JPS6036437A - アントラサイクリン誘導体およびその製法 - Google Patents
アントラサイクリン誘導体およびその製法Info
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- JPS6036437A JPS6036437A JP59127644A JP12764484A JPS6036437A JP S6036437 A JPS6036437 A JP S6036437A JP 59127644 A JP59127644 A JP 59127644A JP 12764484 A JP12764484 A JP 12764484A JP S6036437 A JPS6036437 A JP S6036437A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
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- C07H15/20—Carbocyclic rings
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- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は微生物ストレプトマイシス（８ｔｒθｐｔｏｒ
Ｉｖｃｅｎ ）Ｙ−１１４７２ （培養番号ＨＰＬ Ｙ
−１１４７２）、その突然変異種および変種ならびにア
ントラサイクリン型の新規抗生物質の調製へのこれら培
養物の使用に関する。
Ｉｖｃｅｎ ）Ｙ−１１４７２ （培養番号ＨＰＬ Ｙ
−１１４７２）、その突然変異種および変種ならびにア
ントラサイクリン型の新規抗生物質の調製へのこれら培
養物の使用に関する。
本発明はまたストレプトマイシスｙ−Ｎ４７２またはそ
の突然変異種および変種を発酵させ、続いて単離および
精製することによるアントラサイクリン化合物の製法に
も関する。これらの新規なアントラサイクリン化合物の
いくつかはグラム陽性細菌に対する抗菌作用の点で卓越
しておりそして種々の型の腫瘍に対しても有効である。
の突然変異種および変種を発酵させ、続いて単離および
精製することによるアントラサイクリン化合物の製法に
も関する。これらの新規なアントラサイクリン化合物の
いくつかはグラム陽性細菌に対する抗菌作用の点で卓越
しておりそして種々の型の腫瘍に対しても有効である。
これら新規化合物は式Ｉ
〔式中Ｒ１は水素または一ＯＲ３を意味し、Ｒ２は一Ｏ
Ｒ４または一〇〇ＯＲ５を表わし、ここでＲ５はＣ１−
０５−アルキルでありそしてＲ３およびＲ４は同一また
は相異なりで水素であるかまたは下記組成、すなわち｝
｛ｏａ−ｄＦ−Ｒｏｄ， Ｒｏａ−ｄＦ−ＣｉｎＡ，
１｛ｏａ−ｄＦ’＝ＣｊｎＢ， Ｒｏａ−Ｈａｄ−Ｒｏ
ｄ， ■｛ｏａ−Ｒｏｄ−ＣｉｎＡＳ｝｛ｏａ−上｛ｏ
ｄ−Ａｃｕ，ｆ｛ｏｄ−Ｒｏｄ−Ｉ｛ｏｄ，Ｒｏａ−ｄ
Ｆ−Ａｃｎ，Ｒｏａ−１｛ｏｄまたはＢｏａ−ｄＦ （
これら式中Ｉ｛ｏａはロドサミンであり，ｄＦはデオキ
シフコースであ’）、｝｛Ｏｄはロジノースであシ、Ａ
ｃｕはアキュロース（ａｃｕｌｏｓｅ）であシ、Ｃｉｎ
Ａはンネルロース（ｃｉｎｅｒｕｌｏｓｅ） Ａであ
シそしてＣｉｎ ＢはシネルロースＢであ９そしてｄＦ
−Ｃｉｎ．Ｂは２個の糖単位が通常の配糖体結合の他に
付加的なエーテル橋により結合していることを意味する
）を有する糖組る合せを表わすものとする〕で／’Ｆさ
れる一般構造を有する。
Ｒ４または一〇〇ＯＲ５を表わし、ここでＲ５はＣ１−
０５−アルキルでありそしてＲ３およびＲ４は同一また
は相異なりで水素であるかまたは下記組成、すなわち｝
｛ｏａ−ｄＦ−Ｒｏｄ， Ｒｏａ−ｄＦ−ＣｉｎＡ，
１｛ｏａ−ｄＦ’＝ＣｊｎＢ， Ｒｏａ−Ｈａｄ−Ｒｏ
ｄ， ■｛ｏａ−Ｒｏｄ−ＣｉｎＡＳ｝｛ｏａ−上｛ｏ
ｄ−Ａｃｕ，ｆ｛ｏｄ−Ｒｏｄ−Ｉ｛ｏｄ，Ｒｏａ−ｄ
Ｆ−Ａｃｎ，Ｒｏａ−１｛ｏｄまたはＢｏａ−ｄＦ （
これら式中Ｉ｛ｏａはロドサミンであり，ｄＦはデオキ
シフコースであ’）、｝｛Ｏｄはロジノースであシ、Ａ
ｃｕはアキュロース（ａｃｕｌｏｓｅ）であシ、Ｃｉｎ
Ａはンネルロース（ｃｉｎｅｒｕｌｏｓｅ） Ａであ
シそしてＣｉｎ ＢはシネルロースＢであ９そしてｄＦ
−Ｃｉｎ．Ｂは２個の糖単位が通常の配糖体結合の他に
付加的なエーテル橋により結合していることを意味する
）を有する糖組る合せを表わすものとする〕で／’Ｆさ
れる一般構造を有する。
ストレプトマイシスｙ−１１４７２は既知方法で土壌試
料から抗生物質を添加してかまたは添加せずしてｐＨ６
．５〜８．５で栄養培地を使用して単離された。好まし
くはストレプトマイシスＹ− １ １ ４７２は土壌試
料から栄養培地を使用してｐＨ６．５〜７． ０で単離
される。場合により栄養培地に添加される抗生物質とし
ては好ましくは「アンピシリン」または「アムホテリシ
ンＢ」を使用する。これら抗生物質は細菌および菌類の
生育を妨げる。
料から抗生物質を添加してかまたは添加せずしてｐＨ６
．５〜８．５で栄養培地を使用して単離された。好まし
くはストレプトマイシスＹ− １ １ ４７２は土壌試
料から栄養培地を使用してｐＨ６．５〜７． ０で単離
される。場合により栄養培地に添加される抗生物質とし
ては好ましくは「アンピシリン」または「アムホテリシ
ンＢ」を使用する。これら抗生物質は細菌および菌類の
生育を妨げる。
サラニ「ストレプトマイシン」、「ペニシリン」または
「ナイスタチン」が抗生物質として使用されうる。
「ナイスタチン」が抗生物質として使用されうる。
栄養培地は炭素源および窒素源ならびに無機栄養塩から
なる。炭素源としては葡萄糖または殿粉が適当である。
なる。炭素源としては葡萄糖または殿粉が適当である。
窒素源としてはペプトン、酵母抽出物、肉抽出物、麦芽
抽出物またはカゼインを使用しうる。固化させるには寒
天を使用しうる。無機栄養塩としては例えばナトリウム
、カリウム、マグネシウム、カルシウム、燐または硫黄
塩が適当である。
抽出物またはカゼインを使用しうる。固化させるには寒
天を使用しうる。無機栄養塩としては例えばナトリウム
、カリウム、マグネシウム、カルシウム、燐または硫黄
塩が適当である。
かくして得られた微生物ストレプトマイシスｙ−１１４
７２は１９８３年５月２４日にＤｆ３Ｍ（ＤＦ３ｕｔｓ
ａｈｅ８ａｍｍｌｕｎｇ ｖａｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａ
ｎｉ日ｍ）に受理番号Ｄ８Ｍ２６５８で寄託された。
７２は１９８３年５月２４日にＤｆ３Ｍ（ＤＦ３ｕｔｓ
ａｈｅ８ａｍｍｌｕｎｇ ｖａｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａ
ｎｉ日ｍ）に受理番号Ｄ８Ｍ２６５８で寄託された。
微生物ストレプトマイシスＹ−１１４７２は放射菌目、
ストレプトミセス科そしてストレプトマイシス屈に属す
る。種々の文献に記載されるストレプトマイシス種がア
ントラサイクリン化合物を産生ずることが知られている
。これら種のうちすでにダウノマイシンおよびアドリア
マイシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ）は癌治療のために臨
床的に人間に使用されている。
ストレプトミセス科そしてストレプトマイシス屈に属す
る。種々の文献に記載されるストレプトマイシス種がア
ントラサイクリン化合物を産生ずることが知られている
。これら種のうちすでにダウノマイシンおよびアドリア
マイシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ）は癌治療のために臨
