
を、架橋性の共重合単量体と水性媒体中でサスペンジョ
ン重合または乳化重合させて微小樹脂粒子分散液をつく
り、溶媒置換、共沸、遠心分離乾燥などにより水を除去
して架橋重合体粒子を得るものでり、他の一つは脂肪族
炭化水素等の低ＳＰ有機溶媒、あるいはエステル、ケト
ン、アルコール等の高ＳＰ有機溶媒のようにモノマーは
溶かすが重合体は溶解しない非水性有機溶媒中で、エチ
レン性不飽和単量体と架橋性重合体とを共重合させ、得
られる微小樹脂粒子共重合体を分散するＮＡＤ法あるい
は沈澱折出法と称される方法である。又本出願人の特開
昭５８−１２９０６６号に記載された両イオン性基を有
するモノマー等から合成された微小樹脂粒子を用いても
よい。水性媒体または非水性有機媒体中で製造した架橋
重合体粒子は、ロ過、スプレー乾燥、凍結乾燥などの方
法で微小樹脂粒子の粒径を選別し、そのままもしくはミ
ルなどを用いて適当な粒径に粉砕して用いる事もでき
る。

【０００９】有機高分子物質としては、ポリスチレン、
スチレン−ブタジエン共重合粒子、ポリ塩化ビニル、ポ
リメタクリル酸メチル、ポリアミド、ポリエステル、ポ
リカボーネト等を用いることができる。この他にも、多
糖類、蛋白質の半合成ポリマー、天然ポリマーおよびこ
れらの混合物も用いる事ができる。

【００１０】無機微粉末としては、セラミック微粉末、
シリカ、アルミナ、シリカーアルミナ等を用いる事がで
きる。着色剤としては、顔料や染料を用いる。架橋重合
体粒子及び有機高分子物質の着色粒子を得る方法とし
て、（１）顔料や染料の存在下にモノマーを重合する方
法、（２）顔料や染料と架橋重合体粒子や有機高分子物
質溶液の混合液を、分散させて析出させる方法、あるい
は（３）架橋重合体粒子や有機高分子物質と顔料や染料
とを、混練・混合する方法などにより行う事ができる。
（４）染料の場合は、上記の他に染料溶液と粒子とを、
混合することによっても行うことができる。無機微粉末
の着色粒子を得る方法は、混練する方法及び混合する方
法などによる。

【００１１】顔料としては、以下のもの少なくとも１種
以上を用いることができる。黄色として黄色酸化鉄、黄
鉛、亜鉛黄、クロム酸バリウム、黄土、チタン黄、ナフ
トールエロー、ハンザエロー、ピグメントエロー、ベン
ジンエロー、パーマネントエロー等。橙色としてクロム
バーミリオン、パーマネントオレンジ、リソールファス
トオレンジ、ベンジジンオレンジ、インダスレンブリリ
アントオレンジ等。褐色として酸化鉄、パーマネントブ
ラウン、パラブラウン等。赤色としてべんがら、鉛丹、
アンチモンレッド、パーマネントレッド、パラレッド、
フャイヤーレッド、リソールファストスカーレット、ブ
リリアントファストスカーレット、ブリリアントカーミ
ン、レーキレッド等。紫色としてコバルト紫、ファスト
バイオレット等。青色として群青、コバルトブルー、フ
タロシアニンブルー、ファストスカイブルー、インダス
レンブルー等。緑色としてクロムグリーン、エメラルド
グリーン、コバルトグリーン、フタロシアニングリー
ン、ナフトールグリーン等。黒色としてカーボンブラッ
ク、酸化鉄（鉄黒）等。

【００１２】染料としては、アゾ系又はキノン系の分散
染料及び／又は油溶染料を用いることができる。具体的
には、ディスパーズイエロー３、ディスパーズイエロー
７、ディスパーズレッド７等のアゾ系分散染料、ディス
パーズバイオレット１、ディスパーズバイオレット８、
ディスパーズバイオレット２６等のキノン系分散染料、
ソルベントイエロー２、ソルベントイエロー１４、ソル
ベントオレンジ、ソルベントレッド２３、ソルベントレ
ッド１等のアゾ系油溶染料、オイルレッド９、ソルベン
トバイオレット１３、ソルベントブルー１２等のキノン
系油溶染料等を少なくとも１種以上用いることができ
る。これら染料は水には溶解しにくいものを用いる。こ
れにより、担体粒子を染色着色することができる。

