JPH0656856A - リン脂質誘導体 - Google Patents
リン脂質誘導体Info
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- JPH0656856A JPH0656856A JP5113885A JP11388593A JPH0656856A JP H0656856 A JPH0656856 A JP H0656856A JP 5113885 A JP5113885 A JP 5113885A JP 11388593 A JP11388593 A JP 11388593A JP H0656856 A JPH0656856 A JP H0656856A
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- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
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- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Emulsifying, Dispersing, Foam-Producing Or Wetting Agents (AREA)
- Manufacturing Of Micro-Capsules (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 新規なリン脂質誘導体を提供する。
【構成】 式
【化１】
式中、Ａは式
【化２】
の基を示し、ここでＲ1及びＲ2はそれぞれ飽和もしくは
不飽和のＣ7〜Ｃ21脂肪酸残基を示し、Ａ′は−ＯＨ又
は−Ｏ-を示し、Ｃはアスコルビン酸又はコージ酸残基
を示す、で表わされるリン脂質誘導体。
不飽和のＣ7〜Ｃ21脂肪酸残基を示し、Ａ′は−ＯＨ又
は−Ｏ-を示し、Ｃはアスコルビン酸又はコージ酸残基
を示す、で表わされるリン脂質誘導体。
Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】本発明は新規なリン脂質誘導体に関し、さ
らに詳しくは、例えば、リポソーム形成基剤、乳化剤、
生理活性物質又はそのキャリヤー等として有用な下記式
（Ｉ）
らに詳しくは、例えば、リポソーム形成基剤、乳化剤、
生理活性物質又はそのキャリヤー等として有用な下記式
（Ｉ）
【０００２】
【化４】 式中Ａは下記式
【０００３】
【化５】 の基を示し、ここで、Ｒ1及びＲ2は同一もしくは相異な
り、それぞれ飽和もしくは不飽和のＣ7〜Ｃ21脂肪酸残
基を示し、Ａ′は−ＯＨ又は−Ｏ-を示し、Ｃは式
り、それぞれ飽和もしくは不飽和のＣ7〜Ｃ21脂肪酸残
基を示し、Ａ′は−ＯＨ又は−Ｏ-を示し、Ｃは式
【０００４】
【化６】
【０００５】の基を示す、で表わされるリン脂質誘導体
及びその塩に関する。
及びその塩に関する。
【０００６】上記式（Ｉ）のリン脂質誘導体は、下記式
（ＩＩ）
（ＩＩ）
【０００７】
【化７】 式中、Ｂは−(ＣＨ2)2Ｎ+(ＣＨ3)3、−(ＣＨ2)2ＮＨ、
−ＣＨ2ＣＨ(ＮＨ2)ＣＯＯＨ、−(ＣＨ2)2ＮＨＣＨ3、
−(ＣＨ2)2Ｎ(ＣＨ3)2又は−ＣＨ2ＣＨ(ＯＨ)ＣＨ2ＯＨ
を示し、Ａ及びＡ′は上記の意味を有する、で表わされ
るリン脂質をアスコルビン酸又はコージ酸と、リン脂質
と複素環アルコールとの間の転移反応を触媒するホスホ
リパーゼＤの存在下に反応させることにより製造するこ
とができる。
−ＣＨ2ＣＨ(ＮＨ2)ＣＯＯＨ、−(ＣＨ2)2ＮＨＣＨ3、
−(ＣＨ2)2Ｎ(ＣＨ3)2又は−ＣＨ2ＣＨ(ＯＨ)ＣＨ2ＯＨ
を示し、Ａ及びＡ′は上記の意味を有する、で表わされ
るリン脂質をアスコルビン酸又はコージ酸と、リン脂質
と複素環アルコールとの間の転移反応を触媒するホスホ
リパーゼＤの存在下に反応させることにより製造するこ
とができる。
【０００８】従来、ホスホリパーゼＤが、リン脂質たと
えばホスファチジルコリンのコリン塩基−リン酸エステ
ルを加水分解し、遊離塩基とホスファチジン酸を生ずる
反応を触媒することがしられている［Ｍ．Ｋａｔｅｓ
Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．３２
５７１（１９５４）］。
えばホスファチジルコリンのコリン塩基−リン酸エステ
ルを加水分解し、遊離塩基とホスファチジン酸を生ずる
反応を触媒することがしられている［Ｍ．Ｋａｔｅｓ
Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．３２
５７１（１９５４）］。
【０００９】また、リン脂質たとえばレシチンとエチル
アルコールとをホスホリパーゼＤの存在下に反応させる
と、リン脂質のリン酸構造部分と該リン脂質のアルコー
ル構造部分のエステル結合が加水分解されると同時にホ
スファチジル基転移作用により、ホスファチジルエタノ
ールを生成することも報告されている［Ｒ．Ｍ．Ｄａｗ
ｓｏｎ；Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，１０２、２０５（１９
６７）］；［Ｓ．Ｆ．Ｙａｎｇ：Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．，２４２、４７７（１９６７）］。
アルコールとをホスホリパーゼＤの存在下に反応させる
と、リン脂質のリン酸構造部分と該リン脂質のアルコー
ル構造部分のエステル結合が加水分解されると同時にホ
スファチジル基転移作用により、ホスファチジルエタノ
ールを生成することも報告されている［Ｒ．Ｍ．Ｄａｗ
ｓｏｎ；Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，１０２、２０５（１９
６７）］；［Ｓ．Ｆ．Ｙａｎｇ：Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．，２４２、４７７（１９６７）］。
【００１０】上述のようなホスホリパーゼＤのホスファ
チジル基転移作用が知られて以来、この分野における研
究が進められ、英国特許第１５８１８１０号明細書（＝
西ドイツ国特許公開第２７１７５４７号）の提案が知ら
れている。この提案によれば、この提案の一般式で示さ
れたリン脂質と、水酸基、ハロゲン、アミノその他の置
換基で置換されていてもよいＣ5までの直鎖もしくは分
枝のアルキル基を有する一級アルコールとの前記キャベ
ツ由来のホスホリパーゼＤの酵素作用を利用した一級ア
ルコール転移反応について開示されている。そして、該
反応は、５を超える炭素原子を含有しない一級アルコー
ルでのみ起り、若し、５を超える炭素原子を含有する該
