JPS5857150B2 - タトウルイオブンカイスルコウソノ セイゾウホウ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はストレプトミセス属に属する菌を用いてう蝕の
原因となる歯垢の一成分である不溶性多糖類ムタンを分
解する酵素を製造する方法に関するものである。

近年う蝕に対する研究が進むにつれ、う蝕誘発菌がう蝕
の原因になることが明らかになってきた。

このう蝕誘発菌はストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｃｏｃｃｕｓ）属、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃ
ｉｌｌｕｓ）属、オドントミセス（ｏｄｏｎｔｏｍｙｃ
ｅｓ）属に所属する微生物と云われ、これらの微生物が
食物中に含まれる砂糖を利用して、菌体表面に粘着性を
有する不溶性多糖類を生産し、この生産物が歯牙表面に
沈着することにより、歯垢を形成する。

歯垢は歯肉を刺激し、歯肉の炎症及び歯根膜炎を誘発す
る。

又、歯垢中の微生物は嫌気発酵を行って有機酸を生産し
、これが歯牙を形成しているエナメル質を脱灰させう蝕
を誘発させる。

そこでこの歯垢予防のため従来から弗素化合物、リン酸
化合物、殺菌剤、中和剤などが使用されているが、粘質
物の除去は出来ず、又う蝕の誘発阻止に対する機能も充
分とはいえない。

最近歯垢中の一字糖類としてデキストランが存在するこ
とが知られ、歯垢予防の為デキストラン分解酵素を使用
する方法も開発されている。

しかし歯垢中の不溶性多糖類には殆んど作用せず、歯垢
の抑制、う蝕誘発阻止効果は殆んどないことが報告され
ている。

グツゲンハイム（Ｇｕｇｇｅｎｈｅｉｍ）等及び三崎等
は口腔内細歯ストレプトコッカス・ムタンス（Ｓｔｒｅ
ｐｔｏｃｏｃｃｕｓｍｕｔａｎｓ）ＯＭＺ １７６歯の
生産する不溶性多糖類（ムタンと称す）について研究し
、ムタンが歯垢の主原因である粘性不溶性多糖類であり
、α−１・３−グルコシド結合を主成分とし、これにα
−１・６−グルコシド結合がすだれ状に結合しているこ
とを報告している（Ｇｕｇｇｅｎｈｅｉｍ ｅｔ
ａｌ；Ｈｅ１ｖ、０ｄｏｎ。

Ａｃｔａ １４巻、８９頁〜１０８頁、１９７０年、
Ａ。

Ｍｉｓａｋｉ ｅｔ ａｌ；Ｃａｒｂｏｈｙｄ、Ｒ
ｅｓ、３８巻。

３７４〜３８１頁、１９７４年）。

本発明者等は、このう蝕の原因である不溶粘性多糖類ム
タンを分解して、う蝕の予防、除去をはかることを目的
として、広く自然界よりムタンに作用してこれを分解し
可溶化する酵素を生産する微生物を検索した。

その結果、ストレプトミセス属に属する菌株であるスト
レプトミセスＮＯ・４２号を分離した。

このストレプトミセスＮＯ。４２号の生産するムタン分
解酵素は、α−１，３−グルコシド結合を分解する酵素
及びα−１，６＝グルコシド結合を分解する酵素の二種
類の酵素からなる。

α−１，３−グルコシド結合を切断する酵素としては、
グツゲンハイムがトリコデルマＣＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍ
ａ）属及びペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属
の歯によりこれと同様の分解作用を行う酵素が生産され
ることを報告しており、ムタナーゼと命名している。

又α−１，６−グルコシド結合を切断する酵素としては
、デキストラナーゼが知られており、ストレプトミセス
・シンナモ不ンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｃｉｎ
ｎａｍｏｎｅｎｓｉｓ）等により生産されることが知ら
れている（特公昭４７−７３４５号公報）。

