JP3516105B2 - ムタナーゼ産生微生物及びムタナーゼ - Google Patents
ムタナーゼ産生微生物及びムタナーゼInfo
- Publication number
- JP3516105B2 JP3516105B2 JP14265395A JP14265395A JP3516105B2 JP 3516105 B2 JP3516105 B2 JP 3516105B2 JP 14265395 A JP14265395 A JP 14265395A JP 14265395 A JP14265395 A JP 14265395A JP 3516105 B2 JP3516105 B2 JP 3516105B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- mutanase
- mutan
- action
- optimum
- substrate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規なムタナーゼ産生
微生物及び新規ムタナーゼに関し、詳しくは、土壌より
分離して得られるバチルス属に属し、その菌株を培養す
ることによりムタナーゼを産生する新規なムタナーゼ産
生微生物及び該微生物の菌株を培養することにより得ら
れ、歯磨等の口腔用組成物の添加酵素として有効性が高
く、且つ安定的に配合できる新規なムタナーゼに関す
る。
微生物及び新規ムタナーゼに関し、詳しくは、土壌より
分離して得られるバチルス属に属し、その菌株を培養す
ることによりムタナーゼを産生する新規なムタナーゼ産
生微生物及び該微生物の菌株を培養することにより得ら
れ、歯磨等の口腔用組成物の添加酵素として有効性が高
く、且つ安定的に配合できる新規なムタナーゼに関す
る。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】口腔中
に存在する細菌であるストレプトコッカス・ミュータン
ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）やス
トレプトコッカス・ソブリナス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃｕｓ ｓｏｂｒｉｎｕｓ）等とこれらの菌から産生さ
れる不溶性グルカンとの複合体である歯垢が、う触形成
の要因の一つと推定されている。う触は、歯垢部位にお
いて細菌に由来する酸が産生し、さらにはそれが歯牙を
脱灰することにより生じる。
に存在する細菌であるストレプトコッカス・ミュータン
ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）やス
トレプトコッカス・ソブリナス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃｕｓ ｓｏｂｒｉｎｕｓ）等とこれらの菌から産生さ
れる不溶性グルカンとの複合体である歯垢が、う触形成
の要因の一つと推定されている。う触は、歯垢部位にお
いて細菌に由来する酸が産生し、さらにはそれが歯牙を
脱灰することにより生じる。
【０００３】その歯垢を除去する手法の一つとして、歯
垢を形成する多糖である不溶性グルカンを酵素を用いて
分解することが有効である。不溶性グルカンは、グルコ
ースが主にα−１，６−グルコシド結合とα−１，３−
グルコシド結合を有するグルカンが複雑にからみあって
形成されているが、従来より、α−１，６−グルコシド
結合を切断するデキストラナーゼ、及び、α−１，３結
合を切断するムタナーゼが、それぞれ歯垢形成抑制効果
を持つことが知られており、これらを単独で配合した口
腔用組成物が提案されている（特許第７８２１５４号明
細書、同第１０５５３６５号明細書等）。
垢を形成する多糖である不溶性グルカンを酵素を用いて
分解することが有効である。不溶性グルカンは、グルコ
ースが主にα−１，６−グルコシド結合とα−１，３−
グルコシド結合を有するグルカンが複雑にからみあって
形成されているが、従来より、α−１，６−グルコシド
結合を切断するデキストラナーゼ、及び、α−１，３結
合を切断するムタナーゼが、それぞれ歯垢形成抑制効果
を持つことが知られており、これらを単独で配合した口
腔用組成物が提案されている（特許第７８２１５４号明
細書、同第１０５５３６５号明細書等）。
【０００４】また、歯垢に対する作用点の異なるデキス
トラナーゼとムタナーゼとを併用することによって、各
々を単独で用いるよりも高い歯垢形成抑制効果が得られ
ることも知られている（特開昭５７−１６５３１２号公
報）。しかしながら、単独で使用した場合に、デキスト
ラナーゼとムタナーゼ等とを併用した場合より高い有効
性を示す酵素は知られていない。
トラナーゼとムタナーゼとを併用することによって、各
々を単独で用いるよりも高い歯垢形成抑制効果が得られ
ることも知られている（特開昭５７−１６５３１２号公
報）。しかしながら、単独で使用した場合に、デキスト
ラナーゼとムタナーゼ等とを併用した場合より高い有効
性を示す酵素は知られていない。
【０００５】実際には、これまで上市されているムタナ
ーゼは、ごく一部に限定されており、またムタナーゼを
配合した歯磨等の口腔用組成物の製品として上市されて
いるムタナーゼ配合組成物もない。何故ならば、現在上
市されているムタナーゼは、歯磨、あるいは洗口剤など
の口腔用組成物中に配合するのに必要な安定性、例えば
耐熱性や組成中での安定性が不十分であり、未だかかる
製品の安定供給には至っていないからである。
ーゼは、ごく一部に限定されており、またムタナーゼを
配合した歯磨等の口腔用組成物の製品として上市されて
いるムタナーゼ配合組成物もない。何故ならば、現在上
市されているムタナーゼは、歯磨、あるいは洗口剤など
の口腔用組成物中に配合するのに必要な安定性、例えば
耐熱性や組成中での安定性が不十分であり、未だかかる
製品の安定供給には至っていないからである。
【０００６】本発明は、上記事情に鑑みなされたもの
で、歯垢の予防や歯垢の除去に有効で、且つ歯磨等の口
腔用組成物に安定的に配合できる新規なムタナーゼ及び
土壌より分離して得られるバチルス属に属し、その菌株
を培養することにより上記ムタナーゼを産生する新規な
ムタナーゼ産生微生物を提供することを目的とするもの
である。
で、歯垢の予防や歯垢の除去に有効で、且つ歯磨等の口
腔用組成物に安定的に配合できる新規なムタナーゼ及び
土壌より分離して得られるバチルス属に属し、その菌株
を培養することにより上記ムタナーゼを産生する新規な
ムタナーゼ産生微生物を提供することを目的とするもの
である。
【０００７】
【課題を解決するための手段及び作用】本発明者らは上
記目的を達成するため鋭意検討を行い、歯磨・洗口剤等
の口腔用組成物の配合成分の共存下にあって、歯垢分解
に有効性が高く、且つ優れた安定性を有するムタナーゼ
を産生する微生物を自然界より広く探索した結果、公知
のムタナーゼよりも歯垢除去能力が高く、且つ熱安定性
にも優れた新規ムタナーゼを培地中に産生する下記微生
物を見い出し、本発明をなすに至った。
記目的を達成するため鋭意検討を行い、歯磨・洗口剤等
の口腔用組成物の配合成分の共存下にあって、歯垢分解
に有効性が高く、且つ優れた安定性を有するムタナーゼ
を産生する微生物を自然界より広く探索した結果、公知
のムタナーゼよりも歯垢除去能力が高く、且つ熱安定性
にも優れた新規ムタナーゼを培地中に産生する下記微生
物を見い出し、本発明をなすに至った。
【０００８】即ち、本発明は、バチルス・エスピー（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）Ｍ７株（生命研菌寄第１４８
３５号）であり、下記菌学的性質を有するムタナーゼ産
生微生物を提供する。 （Ｉ）グラム染色性が陽性であるが脱色されやすい。 （ＩＩ）周鞭毛をもち、運動性あり。 （ＩＩＩ）プロテアーゼ産生が陰性である。 （ＩＶ）寒天培地において、２％塩化ナトリウム存在下
では生育しない。 （Ｖ）カタラーゼは陰性である。 （ＶＩ）ＧＣ含量は５６％である。 （ＶＩＩ）下記の理化学的性質を有するムタナーゼを産
生する。 （１）作用：ムタンのα−１，３−グルコシド結合を分
解する性質を有する。 （２）基質特異性：ムタンをよく分解する。 （３）至適作用ｐＨ：ムタンを基質として３５℃で１０
分間作用させる場合、ｐＨ４．５において作用が至適で
あり、ｐＨ４〜５の範囲で高い活性を示す。 （４）安定ｐＨ範囲：２５℃で２４時間保温する場合、
ｐＨ４〜１０の範囲で安定である。 （５）至適温度：ムタンを基質としてｐＨ５で反応させ
る場合、温度５０℃において作用が至適である。 （６）温度安定性：ｐＨ５で１０分間熱処理した場合、
５０℃以下で活性は安定である。 （７）金属イオンの影響：ムタンを基質とする場合、水
銀又は銀により作用が阻害される。 （８）阻害剤の影響：ムタンを基質とする場合、ｐ−ク