アルコールの場合には、反応の主生成物は対応するホス
ファチジン酸であると記載されている。更に、該提案に
はアルコール成分の選択は、上記の要求を満した一級ア
ルコールである限り、特別な制約のないことも記載され
ている。
チジル基転移作用が知られて以来、この分野における研
究が進められ、英国特許第１５８１８１０号明細書（＝
西ドイツ国特許公開第２７１７５４７号）の提案が知ら
れている。この提案によれば、この提案の一般式で示さ
れたリン脂質と、水酸基、ハロゲン、アミノその他の置
換基で置換されていてもよいＣ5までの直鎖もしくは分
枝のアルキル基を有する一級アルコールとの前記キャベ
ツ由来のホスホリパーゼＤの酵素作用を利用した一級ア
ルコール転移反応について開示されている。そして、該
反応は、５を超える炭素原子を含有しない一級アルコー
ルでのみ起り、若し、５を超える炭素原子を含有する該
アルコールの場合には、反応の主生成物は対応するホス
ファチジン酸であると記載されている。更に、該提案に
はアルコール成分の選択は、上記の要求を満した一級ア
ルコールである限り、特別な制約のないことも記載され
ている。
【００１１】上記提案の発明者等であるＳ．Ｋｏｖａｔ
ｃｈｓｖ及びＨ．Ｅｉｂｌ等は、Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅ
ｄ．Ｂｉｏｌ．，Ｖｏｌ．１０１、２２１（１９７８）
に於て、ホスホリパーゼＤの酵素作用を利用した一級ア
ルコール転移反応について、Ｃ7〜Ｃ10のアルカノール
では転移反応が認められないがＣ6のヘキサノールにつ
いては２０％の転移反応が生じたと報告している。一
方、Ｒｏｋｈｉｍｏｖ，Ｍ．ＭはＵｚｂ．Ｂｉｏｌ．Ｚ
ｈ．，Ｖｏｌ．３，６−ｇ（１９７９）に於て、Ｃ5以
上のアルコール例えばＣ6のヘキサノールについては転
移反応は起らなかったと報告している。
ｃｈｓｖ及びＨ．Ｅｉｂｌ等は、Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅ
ｄ．Ｂｉｏｌ．，Ｖｏｌ．１０１、２２１（１９７８）
に於て、ホスホリパーゼＤの酵素作用を利用した一級ア
ルコール転移反応について、Ｃ7〜Ｃ10のアルカノール
では転移反応が認められないがＣ6のヘキサノールにつ
いては２０％の転移反応が生じたと報告している。一
方、Ｒｏｋｈｉｍｏｖ，Ｍ．ＭはＵｚｂ．Ｂｉｏｌ．Ｚ
ｈ．，Ｖｏｌ．３，６−ｇ（１９７９）に於て、Ｃ5以
上のアルコール例えばＣ6のヘキサノールについては転
移反応は起らなかったと報告している。
【００１２】Ｒ．Ｍ．Ｄａｗｓｏｎは、リン脂質として
レシチンを用い、糖類として、シユクロース、グルコー
ス及びガラクトースを夫々用い、キャベツ由来の公知ホ
スホリパーゼＤによる実験の結果、レシチン基質のホス
ファチジル基のこれら糖類への転移は起らなかったこと
を報告しており［Ｂｉｏｃｈｓｍ．，Ｊ．，ｖｏｌ．１
０２、２０５〜２０９（１９６７）］、また、Ｓ．Ｆ．
Ｙａｎｇは、グルコース及びイノシトールを用いて上記
と同様な実験の結果、糖類への転移は起らなかったこと
を報告している［Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，ｖｏｌ．
２４２、４７７〜４８４（１９６７）］。
レシチンを用い、糖類として、シユクロース、グルコー
ス及びガラクトースを夫々用い、キャベツ由来の公知ホ
スホリパーゼＤによる実験の結果、レシチン基質のホス
ファチジル基のこれら糖類への転移は起らなかったこと
を報告しており［Ｂｉｏｃｈｓｍ．，Ｊ．，ｖｏｌ．１
０２、２０５〜２０９（１９６７）］、また、Ｓ．Ｆ．
Ｙａｎｇは、グルコース及びイノシトールを用いて上記
と同様な実験の結果、糖類への転移は起らなかったこと
を報告している［Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，ｖｏｌ．
２４２、４７７〜４８４（１９６７）］。
【００１３】上述のように、従来ホスホリパーゼＤによ
るリン脂質とアルコールとの間の転移反応は、一級アル
コールとくに炭素原子数の比較的小さな単純な構造から
なる主に鎖状の一級アルコールの場合にしか生起せず、
ましてや糖類との間にはペントース及びヘキソース共に
生じないというのがこれまでの技術常識である。
るリン脂質とアルコールとの間の転移反応は、一級アル
コールとくに炭素原子数の比較的小さな単純な構造から
なる主に鎖状の一級アルコールの場合にしか生起せず、
ましてや糖類との間にはペントース及びヘキソース共に
生じないというのがこれまでの技術常識である。
【００１４】本発明者等は、従来公知のキャベツ由来ホ
スホリパーゼＤとは、その至適温度、至適ｐＨ等の点で
異なるホスホリパーゼＤ生産能を有する微生物の存在を
発見して、既に、特開昭５８−６３３８８号公報及び特
開昭５８−６７１８３号公報において提案した。
スホリパーゼＤとは、その至適温度、至適ｐＨ等の点で
異なるホスホリパーゼＤ生産能を有する微生物の存在を
発見して、既に、特開昭５８−６３３８８号公報及び特
開昭５８−６７１８３号公報において提案した。
【００１５】本発明者らの研究によれば、上記の新たに
発見した微生物由来のホスホリパーゼＤは、リン脂質と
して、たとえばレシチンと複素環一級アルコールである
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピロリジンとの間におけ
るリン脂質複素環アルコール誘導体の形成を触媒する作
用を有しており、このホスホリパーゼＤの存在下に、前
記式（ＩＩ）のリン脂質をアスコルビン酸又はコージ酸
と反応させることにより、前記式（Ｉ）で示される新規
且つ有用なリン脂質誘導体を製造することに成功した。
発見した微生物由来のホスホリパーゼＤは、リン脂質と
して、たとえばレシチンと複素環一級アルコールである
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピロリジンとの間におけ
るリン脂質複素環アルコール誘導体の形成を触媒する作
用を有しており、このホスホリパーゼＤの存在下に、前
記式（ＩＩ）のリン脂質をアスコルビン酸又はコージ酸
と反応させることにより、前記式（Ｉ）で示される新規
且つ有用なリン脂質誘導体を製造することに成功した。
【００１６】以下、本発明により提供される式（Ｉ）の
リン脂質誘導体及びその製造法についてさらに詳細に説
明する。
リン脂質誘導体及びその製造法についてさらに詳細に説
明する。
【００１７】前記式（ＩＩ）の原料リン脂質はそれ自体
既知の化合物であって、ジアシルエステル型、（Ａが式
（ｉ）の基を示す場合）モノアシル型（リゾ型─Ａが式
（ｉｉ）の基を示す場合）のグリセロリン脂質を包含
