JPH02227132A - リポソーム形成剤及びリポソーム - Google Patents

Abstract

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め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、新規なリポソーム形成剤及び微細で安定なリ
ポソームに関する。

〔従来の技術及び発明が解決しようとする課題〕脂質二
重膜の一重あるいは多重の球殻からなるリポソームは、
薬効成分のキャリアーとして注目されている。リポソー
ムを薬物担体として用い、静脈注射等により生体への投
与を目的とするとき、リポソームの粒径は小さい方が望
ましいことが多い。リポソーム形成剤としては天然リン
脂質がよく知られているが、通常、天然リン脂質を水に
投入しただけでは粒径の大きな（直径１〜５μｍ）多重
膜リポソームを形成し、均一で粒径が小さく安定なリポ
ソーム分散液を得ることはできない。

従来知られている粒径の小さなリポソームの製造法とし
ては、超音波処理による方法、界面活性剤との混合系か
ら透析などにより界面活性剤を除去する方法、脂質のエ
タノール溶液を水中に注入する方法、逆ミセル法などが
ある。これらの方法は、例えば、エル・ニス・ラオ（Ｌ
、　Ｓ、Ｒａｏ）　ｒリポソーム、テクノロジー（Ｌｉ
ｐｏｓｏｍｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）Ｊ、ジー・ダレ
ボリアディス（Ｇ、Ｇｒｅｇｏｒ　ｉａｄ　ｉｓ）編、
ＣＲＣＰｒｅｓｓ、　Ｆｌｏｒｉｄａ　、　（１９８４
）、第１巻、１８章、２４７−２５７にまとめられてい
る。しかし、超音波照射法、界面活性剤除去法及び逆ミ
セル法による小さなリポソームの製造法は、実験室レベ
ルでの調製法にすぎず、工業的大量生産には適さない。

また、脂質のエタノール溶液を水中に注入する方法では
、低濃度のリポソームしか得られないと共に、長期間保
存してお（と元の大きな多重膜リポソームに戻ってしま
うなどの問題があった。

かかる問題点を解決するための種々の研究がなされ、例
えば、ニンハム（Ｎｉｎｈａｍ）及ヒエバンス（Ｂｖａ
ｎｓ）、（ファラデー・ディスカス・ケミカル・ソサイ
エティ−（Ｆａｒａｄａｙ　Ｄｉｓｃｕｓｓ　Ｃｈｅｍ
、Ｓａｃ、）、８１：１　　（１９８６））には、水酸
イオンあるいは酢酸イオンを対イオンとして有するジド
デシルジメチルアンモニウムカチオンが、半径的３０ｎ
ｍの小さなリポソームを形成することが報告されている
。しかし、この方法では小さなリポソームを形成するた
めに必要なリポソーム形成剤の濃度が狭い範囲に限られ
ている。しかも、リポソーム形成物質がカチオン性界面
活性剤であるので、生体への投与には適さないものであ
った。

従って、粒径が小さく、安定で、しかも人体に対して安
全なリポソームを工業的有利に大量生産する方法が望ま
れていた。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは、このような情況において鋭意検討を重ね
た結果、水に分散きせただけで粒径が小さく、しかも安
定なリポソームを形成するリポソーム形成剤を得ること
に成功し、本発明を完成したものである。

すなわち本発明は、次の成分（ａ）及びら）（ａ）　　
水溶性塩及び／または界面活性剤の存在する水溶液中で
安定な小粒径リポソームを形成する有機リン化合物 （ハ）水溶性塩及び／または界面活性剤からなるリポソ
ーム形成剤及びこれにより容易に得られるリポソームを
提供するものである。

本発明の目的を達成することのできる有機リン化合物と
しては、例えば次の一般式（１）で表わされるものが挙
げられる。

ここにおいて、＾は次式（ｉ）又は（ｉｉ　）で表わさ
れる基である。

（ｉ）　　　　　　　　　　（ｉｉ） ［Ｒｔ及びＲ３は、同一もしくは異なって、それぞれ−
ＤＣ（ｌＲ３及び／または−［１１？、　（Ｒｓ及びＲ
１は同一もしくは異なって、それぞれＣ６〜Ｃ３２、好
ましくはＣＩｌ〜Ｃ２４のアルキル基またはアルケニル
基を示す）を示すか、（ｉ）の場合にはＲ１とＲ１が一
緒になって次の基 （ｎはＩＩ〜１９の整数ンを形成してもよい。〕 Ｍは水素原子、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属
、カルシウム、マグネシウム等のアルカ！Ｊ　土類金属
、アンモニウム、アルキルアンモニウムまたはアルカノ
ールアンモニウムを示す。