床的に人間に使用されている。
ロドマイシン、インーロドマイシ／ンナラびにロドマイ
シン関連抗生物質はｒ Ｃｈｅｍ、 Ｂｅｒ、Ｊ第８８
巻第１７８２〜１８１Ｂ頁（１９５５年） ｓ ｒ Ｃ
ｈｅｍ。
シン関連抗生物質はｒ Ｃｈｅｍ、 Ｂｅｒ、Ｊ第８８
巻第１７８２〜１８１Ｂ頁（１９５５年） ｓ ｒ Ｃ
ｈｅｍ。
Ｂｅｒ、Ｊ第１０１巻第１３４１−１３４８頁（１９６
８年）、１−、Ｔ 、Ｍｅｄ、 Ｃｈｅｍ、 Ｊ第２０
巻第９５７−９６０頁（１９７７年）、（−Ｐｈａｒｍ
ａｃｉｅ Ｊ第２７巻第７８２−７８９頁（１９７２年
）、［ｚｅｌｔ、 ｈｌｌｇ、 ＭｉｋｒｏｂｉｏｌＪ
第１４巻第５５１〜５５８頁（１９７４年）、ｌ’−Ｔ
ｅｔｒａｈｅｄ、 Ｌｅｔｔ、Ｊ第３８巻第５６９９〜
５７０２頁（１９７３年）、［Ｆｏｌｉａ 。
８年）、１−、Ｔ 、Ｍｅｄ、 Ｃｈｅｍ、 Ｊ第２０
巻第９５７−９６０頁（１９７７年）、（−Ｐｈａｒｍ
ａｃｉｅ Ｊ第２７巻第７８２−７８９頁（１９７２年
）、［ｚｅｌｔ、 ｈｌｌｇ、 ＭｉｋｒｏｂｉｏｌＪ
第１４巻第５５１〜５５８頁（１９７４年）、ｌ’−Ｔ
ｅｔｒａｈｅｄ、 Ｌｅｔｔ、Ｊ第３８巻第５６９９〜
５７０２頁（１９７３年）、［Ｆｏｌｉａ 。
ＭｉａｒｏｂｉｏＬ Ｊ第２４巻第２９５−２９５頁（
１９７９年ンおよびｒＪ、 ＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃａＪ
第３２巻第４２０頁（１９７９年）に記載されている。
１９７９年ンおよびｒＪ、 ＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃａＪ
第３２巻第４２０頁（１９７９年）に記載されている。
アクラシノマイシン（Ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｃｉｎ）
Ａは米国特許第３，９８８，３１５号明細書ならびにＯ
ｋｉ氏他により「、Ｔ、 Ａｎｔｉｂ１ｏｔｉｃｓＪ第
２８巻第８３０％（１９７５年）および同第３２巻第７
９１〜８１２頁（１９７９年）に記載されている。
Ａは米国特許第３，９８８，３１５号明細書ならびにＯ
ｋｉ氏他により「、Ｔ、 Ａｎｔｉｂ１ｏｔｉｃｓＪ第
２８巻第８３０％（１９７５年）および同第３２巻第７
９１〜８１２頁（１９７９年）に記載されている。
シネルピン（Ｃ１ｎｅｒｕｂｉｎθ）ＡおよびＢは英国
特許第８４６，１３０号明細書、米国特許第３，８６４
，４８０号明細書、Ｋｅｌｌｅｒ−８ｃｈｉｅｒｌｅｉ
ｎ氏他著ｒＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＡｇｅｎｔｓ
ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｊ第６８頁（１９７
０年）、ｒｃｈｅｍ１ａａＩＡｂｓｔｒａｃｔａＪ第５
４巻第１４６６１頁（１９６０年〕およびｒ、ｒ、 Ａ
ｎｔｉｂｉｏｔｌｃｓＪ第２８巻第８３０頁（１９７５
年）に記載されている。
特許第８４６，１３０号明細書、米国特許第３，８６４
，４８０号明細書、Ｋｅｌｌｅｒ−８ｃｈｉｅｒｌｅｉ
ｎ氏他著ｒＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＡｇｅｎｔｓ
ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｊ第６８頁（１９７
０年）、ｒｃｈｅｍ１ａａＩＡｂｓｔｒａｃｔａＪ第５
４巻第１４６６１頁（１９６０年〕およびｒ、ｒ、 Ａ
ｎｔｉｂｉｏｔｌｃｓＪ第２８巻第８３０頁（１９７５
年）に記載されている。
他のアントラサイクリン抗生物質は梅沢浜夫氏ＭＡ ｒ
Ｉｎａｅｘ ｏｆ Ａｎｔｉ’ｂｉｏｔｉｃａ ｆｒｏ
ｍ ＡｃｔｉｎｏｍｙａｅｔｅａＪ（米国はンシルベニ
ア州立大学発行）中に下記のように詳述または要約され
ている。
Ｉｎａｅｘ ｏｆ Ａｎｔｉ’ｂｉｏｔｉｃａ ｆｒｏ
ｍ ＡｃｔｉｎｏｍｙａｅｔｅａＪ（米国はンシルベニ
ア州立大学発行）中に下記のように詳述または要約され
ている。
抗 生 物 質 頁 番 号
アクラシノマイシンＡおよびＢ １０１〜１０２アドリ
アマイシン １２２ カルミノマイシン（Ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ ）工
２２５ガリ々ビン（Ｇａｌｉｒｕｂｉｎｅ）Ｓ −Ｄ
４０５〜４０８０トマイシンｘ−Ｙ ８７９〜８８０ β−ロドマイシン ８８１〜８８５ γ−ロドマイシン ８８６〜８９２ ステフイマイシン（８ｔｅｆｆｉｍｙｃｉｎ） ９４５
Ｄａｖｉｄ ＧｏｔｔｌｉｅｂおよびＰａｕｌ Ｄ、
８ｈａｗ両氏編ｒＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ Ｊ第１巻（
Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ａａｔｉｏｎ）（１９６７
年）第１９０〜２１０頁には「ダウノマイシンおよび関
連抗生物質」なる標題を有するＡ、 ＤｉｍａＱｒＯ氏
の論文が掲載されている。
アマイシン １２２ カルミノマイシン（Ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ ）工
２２５ガリ々ビン（Ｇａｌｉｒｕｂｉｎｅ）Ｓ −Ｄ
４０５〜４０８０トマイシンｘ−Ｙ ８７９〜８８０ β−ロドマイシン ８８１〜８８５ γ−ロドマイシン ８８６〜８９２ ステフイマイシン（８ｔｅｆｆｉｍｙｃｉｎ） ９４５
Ｄａｖｉｄ ＧｏｔｔｌｉｅｂおよびＰａｕｌ Ｄ、
８ｈａｗ両氏編ｒＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ Ｊ第１巻（
Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ａａｔｉｏｎ）（１９６７
年）第１９０〜２１０頁には「ダウノマイシンおよび関
連抗生物質」なる標題を有するＡ、 ＤｉｍａＱｒＯ氏
の論文が掲載されている。
［Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｂｕｌ’１ｅｔｉｎＪ第１
０号（１９７２年１２月）にはインターナショナル・セ
ンター・オブ・アンチバイオティックス（工ｎｔｏｒｎ
ａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔ
ｉｃｓ）からＷ）１０と共同研究でアントラサイクリン
およびその誘導体についての報告がなされている。
０号（１９７２年１２月）にはインターナショナル・セ
ンター・オブ・アンチバイオティックス（工ｎｔｏｒｎ
ａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔ
ｉｃｓ）からＷ）１０と共同研究でアントラサイクリン
およびその誘導体についての報告がなされている。
ストレプトマイシスｙ−１１４７２の性質（ｉ次のとお
りである。
りである。
（ａ） 形態学
断面スパイラル。１鎖当り１０〜５０個またしまそれ以
上の胞子を有する適度に長い天然胞子鎖。この形態学は
、酵母−麦芽寒天、オートミール寒天、塩−殿粉寒天お
よびグリセロール−アスパラギン寒天上でみられる。
上の胞子を有する適度に長い天然胞子鎖。この形態学は
、酵母−麦芽寒天、オートミール寒天、塩−殿粉寒天お
よびグリセロール−アスパラギン寒天上でみられる。
（１，、） 培養特性
棺 他 生 長 裏 面
１．酵母麦芽寒天 良好、しわ、乾燥 赤色がかった紫
色２、オートミール力天 良好、平滑、乾燥 淡い桃紅
色うギン寒天 ５、馬鈴９！！−グルコーズ寒天 良好、上昇、乾燥
褐 色６、ヘゾトンー酵母鉄寒天 良好、上昇、湿潤
無色〜淡黄色７ チロシン寒天 良好、上昇、乾燥 褐
色ａ ツアペック寒天 良好、しわ、乾燥 紫 色気
菌 糸 可溶性色素 （ビンクン色 良好、粉末様、黄色がかった桃 淡い桃紅色紅色 良好、綿様、明るい黄色がかつ 淡い黄色がかった桃た
桃紅色 紅色 適度、粉末様、灰色がかった桃 淡い赤色がかった紫紅
色 色 良好、ベルベット様、淡黄色が すみれ色かった白色 な し 赤色がかった褐色 良好、綿様、明るい灰色がかつ 赤色がかった褐色た桃
紅色 適度、綿様、淡黄色がかった白 明るい紫色（Ｃ） 生
理学的性質 １、 生長に対する温度範囲：温度範囲２４〜４０℃で
酵母−麦芽寒天上で生長、３０℃ で最適な生長。
色２、オートミール力天 良好、平滑、乾燥 淡い桃紅
色うギン寒天 ５、馬鈴９！！−グルコーズ寒天 良好、上昇、乾燥
褐 色６、ヘゾトンー酵母鉄寒天 良好、上昇、湿潤
無色〜淡黄色７ チロシン寒天 良好、上昇、乾燥 褐
色ａ ツアペック寒天 良好、しわ、乾燥 紫 色気
菌 糸 可溶性色素 （ビンクン色 良好、粉末様、黄色がかった桃 淡い桃紅色紅色 良好、綿様、明るい黄色がかつ 淡い黄色がかった桃た
桃紅色 紅色 適度、粉末様、灰色がかった桃 淡い赤色がかった紫紅
色 色 良好、ベルベット様、淡黄色が すみれ色かった白色 な し 赤色がかった褐色 良好、綿様、明るい灰色がかつ 赤色がかった褐色た桃
紅色 適度、綿様、淡黄色がかった白 明るい紫色（Ｃ） 生
理学的性質 １、 生長に対する温度範囲：温度範囲２４〜４０℃で
酵母−麦芽寒天上で生長、３０℃ で最適な生長。
２、 硝酸塩還元 陽 性
５、 メラニン形成
４、 七うチン利用
５、 殿粉加水分解
６、 チロシン加水分解
Ｚ 塩化ナトリウム許容 ＞７．０％しかしく１０．０
％ａ カセイン加水分解 陽 性 ？、 ゼラチン液化 １０、ウレアーゼ生産 １１、 ストレプトマイシン阻止 １−当り１２．５μ
ｇで阻止１２、ｐｉｉ感受性 基菌糸および拡散性色素はｐＨ感受性である。
％ａ カセイン加水分解 陽 性 ？、 ゼラチン液化 １０、ウレアーゼ生産 １１、 ストレプトマイシン阻止 １−当り１２．５μ
ｇで阻止１２、ｐｉｉ感受性 基菌糸および拡散性色素はｐＨ感受性である。
アルカリ性条件下で紫色（紫色がかった赤色）そして酸
性条件下で赤色（ピンク色）（ｄ） 炎色の利用 Ｄ−グルコーグ、Ｌ−アラビノース、シュクローズ、Ｄ
−キジローズ、ｔ−イノシトール、Ｄ−マンニトール、
Ｄ−７ラクトーズ、ラムノーズ、ラフィノース、ガラク
トーズ、サリシン、アルドーズ、セロビオース、リポー
ス、グルタミン酸ナトリウムおよびソルビトールが生長
に対して使用される。セルローズが利用されるか否かは
明らかでない。
性条件下で赤色（ピンク色）（ｄ） 炎色の利用 Ｄ−グルコーグ、Ｌ−アラビノース、シュクローズ、Ｄ
−キジローズ、ｔ−イノシトール、Ｄ−マンニトール、
Ｄ−７ラクトーズ、ラムノーズ、ラフィノース、ガラク
トーズ、サリシン、アルドーズ、セロビオース、リポー
ス、グルタミン酸ナトリウムおよびソルビトールが生長
に対して使用される。セルローズが利用されるか否かは
明らかでない。
本発明はまたストレプトマイシスｙ−１１４７２を炭素
源および窒素源ならびに無機栄養塩ならびに微量元素を
含有する栄養培地中で好気性条件下に２４〜４０℃およ
びｐＨ６，５〜ａ５で発酵させそして化合物を培養液お
よび菌糸体から下記のような既知方法で単離することＫ
よるストレプトマイシスＹ−１１４７２の培養による一
般式ｌを有するアントラサイクリン種類の化合物の製造
にも関する。
源および窒素源ならびに無機栄養塩ならびに微量元素を
含有する栄養培地中で好気性条件下に２４〜４０℃およ
びｐＨ６，５〜ａ５で発酵させそして化合物を培養液お
よび菌糸体から下記のような既知方法で単離することＫ
よるストレプトマイシスＹ−１１４７２の培養による一
般式ｌを有するアントラサイクリン種類の化合物の製造
にも関する。
炭素源としては葡萄糖、殿粉、デキス） ＩＪンおよび
グリセリンが適当である。適当な窒素涼は大豆ひきわり
、酵母抽出物、肉抽出物、麦芽抽出物、コーンステイー
プリカー、Ｒプトンまタハカゼインである。無機栄養塩
としては例えば塩化ナトリウム、硫酸マグネシウムまた
は炭酸カルシウムが適当である。微量元素としては鉄、
マグネシウム、銅、亜鉛およびコバルトが使用されうる
。
グリセリンが適当である。適当な窒素涼は大豆ひきわり
、酵母抽出物、肉抽出物、麦芽抽出物、コーンステイー
プリカー、Ｒプトンまタハカゼインである。無機栄養塩
としては例えば塩化ナトリウム、硫酸マグネシウムまた
は炭酸カルシウムが適当である。微量元素としては鉄、
マグネシウム、銅、亜鉛およびコバルトが使用されうる
。
ストレプトマイシｘＹ−１１４７２は２４〜４０ｕでｐ
Ｈ６，５〜ａ５で培養されうる。好ましくはストレプト
マイシスＹ−１１４７２の培養は好気性条件下に３０℃
およびｐＨ７，０で遂行される。７２時間後、最大収率
が達成されたら発酵を停止する。
Ｈ６，５〜ａ５で培養されうる。好ましくはストレプト
マイシスＹ−１１４７２の培養は好気性条件下に３０℃
およびｐＨ７，０で遂行される。７２時間後、最大収率
が達成されたら発酵を停止する。
発酵では深部発酵が可能でまた好ましい。
発酵の進展およびアントラサイクリン化合物の形成は黄
色葡萄球菌２０９Ｐおよび枯草菌に対する培養液体の抗
菌効力を基準にし、ならびに全培養溶液（菌糸体および
培養テ液）を有機溶媒で抽出しそして赤色化合物の吸収
強度を４９４ｒａｍで測定することにより追跡されうる
。有機溶媒としては酢酸エチルの使用が好ましい。゛培
養Ｆ液および菌糸体中におけるアントラサイクリン化合
物は本発明のダイヤグラムＩに示されるスキームにより
単向１ｔされる。
色葡萄球菌２０９Ｐおよび枯草菌に対する培養液体の抗
菌効力を基準にし、ならびに全培養溶液（菌糸体および
培養テ液）を有機溶媒で抽出しそして赤色化合物の吸収
強度を４９４ｒａｍで測定することにより追跡されうる
。有機溶媒としては酢酸エチルの使用が好ましい。゛培
養Ｆ液および菌糸体中におけるアントラサイクリン化合
物は本発明のダイヤグラムＩに示されるスキームにより
単向１ｔされる。
菌糸体中のアントラサイクリン化合物を有機溶媒好まし
くはｐＨ１５に調整された水性アセトンを用いて抽出す
る。アセトンを除去した後水相のｐＨ値を１５に調整し
そして次に酢酸エチルで抽出する。培養液体はｐＨ７，
５で酢酸エチルまたはクロロホルムのような有機溶媒好
ましくは酢酸エチルを用いて抽出する。菌糸体および培
養Ｐ液からの酢酸エチル抽出液を合するかまたは別々に
後処理し、濃縮しそしてベンゼンまたはトルエンのよう
な有機溶媒中にとる。トルエンの使用が好ましい。次に
トルエン溶液をｐＨ３，５の酢酸塩緩衝液で抽出する。
くはｐＨ１５に調整された水性アセトンを用いて抽出す
る。アセトンを除去した後水相のｐＨ値を１５に調整し
そして次に酢酸エチルで抽出する。培養液体はｐＨ７，
５で酢酸エチルまたはクロロホルムのような有機溶媒好
ましくは酢酸エチルを用いて抽出する。菌糸体および培
養Ｐ液からの酢酸エチル抽出液を合するかまたは別々に
後処理し、濃縮しそしてベンゼンまたはトルエンのよう
な有機溶媒中にとる。トルエンの使用が好ましい。次に
トルエン溶液をｐＨ３，５の酢酸塩緩衝液で抽出する。
この段階でアントラサイクリン銹導体の混合物を２個の
７ラクシヨンに分ける。トルエン相中に残留する混合物
をフラクションＡとして示し、水相中に残留する配糖体
混合物をフラクションＢとして示す。
７ラクシヨンに分ける。トルエン相中に残留する混合物
をフラクションＡとして示し、水相中に残留する配糖体
混合物をフラクションＢとして示す。
フラクションＡは本発明のダイヤグラム■に示されるよ
うにしてさらに精製する。
うにしてさらに精製する。
フラクションＢは本発明のダイヤグラム■に従いさらに
イ′青製する。
イ′青製する。
ダイヤグラム■から判るように、７ラクシヨンＡは少く
とも４ ａｔ類の成分を生じ、それらから成分サイトロ
ジン（ｃｙｔｏｒｈｏｄｉｎ ） Ｊがｉ 段階のり四
マドグラフィーにより富化されそして終りに純粋な形態
で単離されうる。
とも４ ａｔ類の成分を生じ、それらから成分サイトロ
ジン（ｃｙｔｏｒｈｏｄｉｎ ） Ｊがｉ 段階のり四
マドグラフィーにより富化されそして終りに純粋な形態
で単離されうる。
ダイヤグラムｍに示されるように、フラクションＢから
サイトロジンＡ％Ｂ％Ｃ％Ｄ、 Ｋ、 ｙ、混合物Ｇ＋
Ｉ（１：１）、Ｈ，Ｋ、 Ｌ、 Ｍ、混合物Ｎ十〇、ｐ
、 ｖおよびＷが得られる。フラクション「Ｘ」および
「Ｙ」はまだ研究されてない他のアントラサイクリン化
合物の混合物に関する。それらの−殻構造は式Ｉに相当
する。
サイトロジンＡ％Ｂ％Ｃ％Ｄ、 Ｋ、 ｙ、混合物Ｇ＋
Ｉ（１：１）、Ｈ，Ｋ、 Ｌ、 Ｍ、混合物Ｎ十〇、ｐ
、 ｖおよびＷが得られる。フラクション「Ｘ」および
「Ｙ」はまだ研究されてない他のアントラサイクリン化
合物の混合物に関する。それらの−殻構造は式Ｉに相当
する。
ストレプトマイシスＹ−１１４７２の培養溶液から単離
されそしてダイヤグラムｌに従い精製される化合物は一
般式！を有する 本発明による化合物のいくつかは式■ （式中Ｒ３およびＲ４は前記した意味を有する）で表わ
される構造を有する。
されそしてダイヤグラムｌに従い精製される化合物は一
般式！を有する 本発明による化合物のいくつかは式■ （式中Ｒ３およびＲ４は前記した意味を有する）で表わ
される構造を有する。
ダイヤグラム■
ストレプトマイシスＹ−１１４７２
からの抗生物質複合物の単離
菌糸体 培養ｐ液
粗製残留物
フラクションＡ フラクションＢ
ダイヤグラム■
粗製フラクションＡ；５ｙ
シリカゲルでの分取用
薄層クロマトグラフィー、
ＣＨＣｌ３中４％メタノール
サイトロジン（Ｃ７ｔｏｒｈｏｄｉｎ） Ｊ収量 １５
ｍ２ ダイヤグラム■ 水相Ｂの後処理 本発明による他の化合物は式■ （式中Ｒ４は前記の意味を有する）で示される構造、な
らびに式■ （式中Ｒ３およびＲ５は前記の意味を有する）で示され
る構造を有する。
ｍ２ ダイヤグラム■ 水相Ｂの後処理 本発明による他の化合物は式■ （式中Ｒ４は前記の意味を有する）で示される構造、な
らびに式■ （式中Ｒ３およびＲ５は前記の意味を有する）で示され
る構造を有する。
特に好ましい本発明による化合物は式■（式中Ｒ３およ
びＲ４は下記に示される意味を有する〕を有するもので
ある。
びＲ４は下記に示される意味を有する〕を有するもので
ある。
化合物 Ｒ３〜
（式 Ｘ） （式 Ｘ）
特に好ましい他の化合物は一般式■
（式中Ｒ４は下記の意味すなわち
化合物 Ｒ４
（式Ｘ）
（式Ｘ１ｌｌ ）
を有する）を有するサイトロジンならびに一般式■
〔式中Ｒ５はメチルでありそしてＲ５は糖組み合せＲｏ
ｄ−Ｒｏｄ−Ｒｏｄ （式■）を意味する〕を有するサ
イトロジンＪである。前記した糖組み合せは下記構造式
（ｖ〜■）を有する。
ｄ−Ｒｏｄ−Ｒｏｄ （式■）を意味する〕を有するサ
イトロジンＪである。前記した糖組み合せは下記構造式
（ｖ〜■）を有する。
（■）
Ｎ（ＣＨ，）２
（■）
（Ｅ）０
本発明によるアントラサイクリン化合物はグラム陽性細
菌に対する強力な作用および顕著な細胞増殖抑制（ｃｙ
ｔｏｏｔａｔｉｃ ）作用ゆえに優れている。
菌に対する強力な作用および顕著な細胞増殖抑制（ｃｙ
ｔｏｏｔａｔｉｃ ）作用ゆえに優れている。
本発明を下記の例により詳細に説明する。
例 １
土壌からのストレプトミセスＹ−１１４７２（Ｄ単離（
ａ） 単離用栄養培地の潤製 培地１ニゲルコース １．０２ グリセロール １．０ｊｌ Ｌ−アルキニン ｏ、３２ に２ＨＰＯ４０，３９ Ｍｇ８０４ ・７Ｈ２００，２９ ＮａＣＩＩ ０．５ ｐ 酵母エキス ２．０ＪＩ Ｆｆ！、２（ＳＯ４）３１０９ Ｃ！ｕ８０４ Ｈ５Ｈ２０１１％ｌ ＺｎＳＯ４・７Ｈ２０１キ ＭｎＳＯ４・７Ｈ２０１ｑ 寒 天 １５ｊ１ 蒸留水 １ぶ ｐＨ６，ｓ 培地２ニゲルコース ２． Ｏｐ Ｌ−アスパラギン １． Ｏｐ Ｋ２ＨＰＯ４０，ｓ １ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，５ｊ’ 土壌エキス ２００＋１１ｆｉ 寒天 １５２ 蒸留水 ８００雌 ｐＨ８，。
ａ） 単離用栄養培地の潤製 培地１ニゲルコース １．０２ グリセロール １．０ｊｌ Ｌ−アルキニン ｏ、３２ に２ＨＰＯ４０，３９ Ｍｇ８０４ ・７Ｈ２００，２９ ＮａＣＩＩ ０．５ ｐ 酵母エキス ２．０ＪＩ Ｆｆ！、２（ＳＯ４）３１０９ Ｃ！ｕ８０４ Ｈ５Ｈ２０１１％ｌ ＺｎＳＯ４・７Ｈ２０１キ ＭｎＳＯ４・７Ｈ２０１ｑ 寒 天 １５ｊ１ 蒸留水 １ぶ ｐＨ６，ｓ 培地２ニゲルコース ２． Ｏｐ Ｌ−アスパラギン １． Ｏｐ Ｋ２ＨＰＯ４０，ｓ １ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，５ｊ’ 土壌エキス ２００＋１１ｆｉ 寒天 １５２ 蒸留水 ８００雌 ｐＨ８，。
培地６；殿 粉 １０．ＯＦ
カ ゼ イ ン ０６Ｆ
ＫＮＯ３２，０２
ＮａＣＩｌ ２．Ｄ ＪＪ
Ｋ２ＨＰＯ４２，Ｏ９
ＭｇＳＯ４０，０５９
０ａＣＯ５０，０２り
ＦｅＳＯ４０，０ｉ ｐ
寒天 １５２
蒸留水 １Ｃ
ｐＨ７，２〜Ｚ５
培地は１２１℃で％時間滅菌する。
（ｂ） 土壌試料の懸濁液の製造
土壌試料１ｊ’を空気中で乾燥し、乳鉢中で粉砕しそし
て１２０℃で１時間加熱する。このよ１に処理した土壌
試料を蒸留水に懸濁しそして充分に伽脆する。次に土を
沈降させそして上澄液体を早船用の上記培地に対する接
種体として使用する。
て１２０℃で１時間加熱する。このよ１に処理した土壌
試料を蒸留水に懸濁しそして充分に伽脆する。次に土を
沈降させそして上澄液体を早船用の上記培地に対する接
種体として使用する。
（Ｃｌ Ｊｌｉ ｔＷｆ用培地の接種
土壌試料の懸濁液１峨を、単離用の上記培地それぞれ５
０ｍＱを含有するベトリ皿上に接種する （ｄＪ ストレプトミセスＹ−１１４７２の単離接種し
たベトリ皿を６７℃で２週間培養しそしてストレプトミ
セスＹ−１１４７２を既知の方法で生長した微生物から
単離する。
０ｍＱを含有するベトリ皿上に接種する （ｄＪ ストレプトミセスＹ−１１４７２の単離接種し
たベトリ皿を６７℃で２週間培養しそしてストレプトミ
セスＹ−１１４７２を既知の方法で生長した微生物から
単離する。
例 ２
抗生物質複合体の８醇生産のためのストレプトミセスＹ
−１１４７２の培養 ストレプトミセス！−１１４７２を次の組成の醇母−麦
芽寒天に加える。
−１１４７２の培養 ストレプトミセス！−１１４７２を次の組成の醇母−麦
芽寒天に加える。
麦芽エキス １０．Ｏｊｌ
酵母エキス ４．Ｏｐ
グルコース ４． ＯｊＩ
寒天 １５．０ア
蒸留水 １℃
ｐＨ７，０
この培地を試験管に入れそして１２１℃で６０分滅菌し
、次に管を傾斜して冷却せしめて斜面培養基を製造し、
培養菌で接種しそしＣ２８℃で１０〜１５日間培養する
。この時間の終りには良好な生長および良好な胞子形成
が見出される。
、次に管を傾斜して冷却せしめて斜面培養基を製造し、
培養菌で接種しそしＣ２８℃で１０〜１５日間培養する
。この時間の終りには良好な生長および良好な胞子形成
が見出される。
斜面管からの蒸留水中の胞子の懸濁液を、接種培地それ
ぞれ１００譲を含有する５個の円錐７ジスコまたは同じ
保存培養培地１ｋを含有する１個の５にの吸引フラスコ
に対する接種体とじて使用する。
ぞれ１００譲を含有する５個の円錐７ジスコまたは同じ
保存培養培地１ｋを含有する１個の５にの吸引フラスコ
に対する接種体とじて使用する。
種子培養培地の組成
グルコース ｉｓ、ｏｊＩ
大豆粉 １５．ＯＦ
玉蜀黍浸出液 ５．０９
０ａＯ０５２，０９
ＮａＣＩｌ ５．Ｏｊ９
蒸留水 １β
ｐＨ７，０
上記培地１００１１１ｆｆｉを多数の５００ｍ１１の円
錐フラスコのそれぞれに入れるかまたは該培地１ぶを５
１の吸引フラスコに注入しそしてこの培地を１２１℃で
３０分誠菌する。フラスコを冷却し、胞子の懸濁液で接
種しそして６．７５ｏｎの手振幅で操作される回転撮盪
機中で２４ Ｏｒｌ）ｍおよび３０℃で７２時間伽盪す
る。生長培養物を５容量チ保存培養培地１０Ｊｌを含有
する１５１のカラス製醗酵器に対する接種体として使用
して第２段階の接種体を製造する。ＮＩ＃は６〜７１／
分の通気速度を使用して１６０〜１８０ ｒｐｍで攪拌
しながら２６℃（１１℃）で実施する。それによって得
られたよ（生長した接種体を生産培地に対する接種体と
して使用する。
錐フラスコのそれぞれに入れるかまたは該培地１ぶを５
１の吸引フラスコに注入しそしてこの培地を１２１℃で
３０分誠菌する。フラスコを冷却し、胞子の懸濁液で接
種しそして６．７５ｏｎの手振幅で操作される回転撮盪
機中で２４ Ｏｒｌ）ｍおよび３０℃で７２時間伽盪す
る。生長培養物を５容量チ保存培養培地１０Ｊｌを含有
する１５１のカラス製醗酵器に対する接種体として使用
して第２段階の接種体を製造する。ＮＩ＃は６〜７１／
分の通気速度を使用して１６０〜１８０ ｒｐｍで攪拌
しながら２６℃（１１℃）で実施する。それによって得
られたよ（生長した接種体を生産培地に対する接種体と
して使用する。
生産培地の組成
グルコース ２０．Ｏｊ’
麦芽エキス １０・０夕
酵母エキス ４． ［） ｐ
蒸留水 １ｉ
ｐＨ６，８
デス％７エン（Ｄθｓｍｏｐｈθｎ”） ０．０２５
％を醗酵器中のバッチに消泡剤として加える。
％を醗酵器中のバッチに消泡剤として加える。
上記培地２６０１を６９０βの醗酵器に入れる。
培地を１２１℃で２８分間蒸気によって間接的および直
接的に滅菌する。醗酵器を冷却しそして第２段階（５容
量チ）からの接種体で接種する。
接的に滅菌する。醗酵器を冷却しそして第２段階（５容
量チ）からの接種体で接種する。
＃Ｍ酵を１ ： ０．６ＶＶＭ（９〜１０ｍ５／ｈ）Ｉ
）通気速度で１００〜２００ ｒｐｍで攪拌しながら６
８〜７２時間２６℃（１１℃）で実施する。６８〜７２
時間後に醗酵を中止した場合、抗生物質の濃度は１００
〜１５０μｇ／緘でありそして培養からの液体のｐＨは
５．５−６．０である。培養からの溶液中の残留糖含量
は０，０３〜０．５％でありそして菌糸体の湿潤重量は
６〜４ｊｌ／ＶＯ１，−饅である。
）通気速度で１００〜２００ ｒｐｍで攪拌しながら６
８〜７２時間２６℃（１１℃）で実施する。６８〜７２
時間後に醗酵を中止した場合、抗生物質の濃度は１００
〜１５０μｇ／緘でありそして培養からの液体のｐＨは
５．５−６．０である。培養からの溶液中の残留糖含量
は０，０３〜０．５％でありそして菌糸体の湿潤重量は
６〜４ｊｌ／ＶＯ１，−饅である。
例 ６
抗生物質複合体の醗酵的製造のためのストレプトミセス
Ｙ−１１４７２の培養 （ａＨｌ） 種子培養培地の組成 ひよこまめ（ｇｒａｍ）種子粉末 １０．ＯＦデキスト
ロース １０．０ｐ Ｎａ（’４１ ５． Ｏｐ ＯａｏｏＢ ５．０１） 蒸留水 １ｋ ｐＨ７，０ ３０℃で７２時間 （２）生産培地の組成 殿粉 １０．０タ グル コ − ス １００２ 麦芽エキス ７．５Ｆ ベ プ ト ン ７．５９ ＮａＯＡ ３．０９ ＭｇＳＯ４１，Ｏｊｌ 肚２ＰＯ４２，０９ ０ｕＳＯ４Ｈ５Ｈ２００，００７ｊ’ Ｆθ８０４・７Ｈ２００，００１５１ ＭｎＳＯ４・４Ｈ２００，００８ｊＩ Ｚｎ８０４ ・７Ｈ２０Ｄ、Ｄ ０２ ｐ蒸留水 １μ ｐＨ７，０ 醗酵期間二８８〜９６時間 （１））＋１） 種子培地の組成 麦芽エキス ｉｏ、ｏｐ 酵母エキス ４．Ｏｊｌ グルコース ４．０９ ？′Ａ留水 １！ ｐＨ７０ ６０℃で７２時間 （２）生産培地の組成 殿粉 ｉｏ、ｏ９ グルコース １０．Ｏｊｌ 大豆粉 １５．０ｊｌ Ｋ２王（ＰＯ４１，Ｏｊ１ ＭｇＳｏ４１．ＯＰ ｔｑａｏｘ ３．Ｏｐ ＯｕＳＯ４・５Ｈ２００，００７ｊ’ Ｆθ８０４・７Ｈ２００，００１ｊ１ ＭｎＯｊ！２ ・４Ｈ２００，００８ｊ１ＺｎＳＯ４・
７Ｈ２００，００２９ 蒸留水 １２ ｐＨ７０ ８８〜９６時間後に収穫 例 ４ アントラサイクリン化合物の粗製混合物の単離６００λ
の醗酵器からの培養物約２５０Ｌを遠心処理する。
Ｙ−１１４７２の培養 （ａＨｌ） 種子培養培地の組成 ひよこまめ（ｇｒａｍ）種子粉末 １０．ＯＦデキスト
ロース １０．０ｐ Ｎａ（’４１ ５． Ｏｐ ＯａｏｏＢ ５．０１） 蒸留水 １ｋ ｐＨ７，０ ３０℃で７２時間 （２）生産培地の組成 殿粉 １０．０タ グル コ − ス １００２ 麦芽エキス ７．５Ｆ ベ プ ト ン ７．５９ ＮａＯＡ ３．０９ ＭｇＳＯ４１，Ｏｊｌ 肚２ＰＯ４２，０９ ０ｕＳＯ４Ｈ５Ｈ２００，００７ｊ’ Ｆθ８０４・７Ｈ２００，００１５１ ＭｎＳＯ４・４Ｈ２００，００８ｊＩ Ｚｎ８０４ ・７Ｈ２０Ｄ、Ｄ ０２ ｐ蒸留水 １μ ｐＨ７，０ 醗酵期間二８８〜９６時間 （１））＋１） 種子培地の組成 麦芽エキス ｉｏ、ｏｐ 酵母エキス ４．Ｏｊｌ グルコース ４．０９ ？′Ａ留水 １！ ｐＨ７０ ６０℃で７２時間 （２）生産培地の組成 殿粉 ｉｏ、ｏ９ グルコース １０．Ｏｊｌ 大豆粉 １５．０ｊｌ Ｋ２王（ＰＯ４１，Ｏｊ１ ＭｇＳｏ４１．ＯＰ ｔｑａｏｘ ３．Ｏｐ ＯｕＳＯ４・５Ｈ２００，００７ｊ’ Ｆθ８０４・７Ｈ２００，００１ｊ１ ＭｎＯｊ！２ ・４Ｈ２００，００８ｊ１ＺｎＳＯ４・
７Ｈ２００，００２９ 蒸留水 １２ ｐＨ７０ ８８〜９６時間後に収穫 例 ４ アントラサイクリン化合物の粗製混合物の単離６００λ
の醗酵器からの培養物約２５０Ｌを遠心処理する。
（ａ） 培養物からのＰ液２００ｋをＮａＯＨでｐＨ７
，５に調整しそしてそれぞれ酢酸エチル５０Ａで２回抽
出し次に有機相を真空濃縮する。この間に分離した水性
相を除去しそして酢酸エチルで６回抽出する。合した有
機相を真空蒸発乾個し、残留物をトルエン６５０緘に溶
解しそして溶液をそれぞれｐＨ３，５の酢酸ナトリウム
緩衝液３００ｍ１！で５回抽出しそしてトルエン相を真
空蒸発する（赤色油状残留物、）２クシヨンＡ）。合し
た水性相を２Ｎ ＮａＯＨでｐＨ７，５にｇ４１ｉＬ、
そして酢酸エチル４００緘で４回抽出する。除去した酢
酸エチル相を真空蒸発乾個する（深赤色の固体残留物０
．７ｊ１．７ラクシヨンＢ）。
，５に調整しそしてそれぞれ酢酸エチル５０Ａで２回抽
出し次に有機相を真空濃縮する。この間に分離した水性
相を除去しそして酢酸エチルで６回抽出する。合した有
機相を真空蒸発乾個し、残留物をトルエン６５０緘に溶
解しそして溶液をそれぞれｐＨ３，５の酢酸ナトリウム
緩衝液３００ｍ１！で５回抽出しそしてトルエン相を真
空蒸発する（赤色油状残留物、）２クシヨンＡ）。合し
た水性相を２Ｎ ＮａＯＨでｐＨ７，５にｇ４１ｉＬ、
そして酢酸エチル４００緘で４回抽出する。除去した酢
酸エチル相を真空蒸発乾個する（深赤色の固体残留物０
．７ｊ１．７ラクシヨンＢ）。
（１）） 固体の薗、糸９５＃をそれぞれｐＨ３，５の
アセトン／酢酸エチル緩衝液（１０：１） ５０ ｍで
２回抽出し、合した抽出液を真空で１２１ｐＨ３，５）
Ｋ濃縮し、濃縮物をトルエン４Ｌで６回洗浄しそしてト
ルエン相を合しそして真空濃縮して油状の深赤色残留物
を得る。水性相を濃ＮａＯＨで１）］（７，５Ｋ 調整
し、それぞれ酢酸エチル４Ｌで６回抽出しそして合した
酢酸エチル相を真空蒸発する。深赤色の固体残留物（フ
ラクションＢ）１．９８ｊｌを得る。
アセトン／酢酸エチル緩衝液（１０：１） ５０ ｍで
２回抽出し、合した抽出液を真空で１２１ｐＨ３，５）
Ｋ濃縮し、濃縮物をトルエン４Ｌで６回洗浄しそしてト
ルエン相を合しそして真空濃縮して油状の深赤色残留物
を得る。水性相を濃ＮａＯＨで１）］（７，５Ｋ 調整
し、それぞれ酢酸エチル４Ｌで６回抽出しそして合した
酢酸エチル相を真空蒸発する。深赤色の固体残留物（フ
ラクションＢ）１．９８ｊｌを得る。
（Ｃ）更に他の単離方法はダイアグラム１〜■から明ら
かである。例えば化合物サイトロジンＪは、カラムクロ
マドグ２フイー処理（ダイアグラム■）から得られた部
分的に精製された７ラクシヨンＡ３の分取薄層クロマド
グ２フイーによって得られる。
かである。例えば化合物サイトロジンＪは、カラムクロ
マドグ２フイー処理（ダイアグラム■）から得られた部
分的に精製された７ラクシヨンＡ３の分取薄層クロマド
グ２フイーによって得られる。
サイトロジンＡ、 Ｂ、 Ｏ，ｐｃ％Ｆ％Ｈ，Ｋ、 Ｌ
％Ｍ、 Ｐ、 ＶおよびＷおよびＧ＋１およびＮ十〇の
１：１混合物は、トルエンおよびメタノール−水量の分
配またはシリカゲル上または逆相吸着剤またはＤＯＯＣ
〔小滴向流クロマトグラフィー（ｄｒｏｐｌｅｔ ｃｏ
ｕｎｔｅｒｃｕｒｒｅｎｔ ｃｈｒｏｍａｔ、ｏｇｒａ
ｓｐｈｙ））上のグリコシドに富んだクラクション（ダ
イアグラム■）の反復クロマトグラフィーにより単離さ
れる。精製の最後の段階は分取薄層クロマトグラフィー
および高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ） Ｋよ
って実施される。ＨＰＬＯはミクロボラシル（Ｍｉｃｒ
ｏｐｏｒａｓｉｌ■ン（ウオーターズ社製品ンまたはり
クロンルブ（Ｌｉａｈｒｏｓｏｒｂ＠）Ｓｉ ６Ｑ （
メルク社製品）を含有するカラムおよび６８：２０：１
０：２：０．０１の比のクロロホルム／メタノール１０
「酸／水／トリエチルアミンの組成の移動相を使用して
実施される。流速は１分画り０．５〜１．５緘に固定さ
れそして検出はフローフォトメーター中において２５４
．２６０ または４９０ ｎｍにおけるＵＶ吸収によっ
て実施される。
％Ｍ、 Ｐ、 ＶおよびＷおよびＧ＋１およびＮ十〇の
１：１混合物は、トルエンおよびメタノール−水量の分
配またはシリカゲル上または逆相吸着剤またはＤＯＯＣ
〔小滴向流クロマトグラフィー（ｄｒｏｐｌｅｔ ｃｏ
ｕｎｔｅｒｃｕｒｒｅｎｔ ｃｈｒｏｍａｔ、ｏｇｒａ
ｓｐｈｙ））上のグリコシドに富んだクラクション（ダ
イアグラム■）の反復クロマトグラフィーにより単離さ
れる。精製の最後の段階は分取薄層クロマトグラフィー
および高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ） Ｋよ
って実施される。ＨＰＬＯはミクロボラシル（Ｍｉｃｒ
ｏｐｏｒａｓｉｌ■ン（ウオーターズ社製品ンまたはり
クロンルブ（Ｌｉａｈｒｏｓｏｒｂ＠）Ｓｉ ６Ｑ （
メルク社製品）を含有するカラムおよび６８：２０：１
０：２：０．０１の比のクロロホルム／メタノール１０
「酸／水／トリエチルアミンの組成の移動相を使用して
実施される。流速は１分画り０．５〜１．５緘に固定さ
れそして検出はフローフォトメーター中において２５４
．２６０ または４９０ ｎｍにおけるＵＶ吸収によっ
て実施される。
例 ５
サイトロジンＪ（式■中Ｒ５＝ＲＱｄ−Ｒｏｄ−Ｒｏｄ
およびＲ５＝０１■５）の確認 １５ｉノをタイアゲラムＨに示されたようにし゛〔単離
する。
およびＲ５＝０１■５）の確認 １５ｉノをタイアゲラムＨに示されたようにし゛〔単離
する。
融点：１２８〜１３０℃
吸収スペクトル（メタノール） ： ２４２．２８４゜
４９２、 ５１０． ５２２および５５８ｎｍ’ ）Ｌ
−ＮＭｋ’ｚ δ値（ｐｐｍ） ； １．１〜１．２２（１２Ｈ，ｒｎ
、、４ｘ ０Ｈｓ）１．７５〜２２５（１４Ｉ（、ｍ、
７ｘ −０Ｈ２−ン２．３６（２Ｈ％ｍ、 −０Ｈ２−
） ′５．５１−３．６（３Ｈ％ｍ１４’、４−４″’ −
Ｈ）３．７（３Ｈ，ｓ、−０Ｏ００Ｈ５） ３．９４〜４．１２（３Ｈ，ｍ、 ５’、５’、 ５”
’ −Ｈ）４．３（ＩＨ，ｅ、０１０−Ｈ） ４．８３〜４．８６（２Ｈ％ｍ、 １’、１″′−Ｈ）
５．２８（ＩＨ，ｂｒ、０７−Ｈ） ５．４５（ＩＨ，ｂｒ、 Ｃ！１’ −Ｈ）７．３４（
ＩＨ１ｃ１％Ｊ−８Ｈ２，０ＩＨ）例 ６ 粗製混合物としての化合物サイトロジンＡ、 Ｂおよび
Ｈの分離 ダイアグラムＩに記載したような培養物からの溶液の抽
出によって得られたサイトロジンの粗製混合物１．ＯＦ
を８０：５：５：１ ：０．０１の０ＨＯＩ！、３／メ
タノール／９６チ酢酸／水／トリエチルアミン混合物（
系Ｂ）を使用して３Ｘ４３ａｎのガラスカラム中の３１
μシリカゲル１００Ｐ上でクロマドグ２フイー処理する
。試料を移動相７緘に溶解し。
４９２、 ５１０． ５２２および５５８ｎｍ’ ）Ｌ
−ＮＭｋ’ｚ δ値（ｐｐｍ） ； １．１〜１．２２（１２Ｈ，ｒｎ
、、４ｘ ０Ｈｓ）１．７５〜２２５（１４Ｉ（、ｍ、
７ｘ −０Ｈ２−ン２．３６（２Ｈ％ｍ、 −０Ｈ２−
） ′５．５１−３．６（３Ｈ％ｍ１４’、４−４″’ −
Ｈ）３．７（３Ｈ，ｓ、−０Ｏ００Ｈ５） ３．９４〜４．１２（３Ｈ，ｍ、 ５’、５’、 ５”
’ −Ｈ）４．３（ＩＨ，ｅ、０１０−Ｈ） ４．８３〜４．８６（２Ｈ％ｍ、 １’、１″′−Ｈ）
５．２８（ＩＨ，ｂｒ、０７−Ｈ） ５．４５（ＩＨ，ｂｒ、 Ｃ！１’ −Ｈ）７．３４（
ＩＨ１ｃ１％Ｊ−８Ｈ２，０ＩＨ）例 ６ 粗製混合物としての化合物サイトロジンＡ、 Ｂおよび
Ｈの分離 ダイアグラムＩに記載したような培養物からの溶液の抽
出によって得られたサイトロジンの粗製混合物１．ＯＦ
を８０：５：５：１ ：０．０１の０ＨＯＩ！、３／メ
タノール／９６チ酢酸／水／トリエチルアミン混合物（
系Ｂ）を使用して３Ｘ４３ａｎのガラスカラム中の３１
μシリカゲル１００Ｐ上でクロマドグ２フイー処理する
。試料を移動相７緘に溶解し。
平衡化カラムに適用しそして各２３緘の７ラクシヨンを
集めそして８０７１０：１０：２：０．０１の０ＨＯＪ
ｔ５ ／メタノール／９６％俳酸／水／トリエチルアミ
ン混合物（系Ｂ）を使用して予備被榎したＴＬＯプレー
トまたはシートシリカゲ／Ｉ／６０Ｆ２５４ （メルク
社製品）上で薄層クロマトグラフィー処理することによ
って評価する。
集めそして８０７１０：１０：２：０．０１の０ＨＯＪ
ｔ５ ／メタノール／９６％俳酸／水／トリエチルアミ
ン混合物（系Ｂ）を使用して予備被榎したＴＬＯプレー
トまたはシートシリカゲ／Ｉ／６０Ｆ２５４ （メルク
社製品）上で薄層クロマトグラフィー処理することによ
って評価する。
１４０〜２２０ １８９キ化合物、Ａ、 Ｂ、 Ｈ，Ｍ
の混合物２２１〜２８８ １３８■ 極性生成物の混合
物（フラクションＹ）更に同様な方法でサイトロジン生
成物の粗製混合物を使用してカラムクロマトグラフィー
処理を実施する。同じ組成を有する混合７２クシヨンを
ｊｌ！にスチールカラム中における工１ＰＬＯによって
分離する。
の混合物２２１〜２８８ １３８■ 極性生成物の混合
物（フラクションＹ）更に同様な方法でサイトロジン生
成物の粗製混合物を使用してカラムクロマトグラフィー
処理を実施する。同じ組成を有する混合７２クシヨンを
ｊｌ！にスチールカラム中における工１ＰＬＯによって
分離する。
例 ７
高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＯ）による個個の
成分サイトロジンＡ、ＢおよびＨの単離サイトロジンＡ
％ ＢおよびＨな含有する混合フラクション５２．５岬
を系Ｂ（例６）２雌に溶解しそして加圧下で７μリクロ
ソルブ■５１６０を充填しそして上記移動相で平衡化し
たスチールカラム（２，Ｉ Ｘ ２５ｃｍ） Ｋ適用す
る。溶離は５峨／分の流速で実施しセして４９０ ｎｍ
の波長で７０−スベク）ａフォトメーターで追跡し、各
４雌の７２クシヨンを集めそして分析用ＨＰＬＯで検査
した後金する。
成分サイトロジンＡ、ＢおよびＨの単離サイトロジンＡ
％ ＢおよびＨな含有する混合フラクション５２．５岬
を系Ｂ（例６）２雌に溶解しそして加圧下で７μリクロ
ソルブ■５１６０を充填しそして上記移動相で平衡化し
たスチールカラム（２，Ｉ Ｘ ２５ｃｍ） Ｋ適用す
る。溶離は５峨／分の流速で実施しセして４９０ ｎｍ
の波長で７０−スベク）ａフォトメーターで追跡し、各
４雌の７２クシヨンを集めそして分析用ＨＰＬＯで検査
した後金する。
７ラクシヨｎ 化 合 物 系Ｂ中のＲｆ１９〜２２
６ｇ５ サイトロジンＢ Ｏ，３３２３〜２７ ７岬
混合クラクション（サ ０．６イトロジンＢ＋Ｈ＋Ａ） ２８〜３７ １５ｍ１ｊｌ サイトロジンＡ Ｏ，２７
化合物サイトロジンＨを単離するためにいくつかの方法
からの混合フラクションを同じ方法で書りロマトグラノ
イー処理する。
６ｇ５ サイトロジンＢ Ｏ，３３２３〜２７ ７岬
混合クラクション（サ ０．６イトロジンＢ＋Ｈ＋Ａ） ２８〜３７ １５ｍ１ｊｌ サイトロジンＡ Ｏ，２７
化合物サイトロジンＨを単離するためにいくつかの方法
からの混合フラクションを同じ方法で書りロマトグラノ
イー処理する。
い（つかのクロマトゲランイ一方法からの純粋な個々の
成分を合しそして次の方法によって杓び鞘！８！する。
成分を合しそして次の方法によって杓び鞘！８！する。
記載したような反復カラムクロマトグラフイーによって
単＃：ｆ：されたサイトロジンＡの合したバッチ１ンＯ
町をｐＨ３，５の自［酸ナトリウム緩衝液３ＱｍｆｌＫ
溶解し、溶液を２Ｎ ＮａＯＨでｐＨ７，８にＮＪ１７
しそしてぞれぞれ酢酸エチル１５１１１ｆｌで４回抽出
しぞ［７て合した有機相なＥＤＴＡの０．旧］１モル濃
ｊ隻溶液（ｐＨ７，５） １ ｒｎＱで１回そして次に
それぞれ水ン叫で２回洗浄し、 Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥
し、沖過ｊ〜そして真空ｋ（発する。残留物を少量のａ
（ＣＩβ３に溶ｎ’ｆ ｔ、ぞして溶液をガラスフリッ
トを通して吸引び・過しそしてヘプタンを加えた後乳白
色となるまで真空蒸発する。
単＃：ｆ：されたサイトロジンＡの合したバッチ１ンＯ
町をｐＨ３，５の自［酸ナトリウム緩衝液３ＱｍｆｌＫ
溶解し、溶液を２Ｎ ＮａＯＨでｐＨ７，８にＮＪ１７
しそしてぞれぞれ酢酸エチル１５１１１ｆｌで４回抽出
しぞ［７て合した有機相なＥＤＴＡの０．旧］１モル濃
ｊ隻溶液（ｐＨ７，５） １ ｒｎＱで１回そして次に
それぞれ水ン叫で２回洗浄し、 Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥
し、沖過ｊ〜そして真空ｋ（発する。残留物を少量のａ
（ＣＩβ３に溶ｎ’ｆ ｔ、ぞして溶液をガラスフリッ
トを通して吸引び・過しそしてヘプタンを加えた後乳白
色となるまで真空蒸発する。
Ａ ： ＩＨ−ＮＭＲ（第１図参照）
吸収スペクトル
（ａ）２３５（４，６２）、 ２５３（ｓｈ）、 ２９
”Ｃ３Ｂ７）、４９５（４，１１）（１））２３５ （
４，６２）、２５５ （ｓｈ）、２９６（３，９２）、
４９７（４，１７）（ｏ）２４３（４，６３） −２８
０（３，９５）、 ３０５（３，９１）５７５および６
１０（４，１５ン ０６ ｏＩ（ｓ ８Ｎ２０２０計算分子ｉ： １１５６
（Ｆ’ＡＢ−ＭＳＫより確認）Ｂ ： １Ｈ−ＮＭＲ（
第２図参照） 吸収スペクトル （ａ）２３５ （４，５２） ｂ ２５２ （ｓｈ）、
２９７（３８３）、４９５（５，９４）（ｂ）２３６（
４，５２）、 ２５３（ｓｈ）、 ２９５（３，８９）
、ａ９５（４ｏｓ）（Ｃシ４２（４，４０） −２８０
（３，８９）、６０５（３，６９，）６１０（３，８３
） ０６０Ｈ８６Ｎ２０２１計算分子量： １１７０（ＦＡ
Ｂ−ＭＳにより確認）Ｈ： ＩＨ−ＮＭＲ（第６図参照
） 分子量ＭＷ１１５０〜１３００（ＦＡＢ−ＭＳ）例 ８ 分取高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によるサ
イトロジンＥの単離 粗製サイトロジン６ｏ■を４００二２５：５０：５：０
．０５のＯＨＯλ３／メタノール／９６嘩酢酸／水／ト
リエチルアミン混合物０．５１１１ｆｆｉ Ｋ溶解しそ
してシリカゲル７μリクロソルブ■６０（メルク）約４
０５１を充填した２、５Ｘ３０ｃｔＲのスチールカラム
に適用しそして６緘／分の流速で上記混合物で加圧下で
クロマトグラフィー処理する。１００１１１１の前流の
後、波長２６０ ｎｍの流れ検出器を使用して認め得る
フラクションを分析用ＨＰＬＯによる検査後に合する。
”Ｃ３Ｂ７）、４９５（４，１１）（１））２３５ （
４，６２）、２５５ （ｓｈ）、２９６（３，９２）、
４９７（４，１７）（ｏ）２４３（４，６３） −２８
０（３，９５）、 ３０５（３，９１）５７５および６
１０（４，１５ン ０６ ｏＩ（ｓ ８Ｎ２０２０計算分子ｉ： １１５６
（Ｆ’ＡＢ−ＭＳＫより確認）Ｂ ： １Ｈ−ＮＭＲ（
第２図参照） 吸収スペクトル （ａ）２３５ （４，５２） ｂ ２５２ （ｓｈ）、
２９７（３８３）、４９５（５，９４）（ｂ）２３６（
４，５２）、 ２５３（ｓｈ）、 ２９５（３，８９）
、ａ９５（４ｏｓ）（Ｃシ４２（４，４０） −２８０
（３，８９）、６０５（３，６９，）６１０（３，８３
） ０６０Ｈ８６Ｎ２０２１計算分子量： １１７０（ＦＡ
Ｂ−ＭＳにより確認）Ｈ： ＩＨ−ＮＭＲ（第６図参照
） 分子量ＭＷ１１５０〜１３００（ＦＡＢ−ＭＳ）例 ８ 分取高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によるサ
イトロジンＥの単離 粗製サイトロジン６ｏ■を４００二２５：５０：５：０
．０５のＯＨＯλ３／メタノール／９６嘩酢酸／水／ト
リエチルアミン混合物０．５１１１ｆｆｉ Ｋ溶解しそ
してシリカゲル７μリクロソルブ■６０（メルク）約４
０５１を充填した２、５Ｘ３０ｃｔＲのスチールカラム
に適用しそして６緘／分の流速で上記混合物で加圧下で
クロマトグラフィー処理する。１００１１１１の前流の
後、波長２６０ ｎｍの流れ検出器を使用して認め得る
フラクションを分析用ＨＰＬＯによる検査後に合する。
フラクション 化 合 物 系Ａ中のＲｆ４６〜４８
サイトロジｙＦ Ｃｊ、６６４９〜５１ サイトロシア
Ｄ＋Ｋ Ｏ，５３５２〜 ６２ サイトロシアＩ Ｏ，
５３１１０〜１３５ サイトロジンｃｏ、４４同じ方法
で実施した６回の分取）ＩＰＬＯ法から得られた同じ組
成のフラクションを分析用ＨＰＬｃによる検査後に合し
、それぞれをｐＨ３，５の水性酢酸ナトリウム緩衝液２
０雌に溶ｆ！Ｉ’ｌ Ｌ、そしてｏ、ｏｏｉモル磯度の
水性エチレンジアミン四酢酸溶液（ＥＤＴＡ、ＮａＯＨ
でｐＨ３，５に調整）１ｒｎＱを加えそして混合物をト
ルエン５暉と共に振盪する。トルエン相を捨てそして水
性相を２Ｎ ＮａＯＨでｐＨ７，５に調整しそしてＯＨ
Ｏλ５２０雄で抽出する。硫酸ナトリウム上で乾燥した