【００１３】本発明の着色粒子における着色剤と粒子の
組成比は、用途により異り一概には限定できないが、顔
料又は染料が着色粒子中に０．００１〜５０重量％、好
ましくは０．０１〜２０重量％の範囲から選択すること
ができる。

【００１４】磁性を有しない着色体粒子の好ましい平均
粒径は、０．０１〜１０μｍ、より好ましくは０．１〜
０．５μｍ、さらに好ましくは０．２〜０．４μｍであ
る。平均粒径が０．０１μｍ未満では、着色粒子の製造
が困難で、１０μｍを越えると、着色粒子の沈降速度が
大きくなるので、溶液中の分散性が悪くなり感度が低下
する。

【００１５】本発明で用いる磁性を有する粒子は、磁性
を有しない着色粒子を磁性化してもよく、また前記磁性
を有しない着色粒子で述べた着色前の架橋重合体粒子、
有機高分子物質又は無機微粉末を磁性化してもよい。粒
子の磁性化部位については、表層でも内部でも、また粒
子全体が磁性化されていてもよい。

【００１６】磁性化するには、例えば、金属鉄、Ｆｅ_３
Ｏ_４，γ−Ｆｅ_２Ｏ_３，Ｃｏ−γ−Ｆｅ_２Ｏ_３，（Ｎｉ
ＣｕＺｎ）Ｏ・（ＣｕＺｎ）Ｏ・Ｆｅ_２Ｏ_３，（ＭｎＺ
ｎ）Ｏ・Ｆｅ_２Ｏ_３，（ＮｉＺｎ）Ｏ・Ｆｅ_２Ｏ_３，Ｓ
ｒＯ・６Ｆｅ_２Ｏ_３，ＢａＯ・６Ｆｅ_２Ｏ_３ さらにＳ
ｉＯ_２で被覆したＦｅ_３Ｏ_４（粒径２００オングストロ
ーム） ［Ｅｎｚｙｍｅ Ｍｉｃｒｏｂ．Ｔｅｃｈｎｏ
ｌ．，ｖｏ１．２，ｐ２−１０（１９８０）参照］等の
各種フェライトを３〜１００％、好ましくは３０〜５０
％含有するように調整されたものを用いる。前記の磁性
を有する粒子として本出願人による特開昭６３−６５０
８５号公報の方法によって得られたものを用いることが
できる。

【００１７】磁性を有する粒子の好ましい平均粒径は、
０．００１〜１０μｍ、より好ましくは０．１〜０．５
μｍである。平均粒径が０．０１μｍ未満では、集磁不
良となる。平均粒径が１０μｍを越えると表面積が大き
くなり、分散不良となり測定感度が低下する。

【００１８】磁性を有する粒子及び磁性を有しない着色
粒子の好ましい比重は、１．０〜３．０、より好ましく
は１．０〜２．０である。比重が１．０未満では、水溶
液（比重１．０５位）中で、粒子が浮かび上がり集磁し
にくく、３．０を越えると粒子の沈降が速すぎて分散性
が低下し感度が低下する。

【００１９】磁性を有する粒子と磁性を有しない着色粒
子の好ましい粒径比率は、磁性を有する粒子／磁性を有
しない着色粒子＝４／１〜１／４で、より好ましくは３
／１〜１／３、さらに好ましくは２／１〜１／２であ
る。上記好ましい範囲から外れた場合には、大きい方の
粒子が沈殿することにより、溶液中での大きい方の粒子
の分散性が低下し、測定感度の低下をもたらす。

【００２０】磁性を有する粒子と磁性を有しない着色粒
子の好ましい粒子濃度比率は、磁性を有する粒子／磁性
を有しない着色粒子＝１／１〜１０／１より好ましく
は、４／１〜１０／１、さらに好ましくは５／１〜８／
１である。磁性を有する粒子と磁性を有しない着色粒子
の粒子濃度比率が１／１より小さい（磁性を有しない着
色粒子の濃度が多い）と、着色粒子同志の凝集又は遊離
の着色粒子が多くなり感度が低下し、１０／１より大き
い（磁性を有する粒子の濃度が多い）と着色粒子が不足
し精度が低下する。

