JPS6041494A - 酵素法リン脂質一級アルコ−ル誘導体の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、酵糸法によるリン脂・買−級アルコール紡導
体の製法に関し、ｖＬ来酵余法Ｖこよって（ｑ造できな
いとされ一１＝いンこリン脂１つ一πメアルコール肪ａ
ｔｋを攬も−してムいｉ＋、Ｑｌ州のリンカｉｒ　’ｄ
、−：：八Ｃアルへ−ルｄ廊体の製造を可能としたけ系
法リンｍけよ−ル文アルコール誘導体の製法に閑する。

史ｋｃ評しくは。

従来酵素法で使用されたキャベツ出来のホスホリパーゼ
Ｄ（全適温度４０℃以下、至適ｐ　ｉｌ　５．４〜５６
）とは異なって、至適ｌ錆度６０〜７０℃、至適ｐＨ７
付近のホスホリパーゼＤＭのイア在下で、リン脂質と一
級アルコールとを反応させるリン脂質−級アルコール誘
尋体の製法に関する。

尚、本発明に於て、リンカ１イ”崖−６Ｉジアルコール
誘尋休とは、出発物質であるリン脂質のリンｌｄ構造部
分と該リン脂質の（塩基もしくは）アルコール＋Ｊ造部
分とのエステル結合を、ホスホリパーゼＤＭの作用で加
水分解すると同９ｖこ、上記反応に用いる一級アルコー
ルへ転移させて訪導した、出発物質とは異なる新しいリ
ン脂質を意味する。

ｔ［１に１本発明は、下記式（１） ％式％（１） 但し式中、Ａは下記（１）又は（１１）Ｃ１ｉ、−１１
１ＣＨ，−１で。

１ を示し、ここで、ノＬＩ　及びＩｔ２１ｒＫ共に一〇　
−ＣＯＲ，□であるか、もしくは共に−ｏ　−ｇ　、、
であるか、もしくは式（ｉＨｃおいてＲＩとＲ１は１１
〜１９の叔を示す〕を衣、１つし、上記に於て、Ｒ１，
及びＲ１，は凹−でも兵っていてもよく、夫々−ｃｌ−
ｅ、１の飽和もしくは不飽和の脂肪族炭化水系７・ｋを
不し、 Ｂは−（ＣＨ，）、Ｎ　（ＣＨ，）３、−（Ｃ＃、　）
、Ｎｌｉ、　。

−ＣＨ２ＣＨＣＮＨ，）ＣＯＯ１ｉ、　−Ｃノミ、Ｃノ
ミ、ｌノ１（ｃｔｉ、）。

−Ｃ１ｉ、Ｃノミ、Ｎ　（ＵＨ，）、、　−Ｃノミ、Ｃ
ｌ１ＯｉノＣｉｉ、ＯＢ　もしくに−（ＣＢ、−Ｈ〔こ
こで、フンＬｌｄ１〜５の数を示す〕を示す。

で表わされるリン脂質と、下記式（ＩＩ）Ｒ−０１１・
・・　（Ｉｔ） 但し式中、Ｉｔは下記ｉｌｌ〜（３）よりなる群からえ
らはれた負を示す、 ｉｌｌ　Ｃ６（ただし、ヘキサノール全除く）〜Ｃ２６
の妃和もしくは不飽和のｌ１ｒ−Ｉ“肪族又は芳σ族炭
化水系残基、ここで該炭化水素残基はハロゲン、アミン
、アセチル及び水倣基より選ばれｆｃ＋ぽ次基で１帽災
さｆｉ、ていてもよい、 又は 分子内にエーテル、エステル及びアミド結合よりなる群
からえらばれた結合を荀する上記炭化水系残基、 （２）　プレグナン糸ステロイド化合物残基。

（３）　ガラクトノ−γ−ラクトン、Ｎ（２−ヒドロキ
シエチル）フタルイミド、２−（３−インドール）エタ
ノール＋　２−（２−ヒドロキシエチル）ビリヅン、己
′リドキシン、Ｎ（２−ヒドロキシエチル）七ルホリン
、５−ヒドロキシメチルシトシン、シチヅン、ウリジン
、アラピノシチヅン、ナアミン％　２−（２−ヒドロキ
シエチル）ビベラヅン、アデノシン、グアノシン及びザ
イクロシチヅンより成る群〃・らえらばれ／こ俵素項化
合物ム〈羞、で茨わｉ　＃’１．る一越アルコールとを
、ホスホリ・ｅ−ゼＤＭの存在下に反応させることを特
徴とする下記式（ｎｌ） １ Ａ−Ｑ−Ｐ−０−ノ＜・・−（ｍ） Ｈ 但し式中、Ａ及び１７は上ｉＬ　したと凹成でめる、で
表わされるリン脂質−法アルコールｕ　２１４体の製法
に関する。

従来、ホスホリパーゼＤが、リン脂質たとえばホスファ
チジルコリンのコリン塩基−リン蔽エステルを加水分解
し、遊離塩基とホスファチジンばを生ずる反応を触媒す
ることが知られている［Ｍ。

Ｋａｔｅｓ　Ｃａｎ、Ｊ、Ｈｉｏｃｈｅｍ、Ｐｈ１１ｓ
ｉｏ１．　３２５７１（１９５４）、ｌ。

更に、リン月胃質たとえばレシチンとエチルアルコール
とをホスホリパーゼＤの存在下に反応させると、リン脂
苗のリン酸４１ケ造部分と繊リン脂質のアルコール構造
部分とのエステル粘付が加水分解されると同時にホスフ
ァチジル基転移作用により、ホスファチジルエタノール
を生成することが報告されている［　Ｄａｕｓｔｔｏｎ
＋　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｔ、、　１０２　。

２０５（１９６５）］　；〔Ｙａｎｇ；　Ｊ、Ｂｉａｓ
。

Ｃ）ＬｇＲ、２４２、４７７（１９６７）　）　。

上述のようなホスホリパーゼＤのホスファチジル基転移
作用が知られて以来、この分野にあ・けるＱＩｆ究が２
＾められ、英画待Ｊト煮１．５８１．８１０　（対応西
ドイツ国公開Ａ２７１７５４７）の従来がり：ｕられて
いる。この提木によｉｌ、ば、この提木の一般式で示さ
れたリンカｔＴ　４Ｍと、水１ゾ嬶、ハロゲン、アミン
その池の１４裳基でさ、快でれていてもよいＣ５までの
直鎖もしくは分枝のアルキル柄をイ］する一級アルコー
ルとの前記キャベツ由来のホスホリパーゼＤの酵糸作用
を利用した一緻アルコール転移反応について開示されて
いる。そして、祷反応ｔま。

５を超える炭素原子葡含有しない一級アルコールでのみ
起り、若し、５を超える炭素ノ星子分ち“イｊする該ア
ルコールの鵬＠には、反応の主生１ｍ物は’ｘＵ応する
ホスファチジンばでのると記載さ２１．ている。

更に、該提案にはアルコール成分の選択は、上記の安水
を満した一級アルコールである眠シとくべつな制約のな
いことも記載されている。

又、上記提案の発明者等であるＳ、Ｋｏυαｔｃｈ、ｇ
υ及０：Ｈ，Ｅｉｂｌ等は、Ａｄｖ、Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ
、　Ｂｉｏｌ、　。

Ｖｏｌ、１０１　、２２１　（１９７８）しこ於て、ホ
スホリパーゼＤの１孝素作用を利用１したー、Ｗｚアル
コール転移反応について、Ｃ？　−Ｃ１ｏのアルカノー
ルでは転移反応〃泳３めらｒＬないがＧ６のヘキサノー
ルについては２０％の転移反応が生じ７でと報告してい
る。一方、ノＩ′ｏｋｈｉｍｏｖ、　Ｍ、　Ｍｋｉ、Ｕ
’ｚｂ、　Ｂｉｏｌ。

Ｚｈ、、Ｖｏｌ、３．６−９（１９７９）に於て、Ｃ６
以上のアルコール例えばＣ０のヘキサノールについては
転移反応は起らなかったと報告している。

本発明者等は、従来公知のキャベツ出来ホスホ１ルぞ−
ゼＤとは、その至適温度、至適ｐＨ等で異なるホスホリ
・ξ−ゼＤ生産能を有する微生物の存在を発見して、既
に、舶、顧昭５６−１６１０７６号、％願昭５６−１６
３４７５号に提案した。

更に研究を遅めた結果、該ホスホリ・ぐ−ゼＤ生厘性做
生物の生産する醐系汀、Ｃ６（たたし、ヘキサノールを
除く）以上の一家アルコールケ包宮して、従来、リン脂
□＜ｔｔ　−＋ヒアルコール１．）３当・１体會フレ成
できないとされていた及びν［米全＜６及されたことの
ない前記ｆｉｌ　＋　＋２１及び（３）よりなる１１１
ミからえらはｔＬ　７で一層アルコールとの転移反応を
口珪ヒとする酵来的メリ（媒どｇ　Ｊ、ｉ’ｌを示すと
いう、ζ１言くべさ早実奮発見した。

本狛明イ「等のイｌ）１死に、ｌ：れｌＪニー　リンｔ
（吃１１↓と７ｈとえばＣ＋ｏ　；Ｉアルコールである
ゲラニオールとの曲におけるリン脂’ｔｉ　Ｗｉアルコ
ール１．８４体の形成を１強ａｊシする不発明に於て：
ｊＪ「７こにホスホリパーゼＤＭと呼称する酵素が存在
し、このホスホリパーゼＤＭの存在下に、前記式（１）
で表わされるリン脂質と前記式（ｎ）の−んタアルコー
ルとを反応さぜることにより、従来製造できないと云わ
れていたリン脂質−秋アルコールーＢ、ｖチ体を包？し
て新しい訪尋体がｊＭ造できることが発見された。

↓す１＜て、煩雑且つ不利益な化学的／６成手段を・勘
することなしに、温和且つ容易な条汗及び手段で、副反
応を伴うおそれもなしに、酵巣法によって新しいリン脂
質−級アルコール肪棉体全好収皐で製造できることがわ
かった。

従って、本兄明の目的は新しい酵系法すン脂買−級アル
コールがｊ導体の製法を提供するにある。

不兄明の上記目的及び更に多くの・也の１Ｅ１１］′シ
ならびに利点仁↓、以下の記載から一層明らかとなるで
あろう。

本発明方法で第１」用する原料リン脂ｊ可は下記式（１
）％式％ （１） 但し式中、Ａは下記（１）又は（１１）ＣＨ２−Ｒ，Ｃ
１１２−Ｒ。

１ Ｃｉｉ２−　Ｃ１ｉ２−１４ 金示し、ここで、佑及び１Ｃ２Ｉｌ−を共に一〇−ＣＵ
Ｒ，，であるか、もしくは共に一〇−Ｒ，２であるか、
もしくは式い）にｂ・いてｌヒ、とＲ２は１１〜１９の
数を示す］を表わし、上記に於て、Ｉ＜、１及びＲ１２
は同一でもシ（つていてもよく、夫々、Ｃ７〜Ｃ２１の
飽和もしくは不飽イＩＪや脂肪族炭化水系赫を示し、 Ｂ　ｌ−ｊ：（Ｃ１１ｔ　）２Ｎ　（ＣＪｉｍ　）ｓ、
−（Ｃ＃、　’）、＃＃２、−Ｃ１１，Ｃ１１（Ｎ１１
２）Ｃ００１１、−Ｃ，／１２Ｃ１ｉ２Ｎ１ノ（ＣＩＪ
３）、−Ｃ１ｉ、ＣＨ２Ｎ（ＣＢ、）、　−ＣＩＪ２０
°ｌノ０１ノＣ；ｌｉ、０１１　もしくは−（Ｃ１）、
％Ｊ−１ｃここで、ｍｕ１〜５の数を示す〕を示す。

上記式（１）原料リン脂質に公知化金物であって、市場
でも入手可能であり、それ自体公知の方／２！：に工っ
て天然物より抽出採取又は合成することができる。例え
ば、動植物組織から公知の手段で抽出して得られるレシ
チン、ケファリン、ホスファチノルセリン、ホスファチ
ジル−Ｎ−メチルエタノールアミン、ホスファチジル−
Ｎ、Ｎ−ヅメチルエタノールアミン、ホスファチジルグ
リセロール、ホスファチジン酸アルキルエステル等の単
独或いＩ７１．混合物をそのｔま若しくは梢製して用い
ることができるし、β型すンカ＝Ｗ−アルキルエーテル
＆Ｃに：″：）てその構造の一部もしくは全部を化学合
成して利用することができる。

本発明方法に於て、上記式（Ｉ）、原料リン脂質とホス
ホリパーゼＤＭの存在下に反応せしめる一部アルコール
は，下記式（…）で、×わされる。

ＩＩ　−　Ｏ　Ｂ　・・・　（ＩＩ） １旦し式中、Ｒは下，氾ｔ１ｊ〜（３）よりなる曲から
えしＵ：れた如，ケントず、 ＋１１　Ｃ６（ただし、ヘキサノールｔ１りｊ、く）〜
基はハロク“ン、アミン、アセチル及び水畝基より選ば
ｊした向恨！、−で１４Ｊ，換部れで“−Ｃもよい、 又に 分子内にエーテル−エステル及びアミド結合より女る（
＋ｉ”ｙＪ・らえらば才）、７で債せを有する上口炭化
水系残基、 （２）　グレダナン系ステロイド化ｆ−ｉ物残基。