し、これらのリン脂質はそれ自体既知の方法によって天
然物より抽出採取し又は合成することにより得ることが
できるが、市場で入手することもできる。例えば、動植
物組織から公知の手段で抽出して得られるものとしては
レシチン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリ
セロール、等がある。これらは単独或いは混合物をその
まま使用してもよいし、また、精製して用いることもで
きる。リゾ型リン脂質は上記リン脂質にホスホリパーゼ
Ａ2を作用させて調製することもできるが、市場で容易
に入手できるのもでこれを利用することができる。
既知の化合物であって、ジアシルエステル型、（Ａが式
（ｉ）の基を示す場合）モノアシル型（リゾ型─Ａが式
（ｉｉ）の基を示す場合）のグリセロリン脂質を包含
し、これらのリン脂質はそれ自体既知の方法によって天
然物より抽出採取し又は合成することにより得ることが
できるが、市場で入手することもできる。例えば、動植
物組織から公知の手段で抽出して得られるものとしては
レシチン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリ
セロール、等がある。これらは単独或いは混合物をその
まま使用してもよいし、また、精製して用いることもで
きる。リゾ型リン脂質は上記リン脂質にホスホリパーゼ
Ａ2を作用させて調製することもできるが、市場で容易
に入手できるのもでこれを利用することができる。
【００１８】一方、これらリン脂質と反応せしめられる
アスコルビン酸及びコージ酸はそれぞれ下記式
アスコルビン酸及びコージ酸はそれぞれ下記式
【００１９】
【化８】
【００２０】で示されるアルコール性水酸基含有複素環
化合物であり、天然物、合成品のいずれも使用可能であ
る。
化合物であり、天然物、合成品のいずれも使用可能であ
る。
【００２１】式（ＩＩ）のリン脂質とアスコルビン酸又
はコージ酸との間の転位反応に使用されるホスホリパー
ゼＤは、リン脂質と複素環アルコールとの間の転位反応
を触媒する作用をもつものであり、そのようなホスホリ
パーゼＤとしては、従来公知のキャベツから抽出された
ホスホリパーゼＤの至適温度４０℃以下、至適ｐＨ５．
４〜５．６に対して、至適温度６０〜７０℃、至適ｐＨ
７付近である点で公知ホスホリパーゼＤと区別できる、
前記特開昭５８−６３３８８号公報及び特開昭５８−６
７１８３号公報に記載されているホスホリパーゼＤ生産
菌が生産するホスホリパーゼＤが挙げられる。該ホスホ
リパーゼＤは、複素環一級アルコールであるＮ−（２−
ヒドロキシエチル）ピロリジンと前記式（ＩＩ）のリン
脂質との間におけるリン脂質−複素環化合物誘導体の形
成を触媒する点で公知のホスホリパーゼＤと区別でき
る。
はコージ酸との間の転位反応に使用されるホスホリパー
ゼＤは、リン脂質と複素環アルコールとの間の転位反応
を触媒する作用をもつものであり、そのようなホスホリ
パーゼＤとしては、従来公知のキャベツから抽出された
ホスホリパーゼＤの至適温度４０℃以下、至適ｐＨ５．
４〜５．６に対して、至適温度６０〜７０℃、至適ｐＨ
７付近である点で公知ホスホリパーゼＤと区別できる、
前記特開昭５８−６３３８８号公報及び特開昭５８−６
７１８３号公報に記載されているホスホリパーゼＤ生産
菌が生産するホスホリパーゼＤが挙げられる。該ホスホ
リパーゼＤは、複素環一級アルコールであるＮ−（２−
ヒドロキシエチル）ピロリジンと前記式（ＩＩ）のリン
脂質との間におけるリン脂質−複素環化合物誘導体の形
成を触媒する点で公知のホスホリパーゼＤと区別でき
る。
【００２２】このようなホスホリパーゼＤ生産菌の例と
しては、同一出願人の出願に係わる特開昭５８−６３３
８８号公報に開示されたノカルディオプシス（Ｎｏｃａ
ｒｄｉｏｐｓｉｓ）属に属するホスホリパーゼＤ生産
菌、たとえばノカルディオプシス属ＮＯ７７９株［ＦＥ
ＲＭ−ＢＰ−５１２］、同一出願人の出願に係わる特開
昭５８−６７１８３号公報に開示されたアクチノマデュ
ーラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ）属に属するホスホリ
パーゼＤ生産菌、たとえばアクチノマデューラ属ＮＯ３
６２株［ＦＥＲＭ−ＢＰ−５１１］等を挙げることがで
きるが、前記式（ＩＩ）のリン脂質を原料としてアスコ
ルビン酸又はコージ酸の転移反応を起させる作用を有す
るホスホリパーゼＤであれば如何なる起源のホスホリパ
ーゼＤでも用いることができる。至適温度及び至適ｐＨ
の相違及び他のいくつかの相違点と共に、下掲第１表
に、本発明で利用するホスホリパーゼＤと従来公知のキ
ャベツ由来のホスホリパーゼＤとの酵素学的性質の差異
を示す。
しては、同一出願人の出願に係わる特開昭５８−６３３
８８号公報に開示されたノカルディオプシス（Ｎｏｃａ
ｒｄｉｏｐｓｉｓ）属に属するホスホリパーゼＤ生産
菌、たとえばノカルディオプシス属ＮＯ７７９株［ＦＥ
ＲＭ−ＢＰ−５１２］、同一出願人の出願に係わる特開
昭５８−６７１８３号公報に開示されたアクチノマデュ
ーラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ）属に属するホスホリ
パーゼＤ生産菌、たとえばアクチノマデューラ属ＮＯ３
６２株［ＦＥＲＭ−ＢＰ−５１１］等を挙げることがで
きるが、前記式（ＩＩ）のリン脂質を原料としてアスコ
ルビン酸又はコージ酸の転移反応を起させる作用を有す
るホスホリパーゼＤであれば如何なる起源のホスホリパ
ーゼＤでも用いることができる。至適温度及び至適ｐＨ
の相違及び他のいくつかの相違点と共に、下掲第１表
に、本発明で利用するホスホリパーゼＤと従来公知のキ
ャベツ由来のホスホリパーゼＤとの酵素学的性質の差異
を示す。
【００２３】
【表１】
【００２４】ホスホリパーゼＤは精製品として使用する
必要はなく粗製品であってもよい。更に、適当な固定化
担体たとえばポリプロピレン膜、セライト粒、ガラスビ
ーズなどの如き各種の重合体樹脂類や無機材料の粒状物
やフィルム状物に担持固定化して利用することもでき
る。
必要はなく粗製品であってもよい。更に、適当な固定化
担体たとえばポリプロピレン膜、セライト粒、ガラスビ
ーズなどの如き各種の重合体樹脂類や無機材料の粒状物
やフィルム状物に担持固定化して利用することもでき
る。
【００２５】反応は、ホスホリパーゼＤの存在下に、好
ましくは溶媒中で式（ＩＩ）のリン脂質とアスコルビン
酸又はコージ酸とを接触せしめることにより行うことが
できる。使用しうる溶媒の例としては、水性溶媒及び水
性溶媒と有機溶媒との混合溶媒を例示することができ
る。また、ホスホリパーゼＤの酵素学的触媒作用を阻害
しない任意の他の添加剤を含む溶媒も使用することがで