本発明者等は、このα−１，３−グルコシド結合を分解
する酵素及びα−１，６−グルコシド結合を分解する酵
素の二種類の酵素を同時にしかも強力にストレプトミセ
ス属に属する菌株、例えばストレプトミセスＮＯ・４２
号が生産することを見出したのである。

上記のストレプトミセスＮｏ・４２号の歯学的性質は下
記の通りである。

（ａ） 歯の形態 胞子形成歯糸の分枝法：単純分枝 胞子鎖の形態：螺旋状 胞子の数：１０個以上（約３０ケ位） 胞子の表面構造及び大きさ：平滑で１．７×０．９μ 鞭毛胞子の有無：無し 胞子のうの有無：無し 胞子柄の着生位置：気菌糸上に着生 （ｂ） 各種培地における生育状態 各種培地における生育状態の観察はすべてインターナシ
ョナル・ストレプトミセス・ブロジエク）ＣＩｎｔｅｒ
ｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｐｒｅ
ｊｅｃｔ（１，５−Ｐ）：］の力法（Ｉｎｔｅｒ、Ｊ。

５ｙｓｔ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、１６巻、３１３頁、１
９６６年）に従った。

また記載も１．Ｓ、Ｐ、の記載例に準じたが、集落表面
の菌叢色、集落の裏面色、拡散性色素の色は色の標準″
（日本色彩研究所）に従った。

■ シュークロース・硝酸塩寒天培地 生育は非常に悪く、気菌糸の着生は少なく、菌叢色は茶
白より茶灰に変化する。

基生菌糸の裏面色は無色、拡散性色素は生産せず。

■ グルコース・アスパラギン寒天培地 気性菌糸は密生し、菌叢色は白色より赤味灰、オリーブ
族に変化する。

基生菌糸の裏面は黄味系で薄い量系の拡散性色素を生産
する。

■ グリセリン・アスパラギン寒天培地 集落表面の菌叢色は茶灰よりオリーブ族に変化する。

基生菌糸裏面色は暗い黄色であり、拡散性色素は暗い黄
だいだいより茶色である。

■ スターチ寒天培地 集落表面はビロード状をなし、菌叢色は白色より茶味灰
、オリーブ族と順次変化する。

基土菌糸裏面は薄い黄味系を示す。

又、薄い黄色の拡散性色素を生産する。

■ チロシン寒天培地 生育良好で、気菌糸は密生し、菌叢色は明るい灰白色よ
り茶灰色に変化する。

基生菌糸の裏面色及び拡散性色素は暗い黄味茶色を示す
。

■ 栄養寒天培地 生育悪く、裏面色は薄い黄色より明るいオリーブ族に変
わる。

又、薄い黄味系の拡散性色素を生産する。

■ イースト・麦芽寒天培地 生育良好で、気菌糸の密生した集落を作り、菌叢色は茶
灰色、裏面色は暗い茶色、拡散性色素は明るい茶色であ
る。

■ オートミール寒天培地 生育は普通で、菌叢色は白色より茶灰に変化する。

基生菌糸の裏面色は暗い黄味茶色。拡散性色素は黄茶色
である。

■楔形馬鈴薯 基生菌糸は皺をなし、培地表面をおおう。

皺上に白色より薄い茶灰色になった気菌糸が密生する。

゛、黒褐色の拡散性色素を生産する。［相］ 馬鈴薯・
グルコース寒天培地 生育は普通。

気菌糸の着生は普通。菌叢色は明るい茶灰より灰色に変
わる。

基生菌糸の裏面色は暗い黄味系より茶黒となる。

拡散性色素は灰味茶より明るい茶に変わる。

０ 卵寒天培地 生育は普通。

気菌糸の着生少なく、菌叢色は白色より茶味灰に変わる
。

基土菌糸裏面は暗い黄抹茶色。

拡散性色素は明るい黄味茶色。＠ 繊維寒天培地 生育は非常に悪い。

気菌糸も少なく、菌叢色は白色より茶味灰になる。

拡散性色素はにぷい黄色。

（ｃ） 生理的性質 ■ 生育温度範囲（イースト・麦芽寒天培地。

ｐＨ７，０） ： ２５〜４５°Ｃ０４００Ｃで最も良