（３）　ガラクトノ−γーラクトン、Ｎ（２−ヒドロキ
シエチル）フタルイミド、２− （３−インドール）エタノール、２− （２−ヒドロキシエチル）ピリジノ、ピリドギシン，Ｎ
Ｃ２ーヒドロキシエチル）モルホリン、５−ヒドロキシ
メチルシトシン、シチヅン，ウリヅン，アラビノシチソ
ン，チアミン、２−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジ
ン、アデノシン、グアノシン及びザイ．クロシチノンよ
り成る群からえらばれた倭素４ａｉｉ．合物残基。

このような式（ＩＩ）−級アルコールの具体世１として
は、下記のような一部アルコールを例示することができ
る。

上記（１）のｔｊＰ　ＶＣ　ＰＡする一部アルコールの
例としては、Ｑ　肋７Ｍアルコールのうち１−、３タサ
かをもたがいものとしては１−ヘプタツール（Ｃ，）、
１−オクタツールＣＣ，）、２−エチル−１−ヘキサノ
ールＣＣ，　）、１−ノナノール（Ｃ，）、１−デカノ
ール（ＣＩＯ）、１−ウンデカノール（に’ｌ，）、１
−ドデカノール（Ｃ，２）、１−テトラデカノールＣＣ
，，）、１−ヘキサデカノール（Ｃ１６）、１−オクタ
デカノール（（：’，８）、】−ドデカノール（Ｃ２ｏ
）、■ーエイコザノール（Ｃｕ）、１−へキザコザノー
ル（（、’，。）、グリセロール（Ｇ，ｏ）。

シトロネロール（Ｃ，。）、ファルネソールＣＣ，，）
。

フィトール（Ｃ２ｏ）＆ど；ψ１曲アルコールとしては
１．６−ヘキサンジオールｌ；，）、１，２。

ｈ−ヘキサントリオール（Ｃ，）、ンルビトールマンニ
トール（Ｇ６　）、２−７＋−ブチル−２−エチル−１
．３−プロンぐンヅオール（Ｃ，）、２−エチル−１，
３−ヘキサンジオール（Ｃ８　）、■。

１、１−トリス（ヒドロキシメチル）７″ロパン（Ｃ６
　）、３，３−ビス（ヒドロ二Ｖジメチル）へブタン（
Ｃ９　）、１，ｌＯ−デカン・ジオール（　Ｃ，。）、
１ｔ１２−ドデカンジオール（（、’，２）など；アミ
ノ基をもつものとしては６−アミノ−１−ヘキサノール
（Ｃ０）、スフィンゴシン（Ｃ，８）など；カルｙＪｆ
’　キシル糸をもつものとして、１Ｇ−ヒドロキシヘキ
ザデカンα（（、’、６）など；エステル結合を有する
ものとしてモノラウリンＣＣ，，）、モノオレイン（Ｃ
２１）、１．２−ヅ５つ’）ンｃｃ、）、１．２−ジス
テアリン（Ｃ，、）、メタクリル「技２−ヒドロキシエ
チル（Ｃ０）　７Ｌど；アミド１ｉＨＥをイー１するも
のとしてバントテニルアルコール（ｏ、）。

パンテティン（Ｃ１りなど；エーテルイ・ｌ′ｆ１合ケ
イｉするものとしで、トリエチレングリコール（Ｃ６）
−ヅエチレングリコールモノプチルエーテル（Ｃ８）な
どが例示でき、又、芳香族アルコールではベンジルアル
コール（Ｃ，）−β−７エネチルアルコール（０））、
３−フェニル−１−プロパツール＜ｃ、）、ケイ皮アル
ゾール（（、’、）７２どｉ　’６：換示をもつものと
してはｐ−クロルペンヅルアルコール（Ｃｙ　）、ｐ−
７ミ／フエネチルアルコール（Ｃ８）、Ｎ−」−チル−
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ｍ、−トルイジン（Ｃ
，、）、１１−ヒドロキシエチルアニリン（（、’８　
）、Ｎ−（２−シアノエチル）’−＃−（２−ヒドロキ
シエチル）−アニリン（Ｃ，、）−Ｎ−フェニルジエタ
ノールアミン（Ｃ１０）、アニスアルコール（（、’８
　）、ｔ　、４−ジ（２−ヒトロチジェトキシ）ベンゼ
ン（に、。）、エチレングリコールモノフェニルエーテ
ル（ｃ、）ｓメフエネシンＣＣ；、ｏ）、２−ヒドロギ
シエチルサリチル］設（Ｃ０）なと；多ハぐ化・舒！に
ジではＵ　、　０−ビス（２−ヒドロキシエチル）ザト
ラズロムビスフェノール（Ｃ１゜）％　２−ナフタリン
エタノール（Ｃ−１２）　＆とが例示でき、更に、脂″
振式アルコールではレチノールＣＣ２０’）−１，４−
ジヒドロキシメチルシクロヘキサン（Ｃ６）、など分例
示することができる。

又、上記（２）の群に―する一極アルコールの例として
は、アルドステロン、コルチコステロン、コルチゾン、
デヒドロコルチコステロン、デオキシコルチコステロン
、ハイドロコルチゾン、フレドニゾロン、プレドニゾン
、テトラヒドロコルチゾール、デトラヒドロコルチゾン
、トリアムシノロンなどを例示することができる。

史に、上記（３）の群に属する一叙アルコールの例とし
ては、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）フタルイミド、２
−（３−インドール）エタノール、２−（２−ヒドロキ
シエチル）ビリリン、ピリドキシン、ピリドキサール、
ピリドキサミン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）モルホ
リン、５−ヒドロキシメチルシトシン、シチソン、ウリ
ジン、アラビノシチジン、アデノシン、グアノシン、サ
イクロシチソン、アデニンデオキシリデシド、シトシン
デオキシリ−ぐシト、グアニンデオキシリボシド、５−
ヒドロキシメチルウラシル、チミンデオキシリボシド、
ウラシルデオをシリボシド、イノシン、オロチジン、２
−（２−ヒト１］キシエチル）ビ°ペラジン、ナアミン
、トキンピ゛リミジンなどをセ１１示することができる
。

上記例示の如き式（Ｉｉ）−欽アルコールは、大然吻、
台１戊品いずれでもΔζｔＪ　ｌ：４できるが、１」的
とするールスアルコール以外のアルコールを含慣ないよ
うに予め適当な公知手段を用い４１’ｆ　製して第１」
用するのが好ましい。このようなＭ　ｉｉｉ！　生成の
ヤ（１としては、たとえば、蒸留、］：ｉ）結晶、アル
ミナ、シリカゲル。

、古性炭、イオン父換樹脂なとを用いブヒカラムクロマ
トグラフイー、博１−クロマトグラフィー及びこＪｌ、
らめ適当な組み合わせ、ｉ”＋９製手段を例示できる。

本発明方法によればｈＦＪ’ｌＪＢ旧７１１不の如き式
（１）リン脂質と上記・レリ示の如き式（Ｉｔ）−級ア
ルコールとをホスホリパーゼＤＡｉの仔仕下に反応させ
る。

この際利用するホスホリンぐ一ゼ／Ｊ　ＭとしてＶ↓、
６０〜ｑｏｒ（、、至適ｐＩＩ　７付近でのる点で公プ
」ホスホリパーゼＤと区、別できるホスホリパーゼＤＭ
生産国の生産するホスポリ・Ｃ−ゼ）Ｊ　Ａ４が例示で
きる。蒔ホスホ１ルぞ−ゼＤノ’Ｖｉ（ｄ、　Ｃｏｏ　
’”吹アルコールでするゲラニオールと式（１）リン脂
ノｈとの面におけるリンＨｉｆ質−級アルコール詩り１
体の形成を）１１９７％する点でも公知ホスポリ・ぐ−
ゼＤと区別できる。

このようなホスホリノンーゼＤＭ生産１４」の例として
は、同−出１．ＩＪ人の出願に６ミわる′狩ｉｉ：＋ｉ
昭５６−１６１０７６号に開示されたノカルディオプシ
スＣＮｏｃｏ、ｒｄｉｏｐｓｉｓ）　、；’、４Ｋ）６
４スルホスホ＋）ｓ−セＤＭ生産出たとえばノルカデイ
オゾシス属Ｎ。

７７９株ＣＦＥ　ＲＭ　−Ｐ　１６６１３３　〕−向一
出願人の出１廁１に係わる特１頭昭５６−１６３４７５
号に６１］示さノ１．たアクチノマデューラ（Ａｃｔ）
’、ｎ、ｏｎｔ、ｏ、ｄ１Ｌｒａ　）属に属するホスポ
リ・ぞ−ゼＤ　Ｍ夕ｂ　咳ＩＪＩＪ！　ｉζどえはアグ
チノマデューラへ１ｖ　０３６２体〔）’　Ｅ　１１ノ
１４−ｌノＡ６１３２］等を／、’ｔｉ　（Ｉｆ　、ｑ
ことかでさる。主適温度及び至：Ｌ１４７）１１の相違
と共に、・Ｉ３のいくつ力・の４目違、壱と共に、下掲
ノ；ＩＳ　１　ｉ：ぐに１本虻明力法で第１１川するホ
スホリパーゼ１）Ａ４と公知ホスポリ・ξ−七〇との酵
＝ｉ＝　’Ｉ　Ｌｌ’ジ註質のン襲異全ン１（シた。

公知ホスホリパーゼＤ４１−用いては得られなかったリ
ン脂質−級アルコール訪導体が、本蛇１３Ｉ」方法で形
成できる理由には、この酵素＋ｔ′：Ｊ＋！ｌ・＋Ｉ　
Ａ５反応に関与する公知ホスホソノ９−ゼＤと本発す」
方法で用いるホスホリパーゼＤＭとの上記の川き「ν歯
学的性質の差異がＩＡＩ与しているものと推６１１」さ
れる。勿ｈＩ＋、本発明方法はこのような作用の推測に
よって何等のｔｌｉｌｌ約もうけるものではない。

本発明方法で利用できるホスホリパーゼＤ　Ｍを生産す
る１１η記ホスホリパ一ゼＤＭ生産菌ノカルディオプシ
ス属Ｎ０７７９株［ト’　Ｅ　Ｉいｌ−ｒ’　Ｎ０１Ｇ
１３３］及びアクチノマデューラ属ＮＯ３６２株１１・
゛Ｉ引得４−１）　Ｎｏ、６１３２］の菌学的性状及び
それら寮生産するホスホリパーゼＤＭの力価測定法、理
化学的性質について以下に述べる。

／カルデイオプシス属Ｎ０７７９株［ＦＥＲＭ−ＰＮｏ
、６１３３］の菌学的性状ニー （、）形態 グルコ−又アスパラギン寒天、グリセリンアスパラギン
寒天、酵は麦芽寒天培地等では良好に、また澱粉無機塩
培地では中程度に生育して気菌糸の集落を着生する。

胞子を着生した菌叢の色は培地の種類、観察時期により
若干変化するが、おおむね白色ないし灰白色から明るい
灰色を呈する。

シュークロース硝酸塩寒天、栄養寒天、オートミール寒
天培地では気菌糸を着生しないか、貧弱にしか着生しな
い。

寒天培地上に生育させた本菌株を顕微鏡で観察すると、
気菌糸は０．５〜０．８μで直線状でゆるく波形又は屈
曲を混じえながら分枝をもって長く伸び、気菌糸全体は
数１０から１００ケ以」二のすべて胞子からなる連鎖に
よって形成されて（する。

胞子の大きさは０．５〜０．８Ｘ０．７Ｘ１，０μで、
はぼ短円筒形で大外さはやや不規則である。

塾生菌糸は中０．５〜０．８μで分枝をもって伸長し寒
天培地上ではかならずしも分断しないが、液体培養する
ことによりほとんどの場合Ａｌｌ＋かく分断する。

しｈ化遊走胞子、胞子のう、菌核等は形成されない。

（１〕）各種培地上での性状 以下に記載する実験方法は主としてイー・ビー拳シャー
リング（ＩｎＬ、Ｊ、５ｙｓｔ、ＢａｃＬｅｒｉｏｌ、
１６巻、３１３〜３４０．１９６６年）の方法にしたが
って行った。

色調は「色の標準」（財団法人日本色彩研究所、１９６
７１年）を用いて決定し色相名とともに括弧内に色相名
、彩度番号、明度番号の順に色相記号を記入した。

培養は２５°Ｃで行い、最も生育の旺盛な２〜：３週間
目の各培地」−における観察結果を第２表に示した。但
し＠２表中、生育項１］に記載した塾生菌糸表面の色は
胞子着生前の培養−週間１］における観察結果を示して
おり、胞子着生か早く塾生菌糸表面の色の判定困難な培
地については、記載していない。

■　− （ｃ）生理的性質 １　生育温度：５°Ｃ〜３０°Ｃド１ｊ近で生付し、２
０〜３０℃で最もよく生育する。

２ゼラチンの液化：液化しない（グルコース・ペプトン
・ゼラチン培地上、２５℃、３週間ｉＷ養）。

３　スターチの加水分解二分解する（スターチ寒天培地
」二、２５℃、３週間培養）。

４脱脂牛乳の凝固、ペプトン化：凝固、ペプトン化共に
せず（３０’Ｃ１３〜４週間培養）。

５　メラニン様色素の生成：ペプトンイースト鉄寒天、
チロシン寒天で生成する（２５℃、２〜４日間）。

（ｄ）炭素源の同化性（３０℃、１０〜１６目培芥）Ｌ
−アラピアース　−　シュークロース　−〇−キシロー
ス　−　イノシトール　−Ｉ）−グルコース　＋　Ｌ−
ラムノース　−Ｄ−７ラクトース　−　ラフイ７−ス　
−（ｅ）細胞の化学分析 本菌株のディアミ７ピメリン酸はメン型であり、ヒドロ
キシディアミノピメリン酸を含まない。細胞壁の糖組成
は、アラピアース、キシロース、マデュロース、ラムノ
ース等を右ぜず、ガラク）−ス、マンノース等を有する
。又本菌（朱は７カルドミフール酸を有しない。

