JPH0363227A - 抗皮膚真菌症剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明はカンジダ属、トリコフィトン属またはその他の
皮膚糸状菌などの微生物に起因する皮膚感染症に効果を
有する抗皮膚感染症剤に関するものである。

（従来の技術） 黴、酵母などの真菌による感染症は皮膚、腟などの局所
感染のほか、全身感染も増加の傾向がある。

特に、免疫抑制剤、制ガン剤等の使用により免疫能が低
下した場合に深部真菌症などの全身性感染が多い。

また、皮膚感染症の中でも汗庖状白鮮のように皮膚表層
にとどまっており、深部に侵入することはないが、しば
しば慢性化し、−担治ゆしても再発することが多いもの
もある。

真菌類は細菌の様な原核生物と異り、高等動物と同様の
真植生物であり、真菌類にだけ選択的な毒性を有する物
質を得ることはむずかしく、有効な抗皮膚感染症剤の開
発が遅れている。

現在、抗皮膚感染症剤として、アンテホリシンＢ、ナイ
スタチン等のポリエン系抗生物質、クロトリマゾール、
ミコナゾール、ケトコナゾールなどのアゾール系抗真菌
剤その他グリセオフルビン。

フルシトシンなどがあるが有効性、毒性など問題点が多
い。

従って、有効性の高い、より安全性の高い抗皮膚感染症
剤の開発が望まれている訳である。

ポリガラクトサミン（α−１，４ガラクトサミノガラク
タン）は微生物の生産する多糖類であり、その安全性等
については、マウスに対する急性経口毒性、急性経口毒
性等の確認の結果全く異常のないことが確認されている
。従って、抗皮膚感染症剤としての適用においても従来
の薬剤等と比べ有効で、安全性の高い薬剤として非常に
有用性の高いものである。

しかしながら、ポリガラクトサミンは自然界では非常に
珍しい物質であり、不完全菌由来のＰＦ−１０１及びＰ
Ｆ−１０２が知られている程度である−（特公昭５６−
１２６３９号、特開昭６２−２９４０９３号）。

また、一般に多糖類は低分子化することにより物理化学
的性質が変わり、高分子の状態より取扱いが容易になっ
たり、生理活性が顕著になったりする等のことが知られ
ている６本ポリガラクトサミンに於いても、低分子化す
る方法として酸やアルカリで処理する方法だけでなく酵
素分解による方法、即ちシュードモナス属菌の生産する
ポリガラクトサミン分解酵素についても既に明らかにさ
れている（特開昭６３−１６４８８４号、特開昭６３−
１６４８８５号）。

（問題点を解決するための手段） 本発明の目的は、より安全性の高い抗皮膚感染症剤を提
供することにある。

本発明はα−１，４結合のガラクトサミンを有効成分と
する抗皮膚感染症剤に関するものである０本発明に於け
る抗皮膚感染症剤の有効成分であるα−１，４結合のガ
ラクトサミンは、不完全菌ベニシロマイセスニー１（微
工研寄第１１８０　ＦＥＲＮ　ＢＰ−１１８０）を培養
することにより、ＰＦ−１０１及びＰＦ−１０２として
得ることが出来る。また、　ＰＦ−１０１，ＰＦ−１０
２をシュードモナス属菌　Ｈ８８１（微工研菌寄第８９
５５）の生産するポリガラクトサミン分解酵素で加水分
解することにより、または、酸加水分解することにより
得た分解物を限外濾過膜で分画することにより各々。

分画分子量５万以上、１万以上〜５万未満、１万未満の
α−１，４結合のポリガラクトサミンとして得ることが
出来る。

本発明の抗皮膚感染症剤としては、ＰＦ−１ｏｔ、　Ｐ
Ｆ−１０２，これらの分解物及び分画物などα−１，４
結合のガラクトサミンはすべて、単独もしくは混合して
使用できるものである。

次に、α−１，４ポリガラクトサミン、ＰＦ−１０１及
びＰＦ−１０２の生産菌について説明する。

和歌山路の腐植層より分離した不完全菌Ｉ−１菌はベニ
シロマイセス属（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｓｓ）に属する
ものと認められ、ベニシロマイセスＩ−１と命名され。

該菌株は微工研にＦＦｉＲＭ　ＢＰ−１１８０として寄
託されている。

次にベニシロマイセスＩ−１（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃａ
ｓ　ｌ−１）の菌学的性質を示す。

