JPH0363203A - 抗酵母剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、黴、酵母等の真菌類に非常に有効な抗真菌製
剤を提供することにある。

本発明は、真菌に対する抗菌スペクトルが広く、その為
、利用分野も食品、化粧品、塗料、皮靴、衣類等非常に
適用範囲の広い抗真菌製剤を提供することにある。

（従来の技術及び問題点） 高温多湿の日本の気候は元々真菌類の生育に適している
が、生活形態の変化により生活環境での微生物汚染、例
えば、住居の壁、内装材、塗料等への黴の着生、皮靴、
衣類それに化粧品、食品等の損傷とあらゆる物品、空間
に入り込み災害を拡大している。

これに対する抗真菌剤として、内装材、塗料等において
は有機水銀化合物、有機銅化合物等の金属を含む有機化
合物が広く用いられてきた。近年、低毒性の薬剤の要求
により２−　（４−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）ｂｅｎｚｉｍ
ｉｄａｚｏｌｅも使用されている。また、食品には安息
香酸ナトリウム、ソルビン酸カリウムそれに最近、蟹殻
等の成分であるキトサンも抗真菌製剤として使用されて
いる。

しかし、従来の抗真菌剤は、一部の物質を除いて毒性が
ありその適用濃度、範囲も限定されているものが多い。

従って、有効性の高い、より安全な抗真菌剤の開発が望
まれている。ポリガラクトサミン（α−１，４ガラクト
サミノガラクタン）は微生物の生産する多糖類であり、
その安全性等については、マウスに対する急性経口毒性
、急性経口毒性等の確認の結果全く異常のないことが確
認されている。

しかしながら、ポリガラクトサミン（α−１，４ガラク
トサミノガラクタン）は自然界では非常に珍しく、不完
全菌由来のＰＦ−１０１及びＰＦ−１０２が知られてい
る程度である（特公昭５６−１２６３９号、特開昭６２
−２９４０９３号）。

また、一般に多糖類は低分子化することにより物理化学
的性質が変わり、高分子の状態より取扱い−が容易にな
ったり、生理活性が顕著になったりする等のことが知ら
れている０本ポリガラクトサミンに於いても、低分子化
する方法として酸やアルカリで処理する方法だけでなく
酵素分解による方法、即ちシュードモナス属菌の生産す
るポリガラクトサミン分解酵素についても既に明らかに
されている（特開昭６３−１６４８８４号、特開昭６３
−１６４８８５号）。

これらの技術を基礎にして、毒性がなく、抗菌スペクト
ルが広く、適用範囲の広い抗真菌剤の開発が切望されて
いる。

（問題点を解決するための手段） 本発明の目的は、より安全性の高い抗真菌剤を提供する
ことにある。

本発明はα−１，４結合のガラクトサミンを有効成分と
する抗真菌剤に関するものである０本発明に於ける抗真
菌剤の有効成分であるα−１，４結合のガラクトサミン
は、不完全菌ベニシロマイセスｌ−１（微工研寄第１１
８０　ＦＥＲＮ　ＢＰ−１１８０）を培養することによ
り、ＰＦ−１０１及びＰＦ−１０２として得ることが出
来る。また、ＰＦ−１０１，ＰＦ−１０２をシュードモ
ナス属菌　Ｈ８８１（微工研菌寄第８９５５）の生産す
るポリガラクトサミン分解酵素で加水分解することによ
り、または、酸加水分解することにより得た分解物を限
外濾過膜で分画することにより各々、分画分子量５万以
上、１万以上〜５万未満、１万未満のα−ｌ、４結合の
ポリガラクトサミンとして得ることが出来る。

本発明の抗真菌剤としては、ＰＦ−１０１，ＰＦ−１０
２、これらの分解物及び分画物などα−１，４結合のガ
ラク」サミンはすべて、単独もしくは混合して使用でき
るものである。

次に、α−１，４ポリガラクトサミン、ＰＦ−１０１及
びＰＦ−１０２の生産菌について説明する。

和歌山系の腐植層より分離した不完全菌Ｉ−１菌はベニ
シロマイセス属（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃａｓ）　Ｌニー
、属するものと認められ、ベニシロマイセスＩ−１と命
名され、該菌株は微工研にＦＥＲＭ　ＢＰ−１１８０と
して寄託されている。

次にベニシロマイセスＩ−１（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅ
ｓ　ｌ−１）の菌学的性質を示す。