また、Ｂは下記（１）〜（３］のいずれかの化合物Ｂ−
ＯＲの残基を示す。

（１）　　　ＨＯ−（Ｙ−０）、−Ｘ （式中、Ｘは水素原子またはＣＩ＝　Ｃｓ　ｓのアルキ
ル基、アルケニル基もしくはアシル基、好ましくは水素
原子、メチル基、エチル基、プロピル基、アセチル基等
を示し、Ｙは置換基を有してもよいＣ３〜Ｃ４のアルキ
レン基を示し、ｎは２〜５０．好ましくは２〜２０の整
数を示す） 例えば、平均分子量４００のポリエチレングリコール（
ＰＢ６４００）、平均分子量６００のポリエチレングリ
コール（ＰＢ６６００）、平均分子量２００のポリプロ
ピレングリコール（ＰＰＧ２００）等が挙げられる。

（２）ポリグリセリン（縮合度２〜５０、好ましくは２
〜２０） 例えば縮合度２のジグリセリン、平均分子量５００のポ
リグリセリン（ＰＧ５００）、平均分子量７５０のポリ
グリセリン（ＰＧ７５０）等が挙げられる。

（３）　　アミノ基もしくはアセチルアミノ基で置換さ
れていてもよい、３個以上の水酸基を有するＣ５〜Ｃ１
の単糖類もしくはその糖アルコール、二糖類またはこれ
らのフェノール配糖体 例えば単糖類としてはＤ及びＬ−アラビノース、Ｄ−リ
ボース、２−デオキシ−Ｄ−リボース、Ｄ−リキソース
、Ｄ−キシロース、Ｄ及びＬ−リブロース、Ｄ及びＬ−
キシルロース、αまたはβ−メチルキシロサイド、２−
０−メチルキシロース、β−メチル−ＤまたはＬ−アラ
ビノサイド、２−デオキシ−〇−グルコース、Ｄ−グル
コース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−マンノース、Ｌ−ソル
ボース、Ｄ−タロース、Ｄ−フラクトース、αまたはβ
−メチルガラクトサイド、αまたはβ−メチルグルコサ
イド、αまたはβ−メチルマンノサイド、３−０−メチ
ルグルコース、ｌ−チオ−β−ガラクトース、β−チオ
グルコース、５−チオグルコース、メチル−β−チオガ
ラクトサイド、エチル−β−チオグルコサイド、ハイド
ロキシエチル−１−チオ−ガラクトサイド、２−デオキ
シガラクトース、α−クロラロース、Ｄ−α−グルコヘ
プトース、セドヘプツロース、Ｄ−グルコヘプツロース
、Ｄ−マンノヘプツロースなどを例示でき、また、アミ
ノ糖としては、Ｄ−ガラクトサミン、Ｄ−グルコサミン
、Ｄ−マンノサミン、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミ
ン、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン、Ｎ−アセチル−
Ｄ−マンノサミン、メチル−３−アミノ−３−デオキシ
−β−グルコサイド、メチル−３−アミノ−３−デオキ
シ−β−マンノサイド、ストレプトシトシンなどを例示
できる。また、糖アルコールとしては例えばリビトール
、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、マンニ
トール、ガラクチトール、セドヘプツロース、ベルセイ
トール等が例示できる。さらに、二糖類としてはマルト
ース、セロビオース、ゲンチビオース、Ｎ、Ｎ’−ジア
セチルキトビオース、ラクトース、スクロース、メリヒ
オース、イソマルトースなどが例示できる。さらに、フ
ェノール配糖体としては、サリシン、アルブチン、１−
〇−フェニルーαまたはβ−グルコサイド、１−〇−フ
ェニルーαまたはβ−ガラクトサイド、０−ニトロフェ
ニル−αまたはβ−ガラクトサイド、ｍ−ニトロフェニ
ル−αまたはβ−ガラクトサイド、ｐ−ニトロフェニル
−αまたはβ−ガラクトサイド、ｐ−ニトロフェニル−
αまたはβ−グルコサイド、０−ニトロフェニル−αま
たはβ−グルコサイド°、ｐ−ニトロフェニル−αまた
はβ−マンノサイド、ｐ−ニトロフェニル−１−−Ｆ−
オーβ−ガラクトサイド、０−ニトロフェニル−１−チ
オ−β−ガラクトサイド、ｐ−ニトロフェニル−１−チ
オ−β−グルコサイド、０−ニトロフェニル−β−キシ
ロサイド、ｐ−ニトロフェニル−β−キシロサイド、フ
ェニル−αまたはβ−チオガラクトサイド、マンデルニ
トリルグルコサイドなどを例示できる。