ロロマーキュリー安息香酸によって阻害される。 （９）分子量：ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳
動による分子量は約１６万である。また、上記の理化学
的性質を有することを特徴とするムタナーゼ、上記ムタ
ナーゼ産生微生物の菌株を培養した培養物からムタナー
ゼを採取することを特徴とするムタナーゼの製造方法を
提供する。
ａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）Ｍ７株（生命研菌寄第１４８
３５号）であり、下記菌学的性質を有するムタナーゼ産
生微生物を提供する。 （Ｉ）グラム染色性が陽性であるが脱色されやすい。 （ＩＩ）周鞭毛をもち、運動性あり。 （ＩＩＩ）プロテアーゼ産生が陰性である。 （ＩＶ）寒天培地において、２％塩化ナトリウム存在下
では生育しない。 （Ｖ）カタラーゼは陰性である。 （ＶＩ）ＧＣ含量は５６％である。 （ＶＩＩ）下記の理化学的性質を有するムタナーゼを産
生する。 （１）作用：ムタンのα−１，３−グルコシド結合を分
解する性質を有する。 （２）基質特異性：ムタンをよく分解する。 （３）至適作用ｐＨ：ムタンを基質として３５℃で１０
分間作用させる場合、ｐＨ４．５において作用が至適で
あり、ｐＨ４〜５の範囲で高い活性を示す。 （４）安定ｐＨ範囲：２５℃で２４時間保温する場合、
ｐＨ４〜１０の範囲で安定である。 （５）至適温度：ムタンを基質としてｐＨ５で反応させ
る場合、温度５０℃において作用が至適である。 （６）温度安定性：ｐＨ５で１０分間熱処理した場合、
５０℃以下で活性は安定である。 （７）金属イオンの影響：ムタンを基質とする場合、水
銀又は銀により作用が阻害される。 （８）阻害剤の影響：ムタンを基質とする場合、ｐ−ク
ロロマーキュリー安息香酸によって阻害される。 （９）分子量：ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳
動による分子量は約１６万である。また、上記の理化学
的性質を有することを特徴とするムタナーゼ、上記ムタ
ナーゼ産生微生物の菌株を培養した培養物からムタナー
ゼを採取することを特徴とするムタナーゼの製造方法を
提供する。
【０００９】以下、本発明につき更に詳述すると、本発
明のムタナーゼ産生微生物は自然界より分離採取したも
のであり、バチルス属に属すると共に、グラム染色性が
陽性であるが脱色されやすい性質を示し、且つプロテア
ーゼ産生が陰性であることを特徴とするムタナーゼ産生
微生物、特に上記（１）〜（９）の特性を有するムタナ
ーゼを産生するという特性により他のムタナーゼ産生微
生物と差別化される。その菌株の菌学的性質は以下の通
りである。
明のムタナーゼ産生微生物は自然界より分離採取したも
のであり、バチルス属に属すると共に、グラム染色性が
陽性であるが脱色されやすい性質を示し、且つプロテア
ーゼ産生が陰性であることを特徴とするムタナーゼ産生
微生物、特に上記（１）〜（９）の特性を有するムタナ
ーゼを産生するという特性により他のムタナーゼ産生微
生物と差別化される。その菌株の菌学的性質は以下の通
りである。
【００１０】なお、菌学的性質および分類方法はヴァー
ジズ マニュアル オブ システマチック バクテリオ
ロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙ
ｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）（１９
８４）、ザ ジーナス バチルス（Ｔｈｅ Ｇｅｎｕｓ
Ｂａｃｉｌｌｕｓ）（１９７３）に準じて行った。
ジズ マニュアル オブ システマチック バクテリオ
ロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙ
ｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）（１９
８４）、ザ ジーナス バチルス（Ｔｈｅ Ｇｅｎｕｓ
Ｂａｃｉｌｌｕｓ）（１９７３）に準じて行った。
【００１１】Ａ．形態的性質
肉汁寒天培地上で３０℃にて２日間培養したとき、以下
の形態的特徴が観察される。 （１）細胞の形及び大きさ：桿菌であり、大きさは１〜
２μｍ×４〜６μｍである。 （２）多形性：なし。 （３）運動性：周鞭毛、運動性あり。 （４）胞子：胞子を形成し、胞子の形は楕円形で、その
部位は中立〜亜端立で胞子嚢の膨潤が認められる。胞子
の大きさは１〜１．５μｍ×２〜３μｍである。 （５）グラム染色性：陽性、但し脱色されやすい。 （６）抗酸性：陰性である。
の形態的特徴が観察される。 （１）細胞の形及び大きさ：桿菌であり、大きさは１〜
２μｍ×４〜６μｍである。 （２）多形性：なし。 （３）運動性：周鞭毛、運動性あり。 （４）胞子：胞子を形成し、胞子の形は楕円形で、その
部位は中立〜亜端立で胞子嚢の膨潤が認められる。胞子
の大きさは１〜１．５μｍ×２〜３μｍである。 （５）グラム染色性：陽性、但し脱色されやすい。 （６）抗酸性：陰性である。
【００１２】Ｂ．培養的性質
（１）肉汁寒天平板培養：円形、扁平状、全縁のコロニ
ーを形成する。該コロニーは、白色で光沢はない。 （２）肉汁寒天斜面培養：拡帯状に生育し、白色〜クリ
ーム色のコロニーを形成する。 （３）肉汁液体培養：生育するが、菌膜は形成しない。 （４）肉汁ゼラチン穿刺培養：生育するが、液化しな
い。 （５）リトマス・ミルク：変色しない。液化も凝固もし
ない。
ーを形成する。該コロニーは、白色で光沢はない。 （２）肉汁寒天斜面培養：拡帯状に生育し、白色〜クリ
ーム色のコロニーを形成する。 （３）肉汁液体培養：生育するが、菌膜は形成しない。 （４）肉汁ゼラチン穿刺培養：生育するが、液化しな
い。 （５）リトマス・ミルク：変色しない。液化も凝固もし
ない。
【００１３】Ｃ．生理学的性質
（１）硝酸塩の還元：陽性
（２）脱窒反応：陰性
（３）ＭＲテスト：陰性
（４）ＶＰテスト：陰性
（５）ＶＰブロスのｐＨ：５．８
（６）インドールの生成：検出せず。
（７）硫化水素の生成：検出せず。
（８）デンプンの加水分解：微弱
（９）クエン酸の利用：シモンズ（Ｓｉｍｍｏｎｓ）培
地では利用しない。クリステンセン（Ｃｈｒｉｓｔｅｎ
ｓｅｎ）培地では利用しない。 （１０）無機窒素源の利用：硝酸塩はわずかに利用す
る。アンモニウム塩は利用する。 （１１）色素の生成：陰性 （１２）ウレアーゼ：陰性 （１３）オキシダーゼ：陽性 （１４）カタラーゼ：陰性 （１５）生育の範囲：ｐＨ６〜８で生育する。２０〜３
３℃で至適に生育する。 （１６）酸素に対する態度：好気性 （１７）Ｏ−Ｆテスト：好気的に分解 （１８）糖類から酸及びガスの生成：下記表１に示す通
りである。なお、表１において、「＋」は酸又はガスを
生成することを示し、「−」は酸又はガスを生成しない
ことを示し、「±」は微弱に生成することを示す。
地では利用しない。クリステンセン（Ｃｈｒｉｓｔｅｎ
ｓｅｎ）培地では利用しない。 （１０）無機窒素源の利用：硝酸塩はわずかに利用す
る。アンモニウム塩は利用する。 （１１）色素の生成：陰性 （１２）ウレアーゼ：陰性 （１３）オキシダーゼ：陽性 （１４）カタラーゼ：陰性 （１５）生育の範囲：ｐＨ６〜８で生育する。２０〜３
３℃で至適に生育する。 （１６）酸素に対する態度：好気性 （１７）Ｏ−Ｆテスト：好気的に分解 （１８）糖類から酸及びガスの生成：下記表１に示す通
りである。なお、表１において、「＋」は酸又はガスを
生成することを示し、「−」は酸又はガスを生成しない
ことを示し、「±」は微弱に生成することを示す。
【００１４】
【表１】
【００１５】Ｄ．その他の性質
（１）塩化ナトリウムの耐性：寒天培地において、２％
塩化ナトリウム存在下では生育しない。 （２）嫌気下での生育：陰性 （３）カゼイン分解：陰性 （４）プロピオン酸塩の利用：陰性 （５）ｐＨ６．８での生育：陽性 （６）ｐＨ５．７での生育：陽性 （７）クリスタル形成：陰性 （８）プロテアーゼ産生：陰性 （９）ＧＣ含量：５６％
塩化ナトリウム存在下では生育しない。 （２）嫌気下での生育：陰性 （３）カゼイン分解：陰性 （４）プロピオン酸塩の利用：陰性 （５）ｐＨ６．８での生育：陽性 （６）ｐＨ５．７での生育：陽性 （７）クリスタル形成：陰性 （８）プロテアーゼ産生：陰性 （９）ＧＣ含量：５６％
【００１６】次に、本発明のムタナーゼ産生微生物の菌
株と公知の菌株との相違を述べる。公知のムタナーゼ産
生微生物として、細菌のシュードモナス属、フラボバク
テリウム属、バチルス属、放線菌のストレプトミセス
属、かびのトリコデルマ属、アスペルギルス属などが知
られている。
株と公知の菌株との相違を述べる。公知のムタナーゼ産
生微生物として、細菌のシュードモナス属、フラボバク
テリウム属、バチルス属、放線菌のストレプトミセス
属、かびのトリコデルマ属、アスペルギルス属などが知
られている。
【００１７】まず、本発明のムタナーゼ産生微生物と同
じバチルス属の菌株バチルス・サーキュランス（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ ｃｉｒｃｕｌａｎｓ） ＢＣ−８（以下、