（ａｌ顕微鏡下での観察 本菌は分生胞子柄（ｃｏｎｉｄｉｏｐｈｏｒｅ）を欠き
１分生胞子は栄養菌糸または栄養菌糸束から直接生えて
いる一本一本独立したフィアライド（ｐｈｉａｌｉｄｅ
）の先端に長い連鎖をなして派生している。フィアライ
ドは半透明で２０〜４５μの長さを持ち、基部はやや太
＜　（１，０〜１．５μ）先端はやや先細り（０，５〜
１．０μ）で、直線的あるいは先端部がやや湾曲したも
のもある０分生胞子は電子顕微鏡により葉巻タバコ型（
あるいは桿菌型）であり、そのサイズは４〜６×１．０
〜１．４μである。

分生胞子は普通２５〜３５個の連鎖をなしているが、ま
れにはもつと長鎖のものも観察される。この分生胞子の
連鎖は非常にもろく、−寸したショックで簡単にくずれ
る。

［ｂ）各培地における生育状態（２５℃平面培養）（１
〉ツアペック寒天培地 コロニーの生育は良＜１４日０で直径約４５ｍｍに達す
る。白色のビロード状から羊毛状の菌叢で、中央部に房
状に盛上りがあり、コロニー周辺は円形である。水滴・
シワ共になし。コロニー裏面は培養初期白色、培養後期
中央部が淡黄色を呈する。

寒天への色素産生は認められない。

（２）麦芽寒天培地 コロニーの生育は良く、１４日目で直径約５４ｍｍ、コ
ロニー周辺は円形にならず梅林状を呈する。

菌叢の中央部は白色だが、周辺部は淡黄色を呈する。菌
叢の厚さは中程度で、中央部はやや凹状である６水滴・
シワ共に認められず、コロニー裏面は全面淡黄色を呈す
。寒天培地に淡黄色色素の産生あり。

（３）ポテトデキストロース寒天培地 コロニーの生育は非常に良く１４日目に直径約６０ｍｍ
に達する。白色のビロード状乃至羊毛状の可成り厚い菌
叢を形成し、中央部はやや盛上り、亜中央部は淡い黄色
を呈するやや薄い菌叢、その周辺部は白色の比較的厚い
菌叢となる６表直にシワはないが数個のうすい褐色の水
滴が認められる。コロニー裏面に放射状の数本のシワが
あり、同心円状の黄色の濃淡が認められる。寒天への淡
黄色色素の拡散がある。

（４）　ＹｐＳｓ寒天培地（組成スターチ１．５％、イ
ーストエキス０．４％、　Ｋ、ＨＰｏ、　０．１％、Ｍ
ｇ５０．０．０５％、寒天２％） コロニーの生育は良好で１４日目に直径約５Ｏｎ＋ｎ＋
に達する。白色の全体にふっくらとした羊毛状の厚い菌
叢である。水滴・シワなし。コロニー裏面は特記すべき
特徴なし。色素産生なし。

（５）　ＮＹ２゜寒天培地（組成グルコース２０％、ポ
リペプトン０．５％、イーストエキス０．３％、モルト
エキス０．３％、寒天２％） コロニーの生育はあまり良くなく１４日目で直径約６０
ｍｍ＊である。気菌糸はあまりたたず細かいシワが多く
、周辺部は淡黄色、中央部は淡褐色を呈する。コロニー
の裏面は淡黄色で、細かいシワがある１色素産生なし。

ベニシロマイセスＩ−１は通常の糸状菌の液体培養方法
で培養することができる。

ベニシロマイセスＩ−１の胞子または菌糸を液体培地に
接種し、好気的に培養する。炭素源としてはブドウ糖、
麦芽糖、蔗糖、澱粉、廃糖蜜等を使用することが出来る
が好ましくはブドウ糖を用いるのが良い。窒素源として
は硫酸アンモニウム、硝酸ソーダなどの無機窒素、ペプ
トン、酵母エキスなどの有機窒素が使用出来る。

培養温度は本凝集活性物質生産菌が凝集活性物質を生産
する範囲内で適宜変更し得るが通常は２０〜２５℃で培
養することが好ましい。培養時間は培養条件によって異
なるが、通常４〜５日程度であり、凝集活性物質が最高
に達する時間を見積って適当な時間に終了すればよい、
ここで培養濾液を減圧濃縮、限外濾過等の方法で濃縮し
て濃縮液としてエタノール等の有機溶媒を加えて沈澱す
れば、特公昭５６−１２６３９号公報に記載のＰＦ−１
０１が得られるのである。

また、ＰＦ−１０１生産菌であるベニシロマイセス１−
１を培養し、濾過し、得られた培養濾液または濾液濃縮
液に各種塩を添加し、沈澱が生じない場合は必要によっ
てはアルカリを添加してＰＲを７〜９として、析出させ
、析出物を分離し、水洗し、これを希酸水溶液に溶解し
、再び塩を添加するか。

