JPS5912274B2 - α−１．３−グルコシド結合を分解する酵素の製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はストレプトミセス属に属する菌を使用してう蝕
の原因となる歯垢の一成分である不溶性グルカン、例え
ばムタンの主結合であるα−１，３−グルコシド結合を
分解する酵素の新規な製造法に関するものである。

近年う蝕に対する研究が進むにつれ、５蝕誘発菌がう蝕
の原因となることが明らかになってきた。

このう蝕誘発菌はストレプトコッカス（Ｓ ｔｒｅｐｔ
ｏ −ｃｏｃｕｕｓ ）属、ラクトバチルス（Ｌａｃｔ
ｏｂａｃｉｌｌｕｓ ）属、オドントミセス（Ｏｄｏｎ
ｔｏｍｙｃｅｓ ）属に属する微生物と云われ、これら
の微生物が食物中に含まれる砂糖を利用し、粘着性を有
する不溶性多糖類を生産し、この生産物が歯牙表面に沈
着することにより、歯垢を形成する。

歯垢は歯肉を刺激し歯肉の炎症及び歯根膜炎を誘発する
。

又、歯垢中の微生物は嫌気発酵を行って有機酸を土酸し
、これが歯牙を形成しているエナメル質を脱灰させう蝕
を誘発させる。

そこでこの歯垢予防の為、従来から弗素化合物。

リン酸化合物殺菌剤、中和剤が使用されているが。

粘質物の除去は出来ず、又５蝕の誘発阻止に対する機能
も充分とはいえない。

最近歯垢中の一条糖類としてデキストランが存在するこ
とが知られ。

歯垢予防の為デキストラン分解酵素を使用する方法も開
発されている。

しかし歯垢中の不溶性多糖類には殆んど作用せず、歯垢
の抑制、５蝕誘発阻止効果は殆んどない事が報告されて
いる （Ｇｕｇｇｅｎｈｅｉｍ ｅｔ ａｌ、 ： Ｃａｒｉ
ｅｓ Ｒｅｓ、、 ６巻。

２８９頁１９７２年）。

グッゲンハイム（Ｇ ｕｇｇｅｎｈｅｉ ｍ ）等及び
三崎等は口腔内細菌ストレプトコッカス・ムタンス（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ ） ＯＭ
Ｚ １７６菌の生産する不溶性多糖類（ムタンと称す）
について研究し、ムタンが歯垢の主原因である粘性不溶
性グルカンであり、α−１，３−グルコシド結合を主結
合とし、これにα−１，６−グルコシド結合がすだれ状
に結合していることを報告している （ Ｇｕｇｇｅｎｈｅｉｍ ｅｔ ａｌ、 ： Ｈｅ１
ｖ、 ０ｄｏｎ、 Ａｃｔａ１４巻、８９〜１０８頁、
１９７０年及びＡ。

Ｍｉｓａｋｉ ｅｔ ａｌ、 ： Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ
ａｔｅ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ ３８巻、３７４〜３８１
頁１９７４年）。

本発明者等は、この５蝕の原因である不溶性多糖類ムタ
ンを分解［７てう蝕の予防、除去をはかることを目的と
して、広く自然界よりムタンに作用してこれを分解し可
溶化する酵素を生産する微生物を検索した。

その結果、ストレプトミセス属に属する新菌種ストレプ
トミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ） Ａ１号を分
離した。

この新菌種ストレフトミセスム１号の生産するムタン分
解酵素はα−１，３−グルコシド結合を分解する酵素で
ある。

α−１，３−グルコシド結合を分解する酵素としては、
トリコデルマ（Ｔ ｒ ｉｃｈｏｄｅｒｍａ ）属及び
ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉ−１１ｉｕｍ）属の歯によ
りこれと同様の分解作用を行う酵素が生産されることが
、グッゲンハイムにより報告されており、ムタナーゼと
命名されている。

これに対し１本発明者等は、全（新たにストレフトミセ
ス属に属する菌種例えばストレプトミセスＡ、 １ 号
によってα−１，３−グルコシド結合を分解する酵素が
生産されることを見出したのである。