ＢＣ−８菌という）（特開昭６３−３０１７８８号公
報）について述べると、本発明のムタナーゼ産生微生物
はグラム染色性が一応は陽性を示すものの、脱色されや
すい性質を示すのに対し、ＢＣ−８菌は陽性である。そ
して、本発明のムタナーゼ産生微生物は運動性があり、
胞子の部位が中立〜亜端立であるのに対し、ＢＣ−８菌
は運動性がなく、胞子の部位が亜端立である。また、本
発明のムタナーゼ産生微生物はカタラーゼが陰性で、硝
酸塩還元が陽性であるのに対し、ＢＣ−８菌はカタラー
ゼが陽性で、硝酸塩還元が陰性である。更に、本発明の
ムタナーゼ産生微生物は５％ＮａＣｌの生育性が陰性で
あるのに対し、ＢＣ−８菌は陽性である。本発明のムタ
ナーゼ産生微生物はＤ−キシロースからの酸産生が微弱
であるのに対し、ＢＣ−８菌は陰性である。本発明のム
タナーゼ産生微生物はＧＣ含量が５６％であるのに対
し、ＢＣ−８菌では４９．５％である。
じバチルス属の菌株バチルス・サーキュランス（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ ｃｉｒｃｕｌａｎｓ） ＢＣ−８（以下、
ＢＣ−８菌という）（特開昭６３−３０１７８８号公
報）について述べると、本発明のムタナーゼ産生微生物
はグラム染色性が一応は陽性を示すものの、脱色されや
すい性質を示すのに対し、ＢＣ−８菌は陽性である。そ
して、本発明のムタナーゼ産生微生物は運動性があり、
胞子の部位が中立〜亜端立であるのに対し、ＢＣ−８菌
は運動性がなく、胞子の部位が亜端立である。また、本
発明のムタナーゼ産生微生物はカタラーゼが陰性で、硝
酸塩還元が陽性であるのに対し、ＢＣ−８菌はカタラー
ゼが陽性で、硝酸塩還元が陰性である。更に、本発明の
ムタナーゼ産生微生物は５％ＮａＣｌの生育性が陰性で
あるのに対し、ＢＣ−８菌は陽性である。本発明のムタ
ナーゼ産生微生物はＤ−キシロースからの酸産生が微弱
であるのに対し、ＢＣ−８菌は陰性である。本発明のム
タナーゼ産生微生物はＧＣ含量が５６％であるのに対
し、ＢＣ−８菌では４９．５％である。
【００１８】一方、本発明のムタナーゼ産生微生物と同
じバチルス属に属するバチルス・サーキュランス（Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ ｃｉｒｃｕｌａｎｓ） ＦＥＲＭ−Ｐ４
７６５株（以下、ＦＥＲＭ−Ｐ４７６５株という）（特
開昭５５−８８６９３号公報）は、菌株の菌学的性質が
不明であるが、本発明のムタナーゼ産生微生物の菌株が
産生するムタナーゼは、分子量が約１６万であり、至適
温度が５０℃、至適ｐＨが４．５付近であるのに対し、
ＦＥＲＭ−Ｐ４７６５株が産生するムタナーゼは、分子
量７万以上であり、至適温度が３０〜４０℃、至適ｐＨ
が６．２〜６．７であることから、本発明のムタナーゼ
産生微生物はＦＥＲＭ−Ｐ４７６５株とは差別化され
る。
じバチルス属に属するバチルス・サーキュランス（Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ ｃｉｒｃｕｌａｎｓ） ＦＥＲＭ−Ｐ４
７６５株（以下、ＦＥＲＭ−Ｐ４７６５株という）（特
開昭５５−８８６９３号公報）は、菌株の菌学的性質が
不明であるが、本発明のムタナーゼ産生微生物の菌株が
産生するムタナーゼは、分子量が約１６万であり、至適
温度が５０℃、至適ｐＨが４．５付近であるのに対し、
ＦＥＲＭ−Ｐ４７６５株が産生するムタナーゼは、分子
量７万以上であり、至適温度が３０〜４０℃、至適ｐＨ
が６．２〜６．７であることから、本発明のムタナーゼ
産生微生物はＦＥＲＭ−Ｐ４７６５株とは差別化され
る。
【００１９】更に、特開昭５２−３４９８０号公報に記
載されたムタナーゼ産生微生物はストレプトミセス属に
属し、特開昭５０−１４５５８３号公報に記載されたム
タナーゼ産生微生物はフラボバクテリウム属に属するも
のであり、特開昭４７−９７４３号公報に記載されたム
タナーゼ産生微生物はトリコデルマ・ハルジアヌム、ペ
ニシリウム・リラシヌム、ペニシリウム・フニクロサ
ム、ペニシリウム・メリニイ及びペニシリウム・ヤンシ
ネルムであることから、本発明のムタナーゼ産生微生物
はこれらの公知のムタナーゼ産生微生物と差別化され
る。
載されたムタナーゼ産生微生物はストレプトミセス属に
属し、特開昭５０−１４５５８３号公報に記載されたム
タナーゼ産生微生物はフラボバクテリウム属に属するも
のであり、特開昭４７−９７４３号公報に記載されたム
タナーゼ産生微生物はトリコデルマ・ハルジアヌム、ペ
ニシリウム・リラシヌム、ペニシリウム・フニクロサ
ム、ペニシリウム・メリニイ及びペニシリウム・ヤンシ
ネルムであることから、本発明のムタナーゼ産生微生物
はこれらの公知のムタナーゼ産生微生物と差別化され
る。
【００２０】以上の点から、本発明のムタナーゼ産生微
生物の菌株は公知の菌株とは相違するものである。
生物の菌株は公知の菌株とは相違するものである。
【００２１】本発明者らは新規なムタナーゼ産生微生物
であるバチルス・エスピー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓ
ｐ．）Ｍ７株（以下、Ｍ７株という）を工業技術院生命
工学工業技術研究所へ生命研菌寄第１４８３５号（ＦＥ
ＲＭ Ｐ−１４８３５）として寄託した。このＭ７株は
上記菌学的性質を有するものである。なお、この菌株を
分離した土壌の採取場所は新潟県見王不動であり、土壌
の採取は１９９３年に行った。
であるバチルス・エスピー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓ
ｐ．）Ｍ７株（以下、Ｍ７株という）を工業技術院生命
工学工業技術研究所へ生命研菌寄第１４８３５号（ＦＥ
ＲＭ Ｐ−１４８３５）として寄託した。このＭ７株は
上記菌学的性質を有するものである。なお、この菌株を
分離した土壌の採取場所は新潟県見王不動であり、土壌
の採取は１９９３年に行った。
【００２２】そして、上記Ｍ７株は、次に述べるスクリ
ーニング法により自然界より分離採取されるものであ
る。
ーニング法により自然界より分離採取されるものであ
る。
【００２３】スパテル１杯の土壌を５ｍｌの滅菌した生
理食塩水に懸濁し、その懸濁液１００μｌをムタンを加
えた寒天培地に塗布する。まず、３０℃で３〜５日培養
し、その後、コロニー周辺に透明な分解帯を生じたもの
をムタナーゼ産生微生物として分離し、培養して得られ
る酵素の特性を検討することによって優れた歯垢除去能
と安定性とを有するＭ７株を選抜した。
理食塩水に懸濁し、その懸濁液１００μｌをムタンを加
えた寒天培地に塗布する。まず、３０℃で３〜５日培養
し、その後、コロニー周辺に透明な分解帯を生じたもの
をムタナーゼ産生微生物として分離し、培養して得られ
る酵素の特性を検討することによって優れた歯垢除去能
と安定性とを有するＭ７株を選抜した。
【００２４】このＭ７株を天然又は合成培地に接種し
て、通常の培養条件により培養することによりムタナー
ゼが産生されるが、培地としては、通常、炭素源、窒素
源、無機塩等の微生物一般に用いられるものを使用する
ことができ、このような栄養源は、例えば炭素源として
イノシトール，ガラクトース，ムタン等が、窒素源とし
てペプトン，ポリペプトン，大豆粉，酵母エキス等が、
無機塩としてリン酸，ナトリウム，カリウム，マグネシ
ウム等の塩類を挙げることができ、これらを一種単独で
又は二種以上を適宜組み合わせて使用するが、これらの
中でも特にイノシトール、ムタン、ポリペプトン、リン
酸塩等が好適に使用される。培養基のｐＨは６〜８が好
ましく、特にｐＨ７とすると好適である。また、培養温
度は２０〜３３℃が好ましく、特に３０℃が好適であ
る。培養時間は、培養条件によって異なるが、通常１〜
３日が好ましい。
て、通常の培養条件により培養することによりムタナー
ゼが産生されるが、培地としては、通常、炭素源、窒素
源、無機塩等の微生物一般に用いられるものを使用する
ことができ、このような栄養源は、例えば炭素源として
イノシトール，ガラクトース，ムタン等が、窒素源とし
てペプトン，ポリペプトン，大豆粉，酵母エキス等が、
無機塩としてリン酸，ナトリウム，カリウム，マグネシ
ウム等の塩類を挙げることができ、これらを一種単独で
又は二種以上を適宜組み合わせて使用するが、これらの
中でも特にイノシトール、ムタン、ポリペプトン、リン
酸塩等が好適に使用される。培養基のｐＨは６〜８が好
ましく、特にｐＨ７とすると好適である。また、培養温
度は２０〜３３℃が好ましく、特に３０℃が好適であ
る。培養時間は、培養条件によって異なるが、通常１〜
３日が好ましい。
【００２５】次いで、充分にムタナーゼが産生された上
記Ｍ７株の培養液から遠心分離等により菌体等を取り除
いた上清を本発明のムタナーゼの粗酵素液として得る。
この粗酵素液は、このままでも使用することはできる
が、更に、公知の分離精製方法、例えば限外濾過膜濃縮