アルカリ等の添加によってＰＨを７〜９として、析出さ
せて、特開昭６２−２９４０９３号公報に記載のＰＦ−
１０２を得ることができる。

ＰＦ−１０１の理化学的性質は次の通りである。

（１）凝集活性；きわめて微量で懸濁微細物を凝集する
。

（２）凝集活性ＰＨ範囲；２〜９で安定に凝集活性を示
す。

（３）凝集活性温度範囲；０〜１００℃で凝集活性が認
められる。

（４）凝集活性イオン強度；炭酸イオンおよびＦｅ、　
（５０４）３　により凝集活性が阻害されるがそれ以外
の各種イオン及びイオン強度によって凝集活性に影響は
なく、ＮａＣ１，に、ＳＯ，で１Ｍまで全く影響を与え
ない。

（５）元素分析：窒素５．４４％、炭素３７．４５％、
水素６．３％、リン０．２７％。

（６）紫外部吸収スペクトル；第１図に示すとおり。

（７）赤外部吸収スペクトル；第２図に示すとおり。

（８）呈色反応； ニンヒドリン反応 キサントプロティン反応 エーリッヒ反応　　　　　　　　　− モーリッシュ反応　　　　　　　　十 フェノール硫酸反応　　　　　　　十 しローゼンテスト　　　　　　　　− （９）酸による加水分解；６Ｎ塩酸、１１０℃、２００
時間分解よりガラクトサミンとアンモニアが得られ、　
４Ｎ塩酸、１００℃、１６時間分解により標品の７４％
のガラクトサミンと少量のアンモニアが得られる。

（１０）電気泳動；密度勾配等電点電気泳動により単一
物質として確認され１等電点（ｐＩ）は８．５である。

（１１）物質の色；淡黄白色 （１２）塩基性、酸性、中性の区別；等電点８．５でや
や塩基性を呈す、　　（０，１％水溶液のｐｎは６．２
．脱イオン水のｐＨは５．８） （１３）溶剤に対する溶解性； ・熱水に可溶、溶解後冷却しても析出しない。

・冷水に難溶。

・希酸、希アルカリに難溶。

・アルコール類、アセトン、クロロホルム、ベンゼン、
酢酸エチル、ｎ−ペンタンに不溶。

ＰＦ−１０２の理化学的性質は次の通りである。

（１）凝集活性；きわめて微量で懸濁微細物を凝集する
。

（２）　ＩＩ集活性ｐＨ１ｊｉ囲５ＰＨ２〜９で安全に
凝集活性を示す。

（３）凝集活性温度範囲；０〜１００℃で凝集活性が認
められる。

（４）　１ｉ集活性イオン強度；炭酸およびＦａｘ　（
ＳＯ４）３　により凝集活性が阻害されるがそれ以外の
各種イオン及びイオン強度によって凝集活性に影響はな
く、ＮａＣ１，に、ＳＯ４でＩＭまで全く影響を与えな
い。

（５）元素分析：窒素８．６４％、炭素４２．８０％、
水素６．８７％ 一般式：　（Ｃ，Ｈ，、Ｎ０４−ＸＨ，０）ｎ（６）紫
外部吸収スペクトル；第３図に示すとおり。

（７）赤外部吸収スペクトル；第４図に示すとおり。

（８）呈色反応： ニンヒドリン反応　　　　　　　　十 キサントプロティン反応　　　　　− エーリッヒ反応　　　　　　　　　− モーリッシュ反応　　　　　　　　− フェノール硫酸法　　　　　　　　士 しローゼンテスト　　　　　　　　− （９）電気泳動；密度勾配等電点電気泳動により単一物
質として確認され１等電点（ｐＩ）は８．５である。

（１０）物質の色；淡黄色 （１１）塩基性、酸性、中性の区別 ０．５％％ｔ／ｖで水に懸濁した場合のＰＨは７．５（
脱イオン水のｐＨ５，８）である。

（１２）溶剤に対する溶解性 ・熱水に難溶。

・冷水に難溶。

・希酸に易溶。

・希アルカリに難溶。

・アルコール類、アセトン、クロロホルム、ベンゼン、
ｎ−ペンタンに不溶。

（１３）平均分子量１６万以上 上記ＰＦ−ｌｏｌ及びＰＦ−１０２はいずれもα−１，
４ポリガラクトサミンであると同定され、そして本発明
においていずれも抗真菌性が認められ、更にそれらの分
解物及び分解物の分画物にも抗真菌性が認められ、本発
明が完成されたのである。