き、たとえば該作用を促進したり、酵素の安定化に役立
つ適当な添加剤を含有する溶媒を用いることができる。
例えば、アルブミン、カゼイン等の蛋白質の他の酢酸、
クエン酸、リン酸などの緩衝剤を含有したり、塩化カル
シウムその他の中性塩を含有したり、タウロコール酸ソ
ーダ等の胆汁酸塩類を含有する水性溶媒を用いることが
できる。更に、有機溶媒の例としては、例えば、ｎ−ヘ
プタン、ｎ−ヘキサン、イソオクタンなどの如き脂肪族
炭化水素類；シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロ
ブタンなどの如き脂環族炭化水素類；ベンゼン、トルエ
ン、キシレンなどの如き芳香族炭化水素類；アセトン、
メチルイソプロピルケトンなどの如きケトン類；ジメチ
ルエーテル、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテ
ルなどの如きエーテル類；酢酸メチル、酢酸エチルなど
の如きエステル類；四塩化炭素、クロロホルム、塩化メ
チレンなどの如きハロゲン化炭化水素類；ジメチルホル
ムアミドの如きアミド溶媒類；ジメチルスルホキシドの
如きスルホキシド溶媒類などを例示することができる。
ましくは溶媒中で式（ＩＩ）のリン脂質とアスコルビン
酸又はコージ酸とを接触せしめることにより行うことが
できる。使用しうる溶媒の例としては、水性溶媒及び水
性溶媒と有機溶媒との混合溶媒を例示することができ
る。また、ホスホリパーゼＤの酵素学的触媒作用を阻害
しない任意の他の添加剤を含む溶媒も使用することがで
き、たとえば該作用を促進したり、酵素の安定化に役立
つ適当な添加剤を含有する溶媒を用いることができる。
例えば、アルブミン、カゼイン等の蛋白質の他の酢酸、
クエン酸、リン酸などの緩衝剤を含有したり、塩化カル
シウムその他の中性塩を含有したり、タウロコール酸ソ
ーダ等の胆汁酸塩類を含有する水性溶媒を用いることが
できる。更に、有機溶媒の例としては、例えば、ｎ−ヘ
プタン、ｎ−ヘキサン、イソオクタンなどの如き脂肪族
炭化水素類；シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロ
ブタンなどの如き脂環族炭化水素類；ベンゼン、トルエ
ン、キシレンなどの如き芳香族炭化水素類；アセトン、
メチルイソプロピルケトンなどの如きケトン類；ジメチ
ルエーテル、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテ
ルなどの如きエーテル類；酢酸メチル、酢酸エチルなど
の如きエステル類；四塩化炭素、クロロホルム、塩化メ
チレンなどの如きハロゲン化炭化水素類；ジメチルホル
ムアミドの如きアミド溶媒類；ジメチルスルホキシドの
如きスルホキシド溶媒類などを例示することができる。
【００２６】水性溶媒を有機溶媒との混合溶媒の形で利
用する場合の両者の混合比は適当に選択できるが、例え
ば水性溶媒；有機溶媒（ｖ／ｖ比）の比で１００：０〜
１：９９の如き混合比を例示することができる。
用する場合の両者の混合比は適当に選択できるが、例え
ば水性溶媒；有機溶媒（ｖ／ｖ比）の比で１００：０〜
１：９９の如き混合比を例示することができる。
【００２７】反応モル比、ホスホリパーゼＤの使用量、
溶媒の使用量などは適宜に選択することができるが、例
えば、式（ＩＩ）のリン脂質１モルに対してアスコルビ
ン酸又はコージ酸約１：１〜約１：１０００モルの反応
モル比を例示することができる。また、ホスホリパーゼ
Ｄの使用量としては、例えば、式（ＩＩ）のリン脂質１
ｇ当り約１０〜約１０００００単位、好ましくは約１０
０〜約１０００単位程度の使用量を例示することができ
る。さらに、溶媒の使用量としては、例えば、式（Ｉ
Ｉ）のリン脂質に対して約２倍〜約１００倍（容量）程
度の使用量を例示することができる。
溶媒の使用量などは適宜に選択することができるが、例
えば、式（ＩＩ）のリン脂質１モルに対してアスコルビ
ン酸又はコージ酸約１：１〜約１：１０００モルの反応
モル比を例示することができる。また、ホスホリパーゼ
Ｄの使用量としては、例えば、式（ＩＩ）のリン脂質１
ｇ当り約１０〜約１０００００単位、好ましくは約１０
０〜約１０００単位程度の使用量を例示することができ
る。さらに、溶媒の使用量としては、例えば、式（Ｉ
Ｉ）のリン脂質に対して約２倍〜約１００倍（容量）程
度の使用量を例示することができる。
【００２８】反応は、室温で進行するので、とくに冷却
又は加熱の必要はないが、所望により適宜、冷却もしく
は加温条件を採用することができる。例えば、約０℃〜
約９０℃、好ましくは約２０℃〜約６０℃の如き反応温
度を例示することができる。また反応時間も適宜に選択
できるが、例えば約１分〜約１０日、好ましくは約１時
間〜約７２時間の如き反応時間を例示することができ
る。所望により、たとえばＴＬＣ（薄層クロマトグラフ
ィー）などの手法を利用して反応経過を追跡し、所望の
目的物の形成を確認することにより反応時間を適宜に変
更することができる。
又は加熱の必要はないが、所望により適宜、冷却もしく
は加温条件を採用することができる。例えば、約０℃〜
約９０℃、好ましくは約２０℃〜約６０℃の如き反応温
度を例示することができる。また反応時間も適宜に選択
できるが、例えば約１分〜約１０日、好ましくは約１時
間〜約７２時間の如き反応時間を例示することができ
る。所望により、たとえばＴＬＣ（薄層クロマトグラフ
ィー）などの手法を利用して反応経過を追跡し、所望の
目的物の形成を確認することにより反応時間を適宜に変
更することができる。
【００２９】ホスホリパーゼＤの存在下で式（ＩＩ）の
リン脂質とアスコルビン酸又はコージ酸とを接触せしめ
る態様は適宜に選択できるが、撹拌もしくは振盪条件下
で行うのが普通である。また、反応は場合によっては窒
素気流中で行うことが望ましい。又、前記のように適当
な粒状物やフィルム状物担体に担持固定化した固定化酵
素の形でホスホリパーゼＤを利用する場合には、例え
ば、固定化酵素膜もしくは固定化酵素粒子層を介して反
応組成液を循環ポンプを用いて通過させる態様で行うこ
とができる。
リン脂質とアスコルビン酸又はコージ酸とを接触せしめ
る態様は適宜に選択できるが、撹拌もしくは振盪条件下
で行うのが普通である。また、反応は場合によっては窒
素気流中で行うことが望ましい。又、前記のように適当
な粒状物やフィルム状物担体に担持固定化した固定化酵
素の形でホスホリパーゼＤを利用する場合には、例え
ば、固定化酵素膜もしくは固定化酵素粒子層を介して反
応組成液を循環ポンプを用いて通過させる態様で行うこ
とができる。
【００３０】上述のようにして反応を行った後、生成す
る式（Ｉ）のリン脂質誘導体は、そのまま又は塩の形で
沈澱させて分離することができる。ここで式（Ｉ）リン
脂質誘導体の塩としては、例えば塩酸、臭化水素酸、硫
酸、燐酸等の無機酸との塩、シユウ酸、マレイン酸、乳
酸、酒石酸、フマール酸、メタンスルホン酸、ベンゼン
スルホン酸、トルエンスルホン酸等の有機酸との塩、ア
ルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸等のアミノ酸
との塩、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属との
塩、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属と
の塩及びアンモニウム塩等があげられる。更に、該誘導
体及びその塩はケイ酸カラムクロマト、アルミナカラム
クロマト、イオン交換クロマト、高速液体クロマト、向
流分配、ゲル濾過、吸着クロマト等の適当な公知の方法
を利用して分離精製することができる。
る式（Ｉ）のリン脂質誘導体は、そのまま又は塩の形で
沈澱させて分離することができる。ここで式（Ｉ）リン
脂質誘導体の塩としては、例えば塩酸、臭化水素酸、硫
酸、燐酸等の無機酸との塩、シユウ酸、マレイン酸、乳
酸、酒石酸、フマール酸、メタンスルホン酸、ベンゼン
スルホン酸、トルエンスルホン酸等の有機酸との塩、ア
ルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸等のアミノ酸
との塩、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属との
塩、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属と
の塩及びアンモニウム塩等があげられる。更に、該誘導
体及びその塩はケイ酸カラムクロマト、アルミナカラム
クロマト、イオン交換クロマト、高速液体クロマト、向
流分配、ゲル濾過、吸着クロマト等の適当な公知の方法
を利用して分離精製することができる。
【００３１】得られる式（Ｉ）リン脂質誘導体は、すぐ
れた界面活性作用を有し細胞膜の透過性に大きな影響を
持つ。従って、式（Ｉ）のリン脂質誘導体はリポソーム
形成基剤又はリポソーム表面修飾基剤として利用できる
他、動植物細胞培養基に添加することにより有用物質生
産を誘導又は促進する効果も期待できる。また、化粧品
たとえばクリーム、乳液に配合して皮膚生理に役立つ乳
化剤として、更に脂肪系薬剤の乳化剤、殺虫剤、除草剤
などの如き農薬の乳化剤用途にも有用である。本発明に
よれば、基質となりうる多くの異った構造の中から選ば
れたリン脂質と、アスコルビン酸又はコージ酸との共存
下にホスホリパーゼＤを作用させることによって多くの
リン脂質誘導体を得ることができるから、それらの中に
は、制ガン作用、血圧降下作用、血小板活性化抑制作用
を持つリン脂質誘導体の存在が期待できるし、上記以外
の生理活性作用を有するリン脂質誘導体の存在も期待で
きる。
れた界面活性作用を有し細胞膜の透過性に大きな影響を
持つ。従って、式（Ｉ）のリン脂質誘導体はリポソーム
形成基剤又はリポソーム表面修飾基剤として利用できる
他、動植物細胞培養基に添加することにより有用物質生
産を誘導又は促進する効果も期待できる。また、化粧品
たとえばクリーム、乳液に配合して皮膚生理に役立つ乳
化剤として、更に脂肪系薬剤の乳化剤、殺虫剤、除草剤
などの如き農薬の乳化剤用途にも有用である。本発明に
よれば、基質となりうる多くの異った構造の中から選ば
れたリン脂質と、アスコルビン酸又はコージ酸との共存
下にホスホリパーゼＤを作用させることによって多くの
リン脂質誘導体を得ることができるから、それらの中に
は、制ガン作用、血圧降下作用、血小板活性化抑制作用
を持つリン脂質誘導体の存在が期待できるし、上記以外
の生理活性作用を有するリン脂質誘導体の存在も期待で
きる。
【００３２】また、アスコルビン酸又はコージ酸を、リ
ン脂質に転移させることによって、該化合物の薬理的副
作用を弱めたり或いは薬理効果を高めて、その投与量を
低減させたりすることも期待できる。さらにまた、アス
コルビン酸又はコージ酸をリン脂質に転移させて、該化
合物を患部に的確に集中させるための薬理活性化合物、
例えばビタミン、殺菌剤等のキャリヤーとして、さらに
は、薬理活性化合物の保護基として有用な役割をはたす
ことも期待できる。
ン脂質に転移させることによって、該化合物の薬理的副
作用を弱めたり或いは薬理効果を高めて、その投与量を
低減させたりすることも期待できる。さらにまた、アス
コルビン酸又はコージ酸をリン脂質に転移させて、該化
合物を患部に的確に集中させるための薬理活性化合物、
例えばビタミン、殺菌剤等のキャリヤーとして、さらに
は、薬理活性化合物の保護基として有用な役割をはたす
ことも期待できる。
【００３３】以下、実施例により本発明をさらに具体的
に説明する。
に説明する。
【００３４】
【実施例】参考例１ ホスホリパーゼＤの調製 きな粉３.０％、コーンスターチ−プリカー１.０％、ペ
プトン０.５％、粉末酵母エキス０.１％、グルコース
１.０％、ＮＨ4ＮＯ3 ０.２５％、Ｋ2ＨＰＯ4０.４
％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０.０１％、ツウイン（Ｔｗ
ｅｅｎ）−８５０.１％から成る培地（ｐＨ６.０）約１
５ｌを３０ｌジャーファーメンターに入れ、１２０℃で
１５分間滅菌後、シード培養液１.５ｌを植菌し、２７
℃で４０時間培養を行った。尚、上記シード培養液は、
澱粉１％、（ＮＨ4)Ｈ2ＰＯ4 ０.２５％、ペプトン０.
２５％、Ｋ2ＨＰＯ3 ０.２％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ
０.０１％を含む水溶液培地（ｐＨ６.８）１００ｍｌを
５００ｍｌ坂口フラスコに入れ、蒸気殺菌後、ノカルデ
ィオプシス金属ＮＯ７７９株［ＦＥＲＭ−ＢＰ−５１
２］又はアクチノマデューラ属ＮＯ３６２株［ＦＥＲＭ
−ＢＰ−５１１］の胞子を一白金耳接種し、培養温度３
０℃、１２０回転／分の条件で２日間振盪培養して調製
した。
プトン０.５％、粉末酵母エキス０.１％、グルコース
１.０％、ＮＨ4ＮＯ3 ０.２５％、Ｋ2ＨＰＯ4０.４
％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０.０１％、ツウイン（Ｔｗ
ｅｅｎ）−８５０.１％から成る培地（ｐＨ６.０）約１
５ｌを３０ｌジャーファーメンターに入れ、１２０℃で
１５分間滅菌後、シード培養液１.５ｌを植菌し、２７
℃で４０時間培養を行った。尚、上記シード培養液は、
澱粉１％、（ＮＨ4)Ｈ2ＰＯ4 ０.２５％、ペプトン０.
２５％、Ｋ2ＨＰＯ3 ０.２％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ
０.０１％を含む水溶液培地（ｐＨ６.８）１００ｍｌを
５００ｍｌ坂口フラスコに入れ、蒸気殺菌後、ノカルデ
ィオプシス金属ＮＯ７７９株［ＦＥＲＭ−ＢＰ−５１
２］又はアクチノマデューラ属ＮＯ３６２株［ＦＥＲＭ
−ＢＰ−５１１］の胞子を一白金耳接種し、培養温度３
０℃、１２０回転／分の条件で２日間振盪培養して調製
した。
【００３５】培養後、菌体固形物を遠心分離により除去
し、遠心上清１３１（ノカルディオプシス属ＦＥＲＭ−
ＢＰ−５１２株を用いた場合は０.５４μ／ｍｌ；アク
チノマデューラ属ＦＥＲＭ−ＢＰ−５１１株を用いた場
合は１.７μ／ｍｌであった。）を得た。この遠心上清
を５℃に冷却した後、−２０℃のアセトンを加えてアセ
トン濃度３０〜７０％画分に相当するホスホリパーゼＤ
を含む沈澱物を遠心分離により集めた。この沈澱物を、
ノカルディオプシス属ＦＥＲＭ−ＢＰ−５１２株を用い
た場合にはｐＨ６.０、アクチノマデューラ属ＦＥＲＭ
−ＢＰ−５１１株を用いた場合はｐＨ６.５のトリス−
マレイン酸に溶解し、０.０２Ｍの同緩衝液に対して透
析した後、同緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−セルロース
に通塔し、通過区分を集めた。次に堀内等の方法［Ｊ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ．８１、１６３９（１９７７）］で調整
したパルミトイルガーゼをカラムに充填し、充分に水洗
してから上記ＤＥＡＥ−セルロース通過液を注入し、活
性を吸着した。これを０.０５Ｍトリス−塩酸緩衝液
（ｐＨ７.２）で洗浄後、０.２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１
００を含む同緩衝液を加え活性を溶出した。活性区分を
集めてバイオエンジエアリング社製の限外濾過膜（Ｔｙ
ｐｅ Ｇ−１０Ｔ）を用いて濃縮した後、ゲル濾過担体
としてトヨパールＨＷ−５５Ｆ［東洋曹達（株）製］充
填カラムに注入し、蒸留水を用いて通塔し、活性区分を
集めて凍結乾燥を行った。
し、遠心上清１３１（ノカルディオプシス属ＦＥＲＭ−
ＢＰ−５１２株を用いた場合は０.５４μ／ｍｌ；アク
チノマデューラ属ＦＥＲＭ−ＢＰ−５１１株を用いた場
合は１.７μ／ｍｌであった。）を得た。この遠心上清
を５℃に冷却した後、−２０℃のアセトンを加えてアセ
トン濃度３０〜７０％画分に相当するホスホリパーゼＤ
を含む沈澱物を遠心分離により集めた。この沈澱物を、
ノカルディオプシス属ＦＥＲＭ−ＢＰ−５１２株を用い
た場合にはｐＨ６.０、アクチノマデューラ属ＦＥＲＭ
−ＢＰ−５１１株を用いた場合はｐＨ６.５のトリス−
マレイン酸に溶解し、０.０２Ｍの同緩衝液に対して透
析した後、同緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−セルロース
に通塔し、通過区分を集めた。次に堀内等の方法［Ｊ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ．８１、１６３９（１９７７）］で調整
したパルミトイルガーゼをカラムに充填し、充分に水洗
してから上記ＤＥＡＥ−セルロース通過液を注入し、活
性を吸着した。これを０.０５Ｍトリス−塩酸緩衝液
（ｐＨ７.２）で洗浄後、０.２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１
００を含む同緩衝液を加え活性を溶出した。活性区分を
集めてバイオエンジエアリング社製の限外濾過膜（Ｔｙ
ｐｅ Ｇ−１０Ｔ）を用いて濃縮した後、ゲル濾過担体
としてトヨパールＨＷ−５５Ｆ［東洋曹達（株）製］充
填カラムに注入し、蒸留水を用いて通塔し、活性区分を
集めて凍結乾燥を行った。
【００３６】この乾燥粉末を、ノカルディオプシス属ホ
スホリパーゼＤの場合には０.０２５Ｍイミダゾール−
塩酸（ｐＨ７.４）に溶解後、アクチノマデューラ属ホ
スホリパーゼＤの場合には０.０２５Ｍトリス−酢酸
（ｐＨ８.３）に溶解後、ファルマシア・ファインケミ
カルス社製のポリバッファ交換体ＰＢＥTN９４（２０ｍ
ｌ）充填カラムに通塔して活性を吸着後、同社製の溶出
用ポリバッファ（ｐＨ５.０）を用いてｐＨ勾配により
溶出した。溶出したホスホリパーゼＤの活性区分を集め
て限外濾過膜にて濃縮し、セファデックスＧ−７５充填
カラムに通塔し、ホスホリパーゼＤ活性区分を集めて凍
結乾燥した。
スホリパーゼＤの場合には０.０２５Ｍイミダゾール−
塩酸（ｐＨ７.４）に溶解後、アクチノマデューラ属ホ
スホリパーゼＤの場合には０.０２５Ｍトリス−酢酸
（ｐＨ８.３）に溶解後、ファルマシア・ファインケミ
カルス社製のポリバッファ交換体ＰＢＥTN９４（２０ｍ
ｌ）充填カラムに通塔して活性を吸着後、同社製の溶出
用ポリバッファ（ｐＨ５.０）を用いてｐＨ勾配により
溶出した。溶出したホスホリパーゼＤの活性区分を集め
て限外濾過膜にて濃縮し、セファデックスＧ−７５充填
カラムに通塔し、ホスホリパーゼＤ活性区分を集めて凍
結乾燥した。
【００３７】斯くて、ノカルディオプシス属ホスホリパ
ーゼＤの場合には、約４０％の活性回収率で、比活性１
７８.３μ／ｍｇ蛋白質として、アクチノマデューラ属
ホスホリパーゼＤの場合には約４３％の活性回収率で、
比活性２１８.３μ／ｍｇ蛋白質として、ホスホリパー
ゼＤが回収された。
ーゼＤの場合には、約４０％の活性回収率で、比活性１
７８.３μ／ｍｇ蛋白質として、アクチノマデューラ属
ホスホリパーゼＤの場合には約４３％の活性回収率で、
比活性２１８.３μ／ｍｇ蛋白質として、ホスホリパー
ゼＤが回収された。
【００３８】実施例１ 下記のリン脂質 基質Ｉ：Ｌ−α−レシチン（卵黄由来 シグマ社製 純
度９９％）、又は 基質ＩＩ：Ｌ−α−リゾレシチン（卵黄 シグマ社製
純度９９％） とアスコルビン酸又はコージ酸とを、後記ＴＬＣによる
転移生成物の生成確認方法に従って、ホスホリパーゼＤ
の存在下で反応させて、転移生成物の形成を確認した。
そのＲｆ値を後掲第２表に示す。
度９９％）、又は 基質ＩＩ：Ｌ−α−リゾレシチン（卵黄 シグマ社製
純度９９％） とアスコルビン酸又はコージ酸とを、後記ＴＬＣによる
転移生成物の生成確認方法に従って、ホスホリパーゼＤ
の存在下で反応させて、転移生成物の形成を確認した。
そのＲｆ値を後掲第２表に示す。
【００３９】ＴＬＣによる転移生成物の生成確認方法：
− 下記組成 １％リン脂質乳化液 ０．１ ｍｌ ０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．７） ０．１ ｍｌ １Ｍ塩化カルシウム水溶液 ０．０１ ｍｌ ２０％アスコルビン酸又はコージ酸水溶液 ０．２ ｍｌ の反応液にホスホリパーゼＤ水溶液０．０１ｍｌ（１
ｕ）を加え、３０℃で２日静置した。
− 下記組成 １％リン脂質乳化液 ０．１ ｍｌ ０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．７） ０．１ ｍｌ １Ｍ塩化カルシウム水溶液 ０．０１ ｍｌ ２０％アスコルビン酸又はコージ酸水溶液 ０．２ ｍｌ の反応液にホスホリパーゼＤ水溶液０．０１ｍｌ（１
ｕ）を加え、３０℃で２日静置した。
【００４０】尚、上記１％リン脂質乳化液は、リン脂質
１００ｍｇにジエチルエーテル１ｍｌ及び蒸留水１０ｍ
ｌを加え氷冷下に６００Ｗ、２０ ｋＨｚの条件で５分
間超音波処理して形成した。また、上記２０％アスコル
ビン酸又はコージ酸は、必要に応じて１Ｎカセイソーダ
でｐＨを６.０に調整した後に用いた。
１００ｍｇにジエチルエーテル１ｍｌ及び蒸留水１０ｍ
ｌを加え氷冷下に６００Ｗ、２０ ｋＨｚの条件で５分
間超音波処理して形成した。また、上記２０％アスコル
ビン酸又はコージ酸は、必要に応じて１Ｎカセイソーダ
でｐＨを６.０に調整した後に用いた。
【００４１】上記静置後、０.１Ｎ塩酸０.５ｍｌを加え
反応を停止した後、５ｍｌのクロロホルムメタノール混
液（２：１ ｖ／ｖ）を加えて激しく撹拌し、脂質（生
成物）を抽出した。この懸濁液を数分間静置し、下層の
クロロホルム層を分取し、３０℃で減圧乾固した後、ク
ロロホルム−メタノール混液（２：１ ｖ／ｖ）１００
μｌに溶解してＴＬＣの試料とした。このうち１０μｌ
をシリカゲル薄層（メルク社製、シリカゲル６０ＴＬＣ
プレート、２０×２０ｃｍ）にスポットし、ジイソブチ
ルケトン−酢酸−水（４０：２５：５ ｖ／ｖ）を展開
溶媒として展開した。
反応を停止した後、５ｍｌのクロロホルムメタノール混
液（２：１ ｖ／ｖ）を加えて激しく撹拌し、脂質（生
成物）を抽出した。この懸濁液を数分間静置し、下層の
クロロホルム層を分取し、３０℃で減圧乾固した後、ク
ロロホルム−メタノール混液（２：１ ｖ／ｖ）１００
μｌに溶解してＴＬＣの試料とした。このうち１０μｌ
をシリカゲル薄層（メルク社製、シリカゲル６０ＴＬＣ
プレート、２０×２０ｃｍ）にスポットし、ジイソブチ
ルケトン−酢酸−水（４０：２５：５ ｖ／ｖ）を展開
溶媒として展開した。
【００４２】スポットの検出には下記の試薬を用いた。
【００４３】検出されたスポットで未分解の基質及びそ
の加水分解物以外のリン脂質のスポットが検出された場
合、これを転移生成物と認めた。
の加水分解物以外のリン脂質のスポットが検出された場
合、これを転移生成物と認めた。
【００４４】検出試薬： リン酸の呈色： Ｚｉｎｚａｄｅの試薬 （Ｂｅｉｓｓ Ｕ．Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．１３、１
０４）１９６４）） 有機化合物の呈色： ５０％硫酸
０４）１９６４）） 有機化合物の呈色： ５０％硫酸
【００４５】
【表２】 実施例２ Ｌ−α−レシチン（卵黄由来 シグマ社製 純度９９％）の １０％ジエチルエーテル溶液 ０．２ ｍｌ ０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．７） ０．２ ｍｌ １Ｍ塩化カルシム水溶液 ０．１ ｍｌ ２０％アスコルビン酸又はコージ酸水溶液 ０．５ ｍｌ を共栓付き試験管中に入れｐＨ５．７に合した後、ホス
ホリパーゼＤ水溶液０．１ｍｌ（１０〜２０ｕ）を加え
て、３０℃２日間振トウ反応させた。
ホリパーゼＤ水溶液０．１ｍｌ（１０〜２０ｕ）を加え
て、３０℃２日間振トウ反応させた。
【００４６】次に、反応液に０．１Ｎ塩酸を２ｍｌ加え
て反応を停止した後更にクロロホルム−メタノール混液
（２：１ ｖ／ｖ）１０ｍｌを加えて、激しく混合し、
リン脂質を抽出した。この混合液を２０００ｘｇ１０分
間遠心し、下層のクロロホルム層を分取し、分取したク
ロロホルム層を更に５ｍｌの水で洗った。この混合液か
ら遠心によって再びクロロホルム層を分取し、３０℃で
減圧乾固した後、０．５ｍｌのｎ−ヘキサン−２−プロ
パノール−水（６０：８０：１２ ｖ／ｖ）混液に溶解
した。
て反応を停止した後更にクロロホルム−メタノール混液
（２：１ ｖ／ｖ）１０ｍｌを加えて、激しく混合し、
リン脂質を抽出した。この混合液を２０００ｘｇ１０分
間遠心し、下層のクロロホルム層を分取し、分取したク
ロロホルム層を更に５ｍｌの水で洗った。この混合液か
ら遠心によって再びクロロホルム層を分取し、３０℃で
減圧乾固した後、０．５ｍｌのｎ−ヘキサン−２−プロ
パノール−水（６０：８０：１２ ｖ／ｖ）混液に溶解
した。
【００４７】この試料１０ｕｌをシリカゲル薄層（メル
ク社製 シリカゲル６０ＴＬＣプレート）にスポット
し、ジイソブチルケトン−酢酸−水（４０：２５：５
ｖ／ｖ）の溶媒系で展開したところ３種類のリン脂質が
検出され、そのうち２つはホスファチジン酸及びレシチ
ンとＲｆ値が一致した。そこでこの試料を高速液体クロ
マトグラフィーによって分離精製した。カラムはラジア
ルパックカートリッジシリカ８ｍｍ×１０ｃｍ（ウオー
ターズ社製）、溶媒はｎ−ヘキサン−２−プロパノール
−水（６０：８０：１２ ｖ／ｖ）、流速２ｍｌ／分
で、ピークの検出には４４１型紫外線検出器（ウオータ
ーズ社製）による２１４ｎｍの吸収、及びＲ４０１型示
差屈折計（ウオーターズ社製）を用いた。試料は５回に
分け０．１ｍｌづつ注入した。
ク社製 シリカゲル６０ＴＬＣプレート）にスポット
し、ジイソブチルケトン−酢酸−水（４０：２５：５
ｖ／ｖ）の溶媒系で展開したところ３種類のリン脂質が
検出され、そのうち２つはホスファチジン酸及びレシチ
ンとＲｆ値が一致した。そこでこの試料を高速液体クロ
マトグラフィーによって分離精製した。カラムはラジア
ルパックカートリッジシリカ８ｍｍ×１０ｃｍ（ウオー
ターズ社製）、溶媒はｎ−ヘキサン−２−プロパノール
−水（６０：８０：１２ ｖ／ｖ）、流速２ｍｌ／分
で、ピークの検出には４４１型紫外線検出器（ウオータ
ーズ社製）による２１４ｎｍの吸収、及びＲ４０１型示
差屈折計（ウオーターズ社製）を用いた。試料は５回に
分け０．１ｍｌづつ注入した。
【００４８】この溶媒によりホスファチジン酸、Ｌ−α
−レシチン、転移生成物であるホスファチジルアスコル
ベート又はホスファチジルコージ酸の３成分を分取し
た。得られたホスファチジルアスコルベート又はホスフ
ァチジルコージ酸はもう一度同様な操作により精製し、
精製ホスファチジルアスコルベート又はホスファチジル
コージ酸を得た。これはＴＬＣ及び高速液クロで単一で
あることを確認した。この化合物のＩＲスペクトルは日
本分光Ａ２０２型赤外分光光度計を用い、液膜法で測定
した。その結果を第３表に示す。
−レシチン、転移生成物であるホスファチジルアスコル
ベート又はホスファチジルコージ酸の３成分を分取し
た。得られたホスファチジルアスコルベート又はホスフ
ァチジルコージ酸はもう一度同様な操作により精製し、
精製ホスファチジルアスコルベート又はホスファチジル
コージ酸を得た。これはＴＬＣ及び高速液クロで単一で
あることを確認した。この化合物のＩＲスペクトルは日
本分光Ａ２０２型赤外分光光度計を用い、液膜法で測定
した。その結果を第３表に示す。
【００４９】
【表３】 実施例３ 後掲第４表に示した下記リン脂質 基質Ｉ：Ｌ−α−レシチン、β，γ−ジヘキサデシル
（カルビオケムーベ−リング社製） 基質ＩＶ：Ｌ−α−リゾレシチン（卵黄由来、シグマ社
製） を実施例１と同様な方法で乳化し１０％乳化液を調整し
た。乳化液０．２ｍｌをそれぞれ別の共栓付試験管に入
れ、複素環アルコールとして コージ酸の２０％溶液 ０．５ ｍｌを
加え、 ０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．７） ０．２ ｍｌ、 １Ｍ塩化カルシウム水溶液 ０．１ ｍｌ、 を加え、更にホスホリパーゼＤ水溶液０．１ｍｌ（２０
ｕ）を加え、３０℃で２日間静置した。
（カルビオケムーベ−リング社製） 基質ＩＶ：Ｌ−α−リゾレシチン（卵黄由来、シグマ社
製） を実施例１と同様な方法で乳化し１０％乳化液を調整し
た。乳化液０．２ｍｌをそれぞれ別の共栓付試験管に入
れ、複素環アルコールとして コージ酸の２０％溶液 ０．５ ｍｌを
加え、 ０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．７） ０．２ ｍｌ、 １Ｍ塩化カルシウム水溶液 ０．１ ｍｌ、 を加え、更にホスホリパーゼＤ水溶液０．１ｍｌ（２０
ｕ）を加え、３０℃で２日間静置した。
【００５０】これらの反応液を実施例２と同様に処理し
転移生成物を得た。この化合物のＩＲスペクトルを第４
表に示す。
転移生成物を得た。この化合物のＩＲスペクトルを第４
表に示す。
【００５１】
【表４】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｎ 9/16 Ｃ１２Ｒ 1:03） (Ｃ１２Ｎ 9/16 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 町田 晴夫 東京都日野市旭が丘２−24−４ (72)発明者 岩崎 慎二郎 東京都日野市東豊田２−21−17
Claims (1)
- 【請求項１】 一般式（Ｉ） 【化１】 式中Ａは下記式 【化２】 の基を示し、ここで、Ｒ1及びＲ2は同一もしくは相異な
り、それぞれ飽和もしくは不飽和のＣ7〜Ｃ21脂肪酸残
基を示し、Ａ′は−ＯＨ又は−Ｏ-を示し、Ｃは式 【化３】 の基を示す、で表わされるリン脂質誘導体及びその塩。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5113885A JPH075615B2 (ja) | 1993-04-16 | 1993-04-16 | リン脂質誘導体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5113885A JPH075615B2 (ja) | 1993-04-16 | 1993-04-16 | リン脂質誘導体 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59209929A Division JPS6188890A (ja) | 1984-10-08 | 1984-10-08 | 酵素法リン脂質複素環化合物誘導体の製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0656856A true JPH0656856A (ja) | 1994-03-01 |
| JPH075615B2 JPH075615B2 (ja) | 1995-01-25 |
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ID=14623571
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5113885A Expired - Fee Related JPH075615B2 (ja) | 1993-04-16 | 1993-04-16 | リン脂質誘導体 |
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| JP (1) | JPH075615B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114214377A (zh) * | 2021-12-24 | 2022-03-22 | 中国海洋大学 | 磷脂酰-琼胶寡糖及其制备方法 |
-
1993
- 1993-04-16 JP JP5113885A patent/JPH075615B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114214377A (zh) * | 2021-12-24 | 2022-03-22 | 中国海洋大学 | 磷脂酰-琼胶寡糖及其制备方法 |
| CN114214377B (zh) * | 2021-12-24 | 2024-03-08 | 中国海洋大学 | 磷脂酰-琼胶寡糖及其制备方法 |
Also Published As
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|---|---|
| JPH075615B2 (ja) | 1995-01-25 |
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