・以上の分析結果にツｕｌてＢｅｒｓｅｙ’ｓ　Ｉｋ’
１ａｎｕａｌ　ｏｆＬｌ＋ｅ　Ｉ）ｅＬｅｒｍｉｏａｔ
ｉｖｅ　ＢｅｃＬｅｒｉｏｌｏｇｙ　ｆ５８版、６５７
頁〜６５８頁（１９７４年）や、レシエパリエ（１＋ｉ
ｅｒ、Ｊ　、　Ｓ　ｙｓｔｅｍ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、
　２０巻、藏１３５ｇ＜−４／＋　３頁、１９７０４’
−）、メイヤ（Ｉｎ１．、、Ｊ。

５ｙｓＬ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　２６巻、４．８７
　＠　−４，’：３３　頁１９７６年）らの分類法にし
たかって１−〇定すると、本菌は細胞壁類型（ｃｅｌｌ
　ｕ＋ａｌｌ　ｔｙｐｅ）ＩＩＩ型、糖組成類型（ｃｅ
ｌｌ　ｕ＋ａｌｌ　ｓｕｇａｒ　１＋ａＬｌｅｒｎ）Ｃ
型となる。

以」二本菌は、細胞壁類型がＩＩＩ、糖組成類型かＣで
あることか呟しシエバリエの分類法によれは゛ダソンビ
レイクイブのアクチアマチ゛ユーラ属、サーモアクチア
ミセス属、アクチ／ビイフイグス属、ゲオグーマトフイ
ラス属のいづれかに属する。

しかし本菌は、その形態において気菌糸のすべてが胞子
の長い連鎖から成り、基生菌糸を４１１１かく分断する
か、内生胞子、遊走胞子、胞子のうか見い出されないこ
とより、グンンビレイクイプのアクチノマデューラ属（
Ｇｅｎｕｓ　ＡｃＬｉｎｏ＋ｎａｄｕｒａ　ｄａｓｓ−
ｏ＋＋ｖｉｌｌｅｉ　１．ｙｐｅ）に同定するのが分類
上妥当である。

なお、近年グソンビレイクイプのアクチ７マデューラ属
はメイヤーの提起した所属７カルデイオプシス属に統合
され、／カルデイオプシス属の名称で取り扱われること
か一般的である。

そこで本菌は、メカルデイオプシス属Ｎ０７７９　（Ｇ
ｅｎｕｓ　Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ　ｓｐ　Ｎ　Ｏ７
７９）と称することにした。そして本菌は］１業技術院
微生物工業技術研究所に寄託されており、その受託番号
は「微工研菌寄第６１３３号」である。

本発明で用いるホスホリパーゼＤＭを生産するのに用い
る使用菌としては、メカルデイオプシス属Ｎ０Ｖ７９お
よび本菌株を変異処理した変異株だけでなく、メカルデ
イオプシス属（旧属名アクチ７マデューラ　ダソンビレ
イタイプ属）にｊ＋’６　ＬホスホリパーゼＬ）八ｌを
得」ンＳする１ンＪて゛あれは会て利できる。

アクチノマデューラ属ＮＯ３６２株ＨＦｔ彊ＩＭ−ＰＮ
ｏ、６１３２］の菌学的性状ニー ゛（ａ）形態 澱粉無機塩寒天、チロシン寒天、酵は・麦芽寒天、オー
トミール寒天培地等では良好に、またグリセリンアスパ
ラギン寒天で１土中程度に生ｒｒシて気ｒＷｉ糸の集落
を着生する。

１泡子を着生した菌叢の色は培地の種類、観察時期によ
り若干変化するが、おおむねやや紫昧を持った灰白色か
ら灰色を呈する。

シュークロース硝酸塩寒天、栄養寒天、グルコースアス
パラギン寒天では気菌糸を着生しないか、貧弱にしか着
生しない。

寒天培地上に生育させた本菌株を顕微鏡で観察すると、
気菌糸はＩ’ｌｌ　Ｏ、８〜１．２μで分枝腰一部ルー
プ状又は螺線状をなし、屈曲を混しえなからよとして直
線状に長く伸び、先端はループ状にＶ）るく右いている
場合が多い。

胞子は数１０から１００以上の連鎖状をなして着生上は
ぼ気菌糸全体を形成する。

胞子の大きさは０．８〜１．２Ｘ］、２〜１．７μで、
短円筒又は卵形で、大きさ形ともやや不規則である。

基生菌糸は中０．６〜１．０μで、不規則な分枝をもっ
て屈曲しながら伸長し、遊走胞子、胞子のり、菌核等は
形成されない。

また通常、隔壁、菌糸の分断は見られないが、液体培養
により菌糸の分断が見られることもある。

（Ｉ〕）各種培地上での性状 以下に記載する実験方法は、主としてイー・ビー・シャ
ーリング（Ｉｎｋ、　Ｊ、５ｙｓＬ、ＢａｃＬｅｒｉｏ
ｌ。

１６巻、３１３〜３４０．１９６６年）の方法にしたが
って行った。

色調は、「色の標準」（財団法人日本色彩研究所、１９
６４年）を用いて決定し、色相名とともに拮弧内に色相
名、彩度番号、明度番号の順に色相記号を記入した。

培養は２５°Ｃで行い、最も生育の旺盛な２・−３週間
目の各培地上における観察結果をｔ５３表に示した。但
し第３表中、生肯項１」に記載した基土菌糸表面の色は
Ｉｌａ子着生着生前養−・週間Ｈにおける観察結果を示
しており、胞子着生が早く基土菌糸表面の色の判定困難
な培地については記載していない。

（ｃ）生理的性質 １　生育温度：１０℃〜３７℃附近で生訂し、２０〜３
０℃で最もよく生育する。

２ゼラチンの液化：液化しない（グルツース・ペプトン
・ゼラチン培地上、２５℃、３週間培養）。

３　スターチの加水分解重分解する（スターチ寒天培地
」二、２５℃、３週間培養）。

４脱脂牛乳の凝固、ペプトン化：ｉ疑固ぜず、ペプトン
化する（３０℃、３〜４週間培養）。

５　メラニン様色素の生成：ペプトンイースト鉄寒天、
チロシン寒天で生成する（２５°Ｃ１２〜４ト１）。

（ｄ）炭素源の同化性（３０℃、１０〜１６日培養）Ｉ
−一７ラビノース　＋　シュークロース　−１）：キシ
ロース　＋　イノシトール　±Ｄ−グルコース　＋　Ｌ
−ラムノース　−Ｄ−７ラクトース　−　パラフイノー
ス　−（ｅ）細胞の化学分析 本菌株のディアミノピメリン酸はメン型であり、細胞壁
の糖組成は、アラビノース、キシロース、ラム７−ス等
を有せす、マデュロース、ガラクトース、マン７−ス等
を有する。

以上の分析結果に−）イてｒ３ｅｒＢｅｙ’ｓ　Ｍａｎ
ｕａｌ　ｏｆＬｌ＋ｅ　ＤｅＬｅｒ＋ｎ１ｎａ１．ｉｖ
ＣＢｅｃＬｅｒｉｏｌｏｇｙ第８飯、６５７頁〜６５８
頁（１９７４年）や、レジエバ′リエ（Ｉ　ｎｖｅｒ、
　Ｊ　、　ＳｙｓＬｅｍ、　Ｂａｃｌ、ｅｒｉｏｌ、　
２０巻、４３５頁・〜４４３頁、］　９７　（，１年）
等の分類法にしたがって↑り定すると、本菌は細胞壁類
型（ｃｅｌｌ　ｗａｌｌｔｙｐｅ）ＩＩＩ型、糖組成類
型（ｃｅｌｌ　ｌ１ｌａｌｌ　ｓｕｇａｒ　ｐａＬＬｃ
−ｒｎ）Ｂ型となる。

以上本菌は、細胞壁類型力中１、糖組成類型か１３であ
ることか呟　ミクロビスポラス化ストレプトスポランギ
ウム属、スピリロスボラ属、アラ／モノスポラ属、デル
マドフィラス属、アクチノマデューラ属のいづれかに属
する。しｈ化本菌はその形態にナシいて多数の胞子から
成る胞子連鎖を着生し、菌核、胞子嚢、遊走胞子が見い
出されないことより、アクチ／マチ゛ユーラ属（Ｇｅｎ
ｕｓ　ＡｃＬ目ドｏｍａｄｕｒａ）に同定するのが分類
学」二、最も妥当である。

そこで本漬は、アクチノマデラーラｆｉＮ０３Ｇ２　（
ＡｃＬｉ＋＋ｏ＋ｎａｄｕｒａ　ｓｐ　Ｎ　０３　Ｇ　
２　）と称することにした。そして本漬は工業技術院微
生物］ユ業技術研究所に寄託されており、その受託番号
は１−＠１研菌寄第６１３２号（ＦＥＲＭ　Ｐ−６１３
２）Ｊである。

本発明で用いるホスホリパーゼＩ）　Ｍを生産するのに
利用する使用菌としては、」１記したアクチ／マデュー
ラ属ＮＯ３６２、及び本菌株を変異処理した変異株だけ
でなく、アクチノマデューラ属に属しホスホリパーゼＤ
を生産する菌であれば全て用いる」■ができる。

本発明方法で利用するホスホリパーゼＤＭを、」１記例
示の如きホスホリパーゼＤＭ生産菌を用いて製造するに
は、上記例示の如ぎホスホリパーゼＤＭ生産菌を培地に
培養し、培養物よりホスホリパーゼＤＭを採取すればよ
い。その培養形態としでは、成木培養、固体培養いづれ
も用いることか出来るか、工業的には法部通気攪拌培養
を行うのが有利である。

また使用する培養源としては、一般に微生物培養に用い
られる炭素）ｈに、窒素源、無機塩、及びその他の微量
栄養素の池、メカルデイオプシス属やアクチ７マデュー
ラ属に属するホスホリパーゼｌ）Ｍ生産微生物の利用す
ることの出来る栄養源であれば、すへて使用することか
出来る。

培地の炭素源としては、例えばブト・へｊ社果糖、ショ
糖、乳糖、澱粉、グリセリン、デキストリン、糖蜜、ソ
ルビトール等の池、脂肪酸、油脂、柑レシチン、アルコ
ール、有機酸などを例示でき、これらは単独でまたは組
合せて用いることかできる。

窒素源としては、無（幾窒素源、有機窒素）原いづれで
も利用可能であり、黒磯窒素源としては、例えば硝酸ア
ンモニウム、硫酸アンモニウム、尿素、硝酸ソーダ、燐
酸１アンモニウム、燐酸２アンモニウム、塩化アンモニ
ウム等か挙げられ、また有（Ｉ９．窒素源としては、大
豆、米、とうもろこし綿実、菜種、小麦などの粉、糠、
脱脂粕をはしめ、コーンスチープリカー、ペプトン、酵
はエキス、肉エキス、カゼイン、アミノ酸等か例示で外
る。

無機塩及び微量栄養素としては、例えばリン酸、マグネ
シウム、カリウム、鉄、アルミニウム、カルシウム、マ
ンガン、亜鉛等の塩類の１凱　ビタミン、非イオン界面
活性剤、消泡剤等菌の生育やホスホリパーゼＤＭの生産
を促進する適当な物質を例示で外、必要に応じて使用出
来る。

培養は好気的条件で行なわれる。培養温度は菌が発付し
、ホスホリパーゼＤＭを生産する温度範囲で適宜変更選
択できるが、特に好ましいのは約２０〜約３５°Ｃであ
る。

培養時間は条件により異なるが、ホスホリパーゼｌ）　
Ｍが最高生成量に達するまで培養すればよい。

液体培養の場合は例えば１〜３日程度である。

培養物中に生成したホスホリパーゼＤは、液内培養では
主として培養液中に溶けているので、培養終了液より固
形物を炉別して１１１られる培養枦液よりホスホリパー
ゼｌ）　Ｍを採取できる。

培養済液中よりホスホリパーゼＤＭを採取するに当って
は、通常酵素精製に用いられるあらゆる方法が利用出来
る。例えば硫安、食塩算による塩析、アセトノ、エタノ
ール、メタノール等の有数溶剤による沈）殿、透析、イ
オン交換クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー
、デル濾過、吸着剤、等電点沈澱等の方法か使用出来る
。さらにこれ等の方法を適当に組み合せることによって
、ホスホリパーゼ１〕Ｍの精製効果が」二る場合には、
組合せて行うことが出来る。

」二連のようにして得ることのでとる本発明方法で利用
できるホスホリパーゼＤ’　ｌ’、１は、たとえば安定
化剤として各種塩類、糖質、蛋白質、脂質、界面活性剤
等を加えるか、もしくは加えることなく、減圧濃縮、減
圧乾燥、凍結乾燥管の方法により液状又は固形のホスホ
リパーゼｌ）Ｍの形態にすることが出来る。本発明方法
で利用するホスホリパ−ゼＤＭの酵素活性測定法は、基
質グリセロ燐脂質に作Ｊｌｌ　してリン酸と含窒素塩基
とのエステル結合を分解して生ずる塩基の量を測定して
める。ホスホリパーゼＩ）　Ｍの活性は、特に記載しな
いかぎり、以下に記載するコリンオキシダーゼ法により
測定した。