より好ましい有機リン化合物としては、前記式（１）中
、Ａが前記式（ｉ）で表わされ、しかも、前記式（ｉ）
中Ｒ３及びＲ３が例えばラウロイル、ミリストイル、バ
ルミトイル、ステアロイル、オレオイル、リルオイル、
リルノイル、アラキトノイル、ドコサヘキサノイル、エ
イコサペンタノイルなどの組合せであるか、あるいは、
前記式（１）中、Ａの組成が卵黄組成、大豆組成等、天
然リン脂質由来のＲ，及びＲ３を持っホスファチジルグ
ルコース、ホスファチジルマンノース、ホスファチジル
ＰＢ６４００、ホスファチジルＰＢ６６００．ホスファ
チジルジグリセリン、ホスファチジルＰＧ５００゜ホス
ファチジルＰＧ７５０、ホスファチジルソルビトール、
ホスファチジルマルトースなどが挙げられる。

ここで示された有機リン化合物の多くは、天然に存在す
る、あるいは合成されたリン脂質から、前記式（１）中
桟基Ｂを目的のものに置換することにより合成される。

この合成反応は、ホスホリパーゼＤと呼ばれる酵素を用
いた反応により効率よく行われる。この酵素については
、例えば、日本生化学全編、〔続生化学実験講座、（東
京化学同人）、第３巻、２３５　（１９８６）］や］開
開昭６０−４１４９４公報などに記載されている。

本発明に使用される水溶性塩としては、室温において１
０−’Ｍ以上水に溶解する無機塩または有機塩が好まし
い。無機塩としては、例えば対イオンとしてアルカリ金
属イオン、アンモニウムイオン等を有する、塩酸、硝酸
、硫酸、リン酸、炭酸、臭素酸、ヨウ素酸等の塩、好ま
しくは、臭化カリウム、塩化カリウム、リン酸二水素カ
リウム、リン酸水素二カリウム、硫酸カリウム、ヨウ化
カリウム、硝酸カリウム、臭化リチウム、塩化リチウム
、ヨウ化リチウム、硝酸リチウム、硫酸リチウム、臭化
アンモニウム、塩化アンモニウム、炭酸アンモニウム、
炭酸水素アンモニウム、リン酸二水素アンモニウム、リ
ン酸水素二アンモニウム、ヨウ化アンモニウム、硝酸ア
ンモニウム、硫酸アンモニウム、臭化ナトリウム、炭酸
ナトリウム、塩化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、リ
ン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、硝酸
ナトリウム、リン酸ナトリウム、硫酸ナトリウムなどが
挙げられる。有機塩としては、例えば、アルカノールｆ
ミンの塩酸、硫酸、リン酸等の塩、または、対イオンと
してアルカリ金属イオン、アンモニウムイオン等を有す
る、安息香酸、酢酸、サリチル酸、シニウ酸、フタル酸
、グルコン酸、ｌ−ナフタレンスルホン酸、２−ナフタ
レンスルホン酸、酒石酸、マレイン酸、マロン酸、コハ
ク酸、フマル酸、プロピオン酸、アスコルビン酸、マン
デル酸、リンゴ酸、クエン酸等の塩、好ましくは塩化ト
リエタノールアンモニウム、リン酸二水素トリエタノー
ルアンモニウム、硫酸トリエタノールアンモニウム、安
息香酸ナトリウム、安息香酸カリウム、安息香酸アンモ
ニウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、酢酸アンモニ
ウム、サリチル酸ナトリウム、サリチル酸カリウム、サ
リチル酸アンモニウム、シュウ酸カリウム、シュウ酸ナ
トリウム、シュウ酸アンモニウム、フタル酸ナトリウム
、フタル酸カリウム、フタル酸アンモニウム、グルコン
酸カリウム、グルコン酸アンモニウム、グルコン酸ナト
リウム、１−ナフタレンスルホン酸アンモニウム、２−
ナフタレンスルホン酸カリウム、２−ナフタレンスルホ
ン酸アンモニウム、２−ナフタレンスルホン酸ナトリウ
ム、酒石酸カリウム、マレイン酸ナトリウム、マレイン
酸カリウム、マロン酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム
、フマル酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、プロ
ピオン酸トリエタノールアンモニウム、アスコルビン酸
ナトリウム、アスコルビン酸トリエタノールアンモニウ
ム、アスコルビン酸カリウム、マンデル酸ナトリウム、
リンゴ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸カ
リウム、クエン酸トリエタノールアンモニウムなどが挙
ケられる。