く生育する。

■ ゼラチンの液化：液化する。

■ スターチの加水分解：加水分解する。

■ 脱脂牛乳の凝固、ペプトン化：凝固し、ペプトン化
する。

■ メラニン様色素の生成：チロシン寒天培地及びペプ
トン・イースト・鉄寒天培地上で共に生成する。

■ 生育しうる条件：ｐＨ４，５０以下では生育せずｐ
Ｈ４，５０で生育やや悪し、ｐ Ｈ５，００−ｐＨ８，
２２では生育良好。

ｐＨ８，３０〜８．６０で生育悪し、ｐＥ］９．００以
上では生育せず。

（ｄ）炭素源の同化性 ■Ｌ−アラビノース＋＋■イノシトール ■Ｄ−キシロース ＋■Ｌラムノース ■Ｄ−’ｆルコース ＋＋■Ｌ−ラフィノース＋■Ｄ−
フラクトース＋＋■マンニット ＋＋■シュクロース
士 ＋−二生育良好、＋：生育良 ±：生育悪し、殆んど生育せず ：生育せず 本菌株は１０個以上（約３０個位）の胞子鎖を形成し、
胞子のう、運動性胞子及び菌核などの形成カ認められず
、菌糸の分裂が入られないことから、ストレプトミセス
属に属する。

又、胞子鎖は螺旋状（スピラレス節）をなし、胞子表面
は平滑、気菌糸の菌叢色は灰色系列（又は赤色系列）、
基生菌糸裏面色は黄味系より暗い茶色、拡散性色素は薄
黄色より薄茶でかつメニニン色素を生成する。

この形態的、生理的性状をシャーリング氏とゴツトリー
ブ氏の報告（Ｅ−Ｂ−８ｈｉｒｌｉｎｇ ａｎｄＤ−
Ｇｏｔｔｌ ｉｅｂ ：Ｉｎｔｅｒ−Ｊ −８ｙｓｔ、
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ。

１８巻、１９巻及び２２巻）、野々村の報告（日本発酵
工学雑誌５２巻、７８頁）及びバージエ・マニュアル・
オブ・デイタミネーテイブ・バクテリオロジイ（Ｂｅｒ
ｇｅｙ ｓＭａｎｕａｌ ｏｆＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉ
ｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）８版を参照し、本菌
株と良く一致する菌種を選び比較培養試験を行った。

その結果を第１表に示す。ストレプト□セスＮＯ，４２
号と標準株との菌叢色、集落の裏面色、メラニン様色素
について比較すると、本菌株はストレプトミセス・レジ
ストミシフイカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｒｅ
ｓｉｓｔ。

ｍｙｃｉｆｉｃｕｓ ＩＦＯ１２８１４（ＩＦｏ １２
８１４株という）に最も近い縁であるが、拡散性色素及
び炭素源の利用能については差異が認められる。

即ち、ＩＦ０１２８１４株の拡散性色素は薄量系である
のに対し、本菌株は黄色又は茶色を示す。

又、炭素源の同化性についてはＩＦ０１２８１４株はす
べての糖を利用するのに対し、本菌株はＬ−イノシトー
ル、ラムノースを利用せず、シュクロースも殆んど利用
しない。

ストレプトミセス属の分類においては、拡散性色素の性
状は単独では種以下の分類基準として重要視されていな
いが、炭素源の同化性については岡西氏の報告（日本細
菌学雑誌、２７巻、４３５頁）にも見られる通り重要な
分類基準となるので、本菌株はストレプトミセス属の新
種と判定した。

なおストレプトミセスＮ０．４２号ば工業技術院微生物
工業技術研究所に微工研菌寄第３０２０号（ＦＥＲＭ−
Ｐ ＮＯ３０２０）として寄託されている。

本発明は、上記知見に基いて完成されたものであって、
本発明はストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔ。

