JPS6236195A - ホスファチジル基転位方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ＋ａ＋産業上の利用分野 本発明は、リン脂質とアルコール類を、ホスホリパーゼ
Ｄおよび特定量の水の存在下に反応させることを特徴と
するホスファチジル基転位方法に関するものであり、こ
の転位反応を利用することによって混合リン脂質の濃縮
および新規なリン脂質誘導体を製造することができる。

（ｂｌ従来の技術 リン脂質は、各種生体から単離、濃縮することができ、
また化学的合成法によっても製造は可能であり、産業的
には両方法から製造した製品が利用されている。しかし
ながら、前者の方法（生体からの濃縮）ではかなりの高
濃度まで精製することは可能であるが、単一成分を得よ
うとすれば溶剤法、カラムクロマト法などを用いなけれ
ばならず、このために製造コスト・アップとなり、また
後者の方法（化学的合成法）では単一成分を製造するこ
とは可能であっても、合成時の熱履歴のために結合脂肪
酸およびリン酸エステルが劣化２着色し、その精製では
煩雑かつ、経済的に不利な工程を採用せざるを得ないの
が現状である。

リン脂質を酵素的に変換する試みは従来から研究が行わ
れている。たとえば、レシチンとエタノールをホスホリ
パーゼＤの存在下に反応させると、リン脂質のリン酸−
アルコール部のエステル結合が加水分解されると同時に
ホスファチジル基転移反応により、ホスファチジルエタ
ノールを生成することが報告されている（Ｒ，Ｍ、　Ｄ
ａｗｓｏｎ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ。

Ｊ、、　１０２．２０５（１９６７）　、　Ｓ、Ｆ、　
Ｙａｎｇ、　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、。

拡、　４７７（１９６７）など）。また、英国特許第Ｌ
５８１．８１０号には、グリ七ロリン脂質と水酸基。

ハロゲン、アミノ基、その他の置換基で置換あるいは非
置換の直鎖もしくは分枝のアルキル基を有する１級アル
コールとを、キャベツ由来のホスホリパーゼＤを作用さ
せてアルコール転移反応させる場合、Ｃ１未満の１級ア
ルコールでのみ該反応が起き、Ｃ５を越える該アルコー
ルでは主生成物は対応するホスファチジン酸であると記
載されている。

更に、これらの他に、微生物由来のホスホリパーゼＤは
、リン脂質と２級アルコール（特開昭５９−１８７７８
６）、スフィンゴリン脂質と１級アルコール。

２級アルコールおよびフェノール配糖体（特開昭５９−
１８７７８７）との反応でホスファチジル基転移反応を
起こすことが示されている。

（０）発明が解決しようとする問題点 しかしなから、かかる従来の反応系では例えば１％リン
脂質乳化液（０，１ｍ１）　、　０．４Ｍ酢酸緩衝液（
０，１ｍ１）　、　０．１　Ｍ塩化カルシウム水溶液（
０゜０５ｍ１）、蒸留水（０，１ｍ１）　、　　１０％
アルコール溶液（０，１ｍｌ）およびホスホリパーゼＤ
水溶液（０、１ｍｌ）の如き反応組成で反応せしめるも
のであり、反応系に共存する水分量は概略８０％以上で
あり、したがって基質（リン脂質およびアルコール）重
量の約４０倍以上の水を共存させている。

これは反応効率の面からみて、必ずしも満足すべきもの
ではない。

一方、ホスホリパーゼＤは古（からキャベツ。

ホウレンソウ、ニンジン、ダイコンなどの高等植物、菌
体（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｃｈｒｏｍｏｆｕｓｃ
ｕｓ）、ラット脳ミクロソームなどに含まれることが知
られており、これらがホスファチジル基転位反応を起こ
すことも知られている（たとえば、Ｈａｎａｈａｎ　Ｄ
、Ｊ、＋Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、、　１７２．１
９Ｈ１９４８）、　Ｉｍａｍｕｒａ、　Ｓ、。

Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、　８５　．７９（１９７９）
など）。またアスパラガス、ニンジン、トウダイグサ、
綿実、コムギ。