より好ましい塩としては、塩化ナトリウム、硫酸ナトリ
ウム、炭酸水素ナトリウム、塩化アンモニウム、硫酸ア
ンモニウム、酢酸ナトリウムなどが挙げられる。

水溶性塩（５）は、有機リン化合物（ａ）に対し、モル
比で（ａ）　／　（ｂ）が１０−３〜１０３、特に０．
１〜１０の使用量が好ましい。また、水溶性塩の溶解し
た水中でイオン強度が約１０−４〜ｌ　ｍａｔ／　１　
、特に１０−’〜０．１　ｍｏｌ／　１となるようにす
るのが好ましい。

本発明に使用される界面活性剤としては、アニオン性界
面活性剤、カチオン性界面活性剤、非イオン性界面活性
剤及び両性界面活性剤のいずれでもよく、その種類及び
配合量は、なんら限定されるべきものではないが、好ま
しくは界面活性剤ら）を有機リン化合物（ａ）に対し、
モル比で（ａ）／（５）が１０−３〜１０３、さらに０
．５〜１０．０程度、特に１〜ｌＯ程度となるように加
えるのが好ましい。

アニオン性界面活性剤としては、例えばアルキル硫酸塩
、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ステアリン酸塩、バ
ルミチン酸塩、ミリスチン酸塩、オレイン酸塩、ヘキサ
デカジエン酸塩、ヘキサデカトリエン酸塩、ヘキサデカ
テトラエン酸塩、リノール酸塩などのオクタデカジエン
酸塩、リルン酸塩などのオクタデカトリエン酸塩、アラ
キドン酸塩などのエイコサテトラエン酸塩、エイコサペ
ンタエン酸塩、ドコサヘキサエン酸塩、アルキルリン酸
塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸塩、ポ
リオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ジアルキル
リン酸塩など、好ましくは、ジセチルリン酸ナトリウム
、ジセチルリン酸トリエタノールアンモニウム、２−デ
シルテトラデシルリン酸ナトリウムなどが挙げられる。

カチオン性界面活性剤としては、例えばモノアルキルト
リメチルアンモニウム塩やジアルキルジメチルアンモニ
ウム塩など、好ましくは、セチルトリメチルアンモニウ
ムブロマイドやジステアリルジメチルアンモニウムクロ
ライドなどが挙げられる。

非イオン性界面活性剤としては、例えばポリオキシエチ
レンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフ
ェニルエーテル、グリセリンアルキルエーテル、ソルビ
タン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂
肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸
エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ポリ
グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、フ
ラクトースまたはグルコース等の脂肪酸エステル、グリ
セリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エス
テル、ポリオキシエチレンアルキルアミン グリセリルエーテル、ソルビタンモノステアレート、オ
レイン酸グリセロールエステルなどが挙げられる。また
、コレステロールなど非常に疎水性の高いものも非イオ
ン性界面活性剤に含めて考えることができる。

両性界面活性剤としては、例えばアルキルベタイン、ホ
スホベタイン、スルホベタイン、天然及び合成のホスフ
ァチジルコリンやホスファチジルエタノールアミンなど
、好ましくは、ステアリルホスホベタイン、ジパルミト
イルホスファチジルコリンなどが挙げられる。

本発明において、有機リン化合物並びに水溶性の塩及び
／または界面活性剤を分散させるべき水は、有機リン化
合物に対し、好ましくは１０〜１０４重量倍程度、より
好ましくは２０〜１０３重量倍程度となるよう使用する
のが適している。