法、減圧濃縮法、硫安等による塩析法、エタノール等に
よる分画法、等電点沈殿法、カラムクロマト分画法など
を、単独で又は適宜組み合わせることによって精製酵素
液とすると好適である。なお、この精製処理は、ＳＤＳ
−ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって単一バンド
にまで精製されていることが確認できるまで行うことが
望ましい。
記Ｍ７株の培養液から遠心分離等により菌体等を取り除
いた上清を本発明のムタナーゼの粗酵素液として得る。
この粗酵素液は、このままでも使用することはできる
が、更に、公知の分離精製方法、例えば限外濾過膜濃縮
法、減圧濃縮法、硫安等による塩析法、エタノール等に
よる分画法、等電点沈殿法、カラムクロマト分画法など
を、単独で又は適宜組み合わせることによって精製酵素
液とすると好適である。なお、この精製処理は、ＳＤＳ
−ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって単一バンド
にまで精製されていることが確認できるまで行うことが
望ましい。
【００２６】なお、本発明のムタナーゼの産生には、上
記Ｍ７株以外にも、Ｍ７変異株や該ムタナーゼ遺伝子を
持つ組換え微生物を用いることができる。
記Ｍ７株以外にも、Ｍ７変異株や該ムタナーゼ遺伝子を
持つ組換え微生物を用いることができる。
【００２７】次に、本発明の新規ムタナーゼは上記
（１）〜（９）の特性を有するものであるが、以下これ
らについて詳述する。
（１）〜（９）の特性を有するものであるが、以下これ
らについて詳述する。
【００２８】まず、ムタナーゼとは、口腔連鎖球菌、特
にう蝕菌であるストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）やストレプ
トコッカス・ソブリナス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
ｓｏｂｒｉｎｕｓ）等によってシュークロースから生
成する不溶性グルカン（α−１，３−１，６−グルカ
ン）のα−１，６結合の側鎖を除去した不溶性のα−
１，３−グルカンであるムタンを基質とする酵素である
が、本発明の新規ムタナーゼは以下の理化学的性質を有
するものである。なお、下記性質において基質として用
いられているムタンは、公知の方法により得られるもの
であり、例えば、ストレプトコッカス・ミュータンス又
はストレプトコッカス・ソブリナスの培養により産生さ
れた不溶性グルカンのα−１，６−グルコシド結合をデ
キストラナーゼで切断して得られるものである。
にう蝕菌であるストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）やストレプ
トコッカス・ソブリナス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
ｓｏｂｒｉｎｕｓ）等によってシュークロースから生
成する不溶性グルカン（α−１，３−１，６−グルカ
ン）のα−１，６結合の側鎖を除去した不溶性のα−
１，３−グルカンであるムタンを基質とする酵素である
が、本発明の新規ムタナーゼは以下の理化学的性質を有
するものである。なお、下記性質において基質として用
いられているムタンは、公知の方法により得られるもの
であり、例えば、ストレプトコッカス・ミュータンス又
はストレプトコッカス・ソブリナスの培養により産生さ
れた不溶性グルカンのα−１，６−グルコシド結合をデ
キストラナーゼで切断して得られるものである。
【００２９】（１）酵素作用
ムタナーゼ（α−１，３−グルカナーゼ）にはそのグル
コシド結合の切断パターンから、末端より切断するエキ
ソ型とランダムに切断するエンド型が存在するが、本発
明のムタナーゼは、ムタンのα−１，３−グルコシド結
合をエンド型に分解する性質を有するものと推定され
る。
コシド結合の切断パターンから、末端より切断するエキ
ソ型とランダムに切断するエンド型が存在するが、本発
明のムタナーゼは、ムタンのα−１，３−グルコシド結
合をエンド型に分解する性質を有するものと推定され
る。
【００３０】即ち、１００μｌの３％ムタンに５０μｌ
の本発明のムタナーゼ又はムタンのα−１，３−グルコ
シド結合をエキソ型に分解するノボザイム２３４（商品
名：ノボ社製、トリコデルマ・ハルジアヌム菌由来）を
加えて、３７℃において２０時間保温して反応させ、そ
の後、反応生成物を遠心分離して得られる上清を薄層板
にスポットして展開（１−ブタノール：イソプロパノー
ル：水＝４：７：１）し、その薄層板に濃硫酸を噴霧
し、１００℃で５分間加熱することにより、上記反応に
より産生する糖類をＴＬＣによって分析する。この場
合、本発明のムタナーゼのムタン分解物は、ランダムに
分解され、グルコースより低い移動度の位置に帯状の長
いスポットが検出されるのに対し、ノボザイム２３４の
ムタン分解物は、グルコースのスポットを示すことか
ら、本発明のムタナーゼは基質をランダムに分解するエ
ンド型の酵素と推定される。
の本発明のムタナーゼ又はムタンのα−１，３−グルコ
シド結合をエキソ型に分解するノボザイム２３４（商品
名：ノボ社製、トリコデルマ・ハルジアヌム菌由来）を
加えて、３７℃において２０時間保温して反応させ、そ
の後、反応生成物を遠心分離して得られる上清を薄層板
にスポットして展開（１−ブタノール：イソプロパノー
ル：水＝４：７：１）し、その薄層板に濃硫酸を噴霧
し、１００℃で５分間加熱することにより、上記反応に
より産生する糖類をＴＬＣによって分析する。この場
合、本発明のムタナーゼのムタン分解物は、ランダムに
分解され、グルコースより低い移動度の位置に帯状の長
いスポットが検出されるのに対し、ノボザイム２３４の
ムタン分解物は、グルコースのスポットを示すことか
ら、本発明のムタナーゼは基質をランダムに分解するエ
ンド型の酵素と推定される。
【００３１】（２）基質特異性
本発明のムタナーゼはムタンをよく分解する。即ち、本
発明のムタナーゼ溶液（５００単位／ｍｌ）１００μｌ
に対し、表２に示す各基質溶液１００μｌ（１％溶液）
を３０分間反応させ、還元糖量を以下に示す酵素活性の
測定法に準じて検出すると表２に併記する結果を示す。
なお、表２における相対水解度は、ムタナーゼのムタン
分解に対する遊離の還元量を１００とした場合の各基質
の還元糖量の相対値を意味する。酵素活性の測定法 １００μｌのムタナーゼ溶液を１００μｌの３％ムタン
（０．１Ｍ酢酸緩衝液、ｐＨ５）に加えて、３５℃で１
０分間反応させる。この間、１００回／分で振とうす
る。０．４ｍｌのＤＮＳ溶液（４，６−ジニトロサリチ
ル酸）で反応を停止し、遠心分離を行い、上清を０．５
ｍｌ試験管に移して、ガラス玉を載せて１００℃で１０
分間加熱する。流水中で５分間冷却し、４ｍｌの蒸留水
で希釈してＯＤ530の吸光度を測定する。０〜９０μｇ
のグルコース標準液の検量線から力価を求める。１分間
に１μｇの還元糖を生じさせる酵素量を１単位と定義す
る。なお、以下の理化学的諸性質における酵素活性はこ
の方法により測定するものである。
発明のムタナーゼ溶液（５００単位／ｍｌ）１００μｌ
に対し、表２に示す各基質溶液１００μｌ（１％溶液）
を３０分間反応させ、還元糖量を以下に示す酵素活性の
測定法に準じて検出すると表２に併記する結果を示す。
なお、表２における相対水解度は、ムタナーゼのムタン
分解に対する遊離の還元量を１００とした場合の各基質
の還元糖量の相対値を意味する。酵素活性の測定法 １００μｌのムタナーゼ溶液を１００μｌの３％ムタン
（０．１Ｍ酢酸緩衝液、ｐＨ５）に加えて、３５℃で１
０分間反応させる。この間、１００回／分で振とうす
る。０．４ｍｌのＤＮＳ溶液（４，６−ジニトロサリチ
ル酸）で反応を停止し、遠心分離を行い、上清を０．５
ｍｌ試験管に移して、ガラス玉を載せて１００℃で１０
分間加熱する。流水中で５分間冷却し、４ｍｌの蒸留水
で希釈してＯＤ530の吸光度を測定する。０〜９０μｇ
のグルコース標準液の検量線から力価を求める。１分間
に１μｇの還元糖を生じさせる酵素量を１単位と定義す
る。なお、以下の理化学的諸性質における酵素活性はこ
の方法により測定するものである。
【００３２】
【表２】
【００３３】（３）至適作用ｐＨ
本発明のムタナーゼは、下記の各緩衝液で各ｐＨに調整
した３％ムタンに本発明のムタナーゼを５０単位／ｍｌ
となるように加え、３５℃で１０分間反応させ、活性を
測定し、至適ｐＨでの活性を１００％とするときの各ｐ
Ｈでの相対活性を求める場合、図１に示すように、ｐＨ
４．５において作用が至適であり、ｐＨ４〜６、特にｐ
Ｈ４〜５の範囲で高い活性を示す。緩衝液 ｐＨ３ 〜 ７： クエン酸−Ｎａ2ＨＰＯ4緩衝液 ｐＨ６ 〜 ８： ＮａＨ2ＰＯ4−Ｎａ2ＨＰＯ4緩衝液 ｐＨ９ 〜１０： グリシン−ＮａＯＨ 緩衝液 ｐＨ１０〜１１： Ｎａ2ＨＰＯ4−ＮａＯＨ 緩衝液
した３％ムタンに本発明のムタナーゼを５０単位／ｍｌ
となるように加え、３５℃で１０分間反応させ、活性を