（ａ）　ｌ［微鏡下での観察 本菌は分生胞子柄（ｃｏｎｉｄｉｏｐｈｏｒａ）を欠き
１分生胞子は栄養菌糸または栄養菌糸束から直接生えて
いる一本一本独立したフィアライド（ｐｈｉａｌｉｄｅ
）の先端に長い連鎖をなして派生している。フィアライ
ドは半透明で２０〜４５μの長さを持ち、基部はやや太
＜Ｃｔ、Ｏ〜１．５μ）先端はやや先細り（０，５〜１
．０μ）で、直線的あるいは先端部がやや湾曲したもの
もある６分生胞子は電子顕微鏡により葉巻タバコ型（あ
るいは桿菌型）であり、そのサイズは４〜６×１．０〜
１．４μである。

分生胞子は普通２５〜３５個の連鎖をなしているが。

まれにはもつと長鎖のものも観察される。この分生胞子
の連鎖は非常にもろく、−寸したショックで簡単にくず
れる。

（ｂ）各培地における生育状態（２５℃平面培養）（１
）ツアペック寒天培地 コロニーの生育は良＜１４日０で直径約４５ｍｍに達す
る。白色のビロード状から羊毛状の菌叢で、中央部に房
状に盛上りがあり、コロニー周辺は円形である、水滴・
シワ共になし、コロニー裏面は培養初期白色、培養後期
中央部が淡黄色を呈する。

寒天への色素産生は認められない。

（２）麦芽寒天培地 コロニーの生育は良く、１４日０で直径約５４ｍｍ、コ
ロニー周辺は円形にならず梅林状を呈する。

菌叢の中央部は白色だが１周辺部は淡黄色を呈する。菌
叢の厚さは中程度で、中央部はやや凹状である。水滴・
シワ共に認められず、コロニー裏面は全面淡黄色を呈す
、寒天培地に淡黄色色素の産生あり。

（３）ポテトデキストロース寒天培地 コロニーの生育は非常に良＜１４日０で直径約６０１朧
に達する。白色のビロード状乃至羊毛状の可成り厚い菌
叢を形成し、中央部はやや盛上り、皿中央部は淡い黄色
を呈するやや薄い菌叢、その周辺部は白色の比較的厚い
菌叢となる１表面にシワはないが数個のうすい褐色の水
滴が認められる。コロニー裏面に放射状の数本のシワが
あり、同心円状の黄色の濃淡が認められる。寒天への淡
黄色色素の拡散がある。

（４）　ＹｐＳｓ寒天培地（組成スターチ１．５％、イ
ーストエキス０．４％、　Ｋ、）ＩＰＯ４０，１％、Ｍ
ｇ５Ｏ，０，０５％。

寒天２％） コロニーの生育は良好で１４日０で直径約５０１１Ｉｌ
に達する。白色の全体にふっくらとした羊毛状の厚い菌
叢である。水滴・シワなし。コロニー裏面は特記すべき
特徴なし０色素産生なし。

（５）　ＭＹ、。寒天培地（組成グルコース２０％、ポ
リペプトン０．５％、イーストエキス０．３％、モルト
エキス０．３％、寒天２％） コロニーの生育はあまり良くなく１４日０で直径約３０
ｍｍである。気菌糸はあまりたたず細かいシワが多く、
周辺部は淡黄色、中央部は淡褐色を呈する。コロニーの
裏面は淡黄色で、細かいシワがある１色素産生なし。

ベニシロマイセスＩ−１は通常の糸状菌の液体培養方法
で培養することができる。

ベニシロマイセスＩ−１の胞子または菌糸を液体培地に
接種し、好気的に培養する。炭素源とじてはブドウ糖、
麦芽糖、蔗糖、澱粉、廃糖蜜等を使用することが出来る
が好ましくはブドウ糖を用いるのが良い、窒素源として
は硫酸アンモニウム、硝酸ソーダなどの無機窒素、ペプ
トン、酵母エキスなどの有機窒素が使用出来る。

培養温度は本凝集活性物質生産菌が凝集活性物質を生産
する範囲内で適宜変更し得るが通常は２０〜２５℃で培
養することが好ましい、培養時間は培養条件によって異
なるが１通常４〜５日程度であり、凝集活性物質が最高
に達する時間を見積って適当な時間に終了すればよい、
ここで培養濾液を減圧濃縮、限外濾過等の方法で濃縮し
て濃縮液としてエタノール等の有機溶媒を加えて沈澱す
れば、特公昭５６−１２６３９号公報に記載のＰＦ−１
０１が得られるのである。