【００２１】磁性を有する粒子及び磁性を有しない着色
粒子に抗体又は抗原を担持させる方法には、物理吸着法
と共有結合法と包括法がある。物理吸着法は、磁性を有
する粒子及び磁性を有しない着色粒子と、抗体又は抗原
の間に働く疎水性相互作用により固定化する方法等であ
り、磁性を有する粒子及び磁性有しない着色粒子は、抗
原溶液又は抗体溶液に浸漬するだけで、抗体又は抗原等
のタンパク質を吸着する。共有結合法は、磁性を有する
粒子及び磁性を有しない着色粒子に、アミノ基やカルボ
キシル基のような官能基が表面についた粒子で、グルタ
ルアルデヒド等の架橋剤や水溶性カルボジイミドのよう
な活性剤に、抗原又は抗体を共有結合させる方法であ
る。包括法は、物理吸着法と共有結合法の中間方法で、
抗原又は抗体をＨＥＭＡ（Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌｍ
ｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ）やＨＰＭＡ（Ｈｙｄｒｏｘｙ
ｐｒｏｐｙｌ ｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ）のようなモ
ノマーと混合し、γ線等で重合させて結合する方法であ
る。

【００２２】本発明で測定する生体物質とは、血液、リ
ンパ液、尿、だ液等の体液内の抗体又は抗原であり、ま
たは体液内に侵入した微生物、ウイルスやその成分であ
り、その種類は、被測定対象である生体内物質の特定の
抗原又は抗体に対して抗体又は抗原の関係にあるもので
あり、分析液中の抗原又は抗体に応じて選択される。か
かる抗原又は抗体の例としては、以下のもの等を挙げる
ことができる。抗原類：ＩｇＧ，ＩｇＡ，ＩｇＭ，Ｉｇ
Ｅ，アルブミン、ｈＣＧ，ＡＦＰ，カルジオライビン抗
原、血液型物質、コンカナバリンＡ，ＤＮＡ，プロスタ
グランジン、ＣＲＰ，ＨＢｓ，ヒト成長ホルモン、ステ
ロイドホルモン、ＣＥＡ，ＩｇＤ等。抗体類：抗アルブ
ミン抗体、抗ｈＣＧ抗体、抗ＩｇＧ抗体、抗ＩｇＡ抗
体、抗ＩｇＭ抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩｇＤ抗体、抗Ａ
ＦＰ抗体、抗ＤＮＡ抗体、抗プロスタグランジン抗体、
抗ヒト凝固ファクター抗体、抗ＣＲＰ抗体、抗ＨＢｓ抗
体、抗ヒト成長ホルモン抗体、抗ステロイドホルモン抗
体等、及びこれらをむ血清、並びにモノクロナール抗体
等。

【００２３】本発明では、吸光度や透過率を測定する際
に磁性を有する粒子を分析容器の分析液収容部側方に集
磁させ、磁力をかけた状態で分析することにより、分光
光度計の光源−検出器の光路から磁性を有する粒子によ
る妨害を極めて効率的に排除することができる。

【００２４】本発明では、さらに効率を上げたるために
は、分析容器の分析液収容底部はＶ字型やＵ字型ではな
く、平底状が好ましい。磁石の配設は、好ましくは分析
容器の分析液収容部の回り４方向に等間隔に磁力がかる
ように磁石を支持プレートに配置した場合だが、それら
に限定されず、支持体に配置しただけでなく、磁性を有
する粒子が、分析容器の分析液収納部側壁に集磁させら
れる配置であれば限定されず、少なくとも１個の磁石の
個数で達成できる。また、分析液収容部周囲の全周に磁
石を配設してもよい。また、磁石の形状も丸棒状、角
状、リング状等の任意の形状を選択できる。