本発明にふける小さなリポソーム形成の方法は、有機リ
ン化合物並びに水溶性の塩及び／または界面活性剤を適
当量の水中に投入し、緩やかに攪拌することによる。リ
ポソーム調製時の温度は室温でよいが、一般に、４０〜
８（ｌで行った方が効率はよい。また、有機リン化合物
並びに水溶性の塩及び／または界面活性剤の水中への投
入佳作において、その投入方法及び投入順序はＭ限され
ない。例えば、水溶性の塩及び／または界面活性剤をあ
らかじめ有機リン化合物と混合しておいてもよいし、ま
ず塩水溶液及び／または界面活性剤の分散液をつくり、
後から有機リン化合物を投入してもよい。

従来の方法により形成されたリポソームの平均直径は、
普通１〜５μのであるが、本発明のリポソーム形成剤を
用いると、平均直径５００ｎｍ以下の小さなリポソーム
を形成することが可能である。

本発明の第２の目的は、一般式（Ｉ）で示される有機化
合物を膜構成成分とするリポソームを提供するものであ
る。

本発明のリポソームに封入する物質は特に限定されず、
疎水性物質でも親水性物質でもよく、あるいは両者の混
合物でもよい。リポソームに封入する物質としては、例
えば、ビタミンＡ　、　Ｂ、、Ｂ３、Ｂ６．８１２、Ｃ
，０、Ｂ、Ｆ、Ｈ，に、ＭＳＱなどとその誘導体、アン
トラニル酸、アデニルチオメチルペントース、ヘスベリ
ジン、ヘスペリチン、グリセリン、ニトログリセリン、
グルコース、スクロース、フルクトース、尿素、副腎皮
質ホルモン、ε−アミノカプロン酸、グリチルレチン酸
とその誘導体、卵胞ホルモン、アラントイン、塩化ベン
ザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ハロカルパン、２
．２．４−トリクロロ−２〜とドロキシフェノール、カ
ンフル、メントール、塩化ヒドロキシアンモニウム、グ
ルタチオンとその誘導体、メチル−２，５−ジイソプロ
ピル桂皮酸エステル、パラアミノ安息香酸エステル、ウ
ンデシレン酸とそのエステル、ビス（２−ピリジルチオ
ール−１−オキシト）亜鉛、アミノフェノール型抗ヒス
タミン剤、エストラジオール、エチルエストラジオール
、サリチル酸及びその誘導体、レジルシン、ヒノキチオ
ール、ニコチン酸ベンジル、パントテニールアルコール
、パントテン酸カルシウム、塩酸ジフェンヒドラミン、
イソプロピルメチルフェノール、塩化クロルヘキシジン
、アラントインクロルヒドロキシアルミニウム、パラベ
ンエステル、ホモスルファミン、スコポラミン、クロニ
ジン、硫酸イソソルビド、５−フルオ゛ロウラシル、プ
ロスタグランジン、プロスタサイクリン、ロイコトリエ
ン、天然アミノ酸及びその誘導体、エストロゼン、アン
ドロゼン、チロキシン、脳下垂体ホルモン、脳下垂体後
菓抽出物、胸腺ホルモン、胎盤性コナドトロピン、ヒア
ルロンＲ１：）ン）’ｉ：Ｉイチン酸、塩化カプロニウ
ム、アセチルコリン、糖リン酸エステル、例えば、グル
コース−１−リン酸、グルコース−６−リン酸、マンノ
ース−６−リン酸、ガラクトース−６−リン酸、フルク
トース−６−リン酸、グルコース−１，６−ニリン酸、
フルクトース−１，６−二リン酸、フルクトース−２，
６−二リン酸など、またはそれらのナトリウム、カリウ
ムなどのアルカリ金属塩などが挙げられる。

本発明における封入物質の濃度は何ら限定されないが、
リポソーム形成に用いる水に対し、１０−６〜３０重量
％程度が好ましい。

封入物質の投与方法としては、有機リン化合物並びに水
溶性の塩及び／または界面活性剤の混合物に封入物質を
混合しても良いし、また、水中にあらかじめ封入物質を
溶かしておいてもよい。更に、塩水溶液あるいは界面活
性剤の分散液中に混合しておいてもよい。