また、　ＰＦ−１０１生産菌であるベニシロマイセスＩ
−１を培養し、濾過し、得られた培養濾液または濾液濃
縮液に各種塩を添加し、沈澱が生じない場合は必要によ
ってはアルカリを添加してｐＨを７〜９として、析出さ
せ、析出物を分離し、水洗し、これを希酸水溶液に溶解
し、再び塩を添加するか、アルカリ等の添加によってｐ
Ｈを７〜９とし、て、析出させて、特開昭６２−２９４
０９３号公報に記載のＰＦ−１０２を得ることができる
。

ＰＦ−１０１の理化学的性質は次の通りである。

（１）　１！集活性；きわめて微量で懸濁微細物を凝集
する。

（２）凝集活性ＰＨ範囲；２〜９で安全に凝集活性を示
す。

（３）　ｉｌｊ集活性温度範囲；０〜１００℃で凝集活
性が認められる。

（４）凝集活性イオン強度；炭酸イオンおよびＦｅ２　
（３０４）　ｚ　により凝集活性が阻害されるがそれ以
外の各種イオン及びイオン強度によって凝集活性に影響
はなく、ＮａＣ１，Ｋ、ＳＯ２でＩＭまで全く影響を与
えない。

（５）元素分析；窒素５．４４％、炭素３７．４５％、
水素６．３％、リン０．２７％。

（６）紫外部吸収スペクトル：第１図に示すとおり。

（７）赤外部吸収スペクトル；第２図に示すとおり。

（８）呈色反応； ニンヒドリン反応　　　　　　　　− キサントプロティン反応 エーリッヒ反応　　　　　　　　　− モーリッシュ反応　　　　　　　　十 フェノール硫酸反応　　　　　　　十 しローゼンテスト （９）酸による加水分解；６Ｎ塩酸、１１０°、２００
時間分解よりガラクトサミンとアンモニアが得られ、４
Ｎ塩酸、１００℃、１６時間分解により標品の７４％の
ガラクトサミンと少量のアンモニアが得られる。

（ｌＯ）電気泳動；密度勾配等電点電気泳動により単一
物質として確認され、等電点（ｐＩ）は８．５である。

（１１）物質の色；淡黄白色 （１２）塩基性、酸性、中性の区別；等電点８．５でや
や塩基性を呈す、　　（０，１％水溶液のＰＨは６．２
、説イオ゛ン水のｐＨは５．８） （１３）溶剤に対する溶解性； ・熱水に可溶、溶解後冷却しても析出しない。

・冷水に難溶。

・希酸、希アルカリに難溶。

・アルコール類、アセトン、クロロホルム、ベンゼン、
酢酸エチル、ｎ−ペンタンに不溶。

ＰＦ−１０２の理化学的性質は次の通りである。

（１）　ａｉｌ集活性；きわめて微量で懸濁微細物を凝
集する。

（２）凝集活性ｐＨ範囲：ｐＨ２〜９で安全に凝集活性
を示す。

（３）凝集活性温度範囲；０〜１００℃で凝集活性が認
められる。

（４）凝集活性イオン強度；炭酸およびＦｅ２（ｓｏ４
）ｚ　により凝集活性が阻害されるがそれ以外の各種イ
オン及びイオン強度によって凝集活性に影響はなく　、
　ＮａＣ１，に、Ｓｏ、で１Ｍまで全く影響を与えない
。

（５）元素分析；窒素８．６４％、炭素４２．８０％、
水素６．８７％ 一般式：　（ＣｓＨｎｌＮＯ４・ｘＨｌｏ）ｎ（６）紫
外部吸収スペクトル；第３１！１に示すとおり。

（７）赤外部吸収スペクトル；第４図に示すとおり。

（８）呈色反応； ニンヒドリン反応　　　　　　　　十 キサントプロティン反応　　　　　− エーリッヒ反応 モーリッシュ反応　　　　　　　　− フェノール硫酸法　　　　　　　　士 しローゼンテスト　　　　　　　　− （９）電気泳動；密度勾配等電点電気泳動により単一物
質として確認され１等電点（ｐＩ）は８．５である。