ｍｙｃｅｓ）属に属し、α−１，３−グルコシド結合を
分解する酵素及びα−１，６−グルコシド結合を分解す
る酵素を同時に生産する菌を培養し、培養物よりα−１
，３−グルコシド結合を分解する酵素及び／又はα−１
，６−グルコシド結合を分解する酵素な採取することを
特徴とするα−１，３−グルコシド結合を分解する酵素
及び／又はα−１，６−グルコシド結合を分解する酵素
の製造法である。

本発明で使用する菌としては、上記ストレプトミセスＮ
Ｏ、４２号は１具体例であって、その変異株、変種など
は勿論のこと、ストレプトミセス属に属する菌であって
、α−１・３−グルコシド結合を分解する酵素及びα−
１・６−グルコシド結合を分解する酵素を同時に生産す
る菌であれば、すべて用いることができる。

本発明方法は実施するに当っては、スプレブトミセス属
に属する上記菌を天然又は人工培地として一般に使用さ
れる各種組成の栄養源を含む固体又は液体の培地に表面
培養又は振盪培養もしくは深部培養する。

培地の栄養源としては、例えば澱粉、ブドウ糖蔗糖、ラ
フィノース、マンノース、ソルボース。

皺、大豆粉、コーン、スチープ、リカー、肉エキス、米
ヌカ、無機の窒素、各種無機塩類、各種金属イオンの組
合せたものが使用できる。

特にアスペルギルス・ニガーの菌体もしくはその温水抽
出残渣を培地中に添加することにより、上記酵素の生産
は無添加に比し増強される。

又ムタンの添加も同様な効果がある。

培養に際して温度は２５°Ｃ〜３５°Ｃ１培地のｐＨは
４．５〜６．５に調整することが好ましい。

培養時間は、培養条件によって異なるが、最高力価に達
する時期を検討して培養を止めるのがよく、通常２〜５
日間の培養で最高力価に達する。

液体培養雷液あるいは固体培養抽出液から上記酵素を採
取精製するには、従来各種の培養物からその含有酵素を
採取、精製するために知られた常法を適宜に使用するこ
とが出来る。

例えば培養ろ液又は固体培養物の水抽出液を減圧濃縮す
る方法、硫安、硫酸ソーダ、食塩等での塩析法、メタノ
ール、エタノール、アセトンのような溶媒による分画沈
澱法、適宜の吸着剤による吸着溶出法、又蛋白沈澱剤に
よる沈澱法、等電点沈澱法、重金属による不純物の分離
法、電気透析法などの分離法、精製法を組合せるか又は
単独で応用することができる。

精製方法の具体例を示すと、次の如くである。

本発明方法にしたがって得られた培養液を濾過又は遠心
分離することにより透明な酵素液が得られる。

この酵素液をさらに濃縮、流水透析後、０．００５モル
酢酸緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−セルロースで処理を
行ない、酵素液中のα−１，３−グルコシド結合を分解
する酵素（α−１，３−グルカナーゼという）とα−１
，６−グルコシド結合を分解する酵素（α−１，６−グ
ルカナーゼという）を分離する。

即ちα−１，３−グルカナーゼはＤＥＡＥ−セルロース
に吸着されず、−力α−１．６−グルカナーゼは吸着さ
れる。

吸着されたα−１，６−グルカナーゼは０．２〜０．４
モル食塩で溶出する。

かくして分離されたａ−１，３−グルカナーゼ及びα１
．６−グルカナーゼはさらに各々分子篩バイオゲルｐ−
１５０で処理することにより精製される。

また上記各酵素の力価の測定法は次のようにして行う。

１／１０モル酢酸緩衝液ｐＨ５，５に０．６優になる様
に未処理ムタンを懸濁した基質１ｄを４０°Ｃで予熱す
る。

これに適当に稀釈した酵素液１１ｎｌを加え４００Ｃ，
１０分間振盪しつつ作用させ、生成して来る還元力をソ
モギー・不ルソン法で測定し、グルコース量として表示
する。

次に、あらかじめ前記未処理ムタンの懸濁液に高単位の
デキストラン分解酵素（市販品）を加え、４０°Ｃでム
タン中のα−１，６−グルコシド結合を切断させ、還元
力の増加がなくなるまで反応させる。

反応終了後、反応液中の沈澱物を水洗し、上澄液中に還
元力が無くなるまで水洗と遠心分離をくり返して行ない
、還元力のなくなった時点で沈澱物を遠心分離して回収
する。

これを処理ムタンと称する。この処理ムタンを１／１０
モル酢酸緩衝液ｐＨ５，５に０．６優になる様に懸濁さ
せる。

この懸濁液１−を４０゜Ｃに予熱する。

これに適当に稀釈した酵素液１７！を加え、４００Ｃ９
１０分間振盪しり・つ反応を行なわせ生成して来る還元
力をンモギー・不ルソン法で測定し、グルコース量とし
て表示する。

ここで処理ムタンに酵素を作用させて生成して来るグル
コース量はα−１，３−グルコシド結合が切断されて出
て来るものでα−１，３−グルカナーゼ活性を示す。

又未処理ムタンに酵素を作用させて生成して来るグルコ
ース量はα−１，３及びα−１，６−グルコシド結合が
切断されて出て来るものでα１．３及びα−１，６−グ
ルカナーゼ活性と考えられるので、α−１，６−グルカ
ナーゼ活性は未処理ムタンかも酵素作用によって生成し
て来るグルコース量より処理ムタンかも酵素作用によっ
て生成して来るグルコース量を差引いた値となる。

活性表示は４０℃、１分間に１βのグルコースに相当す
る還元力を生成する量を１単位とする。

なお上記ムタンは、例えば以下の如くにして採取する。

シュクロース５多、トリプチケース・ソイ・ブロス３多
を含む液体培地にストレプトコッカス・ムタンスＯＭＺ
１７６菌を接種し３５°Ｃにて２４時間静置培養する
。

この上澄を除き、水にて沈澱物をくり返し洗浄する。

これに１モルの苛性カリ水溶液を加えて沈澱物を溶解し
た後、濾過し、不溶解物を除去する。

この溶液にエタノールを加えて７５Ｖ／Ｖφとし生じた
沈澱物を沢別する。

これを水にとかした後、塩酸を加えて中性とすると沈澱
物を生ずる。

この沈澱物を水洗をくり返した後に、アルコールで脱水
し４０°Ｃ以下にて減圧乾燥してムタンを得る。

必要に応じボールミル等にて粉砕して使用する。

これを未処理ムタンと称する。

本発明方法によって得られるα−１，３−グルコシド結
合を分解する酵素、及びα−１，６−グルコシド結合を
分解する酵素の性質は次の通りである。

（１）α−１，３−グルコシド結合を分解する酵素（α
−１，３−グルカナーゼ） ■ 作用及び基質特異性：本酵素はムタンのα１．３−
グルコシド結合を無差別に切断するいわゆるエンド塑α
−１，３−グルカナーゼである。

■ 最適ｐＨ： ｐＨ４，５〜６．５（第１図参照）■
安定ｐＨ（５００Ｃ，１０分処理）：ｐＨ５，５（第
２図参照） ■ 最適作用温度：６００Ｃ（第３図参照）■ 安定温
度（ｐＨ５，５、１０分処理）：５０℃以下（第４図参
照） ■ ｐＨ９温度などによる失活の条件：基質のない状態
ではｐＨ５，５，６０ＱＣ，１０分の加熱で３０％、同
じ＜７００Ｃ，１０分で８０優、それぞれ失活する。