〔実施例〕

次に実施例により本発明を説明するが、これらの実施例
はなんら本発明を限定するものではない。

実施例１ まず、０．０１Ｍ硫酸す）　ＩＩウム水溶液を調製した
。

この硫酸ナトリウム水溶液に、グルコース濃度が０、０
５６Ｍとなるようにグルコースを溶かし、グルコース−
塩水溶液を調製した。６０ｍｇのジパルミトイルホスフ
ァチジルＰＢ６４００　（以下叶Ｐ−ＰＢ６４００と略
す）に上記グルコース−塩水溶液６ｇを加え、湯浴上駒
５０℃に加温しつつマグネティックスターラーで攪拌し
た。均一に分散したのち、攪拌しつつ室温に戻したとこ
ろ、薄青く濁ってはいるがほとんど透明なリポソーム溶
液が得られた。この溶液について、粒径測定機（サブミ
クロン粒子分析装置、Ｃｏｕｌｔｅｒ社製モデルＮ４）
を用いて測定したリポソームの平均直径は４１ｎｍであ
った。また、このリポソーム溶液は室温で約１カ月間変
化せず、安定であった。

この溶液をセファデックスＧ　５０−Ｍｅｄｉｕｍを用
いてゲル濾過（２Ｃ１１φＸ３０ｃｍ、室温）し、リポ
ソームとリポソームに保持されなかったグルコースを分
離した。リポソームの溶出している分画についてグルコ
ース濃度とＤＰＰ−ＰＢＧ４００濃度を定量したところ
、グルコース濃度は１．８Ｘ　１０−’Ｍ。

叶Ｐ−ＰＢＧ４００濃度は４．５Ｘ　１０−３Ｍであっ
た。−これより、このリポソームのトラップ体積を口Ｐ
Ｐ−ＰＢＧ４００のモル当りで表わすと、０．０７１　
／　ｍｏｌである。

実施例２ まず、０．０１Ｍ硫酸アンモニウム水溶液を調製した。

この硫酸アンモニウム水溶液に、グルコース濃度が０．
０５６Ｍとなるようにグルコースを溶かし、グルコース
−塩水溶液を調製した。ジパルミトイルホスファチジル
グルコース（以下ＤＰＰ−グルコースと略す）６０ｍｇ
に上記グルコース−塩水溶液６ｇを加え、湯浴上的５０
℃に加温しつつマグネティックスターラーで攪拌した。

均一に分散したのち、攪拌しつつ室温に戻したところ、
薄く白濁したリポソーム溶液が得られた。この溶液につ
いて測定されたリポソームの平均直径は約３８０ｎｏ＋
であった。このリポソーム溶液は約２週間変化せず、安
定であった。

この溶液を実施例１と同様にしてゲル濾過した。

リポソームの溶出している分画についてグルコース濃度
と叶Ｐ−グルコース濃度を定量したところ、グルコース
濃度は５．　ＩＸ　１０−’Ｍ、ロＰＰ−グルコース濃
度は５．８Ｘ　１０−３Ｍであった。これより、このリ
ポソームのトラップ体積をＤＰＰ−グルコースのモル当
りで表わすと、０．１６１／ｍｏｌである。

比較例１ リポソーム形成剤として、ジパルミトイルホスファチジ
ルコリン（以下口ＰＰ−コリンと略す）を用い、これを
実施例２と同様にして０．０５６Ｍグルコース−０，０
１Ｍ！酸アンモニウム塩水溶液に混合し、湯浴上的５０
℃に加温しつつマグネティックスターラーで攪拌した。

均一に分散した後、攪拌しつつ室温に戻したところ、白
濁したリポソーム溶液が得られた。

この溶液を、実施例１または実施例２と同様にしてゲル
濾過を行った。リポソームの粒径分布が広いため、リポ
ソームの分画は広い範囲にわたった。さらに、リポソー
ムを含む分画についてグルコース濃度及びＤＰＰ−コリ
ン濃度の定量を行ったところ、ロＰＰ−コリン濃度は３
Ｘ１０−’Ｍ、グルコース濃度は３．ＯＸ　ｌ　Ｏ−’
Ｍであった。これより、このリポソームのトラップ体積
を叶Ｐ−コリンのモル当りで表わすと、０．１８１７ｍ
ｏｌである。

ゲル濾過前の溶液を室温で約３０分間静置しておくと、
白色の沈澱を生じ、リポソームの安定性に乏しいことが
分かった。また、この沈澱を光学顕微鏡で観察したとこ
ろ、粒子直径は１〜５μｍであった。