α−１，４ポリガラクトサミンの分解、即ち低分子化に
際しては、塩酸、硫酸等の酸による加水分解又はポリガ
ラクトサミン分解酵素による加水分解が行なわれる。

次に、ポリガラクトサミン分解酵素の１例を説明する。

このポリガラクトサミン分解酵素はシュードモナスｓｐ
　８８８１　ＦＥＲＭ　Ｐ−８９５５によって生産され
るものである。

（１）作用及び基質特異性 本酵素は重合度ｎ＝４（テトラ−ガラクトサミン）以上
のオリゴ及びポリガラクトサミン（α−１，４ポリガラ
クトサミン）に作用してオリゴガラクトサミノを生成す
る。

その他の多糖類、澱粉（α−１，４グルカン）、グリコ
ーゲン（α−１，４グルカン）、プルラン（α−１，４
グルカン）、デキストラン（α−１，６グルカン）、ラ
ミナラン（β−１，３グルカン）、カルボキシルセルロ
ース（β−１，４グルカン）、　キトサン（β−１，４
ゲルコサミノグルカン）、エチレングリコールキチン（
β−１゜４Ｎ−アセチルゲルコサミノグルカン）、Ｐｓ
ａｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍのポリ
トアセチルガラクトサミノガラクタン（ポリβ−１，３
Ｎ−アセチルガラクトサミノガラクタン）（Ｙ、＾ｋｉ
ｙａｍａ、、　ａｔ、　ａｌ、。

Ａｇｒｉｃ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ＋、、　５０（３
）７４７．１９８６）などには全く作用しない。

また１重合度ｎ＝３（トリーガラクトサミン）以下のα
−１，４ガラクトサミノオリゴ糖にも作用しな％Ｎ。

（２）至適ｐＨ及び安定ｐ）ｌ範囲 クエン酸リン酸緩衝液を用いた場合、至適ｐＨは４．５
〜７．０である。また、安定ｐＨ範囲はｐＨ４，５〜８
．０である。この測定は３７℃で１時間放電した酵素の
残存活性を相対値で示した。

（３）酵素活性の測定法 酵素活性は基質にＰａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ　Ｉ−１菌
の生産するＰＦ−１０１又はＰＦ−１０２（その主構成
糖はα−１，４ガラクトサミノガラクタン）を用いた。

この０．５％７０．１モル酢酸緩衝液ｐＨ６，０溶液０
．５−に酵素溶液０．５＋ｍＱを加え、３７℃、１０分
間反応させ、生じる還元力をＳｏｍｏｇｙｉ−Ｎｅｌｓ
ｏｎ法で測定した。なお酵素単位は１分間当りに１Ｈモ
ルのガラクトサミンに相当する還元力を増加させる活性
を１単位とした。

（４）作用適温及び温度安定性の範囲 この酵素の至適温度は５５℃であり、それ以上で急激に
低下する。５０℃、１時間で７０％の活性が残存してい
る。

α−１，４ポリガラクトサミンの溶液にポリガラクトサ
ミン分解酵素を添加して３５〜４０℃程度で酵素分解す
ることによってα−１，４ポリガラクトサミンの分解物
を得ることができる。

α−１，４ポリガラクトサミンの分解物には抗真菌性が
認められるので、そのまま抗真菌剤として使用すること
ができるが、α−１，４ポリガラクトサミンの分解物を
限外濾過膜等によって分画することによって各種の分子
量単位に分かれた分画物を得ることができる。

α−１，４ポリガラクトサミンの分解物は限外濾過膜に
よって１分子量５万以上、分子量１万以上５万未満１分
子量１万未満とそれぞれの分画物を得ることができるが
、いずれの分画物も抗真菌性を有しており１本発明の抗
真菌剤となるものである。

本発明は、α−１，４ポリガラクトサミン、その分解物
又は分解物の分画物を有効成分とする抗真菌剤である。

本発明において、有効成分はそのまま添加剤として、又
は各種液剤、粉剤に製剤化して抗真菌剤として有効に使
用されるものである。

次に本発明の製造例、実施例を示す。

製造例１ α−１，４ポリガラクトサミン（ＰＦ−１０２）の製造
グルコース６００ｇ、ポリペプトン６０ｇ、ＣａＣ１，
・２Ｈ，０１２５ｇを水道水１７Ｑに溶解し、濃ＮａＯ
Ｈ溶液でｐＨ７，０に調整した後３０Ｑ容ジヤーフアー
メンターに移した。

この培地溶液に蒸気を注入することにより加圧。

加熱滅菌（１２１℃、２０分間）を行った。冷却後の培
地（最終液量２０Ｑ）に、５００−三角フラスコに１５
０ｍ１２同組成の培地（グルコース３％、ポリペプトン
０．３％、ＣａＣ１，０，５％、ＰＨ７，０）で２６℃
、４日間振盪培養したベニシロマイセスＩ−１、ＦＥＲ
Ｎ　ＢＰ−１１８０（ＦＥＲＭＰ−３９２８）を容量比
で約１０％無菌的に接種した。接種後２７℃、通気量０
．５ＶＶＭ、撹拌数２０ＯＲＰＭ　＋７１条件で５日間
培養した。