又ｐＨ８，０、３０°Ｃ９２４時間放置すると４０饅失
活する。

■ 阻害、活性化、安定化：水銀及び銀イオンによって
顕著に阻害される。

活性化を促す金属イオンは特に認められない。

安定化を促す金属イオンも特に認められないが、基質の
存在は酵素の耐ｐＨ９耐熱性を増加する効果が認められ
る。

■ 精製方法：前記したとおりである。

■ 力価の測定法：前記したとおりである。

（２）α−１，６−グルコシド結合を分解する酵素（α
−１，６−グルカナーゼ） ■ 作用及び基質特異性：本酵素はムタンのα−１，６
−グルコシド結合を無１１Ｊに切断するいわゆるエンド
型のα−１，６−グルカナーゼである。

■ 最適ｐＨ： ｐＨ６−０（第５図参照）■ 安定ｐ
Ｈ（５００Ｃ、１０分処理）：ｐＨ６，０〜６．５（第
６図参照） ■ 最適作用温度：４００Ｃ（第７図参照）■ 安定温
度ＣｐＨ５，５、１０分処理）：４０°Ｃ以下（第８図
参照） ■ ｐＨ９温度などによる失活の条件：基質のない状態
ではｐＨ５，５，５００Ｃ，１０分の加熱で４０％、同
じり５５°ｃ、ｉｏ分では８０饅、それぞれ失活する。

またｐ Ｈ８，０、３００Ｃ、２４時間放置すると１０
０％失活する。

■ 阻害、活性化、安定化：水銀及び銀イオンによって
顕著に阻害される。

カルシウムイオンの添加では、１×１０−２〜１０−１
モルの濃度範囲で２倍以上に活性化される。

安定化を促す金属イオンは特に認められないが、基質の
存在は酵素の耐ｐＨ，耐熱性を増加する効果が認められ
る。

■ 精製方法：前記したとおりである。

■ 力価の測定法：前記したよおりである。

本発明で製造されるα−１，３−グルカナーゼはこれ迄
に報告されているトリコデルマ属、ペニシリウム属など
により生産されるムタナーゼとはやや異る。

即ち、トリコデルマ属の生産するムタナーゼは作用最適
ｐＨは６．０であり、作用最適温度は４８°Ｃである。

又、ペニシリュム属の生産するムタナーゼは作用最適ｐ
Ｈは４．５であり、作用最適温度は４６°Ｃである。

これに対し、本発明で製造されるα−１，３−グルカナ
ーゼは作用最適ｐＨが４．５から６．５迄巾広く存在し
、作用最適温度は６０°Ｃと高い所にるる。

また本発明で製造されるα−１，６−グルカナーゼはス
トレプトミセス・シンナモ不ンシス（微工研菌寄第３３
９号）の生産するデキストラナーゼとは次の点で異なっ
ている。

即ち本発明で製造されるα−１，６−グルカナーゼは、
カルシウムイオンにより顕著に活性化され１０−２モル
〜１０−１モルの範囲では２倍以上の１古性となり、又
最適作用温度は４００Ｃである。

しかるにストレプトミセス・シンナモ不ンシスの生産す
るデキストラナーゼはカルシウムイオンの添加では全く
活性化されないし、又最適作用温度は５５°Ｃ〜６００
Ｃである。

また本発明で製造される２種類の酵素は各々単独でムタ
ン分解作用を有し、特に両者の混合物は強力にムタンを
分解して可溶性とし、歯牙表面よリムタンを除去しヤ丁
くする。

次に本発明の実施例を示すが、本発明はこれにより制限
されるものではない。

実施例 １ ペグトン０．１％、牛肉エキス０．１φ、硝酸アンモン
０．１ ％ 、燐酸−力ＩＪ Ｏ，１％ 、燐酸二ソー
ダ０．６％、硫酸マグネシウム０．０３ ％に炭素源と
して可溶澱粉Ｏ０６多、又はアスペルギルス・ニガーの
菌体の温水抽出残渣０．４％をそれぞれ添加した培養液
（ｐＨ６，０に調整）を内径２０ｍの大型試験管に１０
１ｎｌ加え、蒸気加圧殺菌後、ストレプトミセスＮＯ・
４２号を接種し、３００Ｃで３日間培養する。

培養ろ液の酵素活性を測定した結果は第２表の通りであ
る。

実施例 ２ ペプトン０．１ ％ 、牛肉エキス０．１％、硝酸アン
モン０．１％、燐酸−力ＩＪ０．１％、燐酸二ソーダ０
．６％、硫酸マグネシウム０．０３ ％ 、ブドウ糖０
．２％、アスペルギルス・ニガーの菌体の温水抽出残渣
１．０％を添加した培養液（ｐＨ６，０に調整）１００
−を５００ｒｒｌｌ容肩付フラスコに入れ、蒸気加圧殺
菌し、あらかじめ同培地で３０°Ｃで２４時間試験管振
盪培養したストレプトミセスＮ０，４２ で７２時間，振盪培養を行なう。

このようにして得た培養液の酵素活性は第３表の通りで
ある。

上記培養液１ｔを濾過又は遠心分離により菌体を除き透
明な酵素液とした、０〜４°Ｃに冷却する。

別に００Ｃ以下に冷却したアセトンを、この酵素溶液に
除々に加えて最終アセトン濃度６０Ｖ／Ｖ多とし、生じ
た沈澱物を遠心分離で回収する。

回収した沈澱物は冷アセトンで脱水し、３００Ｃ以下に
て減圧乾燥してα−１．３−グルカナーゼ及びα−１．
６−グルカナーゼ混合酵素粉末５ｉを得た。

この酵素粉末の酵素活性は第４表の通りである。

実施例 ３ 実施例２で得た酵素粉末１ｇ″を一定量の水に溶解し、
１夜流水中で透析を行なう。

透析後の酵素液は０．０５ Ｍ酢酸緩衝液ｐＨ６，０で
平衡化したＤＥＡＥ−セルロースで処理すると、α−１
，３−グルカナーゼは吸着されず通過して出て来るので
、活性部分を集め、次にバイオゲルｐ−１５０に通して
ゲル済過をすることにより１３００Ｕの精製されたα−
１，３−グルカナーゼを得た。

また、上記透析後の酵素液をＤＥＡＥ−セルロースで処
理し吸着された部分は同じ緩衝液で洗浄した後、食塩溶
液で濃度勾配溶出を行なうと、０．２〜０．４モルの範
囲でα−１，６−グルカナーゼが溶出して来るので、活
性区分を集め、次にバイオゲルｐ−１５０に通してゲル
済過をすることにより４００Ｕの精製されたα−１，６
−グルカナーゼを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明により製造されるα−１，３グルカナー
ゼのｐＨと活性の変化を示す図であり、第２図シま本発
明により製造されるα−１，３−グルカナーゼのｐＨ安
定曲線であり、第３図は木兄により製造されるα−１，
３−グルカナーゼの温度と活性の変化を示す図であり、
第４図は本発明により製造されるα−１，３−グルカナ
ーゼの温度安定曲線であり、第５図は本発明により製造
されるα−１，６−グルカナーゼのｐＨと活性の変化を
示す図であり、第６図は本発明により製造されるα−１
，６−グルカナーゼのｐＨ安定曲線であり、第７図は本
発明により製造されるα−１，６−グルカナーゼの温度
と活性の変化を示す図であり、第８図は本発明により製
造されるα−１，６−グルカナーゼの温度安定曲線であ
る。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ストレプトミセスＣ８ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属
   に属し、α−１・３グルコシド結合を分解する酵素及び
   α−１・６−グルコシド結合を分解する酵素を同時に生
   産する菌を培養し、培養物よりα−１，３−グルコシド
   結合を分解する酵素及び／又はα−１・６−グルコシド
   結合を分解する酵素を採取することを特徴とするα−１
   ・３−グルコシド結合を分解する酵素及び／又はα−１
   ・６グルコシド結合を分解する酵素の製造法。