この酵素はムタン中のα−１，３−グルコシド結合を分
解して可溶性とし、歯牙表面よりムタンを除去しやす（
する。

なお、ストレプトミセスＡ１号は他のグルコシド結合を
分解する酵素を生産しない。

上記のストレプトミセスＡ１号の菌学的性質は下記の通
りである。

（ａ） 菌の形態 胞子形成菌糸の分枝法 単純分枝 胞子鎖の形態 直鎖状 胞子の数 １０個以上 （２０〜３０１固。

中には１００位の も有る） 胞子の表面構造及び大きさ 平滑で０．８μ×１．１〜
１．３μ 鞭毛胞子の有無 無 し 胞子の５の有無 無 し 胞子柄の着生位置 基生菌糸上に着生（ｂ）
谷培地における生育状態 各種培地における生育状態の観察はすべてインターナシ
ョナル・ストレプトミセス・プロジェクト（Ｉｎｔｅｒ
ｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｓｅｓ Ｐｒｏ
ｊｅｃｔ）（以下１．Ｓ、Ｐ、と略す）の方法（Ｉｎｔ
ｅｒ、 Ｊ。

５ｙｓｔ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、 １６巻、３１３頁１
９６６年）に従った。

記載も１．Ｓ、’Ｐ、の記載例に準じたが、集落表面の
菌叢色、集落の裏面色、拡散性色素の色は１色の標準」
（昭和３９年財団法人日本色彩研究所発行）に従った。

■ シュクロース・硝酸塩寒天培地 生育はやや悪（、気菌糸の着性もやや悪い。

菌叢色は明るい茶入を示す。

基土菌糸、拡散性色素は生産せず。

■ グルコース・アスパラギン寒天培地 生育は普通、気菌糸は短く１着胞は少ない。

菌叢色は茶白より茶入に変化する。

基生菌糸の裏面色は５す黄で拡散性色素は生産せず。

■ グリセリン・アスパラギン培地 生育悪（、気菌糸は少な（、菌叢色は白色より明るい茶
入に変化する。

基生菌糸の裏面色は茶入で薄い黄色の拡散性色素を生産
する。

■ スターチ寒天培地 気菌糸は密生し１着胞も非常に良い。

菌叢色は明るい茶入より茶入に変化する。

基生菌糸の裏面色は灰味黄茶より暗い黄茶色を示し。

薄茶色の拡散性色素を生産する。

■ チロシン寒天培地 生育悪（、気菌糸も少ない。

又集落表面は粉状、菌叢色は茶山より明るい茶入に変化
する。

基生菌糸の裏面色はうす黄色で、５す黄茶の拡散性色素
を生産する。

■ 栄養寒天培地 生育悪い。

気菌糸は少な（、菌叢色は白、裏面色は無（、拡散性色
素も生産しない。

■ イースト・麦芽寒天培地 気菌糸は密生し、生育は非常に良い。

菌叢色は白より茶入に変る。

基生菌糸の裏面色はうす茶より茶、暗い茶へと順次変色
する。

一方にぶ茶色の拡散性色素を生産する。

■ オートミール寒天培地 集落表面は気菌糸が密生し、ビロード状をなす。

集落中央は没落している。菌叢色は明るい茶入より茶入
に変化する。

基生菌糸の裏面色はうす茶色で拡散性色素は生産しない
。

（ｃ） 生理的性質 ■ 生育温度範囲（イースト・麦芽寒天培地ｐＨ７，０
）２５〜３７℃。

３０℃で最も良（生育する。４２℃では生育せず。

■ ゼラチンの液化 非常に緩慢ではあるが液化する。

■ スターチの加水分解 加水分解する。

■ 脱脂牛乳の凝固、ペプトン化 凝固し、ペプトン化する。

■ メラニン様色素の生成 チロシン寒天培地及びペプトン・イースト・鉄寒天培地
上で共に生成しない。

他の有機培地でも生成しない。

（ｄ） 炭素源の同化性 ■Ｌ−アラビノース丹■イノシトール −■Ｄ−キシロ
ース ＋＋ ■Ｌ−ラムノースー■Ｄ−グルコース ＋
＋ ■ラフィノース −■Ｄ−フラクトース ＋ ■
マンニットー■シュクロース ＋ （注）丹：生育良好、＋：生育良、±：生生育し、殆ん
ど生育せず −二生育せず 本菌株は、１０個以上（約２０〜３０１１ｆｆｉ位、中
には１００＠以上に成るものも有る）の胞子鎖を形成し
、胞子のり、運動性胞子、及び菌核などの形成が認めら
れず、又菌糸の分裂が見られないことより、ストレプト
ミセス属に属する。