【００２５】磁石は、永久磁石でも電磁石でもよく、永
久磁石の場合は、集磁が必要なときに磁石を配置した支
持プレートを分析容器に近接させることで集磁が可能と
なり、電磁石の場合には、必要な際に電気的に磁力を発
生させることで集磁が可能となる。永久磁石を用いるよ
り効率的な好ましい方法は、例えば９６の微小ホール
（ウェル）有するプラスチックプレート（市販品として
グライナー社製の「マイクロプレート」を使用できる）
を用意し、これを分析容器として用い、マイクロプレー
トの周縁下部突起部の内側に、はまるように磁石支持プ
レートをマイクロプレートにかぶせる状態で用いる。ゴ
ム磁石製シートを用いることもできる。支持プレートに
磁石を配設させる方法は、分析液収容部の側方部に磁力
がかかるように、収容部に相当する部分の４方向に、好
ましくは等間隔になるよう磁石を固定すればよい。

【００２６】本発明では、吸光度や透過率を分光光度計
により透過スペクトル差の最大波長で測定するが、その
測定波長は、白色スペクトルの吸収波長に対して、粒子
を着色化することにより、３５０ｎｍ以上における透過
スペクトル差の最大となる波長を選択する。

【００２７】本発明による生体内物質の測定方法は、こ
れまで定量測定を主体に述べてきたが、定性測定に適用
する事もできる。例えば、Ｃｕｔ ｏｆｆ値をＣＲＰで
は、０．５ｍｇ／ｄｌに設定し、その時の吸光度を１．
０近傍になるように、粒子の量、緩衝液び緩衝液中の塩
濃度、界面活性剤の濃度等を調製する。Ｃｕｔ ｏｆｆ
値を境として、透過スペクトル差の最大となる波長を用
いて、吸光度が１．０を越えるものを陽性、越えないも
のを陰性として判定することによって定性測定を行う。

【００２８】

【実施例】以下、本発明を実施例に基づいて、さらに具
体的に説明するが、本発明の技術範囲をこれらの実施例
に限定すべきでないことは言うまでもない。

【００２９】（製造例１） 重合性色素の製造 撹拌加熱装置、温度計、窒素導入管、冷却管及びデカン
ターを備えた反応容器に赤色色素（化１の構造式）１０
０ｇと

【００３０】

【化１】

【００３１】１，４−ジオキサン１３００ｇとトリエチ
ルアミン５８．２２ｇを仕込み、塩化メタクリロイル３
９．５７ｇと１，４−ジオキサン１６０ｇとを室温で６
０分間かけて滴下した。反応は薄層クロマトグラフによ
って追跡し、反応終了後メタノール１０ミリリットルを
添加して未反応の塩化メタクリロイルを消費した。反応
混合物を濾別する事により生成した４級アンモニウム塩
を除去し、溶液はエバポレーションにより脱溶剤した。
残存固形物はメタノールで再結晶し、これを濾別乾燥す
ることにより化２の構造式で示される重合性色素を得
た。構造はＩＲ，ＮＭＲ，マススペクトル、液体クロマ
トグラムにより確認された。収率は９２％であった。吸
収スペクトルによる吸収波長ピークは５１７ｎｍであっ
た。

【００３２】

【化２】

【００３３】 （製造例２） 磁性を有しない着色粒子の製造 蒸留水 １１００ｇ スチレンスルホン酸ソーダ ０．２８ｇ ４，４′−アゾビス（４シアノ窒素酸） ３．７５ｇ ジメチルエターノルアミン ２．４０ｇ を反応器内に仕込み、温度８３℃にセットし、ここに、 スチレン ２５０ｇ 製造例１の重合性色素 １０ｇ の混合液を滴下ロートから６０分かけて滴下し、合計６
時間重合した。走査型電顕で粒子径を測定したところ平
均粒子径０．２μｍであった。この粒子の吸収スペクト
ルを測定したところ、吸収波長ピークは５１７ｎｍであ
った。

【００３４】 （製造例３）磁性を有しない粒子の製造（白色：比較例
用） 製造例１の重合性色素を用いない以外は製造例２と同様
に行った。走査型電顕で粒子径測定したところ平均粒子
０．２μｍであった。