オオムギなどについても同様の反応が推論されている（
Ｖ、Ｅ、　Ｖａｓｋｏｖｓｋｙ、　Ｊ、　Ｃｈｒｏｍａ
ｔｏｇｒ、、　２６１　＋３２４　（１９８３）など）
。しかしながら、米ヌカ中のホスホリパーゼＤについて
はホスファチジル基転移反応を起こすことは知られてお
らず、さらに大豆。

ナタネ、ヒマワリ、ゴマ由来のホスホリパーゼＤについ
てはその存在が全く知られていないか、もしくは知られ
ていても該転移反応について明らかになっていない。

本発明の目的は、リン脂質のホスファチジル基転位反応
を効率よく進行させる方法を提供することにあり、また
従来、かかる転位反応を起こすことが知られていないホ
スホリパーゼＤを用いて上記反応を行わしめることにあ
る。而して本発明の方法による反応を利用すれば、従来
、生体中から複雑な抽出、濃縮工程を経て精製していた
リン脂質たとえばホスファチジルコリン、ホスファチジ
ルエタノールアミンなどを常温付近、常圧、中性付近の
温和な反応条件下で効率よく高純度、高品質な状態で製
造でき、またリン脂質の新規なアルコール誘導体を得る
こともでき、さらにこれら高純度リン脂質およびリン脂
質誘４体を化学的合成法に比べて簡易かつ経済的に製造
することができる。

（ｄ１問題点を解決するための手段 本発明者らは、鋭意研究の結果、ある特定水分の存在下
に前記の反応を行うと、上記の目的が達成されることを
見い出した。

本発明は、かかる知見に基づいて完成されたもので、リ
ン脂質と１級水酸基を存するアルコール類とをホスホリ
パーゼＤおよびリン脂質とアルコール類の合計重量と等
量またはそれ以下の水の存在下に反応させることを特徴
とするホスファチジル基転位方法である。

本発明に用いるリン脂質は、例えば下記式（Ｉ）および
／または（ｎ）で示されるものである。

ただし、該式（１）および（ＩＩ）において、Ｒ３およ
びＲ２は同一であっても異なっていてもよく、Ｈである
かまたは炭素数が８〜２４の飽和あるいはＣ０ＯＨ，−
ＣＨｚＣＨ□Ｎ（ＣＨ３）！、　−ＣＨ２ＧＨｚＮＨ（
ＣＨ３）。

ＣＨｚ−Ｃ）Ｉ　（ＯＨ）　−ＣＨＩ　（ＯＨ）のいず
れかまた混合基である。該リン脂質の例としてレシチン
、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールア
ミン。

ホスファチジル−Ｎ−メチルエタノールアミン。

ホスファチジル−Ｎ、Ｎ−ジメチルエタノールアミン、
ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸。

ホスファチジルグリセロールなどがあげられ、これらの
構成脂肪酸としてはカプロン酸、カプリル酸、ラウリン
酸、ミリスチン酸、パルミチン酸。

パルミトオレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸。

リノール酸、α−およびＴ−リルン酸、ベヘン酸、エル
シン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、
アラキドン酸、テトラコサテトラエン酸などが例示でき
、またこれらの脂肪酸で置換されていない遊離水酸基の
状態でもよい。これらの脂肪酸のうち、エイコサペンタ
エンｆ１）．ｒ−リルン酸、アラキドン酸などのいわゆ
る血栓溶解、血小板凝集などの生理活性を有する脂肪酸
はとくに重要である。さらにこれらの塩基部分（式（１
）および（Ｉｌ）のＡ）および脂肪酸部分は各々単一で
も混合していてもかまわない。

これらのリン脂質は、天然物から抽出、濃縮されたもの
であっても、また合成品であっても良い。

次に本発明る用いるアルコール類は、１級水酸基を有す
るものであって、例えば水酸基、アミノ基、モノ・ジも
しくはトリアルキルアミノ基、カルボキシル基、アセチ
ル基またはハロゲン基のうちの１種もしくは２種以上の
置換基で置換されているかまたは置換されていない、直
鎖状または側鎖状の、１級水酸基を少なくとも１個以上
有するアルコールでり、本発明ではこれらを単独または
混合して使用しても何らさしつかえない。該アルコール
類としては、例えばメタノール、エタノール、１−プロ
パツール、■−ブタノール、ｌ−オクタツール、１−ノ
ナノール、１−デカノール。