又、胞子鎖は直鎖状（レクチフレキシビレス節）をなし
。

胞子表面は平滑、気菌糸の菌叢色は灰色系列、基中菌糸
、裏面色は暗い茶色、拡散性色素は薄茶色でメラニン色
素は生産しない。

この形態的、生理的性状をシャーリングとゴツトリーブ
の報告（Ｅ 、 Ｂ 、 Ｓｈｉｒｌｉｎｇ ａｎｄ
Ｄ。

Ｇｏｔｔｌｉｅｂ ； Ｉ ｎｔｅｒ、 Ｊ 、 ５
ｙｓｔ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、 １８巻、１９巻及
び２２巻）野々村の報告（日本醗酵工学雑誌５２巻、７
８頁）及びバージェ・マニュアル第８版（Ｂ ｅｒｇｅ
ｙζＭａｎｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａ−ｔｉ
ｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ ８ ｔｈ ｅｄ、
）を参照した。

本菌株の性質をこれらの参考文献記載の菌株と比較する
と、シャーリングとゴツトリーブの報告、及び野々村の
報告には本菌株の性質と一致するものは見当らない。

即ちストレプトミセス・アブラビエンシス（Ｓ ｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｂｕｒａｖｉｅｎｓｉｓ）は裏面
色が黄味系であって本菌の暗い茶色とはやや異る。

又、該菌は拡散性色素は殆んど生成しないと記載しであ
るのに対し本菌は薄茶色の色素を生産する。

糖の資化性についてもかなり異り１本菌がアラビノース
、シュクロースを資化するのに対し。

ストレプトミセス・アブラビエンシスはこれらの糖を資
化しない。

次にストレプトミセス・グリセオルス （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｒｉｓｅｏｌｏｓ ）
は胞子鎖中の胞子数が１０個前後であり、本菌株の２０
〜３ｏ個。

時には１００個位のものよりかなり少ない。

又。可溶性色素を生産しない点も本菌株と異る。

糖の資化性においては、ストレプトミセス・グリセオル
スは、マンニトール、ラムノース、シュクロースを弱く
資化するのに対し１本菌株はマンニトール、ラムノース
は資化せス、シュクロースは良く利用する。

次にバージエ・マニュアル第８版をみると、ここでは胞
子の数、可溶性色素の生成、裏面色などについては殆ん
ど記載がなく、これらの性質で比較することは困難であ
る。

従ってそれらの性質を全（無視して強いて近縁のものを
探すと、ストレプトミセス・クリソマルス・サブスピー
シス・フミガタス（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｈ
ｒｙｓｏｍａｌｌｕｓｓｕｂｓｐｉｅｃｅｓ ｆｕｒｎ
ｉｇａｔｕｓ ）がこれにあたる。

しかし、この菌はツアペック培地によく生育しないとい
う記載があるので、シュクロースの資化性がよ（ないと
推定され、又フラクトースは資化しない。

しかるに本菌はシュクロースをよ（資化するし。

フラクトースも資化する。

又１本菌は全く抗生物質を生産しないが、ストレプトミ
セス・クリソマルス・サブスピーシス・フミガタスはア
クチノマイシンＣ複合体の生産菌である。

これら近縁の菌とストレプトミセスＡ１号の性質を比較
したのが第１表である。

以上述べた如く、参考文献中には本菌と一致する菌種は
なく、上記ストレプトミセス五１号は新菌種と判定した
。

なお上記ストレプトミセスＡ１号は工業技術院微生物工
業技術研究所に微工研菌寄第３２１９号（Ｆ Ｅ ＲＭ
Ｐ２Ｏ：３２１９ ）として寄託されている。

本発明は、この新知見に基いてなされたもので。

ストレプトミセス属にＭＬ、 α−１，３−グルコシド
結合を分解する酵素を生産し他のグルコシド結合を分解
する酵素を生産しない菌を培養し、培養物よシα−１．
３−グルコシド結合を分解する酵素を採取することを特
徴とするα−１，３−グルコシド結合を分解する酵素の
製造法である。

本発明の使用菌としては、上記したストレプトミセスＡ
１号はその具体例であって、このストレプトミセスＡ１
号の他にストレプトミセス属に属し、α−１，３−グル
コシド結合を分解する酵素を生産し他のグルコシド結合
を分解する酵素を生産しない菌であれば、すべて本発明
に使用することができる。