【００３５】（製造例４） 磁性を有する粒子の製造 反応容器にイオン交換水０．９リットルを仕込んだ。こ
れに予め製造例２の粒子１０ｇを分散したイオン交換水
１００ｇを投入し、窒素ガスにり脱酸素を行った。充分
脱酸素を行った後、ＦｅＣｌ_２１０ｇ投入し０．１Ｎ−
ＮａＯＨでｐＨ６．９に調製した。この後、容器内の温
度を７０℃に加温した。このものに予め、脱酸素イオン
交換水１リットルに亜硝酸ナトリウム２０ｇ溶解した溶
液を、５ミリリットル／分の割合で供給した。この間ｐ
Ｈは一定に維持し、約２０分後、磁性を有する粒子が生
成された。副生マグネタイト粒子は殆ど生じなかった。
これを瀘過、水洗し磁性を有する粒子を得た。得られた
粒子は、黒色をしていた。

【００３６】実施例１ 抗ＣＲＰを担持した磁性を有しない着色粒子（以下カラ
ーラテックス粒子という）の調製法 製造例２で作成した粒子は、不揮発成分５．２％（Ｗ／
Ｗ）、平均粒径０．２μｍの磁性を有しない着色粒子
（製造例２）を最終濃度１％となるように１ミリリット
ルの２０ｍＭグリシン緩衝液（ｐＨ８．０）中に分散さ
せる。さらに抗ヒトＣＲＰヤギ由来抗（ＡＴＡＢ社製）
０．２５ｍｇを加え攪拌後、冷蔵庫中にて３日間担持
（感作）させる。その後、遠心分離（１２０００ｒｐｍ
×２０ｍｉｎ）により上清を取り除き分離されたカラー
ラテックス粒子を１ミリリットル１の０．１％牛血清ア
ルブミン／２０ｍＭグリシン緩衝液（ｐＨ８．０）に再
分散させこの操作を３回繰り返し、粒子濃度を１％に調
製する。

【００３７】抗ＣＲＰを担持した磁性を有する粒子（以
下、磁性粒子という）の調製法 不揮発成分１３．２％（Ｗ／Ｗ）平均粒径０．２μｍの
磁性を有する粒子（製造例４）を最終濃度１％となるよ
うに１ミリリットルの２０ｍＭグリシン緩衝液（ｐＨ
８．０）中に分散させる。さらに抗ヒトＣＲＰヤギ由来
抗体（ＡＴＡＢ社製）０．２５ｍｇを加え攪拌後冷蔵庫
中にて３日間担持（感作）させる。その後、磁気分離装
置（ＣＯＲＮＩＮＧ社製）を用い上清を取り除き分離さ
れた磁性粒子を１ミリリットルの０１．％牛血清アルブ
ミン／２０ｍＭグリシン緩衝液（ｐＨ８．０）に再分散
させこの操作を２回繰り返す。３回目は２５０マイクロ
リットルの０．１％牛血清アルブミン／２０ｍＭグリシ
ン緩衝液（ｐＨ８．０）再分散させ粒子濃度を４％に調
製する。

【００３８】測定波長の選択 カラーラテックス粒子の吸収波長を波長スキャンをする
ことにより検知できるが、本実施例１の赤色の場合は、
吸収波長に基づき５１７ｎｍを測定波長とする。

【００３９】操作方法 表１の組成に示すようにＣＲＰ抗体を感作した１％のカ
ラーラテックス粒子とＣＲＰ抗体を感作した４％の磁性
粒子を１：１の割合で混合しこれをラテックス−磁性粒
子調製試薬とする。ＣＲＰ標準品（２５．３μｇ／マイ
クロリットル、ＡＴＡＢ社製）をＣＲＰの含まれていな
い血清で２倍希釈した系列を作製しこれ検体とする。９
６穴マイクロプレート（平底）に検体１００マイクロリ
ットル及びラテックス−磁性粒子調整試薬１００マイク
ロリットルを加え混合し３０分室温で反応させる。次に
永久磁石をマイクロプレートのウェル側面外部にあて、
磁性粒子とカラーラテックス粒子の凝集塊及び未反応の
磁性粒子を集磁させる。そして残存するカラーラテック
ス粒子の濃度をマイクロプレートリーダー（東ソー
（株）製ＭＰＲ４ｉ）により波長５１７ｎｍでその吸光
度を測定した。吸光度とＣＲＰ濃度の結果を表２に示
す。