（ｌＯ）物質の色；淡黄色 （１１）塩基性、酸性、中性の区別 ０．５％ｖ／ｖで水に懸濁した場合のＰＨは７．５（脱
イオン水のｐＨ５，８）である。

（１２）溶剤に対する溶解性 ・熱水に難溶。

・冷水に難溶。

・希酸に易溶。

・希アルカリに難溶。

・アルコール類、アセトン、クロロホルム、ベンゼン、
ｎ−ペンタンに不溶。

（１３）平均分子量１６万以上 上記ＰＦ−ｌｏｌ及びＰＦ−１０２はいずれもα−１，
４ポリガラクトサミンであると同定され、そして本発明
においていずれも抗真菌性が認められ、更にそれらの分
解物及び分解物の分画物にも抗真菌性が認められ１本発
明が完成されたのである。

α−１，４ポリガラクトサミンの分解、即ち低分子化に
際しては、塩酸、硫酸等の酸による加水分解又はポリガ
ラクトサミン分解酵素による加水分解が行なわれる。

次に、ポリガラクトサミン分解酵素の１例を説明する。

このポリガラクトサミン分解酵素はシュードモナスミル
　１（８８１ＦＥＲＭ　Ｐ−８９５５によって生産され
るものである。

（１）作用及び基質特異性 本酵素は重合度ｎ＝４（テトラ−ガラクトサミン）以上
のオリゴ及びポリガラクトサミン（α−１，４ポリガラ
クトサミン）に作用してオリゴガラクトサミンを生成す
る。

その他の多糖類、澱粉（α−１，４グルカン）、グリコ
ーゲン（α−１，４グルカン）、プルラン（α−１，４
グルカン）、デキストラン（α−１，６グルカン）、ラ
ミナラン（β−１，３グルカン）、カルボキシルセルロ
ース（β−１，４グルカン）、　キトサン（β−１，４
ゲルコサミノグルカン）、エチレングリコールキチン（
β−１゜４Ｎ−アセチルゲルコサミノグルカン）、Ｐｓ
ａｕｄｏ＋＊ｏｎａｓ　５ｏｌａｎａｃｅａｒｕ−のポ
リＮ−アセチルガラクトサミノガラクタン（ポリβ−１
，３Ｎ−アセチルガラクトサミノガラクタン）（Ｙ、　
Ａｋｉｙａ＋ｉａ、、　ｓｔ、　ａｌ、。

Ａｇｒｉｃ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、、　５０（３）
７４７．１９８６）などには全く作用しない。

また、重合度ｎ＝３　（トリーガラクトサミン）以下の
α−１，４ガラクトサミノオリゴ糖にも作用しな塾）。

（２）至適ｐＨ及び安定ＰＨ範囲 クエン酸リン酸緩衝液を用いた場合、至適ｐＨは４．５
〜７．０である。また、安定ＰＨ範囲はρ旧、５〜８．
０である。この測定は３７℃で工時間放置した酵素の残
存活性を相対値で示した。

（３）酵素活性の測定法 酵素活性は基質にＰａｅｃｉｌｏｍｙｃｓｓＩ−１菌の
生産するＰＦ−１０１又はＰＦ−１０２（その主構酸糖
はα−１，４ガラクトサミノガラクタン）を用いた。こ
の０．５％７０．１モル酢酸緩衝液ｐＨ６，０溶液０．
５ａ＋１２に酵素溶液０．５ｍ１２を加え、３７℃、１
０分間反応させ、生じる還元力をＳｏａ＋ｏｇｙｉ−Ｎ
ｅＬｓｏｎ法で測定した。なお酵素単位は１分間当りに
１μモルのガラクトサミンに相当する還元力を増加させ
る活性を１単位とした。

（４）作用適温及び温度安定性の範囲 この酵素の至適温度は５５℃であり、それ以上で急激に
低下する。５０℃、１時間で７０％の活性が残存してい
る。

α−１，４ポリガラクトサミンの溶液にポリガラクトサ
ミン分解酵素を添加して３５〜４０℃程度で酵素分解す
ることによってα−１，４ポリガラクトサミンの分解物
を得ることができる。

α−１，４ポリガラクトサミンの分解物には抗真菌性が
認められるので、そのまま抗皮膚感染症剤として使用す
ることができるが、α−１，４ポリガラクトサミンの分
解物を限外濾過膜等によって分画することによって各種
の分子量単位に分かれた分画物を得ることができる。

α−１，４ポリガラクトサミンの分解物は限外濾過膜に
よって１分子量５万以上、分子量１万以上５万未満、分
子量ｌ万未満とそれぞれの分画物を得ることができるが
、いずれの分画物も抗真菌性を有しており１本発明の抗
皮膚感染症剤となるものである。　本発明は、α−１，
４ポリガラクトサミン。