培養終了後培養物を濾布濾過することにより培養濾液１
７Ｉ２を得た。この培養濾液を５０℃〜６０℃に加熱し
ながら分画分子量１６万の限外濾過膜（三菱レイヨン・
エンジニアリング社［ＵＦ膜チューブラ−モジュールＦ
タイプ）を通過させることにより、低分子画分を除き液
量が約３Ｑになる迄濃縮した。

更に、約１４０００　Ｘ　Ｇで遠心分離することにより
菌体残渣、熱変性蛋白質を除去した。

遠心分離後に上澄液画分３Ｑに食塩約７５０ｇ　（約２
５％濃度）を加え撹拌し、溶解後、濃ＮａＯＨでｐＨを
７．０〜８．５に調整した。−夜装置し塩析物を十分析
出させた後、サラン製の布（塩化ビニリデンと塩化ビニ
ールの共重合体）上に塩析物を回収した。

更にこの塩析物の上から大量の微アルカリ性の水（ｐＨ
７，０以上）を撒布することにより余分の食塩及び培養
液に同時に混在している中性糖、その他の夾雑物を洗い
流した。

次に、水洗後の塩析物に０．１Ｍ塩酸溶液を容量比で約
３倍量加え溶解した。この溶解物に濃Ｎ、ａＯＨ溶液を
加えポリガラクトサミンの等電点であるｐＨ８，５に合
せた。−夜装置し十分析出物を析出させた後、上記と同
様サラン製の布上に析出物を回収し、大量の水道水で洗
った。この水洗物をもう１度０．１Ｍ塩酸に溶解後、等
電点沈澱を行い水洗を繰返すことにより精製した。

この精製した析出物を１２１℃、１５分間滅菌後、凍結
乾燥することにより、ポリガラクトサミンを主成分とす
るＰＦ−１０２の精製粉末（α−１，４ポリガラクトサ
ミンとしての純度約９９％）を７ｇ得た。

製造例２ α−１，４ポリガラクトサミンの分画方法精製α−１，
４ポリガラクトサミン（ＰＦ−１０２）　１００ｇを４
規定塩酸２息に分散させ、冷却管付き三角フラスコ中に
て、８０℃、４時間塩酸加水分解した。

分解後、この塩酸加水分解溶液を１０規定水酸化ナトリ
ウムで中和しＰＨ７とした。この溶液を先ず分画分子量
５万の限外濾過膜で処理（ブレースジャパン社製）シ、
更に分画分子量１万の限外濾過膜で処理した。この様に
して、各々分子量５万以上、１〜５万、１万未満のα−
１，４結合のポリガラクトサミンを得た。

各々の両分を凍結乾燥することにより、粉末試料とした
。

製造例３ ポリガラクトサミン分解酵素の製造 シュードモナスｓｐ　［８８１，ＦＩＥＲＭ　Ｐ−８９
５５を５００ＩＩＩＱ三角フラスコ中で、グルコース０
．５％、酵母エキス０．０５％、ポリペプトン０．０５
％の組成を有する種培地１００−に植苗し、３０℃で２
０時間培養する。

得られた種培養液を３０党のジャーファーメンタ−中で
、ポリガラクトサミン（ＰＦ−１０２）０．２５％、グ
ルコース０．２５％、酵母エキス０．０５％、ポリペプ
トン０．０５％の酵素生産培地１８αに植菌し、３０℃
で４８時間通気（１８ｆｉ／分）攪拌（２Ｇ０ｒρ−）
培養する。

得られた培養液を遠心分離（１４，０００ｒｐｍ）　Ｌ
／て、菌体を除き、得られた培養濾液（酵素活性０．０
０３５Ｕ／−１総括性６３Ｕ／１８　ｆｉ　）に冷却し
たエタノールを６０％濃度まで加えて、タンパク質を沈
殿させ、この沈殿タンパク質を遠心して、溶液から分離
する。

得られたタンパク質を０．１モル酢酸緩衝液（ｐＨ５，
０）で平衡化したＣＭ−セファデックスＣ−２５カラム
（２，５Ｘ　６０ｃｍ）に吸着させ、０〜０．５モル食
塩の濃度勾配を有する同緩衝液を用いて溶出させる。