１−ドデカノール、１−ヘキサデカノール、２−エチル
ヘキサノール、１．２−プロパンジオール。

１．３−プロパンジオール、２−エチル−１，３−ヘキ
サンジオール、エチレングリコール、ジエチレングリコ
ール、ジエチレングリコールモノブチルエーテル、プロ
ピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリ
ン、ジグリセリン、モメステアリン。ホスファチジルグ
リセロール、■＝ニアミノ−２−ブロパツールよび塩酸
塩、コリンおよび塩化コリン、エタノールアミンおよび
エタノールアミン塩酸塩、セリン、セリンエチルエステ
ル、Ｎ−メチルエタノールアミン、Ｎ、Ｎ−ジメチルエ
タノールアミンなどがあげられるが、本発明はこれらに
よって限定されるものではない。

また、これらのアルコール類は天然物９合成品のいずれ
でも使用することができる。

本発明においては上記のリン脂質とアルコール類を、ホ
スホリパーゼＤの存在下で反応させるが、該ホスホリパ
ーゼＤは植物由来のものが好ましい。前述のように植物
系ホスホリパーゼＤとしてキャベツ、アスパラガス、ニ
ンジン、綿実、コムギおよびオオムギなどについてはリ
ン脂質のホスファチジル基転移作用があること、もしく
は該ホスファチジル基転移作用の結果と思われる現象が
確認されている。本発明では、これらのホスホリパーゼ
Ｄを使うことができるが、本発明者らはさらに、従来、
ホスホリパーゼＤの存在が全く知られていなかったか、
もしくは存在することは知られていてもそのホスファチ
ジル基転移作用が明らかでなかった植物体からホスホリ
パーゼＤを単離し、その作用を確認したのであり、本発
明ではかかるホスホリパーゼＤを使用することができる
。

このような植物としてはコメ、大豆、ナタネ、ヒマワリ
２．およびゴマをあげることができ、これらの根、茎１
葉などの植物生体２種子またはそれらを物理的処理ない
しは有機溶媒などの化学薬品で処理した残渣（たとえば
種子を粉砕し、ヘキサンで脱脂処理した残渣）などから
該ホスホリパーゼＤを採取することができる。該ホスホ
リパーゼＤを採取するには植物体あるいはそれらの残渣
を水抽出し、その水溶液に対して通常の酵素の単離。

精製方法が利用でき、例えば食塩、硫安などによる塩析
、エタノール、アセトンなどの有機溶媒による沈澱、透
析、イオン交換あるいは吸着クロマトグラフィー、ゲル
濾過、吸着剤などによる処理方法が使用できる。かくし
て得られる酵素は、必要に応じて糖質、蛋白質、各種塩
類などの安定化剤を添加し、減圧濃縮もしくは乾燥、凍
結乾燥などの処理により液状または固形状となることが
できる。

さらに、本発明ではかかるホスホリパーゼＤを使用する
反応系において該ホスホリパーゼＤを固定化物となした
形態で利用できる。一般に、酵素はｐＨおよび安定性改
良、活性維持、再使用などを目的として固定化すること
があるが、固定化用担体としてはセルロース、デキスト
ラン、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、ポリビニル
アルコール、イオン交換樹脂、磁性体、活性炭、アルミ
ナ、光架橋性樹脂、アルギン酸塩、各種ゲル化剤などが
使用される。本発明では、これらの固定化担体に該ホス
ホリパーゼＤを吸着、イオン結合。

共有結合あるいは包括させて粒状、膜状もしくはシート
状の固定化ホスホリパーゼＤとなし、使用することがで
きる。

本発明で、リン脂質とアルコール類とを前述のホスホリ
パーゼＤにより反応させる場合に、水分量を反応基質す
なわちリン脂質およびアルコール重量と等量もしくはそ
れ以下の水分量、好ましくはせ反応基質のうちリン脂質
重量と重量もしくはそれ以下の水分量に限定することが
特徴であり、これによりホスファチジル基転移反応を効
率よく進行させることを可能ならしめた。上述の含有量
を越える水分量が反応系に共存する場合、反応生成物は
加水分解物を含み、あるいは加水分解物が主成分となり
、本発明の目的とする高純度なリン脂質またはその誘導
体は得られない。