その分解物又は分解物の分画物を有効成分とする抗皮膚
感染症剤である。

本発明において、有効成分をそのまま添加剤として、又
は各種液剤、粉剤に製剤化して抗皮膚感染症剤として有
効に使用されるものである。

次に本発明の製造例、実施例を示す。

製造例１ α−１，４ポリガラクトサミン（ＰＦ−１０２）の製造
グルコース６００ｇ、ポリペプトン６０ｇ。

ＣａＣ１，４Ｈ，０１２５ｇを水道水ＩＬＱに溶解し、
濃ＮａＯＨ溶液でｐＨ７，０に調整した後３０Ｑ容ジヤ
ーフアーメンターに移した。

この培地溶液に蒸気を注入することにより加圧、加熱滅
菌（１２１’Ｃｌ２Ｏ分間）を行った。冷却後の培地（
最終液量２０Ｑ）に、５００−三角フラスコに１５０ｍ
１ｌ同組成の培地（グルコース３％、ポリペプトン０．
３％、ＣａＣ１，０，５％、ｐＨ７，０）で２６℃、４
日間振盪培養したベニシロマイセスＩ−１，ＦＥＲＭ　
ＢＰ−１１８０（ＦＥＲＭＰ−３９２８）を容量比で約
１０％無菌的に接種した。接種後２７℃１通気量０．５
ＶＶＭ、攪拌数２０ＯＲＰＭの条件で５日間培養した。

培養終了後培養物を濾布濾過することにより培養濾液１
７Ｑを得た。この培養濾液を５０℃〜６０℃に加熱しな
がら分画分子量１６万の限外濾過膜（三菱レイヨン・エ
ンジニアリング社製ＵＦ膜チューブラ−モジュールＦタ
イプ）を通過させることにより、低分子画分を除き液量
が約３Ｑになる迄濃縮した。

更に、約１４０００　Ｘ　Ｇで遠心分離することにより
菌体残渣、熱変性蛋白質を除去した。

遠心分離後に上澄液画分３Ｑに食塩約７５０ｇ　（約２
５％濃度）を加え攪拌し、溶解後、濃ＮａＯＨでｐｎを
７．０〜８．５に調整した。−夜放置し塩析物を十分析
出させた後、サラン製の布（塩化ビニリデンと塩化ビニ
ールの共重合体）上に塩析物を回収した。

更にこの塩析物の上から大量の微アルカリ性の水（ｐＨ
７，０以上）を撒布することにより余分の食塩及び培養
液に同時に混在している中性糖、その他の夾雑物を洗い
流した。

次に、水洗後の塩析物に０．１Ｍ塩酸溶液を容量比で約
３倍量加え溶解した。この溶解物に濃ＮａＯＨ溶液を加
えポリガラクトサミンの等電点であるＰＨ８，５に合せ
た。−夜放置し十分析出物を析出させた後、上記と同様
サラン製の布上に析出物を回収し、大量の水道水で洗っ
た。この水洗物をもう１度０．１Ｍ塩酸に溶解後１等電
点沈澱を行い水洗を繰返すことにより精製した。

この精製した析出物を１２１℃、１５分間滅菌後。

凍結乾燥することにより、ポリガラクトサミンを主成分
とするＰＦ−１０２の精製粉末（α−１，４ポリガラク
トサミンとしての純度約９９％）を７ｇ得た。

製造例２ α−１，４ポリガラクトサミンの分画方法精製α−１，
４ポリガラクトサミン（ＰＦ−１０２）１００ｇを４規
定塩酸２Ｑに分散させ、冷却管付き三角フラスコ中にて
、８０℃、４時間塩酸加水分解した。

分解後、この塩酸加水分解溶液を１０規定水酸化ナトリ
ウムで中和しｐＨ７とした。この溶液を先ず分画分子量
５万の限外濾過膜で処理（ブレースジャパン社製）し、
更に分画分子量１万の限外濾過膜で処理した。この様に
して、各々分子量５万以上、１〜５万、１万未満のα−
１，４結合のポリガラクトサミンを得た。

各々の画分を凍結乾燥することにより、粉末試料とした
。

製造例３ ポリガラクトサミン分解酵素の製造 シュードモナスｓｐ　Ｈ８８１，ＦＥＲＮ　Ｐ−８９５
５を５００−三角フラスコ中で、グルコース０．５％、
酵母エキス０．０５％、ポリペプトン０．０５％の組成
を有する種培地１００ｓｊｌに植菌し、３０℃で２０時
間培養する。