溶出した酵素活性区分を集め、限外濾過装置（分子量１
万保持）を使って濃縮する０次に、２モル食塩を含む０
．１モル酢酸緩衝液（ＰＨ６，０）溶液とし、同緩衝液
で平衡化したセファデックスＧ−５０カラム（５Ｘ　９
０ｃｍ）クロマトグラフィーにかける６次いで、活性区
分の食塩濃度を４モルにまで・高め、同様な溶液で平衡
化したフェニル−セファロースＣＬ−４Ｂカラム（２，
５ｘ　２０ｃｍ）に吸着させ、食塩の逆濃度勾配を持つ
０．１モル酢酸緩衝液で溶出して精製ポリガラクトサミ
ン分解酵素５０＋ｓｇ　（収率２３．１％、比活性５２
ｐｇ　ｇａｌＮ／ｗｉｎ／ｍｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ）を得
た。

製造例４ α−１，４ポリガラクトサミンの分画方法精製ポリガラ
クトサミン２５ｇを４．８Ｑの０．１モル酢酸に溶解し
１次に水酸化ナトリウムでｐＨ６，０に調整し、全液量
を５Ｑとした。このポリガラクトサミン溶液を基質とし
、これに製造例３で得た精製ポリガラクトサミン分解酵
素１０＋ｍｇを加え３７℃で酵素分解した。この分解後
の溶液を先ず、分画分子量５万の限外濾過膜で処理（ブ
レースジャパン社製）し、更に分画分子量１万の限外濾
過膜で処理した。この様にして、各々分子量５万以上、
１〜５万、１万未満のα−１，４結合のポリガラクトサ
ミンを得た。

更に、各々の両分を凍結乾燥することにより、粉末試料
とした。

ここに得られた分画分子量５万以上のα−１，４結合の
ポリガラクトサミンの理化学的諸性質は次の通りである
。

１、元素分析；窒素８．６％、炭素４２．８％、水素６
．９％ ２、比旋光度；〔α〕δ’　＝　＋　２１５〜２２５３
、融点；１６０℃以上で褐変、２１０℃で炭化、２３０
℃で灰化 ４、物質の色；淡黄色 ５、呈色反応； ニンヒドリン反応　　　　　　　　十 キサントプロティン反応　　　　　− エーリッヒ反応 モーリッシュ反応 フェノール硫酸反応　　　　　　　士 ６、溶剤に対する溶解性； ・水に難溶。

・希酸に可溶。

・メタノール、エタノール、アセトン、クロロホルム、
ヘキサンに難溶 ７、紫外部吸収スペクトル；第５図に示される。

８、赤外部吸収スペクトル；第６図に示される。

また、分画分子量ｌ万以上５万未満のα−１，４結合の
ポリガラクトサミンの理化学的諸性質は次の通りである
。

１、元素分析；窒素８．７％、炭素４５．７％、水素３
．２％ ２、比旋光度；〔α〕δ’　＝　＋　２１０〜２２０３
、融点：特定の融点を持たず、（６０℃で褐変、２１０
℃で炭化、２３０℃で灰化 ４、物質の色；淡黄色 ５、呈色反応； ニンヒドリン反応　　　　　　　　十 キサントプロティン反応 エーリッヒ反応 モーリッシュ反応 フェノール硫酸法　　　　　　　　士 ６、溶剤に対する溶解性； ・水に可溶。

・メタノールに微温。

・ジメチルスルホオキシドに微温。

・エタノール、アセトン、クロロホルム、ヘキサンにＮ
溶。

７、紫外部吸収スペクトル；第７図に示される。

８、赤外部吸収スペクトル；第８図に示される。

また、分画分子量１万未満のα−１，４結合のポリガラ
クトサミンの理化学的性質は次の通りである。

１、元素分析；窒素８．６％、炭素４４．３％、水素６
．９％ ２、比旋光度；〔α〕乙’　＝　＋　２０６．８３、　
融点；特定の融点を示さず、１６０℃以上で炭化をはじ
める。

４、物質の色；淡黄色 ５、呈色反応： ニンヒドリン反応　　　　　　　　十 インドール塩酸反応　　　　　　　十 ソモギーーネルソン反応　　　　　十 フェノール硫酸反応 ヨード反応 ６、溶剤に対する溶解性； ・水に可溶。

・希酸に可溶。

・メタノールに微温。

・ジメチルスルホオキシドに微温。

・エタノール、アセトン、クロロホルムには難溶。

７、紫外部吸収スペクトル；第９図に示される。

８、赤外部吸収スペクトル；第１０図に示される。

製造例５ 製造例２で得た分画分子量１万未満を更に、分別してガ
ラクトサミンオリゴ−６糖を得た。ガラクトサミンオリ
ゴ−６糖の性質は次の通りである。

１）　α１→４結合のみで構成されるガラクトサミンの
６糖 Ｇａ１Ｎ、　−＋４ＧａｌＮ、−）、Ｇａ１Ｎ１−＋４
ＧａｌＮ、→４ＧａｌＮ、→、Ｇａ１Ｎ　（但し、Ｇａ
１Ｎはα−Ｄ−ガラクトピラノシル基を示す。） ２）色と形状：淡黄色不定形の粉末。