本発明の方法により、リン脂質とアルコール類とを反応
させるには次のようにする。すなわち、リン脂質の１種
または２種以上の組成物を適当なガラスまたはステンレ
ス製容器に採り、これを使用したリン脂質のモル等量〜
約１００モル倍量程度のアルコール類またはアルコール
類と非水性溶媒の混合溶媒に溶解させる。非水性溶媒と
しては、いわゆる不活性有機溶媒であるｎ−へブタン、
ｎ−ヘキサン、ベンゼン、キシレン、アセトン、ジメチ
ルエーテル、ジエチルエーテル、酢酸エチルなどを例と
してあげることができる。ついでホスホリパーゼＤの賦
活剤して公知の添加剤たとえばドデシル硫酸ソーダ、コ
ール酸、デオキシコール酸もしくはそれらの塩、塩化カ
ルシウム、陰イオン界面活性剤など、また酵素の安定性
を維持するための緩衝剤たとえば酢酸、リン酸、クエン
酸。

塩酸などを水溶液として添加し、さらに対リン脂質０．
１〜１０重量％の酵素を粉末状９粒状もしくは水溶液と
して加える。

反応系に必要な水は、以上のような賦活剤、緩衝剤など
の水溶液の水分として通常供給される。

従って、これらの水分量は本発明に規定する量、すなわ
ち反応基質のリン脂質およびアルコールの合計重量と等
量またはそれ以下となるよう、予め計算しておくことが
必要である。

次いで振とうあるいはホモミキサーなどの適当な攪拌機
で内容物を均一に乳化状態となし、ｐＨ４〜８好ましく
はｐＨ５〜７．５．２０〜５０℃好ましくは３５〜４５
℃で、約１時間〜２４時間反応を行わしめる。

なお、本反応を固定化ホスホリパーゼＤを充填したカラ
ム方式で行わしめる場合は、ガラスまたはステンレス円
筒管に該固定化リパーゼを詰め、前述の組成物で乳化状
態とした反応液を液循環ポンプなどを介して連続的にカ
ラムの一方から滴下、もしくは微加圧下に流入せしめ、
反応を行わせる。

ホスファチジル基転移反応により目的の高純度リン脂質
またはリン脂質誘導体が生成する反応過程は、例えばＴ
ＬＣ（７１）層クロマトグラフィー）。

ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）なとの分析方
法により経過を把握でき、これにより反応時間をコント
ロールすることもできる。反応終了後、７０〜８０℃に
短時間加熱処理するが、酵素活性阻害剤、例えばＥＤＴ
Ａ水溶液を加えて酵素活性を失わせ、そのまま、もしく
は必要に応じて溶剤抽出し、さらにシリカゲルあるいは
アルミナなどの吸着カラムクロマトグラフィー、溶剤分
別。

沈澱などの精製処理を施して目的物を得ることができる
。

（ｅ）実施例 実施例１ 攪拌機および冷却管つき西ソロフラスコ（５００ｍｌ）
にシミリストイルホスファチジルコリン（米国シグマ社
製）１０ｇを採り、ジエチルエーテル５０ｍ１で溶解し
た。さらにＮ−メチルエタノールアミン塩酸塩５ｇを添
加し、５ｍＭ塩化カルシウムを含む０．５Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ７，０）５ｍｌを加えた。

一方、米胚芽に精製水５倍容量を加え、４℃でホモゲナ
イズし、１０，０ＯＯＸ　ｇで２０分間遠心分離した上
澄液に４℃冷却下、１．５倍容量のアセトンを添加し、
沈澱物としてホスホリパーゼＤを得た。

この１ｇを２ｍｌの水溶液とし、上記混合物を攪拌しな
がら滴下して、乳化状態にした。４０℃で攪拌しながら
、１０時間反応させ、反応物の一部をクロロホルム／メ
タノール／酢酸を展開溶媒としたＴＬＣＣＦｆｆｉ層ク
ロマトグラフィー）分析を行ったところ、シミリストイ
ルホスファチジルコリンのスポットが消失し、シミリス
トイルホスファチジル−Ｎ−メチルエタノールアミンが
生成していること、また相当するホスファチジン酸が生
成していないことを確認した。なお、本反応物はジエチ
ルエーテル層を回収し、水洗後、溶剤留去した。上記と
同様の条件でＴＬＣ分析を行ったところ、純度９８％以
上のほぼ純粋なジミリストイルホフスファチジルーＮ−
メチルエタノールアミンが得られた。