得られた種培養液を３０Ｊ１のジャーファーメンタ−中
で、ポリガラクトサミン（ＰＦ−１０２）０．２５％、
グルコース０．２５％、酵母エキス０．０５％、ポリペ
プトン０．０５％の酵素生産培地１８４ｍに植菌し、３
０℃で４８時間通気（１８愈／分）攪拌（２００ｒｐ園
）培養する。

得られた培養液を遠心分離（１４，ＯＯＯｒｐｍ）　シ
て、菌体を除き、得られた培養濾液（＃素活性０．００
３５＋Ｊ／社、総括性６３υ／１８ｇ）に冷却したエタ
ノールを６０％濃度まで加えて、タンパク質を沈殿させ
、この沈殿タンパク質を遠心して、溶液から分離する。

得られたタンパク質を０．１モル酢酸緩衝液（ｐＨ５，
０）で平衡化したＣＭ−セファデックスＣ−２５カラム
（２，５Ｘ　６０ｃｍ）に吸着させ、Ｏ〜０．５モル食
塩の濃度勾配を有する同緩衝液を用いて溶出させる。

溶出した酵素活性区分を集め、限外濾過装置（分子量１
万保持）を使って濃縮する６次に、２モル食塩を含む０
．１モル酢酸緩衝液（ｐＨ６，０）＃１１液とし。

同緩衝液で平衡化したセファデックスＧ−５０カラム（
５Ｘ　９０ｃｍ）クロマトグラフィーにかける０次いで
、活性区分の食塩濃度を４モルにまで高め、同様な溶液
で平衡化したフェニル−セファロースＣＬ−４Ｂカラム
（２，５Ｘ２０ｃｍ）に吸着させ１食塩の逆濃度勾配を
持つ０．１モル酢酸緩衝液で溶出して精製ポリガラクト
サミン分解酵素５０ｍｇ　（収率２３．１％、比活性５
２μｇ　ｇａｌＮ／ｉ＋１ｎ／ｍｇ　ｐｒｏｔａｉｎ）
を得た。

製造例４ α−１，４ポリガラクトサミンの分画方法精製ポリガラ
クトサミン２５．を４．８Ｑの０．１モル酢酸に溶解し
、次に水酸化ナトリウムでＰＨ６，０に調整し、全液量
を５Ｂとした。このポリガラクトサミン溶液を基質とし
、これに製造例３で得た精製ポリガラクトサミン分解酵
素１０ｍｇを加え３７℃で酵素分解した。この分解後の
溶液を先ず、分画分子量５万の限外濾過膜で処理（ブレ
ースジャパン社１１）シ、更に分画分子量１万の限外濾
過膜で処理した。この様にして、各々分子量５万以上、
１〜５万、１万未満のα−１，４結合のポリガラクトサ
ミンを得た。

更に、各々の両分を凍結乾燥することにより、粉末試料
とした。

ここに得られた分画分子量５万以上のα−１，４結合の
ポリガラクトサミンの理化学的諸性質は次の通りである
。

１、元素分析；窒素８．６％、炭素４２．８％、水素６
．９％、酸素４１．７％ ２、比旋光度；〔α〕ｖ＝＋２１５〜２２５３、融点；
１６０℃以上で褐変、　２１０℃で炭化、２３０℃で灰
化 ４、物質の色；淡黄色 ５、呈色反応； ニンヒドリン反応　　　　　　　　十 キサントプロティン反応　　　　　− エーリッヒ反応 モーリッシュ反応 フェノール硫酸反応　　　　　　　士 ６、溶剤に対する溶解性； ・水に難溶。

・希酸に可溶。

・メタノール、エタノール、アセトン、クロロフォルム
、ヘキサンに難溶。

７、　紫外部吸収スペクトル；第５図に示される。

８、赤外部吸収スペクトル；第６図に示される。

また１分画分子量１万以上５万未満のα−１，４結合の
ポリガラクトサミンの理化学的諸性質は次の通りである
。

１、元素分析；窒素８．７％、炭素４５．７％、水素３
．２％ ２６　　比旋光度；　（ａ　）ｐ’　＝　＋　２１０〜
２２０３、融点：特定の融点を持たず、１６０’Ｃで褐
変、２１（１℃で炭化、２３０℃で灰化 ４、物質の色；淡黄色 ５、呈色反応； ニンヒドリン反応　　　　　　　　十 キサントプロティン反応 エーリッヒ反応 モーリッシュ反応 フェノール硫酸法　　　　　　　　士 ６、溶剤に対する溶解性； ・水に可溶・ ・メタノールに微温。