測定し、至適ｐＨでの活性を１００％とするときの各ｐ
Ｈでの相対活性を求める場合、図１に示すように、ｐＨ
４．５において作用が至適であり、ｐＨ４〜６、特にｐ
Ｈ４〜５の範囲で高い活性を示す。緩衝液 ｐＨ３ 〜 ７： クエン酸−Ｎａ2ＨＰＯ4緩衝液 ｐＨ６ 〜 ８： ＮａＨ2ＰＯ4−Ｎａ2ＨＰＯ4緩衝液 ｐＨ９ 〜１０： グリシン−ＮａＯＨ 緩衝液 ｐＨ１０〜１１： Ｎａ2ＨＰＯ4−ＮａＯＨ 緩衝液
【００３４】（４）安定ｐＨ範囲
本発明のムタナーゼは、２０ｍＭの上記各緩衝液中に本
発明のムタナーゼを３００単位／ｍｌとなるように加
え、２５℃で２４時間インキュベートした後、活性を測
定し、インキュベート前の活性を１００％として各ｐＨ
での相対的活性を求めると図２に示すように、ｐＨ４〜
１０の範囲でほぼ１００％の残存活性率を示し、ｐＨ１
１の場合は７０％以上、ｐＨ３の場合には４０％以上の
残存活性率を示す。
発明のムタナーゼを３００単位／ｍｌとなるように加
え、２５℃で２４時間インキュベートした後、活性を測
定し、インキュベート前の活性を１００％として各ｐＨ
での相対的活性を求めると図２に示すように、ｐＨ４〜
１０の範囲でほぼ１００％の残存活性率を示し、ｐＨ１
１の場合は７０％以上、ｐＨ３の場合には４０％以上の
残存活性率を示す。
【００３５】（５）至適温度
本発明のムタナーゼは、基質となるムタンを溶液全体に
対して３％含有するｐＨ５の２０ｍＭ酢酸緩衝液に本発
明のムタナーゼ酵素を５０単位／ｍｌとなるように加
え、１０分間各温度で反応させ、３５℃での活性を１０
０％として各温度での相対活性を求める場合、図３に示
すように、温度５０℃において作用が至適である。
対して３％含有するｐＨ５の２０ｍＭ酢酸緩衝液に本発
明のムタナーゼ酵素を５０単位／ｍｌとなるように加
え、１０分間各温度で反応させ、３５℃での活性を１０
０％として各温度での相対活性を求める場合、図３に示
すように、温度５０℃において作用が至適である。
【００３６】（６）温度安定性
本発明のムタナーゼは、２０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５）
に透析した３００単位／ｍｌの本発明のムタナーゼを加
え、各温度で１０分間熱処理し、氷冷した後、熱処理前
の酵素活性を１００％として残存活性率を求める場合、
図４に示すように、５５℃で残存活性率は２２％となる
が、３０〜５０℃の範囲で１００％の残存活性率が示さ
れる。
に透析した３００単位／ｍｌの本発明のムタナーゼを加
え、各温度で１０分間熱処理し、氷冷した後、熱処理前
の酵素活性を１００％として残存活性率を求める場合、
図４に示すように、５５℃で残存活性率は２２％となる
が、３０〜５０℃の範囲で１００％の残存活性率が示さ
れる。
【００３７】（７）金属イオンの影響
本発明のムタナーゼは、５０ｍＭ酢酸緩衝液を使用して
本発明のムタナーゼが５０単位／ｍｌとなるように調製
し、これに各種金属塩を最終濃度が１ｍＭ濃度になるよ
うに添加し、３５℃で３０分間保温処理し、処理後の各
溶液の活性を測定し、金属塩無添加の活性を１００％と
して各種金属塩を添加した溶液における相対活性を求め
ると表３に示すように、水銀又は銀を添加することによ
り、本発明のムタナーゼの酵素活性が阻害されることが
認められる。
本発明のムタナーゼが５０単位／ｍｌとなるように調製
し、これに各種金属塩を最終濃度が１ｍＭ濃度になるよ
うに添加し、３５℃で３０分間保温処理し、処理後の各
溶液の活性を測定し、金属塩無添加の活性を１００％と
して各種金属塩を添加した溶液における相対活性を求め
ると表３に示すように、水銀又は銀を添加することによ
り、本発明のムタナーゼの酵素活性が阻害されることが
認められる。
【００３８】
【表３】
【００３９】（８）阻害剤の影響
本発明のムタナーゼは、５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５）
を使用して本発明のムタナーゼが５０単位／ｍｌとなる
ように調製し、これに各種阻害剤を最終濃度が１ｍＭ濃
度になるように添加し、３５℃で３０分間保温処理した
後に、各溶液の残存活性を測定し、阻害剤無添加の活性
を１００％として各溶液の相対活性を求めると表４に示
すように、ｐ−クロロマーキュリー安息香酸（ＰＣＭ
Ｂ）の添加により、酵素活性が特に強く阻害されること
が認められる。
を使用して本発明のムタナーゼが５０単位／ｍｌとなる
ように調製し、これに各種阻害剤を最終濃度が１ｍＭ濃
度になるように添加し、３５℃で３０分間保温処理した
後に、各溶液の残存活性を測定し、阻害剤無添加の活性
を１００％として各溶液の相対活性を求めると表４に示
すように、ｐ−クロロマーキュリー安息香酸（ＰＣＭ
Ｂ）の添加により、酵素活性が特に強く阻害されること
が認められる。
【００４０】
【表４】
【００４１】（９）分子量
本発明のムタナーゼは、５〜２０％ポリアクリルアミド
グラジエントゲル（バイオラッド（株）製のレディーメ
イドゲル）を用いて４０ｍＡで１時間泳動し、標準タン
パクとしてシグマ・マーカー・ハイレンジ（シグマ社
製）を用いるＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動
により精製した酵素タンパクの分子量を求める場合、分
子量は約１６万であると算定される。
グラジエントゲル（バイオラッド（株）製のレディーメ
イドゲル）を用いて４０ｍＡで１時間泳動し、標準タン
パクとしてシグマ・マーカー・ハイレンジ（シグマ社
製）を用いるＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動
により精製した酵素タンパクの分子量を求める場合、分
子量は約１６万であると算定される。
【００４２】なお、本発明のムタナーゼは、上記理化学
的性質を有する限りその産生方法は制限されず、上述し
たようにＭ７株等から産生されたものに限られることな
く、例えばＭ７株から産生されたムタナーゼに化学的修
飾又は遺伝子組換え等により、より安定且つ有効な酵素
に改質したものも含まれる。
的性質を有する限りその産生方法は制限されず、上述し
たようにＭ７株等から産生されたものに限られることな
く、例えばＭ７株から産生されたムタナーゼに化学的修
飾又は遺伝子組換え等により、より安定且つ有効な酵素
に改質したものも含まれる。
【００４３】本発明のムタナーゼは、上記のような理化
学的性質を備えるものであり、公知のムタナーゼと比較
すると、本発明のムタナーゼと上記ノボザイム２３４と
はムタンのα−１，３−グルコシド結合の切断パターン
が相違する。そして、本発明のムタナーゼの安定ｐＨ領
域はｐＨ４〜１０（２５℃、２４時間）で、分子量が約
１６万であるのに対し、上記ＢＣ−８菌由来のムタナー
ゼの安定ｐＨ領域はｐＨ７．０〜９．０であり、分子量
は１８万である。また、上述したように、本発明のムタ
ナーゼは分子量が約１６万であり、至適温度が５０℃、
至適ｐＨが４．５であるのに対し、上記ＦＥＲＭ−Ｐ４
７６５株由来のムタナーゼは分子量７万以上で至適温度
が３０〜４０℃、至適ｐＨが６．２〜６．７である。更
に、特開昭５２−３４９８０号、同５０−１４５５８３
号又は同４７−９７４３号公報に記載されたムタナーゼ
は、それぞれストレプトミセス属又はフラボバクテリウ
ム属に属する微生物又はトリコデルマ・ハルジアヌム、
ペニシリウム・リラシヌム、ペニシリウム・フニクロサ
ム、ペニシリウム・メリニイ及びペニシリウム・ヤンシ
ネルムにより産生されたものであり、例えば本発明のム
タナーゼは至適ｐＨが４．５、安定ｐＨ領域が４〜１０
であるのに対し、特開昭５２−３４９８０号公報のムタ
ナーゼは至適ｐＨが５．５、安定ｐＨ領域が５〜７、特
開昭５０−１４５５８３号公報のムタナーゼは至適ｐＨ
が６．０、安定ｐＨ領域が５．０〜７．０であり、その
理化学的性質は多くの点で相違する。なお、特開昭４７
−９７４３号公報に記載されたムタナーゼの理化学的性
質は不明である。
学的性質を備えるものであり、公知のムタナーゼと比較
すると、本発明のムタナーゼと上記ノボザイム２３４と
はムタンのα−１，３−グルコシド結合の切断パターン
が相違する。そして、本発明のムタナーゼの安定ｐＨ領
域はｐＨ４〜１０（２５℃、２４時間）で、分子量が約
１６万であるのに対し、上記ＢＣ−８菌由来のムタナー
ゼの安定ｐＨ領域はｐＨ７．０〜９．０であり、分子量
は１８万である。また、上述したように、本発明のムタ
ナーゼは分子量が約１６万であり、至適温度が５０℃、
至適ｐＨが４．５であるのに対し、上記ＦＥＲＭ−Ｐ４
７６５株由来のムタナーゼは分子量７万以上で至適温度
が３０〜４０℃、至適ｐＨが６．２〜６．７である。更
に、特開昭５２−３４９８０号、同５０−１４５５８３
号又は同４７−９７４３号公報に記載されたムタナーゼ
は、それぞれストレプトミセス属又はフラボバクテリウ
ム属に属する微生物又はトリコデルマ・ハルジアヌム、
ペニシリウム・リラシヌム、ペニシリウム・フニクロサ
ム、ペニシリウム・メリニイ及びペニシリウム・ヤンシ