実施例２ ガラス製三角フラスコ（１））中で濃縮ホスファチジル
コリンＰＣ−Ｔｏ　（日清製油（株）製；リン脂質組成
：ホスファチジルコリン７ｏ％、ホスファチジルエタノ
ールアミン１０％、リゾホスファチジルコリン２％；脂
肪酸組成：パルミチン酸１６％、ステアリン酸５％、オ
レイン酸９％、リノール酸６５％、リルン酸５％）１０
０ｇＧｎ−ヘキサン／ジエチルエーテル（＝１：１）３
００ｍｌに溶解させ、エタノールアミン塩酸塩６０ｇ、
５ｍＭ塩化カルシウムおよび４ｍＭドデシル硫酸ナトリ
ウムを含む、０．３　Ｍ　）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ７
，５）１００ｍｌを添加した。一方、文献（高橋ら、東
京農業大学農学集報、２８（Ｎ１３）、２６２（１９８
４））の方法に準じて生米ヌカより採取、精製したホス
ホリパーゼＤ３．５ｇを粉末のまま、上記混合物中に攪
拌しながら加え、乳化状態となし、３７℃でゆるやかに
振とうしながら５時間反応させた。反応物の溶媒層を回
収し、数回水洗後、溶剤を留去した後、実施例１と同様
にＴＬＣ分析を行ったところ、ホスファチジルコリンお
よびホスファチジン酸が検出されず、主成分はホスファ
チジルエタノールアミンであった。

これにより、混合リン脂質を単一組成の高純度リン脂質
に変換できることを確認した。

実施例３ 実施例２と同様の条件で、卵黄レシチン（リン脂質組成
：ホスファチジルコリン７０％、リゾホスファチジルコ
リン５％、ホスファチジルエタノールアミン１５％、リ
ゾホスファチジルエタノールアミン３％、ホスファチジ
ルイノシトール１％。

スフィンゴミエリン２％；脂肪酸組成：パルミチン酸２
０％、ステアリン酸５％、オレイン酸１４％、リノール
ｌｌ　５５　％、　　リルン酸６％）とコリンとを反応
させ、分析したところ、原料リン脂質中のエタノールア
ミン結合リン脂質は検出されなかった。

実施例４ 糸状菌カニンガメラエレガンス（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ
ｅｌｌａｅｌｅｇａｎｓ、　ＮＲＲＬ　１３７Ｂ）を培
養し、菌体から溶剤抽出してγ−リルン酸（Ｃ１ｌＩ３
　　Ｃ６）を主成分とするリン脂質を得た。このリン脂
質組成はホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコ
リン。

ホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジル
エタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、スフ
ィンゴミエリンであり、構成脂肪酸組成は上記Ｔ−リル
ン酸を主成分とし、リノール酸、オレイン酸、ステアリ
ン酸、パルミチン酸などであった。かかるリン脂質１０
ｇに塩化コリン５ｇ、ジエチルエーテル５０ｍ１，５ｍ
Ｍ塩化カルシウムおよび１％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ　　１０
０を含む０゜５　Ｍ　）　ＩＪ　スー塩酸緩衝液（ｐＨ
７，０）５ｍｌ、粒状活性炭（和光純薬（株）製）１０
ｇに水溶液中で実施例２で得た米ヌカ由来ホスホリパー
ゼＤ４ｇを吸着させた固定化物５ｇを加え、冷却下にホ
モミキサーで乳化させた。この混合物を三角フラスコに
とり、ゆるやかに振とうを続け、４０℃で１５時間反応
させた０反応物のＴＬＣ分析結果より原料中のエタノー
ルアミン結合リン脂質は検出されなかった。