力価測定法： １％卵満精Ｍレシチンエマルション（（’１．１ｇレシ
チン、１＋ｎｌエチルエーテル、１０　ｍ　ｌ　蒸留水
の超音波乳化液）０．１ｍｌに、０．２　ＭｐＨ７，２
ｌ・リス−塩酸緩衝液０．１ｍＬ　Ｏ，ＩＭ　ＣａＣＬ
水溶液０゜０５「ｎｌ、蒸留水０．１５ｍ１を混合しこ
れに酵素液０．１１１１１を加え、３７°Ｃで２０分反
応後、５０＋ｎＭ　Ｅ　Ｉ）　Ｔ　Ａ　−２Ｎ　ａを含
むＩＭ）リス−塩酸緩衝液（１＋Ｈ１’１．Ｏ）０．２
ｍｌを加え、直ちに５分間煮沸して反応を完全に停止す
る。次にコリンエステラーゼ測定用試薬〔日本商事（株
）製造〕のキットに含まれるコリン呈色剤を呈色溶解液
にｌ８解した溶液４、ｍｌを加え、３７°Ｃ’ｔ’２０
分間反応させた後、５　（Ｊ　Ｏｎｍの吸光度を測定す
る。

ス１］照としては、あらカルめ熱失活した酵素液を用い
て同４．￥＋に反応さぜたものの吸光度を測定する。

そして１分間に１μモルのコリンを遊離する酵素活性を
１単位とする。

・１１；ｊ述した／カルデイオブシス属Ｎ　Ｏ７７９株
及びアクチノマデューラ属ＮＯ３Ｇ２株の夫々を用い、
後記９籾製方法に記載した方法により精製した酵素標品
を用いた本発明方法で利用できるホスホリパーゼＤＭの
理化学的性質について以下にのべる。

１作用 グリセロリン脂質のリン酸と含窒素塩基とのエステル結
合を分解してホス７アチノン酸と塩基を遊離する。

ＣＨ２０ＣＯＲＣＨ２０ＣＯＲ １ １ＩＩ　Ｉ　ＩＩ Ｃｔｌ、０−Ｐ−０−（Ｎ−塩基）　ＣＨ，０−Ｐ−（
月１１ ０　０− ２　基質特異性 基質としてレシチン、リゾレシチン、スフィンゴミエリ
ンのいづれか１つを０．５μモル含むエマルジョン０　
、１．　ｍ　ｌを用い、蒸留水の代りに１％ＴｒｉＬｏ
ｎ　Ｘ−１００を含む水溶液を用いる以外は、」１記力
価測定法と同様にして反応させ遊則したフリン量を測定
し、各基質に対するホスホリパーゼ１）Ｍ活性を測定し
た。その結果、レシチンに月する活性を１００とした時
の相同活性は、メカルデイオプシス属ホスホリパーゼＤ
ｈ＋ニーリゾレシチン４．９；スフィンゴミエリン０．
３、アクチ７マデューラ属ホスホリパーゼ１つｌ’、ｌ
ｌ　ニーリゾレシチン３．６：スフィンゴミエリン（）
、３、であった。

３　至適１〕１１ 力価測定法において用いる緩衝液の代りに１）Ｈ３，０
〜４．０では蟻酸・蟻酸ソーダ緩衝液、ｐ　ｌ−１・１
．０〜５．５では酢酸・酢酸ソーダ緩ｆＭ液、ｐ　ｌ−
１５，５〜８．５ではトリス・マレイン酸・苛性ソーブ
緩衝液、＋＋Ｉ−１７、ｔ、’１〜９．０ではトリス・
塩酸緩衝液、ｐ　ｌ−１９、（Ｊ〜１０．０ではグリシ
ン・苛性ソーダ緩ＩＩＪ液を用いてホスホリパーゼＩ）
　Ｍの活性を測定し、至適１１１−１をめた。また同測
定法で団］いる蒸溜水０．１５ｍ１の代りに１％ｉ’　
ｒｉ　Ｌｏｐ　Ｘ　−］　＋１÷）（和光紬薬）水溶液
０．］５５ｍを用いた時の至適１＋　ｌ−１についても
めた。

その結果、蒸留水を用いた場合、 ７カルデイオプシス属ホスホリパーゼＩ）　Ｍ　ニー至
適１１１（フイマ１近（６，５〜７　、（，１）、アク
チノマデューラ属ホスホリパーセｌ）　Ｍ　ニー至適ｌ
用７伺近、 であり、１％１’ｒｉＬｏｎ　Ｘ　−１０（ｌ水溶液を
用いた場合、 ノカルディオプシス属ホスホリパーゼｌ）　Ｍ　ニー至
適１］１−１５イτ］近、 マクチノマデューラ属ホスホラバーゼＩ）　Ｍ　ニー至
適ｐＨ５，Ｓイー１近、 であった。

４　至適ｆ１１一度 力（＋Ｉｉ　ａｌｌｌ定法（これいて、反応温度条件を
１（）、２０．２５．３７．４０．５０．５５．６０．
７ｏ、８０および９０℃で酵素活性を測定した。その結
果、 メカルデイオプシス属ホスホリパーセＩ〕へ１ニー至適
温度６０℃〜８０’Ｃ１とくには６　（，１’Ｑ〜７０
°Ｃ１ アクチ７マデューラ属ホスホリパーゼｌ’）　Ｍ　ニー
至適温度５５°Ｃ−８０’Ｃ１とくにはｌ’Ｃ〜７０　
’Ｃ１ と認められた。

５１）Ｈ安定性 酵素溶液０．１１１１１に、ノカルディオプシス属ホス
ホリパーゼＤＭの場合は（，１，２＋ｎｌのアクチノマ
デューラ属ホスホリパーゼＤＮ１１の場合１こはｌ）　
、　９　ｎ＋１のｆ）　、　Ｉ　Ｍの各種緩１１ｊ液、
□すなわち１辻１３．０−・３゜５ではグリシン・塩酸
緩衝液、ｐｉ−１３，５〜７．０では酢酸・酢酸ソーダ
緩衝液、ｐｉ−１５、０〜８．０では１リス・マレイン
酸・苛性ソーブ緩（ΦＪ液、１＋ｌｌ　？　、Ｏ〜！３
．０ではトリス・塩酸援ｊ軸改、１＋　ｔ１’、）　。

０〜り、５ではグリシン・ＨＨ性ソーダ援ｉ！１１ｊ液
を夫々加え、２５°Ｃで２時間保った。その後、これら
酵素緩ｉη１ｊ溶液にＯ，Ｓへ１トリス・塩酸状ｉΦ」
液（ｌｄ−１°７・、２）を、７カルデイオブシス属ホ
スホリパーゼり　Ｍの場合には］、２＋ｎｌ、マクチ／
マデューラ属ホスホリパーゼｌ）　Ｎ’ｌの場合には９
　、０τ１）１加え、ｐ　ｌ−１を７．０〜７．３とし
た。この溶液１．）　、１　＋ｎ　ｌを用い、力価測定
法に従って力価を測定し、安定１川範囲を調べた結果、 ／カルデイオプシス属ボスホリパーゼＤ　Ｍ　ニー特に
安定なＩ］　８４　、（，１〜７．（）、アクチノマデ
ューラ属ホスホリパーゼ１．）　１１．’ｌ　ニー特に
安定な１山４．０〜七Ｊ、０、 と認められた。

また、力価測定法で用いる蒸溜水０．］５＋ｎｌの代り
に１％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ　−１１）　０水溶液（１，］
５５ｍを用いる他は、上記と同様に操作してｐ　ｌ−］
安安定量を調べたか、結果は上記したところと殆んど変
らなかった。

６　熱安定性 酸素溶液０．１ｍｌに０．１Ｍ）ＩＪスス−酸緩衝液（
ｐＨ７、２）を、ノカルディオプシス属ホスホリパーゼ
ＤＭの場合には４（ｏｌ、アクチノマデューラ属ホスホ
リパーゼＤＭの場合にはり、９＋１１１加え、２０．３
０．３７．４０．５０．６０および６５°Ｃに３０分間
放置した後、残存する酵素活性を測定した。

その結果、 ノカルディオプシス属ホスホリパーゼＤｈ１ニー３　＋
）　’Ｃで３０分の熱処理では殆んど失活ぜず、５０°
Ｃで３０分の熱処理で８０％の活性が残存、アクチ７マ
デューラ属ホスホリパーゼＤＭニー３０℃で３０分の熱
処理では殆んど失活せず、５０°Ｃで３０分の熱処理で
６０％の活性が残存、という結果であった。　１ ？　各種物質による影響 力価測定法においてＣａＣｌ２水溶液の代りに各種物質
の水溶液を０．０５ｍ１加え、酵素反応系中で１ｍＭ濃
度に成るようにして活性を測定した。

その結果は水添加の時の活性を１０　ｔ）とし、損料活
性として賦活作用のあったものは、 メカルデイオプシス属ホスホリパーゼＤＭニー・例えば
、ＡｌＣｌ、、Ｃｕ　ＳＣ２、Ｚｎ５Ｏ，、ＣｏＣｌ２
、ＣａＣ１，、ＦｅＣｌ２、Ｆｅ　ＳＯ＊、Ｍｇｃ＋２
、Ｓ。

Ｃ１２、デオキシコール酸ソーダ、エタノール、インプ
ロパ／−ル、し−ブタ７−ル、Ｔ　ｒ　ｉ　ｔｏｎ　Ｘ
　−１０（１、アクチノマデューラ属ホスホリパーゼ１
）ｈｌ　ニー例えば、Ａ　Ｉ　Ｃｌ　３、ＣａＣｌ３、
ｌＦ’ｅＣ１２、ＦｅＣｌ４、Ｍ　８ＣＩ　２．５ｎＣ
１２、デオキシコール酸ソーダ、エタノール、インプロ
パ／−ル、［−ブタ７−ル、で、一方、阻害作用のあっ
たものは、 ノカルディオプシス属ホスホリパーゼＬ’）　Ｍ　ニー
例えば、ドデシル硫酸ソーダ、セチルピリノニワムクロ
ライド、 アクチノマデューラホスホリパーゼｌ’）　Ｍ　ニー例
えば、セチルピリジ゛ニウムクロライド、であった。

；ｊ　ノ月曲の１１１１定法 ０１ｊ述したとおりである。

９　精製方法 きな粉３．（〕ビ、コーンスターチ−プリカー１゜０％
、ペプトン０．５８、粉末酵母エキス０．１％、グルコ
ース１．０．、Ｎ）１．ＮＯ３０，２５％、Ｋ　、Ｉ−
ＩＰ　Ｏ、０、４％、Ｍ　ｇＳ　Ｏ＋・７１−１２　Ｏ
ｆ’、ｌ　、　（’、ｌ　１％、ツウイン（Ｔｕ＋ｅｅ
ｎ）−８５０，１％から成る培地（１＋１−１６．０）
約１５１を３（月ツヤ−ファーメンタ−に入れ、１２　
（１’Ｃで１５分間滅菌後、シード培五教１゜５１を植
菌し、２７°Ｃで４０時間培養を行った。

尚、」１記シード培養液は、澱粉１％、（ＮＩ−１，）
Ｈ７］）０．０．２５％、ペプトンＩ）、２５％、Ｋ　
、　Ｉ−Ｉ　Ｆ’　０３（）、２％、ＭｇＳＯ４０，０
１％を含む水溶液培地（＋１１−１６．８）１００ｍ１
を５００ｍ１坂口７ラスフに入れ、蒸気殺菌後、メカル
デイオプシス属Ｎ０７７９株ＩＦＥ　ＲＭ−Ｐ　Ｎｏ、
　６１３３　］又はアクチノマデューラ属ＮＯ３６２株
［ＦＥＲＭ−Ｐ　Ｎｏ、６１３２１の胞Ｊ−を一白金耳
接種し、培養温度３＋１’ｃ、４２０回ＩＩ伝／分の条
１！１で２１］間振盪ｊ￥Ｘ養して調製した。

培養後、菌体固形物を遠心分離により除ノぐし、遠心上
清１３１（／カルテイオプシス属Ｆト１　＋＜　１ｓ４
−に’　ＮＯ，６］　３３株を用いた場合は０．５・Ｌ
　ｕ　／　１ｎ　ｌ；アクチ７マデューラ属Ｉ・川Ｅ　
ＲＭ−Ｐ　Ｎ　０．６　］　］３株を用いた場合は］　
、　７　Ｌｌ／＋１１１であった。）を（ｉｆた。この
遠心」二）、′ｉを５°Ｃに冷ノ、１１シた後、−２ｆ
ｌ’Ｃのアセトンを加えてアセトン濃度３０〜７（）％
画分に相当するホスホリパーゼｌ）　Ｍを含む沈澱物を
遠心分離により集めた。この沈澱物を、メカルディオプ
シス属ＦＥＲＭ−ＰＮＯ，Ｇ　］　］３株を用いた場合
にはｐ　Ｉ−Ｉ　Ｇ　、Ｏ、アクチ７マデューラ属１−
’ＥＲＩＶＩ−Ｐ　Ｎ０６Ｇ　］　３４株を用いた場合
は１＋　Ｎ　Ｇ　。