ネルムにより産生されたものであり、例えば本発明のム
タナーゼは至適ｐＨが４．５、安定ｐＨ領域が４〜１０
であるのに対し、特開昭５２−３４９８０号公報のムタ
ナーゼは至適ｐＨが５．５、安定ｐＨ領域が５〜７、特
開昭５０−１４５５８３号公報のムタナーゼは至適ｐＨ
が６．０、安定ｐＨ領域が５．０〜７．０であり、その
理化学的性質は多くの点で相違する。なお、特開昭４７
−９７４３号公報に記載されたムタナーゼの理化学的性
質は不明である。
【００４４】本発明のムタナーゼは、歯磨（練り歯磨、
粉歯磨、液状歯磨）、洗口剤、義歯洗浄剤、うがい用錠
剤、歯肉マッサージクリーム、トローチ、口腔用パスタ
等の口腔用組成物に配合応用が可能であり、組成物１ｇ
に対して１〜５０，０００単位となるように、単独で又
はデキストラナーゼと併用して配合することにより、優
れた歯垢形成抑制作用及び歯垢除去能を示す。
粉歯磨、液状歯磨）、洗口剤、義歯洗浄剤、うがい用錠
剤、歯肉マッサージクリーム、トローチ、口腔用パスタ
等の口腔用組成物に配合応用が可能であり、組成物１ｇ
に対して１〜５０，０００単位となるように、単独で又
はデキストラナーゼと併用して配合することにより、優
れた歯垢形成抑制作用及び歯垢除去能を示す。
【００４５】
【実施例】以下、実施例及び比較例を示し、本発明を具
体的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限される
ものではない。 （１）ムタンの調製 まず、本実施例において使用するムタンの調製を以下に
ように行った。ストレプトコッカス・ソブリナス（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｏｂｒｉｎｕｓ）６７１５
株を２００ｍｌのＢＨＩ培地（ブレインハートインヒュ
ージョン（Ｂｒａｉｎ Ｈｅａｒｔ Ｉｎｆｕｓｉｏ
ｎ）オキソイド社製）に植菌し、３７℃で１日間の培養
を行った。得られた培養物を仕込み量４リットルの５％
シュークロースを含むＢＨＩ培地に接種し、３７℃で５
日間の培養を行った。この沈殿物を収穫し、５００ｍｌ
の１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に溶解し、室温で１時間
放置した。この遠心分離上清を塩酸で中和し、析出した
沈殿をろ過処理により回収した。更に、この回収物にデ
キストラナーゼを作用させ、α−１，６−グルコシド結
合を切断した。
体的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限される
ものではない。 （１）ムタンの調製 まず、本実施例において使用するムタンの調製を以下に
ように行った。ストレプトコッカス・ソブリナス（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｏｂｒｉｎｕｓ）６７１５
株を２００ｍｌのＢＨＩ培地（ブレインハートインヒュ
ージョン（Ｂｒａｉｎ Ｈｅａｒｔ Ｉｎｆｕｓｉｏ
ｎ）オキソイド社製）に植菌し、３７℃で１日間の培養
を行った。得られた培養物を仕込み量４リットルの５％
シュークロースを含むＢＨＩ培地に接種し、３７℃で５
日間の培養を行った。この沈殿物を収穫し、５００ｍｌ
の１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に溶解し、室温で１時間
放置した。この遠心分離上清を塩酸で中和し、析出した
沈殿をろ過処理により回収した。更に、この回収物にデ
キストラナーゼを作用させ、α−１，６−グルコシド結
合を切断した。
【００４６】（２）ムタナーゼの調製
次に、本実施例のムタナーゼを以下のようにして調製し
た。まず、培地を以下の培養組成で調製した。培養組成 イノシトール １０ｇ／リットル ムタン １ｇ／リットル ペプトン ５ｇ／リットル 酵母エキス ３ｇ／リットル ＫＨ2ＰＯ4 ２ｇ／リットル ＮＨ4ＮＯ3 ２ｇ／リットル ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．３ｇ／リットル （ｐＨ７．０）
た。まず、培地を以下の培養組成で調製した。培養組成 イノシトール １０ｇ／リットル ムタン １ｇ／リットル ペプトン ５ｇ／リットル 酵母エキス ３ｇ／リットル ＫＨ2ＰＯ4 ２ｇ／リットル ＮＨ4ＮＯ3 ２ｇ／リットル ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．３ｇ／リットル （ｐＨ７．０）
【００４７】上述したスクリーニング法により得られた
Ｍ７株を上記培地に接種し、３０℃で２日間培養した
後、培養液を８０００ｒｐｍで１５分間遠心分離して上
清を得、これを限外濾過装置（アミコン社製）を用いて
濃縮し、更に、硫酸アンモニウムを９０％飽和になるよ
うに加え、塩析を行った。次いで、１０ｍＭのトリス塩
酸緩衝液（ｐＨ８）に溶解し、一晩透析した。１０ｍＭ
のトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８）で平衡化した陰イオン交
換クロマトグラフィーＤＥ５２（商品名：ワットマン社
製）に透析後の上記溶液を注ぎ込み、上記緩衝液で非吸
着画分として得られる本実施例のムタナーゼ（以下、Ｍ
７酵素という）を含む溶出液を得た。次いで、上記溶出
液を１０ｍＭの酢酸緩衝液（ｐＨ４．８）で透析し、１
０ｍＭの酢酸緩衝液（ｐＨ４．８）で平衡化した陽イオ
ン交換クロマトグラフィーＣＭ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ
６５０Ｍ（商品名：東ソー社製）に透析後の上記溶出液
を注ぎ込み、Ｍ７酵素を吸着させた後、０〜０．２Ｍの
塩化ナトリウムを含む１０ｍＭの酢酸緩衝液（ｐＨ４．
８）で吸着したＭ７酵素をリニアグラジエントにより溶
出した。
Ｍ７株を上記培地に接種し、３０℃で２日間培養した
後、培養液を８０００ｒｐｍで１５分間遠心分離して上
清を得、これを限外濾過装置（アミコン社製）を用いて
濃縮し、更に、硫酸アンモニウムを９０％飽和になるよ
うに加え、塩析を行った。次いで、１０ｍＭのトリス塩
酸緩衝液（ｐＨ８）に溶解し、一晩透析した。１０ｍＭ
のトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８）で平衡化した陰イオン交
換クロマトグラフィーＤＥ５２（商品名：ワットマン社
製）に透析後の上記溶液を注ぎ込み、上記緩衝液で非吸
着画分として得られる本実施例のムタナーゼ（以下、Ｍ
７酵素という）を含む溶出液を得た。次いで、上記溶出
液を１０ｍＭの酢酸緩衝液（ｐＨ４．８）で透析し、１
０ｍＭの酢酸緩衝液（ｐＨ４．８）で平衡化した陽イオ
ン交換クロマトグラフィーＣＭ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ
６５０Ｍ（商品名：東ソー社製）に透析後の上記溶出液
を注ぎ込み、Ｍ７酵素を吸着させた後、０〜０．２Ｍの
塩化ナトリウムを含む１０ｍＭの酢酸緩衝液（ｐＨ４．
８）で吸着したＭ７酵素をリニアグラジエントにより溶
出した。
【００４８】更に、０．５Ｍ硫酸アンモニウム溶液を含
む５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）により平衡化し
た疎水クロマトグラフィーに、Ｍ７酵素溶液とこれと同
体積の１Ｍ硫酸アンモニウム溶液とを０．１Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７．０）に混合したものを注ぎ込み、０．５
Ｍから０Ｍに硫酸アンモニウム濃度を下げることにより
Ｍ７酵素を溶出した。得られた活性画分を１０ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ７．０）で透析することにより、Ｍ７酵
素を精製した。
む５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）により平衡化し
た疎水クロマトグラフィーに、Ｍ７酵素溶液とこれと同
体積の１Ｍ硫酸アンモニウム溶液とを０．１Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７．０）に混合したものを注ぎ込み、０．５
Ｍから０Ｍに硫酸アンモニウム濃度を下げることにより
Ｍ７酵素を溶出した。得られた活性画分を１０ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ７．０）で透析することにより、Ｍ７酵
素を精製した。
【００４９】このようにして精製されたＭ７酵素を用い
て上記の理化学的性質を確認したところ、本発明のムタ
ナーゼの上記理化学的性質を有することが確認された。
この精製されたＭ７酵素を以下の酵素特性評価に使用し
た。
て上記の理化学的性質を確認したところ、本発明のムタ
ナーゼの上記理化学的性質を有することが確認された。
この精製されたＭ７酵素を以下の酵素特性評価に使用し
た。