・ジメチルスルホオキシドに微温。

・エタノール、アセトン、クロロホルム、ヘキサンに難
溶。

７、　紫外部吸収スペクトル；第７図に示される。

８、赤外部吸収スペクトル；第８図に示される。

また１分画分子量１万未満のα−１，４結合のポリガラ
クトサミンの理化学的性質は次の通りである。

１、元素分析；窒素８．６％、炭素４４．３％、水素６
．９％ ２、比旋光度；〔α〕６°＝　＋２０６．８３、融点；
特定の融点を示さず、１６０℃以上で炭化をはじめる。

４、物質の色；淡黄色 ５゜呈色反応； ニンヒドリン反応　　　　　　　　十 インドール塩酸反応　　　　　　　十 ソモギーネルソン反応　　　　　　十 フェノール硫酸反応 ヨード反応 ６、ｍ剤に対する溶解性： ・水に可溶。

・希酸に可溶。

・メタノールに微温。

・ジメチルスルホオキシドに微温。

・エタノール、アセトン、クロロフォルムには難溶。

７、紫外部吸収スペクトル；第９図に示される。

８、赤外部吸収スペクトル；第１０図に示される。

製造例５ 製造例２で得た分画分子量１万未満を更に、分別してガ
ラクトサミンオリゴ−６（ＧＯ３６）糖を得た。ガラク
トサミンオリゴ−６＠の性質は次の通りである。

■）　α１→４結合のみで構成されるガラクトサミンの
６糖 Ｇａ１Ｎ、−＋、Ｇａ１Ｎ１−＋４ＧａｌＮ、→４Ｇａ
ｌＮ１→４ＧａｌＮｉ→４ＧａｌＮ　（但し、Ｇａ１Ｎ
はａ−Ｄ−ガラクトビラノシル基を示す、） ２）色と形状：淡黄色不定形の粉末。

３）味：弱い甘味を有する。

４）溶解性：薄い酸、塩溶液、水に可溶、ジメチルスル
ホキシドを除く一般的な有機溶媒に難溶。

５）下記の元素分析値を示す。

Ｃ：　４３，９０．　Ｈ：　６．９１．　Ｎ　：　８．
５４、Ｏ：　４０．６５予想される分子式：Ｃ３Ｊｓｓ
Ｏ□Ｎ１６）分子量と構造式は下記の通り。

分子量：　９ｇ４．６ ７）呈色反応：インドール塩酸反応、エルソンーモルガ
ン反応、ソモギーネルソン反応にそれぞれ陽性。

８）旋光度 〔α）′Ｄ：　＋１９０．２ ９）融点：　１６０’Ｃ以上で炭化。

１０）第１１図に紫外部吸収スペクトルを示す。

ＩＩ）第１２図に赤外部吸収スペクトルを示す。

実施例１ サブロー寒天培地（ペプトンｌＯｇ、グルコース４０ｇ
、寒天２０ｇ、精製水１００１００Ｏ，ｐＨ６，０）（
７）　２倍濃度の培地を調製し１２１’Ｃ，１５分でオ
ートクレーブで滅菌した。

別に、製造例１で製造したＰＦ−１０２、製造例２で１
１１１ｔ、た塩酸加水分解物及びその分画物で各々の分
画分子量のものまた。製造例５で調製したガラクトサミ
ンオリゴ６糖（ＧＯＳ　６）について適当な濃度の水溶
液（ｐ）１６．０）とし、同様１２１℃、１５分オート
クレーブで滅菌した。滅菌終了後、サブロー寒天培地と
各そのポリガラクトサミン及び塩酸分解物。

その分画物、ガラクトサミンオリゴ−６糖を所定の濃度
となる様に混合し、各々の寒天平板培地とした。

この平板培地上に、予め前培養した供試菌のスラントよ
り１白金耳液種し、　３０℃、７日間培養した後コロニ
ーの直径を測定し、ＰＦ−１０２及び塩酸分解物及びそ
の分画物、ＧＯ３６無添加培地でのコロニーの直径を１
００とした時の比で示した。

供試した菌株はＴｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ　ｍａｎｔａ
ｇｒｏｐｈｙｔｅｓ。

Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ　ｒｕｂｒｕ＋ｓである・結
果は第１表に示した。

対照 ＰＦ−１０２ 分解物 ５万以上 １〜５万 １万未満 Ｏ３６ 実施例２ サブロー液体培地（ペプトン１０ｇ、グルコース４０ｇ
、精製水１０００ｍＡ１．　ｐ）１６．０）の２倍濃度
の培地を調製し１５０−三角フラスコに１５ｔＱ分注し
１２１℃、１５分オートクレーブで滅菌した。別に、製
造例１で製造したＰＦ−１０２、製造例２で調製した塩
酸加水分解物及０その分画物で各々の分画分子量のもの
また。