【００４０】なお計算式を下記に示す。 吸光度＝抗原濃度零の吸光度（Ｂｌａｎｋ）− 抗原濃
度における吸光度

【００４１】比較例１ 実施例１のカラーラテックスを製造例３に変えた以外は
実施例１と同様に実施した。

【００４２】実施例２〜８，比較例２〜６ 表１に示す濃度比率（使用量）、粒径のものを用いた以
外は実施例１と同様に測定した。

【００４３】

【００４４】

【００４５】（製造例５） 表層に顔料を担持した着色
粒子の製造 温度計、攪拌器、二本の滴下ロート及び窒素導入管を具
備した１リットルの５つ口フラスコにキシレン１５０ｇ
及び酢酸ブチル２００ｇを仕込み、加温して液を１０５
℃に保った。次にスチレン９２ｇ，メチルメタクリレー
ト１４０ｇ，ｎ−ブチルアクリレート２０ｇ，エチルヘ
キシルメタクリレート１１６ｇ，及び無水イタコン酸３
２ｇを秤取して滴下ロートに仕込み、ｔ−ブチルパーオ
キシ−２−エチルヘキサナート６ｇ及びキシレン５０ｇ
秤取をし、別の滴下ロートに仕込んだ。加温攪拌しなが
ら、２つの滴下ロートの内容物をフラスコに３時間かけ
て滴下し、その後、同温度で２時間攪拌した。さらに同
温度でステアリルミン３８．５ｇとジメチルエタノール
アミン５０．８ｇを順次フラスコに添加し、１時間攪拌
することにより数平均分子量８，０００の両性イオン性
共重合体の不揮発分５１．５％ワニスを得た。このよう
にして得られたワニスに、パリオゲンレッド３９１０
（ＢＡＳＦ社製）４４ｇと酢酸ブチル９６０ｇとｎ−ブ
タノール３８４ｇとスチールビーズ１０００ｃｃ仕込
み、レッドデビルを用いて粗粒が５μｍ以下の赤色顔料
ペーストを作成した。上記で得た赤色顔料ペースト１５
ｇをスチレン４０ｇ，メチルメタクリレート１５ｇ，ｎ
−ブチルアクリレート１５ｇ及びエチレングリコールジ
メタクリレート３０ｇに均一分散した溶液と、２．２−
アゾビス（２．４−ジメチルバレロニトリル）１ｇとを
ビーカーに秤取し、攪拌して均一した後、ステンレスビ
ーカー中の脱イオン水４００ｇ中に高速攪拌しながら添
加し、懸濁液を製造した。この懸濁液を攪拌機、冷却
器、温度制御装置及び窒素導入管を具備した０．５リッ
トル反応容器に入れ、攪拌下３０分間で６０℃まで加熱
し、この温度で６時間にわたり重合した。得られた分散
液の不揮発分は２２％であり、これを濾過、乾燥して粒
子径の中心が０．５μｍにある粒子内部が架橋された着
色粒子を得た。

【００４６】実施例９ 実施例７の粒子カラーラテックスの変わりに製造例５の
着色粒子を用いた以外は実施例７と同様に行った。結果
を、表２に示した。

【００４７】

【発明の効果】本発明によれば、反応性のよい磁性を有
しない着色粒子と磁性を有する粒子に各々抗体あるいは
抗原を結合させることにより、従来よりも短時間で目的
の測定物質が定量出来るので、臨床診断薬として人手あ
るいは時間の節約効果がある。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 中村 壽臣 東京都品川区南品川４丁目１番15号 日本 ペイント株式会社東京事業所内 (72)発明者 中塚 徹 大阪府寝屋川市池田中町19番17号 日本ペ イント株式会社寝屋川事業所内

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記（１）〜（４）の工程を、順次経るこ
   とを特徴とする抗原・抗体反応による生体内物質の測定
   方法。 （１）磁性を有する粒子と磁性を有しない着色粒子に、
   抗体又は抗原を担持させた混合粒子に、前記混合粒子の
   抗体と生体内物質中の抗原、又は前記混合粒子の抗原と
   生体内物質中の抗体を反応させる工程 （２）前記反応混合物に、磁場を付与する工程 （３）集磁されない着色粒子の量を、３５０ｎｍ以上
   で、透過スペクトル差の最大波長で測定し、生体内物質
   中の抗原又は抗体を、定性又は定量する工程