実施例３ リポソームの形成を電子顕微鏡観察により確認した。３
０ｍｇの［１ＰＰ−ＰＢＧ４００を０．０１Ｍの硫酸ア
ンモニウム水溶液３ｍｊ！に溶解した。この溶液につい
て、リン−タングステン酸を染色剤として染色し、透過
型電子顕微鏡観察を行ったところ、平均直径的１２０ｎ
ｍの一重のリポソームが観察された。このリポソームの
直径は、粒径測定機を用いて測定した値とよく一致して
いた。

実施例４ 有機リン化合物と水溶性塩の混合系について、実施例１
〜３と同様に行った。用いた有機リン化合物、有機リン
化合物の濃度（重量％）、水溶性塩、水溶性塩濃度（Ｍ
）、活性物質、活性物質濃度（Ｍ）、平均粒子直径及び
有機リン化合物モル当りのトラップ体積を表１に示す。

以下余白 実施例５ ０ＰＰ−グルコース３９ｍｇと２−デシルテトラデシル
リン酸ナトリウム２５ｆｆｉｇをクロロホルム−メタノ
ール（２：１）混合溶媒に溶かして均一溶液とした後、
減圧濃縮乾固して有機溶媒成分を完全に除去した。こう
して得た均一な固型物に０．１６’ｉ１Ｍ尿素水溶液約
３．５ｇを加え、湯浴上駒５０℃に加温しつつマグネテ
ィックスターラーで攪拌した。

均一に分散した後、攪拌しつつ室温に戻したところ、薄
青く濁ってはいるがかなり透明なリポソーム溶液が得ら
れた。この溶液について測定されたリポソームの平均直
径は、約２４０ｎｍであった。

この溶液を実施例１と同様にしてゲル濾過した。

リポソームの溶出している分画について、リンと尿素の
定量を行ったところ、リン濃度は１．３Ｘ１０−’Ｍ、
尿素濃度は２．４Ｘ　１０−’Ｍテあった。

これより、このリポソームのトラップ体積をリンのモル
当りで表わすと０．１１１／ｍｏｌである。

実施例６ ジパルミトイルホスファデジルソルビトール（以下ＤＰ
Ｐソルビトールと略す）３１ｍｇとジパルミトイルホス
ファチジルコリン２６ｍｇをクロロホルム−メタノール
（２：　１）混合溶媒に溶かして均一溶液とした後、減
圧濃縮乾固して有機溶媒成分を完全に除去した。こうし
て得た均一な固形物に０．０５６Ｍグルコース水溶液約
５．６ｇを加え、湯浴上駒５０℃に加温しつつマグネテ
ィックスターラーで攪拌した。均一に分散した後、攪拌
しつつ室温に戻したところ、薄青く濁ってはいるが、は
ぼ透明なリポソーム溶液が得られた。この溶液について
測定されたリポソームの平均直径は、約１２５ｎｍであ
った。

この溶液を実施例１と同様にしてゲル濾過した。

リポソームの溶出している分画について、リンと尿素の
定量を行ったところ、リン濃度は４．０×１０−’Ｍ、
グルコース濃度は２．　ＩＸ　１０−’Ｍであった。こ
れより、このリポソームのトラップ体積をリンのモル当
りで表わすと、０．９５１　／　ｍｏｌである。

実施例？ 有機リン化合物と界面活性剤の混合系について、実施例
５及び６と同様に行った。用いた有機リン化合物、有機
リン化合物の濃度（重量％）、界面活性剤、界面活性剤
の濃度（重量％）、活性物質、活性物質濃度（Ｍ）、平
均粒子直径及びリンのモル当りのトラップ体積を表２に
示す。

以下余白 実施例８ ６０＋ａｇのＤＰＰ−ＰＢＧ４０Ｇと３■のメントール
の混合物に、０．０１Ｍの炭酸水素ナトリウム水溶液を
加え、湯浴上的５０℃に加温しつつマグネティックスタ
ーラーで攪拌した。均一に分散した後、攪拌しつつ室温
に戻したところ、薄白く濁ってはいるがほぼ透明なリポ
ソーム溶液が得られた。この溶液について、測定された
リポソームの平均直径は約２９０　ｎｍであった。

この溶液を実施例１と同様にしてゲル濾過した。

分かれた各フラクションについて、ＤＰＰ−ＰＢＧ４０
０とメントールの分析を行ったところ、ＤＰＰ−ＰＢＧ
４００の溶出しているフラクションにメントールも検出
され、メントールがリポソームに封入されていることが
確認された。

実施例９ ６０ｍｇの叶Ｐ−グルコースと３　ｍｇのブチルパラベ
ンの混合物に、０．０２Ｍの塩化す）　ＩＪウム水溶液
を加え、湯浴上的５０℃に加温しつつマグネテイックス
ターラーで攪拌した。均一に分散した後、攪拌しつつ室
温に戻したところ、薄白く濁ってはいるがほぼ透明なリ
ポソーム溶液が得られた。この溶液について、測定され
たリポソームの平均直径は約３３０ｒ＋ｍであった。

この溶液を実施例１と同様にしてゲル濾過した。

分かれた各フラクションについて、叶Ｐ−グルコースと
ブチルパラベンの分析を行ったところ、ＤＰＰ−グルコ
ースの溶出しているフラクションにブチルパラベンも検
出され、ブチルパラベンがリポソームに封入されている
ことがｍｕされた。

〔発明の効果〕

本発明のリポソーム形成剤は、水と混合し、攪拌しただ
けで自然に粒径の小さなリポソームを形成することがで
きる。本発明を用いて製造した小さなリポソームは、従
来の方法によって製造したもの（例えば超音波照射によ
り得られたもの）よりも安定である。また、本発明によ
る粒径の小さなリポソームの製造法は、簡便で、従来の
方法に必要な機械的操作や界面活性剤の除去などに煩わ
されることがない。すなわち、本発明は、従来の課題で
あったリポソームの大きさ、大量生産性、保存安定性に
対する問題点をすべて解決しているもので、その利用価
値は大きく、医薬品等に好適に用いれらる。

以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の成分（ａ）及び（ｂ） （ａ）水溶性塩及び／または界面活性剤の存在する水溶
   液中で安定な小粒径リポソームを形成する有機リン化合
   物 （ｂ）水溶性塩及び／または界面活性剤 からなるリポソーム形成剤。 ２、有機リン化合物が、次の一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中、Ａは次式（ｉ）又は（ｉｉ）の基を示す。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ｉ）　▲数式、化
   学式、表等があります▼（ｉｉ） Ｒ＿１及びＲ＿２：同一もしくは異なって、それぞれ−
   ＯＣＯＲ＿３及び／または−ＯＲ＿４（Ｒ＿３及びＲ＿
   ４は同一もしくは異なって、それぞれＣ＿６〜Ｃ＿３＿
   ２のアルキル基またはアルケニル基を示す）を示すか、
   （ｉ）の場合には、Ｒ＿１とＲ＿２が一緒になって次の
   基▲数式、化学式、表等があります▼ （ｎは１１〜１９の整数） を形成してもよい。 Ｍは水素原子、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アン
   モニウム、アルキルアンモニウムまたはアルカノールア
   ンモニウムを示す。 Ｂは下記（１）〜（３）のいずれかの化合物Ｂ−ＯＨの
   残基を示す（ただし、−ＯＨは一級アルコールを示す）
   。 （１）ＨＯ−（Ｙ−Ｏ）＿ｎ−Ｘ （Ｘは水素原子またはＣ＿１〜Ｃ＿３＿２のアルキル基
   、アルケニル基もしくはアシル基を示し、Ｙは置換基を
   有してもよいＣ＿２〜Ｃ＿４のアルキレン基を示し、ｎ
   は２〜５０の整数を示す） （２）ポリグリセリン（縮合度２〜５０） （３）アミノ基もしくはアセチルアミノ基で置換されて
   いてもよい、３個以上の水酸基を有するＣ＿５〜Ｃ＿７
   の単糖類もしくはその糖アルコール、二糖類またはこれ
   らのフェノール配糖体〕 で表わされるものである請求項１記載のリポソーム形成
   剤。 ３、請求項２記載の有機リン化合物（ I ）を膜構成成
   分とするリポソーム。 ４、請求項１または２記載のリポソーム形成剤を用い、
   有効活性成分を含有せしめたリポソーム。 ５、平均直径が５００ｎｍ以下である請求項３または４
   記載のリポソーム。