製造例５で調製したＧＯＳ　６を適当な濃度の水溶液と
し、同様１２１℃、　１５分オートクレーブで滅菌した
。滅菌終了後、サブロー液体培地に各々のＰＦ−１０２
及び塩酸分解物、その分画物、ＧＯＳ　６を所定の濃度
となる様にサブロー液体培地に混合し各々３０−／フラ
スコの液体培地とした。

この液体培地に、予め前培養した供試菌のスラントより
１白金耳液種し、３０℃、７日間、振盪培養し、菌の増
殖の有無をｗｔ察し、増殖の認められなかった区分のＰ
Ｆ−１０２及び塩酸分解物、その分画物、ＧＯＳ　６の
濃度を最小阻止濃度として示した。

供試した菌株はＴｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ　ｍａｎｔａ
ｇｒｏｐｈｙｔｅａ。

Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ　ｒｕｂｒｕ−である。

結果は第２表に示した。

ＣａＣ１，１２＋１２０　　　　　　　０．１ｇ精製水
　　　　　　１００１００Ｏ Ｆ−１０２ 分解物 ５万以上 １〜５万 （万未満 ０５６ ０．２５ ０．１３ ０．１３ ０．２５ ０．０６ ０．１３ ０．５ ０．１３ ０．２５ ０．２５ ０．０６ ０．１３ 第３表 培地組成 グルコース ペプトン カザミノ酸 酵母エキス ａＣＩ ＫＨ，ＰＯ４ Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ２０ 第３表に示した培地組成の液体培地の２倍濃度になる様
に培地を調３１１５０ｍＮ三角フラスコに３０ｄ分注し
、１２１’Ｃ１■５分オートクレーブで滅菌した。

別に製造例１で製造したＰＦ〜１０２及び製造例２で調
製した塩酸分解物、その分画物で各々の分画分子量のも
の、製造例５で調製したＧＯ３６を適当な濃度の水溶液
とし、同様１２１℃、　１５分オートクレーブで滅菌し
た。

滅菌終了後三角フラスコの培地に各々ＰＦ−１０２塩酸
分解物、その分画物、ＧＯ５６を所定の濃度になる様に
添加混合し、各々３０−／フラスコの液体培地とした。

この液体培地に、予め前培養した供試菌のスラントより
１白金耳液種し、３０℃、６日間振盪培養し、菌の増殖
の有無を濁度計で測定し、実施例２と同様、各区分の最
小阻止濃度で示した。

供試した菌株はＣａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　Ｄ
ＣＵ（：　ｌ０ｏｌ。

Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　ＤＣＵ−Ｃ１００
２である。

結果は第４表に示した。

分解物　　　　　　０．２５　　　　　０．２５５万以
上　　　　　０．２５　　　　　０．２５工万〜５万　
　　　０．２５　　　　　０．２５１万未満　　　　　
０．２５　　　　　０．２５第７図はＰＦ−１０２の分
解物の分子量１万以上５万未満の分画物の紫外部吸収ス
ペクトルを、第８図はその赤外部吸収スペクトルを示す
図で、第９図はＰＦ−１０２の分解物の分子量１万未満
の分画物の紫外部吸収スペクトルを、第１０図はその赤
外吸収スペクトルを示す図で、第１１図はガラクトサミ
ンオリゴ−６糖の紫外部吸収スペクトルを、第１２図は
その赤外部吸収スペクトルを示す図である。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）α−１，４ポリガラクトサミン、その分解物又は
   分解物の分画物を有効成分とする抗皮膚感染症剤。
2. （２）α−１，４ポリガラクトサミンの分解物の分画物
   が分子量５万以上のα−１，４ポリガラクトサミンであ
   ることを特徴とする第１項記載の抗皮膚感染症剤。
3. （３）α−１，４ポリガラクトサミンの分解物の分画物
   が分子量１万以上５万未満のα−１，４ポリガラクトサ
   ミンであることを特徴とする第１項記載の抗皮膚感染症
   剤。
4. （４）α−１，４ポリガラクトサミンの分解物の分画物
   が分子量１万未満のα−１，４ポリガラクトサミンであ
   ることを特徴とする第１項記載の抗皮膚感染症剤。