実施例５ １．２−シリルオイルホスファチジルコリン（合成品、
純度９８％）５０ｇ、ジエチレングリコールモノブチル
エーテル（試薬、和光純薬（株）製）２０ｇ、１０ｍＭ
塩化カルシウムおよび２０ｍＭデオキシコール酸ソーダ
を含む０．４　Ｍ酢酸緩衝液（ｐ　Ｈ６，０）　５０　
ｇ、大豆種子から硫安分画。

透析したホスホリパーゼＤ２ｇを用いて、実施例２と同
様の方法で１０時間反応を行った。反応物組成をＴＬＣ
分析でチェックしたところ、遊離したコリン、未反応の
原料および上記リン脂質とアルコールの転移反応による
新規エステル化物が検出された。

実施例６ ナタネ種子から実施例１に示したアセトン沈澱法により
、ホスホリパーゼＤを含む粗酵素を得た。

これの２ｇを用い、実施例５と同様の反応を行い、反応
物のＴＬＣ分析により原料として用いたリン脂質とアル
コールの転移反応による新規エステル化物（実施例５と
同一）が生成していることを確認した。

実施例７ ブタ肝臓より抽出した脂質から文献（Ｍ、Ｒ。

５ａｈａｓｒａｂｕｄｈｅ、　Ｊ、　Ａ＋ｓ、　Ｏｉｌ
　Ｃｈｅｗ、　Ｓｏｃ、＋４２＋　８６２（１９６５）
およびＨａｚｌｅｗｏｏｄ、Ｇ、Ｐ　ａｎｄ　Ｄａｗｓ
ｏｎ＋　Ｒ，Ｍ、Ｃ，ＩＪ、　Ｇｅｎ、　Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌ、、　８９．１６３（１９７５））の方法に準拠
してリン脂質を単離した。該リン脂質組成は、ホスファ
チジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、リゾ
ホスファチジルエタノールアミン。

ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリンなど
であり、また構成脂肪酸組成は、アラキドン酸（ＣＺ。

１４　　Ｃ６）を主成分とし、リノール酸。

オレイン酸、パルミチン酸などであった。

一方、ヒマワリ種子を粉砕し、ｎ−ヘキサンでｍ脂した
後１ｍＭ塩化カルシウムを含む１０ｍＭトリス塩酸緩衝
液（ｐＨ７，０）を加えてホモゲナイズした。遠心分離
した上澄液を常法により硫安塩析し、溶解後、さらに上
記緩衝液で透析処理し、ホスホリパーゼＤ水溶液を得た
。これを凍結乾燥して粉末状とした。

上記リン脂質３０ｇ、セリン（東京化成（株）製、純度
９８％以上）３０ｇ、ジエチルエーテル５０ｍ１，５ｍ
Ｍ塩化カルシウムおよび１５ｍＭコール酸ソーダを含む
０．３　Ｍ　）リス塩酸緩衝液（ｐＨ７，０）１５ｍｌ
、上記ヒマワリ由来のホスホリパーゼＤ３．５ｇを用い
て実施例２と同様の方法で７時間反応を行った。反応物
組成をＴＬＣ分析によりチェックしたところ、コリン結
合およびエタノールアミン結合したリン脂質が存在せず
、主成分は、セリン結合リン脂質であった。また、該セ
リン結合リン脂質の脂肪酸組成を常法によりＧＬＣ分析
したところ、原料中の脂肪酸組成とほぼ同じであった。

（ｆ）発明の効果 本発明は、天然もしくは合成のリン脂質と１級水酸基を
有するアルコール類とを、例えばコメ。

大豆、ナタネ、ヒマワリ、ゴマなどの植物を起源とする
ホスホリパーゼＤの存在下、特定の反応条件すなわち反
応系中の水分量を規定してホスファチジル基転移反応を
効率よく生じせしめる方法であり、これにより塩基部分
が、混合物であるリン脂質の特定成分を容易に高純度に
することができ、従来、天然物から抽出、濃縮などの複
雑な工程を経ていたものが大幅に縮小され、この経済で
きメリットは大きい。また化学的合成法に比べても熱履
歴が少なく、簡易な反応であるため、副反応をほぼ完全
に抑制することができ、品質的に優れた目的物を安定し
て経済的に得ることができる。また、本発明の方法によ
れば、新規なリン脂質誘導体を上記と同様のメリットを
に以って製造することもできる。さらに、本発明の方法
を用いれば従来キャベツなどのホスホリパーゼＤでは不
可能であった炭素数の長いアルコール類に対してもホス
ファチジル基転移反応が起きる可能性を示している。