本発明の方法を実施するに当っては、ストレプトミセス
属に属するα−１，３＝グルコシド結合を分解する酵素
を生産する菌を、天然又は人工培地として一般に使用さ
れる各種組成の栄養源を含む固体又は液体の培地に表面
培養又は深部培養する。

培地の栄養源としては１例えば澱粉、ブドウ糖。

蔗糖、ラフィノース、マンノース、ソルボース。

皺、大豆粉、コーン・スチープ・リカー、肉エキス、米
ヌカ、無機の窒素、各種無機塩類、各種金属イオンなど
が挙げられ、これらの成分を適当に選択組合せたものが
培地として使用される。

特にアスペルギルス・ニガーの菌体（もしくはその乾燥
物）もしくはそれから採取したシュードニゲランもしく
はその未精製物を培地中に添加することにより上記酵素
の生産は無添加の場合に比し増強される。

又、ムタンの添加も同様に効果がある。上記シュードニ
ゲランはハセガワ等の方法（Ｓ。

Ｈａｓｅｇａｗａ ｅｔ ａｌ、 ： Ｊ、 Ｂｉｏｌ
、 Ｃｈｅｍ、２４４巻。

５４６０頁１９６９年）に従って次の様にして採取スル
。

アスペルギルス・ニガーＮＲＲＬ３２６の湿菌体約５０
０１に水４ｔを加え、１２０℃にて２０分間加圧下に加
熱し、熱い５ちに濾過し。

濾過残渣を集める。

これに更に４ｔの熱水を加え２０分間煮沸し、熱いうち
に濾過する。

この熱水による煮沸、濾過を色が出な（なる迄４，５回
（り返す。

充分に洗浄した菌体は冷却した後、０６１モルのホウ素
化水素す） ＩＪウム溶液４ｔに懸濁し。

時々攪拌しなから３，４時間放置する。

次に苛性ソーダを加えて１規定とした後、加熱し、３時
間煮沸する。

冷却後、濾過し、Ｐ液を集める。これＶＣ２倍量のメタ
ノールを攪拌しつつ加え、３，４時間放置する。

この液を遠心分離して沈澱物を集め、メタノール３と水
１の混合液で洗浄し、脱色する。

洗浄沈澱物は１規定の苛性ソーダ酸液にとかし、不溶解
物は濾過して除去する。

濾過液に再び２倍量のメタノールを加えて沈澱を生じさ
せ、遠心分離にて沈澱を集める。

沈澱物はメタノール３と水１の混合液で３回洗浄する。

洗浄のすんだ白色沈澱はメタノール３と０．１規定の酢
酸水溶液１の混合液に懸濁し１時々攪拌しながら数時間
放置する。

最後に塩酸および苛性ソーダでｐＨ７に合わせた後、Ｐ
遇する。

沈澱物はメタノール３と水１の混合液で洗浄し、さらに
水で洗浄する。

沈澱は熱水に懸濁し、２０分間煮沸した後、遠心分離し
て沈澱物を集め、さらに熱水で３回洗浄する。

沈澱物はメタノールで脱水した後、減圧下で乾燥し、シ
ュードニゲランとする。

また上記ムタンは例えば次の如くにして採取する。

シュクロース５％、トリプチケース・ソイ・ブロス３係
を含む液体培地にストレプトコッカス・ムタンスＯＭＺ
１７６菌を接種し、３５℃にて２４時間静置培養する
。

この上澄を除き水にて沈澱物をくり返し洗浄する。

これに１モルの苛性カリ水溶液を加えて沈澱物を溶解し
た後、濾過し。

不溶解物を除去する。

この溶液にエタノールを加えて７５Ｖ／Ｖ％とし生じた
沈澱物を炉別する。

これを水にとかした後、塩酸を加えて中性とすると沈澱
物を生じる。

この沈澱物を水洗を（シ返した後、アルコールで脱水し
４０℃以下にて減圧乾燥してムタンを得る。

必要に応じボールミル等にて粉砕して使用する。

これを未処理ムタンと称する。

なおまた本発明において用いるムタンも同様にして採取
されたものである。

培養に際して、温度は２５〜３５℃、培養基ｐＨは４．
５〜６．５に調整することが好ましい。

培養時間は培養条件に依って異なるが、最高力価に達す
る時間を検討して培養を止める。

通常２〜５日間の培養で最高力価に達する。

このようにして得られた培養物には、α−１，３−グル
コシド結合を分解する酵素が含有され、他のグルコシド
結合を分解する酵素は含有されない。

液体培養Ｐ液あるいは固体培養抽出液から本酵素を採取
精製するには、従来各種の培養物からその含有酵素を採
取、精製するために知られた常法を適宜に使用すること
ができる。