５のトリス−マレイン酸にｔ８解し、ｏ、ｏ２Ｍの目状
ｉΦｊ液に対して透４７１シた後、目状１ΦＪ液で平（
１す化したＤ　Ｅ　Ａ　Ｅ−セルロースに通塔し、通過
区分を集めた。次に環内等の方法〔、Ｊ　、　Ｂ　１ｏ
ｃｌ＋ｅｍ、　８↓、］］６３（１９７７））で調整し
たバルミトイルガーゼをカラムに充填し、充分に水洗し
てから上記ＤＥ　Ａ　Ｅ−セルロース通過液を注入賦活
性を吸着した。これを０．０５Ｍ）リスー塩酸緩笥液（
ｐｌ−１７。

２）で洗浄後、０．２％ＴｒｉＬｏｎ　ｘ−１００を含
む同紙ｆΦｊ液を加え活性を溶出した。活性区分を集め
てバイオエンノエアリング社製の限外濾過膜（Ｔｙ−ｐ
ｅ　Ｇ−１０Ｔ）を用いて濃縮した後、ゲル濾過担体と
してトヨパーツｂｌ−ＩＷ−５５Ｆ　Ｃ東洋曽達（株）
製〕充」眞カラムに注入し、蒸留水を用いて通塔し、活
性区分を集めて凍結乾燥を行った。

この乾燥粉末を、メカルデイオプシス属ボスホリバーゼ
ＤＭの場合には０．０２５Ｍイミダゾール−塩酸（ｐｉ
−１７，４）に溶解後、アクチ／マデューラ属ホスホリ
パーゼＤＭの場合には０．０２５Ｍトリス−酢酸（ｐＨ
８，３）に溶解後、ファルマシア・ファインケミカルス
社製のポリバッファ交換体ＰＢＥ　９４（２０ｍｌ）充
填カラムに通塔して活性を吸着後、同社製の溶出用ポリ
バッファ（Ｉ）■−１５。

０）を用いて１山勾配により溶出した。落出したホスホ
リパーゼ１）Ｍの活性区分を集めて限外ｉ濾過膜にて濃
縮し、セファデックスＧ−７５充填カラムに通塔し、ホ
スホリパーゼｌ）　Ｍ活性区分を集め′（凍結乾燥した
。

斯くて、／カルデイオプシス属ホスホリパーゼＩ）Ｍの
場合には、約、１０％の活性回収率で、比活性］　７８
　、３　ｕ／ＩｎＢ蛋白質として、アクチノデューラ属
ホスホリパーセ寸）Ｍのｊ場合には約・１：３％の活性
回収率で、比活性２１３　、３　ｕ／ｍ８蛋白質として
、ホスホリパーゼＤ　Ｍが回収された。

［相］等電点 ノカルディオプシス属ホスホリパーゼＤＭニー４．８５
±０．１（アンホライン電気泳動法により測定） アクチノマデューラ属ボスホリパー／Ｎハ１４ニー６．
４±０．１（アンホライン′［０゜気泳劾法により測定
） ■転移作用 従来公知のホスホリパーゼＤｎ、既述の」：うに。

レシチンからホスファチノンｌｔＥを生乃Ｚし、これを
炭素数１から６までの直鎖の１原アルコール移してエス
テルを形成することが’ＬＪＩ　Ｌ）れている。

ホスホリパーゼＤＭについても同４）Ｒに鴫，）４叩用
を１、・、ちべた結果、本〔げ系では、公知ホスホラ・
ぞ−ゼＤでは転移金主じないこ．との記載さルた一斂ア
ルコールを包貧して一ψに広号ｊＬ’．囲の１ルコール
に転移カ起すエステルが形成することが判明した。

佼記転７１渋作用の％　！，頂方法（１’Ｌｃによる仏
トシ生成！ｌ勿の勺ミＤ１ｒ（（（　ｒ，、’４カーｍ
　）にｔＩｆつて反応を信い、Ｃ１〇−オ；！．２　フ
ルコール之１えばり゛ラニオールとリン脂′Ｃに例えば
レシチンとの間にあ・けるリンｊｉ：・１．・ｌ−ｆｉ
．’！アルコールｒ，・凛メ体形！戻反応を心ｆ４に％
　して、該リンｌｂ’ｒ　’ｌ’ｆの該−ｉｏ．つ′ル
コールｉ０冶，体をｊｌ−ン成する。公知ボスホリパー
ービＤ６よ、　上記行・５４１本をルＩ現しない。

本丸り」方法によノ１，ば．　＋〕ｔ＋第１ノ１Ｎ（の
如き式（１’）リンＩｔ？？ν」とａｉＪ　＋ｔｌ’．
：例示の如さ式（＋１）−；ｒ：アルコーノシトを・、
上記訛ｔｎｉ　Ｌ　＜述べたホスホリパーゼＤノＶの仔
圧下にｌ反応させることにより．下６１２式（Ｉｌｌ）
１ 〆ｉ　−　０　−　１’　−　０−ｌビ　・・・　（Ｉ
ＩＩ）１Ｊ １１ｔシ式中、Ａ及びＲ　１１　ｒａｉｌ　＋＋ｉ：：
　Ｌ，　ｆｃと：’ｉ　：ｓ’．である、′Ｃ衣わ忌ノ
Ｌわリンｌｉｉ４　’ｔ’Ｊージノアルコール、、）昼
休を”製造することができる。この際、ホスホリパーゼ
Ｊ）Ｍは紹製品として使用する必要にグく徂・坪品で２
二，つてもよい。史に、】の当な画定化担体たとえばボ
リア０ロビレン膜、セライト粒、ガラスピーズなどの如
き各独の小合体＜Ｉｌｊ脂矩や無・ｊぺ材料の粒状物や
フィルム状！１勿Ｕこ担持固矩化してオ１１川すること
もできる。

反応ｔよ、ホスホリパーゼＤＡｉの存（１−］・で、好
オしくｉｄｒｌｙ媒の存在下に、弐（　１　）　ｌ）ン
脂質と式（ＩＩ）−ルヌアルコールとを接触せしめゐと
とＫよ．リイ」うことができる。オリ用する暦奴のし１
１としーこに、水性浴？保及び水性浴（ｂ；トと壱機イ
谷媒との４合を１がりを例示することができる。式（１
）ｓアルコールそれ目体にＲ）媒の役目を兼ねさせるこ
ともできる。咬ブこ、ポスホリ，ｅ−ゼＤＭ・の酵素学
的１：ｌｔｔ媒作用を阻壱しない任急の他の硝卵剤を言
む酵媒も利用でき。

たとえば該作用を促進したり、１ｊチ素の反力え化に役
立つ適当なｉｒｊｉ加ｒｒ１１葡ざ有した（１保である
ことができる。例えは、１１μ畝、クエン（−υｔ、リ
ンば／ｊとの緩衝Ａｌｌを含ゼしたり、塩化カル７ウム
その他の中性線を富有したりした丞イーに冶碌で２天・
ることかできる。

−（ＪＱに、七イ具沿々イーの１クリとして１．、式（
１１）−赦アルコールそれ自体を包合′しで、１列え（
ｒ；Ｊ，　−　ｔｔ−へブタン、１Ｌ−ヘキサノなどの
ｙｌきハＴｒ肪Ｊ１）Ｓ炭化水素７ｊＪ　ｉシクロベン
クン、シクロヘギザン、シクロブタンナトの如キ力「閥
＝ｉｈ大ルて化水系７、＋Ｉ　ｉベンゼン−　トルエン
トン、メチルイソプロピルケトンなどＩｔ）　７１ｊき
りトン弾にヅメチルエーテル＋ヅエチル１ーデ／Ｌ＝．
ソイソゾロビルエーテルなどの如きエーテル知；酢１に
メチル、　Ｑ’＋：Ｌ，＋７２エナルなどの如きエステ
ル知；四Ｊ’！’：Ｈ化炭２＝、クロロホルム＋　４化
メチレン〃どのｙ目さハロケ９ン化炭化水系知；ジメチ
ルホルムアミドの如きアミド７？ｊ媒腿；ジメチルスル
ホキシドの如きスルホキシド出媒類などを例示すること
ができる。

水性沼媒を有］％セ陪媒との混合７谷媒の形で坏１」用
する場合の両者の混合比はＭｉ幽に選択できるが、例え
ば水性浴媒：有（Ｗ’に溶媒（υ／υ比）の比で５０：
ｌ〜１：１０の如きａ七尾を例ボすることができる。

反応モル比、ホスホリパーゼＤＭＯＩｆｆｉ用ｊ６１、
溶媒の吠用散々とは、適宜にカζヅくできるが、例えば
、式（１）’Ｊン廂ｉ’ＪＪ１モルに対して式（ｎ　）
　−１ｌｌ：・アルコール約１１１０〜約１：１００モ
ルの反応モル比を例示することができる。ｌだ、ホスホ
リパーゼＤノυの゛吠用鼠としては、Ｖｌｌえば、式（
１）　’Ｊン月旨質１ｇ当り３勺１００〜約１　［］　
００単位４Ｙ４ｉノ蛤の′１史月」…：ケ秒リノす（す
ることかでさる。さらに、ｆ爵ｒＪｉ＋１−の１ゲ用駐
としては１例えは一式（１）　ＩＪン賄質に対して約１
０倍〜約５００倍（谷筋）竹１度の１史用度ケ例示でさ
め。

反応は、至ＩＩ！１．１で迦打するので、とくに伶却或
は力ｌ熱の必−レＩｄないが、υ「望によりノ１４宜に
（■却・ｔ１シくは刀ｌＪ精れに件を土木用ずろこと７
）上できる。汐りえは。

４勺２０℃〜約６０°Ｃのν目さノ又化、棉（１ｋを例
示することかでさぁ。舟だ反応（（、「間も適宜に、・
、≦択一？：きるが、・列えは杓１陥１間〜約２４　ｉ
ｌ、、１間の如き反応時間をＮ示することがでひる。！
ツ目Ｊ　［より、たとえは’１’ＬＣ（ｒ専１？ｊクロ
マトグラフィー）なとの手法を利用して反応社ユ■を追
跡し、１シ「糞の１ＩＪｊ物の形ＩＪｉをイ、’ｉｉｌ
　ｉｉｇすることに」二り反応’；１’　１ｊｉｊをＪ
：Ｉ圓に装史することができ／、）。

ホスホラ・ぞ−セ゛ＤＭのイティ１ヨ下て式（１）リン
川１゛ｒ１４ｆと式（Ｉｆ）　−Ａ’、又フ′ルコール
とｆｆ：ｊ；・ζン５」之ぜしめる態１）ｊζに１１（
宜に六く択できるが、４・忙４１゛もしくはう辰帰柴件
下で何うのが普通でめる。又、ＪｖｊＪ記のよ′）に過
当なイ３を状−吻やフィルム状物正体［担持１卜ｄ定化
したｔ、７ｄシメ化醇梁の形でホスホリパーゼＤＡｉを
３り用する場合には１例えば、固定化酵：ｘ＝　Ｉ！６
！もしくｄ！・′尤１尼化酵系イＩ′Ｌ子層を介して反
応組成敢を俯棋ボンプケ用いて）ｌｊｊ過させる＃Ａ様
で何うことかできる。

上１七のようにして反応を打った１、え、ノ１多成され
た式（ＩＩＩ　）　’Ｊン脂賃−級アルコール＋ｉ５得
体は、その丑＼又はバ°１にの形で沈澱８ぜて分１．ｉ
：ｌシイ団ｊすることができる。史に、ケイ収カラムク
ロマト、”ア°ルミナカラムクロマト、１ｖ？ｌ速液体
クロマト、向θｉ９分配、ケ゛ル沖過、吸、Ｉ′、クロ
マト寺の過当な公知の方法を利用して分ｔｌｊｆ：　消
製することかでさる。

本屈明カ法に１才しは、上述しノこようにして、式（夏
）リンＩＦＩ貿と式（■）−叙−ｒルコールとを。

ホスホリパ−ゼＤＭのイイ、在下に反応させて式（ＩＩ
）リン）］］１イ′Ｇｌ−六ｔンアルコールｒ５．Ｑ％
　’１本を堅ｉ１７造することができる。

僧られる式（Ｉｌｌ）リン１１百！娃−戚アルコール醪
導体は、−４〜ぐｔ＋、　７ｊ　フ篩Ｉｔ　ｒｌ朧−１
陣用’ｔＣ１１シ：ｔ’ｌｌｌ　１ｉｔ（ハ（」５’−
、）　Ｊ（’ｊ　、’ｌｉ”ｊｌ午に人へな１．、；背
’Ｉ−’Ｂ１つ。この１．嘲り０５．υ・し、ｄ八（ｌ
ｉｔ　）、１η２ζ１１体にリポソーム形Ｉ）Ｍノ１゛
、、利として、又、１１ｘ　；ＩＩＩ品ノＣとえばクリ
ーム、￥Ｌ　ｒｌ’（Ｕ（−ｊ、’ｌ已；’ｉ’　Ｌ　
”ＴＥ　Ｉｋ　Ｉｌ’ｌ゛〕にｊｌに７Ｑ−立つ孔１ｔ
′、　ｒｌ１１として、１ノリ（−１１ｉＴ肪７１さ・
、・汀１１１のｊ“１．化ｉ１１．ｌ、Ａ々黒１１１［
，１）ゴｆミー”Ａ　７’ｊ’しくどｆｆ１．化剤なと
の１へり時１．１Ｌ−ノ゛（１１月４シＪ（にイ１′月
１で６−４る。