さらに本発明では、ホスホリパーゼＤを固定化物となし
、カラム方式、膜方式あるいはその他の方法によりバイ
オリアクターとして目的物を連続生産することができる
。

生成物である高純度リン脂質および新規リン脂質は、食
品、医薬品、化粧品、農薬をはじめ多く竜業分野におい
て、界面活性剤、リポソーム基剤。

治療剤、乳化剤、殺虫剤などのほか、医薬分野での生理
活性物質のキャリヤーあるいは保護機能を目的とし、ま
た生理活性のある高度不飽和脂肪酸などを薬理活性を試
験しやすい形態に容易に変化できるなどの有用な利用法
が期待できる。

特許出願人　　日清製油株式会社 手続補正書（自発） １、事件の表示 昭和６０年特許願第１７４２４６号 ２、発明の名称 ホスファチジル基転位方法 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 郵便番号　　２２１ 住　　所　　神奈川県横浜市神奈用区千若町１−３名　
　称　　日清製油株式会社　研究断電　　　話　　　０
４５　　（４６１）０１８１４、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 ５、補正の内容 （１）明細書第１４頁２行「せ反応基質のうちリン脂質
重量と重量もしくは」を「該反応基質のうちリン脂質重
量と等量もしくは」と訂正する。

（２）同第２４頁１０行「この経済でき」を「この経済
的」と訂正する。

（３）同第２４真下から５行「メリットをに以って」を
「メリットに以って」と訂正する。

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. （１）リン脂質と１級水酸基を有するアルコール類とを
   、ホスホリパーゼＤおよび上記リン脂質と上記アルコー
   ル類の合計重量と等量またはそれ以下の水の存在下に反
   応させることを特徴とするホスファチジル基転位方法。
2. （２）リン脂質が下記の一般式（ I ）および／または
   （II）で表されるものである特許請求の範囲第（１）項
   記載の方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（II） （但し、Ｒ＿１およびＲ＿２は、同一または異なるもの
   であって、Ｈまたは炭素数が８〜２４の飽和または不飽
   和脂肪酸残基であり、Ａは−Ｈまたは−（ＣＨ＿２）＿
   ２Ｎ＾＋（ＣＨ＿３）＿３、−（ＣＨ＿２）＿２Ｎ＾＋
   Ｈ＿３、−ＣＨ＿２ＣＨ（ＮＨ＿２）ＣＯＯＨ、−ＣＨ
   ＿２ＣＨ＿２Ｎ（ＣＨ＿３）＿２、−ＣＨ＿２ＣＨ＿２
   ＮＨ（ＣＨ＿３）、−ＣＨ＿２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ＿
   ２（ＯＨ）のいずれかまたは混合基である）
3. （３）一般式（ I ）および（II）のＲ＿１およびＲ＿
   ２のいずれか一方または両方がエイコサペンタエン酸、
   γ−リノレン酸、アラキドン酸のいずれかの脂肪酸残基
   である特許請求の範囲第（２）項記載の方法。
4. （４）アルコール類が、水酸基、アミノ基、モノ・ジも
   しくはトリアルキルアミノ基、カルボキシル基、アセチ
   ル基、またはハロゲン基の１種もしくは２種以上の置換
   基で置換されているかまたは置換されていない、直鎖状
   または側鎖状の、１級水酸基を少なくとも１個以上有す
   るアルコールである特許請求の範囲第（１）項記載の方
   法。
5. （５）ホスホリパーゼＤが植物を起源とする特許請求の
   範囲第（１）記載の方法。
6. （６）植物がコメ、大豆、ナタネ、ヒマワリ、ゴマであ
   る特許請求の範囲（５）項記載の方法。
7. （７）ホスホリパーゼＤが固定化物である特許請求の範
   囲（１）項記載の方法。
8. （８）固定化ホスホリパーゼＤを充填したカラムを用い
   る特許請求の範囲第（７）項記載の方法。