【００５０】（３）市販酵素との比較及びカルシウムイ
オンの影響 Ｍ７酵素と現在市販されているムタナーゼを含む混合酵
素である上記ノボザイム２３４（比較例）の至適ｐＨ及
びｐＨ安定性を上記と同様にして測定した。結果を図
５、６に示す。図５、６によれば、Ｍ７酵素はノボザイ
ム２３４に比較してより広いｐＨ領域において安定であ
ることが認められる。
オンの影響 Ｍ７酵素と現在市販されているムタナーゼを含む混合酵
素である上記ノボザイム２３４（比較例）の至適ｐＨ及
びｐＨ安定性を上記と同様にして測定した。結果を図
５、６に示す。図５、６によれば、Ｍ７酵素はノボザイ
ム２３４に比較してより広いｐＨ領域において安定であ
ることが認められる。
【００５１】また、Ｍ７酵素とノボザイム２３４、及び
これらにそれぞれ５ｍＭのカルシウムイオンを添加した
場合の至適温度及び温度安定性を上記と同様にして測定
した。結果を図７、８に示す。図７、８によれば、Ｍ７
酵素はノボザイム２３４に比較して熱安定性に優れてい
ることが認められる。また、Ｍ７酵素はカルシウムイオ
ンの添加により熱安定性が向上するのに対し、ノボザイ
ム２３４はカルシウムイオンを添加しても、その温度に
対する挙動はほとんど変化せず、カルシウムイオンを添
加したＭ７酵素はノボザイム２３４に比較して非常に優
れた熱安定性を有することが認められる。
これらにそれぞれ５ｍＭのカルシウムイオンを添加した
場合の至適温度及び温度安定性を上記と同様にして測定
した。結果を図７、８に示す。図７、８によれば、Ｍ７
酵素はノボザイム２３４に比較して熱安定性に優れてい
ることが認められる。また、Ｍ７酵素はカルシウムイオ
ンの添加により熱安定性が向上するのに対し、ノボザイ
ム２３４はカルシウムイオンを添加しても、その温度に
対する挙動はほとんど変化せず、カルシウムイオンを添
加したＭ７酵素はノボザイム２３４に比較して非常に優
れた熱安定性を有することが認められる。
【００５２】（４）酵素作用特性
ムタンを含む寒天プレートに直径３ｍｍ、深さ１ｍｍの
穴をあけ、初期値１００単位のＭ７酵素又はノボザイム
２３４を２倍づつ希釈することを繰り返した酵素サンプ
ル、即ち、１、２、４、８倍に希釈した各酵素サンプル
を５μｌ注入し、３０℃で２４時間保温した後の各酵素
サンプルによる透明な分解帯を調べた。結果を表５に示
す。
穴をあけ、初期値１００単位のＭ７酵素又はノボザイム
２３４を２倍づつ希釈することを繰り返した酵素サンプ
ル、即ち、１、２、４、８倍に希釈した各酵素サンプル
を５μｌ注入し、３０℃で２４時間保温した後の各酵素
サンプルによる透明な分解帯を調べた。結果を表５に示
す。
【００５３】
【表５】
【００５４】表５によれば、Ｍ７酵素は同じ酵素単位の
ノボザイム２３４よりも高いムタン分解能力を示し、ム
タンをエンド型に分解するムタナーゼのほうがエキソ型
のものより分解効率がよいことを示唆するものと認めら
れる。
ノボザイム２３４よりも高いムタン分解能力を示し、ム
タンをエンド型に分解するムタナーゼのほうがエキソ型
のものより分解効率がよいことを示唆するものと認めら
れる。
【００５５】（５）歯垢除去能の有効性評価
ストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃ
ｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）１０４４９株をＢＨＩ（Ｂ
ｒａｉｎ Ｈｅａｒｔ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ）培地にて３
７℃で一晩静置し、前培養液を調製した。この前培養液
１００μｌを１％シュークロースを含むＢＨＩ培地３ｍ
ｌ（Ｍ２試験管）に添加し、試験管を傾け、３７℃で一
晩静置培養して、試験管壁に歯垢を形成させた。その
後、培地を捨て、試験管内を蒸留水で２回洗浄し、３ｍ
ｌの人工唾液（０．８５ｍＭ ＣａＣｌ2／６．２２ｍ
Ｍ ＫＨ2ＰＯ4／５０ｍＭ ＮａＣｌ／０．１５ｍＭ
ＭｇＣｌ2（ｐＨ５．９４））を添加した後、表６に示
す酵素を各１ｍｌ加え、３７℃で３分間保温した。その
後、酵素液を捨て、試験官内を蒸留水で２回洗浄した
後、更に４ｍｌの蒸留水を添加し、超音波処理を行った
後の各溶液の濁度測定を行い、酵素無添加のものを対照
とし、各酵素溶液の歯垢除去能を計算した。結果を表６
に示す。
ｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）１０４４９株をＢＨＩ（Ｂ
ｒａｉｎ Ｈｅａｒｔ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ）培地にて３
７℃で一晩静置し、前培養液を調製した。この前培養液
１００μｌを１％シュークロースを含むＢＨＩ培地３ｍ
ｌ（Ｍ２試験管）に添加し、試験管を傾け、３７℃で一
晩静置培養して、試験管壁に歯垢を形成させた。その
後、培地を捨て、試験管内を蒸留水で２回洗浄し、３ｍ
ｌの人工唾液（０．８５ｍＭ ＣａＣｌ2／６．２２ｍ
Ｍ ＫＨ2ＰＯ4／５０ｍＭ ＮａＣｌ／０．１５ｍＭ
ＭｇＣｌ2（ｐＨ５．９４））を添加した後、表６に示
す酵素を各１ｍｌ加え、３７℃で３分間保温した。その
後、酵素液を捨て、試験官内を蒸留水で２回洗浄した
後、更に４ｍｌの蒸留水を添加し、超音波処理を行った
後の各溶液の濁度測定を行い、酵素無添加のものを対照
とし、各酵素溶液の歯垢除去能を計算した。結果を表６
に示す。
【００５６】
【表６】
【００５７】表６の結果によれば、Ｍ７酵素は、ストレ
プトコッカス・ミュータンス１０４４９株の作る歯垢に
対し、非常に優れた歯垢除去能を示すことが認められ
る。
プトコッカス・ミュータンス１０４４９株の作る歯垢に
対し、非常に優れた歯垢除去能を示すことが認められ
る。
【００５８】なお、Ｍ７酵素は、一般的な組成の練歯
磨、粉歯磨、液状歯磨、洗口剤、義歯洗浄剤、うがい用
錠剤、歯肉マッサージクリーム、トローチ、口腔用パス
タに各組成物１ｇに対して５００単位となるようにＭ７
酵素単独で又はデキストラナーゼと併用して配合した製
剤中において、優れた有効性を示した。
磨、粉歯磨、液状歯磨、洗口剤、義歯洗浄剤、うがい用
錠剤、歯肉マッサージクリーム、トローチ、口腔用パス
タに各組成物１ｇに対して５００単位となるようにＭ７
酵素単独で又はデキストラナーゼと併用して配合した製
剤中において、優れた有効性を示した。
【００５９】
【発明の効果】本発明のムタナーゼ産生微生物によれ
ば、優れた歯垢形成抑制効果を有するのみならず、歯磨
等の口腔用組成物の製品として充分に安定的に配合する
ことができる新規のムタナーゼを得ることができる。本
発明のムタナーゼは、デキストラナーゼと併用すること
なく、単独でも非常に優れた歯垢除去効果を示すもので
あり、また、カルシウムイオンを添加することにより、
非常に優れた熱安定性を有するものとなる。
ば、優れた歯垢形成抑制効果を有するのみならず、歯磨
等の口腔用組成物の製品として充分に安定的に配合する
ことができる新規のムタナーゼを得ることができる。本
発明のムタナーゼは、デキストラナーゼと併用すること
なく、単独でも非常に優れた歯垢除去効果を示すもので
あり、また、カルシウムイオンを添加することにより、
非常に優れた熱安定性を有するものとなる。
【図１】本発明のムタナーゼの至適ｐＨを示すグラフで
ある。
ある。
【図２】本発明のムタナーゼのｐＨ安定性を示すグラフ
である。
である。
【図３】本発明のムタナーゼの至適温度を示すグラフで
ある。
ある。
【図４】本発明のムタナーゼの温度安定性を示すグラフ
である。
である。
【図５】本実施例のムタナーゼと比較例のムタナーゼと
の至適ｐＨを比較するグラフである。
の至適ｐＨを比較するグラフである。
【図６】本実施例のムタナーゼと比較例のムタナーゼと
のｐＨ安定性を比較するグラフである。
のｐＨ安定性を比較するグラフである。
【図７】本実施例のムタナーゼと比較例のムタナーゼと
の至適温度、及びそれらのカルシウムイオン添加の影響
を比較するグラフである。
の至適温度、及びそれらのカルシウムイオン添加の影響
を比較するグラフである。
【図８】本実施例のムタナーゼと比較例のムタナーゼと
の温度安定性、及びそれらのカルシウムイオン添加の影
響を比較するグラフである。
の温度安定性、及びそれらのカルシウムイオン添加の影
響を比較するグラフである。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ
Ｃ１２Ｒ 1:07）
(72)発明者 下津浦 勇雄
東京都墨田区本所１丁目３番７号 ライ
オン株式会社内
(56)参考文献 特開 昭63−301788（ＪＰ，Ａ)
米国特許5290916（ＵＳ，Ａ)
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａ
ｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ
（1980），Ｖｏｌ．114，Ｎｏ．１，ｐ.