３）味：弱い甘味を有する。

４）溶解性＝薄い酸、塩溶液、水に可溶。ジメチルスル
ホキシドを除く一般的な有機溶媒に難溶。

５）下記の元素分析値を示す。

Ｃ：　４３．９０、Ｈ：　６．９１、Ｎ　：　８．５４
、Ｏ：　４０．６５予想される分子式：Ｃｓ５Ｈｓｓｏ
□Ｎ。

６）分子量と構造式は下記の通り。

分子量：　９８４．６ ７）呈色反応：インドール塩酸反応、エルソンーモルガ
ン反応、ソモギーーネルソン反応にそれぞれ陽性。

８）旋光度 〔α）′ｏ’　：　＋１９０．２ ９）融点：１６０℃以上で炭化。

１０）第１１図に紫外部吸収スペクトルを示す。

１１）第１２図に赤外部吸収スペクトルを示す。

実施例１ ポテトデキストロース培地（ポテトデキストロース寒天
培地：栄研化学株式会社）３０ｇを１００００の精製水
に加温溶解し、１２１℃１５分間オートクレーブして滅
菌した。さらに、製造例１で製造したα−■、４ポリガ
ラクトサミン（ＰＦ−１０２）、製造例２で製造したα
−１，４ポリガラクトサミンの塩酸分解物及び製造例２
で調整した塩酸分解物の分画物で各々の分子量のものに
ついて、それぞれα−１，４ポリガラクトサミン溶液を
調整し、滅菌後各々適当な濃度になるように滅菌済のポ
テトデキストロース培地に添加し、寒天平板培地を作成
した。

この各分子量のポリガラクトサミンを含有する平板培地
上に予め前培養した真菌のスラントより白金線で接種し
、２７℃、４日間培養した後コロニーの直径を測定した
。そして抗菌活性は最小増殖阻止濃度（％）あるいはポ
リガラクトサミン無添加の培地に接種した真菌のコロニ
ーの直径を１００とした時の各試験区のコロニーの比で
示した。

供試した真菌は Ｃａｎｄｉｄａ　ｍｏｇｉｉ　ＩＧＣ３６９０、Ｐｉｃ
ｈｉａ　ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎｓ　ＳＢＹ　
１９１９、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｒｕｂｒａ　ＭＹ
　１Ｇ。

Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　
ＯＵＴ　７８７２゜Ｃａｎｄｉｄａ　ｖｅｒｓａｔｉｌ
ｉｓ　ＩＦＯ１６５２゜Ｃａｎｄｉｄａ　ｔｒｏｐｉｃ
ａｌｉｓ　ＣＢＳ　２３１９、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕ
ｓ　ｋｕｅｔｚｉｎｇｉｉ　ＣＢＳ　１９２０、Ｋｌｕ
ｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ　１ａｃｔｉｓ　ＩＦｏ　０６４
ｇ。

Ｍａｔｓｃｈｎｉｋｏｖｉａ　ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｓａ
　ＡＴＣＣ２２０３２、Ｓａｃｃｈａｒｏｗｒｙｃｅｓ
　ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ　００丁７９３０゜Ｚ
ｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｒｏｕｘｉｉ　Ｉ
ＡＭ　４０１１゜Ｃａｎｄｉｄａ　ｅｔｃｈｅｌｌｓｉ
ｉ　ＩＦＯ１２２９、＾１ｔａｒｎａｒｉａ　ｋｉｋｕ
ｃｈｉａｎａ　ＩＦＯ８４１４、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ　ｃ
ｉｎａｒｅａ。

Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ　ｍ１ｙａｂａａｎｕｓ　Ｉ
ＦＯ５２７７、Ｄｉａｐｏｒｔｈａ　ｃｉｔｒｉ　ＩＦ
Ｏ９１７０゜Ｅｌｓｉｎｏｅ　ｆａｖｃａｔｔｉ　ＩＦ
Ｏ８４１７、Ｆｕｓａｒｉｕｍ　　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ
　　ｃａｐａａ。

Ｆｕｓａｒｉｕｍ　５ｏｌａｎｉ、 Ｇｉｂｂａｒｅｌｌａ　ｚｅａｅ　ＩＦＯ７１６０゜Ｇ
ｕｉｇｎａｒｄｉａ　　１ａｒｉｃｉｎａ　　ＩＦＯ７
８８８、Ｈａｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ　　ｓｉｇ
ａ＋ｏｉｄａｕｍ　　ｗａｒ、　　ｉｒｒｅｇｕｌａｒ
ａＩＦＯ５２７３゜ Ｐｅ５ｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ　ｆｕｎａｒｅａ。