（Ｊｊｐこ、多くの’；、’Ｃ１＋　リン！：１ｉＨｊ
ｉｒ、：ｌ：　、＋−］１．ぞノ’　ｊｉ、シ”−１，
（４：Ｉ＝　、１凸１ｔ１１作才・１１することが）ｉ
ｌｌ−１第１．ていン）が、１・づ：゛、（１１」方法
で仁１°ら才１、る式（ＩＩ　）　、ｉ／、、１体の各
くη」、−Ｉ遠／、）・１１什ｊ、ＩＩＪ　勺’＋　；
１ｊｉ　’ｚ　・ｉ４−するとこ；５　、！ＩＩ）　Ｉ
Ｚ’　、、　′白イ１．・の’−ｉｇ　、１！ｉｉ　ｉ
肖ｉ’、ｌ：かノ・、・：侍−ｒ：’５．ろ。又−−戚
アルコール７ｊりｒｌ：＞’・＋’）、’ｔ：　’ｆじ
ｊ”る或＆’ｉ　＋Ａアル：Ｉ−ルノに＋：＋ｊ、ｌ’
ｒ　（Ｃ”、ｌ１人しｌｊ　、１．′５　Ｊ西＋’ｉ　
（′１化合１勿ｆ−リフ廂１！ｆ　［＋、シ（，１多い
ゼることυこＪ、つ−て、式化合物の！’、？、　Ｊｊ
ｉｊ的！＋ｊｌｉ　ｆｌ−用ｋＷｕめン′こり弗ｓ　ｋ
ｌ　４”Ｑ　Ｊｉｊ　（ｒ、ｌＪ　宅イＣ，７：、めで
ぞび）４纏”：ｊ　、ｉ＋ｉヲ１戊弦ざ−ＩＬｆｃりず
ｔ）？ニー　トモ＋ｊｇ　ｒ、、’ｒできる。塾らしＣ
又、上昂：帳理、古１てト化ｔ」′吻６−゛りン＋：！
’１負に転移でぜて、法化けりを、０部に市価に集中さ
也るための架理活性化合吻のキャリヤーとして、さらに
は、り超月８１占櫨生化名・・（勿の・１尿貨夏ヲ、イ
ニとしでン（ト）４な役割をはだすことも３ｉｊｊ角・
できる。

又更に、各イー１ｊｃ医ツ古品を（ｄじめとする化学・
ａ−成の中間体として有用であり、　’＋；ＩＩえば、
反応件の尚いハロケ゛ンやアミノ［、−τ、僕糸をＷ−
ｉするアルコールを転４イさぜた肋々１体を利用でひる
。更に又二車水系やＨ２Ｏでラベルし／ζ−ζ−シアル
コール４ンすることＶＣＸ、ってラベルされたリン）丁
１イ“Ｇｆ　ｎ’５２４ン体がイシｊられ、リン脂゛ノ
（・↓の代Ａｌｌ’　ｉ岐路の月６明しこオｊ」用する
りｊもでさる。

ｊユ下、実施例により本兇り１」方法笑施の叡ｆ：ＩＭ
　’ｌ；ｊ、について、史に８Ｆ　シ＜　９１１示する
。

在考例１．　ホスホリパーゼＤＭの、司製。

前記■精製方法の項に従って、ノカルディオプシス域Ｎ
ｏ　７７９株［：　ＦＥ　１１′Ｊａｉ　−Ｐ　Ｊｆ６
６１３３　〕及びアクナノマデューラ鵜Ｎ　０３６２　
Ｑ　（１”ＥＲＭし／ことおりの活性回）又巾及びまｆ
；ｉｉＪ：ｉ区でホス承り・ξ−　ゼｌ）Ｍ　イ仁イ吋
ブこ。

；＜ｄｆ＃ＶｉｌＪ　１　（Ｒｑｂｎ　＆　１〜Ｉｒｉ
；、　７　８　）１、Ｒ３ｕ　ｇ　４７１／こ示し７ｃ
１”：’ｔＬｉ式（１）リンｊ］「百」イ（賀ｔ　：　
Ｌ−α−レシチン、β、γ−ヅミリストイル（ングマ社
） （ｌ、２−ヅテトラデカノイルーｓｎ−グリセロール−
３−ホスホリルコリン） 椿１−６　ｎ　：　Ｌ−α−レシナン、β、γ−ソヘキ
ザデシル（カルビＡケムーベーリング付） （１，２−ジヘキーυデシルー５ｎ−グリセロール−３
−ホスホリルコリン） 基質ｍ　：　Ｌ−α−レシチン、β、γ−ヘキザデシリ
ヅン（ＩＬ・」上） （１，２−シクロへキザブ′シリデンーｓｎ−グリセロ
ール−３−ホスボリルコリン）Ｍ質ＩＶ　：β−レシチ
ン−α、γ−ソパルミトイル（同上） （１，３−ヅヘキサデカノイルーグリセロールー２−ホ
スホリルコリン） と、後掲第４表に示した多数種の式（Ｉｔ）−叔アルコ
ールとを、後記ｉ’　Ｌ　Ｃによる転移生成物（リン脂
質−級アルコール）の生成確認方法ｒＣ従って。

ホスホリパーゼＤノげの存在下で反応ぜせて、φ、；移
生酸生成物Ｉ戎を確認した。そのｌヒ１１１Ｌ１−をイ
女掲市４次に示した。

１°ＬＣによる転移生成【吻の生成確認方法ニー下記組
ｊ戎 １％リン１１１イ質乳化液　ｏ、１ｍ１０、４　Ｍ　（
Ｍ”？　Ｃ１緩側液（ｐＨ５，７）　ｏｌｍｇＯ，Ｉ　
Ｍ　９ｊ７．化カルシウム水５８液　０．０５　コ４＼
留水　Ｑ、　３．　ｍ８ １０％−級アルコール溶液　Ｑ、　ｌ　ｍｅの反応／（
ｙ、に、ホスホリパーゼＤルｌ水、は敵Ｑ、　ｌ　ｒｐ
ｔ（０，２〜１．　Ｏｕ　／　０．１　＋ｎ／！　）を
川１え、３７′【ンで１〜５１４ｒ間／］−Ｐｉ占した
。

尚、上記１％リンＩｊ′Ｉ′ｌ”ｔ”、−乳化故Ｖ↓、
リンカ’ｆ’ｆ　’Ｆ（１００ｈ４にジエチルニーデル
ｌ　ｍｅ及び〃τ竹ｆ水ＬＯｙｎｅを加え、氷冷鎖件下
に、６００Ｗ、２０）（ｌｉｚの条件で５分間鱈ゴ背波
＋）ｊ、Ｊ・（二して形ｈｋ１する。この除、上記反応
ｔ１３１の形１）４．：に、必′αな１部４合には、六
叉ｒ１ジエチルエーテルーアセトン省のイ］゛ｌ攬ｉｒ
”ｔ　Ｕ’ｌｌ：をノＪｉｌえで十ｈ１；１０％−たθ
アルコールｔ？、ｌ孜を＋ｉＬ：ｊ　ＩＮ　シ／こ。

−に、ｉｌ：：静ｏＹ、ｉ：、ｊｊ、５０　ｍＭｃ！、
）ｆｉ；ＤＴＡ　（ｘ４−ｖンジアミン四ｉ゛ｉｅ　ｇ
７°、）／１（＾何枚（１２ｍｅ會〕１；１え、更にク
ロロホルム−メタノールア１イ、液（２＝Ｉ　’ｒＩ：
ｊ’＋’＋’、Ｊ−１ｉ　）　５　ｍどを力１１えてｌ
ｌｉ、　Ｌ、　＜　ｊ：ｉ’＃拌し、　ｊｌｔ’７′ｆ
、’ｊ　（ノーｊ：、）、ν’１”Ｊ　）　’５−．’
　；４Ｌ出した。

この＋＋１＋１濁７１夕を２ｏｏｏｘｙの米作で１（）
分ｌｉｄ　；ｉ、・心ノξし理し、下層のクロロホルム
；！・、・衾分取し、クロロホルムーメクノーに７Ｍ液
（１：　１　ｆｒ−’ｒ（ｊ比）　７５１ｔｌｌに浴Ｓ
（、てＴ７．Ｃの試料とした。このうち１０μ）をシリ
カｒルンｒｙｒ　ｒ曽（フナグルｅ　ｏ　Ａ　２　ｏ　
Ｘ　２　＋１のフナコシ法品）にス、Ｉ？ツトし、ジイ
ソブチルケトン−酢酸−水（４０７２５：５）を展り月
／Ｎ麻として展開した。スポットの４民出にＶ」プ１Ｊ
記の；’：Ａ：系を用いた。１火出さノシたスフ＋５ツ
トで禾うＩ−川の恭′１ｊ、及びぞの刀Ｕ水分ノ仔９勿
（ホスファチジンを一没六）ひそのｄ、：：ｌ　ｈ：、
ｉ：トド）以外のリンＪｌｔイ′Ｌ４のスポラ：・が、
１火出吾れた。１ノ；合、これを転移生成物と認めた。

侠出試梨 リン岐の呈色；　Ｚｉｔばαｄａの試乗（Ｂｅｉｓｓ・
Ｕ・Ｊ・Ｃｈｒｏｒｒｕｘｔｏｇ、１３　１０４　、１
９　（ｉ　４　）−１１１アミンの呈色：ニンヒドリン
試条にンヒドリンのｏ、２ｓ悸アセトンＭ液） 二ｉ鎖アミンの呈色＝７に唾Ｊ１・、爾むｉ父−ベンヅ
ヅン試余ＣＨｉｓｃｈ、ｇｌ　ｉｖｌ、　Ｃ，ら　ノｉ
ｉｏｃｈｉｍ、Ｈｉｏｐｌｔ、ｙｓ　。

Ａｃｔα７０　５９８　１９６３） プリン及びピリミジンの呈色：フルオレツセインーアン
モニア試シ、、、、（Ｗ信ａｎ、ｄ　ｉ’、ら）Ｌｎｇ
ｇｗ　ｃｈ、ｔｃｒンｂ、　６３　５１１　１９５１）
グリコール粘けの呈色：　ｊｌｉ☆ヨウ７、・、：・□
、−シッフの試楽　（ＳＩＬ　αｌχ）　ノＶ、　Ｂｉ
ｏｃｈｉｍ、ＪＪｉｏ７）ノ＋、７／　Ｓ。

Ａｃｔａ、Ｉ　Ｇ　４　４３　ｓ　１９６８　）１７−
ケドステロイドの一旨實！Ｊ：　９７１−ヅニトロベン
セン試、ｇｒｚ　（Ｌｉ、５ｂｏａ　Ｈ，’Ｐ、Ｊ、Ｃ
ｈｒｏｎｕｘｔｏｇ。

１６　１３６　１９６４） 比較例１ 実力出物１１ｃ於て、ホスホリパーゼＬ）　Ａ４の代り
に。

キャベツ由来の公＝、用ホスホリパーゼｌ）　（／’　
−ＬＨｉｏｃｈｅｎｔｉｃａｌｇ　ＩｎＣ，）　’ｇ）
ｒｌｌいる（・マかＶよ、−：／Ａ７　ｉ９＋１１と同
僚に行った。その錆朱、４父掲弔４イ；、ｖｃ不したす
べての−に■アルコールνこついてη１へ移夕月ｙ戊５
）勿の生成ばめめられ耽かった。

ちｒ−＜　ｈｍ例２　（）（ｕｗＪｆｆｉｌ　〜Δ６２
４　）Ｌ−α−レシチン、β、γ−ノミリストイル（シ
グマ　ケミカル　カンノぞニー製、純度９８％）４００
１ツノ１、ヅエチルエーテルｌ成１．・、ｔイ留水１０
ｍ１を超音波用セルに入れ、氷冷しなから６０ｏｔ（／
。

２ｏＫｆｉｚで５分間、垣音波処理をし、乳白色の乳化
液をイ）ノブこ。

このレシチン乳化液２　ｍｌ！　（レシチン８０　Ｉｊ
ゾ）。

０、　４　ｕｔ卸ｗ＝＝Ｍ　＜　ｐ　ノア５．７）２ｍ
Ｊ　、Ｑ、ｌ　７１：ｌ　ＪＭｘ　化カルシウム水埼液
１　ｍｌ及びｌＯ％β−ヒドロキシエチルアニリンーヅ
エチルエーテルｒ’ｔｉ　？ｆｔ　２　ｍｌを共栓付試
験う弓゛中に入れ、ホスホリパーゼＤＭ水、谷詠（２，
５？Ｌ／ｍ１．）　２ｍｌ’１ｉ）ＪＩＪえてよく７３
２１合し７゛こ１女、３７℃で３１μｌ間静はした。反
応液に０．５　Ｎ　Ｉｊ、５　（：（、−を０．５ｍｌ
加えて反応を郷土した゛後史にタロロホルムーメ１／−
）しＣ２：　１　）？、１Ａ７ｉ１５ｍを刀（１んで−
ｅＸ　シ＜？Ｊ：Ｘ木１」シ、リン月１ｆｆｉ′賃全う
ｉｉｌ出しグと。このｉＪεｂ散を２００　（ｌ　Ｘ　
ｇｌ　０分間遠心し、下層のクロロホルム層を分取した
。

止血の水層に番まもう−ξ、Ｖクロロホルム１０　＋１
１７　ｆ刃口えて１回４求のづ出出：末１′Ｆを１ｆい
、Ｉ’ｌｌ出叡を台わぜ・次いで１０ｍ１．の０．０２
　Ｎ　、１’、、冒バでｒ／Ｌつ７ζ。この／ｌｉｉ合
（）グから遠心に、仁ってイｊｊびクロロホルム層曽を
分取し。

減圧’Ｎｉ、　ｌ＋’ｉｌ　したｉ７Ａ、１　ｒａｅＯ
）　？Ｌ　−ヘ：’ｅ−＋Ｊｙ　−２−７’。

パノール−水（６０；　８０　：　’Ｉ　）街貸献にｉ
’ｉ、ｉ　ｌ’ｌ’ｔ　Ｌブζ。

このＭＡ、本−１−２０μｌをシリカゲル）゛・−１５
・・１（フナケ゛ルフナコシ・７龜品）にスフｊ４′ツ
トし、ソイツブチルケトン−ｉ’ｌｉ二叡−水（４０：
２５：５）の！’ｊｆ！ｌ”ｋ　、；ｉ：、でＢｋ　ｖ
ｉＪしたところ、３，１ツ耕のリン月￥ｉ−＋ｉｊｊが
４央出松れ−そのつちの二つは、ホスファチヅンＣツ及
びレシチンと１ｉ　ｊ’　ｉｌ！、１が一致した。

この試料ケ■、５速合二３体クロマトグラフィーＶこよ
って鞘製した。カラムＣ：、Ｉ−７シ゛アノ１／、セッ
クカートリッジシリカ８醋×１０工（ウォーターズ社製
）−浴離液は」二連したｎ−ヘキサン−２−プロパノ−
ルー水：６０　＋　８０　＋　７．６％Ｍ　２　ｍＡ／
　分テ’＝！：　−クツ１火山にば４４１型紫外線恢出
器（ウォーターズ社）Ｖこよる２１４ｎＷｔの１収、及
びＲ４０１型示差朋折Ｈ１（同）を用いた。試、１ｓｔ
ｒ１４回に分ｈ’　０．２５　ｍｅずつ（下人した。

マスこのｘ＝　離？’ｉｉで混入しているβ−ヒドロキ
シｘ　−ｆ−ルー／’ニリン、及びホスファチノン７７
、ポスフ　（アチソン酸のβ−ヒドロキシエチルアニリ
ンエステルの３成分を分′ｙ４ｙ、シ、次いで、７ψ、
Ｂ、ＪｆｉＨ故をｎ−ヘキサン−２−プロパノ−ルー水
＝６０　：　８０　：１４として、カンムに吸着してい
る本分ｊ・拝のレシチンをγ６出した。得ら〕した３独
窃のリンｊ（ｈ質は、それぞれもう一度１ｉ；１様の操
作により１）７１連故体クロマトグラフィーで絹製した
。

３り＋頁匁１のリンｌＩ？ｆ４ｊＪはホスファチジンＣ
−政約１０飴、胛４多生成物約８０％未分附のレシチン
約１０％（モル比）であり、約４（１トピンの’１１Ｔ
Ａ’４さｊｌ、た転移生成物であるホスファチジン酸の
β−ヒドロキシエチルアニリンエステルが得られた。こ
の化含吻のＩｌｌスペクトルは日本分光Ａ２０２型亦夕
）分光光１則５１を用い、薄膜法でｌｉｔ・］疋し１こ
。そのか−ｊ禾を、−９５衣に示した（　１ｉｕｎ　＆
１４　）。

第５衣に示した他の式（■）　ＫＵアルコールを１４４
いて、上記と同４）〆に何つフξ。七の結氷を第５枚に
示した（　Ｒｒｂｎ　Ａ１〜１３及び１５〜２４）。

ただし、反応液に該−級アルコールを加える除、そのア
ルコールのＩＭ　ｐ；Ｉ！性に応じて、適互、水、又は
ソエチルエーテル、あるいはア七トン１ｊ−ｆ液として
力１」えた。

笑〃亀例３　（ノビｕｎ　Ａ１〜Δ６２４　）Ｌ−α−
レシチンβ、γ−ソへキサデシル（カルビオケムーベー
リング社製）４００７ｉ！／、ヅエチルエーテ／ｌｚ　
ｌ　ＭＥ及び感留水１．　Ｏｍｌの混む吻を一尖〃１１
例２と同体の方法で乳化させ、この乳化７１１２　ｍｌ
を用いて、以下、’）！　ｈｌＪＪ例２と同様の方法で
反応全行ノ（、つた。た）とし、−Ａ＆アルコールとし
て、チアミン」爺版堰の１０チ水浴６ｙを用いた。

この反応静を実施例２と同様に・、（ルイして、１巨移
生成”：ｌＪ３０　＋ＩＩｙを得た。この化合物のＩ　
Ｒスペクトルｆ：ｍ６ｒに示し；’ｊ　（Ｒ〕ｚ’ｙｔ
　ｊｏ２ａ）。

、４↓６表に示した１也の式（ｎ）　−１−アルコール
を出いて、上記と同４５Ｊ＜にイ丁つだ。その、ｉ石米
を第６表に示した（　１ｌｕｎ　Ａ　１〜２２及び２４
）。

’１４　＆例４　（Ｒｑｂｎ　ｘ＝　１〜ｉ６．２４　
）Ｌ−α−レシチンβ、γ−ヘキザデシリソン（カルビ
オケムーベーリング１社’！’！　）　４００　ｒｔｒ
ｙと実ｈｉｌｉ例２と１ｍＪ　４ニー＋’＜　（Ｄ　万
Ｌ　テｔＬ　化Ｌ、８０　Ｔｒｒｙ　相ａ　）ａ　化液
を用い、転移反応の受答体としてケ゛ラニオール盆肌１
え以下、実力（ハ例２と同様の方法で反応、１１（出、
循製を行なった。その結果、転移生成物５０　Ｉｆ！！
をイ：、゛た。この化合物の１’　１１スペクトルｆ：
第７衣に示した（　Ｒｕｎ　Ａ４　）。

第７衣に示した鴎の式（Ｉｆ）−級アルコーノノを用い
て上記と同様に行った。その帖呆を化７衣に示しＩｐ（
Ｒｕｎ　ｍｌ　〜３Ｍび５〜２４〕。

実施例　５（ｌビｕｑｚ　Ｎａ　１−７Ｉ＆１２４１β
−レシチン、α、ｒ−ソへキサデカノイル（カルビオケ
ムーベーリング社ｄ）４ｏｏｑを実施例２と同様に乳化
し、８０ｍ１相当の乳化数を用い、転移反応の受容体と
してノモントテニルアルコールを７Ｊ［Ｉえて、以下実
施例２と同様の方法で、反応、抽出、精製を行なった。

その結果、転移生成物２５＋ｖを得た。この化合物のＩ
　１１スペクトルケ第８表に示した（Ｒｕｎ　Ｎｎ９１
゜ 第８衣に示した池の式（ｎ）−級アルコールを用いて上
記と同様に行なった。その結果を第８表Ｋ　、ｙｆくし
たｌ　Ｒｕｎ　Ｎｎ　１−８及び１０〜２４）。

実施９１　６　（ｌ１ｒｂｎ　Ｎｏ　１〜Ｎｎ　５　）
アミン Ｌ−α−ホスファチジルエタノ−ＹＣｊ、１−シミリス
トイル（＋）、Ｌ−α−ボスヌアチソルＮ−メチルエタ
ノールアミン、β、ｒ−ノミリストイル（ｎｉ、ｂ−α
−ホスフ了チジルーＤ／７−グリセロールβ、ｒ−シミ
ストイル（１（以上、いずれもカルビオケムーベーリン
グＦＪ二）、Ｌ−α−ホスファチ命ヅルセリン（１’ｔ
’　）　（シグマ社）、及びＳ　、　Ｗ　、　Ｙａ？Ｚ
ｇら（Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ（土ユ、４７７．１９６
７）の方法で調歪したＬ−α−ホスファチジヱクノール
、β、ｒ−ノミリストイル（Ｖｉｆ：、実施例２と同様
の方法で乳化した。各リン脂質５θηを含む乳化液１．
５−をそレ−ｔ’ｔｌＪｊｌの共栓付試＝ｔ’ｔｉ　’
ｋに入れ、−アルコールトシてｒラニオールの１０％ジ
゛エチルエーテル溶液１ｍｌ、ｏ、　４　Ｍ酢酸緩衝液
１−１蒸留水１−１ｏ、　ｏ　ｔＭ塩化カルシウム水溶
液０．５ゴを加えて、更に、この反応液を６００Ｗ、２
０１ｃｔｌｚ　、１分間超音波処理した１次いで各反応
液（／ζホスホ１ルぐ−ゼＤＭ水溶液（８ｕ　／　ｍｅ
　）　１　ｍｅづつ加え、３７℃で６時間計ＩＩイした
。以下、リン１１旨質の抽出及び精ｕ場は実施例２と同
様に処理し、東曲の転移生成物であぞのｉ　ＩＩスペク
トル全第９衣に示した。

手続補正書 昭和５９年７　月１１８ 特許庁長官　志　賀　学　殿 １、事件の表示 特願昭５８−６３３ｏ４号 ２、発明の名称 酢素法すン脂質−級アルコール誘導体の製法３、補正を
する者 事Ｈとの関係　特ｒ「出願人 住　所　亥知県名古屋市西区笹塚町２−４１４代　理　
人〒１０７ （ほか１名） （１）明細書第９頁下から４〜３行に、［Ｄａ１Ｌ８８
０７＋、；・・・・・（Ｙａｎｇ；」とあるを、 Ｆ　Ｒ，Ｍ、１）αｗｓｏｎ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、ノ、、
１０２，２０５（１’９６７　）　）　：　（Ｓ、Ｆ、
Ｙａｎｇ　；　Ｊｌと訂正する。

（２）明細書第１８頁９行に、「ソルビトール」とちる
後に、 ｆ　（Ｃ６）　」 と加入する。

（３）明細書第１８頁下から２行に、１−ＩＣ１ｆｆｉ
）などＪとおるを、 １（ＣＩり、トリメチロールプロパン、ジペンタエリス
リトール、カラクチトールなど」 と訂正する。

（４）　明細書第１９頁１行に、「（Ｃ６）、」とある
後に、 「トリエタノールアミン、Ｎ−プチルジエタノールアミ
ン、セリンエチルエステル、ジヒドロキシエチルグリシ
ン、」 と加入する。

（５）明細書第１９頁１行にｒ（Ｃ１８）ｊとある後に
、以下のとおシ加入する。

「、Ｎ−メチルペンタノールアミン、Ｎ−メチルヘキサ
ノールアミン、Ｎ−エチルブタノールアミン、Ｎ−エチ
ルペンタノールアミン、Ｎ−エチルヘキサノールアミン
、Ｎ−プロピルブタノールアミン、Ｎ−プロピルブタノ
ールアミン、Ｎ−プロピルペンタノールアミン、Ｎ−プ
ロピルヘキサノールアミン、Ｎ−ブチルエタノールアミ
ン、Ｎ−ジブチルプロパノールアミンＮ−ブチルブタノ
ールアミン、Ｎ−ブチルペンタノールアミン、Ｎ−ブチ
ルヘキサノ−ルア、ミン、Ｎ−ペンチルエタノールアミ
ン、Ｎ−ヘキシルエタノールアミン、Ｎ、Ｎ−ジメチル
ブタノールアミン、Ｎ、Ｉ’ｊ−ジメチルペンタノール
アミン、＃、＃−ジメチルベキザノールアミン、Ｎ’、
Ｎ−ジエチルエタノールアミン、Ｎ、Ｎ−ジエチルプロ
パノールアミン、Ｎ、Ｎ−ジエチルブタノールアミン、
ＮｌＮ−ジエチルペンタノールアミン、Ｎ、Ｎ−ジエチ
ルへキサノールアミン、Ｎ、Ｎ−ジエチルエタノールア
ミン、Ｎ、Ｎ−ジプロピルプロパノールアミン、Ｎ、Ｎ
−ジエチルエタノールアミン、Ｎ。

Ｎ−ジプロピルペンタノールアミン、Ｎ、Ｎ−ジプロピ
ルヘキサノールアミン、Ａ’、Ａ’−ジブチルプロパノ
ールアミン、Ｎ、Ｎ−ジブチルブタノールアミン、Ｎ、
Ｎ−ジブチルペンタノールアミン、Ｎ、Ｎ−ジブチルヘ
キサノールアミン、Ｎ、Ｎ−ジベンチルエタノールアミ
ン、Ｎ、Ｎ−ジエチルエタノールアミン、Ｎ、Ｎ、Ｎ−
）、リメチルグロバノールアミン、Ｎ、Ｎ、Ｎ−）ジメ
チルブタノールアミン、Ｎ、Ｎ、Ｎ−）ジメチルペンタ
ノールアミン、Ｎ、Ｎ、Ｎ−トリメチルヘキサノールア
ミン、Ｎ、Ｎ、Ｎ−トリエチルエタノールアミン、Ｎ、
Ｎ、Ｎ−トリエチルエタノールアミン、Ｎ、Ｎ、Ｎ−ト
１）エチルブタノールアミン、Ｎ、Ｎ、Ｎ−ト＋）エチ
ルペンタノールアミン、Ｎ、Ｎ、Ｎ−トリエチルヘキサ
ノールアミン、Ｎ、Ｎ、Ｎ−トリプロピルエタノールア
ミン、＃、＃、Ｎ−）リプロビルプロノくノールアミン
、Ｎ、Ｎ、Ｎ−トリプロピルブタノールアミン、Ｎ、Ｎ
、Ｎ−トリプロピルペンタノールアミン、Ａ’、＃、＃
−）ジプロピルヘキサノールアミン、Ｎ、Ｎ、Ｎ−トリ
ブチルエタノールアミン、Ｎ。

＃、＃、−）リプチルプロパツールアミン、Ｎ、Ｎ。

Ｎ−トリブチルブタノールアミン、Ｎ、Ｎ、Ｎ−トリブ
チルペンタノールアミン、Ｎ、Ｎ、Ｎ−トリブチルヘキ
サノールアミン、Ｎ、Ｎ、Ｎ−トリペンチルエタノール
アミン、Ｎ、Ｎ、Ｎ−トリヘキシルエタノールアミン、
Ｎ、Ｎ−ジブチルエタノールアミン、Ｎ−（３−アミノ
プロピル）ジェタノールアミン、」 （６）明細書第１９頁３行に、ｒ（Ｃ１０）Ｊとある後
に、 「、グルコン酸、ガラクトン酸」 と加入する。

Ａ）明細書第９頁７行に、ｒ（Ｃ６）Ｊとある後に、 「、エチレングリコールモノラウレート、ジエチレンク
リコールモノラウレート、エチレンクリコ・−ルモノス
テアレート、ジエチレングリコールモノステアレート、
エチレングリコールモノオレー１’１ジエチレングリコ
ールモノオレート、エチレングリ呂−ルモノパルミテー
ト、ジエチレングリコールモノパルミテート」 と加入する。

（８）明細書第１９頁９行に、ｒ（Ｃ１１）Ｊとある後
に、以下のとおシ加入する。

「、トリーＬ−セリン、Ｌ−セリル−Ｌ−ロイシン、Ｌ
−セリル７Ｌ−メチオニン、Ｌ−セリル−Ｌ−アルギニ
ン、Ｌ−セリル−Ｌ−リジン、Ｌ−セリルーＬ−グルタ
ミン、Ｎ−カプリロイルエタノールアミン、Ｎ−カプロ
イルエタノールアミン、Ｎ−ラウロイルエタノールアミ
ン、Ｎ−ミリストイルエタノールアミン、Ｎ−バルミト
イルエタノ−＃７　ミン、Ｎ−ステアロイルエタノール
アミン、Ｎ−オレオイルエタノールアミン、Ｎ−パルミ
トオレオイルエタノールアミン、Ｎ−リノロイルエタノ
ールアミン、Ｎ−リルノイルエタノールアミン、Ｎ−ア
ラキトノイルエタノールアミン、Ｎ−エイコサノイルエ
タノールアミン、Ｎ−ドコサノイルエタノールアミン、
２ウリン酸ジエタノールアミド、ステアリン酸ジェタノ
ールアミド、オレイン酸ジェタノールアミド、パルミチ
ン酸ジェタノールアミド、トリオキシエチレンラウリン
酸アミド、テトラオキシエチレンラウリルエーテル硫酸
トリエタノールアミン、ラウリル硫酸トリエタノールア
ミン」 （９）明細書第１９頁１１行に、ｒ（（１’、）Ｊとあ
る後に、以下のとおシ加入する。

「、エチレングリコールモノラウリルエーテル、ジエチ
レングリコールモノラウリルエーテル、エチレングリコ
ールモノセチルエーテル、ジエチレンクリコールモノセ
チルエーテル、エチレンクリコールモノステアリルエー
テル、ジエチレンクリコールモノステアリルエーテル、
エチレングリコールモノセチルエーテノヘ　ジエチレン
グリコールモノオレイルエーテル、エチレンクリコール
モツプチルエーテル、エチレングリコールモノ（２−ジ
エチルアミノエチルンエーテル、エチレングリコールモ
ノヘキシルエーテル、エチレングリコールモノトリルエ
ーテル、ジエチレンクリコールモノセチルエーテルへ　
ジエチレングリコールモノヘキシルエーテル、テトラエ
チレングリコール、ペンタエチレングリコール、ヘキサ
エチレンクリニア　−／Ｌ／、オクｐエチレングリコー
ル、デカエチレングリコール、ドデカエチレングリコー
ル、ジェタノ−ル、トリグリセロール、テトラｆ’）セ
。

−ル、ペンタグリセロール、ヘキサグリセロール、ヘプ
タグリセロール、オクタグリセロール」θＩＩＪＩＩ細
書第１９細工第１９頁下、ｒ（Ｃ，）Ｊとおる後に、 「Ｌ−セリル−Ｌ−チロシン、Ｌ−セリル−Ｌ−フェニ
ルアラニン、Ｌ−セリンベンジルエステル、Ｌ−セリン
β−ナフチルアミド、Ｌ−ジニトロフェニル−Ｌ−セリ
ン、Ｎ−（１−ジメチルアミノナフタレン−５−スルフ
ォニル）−Ｌ−セリン、エチレングリコールモノベンジ
ルエーテル、エチレンクリコールモノオクチルフェノー
ルエーテル、ジエチレングリコールモノオクチルフェノ
ールニー　チル、Ｉ　チレングリ：Ｉ−ルモノノニルフ
エ／　−ルエーテル、ジエチレングリコールモノノニル
フェノールエ〜チル」 と加入する。

０υ　明細書第２０頁１０行に、ｒ（（？、）ｊとある
後に、 「、エチレングリコールモノクロロフェニルエーテル、
６−クロロ−ヘキサノール」 と加入する。

（１２１明細書簡２１頁７〜８行に、「例としては、」
とある後に、 「ガラクトノ−γ−ラクトン、」 と加入する。

σＪ　明細書第２３頁６〜７行に、ｒＣＩＯ−級アルコ
ールでする」とろろを、 「ＣＩｏ−級アルコールである」 と訂正する。

０４）明細書第３２頁７行に、［Ｂｅｃｔｅｒｉｏｌｏ
ｇｙＪとあるを、 Ｉｆ’　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　ｊと訂正する。

０口　明細書第３４頁２〜３行に、「全て利できる」と
あるを、 「全て利用できる。」 と訂正する。

翰　明細書第３７頁末行に、「螺線状」とらるを、ｒ螺
旋状」 と訂正する。

（Ｉη　明細書第９〜１０行、に、「胞子のシ」とめる
を、 「胞子のう」 と訂正する。

α＆　明細書第３７頁の表中、下から４行に、１）′−
１−ｔ９」とあるを、 Ｉｆ’　ｒＹ−１−１９Ｊｌ と訂正する。

ａ９　明細書第３９頁５行に、「Ｂｅｃｔｅｒｉｏｌｏ
ｇｙ　Ｊとあるを、 「Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　」 と訂正する。

（２０）　明細書第４２頁下から２行に、「ホスホリパ
ーゼＤ」とあるを、 「ホスホリパーゼＩ）Ｍ」 と訂正する。

（２１）　明細書箱４５頁末行の式を、以下のとおシ訂
正する。

「Ｃ１１２０ＣＯＲ ＲＣＯＯＣＨＱ　→ ＣＭ２ＯＣＯＲ ＣＨ，０−ｐ　−ＯＨ 〇−ｊ （２２）　明細書第５０頁４行に、「酸素溶液」とある
を、 「酵素溶液Ｊ と訂正する。

（２３）　明細書第５１頁７行に、［Ｆｅｃｌ、ＪＪと
あるを、 Ｉｉ′ＦｅＣＬ、Ｊｌ と訂正する。

（２４）　明細書第５１頁１１行に、［ＦｅＣ１，。

ＦｅＣｌ４、−１とあるを、 「ＦｅＳＯ４、ＦｅＣｌ３．ｊ と訂正する。

（２５）　明細簀紀５２頁下から５行に、＠ＭＱＳＯ４
」とあるを、 「Ｍｇ５Ｏ，・’ＩＥ、０３ と訂正する。

（２６）　明細書第５４頁下から２行に、「ｐｌＪＥ９
４」とあるを、 Ｆ　Ｉ）ＪＪＥＴＮ９４　Ｊｌ と訂正する。

（２７）　明細書第６０頁１０〜１１行に「−級アルコ
ール」とある後に、 「約１：１〜約ｔ：ｔｏｏｏ、好ましくはｊと加入する
。

（２８）　明細書第６０頁下から４行に、「脂質Ｉｇ当
シ」とある後に、 「約１０〜約１００．０００、好ましくは」と加入する
。

（２９）　明細書第６１頁５行に、「約２０℃」どある
前に、 「約り℃〜約９０℃、好ましくは」 と加入する。

（３０）　明細書第６１頁７行に、「約１時間」とおる
前に、 「約１分〜約１０日、好ましくは約０．１時間〜約７２
時間、更に好ましくは約１時間〜約７２時間、とくに好
ましくは」 と加入する。

（３１）　明、ｌ１ｌｌ？第６３頁６行に、「除幕剤な
ど乳化剤など」とあるを、 「除草剤などの如き農薬の乳化剤など」と訂正する。

（３２）　明細書第６７頁７〜８行に、［この際、・・
・・・形成に、」と心るを、 「上記反応液の形成に際して、」 ど訂正する。

（３３）　明細書簡６７頁下から２行に、「分取し７、
」とある後に、 ［’　３０　”Ｃで減圧乾固した後、」と加入する。

（３４）　明紹１有°第６８頁２行に、［６０Ａ２０ｘ
２０ｃｎＪとるるを、 ｆｆ’　６０Ａ、２０ｃＭＬＸ　２０ｏｎ」と訂正する
。

（３５）　明細書第７７頁５行に、「薄膜法］とめるを
、 「゛液膜法」 と訂正する。

（３６）　明細書簡７３頁の表の末尾に、以下のとおシ
加入する。

手続補正書 昭和５９年９月５日 特許庁長官　志　賀　学　殿 １、事件の表示 特願昭５８−（５３３０４号 ２、発明の名称 酵素法リン脂質−級アルコール誘導体の製法３、＠正を
する者 事件との関係　特許出願人 住　所　愛知県名古屋市西区笹塚町２−４１名　称　名
糖産業株式会社 ４、代理人　〒１０７ （ばか１名） ５、補正命令の］：１付　昭和５９年８月２８日（発送
１」）６、補正の幻象 昭（０５９年７月１１ＦＩ付提出の手続補正岩の補正の
内容の欄 ７、補正の内容 別紙のとおり （１）　昭和５９年７月１１日付提出の手続補正書の補
正の内容（７）に「明４’ｌ　ホ１”＝　”頁７行」と
あるを「明細書第１９頁７行」と補正する。

（２）同補正の内容（１７）に「明雑書第９〜１０行」
とあるを「明細書第３５貞９〜ｌＯ行」と補正する。

以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　下記式（１） ％式％（１） 但し式中、Ａｌ１−１：下記（１）又は（１１）を示し
   、ここで、Ｒ８及びＲ，は共に一〇−ＣＵＲ，□である
   か、もしくは共に一〇　−Ｒ、、であるか、もしくは式
   （１）において１７、と１ヒ２ｎは１１〜１９の数を示
   す〕を−衣わし、上記に於て、Ｒ１，及びＲ１２ｉｔ回
   −ても異っていてもよく、夫々、Ｃ７〜Ｇ２＋の飽和も
   しくは不廂和の徐≠崩肋跣炭化水系祐を示し。 十 ＢＬ↓−（Ｃ１ｉ、　）、、Ｎ　（Ｃツノ、）８、　−
   （Ｃ１ｉ、）、Ｎｌｉ、　。 −ＣＨ２ＣＢ（ＮＨ，）ＣＯＯ１１，−Ｃ１ｉ、Ｃ１ｉ
   、ＮＨ（Ｃ）Ｊ３）。 −Ｃ１ｉ２Ｃ；１ｉ２Ｎ（ＣＢ、’）、　、　−Ｃ１ｉ
   、ＣＨＯＨＣノｉ、ＯＨもしくば−（ｃ、＃２）Ｈ〔こ
   こで、クンＬは１〜５の故？ｌＺ を示す〕を示す。 で表わされるリン月酋値と、下記式（ｎ）Ｒ−ＯＨ・・
   ・・・（Ｉｆ） 但し式中、ノヒは下記（１）〜（３）よりなる杯からえ
   らばれた負を示す、 ＋１）　Ｃ６（ただし、ヘキサノールを除く）〜Ｃ２゜
   のＭ和もしくは不妃オＵの脂肪族又は芳杏族炭化水素銭
   基、ここで該炭化水素残基はハロゲン、アミン、アセチ
   ル及び水畝基より選ばれた置換基で直換されていてもよ
   い。 又は 分子内にエーテル、エステル及びアミド結合よりなる群
   からえらばれた結合を有する上記炭化水素残基、 （２）　プレグナン系ステロイド化合物残是。 （３）　ガラクトノ−γ−ラクトン、ＮＣ２−ヒドロキ
   シエチル）フタルイミド、２− （３−インドール）エタノール、２− （２−ヒドロキシエチル）ピリジン、ピリドキシン、Ｎ
   （２−ヒドロキシエチル）モルホリン、５−ヒドロキシ
   メチルシトシン、シチジン、ウリヅン、アラビノシチヅ
   ン、チアミ・ン、２−（２−ヒドロキシエチル）ビペラ
   ソン、アデノシン、グアノシン及びサイクロシチジンよ
   り成る群からえらばれ／こ複系猿化合物残基。 で表わされる一級アルコールとを、ホスホリパーゼＤＭ
   の存在下に反応８ぜることを剌・源とする下口１式　（
   ｍ） １ Ａ−０−Ｐ−Ｕ−Ｒ・・・（ＩＩＩ） １１ 但し式中、Ａ及びＩＩ／よ上記したと凹状である。 で表わされるリン１１１イ質−ｉ（技アルコール誘辱体
   の製法。