例えば、培養Ｐ液又は固体培養物の水抽出液を減圧濃縮
する方法。

硫安、硫酸ソーダ、食塩等での塩析法、メタノール、エ
タノール、アセトンのような溶媒による分画沈澱法１等
電点沈澱法１重金属による不純物の分離法、電気透析法
などの精製法を組合せるか又は単独で応用することが出
来る。

精製方法の具体例を示すと次の如くである。

本発明方法にしたがって得られた培養液を濾過又は遠心
分離することにより透明な酵素液が得られる。

この酵素液をさらに濃縮、流水透析後、０．００５モル
酢酸緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−セルロースで処理し
酵素液中のα−１，３−グルコシド結合を分解する酵素
と色素とを分離する。

更に該酵素をＣＭ−セルロースに吸着させ、０．１〜０
．３モルの食塩水で溶出させる。

続いて分子篩バイオゲルＰ−１５０で処理することによ
り精製されたα−１，３−グルコシド結合を分解する酵
素を得る。

また上記酵素の力価の測定法は次のようにして行う。

あらかじめ未処理ムタンの懸濁液に高単位のデキストラ
ン分解酵素（市販品）を加え、４０℃でムタン中のα−
１，６−グルコシド結合を切断させ、還元力の増加がな
（なる迄反応させる。

反応終了後１反応液中の沈澱物を水洗し、上澄液中に還
元力が無くなるまで水洗と遠心分離をくり返し行ない、
還元力の無（なった時点で沈澱物を遠心分離して回収す
る。

これを処理ムタンと称す。この処理ムタンを１／１０モ
ル酢酸緩衝液ｐＨ５．５に０．６係になる様に懸濁させ
る。

この懸濁液１ ｍｌを４０℃に予熱する。

これに適当に稀釈した酵素液１７１１１を加え、４０℃
、１０分間振盪しつつ反応を行なわせ、生成して来る還
元力をソモギー・ネルノン法で測定し、グルコースとし
て表示する。

活性表示は４０℃、１分間に１μｍのグルコースに相当
する還元力を生成する酵素量を１単位とする。

本発明の方法によって得られるα−１，３−グルコシド
結合を分解する酵素の性質は次の通りである。

（１） 作用及び基質特異性 本酵素はグルカンの主結合であるα−１，３−グルコシ
ド結合を切断する酵素（α−１，３−グルカナーゼ）で
ある。

（２）最適ｐＨ ｐＨ５，５（第１図参照） （３）安定ｐＨ ｐ Ｈ５，０〜ｐＨ７，０（第２図参照）（４）精製方
法二前記したとおりである。

（５）力価の測定法：＠記したとおりである。

（６）作用最適温度 ６０℃（第３図参照） （７）温度による失活の条件 ７０℃、１０分間の加熱で急速に失活する（第４図参照
） （８）阻害、活性化及び安定化 酵素力価測定法の反応液中に第２表に示す化合物を第２
表に示す濃度になるように添加して酵素価を測定し、阻
害と活性化を調べた。

本酵素はＨｇ＋＋ 、 Ｍｎ＋＋ 、 Ｎ ｉ＋＋ 、
ｐ ｂ＋＋で失活する他１種々の金属塩で阻害される
。

活性化及び安定化させる化合物は現在のところ見出され
ていない。

（９）分子量 セファロース４Ｂゲルを用い濾過法で分子量を測定した
結果１本酵素はボイド容量の近（に溶出し、標準物質と
して用いたフェリチン（分子量５４万）より早く溶出す
るので１本酵素の分子量は約１００万ないし２００万と
推定される。