Ｐｉｒｉｃｕｌａｒｉａ　ｏｒｙｚａａ　　ＩＦＯ５２
７９，５ｃｌａｒｏｔｉｎｉａ　　ｓｃｌｅｒｏｔｉｏ
ｒｕｍ　ＩＦＯ９３９５、Ｖｅｎｔｕｒｉａ　ｐｉｒｉ
ｎａ　　ＩＦＯ６１８９である。

第１表は抗菌活性を最小増殖阻止濃度（％）で表した結
果を、第２表は各分子量のポリガラクトサミン０．１％
を含有する各試験区について対照を１００とした時の比
で表した結果を示したものである。

実施例２ グルコース３０ｇ、カザミノ酸４ｇ、酵母エキス２ｇ、
　Ｋ）１．ＰＯ４１ｇ、　ＭｇＳＯ４’７Ｈ，００，５
ｇ、　ＣａＣｌ２’２）１．ＯＱ、　Ｉｇ、ＮａＣ１１
ｇ、ポリペプトン５ｇを精製水に溶解し、ＰＨを６．０
に調整した後、精製水を加えて全量をＬＭとした。分注
後１２１”Ｃ，１５分間オートクレーブして滅菌した。

ここに、別滅菌した各α−１，４ポリガラクトサミン溶
液をそれぞれ適当な濃度になるように添加し、液体培地
を作成した。

実施例１と同様の真菌を接種し、３０℃、２００ｒｐｍ
で６日間培養後、培養液の濁度を測定した。そして抗菌
活性は最小増殖阻止濃度（％）で示した。

第 表 第４表 実施例３ 製造例５で製造したガラクトサミンオリゴ−６糖につい
て実施例１及び２と同様にａｍ済の培地にそれぞれ適当
な濃度になるように添加した。

実施例１及び２と同様の真菌を接種し、抗菌活性は最小
増殖阻止濃度（％）で表した。第５表は寒天平板培地で
の結果を、第６表は液体培地での結果を示すものである
。

実施例４ ３００＋ｍＱの三角フラスコにエマルション塗料を２０
０ｇずつ分注し、各々１００ｍ１２の水を加え希釈した
。別に、製造例１で製造したＰＦ−１０２、製造例２で
製造したＰＦ−１０２の塩酸分解物及び製造例２で調整
した塩酸分解物の分画物で各々分子量のものについて各
々、適度の濃度に調整し最終濃度で０．５％になるよう
に希釈エマルジョンに添加し混合した。無添加画分を対
照とした。

更に、添加、無添加両両分の希釈エマルジョンにグルコ
ース０．１％、ペプトン０．１％になるように加え、全
両分に１０”／ｍｆｌになるようにＢｏｔｒｙｔｉｓｃ
ｉｎｅｒｅａの胞子を懸濁した。そして、各画分をｌＯ
Ｘ　Ｌｏａｍのベニヤ板にスプレーした後３０℃に５日
間放置し、板表面の黴の発生を観察した。

結果を第７表に示した。

示す図で、第３図はＰＦ−１０２の紫外部吸収スペクト
ルを示す図で、第４図はＰＦ−１０２の赤外部吸収スペ
クトルを示す図で、第５図はＰＦ−１０２の分解物の分
子量５万以上の分画物の紫外部吸収スペクトルを、第６
図はその赤外部吸収スペクトルを示す図で、第７図はＰ
Ｆ−１０２の分解物の分子量１万以上５万未満の分画物
の紫外部吸収スペクトルを、第８図はその赤外部吸収ス
ペクトルを示す図で、第９図はＰＦ−１０２の分解物の
分子量１万未満の分画物の紫外部吸収スペクトルを、第
１Ｏ図はその赤外吸収スペクトルを示す図で、第１１図
はガラクトサミンオリゴ−６糖の紫外部吸収スペクトル
を、第１２図はその赤外部吸収スペクトルを示す図であ
る。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）α−１，４ポリガラクトサミン、その分解物又は
   分解物の分画物を有効成分とする抗真菌剤。
2. （２）α−１，４ポリガラクトサミンの分解物の分画物
   が分子量５万以上のα−１，４ポリガラクトサミンであ
   ることを特徴とする第１項記載の抗真菌剤。
3. （３）α−１，４ポリガラクトサミンの分解物の分画物
   が分子量１万以上５万未満のα−１，４ポリガラクトサ
   ミンであることを特徴とする第１項記載の抗真菌剤。
4. （４）α−１，４ポリガラクトサミンの分解物の分画物
   が分子量１万未満のα−１，４ポリガラクトサミンであ
   ることを特徴とする第１項記載の抗真菌剤。