197−208
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｅｒｍｅｎ
ｔ Ｂｉｏｅｎｇ．（1997），Ｖｏｌ.
83，Ｎｏ．６，ｐ．593−595
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
C12N 1/00
C12N 9/00
C12P 21/00
ＢＩＯＳＩＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＷＰＩＤ
Ｓ（ＳＴＮ)
ＣＡ（ＳＴＮ)
ＪＳＴＰｌｕｓ（ＪＯＩＳ)
Claims (3)
- 【請求項１】 バチルス・エスピー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｐ．）Ｍ７株（生命研菌寄第１４８３５号）であ
り、下記菌学的性質を有するムタナーゼ産生微生物。 （Ｉ）グラム染色性が陽性であるが脱色されやすい。 （ＩＩ）周鞭毛をもち、運動性あり。 （ＩＩＩ）プロテアーゼ産生が陰性である。 （ＩＶ）寒天培地において、２％塩化ナトリウム存在下
では生育しない。 （Ｖ）カタラーゼは陰性である。 （ＶＩ）ＧＣ含量は５６％である。 （ＶＩＩ）下記の理化学的性質を有するムタナーゼを産
生する。 （１）作用：ムタンのα−１，３−グルコシド結合を分
解する性質を有する。 （２）基質特異性：ムタンをよく分解する。 （３）至適作用ｐＨ：ムタンを基質として３５℃で１０
分間作用させる場合、ｐＨ４．５において作用が至適で
あり、ｐＨ４〜５の範囲で高い活性を示す。 （４）安定ｐＨ範囲：２５℃で２４時間保温する場合、
ｐＨ４〜１０の範囲で安定である。 （５）至適温度：ムタンを基質としてｐＨ５で反応させ
る場合、温度５０℃において作用が至適である。 （６）温度安定性：ｐＨ５で１０分間熱処理した場合、
５０℃以下で活性は安定である。 （７）金属イオンの影響：ムタンを基質とする場合、水
銀又は銀により作用が阻害される。 （８）阻害剤の影響：ムタンを基質とする場合、ｐ−ク
ロロマーキュリー安息香酸によって阻害される。 （９）分子量：ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳
動による分子量は約１６万である。 - 【請求項２】 請求項１記載のムタナーゼ産生微生物の
菌株を培養した培養物から採取されてなり、下記の理化
学的性質を有することを特徴とするムタナーゼ。 （１）作用：ムタンのα−１，３−グルコシド結合を分
解する性質を有する。 （２）基質特異性：ムタンをよく分解する。 （３）至適作用ｐＨ：ムタンを基質として３５℃で１０
分間作用させる場合、ｐＨ４．５において作用が至適で
あり、ｐＨ４〜５の範囲で高い活性を示す。 （４）安定ｐＨ範囲：２５℃で２４時間保温する場合、
ｐＨ４〜１０の範囲で安定である。 （５）至適温度：ムタンを基質としてｐＨ５で反応させ
る場合、温度５０℃において作用が至適である。 （６）温度安定性：ｐＨ５で１０分間熱処理した場合、
５０℃以下で活性は安定である。 （７）金属イオンの影響：ムタンを基質とする場合、水
銀又は銀により作用が阻害される。 （８）阻害剤の影響：ムタンを基質とする場合、ｐ−ク
ロロマーキュリー安息香酸によって阻害される。 （９）分子量：ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳
動による分子量は約１６万である。 - 【請求項３】 請求項１記載のムタナーゼ産生微生物の
菌株を培養した培養物からムタナーゼを採取することを
特徴とするムタナーゼの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14265395A JP3516105B2 (ja) | 1995-05-17 | 1995-05-17 | ムタナーゼ産生微生物及びムタナーゼ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14265395A JP3516105B2 (ja) | 1995-05-17 | 1995-05-17 | ムタナーゼ産生微生物及びムタナーゼ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08308559A JPH08308559A (ja) | 1996-11-26 |
| JP3516105B2 true JP3516105B2 (ja) | 2004-04-05 |
Family
ID=15320372
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14265395A Expired - Fee Related JP3516105B2 (ja) | 1995-05-17 | 1995-05-17 | ムタナーゼ産生微生物及びムタナーゼ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3516105B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3440694B2 (ja) * | 1996-05-16 | 2003-08-25 | ライオン株式会社 | 口腔用組成物 |
-
1995
- 1995-05-17 JP JP14265395A patent/JP3516105B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｅｒｍｅｎｔ Ｂｉｏｅｎｇ．（１９９７），Ｖｏｌ．８３，Ｎｏ．６，ｐ．５９３−５９５ |
| Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（１９８０），Ｖｏｌ．１１４，Ｎｏ．１，ｐ．１９７−２０８ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH08308559A (ja) | 1996-11-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3440694B2 (ja) | 口腔用組成物 | |
| US4353891A (en) | Mutanase | |
| JPH05219942A (ja) | 細菌クロストリジウム・ヒストリチカムの変異株、その製造法及びその用途 | |
| JPS6236671B2 (ja) | ||
| OKUSHIMA et al. | Molecular cloning and nucleotide sequencing of the Arthrobacter dextranase gene and its expression in Escherichia coli and Streptococcus sanguis | |
| US5290916A (en) | Purified glucanase enzymes | |
| NO139590B (no) | Tannpleiemiddel for aa hindre dannelse av tannbelegg | |
| JP3516104B2 (ja) | ムタナーゼ産生微生物及びムタナーゼ | |
| JP3516105B2 (ja) | ムタナーゼ産生微生物及びムタナーゼ | |
| JPH0937773A (ja) | ムタナーゼ産生微生物及びムタナーゼ | |
| US3912594A (en) | Method of producing dextranase | |
| JP2676453B2 (ja) | アルカリイソアミラーゼ及びそれを生産する微生物並びに該アルカリイソアミラーゼの製造方法 | |
| KR0175495B1 (ko) | 치아우식증 원인세균인 스트렙토코커스 뮤탄스의 세포벽을 용해하는 용해효소와 그의 생산 미생물 | |
| JP3055041B2 (ja) | α−１，２−マンノシダーゼ、その製造方法およびその生産菌 | |
| JP2959777B2 (ja) | 新規エンドデキストラナーゼ、その製造方法及び本酵素を用いたイソマルトオリゴ糖の製造方法 | |
| JP3959439B2 (ja) | 耐熱性トレハラーゼと、その製造法 | |
| JPS63301788A (ja) | α−１，３−グルカナーゼの製造方法 | |
| JP3027449B2 (ja) | 新規シクロマルトデキストリナーゼ、その製造法及び該酵素を生産する微生物 | |
| JPH10229876A (ja) | α−１，３−多分岐デキストラン水解酵素、その製造法及び環状イソマルトオリゴ糖の製造法 | |
| JP2894292B2 (ja) | ガラクタナーゼｓ−２及びこれを産生するバチルスエスピーｓ−２ | |
| KR0130541B1 (ko) | 글루카네이즈를 생산하는 스트렙토마이세스 속 미생물 | |
| JPS63185381A (ja) | デキストラナ−ゼの製造方法 | |
| Jung et al. | Purification and Characterization of a Bacteriolytic Enzyme from Alkalophilic Bacillus sp. | |
| JP2623509B2 (ja) | 分岐マルトオリゴ糖の製造法 | |
| JPH07213282A (ja) | 耐熱性α−１，３−グルカナーゼの製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20031224 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Effective date: 20040106 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Year of fee payment: 5 Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090130 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090130 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100130 Year of fee payment: 6 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |