JPH0219393A - Ｎ‐アセチルガラクトサミノオリゴ糖及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、新規物質であるＮ−アセチルガラクトサミノ
オリゴ糖、及びその製造方法に関するものである。

（従来の技術） 近年、微生物、植物あるいは動物の生産する多糖類に各
種の有益な生理活性があることが知られるようになり、
これら多糖類に対する関心が高まっている。

そして例えばポリグルコサミン（キトサン）においても
、キチン、キトサン及びそのオリゴ糖が抗腫瘍活性とい
ったすぐれた生理活性を有することが発見されている。

また、ポリガラクトサミンも上記したポリグルコサミン
と類似の多糖類であることから、ポリガラクトサミンに
もすぐれた生理活性が期待され、ポリガラクトサミンに
対する関心が高まっている。

しかしながら、ポリガラクトサミン（α−１，４−ガラ
クトサミノガラクタン）の内、微生物起源のものは非常
に少なく、例えば不完全菌由来のＰＦ−１０１及びＰＦ
−１０２が知られている程度であり（特公昭５６−１２
６３９号、特開昭６２−２９４０９３号）、少糖類であ
るガラクトサミノオリゴ糖自体が未知の化合物である。

本発明は、これら未知の特定のガラクトサミノオリゴ糖
から誘導された化合物、特にＮ−アセチル化合物に関す
るものであるが、このような化合物は従来全く知られて
おらず新規である。

（発明が解決しようとする問題点） 本発明は、ポリガラクトサミンを出発原料として、従来
未知の新規な生理活性物質を見出す目的でなされたもの
である。

（問題点を解決するための手段） 本発明は、上記［１的を達成するためになされたもので
あって、従来主として注目されてきた多糖類ではなく、
その分解生成物であるオリゴ糖に着目し、更にその誘導
体について検討した結果完成されたものである。

本発明に係るＮ−アセチル化したガラクトサミノオリゴ
糖は、もとより、Ｎ−アセチル化する原料化合物である
ガラクトサミノオリゴ糖自体も、いずれもが文献未載の
新規化合物である。本発明に係る化合物は、医薬、農薬
、工業用薬品又はそれらの中間体として有用であり、特
に、単独で又は混合して抗腫瘍剤等各種の有益な生理活
性物質として強く期待されるものである。

本発明を実施するに際して、ガラクトサミノオリゴ糖の
出発原料として、ＰＦ−１０２に着目した。

ＰＦ−１０２は、化学構造が明確化され且つ微生物を起
源とする大量安定供給が確保された多糖類である。

なお、本発明の出発物質としては、上記したようにα−
１，４−ポリガラクトサミンの氷解物を用いるほか、化
学合成法その他の方法で製造したガラクトサミノオリゴ
糖も単独又は混合して適宜使用できることには多言を要
しない。

ＰＦ−１０２は、Ｄ−ガラクトサミンが主にα−１，４
結合した分子量１６万以上の塩基性多糖、α−１，４ポ
リガラクトサミンであって、次の式で示される天然多糖
類である。

このＰＦ−１０２は、和歌山系の腐植層から分離した不
完全菌［１菌の培養液中に蓄積される凝集活性物質の１
つであって、培養液に塩類を添加して析出させた酸水溶
液溶解性の析出物を更に精製して得られたものであって
、次の理化学的性質を有するものである。

（１）凝集活性；きわめて微量で懸濁微細物を凝集する
。

（２）凝集活性ｐＨ範囲；ＰＨ２〜９で安定に凝集活性
を示す。

（３）凝集活性温度範囲；０〜ｌＯＯ℃で凝集活性が認
められる。

（４）凝集活性イオン強度；炭酸およびＦ６．　（ｓｏ
４）３により凝集活性が阻害されるがそれ以外の各種イ
オン及びイオン強度によって凝集活性に影響はなく、Ｎ
ａＣ１、Ｋ２ＳＯ４でＩＭまで全く影響を与えない。

（５）元素分析；窒素８．６４％、炭素４２．８０％、
水素６．８７％ 一般式：　（ＣｓＨｔｔＮＯ＊”ＸＨｚＯ）ｙ（６）呈
色反応；ニンヒドリン反応　　　　十キサントプロティ
ン反応 エーリッヒ反応　　　　　− モリッシュ反応 フェノール硫酸法　　　　士 レローゼンテスト （７）電気泳動；密度勾配等電点電気泳動によす単一物
質として確認され、等電点（ｐＩ）は８．５である。

（８）物質の色；淡黄色 （９）塩基性、酸性、中性の区別 ０．５％ｗ／ｖで水に懸濁した場合のｐＨは７．５（脱
イオン水のｐｌ＋５．８）である。

（１０）溶剤に対する溶解性 ・熱水に難溶 ・冷水に難溶 ・希酸に易溶 ・希アルカリに難溶 ・アルコール類、アセトン、クロロホルム、ベンゼン、
ｎ−ペンタンに不溶６ （１１）平均分子量　１６万以上 上記したＰＦ−１０２の酸塩としては、燐酸塩、塩酸塩
、酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩などが例示される。

上記した凝集活性物質ＰＦ−１０２は、例えば本発明者
らが和歌山系の腐植層より分離した不完全菌［１菌によ
って生産される。不完全菌■−１菌はベニシロマイセス
Ｑ　（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ）に属すものと認めら
れ、ベニシロマイセス［１と命名され、該菌株は微工研
にＦＥＲＮ　Ｐ−３９２８（ＦＥＲＭ　ＢＰ−１１８０
）として寄託されている。

ベニシロマイセスＩ　−１（Ｐａａｃｉｌｏｍｙｃｅｓ
　ｌ−１）を顕微鏡下でａ察したところ、 本菌は分生胞子柄（ｃｏｎｉｄｉｏｐｈｏｒｅ）を欠き
、分生胞子は栄養菌糸または栄養菌糸束から直接生えて
いる一本一本独立したフィアライド（ｐｈｉａｌｉｄｅ
）の先端に長い連鎖をなして派生している。フィアライ
ドは半透明で２０〜４５μの長さを持ち、基部はやや太
＜　（１，０〜１．５μ）先端はやや先細り（０，５〜
１．０μ）で、直線的あるいは先端部がやや湾曲したも
のもある。分生胞子は電子顕微鏡により葉巻タバコ型（
あるいは桿菌型）であり、そのサイズは４〜６Ｘ１．０
〜１．４μである。

分生胞子は普通２５〜３５個の連鎖をなしているが、ま
れにはもつと長鎖のものも１！察される。この分生胞子
の連鎖は非常にもろく、−寸したショックで簡単にくず
れる。

上記形態的特徴、及び、ツアペック寒天培地、麦芽寒天
培地、ポテトデキストロース寒天培地。

ＹｐＳｓ寒天培地、ＭＹ、。寒天培地での培養上の性質
から１本菌は、モノフィアライド（ｍｏｎｏｐｈｉａｌ
ｉｄｅ）の不完全菌と考えられオニオンとバロン共著の
ａ＋ｏｎｏｐｈｉａｌｉｄｉｃ　５ｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ
　Ｐａｅｃｉｌｏａ＋ｙｃｅｓ（Ａｇｎｅｓ。

Ｈ，Ｓ、　０ｎｉｏｎｓ　ａｎｄ　Ｇ、　Ｌ、　Ｂａｒ
ｒｏｎ：　１９６７゜Ｍｙｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ｐａｐ
ｅｒｓ　Ｎｏ、１０７、Ｃｏｍｍｏｎ　ｖｅａｌｔｈＭ
ｙｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ、　Ｋｅｙ
、Ｅｎｇｌａｎｄ）に記載されているベエシロマイセス
バシリスポラス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃａｓ　ｂａｃｉ
ｌｌｉｓｐｏｒｕｓ）の特徴に類似している点が多い。

即ち不完全菌の分類上置も重要な特徴とされる分生胞子
の形態はＰ、　ｂａｃｉｌｌｉｓｐｏｒｕｓの分生胞子
の形態に極めて似ており、フィアライドの形態なども良
く似ている。しかし、一方各種の培地での培養上の特徴
については多少の差違が認められ、上記文献の記載のＰ
、　ｂａｃｉｌｌｉｓｐｏｒｕｓは生育速度が本菌に比
較して遅く、菌糸は初期白色、培養後期に桃色がかる（
ｐｉｎｋｉｓｈ）と記述されているが、本菌では初期白
色、培地によっては後期淡黄色を呈する点で異なる。し
かし前述文献にも Ｐ、　ｂａｃｉｌＨｓｐｏｒｕｓの菌株には培養上の特
徴や分生胞子の大きさにおいて変動がある。（Ｓｔｒａ
ｉｎｓ　ｏｆＰ、　ｂａｃｉｌｌｉｓｐｏｒｕｓ　ｓｈ
ｏｗ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｃｕｌｔｕｒａｌｃ
ｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｉｎ　５ｐｏ
ｒｅ　５ｉｚｅ）と記述されていることを考慮すると、
本菌はＰａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓｂａｃｉｌｌｉｓｐｏ
ｒｕｓかその類縁菌と考えられるが決定的根拠がないの
でベニシロマイセスＩ−１とした。

ペーシロマイセスＩ−１は通常の糸状菌の液体培養方法
で培養することができる。

ペーシロマイセスＩ−１の胞子または菌糸を液体培地に
接種し、好気的に培養する。炭素源としてはブドウ糖、
麦芽糖、蔗糖、澱粉、廃糖蜜等を使用することが出来る
が好ましくはブドウ糖を用いるのが良い。窒素源として
は硫酸アンモニウム、硝酸ソーダなどの無機窒素、ペプ
トン、酵母エキスなどの有機窒素が使用出来る。

培養温度は本凝集活性物質生産菌が凝集活性物質を生産
する範囲内で適宜変更し得るが通常は２０〜２５℃で培
養することが好ましい。培養時間は培養条件によって異
なるが、通常４〜５日程度であり、凝集活性物質が最高
に達する時間を見積って適当な時間に終了すればよい。

本発明においては、培養濾液または濾液濃縮液に各種塩
を添加し、沈澱が生じない場合は必要によってはアルカ
リを添加してｐＨを７〜９として、析出させ、析出物を
分離し、水洗し、これを希酸水溶液に溶解し、再び塩を
添加するか、アルカリ等の添加によってｐＨを７〜９と
して、析出させて。

高度に精製されたＰＦ−１０２を得ることができる。

円（−１０２の含有液に添加される塩としては、次の例
示の塩を含めて塩の１又は２以上である。

即ち、塩化カリ、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、塩
化アンモニアなどの塩酸塩、硝酸カリ、硝酸ナトリウム
などの硝酸塩、酢酸ソーダなどの酢酸塩、硫酸２カリ、
硫安、硫酸カルシウム、硫酸銅などの硫酸塩、リン酸２
カリ、リン酸１カリ、リン酸２ソーダ、リン酸エソーダ
などのリン酸塩などが例示される。

添加する塩は溶解した状態であれば、どれだけでもよい
が、好ましいのはＰＦ−１０２含有液に対し０．５〜５
０％、より好ましくは２〜４０％程度である。

添加する塩の種類によってはｐＨが７以上になるので、
この場合はｐＨの調整を行なうことなく、ＰＦ−１０２
が析出するので、析出物を分離すればよい。

塩を添加しても析出を生じない場合はカセイソーダ等の
アルカリを用いて、ｐＨを７〜９、好ましくけ等電点で
ある８、５附近にｐｌ＋調整を行えばよい。

ＰＦ−１０２含有液に塩の添加と場合によってｐＨ７〜
９の調整を行えば、夾雑物の妨害によって容易に析出し
なかったＰＦ−１０２が析出を起し、夾雑物とは分離し
て析出する。この析出物は遠心分離又は濾布による濾過
によって分離できる。

培養液をｐＨ８，５の等電点処理をしてもＰＦ−１０２
の析出は全く起らなかったことからみれば、塩の添加だ
けでＰＦ−１０２の析出が完全に起るということばきわ
めて意外なことである。

分離した析出物は多量の塩を含んでいるので、これを水
や溶媒で洗滌して脱塩し、酸に溶解する。

酸としては酢酸などの有機塩、塩酸などの無機酸などい
ずれの酸でもよく、また、濃度としては０．０１〜３モ
ル程度のものがよい。

析出物を酸に溶解した後は、ｐＨ７〜９の等電点附近の
処理のみで容易に析出するようになっているので、カセ
イソーダ等のアルカリを添加し、ｐＨ７〜９、好ましく
はｐＨ８，５とｐＨ調整し、析出物を得る。

更に、精製するためには、この析出物を水等で洗滌し、
再び酸に溶解し、ｐＨ７〜９のＰＨ調整を行い、析出物
を得ることができる。

この精製処理は何度でも行なうことができ、精製が完了
した時点で、析出物はほぼ純粋となり、前記した化学構
造を有するα−１，４−ガラクトサミノガラクタンであ
るＰＦ−１０２が得られるのである。

このようにして得たポリガラクトサミン（ＰＦ−１０２
）を酸やアルカリ又は酵素で加水分解した後、単離精製
すれば原料化合物であるガラクトサミノオリゴ糖を単品
であるいは数種類を混合物として得ることができる。

例えば酸加水分解の場合は、塩酸等常用される酸液を用
いて、通常、加温しながら酸加水分解を行うのである。

しかる後に、減圧濃縮したり、または、濾液を活性炭で
脱色した後アニオン交換樹脂で処理したりして、塩酸を
除去する。このようにして得たガラクトサミノオリゴ糖
混液をクロマトグラフィー等分離精製処理に付して、各
フラクションを回収し、各ガラクトサミノオリゴ糖をそ
れぞれ単離すればよい。

このように、ポリガラクトサミンを酸又はアルカリによ
って加水分解することによりオリゴ糖を得ることができ
るのであるが、オリゴマー、特に重合度の高いものの収
率が比較的低い６例えば塩酸によってポリガラクトサミ
ンを加水分解する時、ランダムな分解の結果、得られる
オリゴ糖の量はモノ−ガラクトサミン、ジ−ガラクトサ
ミン、トリーガラクトサミン、テトラ−ガラクトサミン
、ペンタ−ガラクトサミンの順であり、重合度が大きい
程その収量は低下するということになる。

そこで、ポリガラクトサミンを分解して、重合度が比較
的大きな種々の重合度のオリゴ糖を生成し得る酵素につ
いて検索したところ、シュードモナス属に属する細菌が
、大きな重合度のみでなく小さな重合度のオリゴ糖も生
成する新規なポリガラクトサミン分解酵素を生産するこ
とを見出し、この酵素を利用することにより新規なオリ
ゴ糖を各種得ることにも成功したものである。

この新規なポリガラクトサミン分解酵素の理化学的性質
は次のとおりである： （１）作用および基質特異性 ポリガラクトサミン（α−１，４ガラクトサミノガラク
タン）に作用してオリゴガラクトサミンを生成する。

その他の多糖類、例えばポリヘキソース、キチン、澱粉
（α−１，４グルカン）、グリコーゲン（α−１，４グ
ルカン）、プルラン（α−１，４グルカン）、デキスト
ラン（α−１，６グルカン）、ラミナリン（β−１，３
グルカン）、カルボキシルセルロ−ス ルカン）、キトサン（β−１，４ゲルコサミノグルカン
）、エチレングリコールキチン（β−１，４Ｎ−アセチ
ルゲルコサミノグルカン）、 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍの
Ｎ−アセチルガラクトサミノガラクタン（β−１，３Ｎ
−アセチルガラクトサミノガラクタン）（Ｙ，　Ａｋｉ
ｙａｍａ，、ａｔ．　ａｌ．、Ａｇｒｉｃ。

Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．、５０（３）７４７．　１９８
６）などには全く作用しない。

（２）至適ｐＨ及び安定ｐＨ範囲 クエン酸リン酸ナトリウム緩衝液を用いた場合、至適ｐ
Ｈは４．５〜７．０であり，安定範囲ｐＨは４．５〜８
、０である。

（３）酵素活性の測定法 酵素活性は基質にＰａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ　Ｉ　−１
菌の生産するＰＦ−１０１又はＰＦ−１０２（その主構
成糖はα−１，４ガラクトサミノガラクタン）を用いた
、この０．５％７０．１モル酢酸緩衝液Ｐ１（６．０溶
液０．５ｍＭに酵素溶液０．５＋ｍｆｌを加え、３７℃
、１０分間反応させ、生じる還元力をＳｏｍｏｇｙｉ−
Ｎｅｌｓｏｎ法で測定した．なお酵素単位は１分間当り
に１μモルのガラクトサミンに相当する還元力を増加さ
せる活性を１単位とした。

（４）作用適温及び温度安定性の範囲 ２０〜７０℃の範囲で測定した結果、この酵素の至適温
度は５５℃であり、それ以上で急激に低下する。

つぎに温度安定性についてみた．　ｐＨ　６．０の条件
で各温度で０〜８０分間保った時の残存活性をみたとこ
ろ、５０℃、１時間で７０％の活性が残存している。

（５）金属イオン等の影響 各種金属イオン及び阻害剤１　ｍＭ　（ＰＣＭＢのみ０
．１ｍＭ）を含む溶液中に３７℃、１時間放置後、残存
酵素活性を測定し，相対値で示した。（表−１）表−１
．　金属等の影響 阻害物　　残存活性（％）　阻害物　　残存活性（％）
無添加　　　　１００ にＣｌ　　　　　　　９６　　　　　　ＮａＣｌ　　　
　　９７ＣａＣｌ，　　　　　　９８　　　　　　Ｌｉ
Ｃｌ　　　　　１００ＢａＣ１，　　　　　　９９　　
　　　　ＭｎＣｌ，　　　　　１０３ＣｏＣｌ，　　　
　　　８８　　　　　　ＮｉＣｌ，　　　　　９０Ｃｄ
Ｃ１，９８５ｎＣ１２２６ ＦｅＣ１２°５　　　　　　　ＦｅＣ１，６ＺｎＣ１，
９２ＨｇＣ１，０ Ｐｂ（ＣＨ，Ｃｏｏ）、　　　９５　　　　　　　ＮＨ
，Ｃ１９８（ＮＨ４）ｚＳ０４１００　　　　　　　Ｃ
ｕＳＯ４２９ｔｒｉｓ　１）　　　　　９７　　　　　
　　ＳＤＳ　２）　　　　　　４ＮＢＳ　３）　　　　
　　８８　　　　　　　ＥＤＴＡ　４）　　　　　９９
阿ＩＡ　５）　　　　　１００　　　　　　　ＰＣＭＢ
　６）　　　　　９３１）トリス（ヒドロキシル）アミ
ノメタン２）ドデシル硫酸ナトリウム ３）　Ｎ−ブロモコハク酸イミド ４）エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム５）モノヨー
ド酢酸 ６）パラオキシ安息香酸第二水銀 以上の結果から、このポリガラクトサミン分解酵素はス
ズ、鉄、銅、無機水銀及びＳＯ５により阻害される。

（６）酵素の精製法 本酵素の単離、精製は常法に従って行うことができる。

例えば、エタノールによる沈殿物をセファデックスＧ−
５０カラムクロマトグラフイー、ＣＭ−セファデックス
Ｃ−２５カラムクロマトグラフイーフエニル−セファロ
ース４Ｂカラムクロマトグラフイーなどの精製手段又は
これらの組合せにより精製される。

（７）分子量 本酵素の分子量はポリアクリルアミドゲルスラブ電気泳
動法により測定すると、３１，０００と計算される。

（８）ポリアクリルアミドゲル電気泳動精製酵素を常法
に従って、７．５％のポリアクリルアミドゲル（ｐＨ８
，６）電気泳動にかけたところ。

単一のバンドが認められた。

（９）等電点 常法によりシュークロース密度勾配の等電点電気泳動を
行った。その結果、この酵素の等電点はｐＩ＝６．７で
ある。

本酵素は、その作用及び基質特異性において従来全く知
られていない新規酵素である。

上記したポリガラクトサミン分解酵素は、例えばシュー
ドモナスｓｐ　Ｈ８８１によって生産される。

シュードモナスｓｐ　８８８１は本発明者らが土壌中よ
り分離した菌株である。

上述の新規なポリガラクトサミン分解酵素生産能を有す
る本菌の分類学的性質を、［バージェズ・マニュアル・
オブ・デターミイティブ・バクテリオロジー」第８版（
１９７４年）及び「バージェズ・マニュアル・オブ・シ
ステマティック・バクテリオロジー」第１巻（１９８４
年）の分類と対比すると、本菌はグロスファクターを要
求せず、ＰＨ８を蓄積し。

アルギニン、ベタインを唯一の炭素源として生育し、ア
ルギニン・デヒドロラーゼ陰性、脱窒反応陰性、４０℃
で生育可能からセクション２（あるいはＲＮＡグループ
２）のＰ、　ｃｅｐａｃｉａ、　Ｐ、　ｇｌａｄｉｏｌ
ｉ。

Ｐ、　ｍａｒｇｉｎａｔｅの類縁菌と思われるがＰ、　
ｃｅｐａｃｉａとは硝酸塩の還元陽性、炭素源の資化性
ではＤ（−）−トレハロース、マルトース、ラクトース
、マレイン酸において異なる。　Ｐ、　ｇｌａｄｉｏｌ
ｉとは、マルトース、ラクトース、マレイン酸、ｍ−ハ
イドロキシブチル酸エステルの資化性の結果が異なる。

Ｐ、　ｍａｒｇｉｎａｔｅとは、ｌ−ハイドロキシブチ
ル酸エステルの結果が異なる。また、Ｐ、　ｃｅｐａｃ
ｉａ、　Ｐ。

ｍａｒｇｉｎａｔｓは、非蛍光性色素を生成するが本菌
はＫｉｎｇＢ、　Ｆ　ａｇａｒ及びＬ−グルタミン酸、
Ｌ−アルギニン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−ヒスチジンを唯
一の炭素源とした時弱い蛍光色素（青白蛍光）は生成す
るが非蛍光性色素の生成は種々の培地条件においても認
められない。これらの結果から、本菌はＰ。

ｃａｐａｃｉａ、　Ｐ、　ｇｌａｄｉｏｌｉ、　Ｐ、　
ｍａｒｇｉｎａｔｅとは異なる５ｐａｃｊｅｓである。

本菌の生理学的諸性質で特徴的なことは、Ｏ−Ｆテスト
において単糖のみならずマルトース、シュークロース、
ラクトース、セルビオースなどの二糖類からも酸を生成
することである。この性質はＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属
、低温性のｐ、　ｆｒａｇｉ、　Ｐ。

ｔａｅｔｒｏｌｅｎｓ（いずれもセクション５　）Ｐ、
　１ｕｎｄｅｎｓｉｓと似ているが生育温度で違いがあ
る。

以上の結果より本菌はＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓの新菌種
と認められ、本菌をシュードモナスｓｐ　Ｉ（８８１と
命名し、通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所に
、微工研菌寄第８９５５号（ＦＥＲＭ　Ｐ−８９５５）
として寄託されている。

ポリガラクトサミン分解酵素生産菌の培養培地としては
、炭素源、窒素源、無機物、その他の栄養素を程よく含
有する培地ならば、合成培地あるいは天然培地のいずれ
でも使用可能である。該培養培地の好適な例としては、
ポリガラクトサミン０．２５％、グルコース０．２５％
、酵母エキス０．０５％、ポリペプトン０．０５％、ｐ
Ｈ７，０の例が挙げられる。

培養温度は２０〜４０℃、好ましくは３０〜３８℃の範
囲、培養開始ｐ＋＋は６〜８、好ましくは７付近で３５
〜７２時間振盪又は深部撹拌培養すれば、培養液中にポ
リガラクトサミン分解酵素が得られる。そして、ポリガ
ラクトサミン分解酵素は必要に応じて単離精製される。

例えば、培養濾液をエタノール沈殿法によって粗酵素を
分離し、これを水性媒質に溶解し、セファデックスＧ−
５０ゲル濾過、ＣトセファデックスＣ−２５イオン交換
クロマトグラフイー、フェニル−セファロースＣＬ−４
Ｂ疎水クロマトグラフィー等の処理により精製されたポ
リガラクトサミン分解酵素が得られる。

このようにして得た新規ポリガラクトサミン分解酵素を
ポリガラクトサミンに作用させると、各種のガラクトサ
ミノオリゴ糖を効果的に得ることができる。この処理は
酵素を用いる加水分解の常法にしたがって行えばよく、
例えば次のような方法が例示される。

先ず、ポリガラクトサミンを低濃度の酸に溶解せしめる
。酸としては、例えば酢酸、ギ酸等の有機酸のほか、硫
酸を除く無機酸が広く使用できる。

こうして得られた多糖類溶液のｐＨを調整した後、上記
により調製したポリガラクトサミン分解酵素を加えて、
３７℃前後の適温で酵素分解を行う。

低分子の分解反応生成物を反応液から取り出し、これを
イオン交換樹脂に吸着せしめた後、適当な濃度勾配の溶
剤で溶出して、各種のガラクトサミノオリゴ糖画分を得
、これを精製して目的とするオリゴ糖をそれぞれ得るの
である。

既述したような酸又はアルカリ加水分解、あるいは酵素
分解を単独でまたはこれらを適宜組合わせることによっ
て、目的とするガラクトサミノオリゴ糖を単独で又は混
合物として得ることができる。即ち、上記によりポリガ
ラクトサミンを加水分解すれば、極めて効果的に、次式
で示されるガラクトサミンオリゴ−２糖〜１２糖をそれ
ぞれ得ることができるし、必要ある場合には各オリゴ糖
の適宜の混合物も自由に得ることができるのである。

（但し、式中ｎは０〜１０を表わす）。

このようにして得た各種のガラクトサミノオリゴ糖を、
単独又は混合物のまま、Ｎ−アセチル化する出発原料と
して使用するのである。また、これらの原料化合物は、
上記したようにポリガラクトサミンを加水分解して製造
するほか、糖合成法によって製造してもよい。

このようにして得たガラクトサミノオリゴ糖を出発原料
として本発明に係るＮ−アセチルガラクトサミノオリゴ
糖を製造するには、出発原料をアセチル化すればよい。

アセチル化法としては、水、アルコール、ピリジン、そ
の他有機溶媒又はそれらの混液中で、無水酢酸あるいは
ハロゲン化アセチル等のアセチル化剤を作用せしめて行
うほか、酢酸又は酢酸エステルと原料化合物を加熱しな
がら反応せしめる方法等が適宜採用されるが、その他ア
ミノ基のアセチル化に用いられる常法であればすべての
方法が広く利用できる。相当過激な条件でアセチル化す
る場合はともかく、通常の反応条件下ではジアセチル体
は生成し難く、したがって、通常は目的とするＮ−アセ
チル体が主として生成される。

Ｎ−アセチル化は、個々に合成して得たガラクトサミノ
オリゴ糖又は混合物から分離精製して得た個々のガラク
トサミノオリゴ糖に対して実施し、個々のＮ−アセチル
ガラクトサミノオリゴ糖を直接製造してもよい。また１
例えばポリガラクトサミンの氷解物のようなガラクトサ
ミノオリゴ糖の混合物をＮ−アセチル化した後、個々の
Ｎ−アセチルガラクトサミノオリゴ糖をそれぞれ分離し
てもよい。

これらＮ−アセチル化は上記したような常法によって行
うが、前者の方法を実施するには例えば次のような操作
を行えばよい：各ガラクトサミノオリゴ糖の水溶液（ρ
１（７）を炭酸水素ナトリウムで飽和した後、約１０″
Ｃ以下好ましくは５℃以下に冷却しながらアセチル化剤
を加えて一定時間撹拌放置してアセチル化する。反応液
をカラ１１に吸着せしめた後、カラムを洗い、Ｎ−アセ
チルガラクトサミノオリゴ糖を溶出せしめ、減圧濃縮、
凍結乾燥等を行って、目的物を得るのである。

また後者の方法を実施するには例えば次のような操作を
行えばよい： ポリガラクトサミンを加水分解して（塩酸加水分解の場
合には、減圧濃縮等によって塩酸を除去し）、ガラクト
サミノオリゴ糖混液を得る。この混液を中性に調整した
後、炭酸水素ナトリウム飽和し、上記と同様にアセチル
化、カラム処理、及び減圧濃縮処理を行って、Ｎ−アセ
チルガラクトサミノオリゴ糖の混合シロップを得る。こ
のシロップをバイオゲルルー４等によりゲル濾過し、個
々のＮ−アセチルオリゴガラクトサミンをそれぞれ分離
、精製し、各両分をそれぞれ回収し、減圧濃縮、凍結乾
燥等を行って、目的物を得るのである。

このようにして得たＮ−アセチルガラクトサミノオリゴ
糖は、ＨＰＬＣ，ＴＬＣ等の標準品、高純度試薬として
利用できるほか、キチン、キトサンのオリゴマーと同様
な又は異なった生理活性が期待され、例えば抗腫瘍活性
、免疫賦活性、抗凝血性等が特に有望であるところから
、各楽の医薬として又はその原料ないし中間体としても
利用することができる。

抗腫瘍活性等生理活性は、各Ｎ−アセチルオリゴ糖単独
で期待されるばかりでなく、Ｎ−アセチルオリゴ糖混合
物（例えば３糖、４糖、５糖の混合物）とした方が更に
強力な抗腫瘍活性等の生理活性が期待できる場合もあり
、いずれにせよ、本発明に係るＮ−アセチルオリゴ糖は
抗腫瘍剤その他生理活性剤として利用することが可能で
ある。

また、食品添加物、栄養剤、保健剤、農薬、工業薬品と
しても利用可能であ・る。

次に本発明の実施例を示す。

実施例１ ポリガラクトサミンの調製 グルコース６００ｇ、ポリペプトン６０ｇ、　ＣａＣ１
□・２Ｈ，０１２５ｇを水道水１７１２に溶解し、濃Ｎ
ａ０１１溶液でρ■７．０に調整した後３０Ｑ容ジャー
ファーメンタ−に移した。

この培地溶液に蒸気を注入することにより加圧、加熱滅
菌（１２１℃、　２０分間）を行った。冷却後の培地（
最終液量２０Ｑ）に、５００ｄ三角フラスコに１５０ｕ
＋Ｑ同組成の培地（グルコース３％、ポリペプトン０．
３％、ＣａＣｌ２０．５％、ｐ　Ｈ７、０）で２６℃、
４日間振盪培養したベニシロマイセスＩ　−Ｉ　ＦＥＲ
Ｍ　Ｐ−３９２８（ＦＥＲＮＢＰ−１１８０）を容量比
で約１０％無菌的に接種した。接種後２７℃、通気量０
．５ＶＶＭ、撹拌数２００ｒｐｎ＋の条件で５日間培養
した。

培養終了後培養物を濾布濾過することにより培養濾液１
１Ｑを得た。この培養濾液を５０°Ｃ〜６０℃に加熱し
ながら分画分子量１６万の限外濾過膜（三菱レイヨン・
エンジニアリング社製ＵＦ膜チューブラ−モジュールＦ
タイプ）を通過させることにより、低分子画分を除き液
量が約３Ｑになる迄濃縮した。更に、約１４０００　Ｘ
　Ｇで遠心分離することにより菌体残渣、熱変性蛋白質
を除去した。

遠心分離後に上澄液画分３Ｑに食塩約７５０ｇ（約２５
％濃度）を加え撹拌し、溶解後、濃Ｎａ０Ｉｌでｐｌ＋
を７．０〜８．５に調整した。−夜装置し塩析物を十分
析出させた後、サラン製の布（塩化ビニリデンと塩化ビ
ニールの共重合体）上に塩析物を回収した。

更にこの塩析物の上から大量の微アルカリ性の水（ｐＨ
７，０以上）を撒布することにより余分の食塩及び培養
液に同時に混在している中性糖、その他の夾雑物を洗い
流した。

次に、水洗後の塩析物に０．１Ｍ塩酸溶液を容量比で約
３倍量加え溶解した。この溶解物に濃ＮａＯＨ溶液を加
えポリガラクトサミンの等電点であるｐＨ８．５に合せ
た。−夜装置し十分析出物を析出させた後、上記と同様
サラン製の布上に析出物を回収し、大量の水道水で洗っ
た。この水洗物をもう１度０．１Ｍ塩酸に溶解後、等電
点沈澱を行い水洗を繰返すことにより精製した。

この精製した析出物を１２１℃、１５分間滅菌後、凍結
乾燥することにより、ポリガラクトサミンを主成分とす
るＰＦ−１０２の精製粉末（ポリガラクトサミンとして
の純度約９９％）を７ｇ得た。

また、用途により上記精製粉末の１部を０．１Ｍ塩酸に
溶解し分画分子量３０万の限外濾過膜（アミコン社製分
子篩膜タイプＸＭ　３００）で分画し、平均分子ｆｉｋ
１６〜３０万のものと平均分子量３０万以上のものに分
画することもできる。

実施例２ ガラクトサミノオリゴ糖の調製 精製ポリ−ガラクトサミン（ＰＦ１０２）　１００ｇを
４規定塩酸、２Ｑに分散させ、冷却管付きの三角フラス
コ中にて、８０℃、８時間、塩酸加水分解した。

分解後、この塩酸溶液を濾紙濾過して未分解残渣を除去
し、これに活性炭約１００ｇを加えて脱色した。次に、
陰イオン交換樹脂ＡＧ３Ｘ４Ａ　（米国バイオ−ラッド
社製）を充填したカラム（８Ｘ　７５ｃｍ）にこの溶液
を通過させ、塩酸を除去した。

次いで、得られたガラクトサミノオリゴ糖混液を活性化
してカラムに充填したＣトセファデックスＣ−２５（２
，５Ｘ　１００ｃｍ）に吸着させ充分水洗後、ｏ〜２．
５モル食塩による直線的濃度勾配で溶出させ、その結果
、１２のピークを分画した。

得られた各ピークのガラクトサミノオリゴ糖を再度活性
炭により脱色し、重合度ｎ　＜　４にあっては電気透析
機、ミクロアシライザーＧ−１１００ＣＭ化成社製）で
脱塩し、吸引濃縮後、凍結乾燥して、また重合度３　＜
　ｎにあっては限外濾過膜（ＯＨ−０５ウルトラフイル
タ一アドバンテツクトーヨー社製）にて脱塩、濃縮し、
凍結乾燥して各両分のガラクトサミノオリゴ糖を得た。

この時、得られた各両分の回収量は第１表に示した。

また、得られた各ガラクトサミノオリゴ糖の各旋光度を
測定したところそれらの旋光度と重合度との間には直線
関係が成り立ち、各両分はガラクトサミノオリゴ糖が重
合度の小さい順に順次溶出されていることが分かった。

第１表 両　分　溶出食塩濃度（モル）ガラクトサミノオリゴ糖
（ｇ）１　　　　　０．２７　　　　　　　　　１１．
９２　　　　　０．４８　　　　　　　　　　９．７３
　　　　　０．７３　　　　　　　　　　６．２４　　
　　　０．９４　　　　　　　　　　５．７５　　　　
　１．１６　　　　　　　　　　３．６６　　　　　１
．３３　　　　　　　　　　３．０７　　　　　１．５
８　　　　　　　　　　２．３８１．７３２．１ ９　　　　　１．８６　　　　　　　　　　１．６１０
　　　　　１．９９１．１ １．１　　　　　２．１０　　　　　　　　　　１．０
１２　　　　　２．２２　　　　　　　　　　０．８実
施例３ ポリガラクトサミン分解酵素の調製 シュードモナスｓｐ　８８８１、ＦＥＲＭ　Ｐ−８９５
５を５００ｍｆｌ三角フラスコ中で、グルコース０．５
％、酵母エキス０．０５％、ポリペプトンＯ，ＯＳ％の
組成を有する種培地１００ｔＱに植菌し、　３０℃で２
０時間培養する。

得られた種培養液を３ｉのジャーファーメンタ−中で、
ポリガラクトサミン（ＰＦ−１０２）０．２５％、グル
コース０．２５％、酵母エキスＯ，ＯＳ％、ポリペプト
ン０．０５％の酵素生産培地１８Ｒに植菌し、　３０’
Ｃで通気量ｉｖｖ阿、攪拌数２０ＯＲＰＭで４８時間培
養した。

得られた培養液を遠心分離（１４，０ＯＯｒｐ＋ｍ）　
して、菌体を除き、得られた培養濾液に冷却したエタノ
ールを６０％濃度まで加えて、タンパク質を沈殿させ、
この沈殿タンパク質を遠心して、溶液がら分離する。得
られたタンパク質を０．１モル酢酸緩衝液（ＰＨ５，０
）で平衡化したｃトセファデックスｃ−２５カラム（２
，５Ｘ　６０ｃｍ）に吸着させ、　Ｏ−０，５モル食塩
の濃度勾配を有する同緩衝液を用いて溶出させる。

溶出した酵素活性区分を集め、限外濾過装置（分子量１
万保持）を使って濃縮する。次に、２モル食塩を含む０
．１モル酢酸緩衝液（ｐＨ６，０）溶液とし、同緩衝液
で平衡化したセファデックスＧ−５０カラム（５Ｘ　９
０ｃｍ）クロマトグラフィーにかける０次いで、活性区
分の食塩濃度を４モルにまで高め、同様な溶液で平衡化
したフヱニルーセファロースＣＬ−４８カラム（２，５
Ｘ　２０ｃ＋＋＋）に吸着させ１食塩の逆濃度勾配を持
つ０．１モル酢酸緩衝液で溶出して精製ポリガラクトサ
ミン分解酵素５０Ｂ　（収率２３．１％、比活性５２μ
ｇ　ｇａｌＮ／ｗｉｎ／ｍｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ）を得る
。

実施例４ ガラクトサミノオリゴ糖の調整 〈酵素分解−ＣＭセファデックスＣ−２５クロマト〉精
製ポリガラクトサミン２５ｇを約４．８Ｑの０．１モル
酢酸に溶解し、次いで水酸化ナトリウムでＰＩ（６，０
に調整して水を加えて全液量を５Ωとした。

このポリガラクトサミン溶液を基質とし、精製したポリ
ガラクトサミン分解酵素５ｍｇ（約５００ユニツト）（
傘１ユニットは１分間にガラクトサミン１μモルを生成
する酵素力価）を加え、３７℃で１時間酵素分解した。

分解後、１００℃、１０分間加熱して酵素反応を止め、
不溶物を遠心して除いた１次いで、得られた溶液のｐＨ
を酢酸を用いて５．０に調整し、弱陽イオン交換体Ｃト
セファデックスＣ−２５カラム（２Ｘ４０ＣＩ１１）に
吸着させた。

このカラムを０．１モル酢酸緩衝液（ｐＨ５，０）で洗
浄後、０〜２．５モルの食塩による直線的濃度勾配で溶
出させ、単離される各両分を集めた。

各両分は電気透析機、マイクロ・アシライザーＧ３（Ｍ
化成社１）にて脱塩し、凍結乾燥して精製ガラクトサミ
ノオリゴ糖とした。

この時、得られた各両分の回収量は表−２に示した。

第２表 （ガラクトサミノオリゴ糖）（ｇ） ガラクトサミン　　　　　　　　　０．１８ガラクトサ
ミノオリゴー２糖　　　０．３６ガラクトサミノオリゴ
ー３糖　　　１．８゜ガラクトサミンオリゴ−４糖　　
　１．６５ガラクトサミノオリゴー５糖　　　１．２０
ガラクトサミノオリゴー６糖　　　ｏ、８４ガラクトサ
ミノオリゴ一７Ｍ　　　　Ｏ，６０ガラクトサミノオリ
ゴー８糖　　　ｏ、４８ガラクトサミノオリゴ−９糖　
　　０．３９ガラクトサミノオリゴ一１０Ｍ０．２４ガ
ラクトサミノオリゴー１１糖　　　０．Ｈｌガラクトサ
ミノオリゴー１２糖　　　ｏ、１２実施例Ｓ ガラクトサミノオリゴ糖の調整 く酵素分解−Ｄｏｗｅｘ５０Ｗ　Ｘ　８クロマト〉精製
ポリガラクトサミン２５ｇを約４．８Ｑの０．１モル酢
酸に溶解し、次に、水酸化ナトリウムでｐＨ６，０に屑
整し、全液量を釘とした。このポリガラクトサミン溶液
を基質とし、これに精製したポリガラクトサミン分解酵
素１０ｍｇ（約１０００ユニツト　傘１ユニットは１分
間にガラクトサミン１μモルを生成する還元力）を加え
３７℃で酵素分解した。

分子量３０００以下の分解反応生成物はホローファイバ
ーＨＩＰ−３（アミコン・ファー・イースト・リミテッ
ド社製、ＤＣ−２型ホローフアイバー）を用いて連続的
に反応液から取り出し、直接陽イオン交換樹脂ダペック
ス５０Ｗ　Ｘ　８　（２、５Ｘ　５０ｃｍ）に吸着させ
た。　ダペックス５０Ｗ　Ｘ　８からのガラクトサミノ
オリゴ糖の溶出は０〜４モルの塩酸濃度勾配によって行
った０次いで、えられた各ガラクトサミノオリゴ糖溶液
は陰イオン交換樹脂ＣＤＲ２Ｏ（三菱化成製）で処理し
、塩酸を除いた。この溶液を凍結乾燥して精製ガラクト
サミノオリゴ糖を得た。得られた各ガラクトサミノオリ
ゴ糖量は第３表に示した。

第３表 （ガラクトサミノオリゴ糖） ガラクトサミン ガラクトサミノオリゴ−２Ｍ ガラクトサミンオリゴ−３糖 ガラクトサミンオリゴ−４糖 ガラクトサミノオリゴー５１ＪＩ ガラクトサミンオリゴ−６糖 実施例６ ガラクトサミノオリゴ糖の調整 〈塩酸分解−Ｄｏｔｚｅｘ５０Ｗ　Ｘ　８クロマト〉精
製ポリガラクトサミン２５ｇを濃塩酸（１２規定）２５
０ｍＱに分散し、８０℃、４時間、加フに分解した。

次いで、この溶液を減圧濃縮して、塩酸を除去し、ダペ
ックス５０すＸ　８　（２，５Ｘ　５０ｃｍ）のカラム
クロマトグラフィー（０〜５モルの塩酸濃度勾配で溶出
）を行いガラクトサミノオリゴ糖を分離精製した。

精製した各ガラクトサミノ第１ノゴ糖＋１ＡＧ３Ｘ４Ａ
で処理して塩酸を除去した後、凍結乾燥して精製ガラク
トサミノオリゴ糖を得た。

結果を第４表に示した。

第４表 （ガラクトサミノオリゴ糖）（ｇ） ガラクトサミン　　　　　　　　　８．０ガラクトサミ
ノオリゴー２糖　　　６．０ガラクトサミノオリゴー３
糖　　　４．０ガラクトサミノオリゴー４糖　　　２．
０ガラクトサミノオリゴー５９　　　１．０ガラクトサ
ミノオリゴー６糖　　　０．８このようにして各種の方
法によりガラクトサミノオリゴ糖が得られたが、これら
はいずれも新規物質であり、ガラクトサミンオリゴ−２
糖〜１２糖の構造及び物性は以下に示すとおりである。

第５表 ９８４．６ １１４５．７ １３０６．８ １４６７．９ １６２９．０ １７９０．１ １９５１．２ ＋１９０．２ ＋１９４．９ ＋１９８．５ ＋２０１．２ ÷２０３．４ ＋２０５．２ ＋２０６．８ 実施例７ Ｎ−アセチルガラクトサミノオリゴ糖の調整く塩酸分解
−アセチル化〉 ポリガラクトサミン１００ｇを４規定塩酸２Ｑに分散し
、冷却管を取り付けた三角フラスコにて、８０℃、８時
間、加水分解を行った。

分解後、減圧濃縮して塩酸を除去し、内容物を３Ωビー
カーに移し、純水を用いて約２Ｑに合わせた。

これを１０規定の水酸化ナトリウムでｐ＋（７，０に調
整し、過剰の炭酸水酸化ナトリウムを加えて飽和させる
。次にこの溶液を４℃以下に冷却し、０．１１１１０７
分のスピードで無水酢酸を加えガラクトサミノオリゴ糖
のアミノ基をＮ−アセチル化した。

次いで、これを活性炭−セライト（１：　１）カラム（
１０ｘ４０ｃｍ）を通過させ、Ｎ−アセチルガラクトサ
ミノオリゴ糖を吸着させた。カラムを１０Ｑの水で充分
洗浄し、５％エタノール５Ｑで更に洗った。

次に７５％エタノール５ＱでカラムからＮ−アセチルガ
ラクトサミノオリゴ糖を溶出させた。

この溶出液を減圧濃縮し、Ｎ−アセチルガラクトサミノ
オリゴ糖の濃厚液を調整した。次に、このシロップ状溶
液をバイオ−ゲルＰ−４（米国バイオ−ラッド社製）カ
ラム（５Ｘ　ｌｏｏｃｍ）に通過させゲル濾過を行い各
Ｎ−アセチルガラクトサミノオリゴ糖を分離精製した。

そのパターンを第１図に示した（溶媒は純水）。

得られたＮ−アセチルガラクトサミノオリゴ糖の量は第
６表に示した。

第６表　　Ｎ−アセチルガラクトサミノオリゴ糖Ｎ−ア
セチルガラクトサミノオリゴ糖　　収　量（ｇ）２　糖
　　　　　　　　　　　１００ ３　糖　　　　　　　　　　　　６．０４糖　　　　５
０ ５　　Ｍ　　　　　　　　　　　　　２．５６糖　　　
　２０ ７糖　　　　１．２ ８糖　　　　０７ ９糖　　　　０３ １０　　％！ｌ　　　　　　　　　　　　　Ｏ，２１１
糖　　　　　０．１ １２糖　　　　　０．１ 実施例８ Ｎ−アセチルガラクトサミノオリゴ糖の調製〈精製ガラ
クトサミンオリゴ糖のアセチル化〉先の実施例で調製し
た各精製ガラクトサミンオリゴ糖を０．５％濃度で純水
に溶解し、塩酸もしくは水酸化ナトリウムを用いてｐＨ
を７．０に調整する。

次に炭酸水素ナトリウム約５ｇを加えて飽和させる。こ
の溶液を４℃以下に冷却し、無水酢酸を０．１ｍＲ／分
のスピードで加えてアミノ基をＮ−アセチル化させる。

−夜放置後、この溶液を活性炭−セライト（１：　ｌ）
カラム（ｌＸ１０ｃｍ）に通過させＮ−アセチルガラク
トサミノオリゴ糖を吸着させる。

１５０ｍＱの純水と５％エタノールで洗浄後、７５％の
エタノール１５０ｍＱで溶出させ、減圧濃縮して約０．
３〜０．５ｇの精製Ｎ−アセチルガラクトサミノオリゴ
糖を得た。各Ｎ−アセチルガラクトサミノオリゴ糖の赤
外部吸収スペクトルは先に示したように１６４８ｃｍ−
１のアセトアミドの吸収が増加していること、また、１
７２５〜１７５０ｃｍ−’に０−アセチルの吸収が見ら
れないことからガラクトサミンオリゴ糖のアミン基のみ
が選択的にＮ−アセチル化されたＮ−アセチルガラクト
サミノオリゴ糖であることを確認した。

このようにしてＮ−アセチルガラクトサミノオリゴ糖が
得られたが、これらはいずれも新規物質であり、これら
Ｎ−アセチルガラクトサミノオリゴー２Ｍ〜１２糖の構
造及び物性は、以下に示すとおりである。

１、物質の名称：Ｎ−アセチルガラクトサミノオリゴー
２Ｍ ■）α−１→４結合のみで構成されるＮ−アセチルガラ
クトサミンオリゴ−２糖 ＧａｌＮＡｃｍ−＋、Ｇａ１ＮＡｃ　（但し、Ｇａ１Ｎ
ＡｃはＮ−アセチルガラクトサミノピラノシド基を示す
。）２）色および形状：淡黄色不定形の粉末３）味：甘
味を有する。

４）溶解性ニー膜性な有機溶媒のうちメタノール、エタ
ノール、ジメチルスルホキシドなどや水に可溶性であり
、アセトンやクロロホルムなどに難溶である。

５）下記の元素分析値を示す。

Ｃ：　４５．２８、Ｈ：　６．６０％Ｎ　：　６．６０
、Ｏ：　４１．５１予想される分子式：　Ｃｉ、Ｈ２，
Ｏ□ｔｌ’１ｚ６）分子量と構造式 ％式％ ７）下記の呈色反応を示す。

モルガンーエルリン反応、ソモギーネルソン反応陽性。

フォーリン・ローリ−反応に僅かに陽性。エルソンーモ
ルガン反応、インドール塩酸反応、フェノール硫酸反応
、ヨード反応に陰性である。

８）旋光度 〔α〕も’　：　＋１５８．６ ９）融点：１６６℃ １０）第２図に紫外部吸収スペクトルを示す。

１１）第３図に赤外部吸収スペクトルを示す。

２．物質の名称二Ｎ−アセチルガラクトサミノオリゴー
３糖 ■）α−１→４結合のみで構成されるＮ−アセチルガラ
クトサミンの３Ｍ Ｇａ１ＮＡｃ１−４ＧａｌＮＡｃ”−’Ｇａ１ＮＡｃ　
（但し、Ｇａ１ＮＡｃはＮ−アセチルガラクトサミノビ
ラノシル基を示す。） ２）、３）、４）同上 ５）下記の元素分析値を示す。

Ｃ：　４５．９３、Ｈ：　６．５４、Ｎ　：　６．７０
、Ｏ：　４０．８３予想される分子式：Ｃ２４Ｈ，□０
□６Ｎ！６）分子量と構造式 ％式％ モルガンーエルソン反応、ソモギーネルソン反応に陽性
。以下同じ。

８）旋光度 〔α〕も’　：　＋１９８．７ ９）融点：１８５℃ １０）第４図に紫外部吸収スペクトルを示す。

１１）第５図に赤外部吸収スペクトルを示す。

３、物質の名称：Ｎ−アセチルガラク１−サミノオリゴ
−４Ｎ ｌ）　Ｇａ１ＮＡｃ、−＋、Ｇａ１ＮＡｃ１−＋、Ｇａ
１ＮＡｃ１−＋４ＧａｌＮＡｃ２）、　３）、４）同上 ５）下記の元素分析値を示す。

Ｃ：４６．２１．　Ｈ：６．５０．　Ｎ　：６．７１．
０　：４０．４３予想される分子式：　Ｃ，２＋１，４
０□ｔｌ’１４６）分子量と構造式 ％式％ ７）下記の呈色反応を示す。

７）呈色反応二同上 ８）旋光度 〔α〕ら’　：　＋２１９．１ ９）融点：１９０℃ １０）第６図に紫外部吸収スペクトルを示す。

１１）第７図に赤外部吸収スペクトルを示す。

４、物質の名称二Ｎ−アセチルガラクトサミノオリゴー
５糖 １）α−１→４結合のみで構成されるＮ−アセチルガラ
クトサミンの５Ｍ Ｇａ１ＮＡｃｔ−、Ｇａ１ＮＡｃ、−、Ｇａ１ＮＡｃ１
−、Ｇａ１ＮＡｃ、　−４ｃａｌ、ＮＡｃ　（但し、以
下同じ） ２）、３）、４）同上 ５）下記の元素分析値を示す。

Ｃ：　４６．４２、Ｈ：　６．５０．　Ｎ　：　６．７
７、Ｏ：　４０．２３予想される分子式二ｃ４゜Ｈ６□
０．６Ｎ。

６）分子量と構造式 ％式％ ７）下記の呈色反応を示す。二同上 ８）旋光度 〔α〕も’　：　＋２３１．５ ９）融点：　１！３５℃ １０）第８図に紫外部吸収スペクトルを示す。

ＩＩ）第９図に赤外部吸収スペクトルを示す。

５、物質の名称二Ｎ−アセチルガラクトサミノオリゴー
６糖 １）　ＧａｌＮＡｃｍ−＋４ＧａｌＮＡｃ２出”＋Ｇａ
１ＮＡｃ２）、３）、４）同上 ５）下記の元素分析値を示す。

Ｃ：　４６．５６、Ｈ：　６．４７、Ｎ　：　６．７９
、○：　４０．１０予想される分子式：　Ｃ，ＩＩＨ，
ｏＯ，、Ｎ。

６）分子量と構造式 分子量：　１２３７．２ ５）下記の元素分析値を示す。

Ｃ：　４６．６７、Ｈ：　６．４６．　Ｎ　：　６．８
１、Ｏ：　４０．００予想される分子式：Ｃ□Ｈ，３０
３６Ｎ。

６）分子量と構造式 ％式％ ：１９７ １０）第１０図に紫外部吸収スペクトルを示す。

１１）第１１図に赤外部吸収スペクトルを示す。

６、物質の名称：Ｎ−アセチルガラクトサミノオノ　ゴ
ー　７糖 １）α−１→４結合のみで構成されるＮ−アセチルガラ
クトサミノオリゴー７＆！ Ｇａ１．ＮＡｃ、−、Ｇａ１ＮＡｃ、　−、Ｇａ１ＮＡ
ｃ、　−４Ｇａ１ＮＡｃ、　−、Ｇａ１ＮＡｃ、−４Ｇ
ａ１ＮＡｃ、−、Ｇａ１ＮＡｃ　（但し、以下同じ。）
２）、３）、４）同上 ７）呈色反応：同上 ８）旋光度 〔α〕♂０：　２４５．７ ９）融点：１９９°Ｃ ｌｏ）第１２図に紫外部吸収スペクトルを示す。

１１）第１３図に赤外部吸収スペクトルを示す。

７、物質の名称二Ｎ−アセチルガラクトサミノオリゴー
８糖 １）　Ｇａ１ＮＡｃ、÷４ＧａｌＮＡｃ、→、Ｇａ１Ｎ
Ａｃ２）、３）、　４）同上 ５）下記の元素分析値を示す。

Ｃ：　４６．７４、　Ｈ：　６．４５、　Ｎ　　：　６
．８２、　Ｏ：　３９．９３予想される分子式：　Ｃ５
ＪＩｘｏｓＯ４□Ｎ。

６）分子量と構造式 ％式％ ３）味：僅かな甘味を有する。

４）溶解性二同上 ５）下記の元素分析値を示す。

Ｃ：　４６，３３、Ｈ：　６．３８、Ｎ　：　６．７６
、○：　３９．４６予想される分子式：Ｃ７□１（□□
９　ｏ、　Ｇ　Ｎ１３）分子量と構造式 ％式％ ：２０３ １０）第１４図に紫外部吸収スペクトルを示す。

１１）第１５図に赤外部吸収スペクトルを示す。

８８　　物質の名称：Ｎ−アセチルガラクトサミンオリ
ゴ−９糖 １）　Ｇａ１ＮＡｃ、←、Ｇａ１ＮＡｃ１→ｆ’４　Ｇ
ａ　ｌ　Ｎ　Ａ　Ｃ２）色および性状：同上 ７）呈色反応二同上 ８）旋光度 〔α〕も’　：　＋２５１．３ ９）融点：特定な融点を有さず、２５０℃以上で炭化す
る。

１０）第１６図に紫外部吸収スペクトルを示す。

１１）第１７図に赤外部吸収スペクトルを示す。

９、物質の名称：Ｎ−アセチルガラク！−サミノオリゴ
ー１０糖 １）　Ｇａ１ＮＡｃ、←４　Ｇ　ａ　ｌ　Ｎ　Ａ　ｃ　
ｘ→、Ｇａ１ＮＡｃ２）色および性状二同上 ３）僅かな甘味を有する。

４）溶解性：同上 ５）下記の元素分析値を示す。

Ｃ：　４６．８３、Ｈ：　６．４３、Ｎ　：　６．８３
、Ｏ：　３９．８０予想される分子式：　ＣａｏＨｘ３
ｚＯｓｘＮｘ。

６）分子量と構造式 ％式％ １Ｏ）第１８図に紫外部吸収スペクトルを示す。

１１）第１９図に赤外部吸収スペクトルを示す。

１０、物質の名称二Ｎ−アセチルガラクトサミノオリゴ
ー１１糖 １）　Ｇａ１ＮＡｃ、７←４ＧａｌＮＡｃ、→−４Ｇａ
１ＮＡｃ２）色および性状二同上 ３）僅かな甘味を有する。

４）溶解性：同上 ５）下記の元素分析値を示す。

Ｃ：　４６．９１、Ｈ：　６．４４、Ｎ　：　６．８４
、○：　３９．８０予想される分子式：　ＣＱＩｌｔ（
ｘ＊５ＯｓｓＮｔ□６）分子量と構造式 ％式％ ： ： ： １０）第２０図に紫外部吸収スペクトルを示す。

１１）第２１図に赤外部吸収スペクトルを示す。

１１、物質の名称二Ｎ−アセチルガラクトサミノオリゴ
ー１２　Ｎ １）　Ｇａ１ＮＡｃ、−＋、Ｇａ１ＮＡｃ、→ｒｓ”　
ｎＧａ１ＮＡｃ２）、３）、４）同上 ５）下記の元素分析値を示す。

Ｃ：　４６．９４．　Ｈ：　６．４４、Ｎ　：　６．８
５、Ｏ：　３９．７７予想される分子式：Ｃ９，Ｈ□Ｓ
　８０Ｇ　１　Ｎｌ□６）分子量と構造式 ％式％ ： ： １０）第２２図に紫外部吸収スペクトルを示す。

１１）第２３図に赤外部吸収スペクトルを示す。

（発明の効果） 本発明に係るガラクトサミノオリゴ糖は、いずれも文献
未載の新規化合物であって、医桑、農薬、食品添加物、
工業薬品及びそれらの中間体として有用な化合物である
。

本発明に係る新規化合物の具体的用途としては、例えば
凝集剤、免疫調整剤、抗腫瘍剤、抗血液凝固剤等が大い
に期待される。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例７において分画されたＮ−アセチルガ
ラクトサミノオリゴ糖のバイオゲルＰ−４のゲル濾過の
パターンを図示したものであり、ｙ輔：　０．０．。。 はソモギーネルソン法で測定した還元力を示す。 第２．４．６．８．１０．１２．１４．１６．１８．２
０、２２図は、Ｎ−アセチルガラクトサミンオリゴ−２
糖〜１２糖の紫外部吸収スペクトルをそれぞれ示した図
面である。 第３，５．７．９．１１．１３．１５．１７．１９．２
１．２３図は、Ｎ−アセチルガラクトサミノオリゴー２
Ｍ〜１２糖の光外部吸収スペクトルをそれぞれ示した図
面である。 代理人　弁理士　戸　１）親　男 第 図 フウクショシＮｏ、　［７ｍＸ／ｆｒ）第 図 第 図 第 図 ２カ 第 図 第 図 ｂｓ 第 Ａｂｓ 塙 図 Ａｂｓ 第 図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の式で示されるＮ−アセチルガラクトサミノオ
   リゴ糖： ▲数式、化学式、表等があります▼ （但し、式中ｎは０〜１０を表わす）。 ２、α−１，４−ポリガラクトサミンを分解し、得られ
   たガラクトサミノオリゴ糖を混合物のままあるいは各オ
   リゴ糖成分に分離した後、Ｎ−アセチル化することを特
   徴とする下記の式で示されるＮ−アセチルガラクトサミ
   ノオリゴ糖の製造方法： ▲数式、化学式、表等があります▼ （但し、式中ｎは０〜１０を表わす）。 ３、下記の式で示されるガラクトサミノオリゴ糖を ▲数式、化学式、表等があります▼ （但し、式中ｎは０〜１０を表わす） Ｎ−アセチル化することを特徴とする下記の式で示され
   るＮ−アセチルガラクトサミノオリゴ糖の製造方法： ▲数式、化学式、表等があります▼ （但し、式中ｎは０〜１０を表わす）。