００）等電点 本酵素は結晶化されないので結晶構造の解析および元素
分析は実施できない。

しかし、キャリヤーアンホライン（ＬＫＢ社製）を用い
た等電点電気泳動法での測定によると１本酵素の等電点
はｐ Ｈ５，３である。

次に本発明の実施例を示すが１本発明はこれにより限定
されるものではない。

実施例 １ ペプトン０．１ ％ 、牛肉エキス０．１％、硝酸アン
モン０．１％、燐酸−カリ０．１％、燐兼二ソーダ０．
６係、硫酸マグネシウム０．０３％に炭素源として可溶
性澱粉０．６ ％、又はアスペルギルス・ニガーの菌体
０．４％又はムタン０．４％を添加した培養液（ｐＨ６
，０に調整）を直径２Ｑｍｍの大型試験管に１０７７２
Ａ加え、蒸気加圧殺菌後ストレプトミセスＡ１号（Ｆ
Ｅ ＲＭ−ＰＡ、 ３２１９ ）を接種し。

３０℃で３日間培養する。

この培養Ｐ液中のα−１，３グルコシド結合を分解する
酵素（以下α−１，３グルカナーゼという）の酵素活性
を測定した結果は第２表の通９である。

実施例 ２ ペプトン０．１％、牛肉エキス０．１％、硝酸アンモン
０．１％、燐酸−力！Ｊ Ｏ，１％１燐酸二ソーダ０．
６％、硫酸マグネシウム０．０３％、ブドウ糖０．２％
、ムタン０．４％を添加した培養液（ｐＨ６，０に調整
）を５００７７２Ａ’容肩付フラスコに１００ ｍｌｆ
つ入れ、蒸気加圧殺菌し、あらかじめ同培地で３０℃、
２４時間試験管振盪培養したストレプトミセスＡ１号の
培養液ｌｏｍｅずつを接種し、３０℃、７２時間振盪培
養を行なう。

この培養液１ｔを濾過又は遠心分離により透明な酵素液
とする。

この酵素液中のα−１，３−グルカナーゼの活性を測定
すると７．３単位／７Ｉ２１であった。

この酵素液を０〜４℃に冷却する。別に０℃以下に冷却
したアセトンを、この酵素溶液に徐々に加えつ最終アセ
トン濃度６０Ｖ／Ｖ％とし、生じた沈澱物を遠心分離で
回収する。

回収した沈澱物はアセトンで脱水し、３０℃以下にして
減圧乾燥してα−１６３−グルカナーゼ酵素粗粉末６ｚ
を得た。

この粉末の酵素活性は１４００単位／１であった。

実施例 ３ 実施例２で得た酵素粉末１１を一定量の水にとかし、一
夜流水中で透析した。

透析後の酵素液は０．０５Ｍ酢酸緩衝液ｐＨ６，０で平
衡化したＤＥＡＥ−セルロースで処理すると、α−１，
３−グルカナーゼは吸着されず通過して出て来るので、
活性部分を集め、ＣＭ−セルロースに吸着させた。

ついで食塩溶液で濃度勾配溶出を行い、α−１，３−グ
ルカナーゼの活性部分を集めた。

カラムに０．１モルの酢酸緩衝液ｐ Ｈ５，５で充分膨
潤したバイオケルＰ−１５０を充填し、更に１昼夜同じ
緩衝液で洗浄する。

ゲル上部に酵素の活性部分を加え、上記の緩衝液で流出
させる。

この流出液の活性部分を集め、濃縮する。

次に上記と同様の方法でカラムに充填したセファロース
４ＢＫ上記の酵素活性部分を加え、更に上記と同じ緩衝
液で流出させ。

活性部分ケ集め、濃縮することによ１２５単位／ｍｌの
精製酵素液４ｍが得られた。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明により製造されるα−１，３−グルカナ
ーゼのｐＨと活性の変化を示す図であり。 第２図は本発明により製造されるα−１，３−グルカナ
ーゼのｐＨ安定曲線であシ、第３図は本発明により製造
されるα−１，３−グルカナーゼの温度と活性の変化を
示す図であり、第４図は本発明により製造されるα−１
，３−グルカナーゼの温度と残存活性の関係を示す図で
ある。 １４４− １４５−

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ）
   属に属し、α−１，３−グルコシド結合を分解する酵素
   を生産し他のグルコシド結合を分解する酵素を生産しな
   い菌を培養し、この培養物よりα−１，３グルコシド結
   合を分解する酵素を採取することを特徴とするα−１，
   ３グルコシド結合を分解する酵素の製造法。