後、混合物を沖遇しそしてＦ液を真空蒸発する。次のも
のが１６られる。
サイトロジｙＦ Ｃｊ、６６４９〜５１ サイトロシア
Ｄ＋Ｋ Ｏ，５３５２〜 ６２ サイトロシアＩ Ｏ，
５３１１０〜１３５ サイトロジンｃｏ、４４同じ方法
で実施した６回の分取）ＩＰＬＯ法から得られた同じ組
成のフラクションを分析用ＨＰＬｃによる検査後に合し
、それぞれをｐＨ３，５の水性酢酸ナトリウム緩衝液２
０雌に溶ｆ！Ｉ’ｌ Ｌ、そしてｏ、ｏｏｉモル磯度の
水性エチレンジアミン四酢酸溶液（ＥＤＴＡ、ＮａＯＨ
でｐＨ３，５に調整）１ｒｎＱを加えそして混合物をト
ルエン５暉と共に振盪する。トルエン相を捨てそして水
性相を２Ｎ ＮａＯＨでｐＨ７，５に調整しそしてＯＨ
Ｏλ５２０雄で抽出する。硫酸ナトリウム上で乾燥した
後、混合物を沖遇しそしてＦ液を真空蒸発する。次のも
のが１６られる。
化 合 物 系ＡにおけるＲｆ
サイトロジンＦ ８■ ０．６６
Ｄ十Ｋ １０１１ｐ ０．５３
Ｅ ２１〜 ０．５３
０ ２１岬 ０４４
分析用ＨＰＬＯは予め充填した７μリクロンルプ＠５ｔ
６ｂ（ノルクン４Ｘ１２Ｓｃｒｎカラム上で上記移動相
を使用して実施した。検出は流れ細胞を有するスペクト
ロフォトメーターを使用して２６０ｎｍで実施した。
６ｂ（ノルクン４Ｘ１２Ｓｃｒｎカラム上で上記移動相
を使用して実施した。検出は流れ細胞を有するスペクト
ロフォトメーターを使用して２６０ｎｍで実施した。
」三ｊＨ−ＮＭＲ（第４図参ｆｆ＠）
吸収スペクトル
（ａ）２３５（４，５７） ２５３（ｓｈ） ２９５（
５，８５） ４９５（４，１）（ｂ）２３６（４，５８
） ２５６（ｓｈ） ２９６（５，９） ４９８（４，
１５）（Ｑ）２４３（４，６） −３０５（５，８８）
６１０（４，１）Ｃ４０Ｈ５５Ｎ１０１５計算分子景
７５５（ＦＡＢ−ＭＳＫよす確認）例 ９ サイトロジンＦ、 ＤｓＯおよびＧ＋１・の単離粗製サ
イトロジン２Ｐを８Ｑ：１Ｑ：１０：２のクロロホルム
／メタノール／氷酢酸／水の混合物（系Ａ ） ５ ｏ
ｍＱに溶解しそして県人中でスラリー化した１５〜４
０μシリカゲル６０（メルク社製品）を含有する２、７
５Ｘ４２ｃｍのカラムに適用する。使用した溶離剤はへ
ブタンスルホン酸ナトリウム０．０１％を含有する系Ａ
である。１．１フの前流拶に各２５緘のフラクションを
集めそして分析用ＴＬＯ（系Ａ）Ｋよって検査する。活
性化合物は次の７２クシヨン中に溶離された。
５，８５） ４９５（４，１）（ｂ）２３６（４，５８
） ２５６（ｓｈ） ２９６（５，９） ４９８（４，
１５）（Ｑ）２４３（４，６） −３０５（５，８８）
６１０（４，１）Ｃ４０Ｈ５５Ｎ１０１５計算分子景
７５５（ＦＡＢ−ＭＳＫよす確認）例 ９ サイトロジンＦ、 ＤｓＯおよびＧ＋１・の単離粗製サ
イトロジン２Ｐを８Ｑ：１Ｑ：１０：２のクロロホルム
／メタノール／氷酢酸／水の混合物（系Ａ ） ５ ｏ
ｍＱに溶解しそして県人中でスラリー化した１５〜４
０μシリカゲル６０（メルク社製品）を含有する２、７
５Ｘ４２ｃｍのカラムに適用する。使用した溶離剤はへ
ブタンスルホン酸ナトリウム０．０１％を含有する系Ａ
である。１．１フの前流拶に各２５緘のフラクションを
集めそして分析用ＴＬＯ（系Ａ）Ｋよって検査する。活
性化合物は次の７２クシヨン中に溶離された。
７之り７ヨ４１１１ サイトロジン Ｍ Ａ 中のＲｆ
４０〜４４ Ｆ ２０〜 ０６３ ４５〜４９ Ｆ十Ｄ ６ＯｆＩＩ ５０〜７６ Ｄ ２６３り ０．５３ ７７〜９３ Ｄ十０ １４５１’−１ ９４〜１２６ ０ ２６０キ Ｄ、４４１２７〜１５３
０＋Ｐ＋Ｖ十Ｇ＋工 １３５１１１Ｆ１５４〜１９２
Ｇ−１４１７５９０，３４カラムをメタノールで処理
すると、主としてより極性の成分フラクションＸの混合
物の溶離を招（。
４０〜４４ Ｆ ２０〜 ０６３ ４５〜４９ Ｆ十Ｄ ６ＯｆＩＩ ５０〜７６ Ｄ ２６３り ０．５３ ７７〜９３ Ｄ十０ １４５１’−１ ９４〜１２６ ０ ２６０キ Ｄ、４４１２７〜１５３
０＋Ｐ＋Ｖ十Ｇ＋工 １３５１１１Ｆ１５４〜１９２
Ｇ−１４１７５９０，３４カラムをメタノールで処理
すると、主としてより極性の成分フラクションＸの混合
物の溶離を招（。
Ｎａ ２ＨＰＯ４の飽和水溶液をクロロホルム相が分離
するまで合したフラクションに加え、そしてクロロホル
ム相を５％の強度のＮａ ２ＨＰＯ４溶液そして次に水
で洗浄し、無水の４ｉ／ｌ酸ナトリウム上で乾燥し、真
空１９ｍしそして生成物を石油ニー戸ルまたはヘキサン
で沈殿すせる。
するまで合したフラクションに加え、そしてクロロホル
ム相を５％の強度のＮａ ２ＨＰＯ４溶液そして次に水
で洗浄し、無水の４ｉ／ｌ酸ナトリウム上で乾燥し、真
空１９ｍしそして生成物を石油ニー戸ルまたはヘキサン
で沈殿すせる。
Ｆ ： ＩＨ−ＮＭＲ（第５図参照）
吸収スペクトル
（ａ）２３５（４５５） ２５４（ｓｈ） ２９５（？
＋、７９） ４９５（４，０４）（ｂ）２３５（４，’
５ｂ） ２５５（ｓｈ） ２９５（５，７９） ４９５
（４，０４）ｆＣ）２４３（４４９） ２８０（ｓｈ＋
６８２）ｂ ５８Ｑ ６１０（３−９５ンＣ６ｏＨｓｏ
Ｎ２０２ｏ ｉＬ算分子量１１４８旦ヨーＩＨ−ＮＭＲ
（第６図参照ン 吸収スペクトル （ａ）；２３５（４，６２） ２５５（ｓｈ） ２９５
Ｃ５Ｂ２） ４９５（３，１７）（ｂρ３６（４，７５
） ２５３（ｓｈ） ２９３（４，０） ４９５（３，
３（］ン（Ｑ）２４２（４，６４） −２９８（５，８
８） ５５５（６，０９）０６０Ｈ８ＯＮ２０２１岨算
分子量１１６４ （ＦＡＢ−ＭＳにより確認）旦三’ｌ
−ｌ−１−Ｎ （第７図釦照）吸収ス投りトル （ａ）、’３４（４，６８） ２５３（ｓｈ） ２９５
（５，８５） ４９５（４，１１）（ｂ）２３４（４，
６８） ２５３（ｓｈ） ２９５（３，９２） ４９５
（４，１８）（ｃ）’、／４４（４，６９） −２９０
（ｓｈ、３＋８５人５８０，６１０（４，１８）ｃｄ
ＤＨ８０Ｎ２０２２計算分子量１１８０ （ＦＡＢ−Ｍ
Ｓにより確認）ａ ＋ ｘ 、ｊＨ−ＮＭＲ（＠ ８図
参照ン吸収スペクトル （ａ）２３７（４５１） ２５６（ｓｈ） ３００（３
，９） ４９５（４，１３）（ｂ）２３６（ｊＬ５１）
２５５（ｓｈ） ２９５（３，９） ４９５（４，１
３）（０）２４２（４，６） −３００（３，９ン ５
７０（４，１）Ｃ！６０ｉ（８２Ｎ２０２２計算分子量
１１８２ （ＦＡＢ−ＭＳにより確認）単離した生成物
はおそらく２種の構造異性成分Ｇおよび工の１＝１混合
物である。これはＩｌｌ−ＮＭＲスペクトル、分解実験
（水素添加分ｗＩ）および全加水分解後の個々の抛単位
の測定から明らかである。
＋、７９） ４９５（４，０４）（ｂ）２３５（４，’
５ｂ） ２５５（ｓｈ） ２９５（５，７９） ４９５
（４，０４）ｆＣ）２４３（４４９） ２８０（ｓｈ＋
６８２）ｂ ５８Ｑ ６１０（３−９５ンＣ６ｏＨｓｏ
Ｎ２０２ｏ ｉＬ算分子量１１４８旦ヨーＩＨ−ＮＭＲ
（第６図参照ン 吸収スペクトル （ａ）；２３５（４，６２） ２５５（ｓｈ） ２９５
Ｃ５Ｂ２） ４９５（３，１７）（ｂρ３６（４，７５
） ２５３（ｓｈ） ２９３（４，０） ４９５（３，
３（］ン（Ｑ）２４２（４，６４） −２９８（５，８
８） ５５５（６，０９）０６０Ｈ８ＯＮ２０２１岨算
分子量１１６４ （ＦＡＢ−ＭＳにより確認）旦三’ｌ
−ｌ−１−Ｎ （第７図釦照）吸収ス投りトル （ａ）、’３４（４，６８） ２５３（ｓｈ） ２９５
（５，８５） ４９５（４，１１）（ｂ）２３４（４，
６８） ２５３（ｓｈ） ２９５（３，９２） ４９５
（４，１８）（ｃ）’、／４４（４，６９） −２９０
（ｓｈ、３＋８５人５８０，６１０（４，１８）ｃｄ
ＤＨ８０Ｎ２０２２計算分子量１１８０ （ＦＡＢ−Ｍ
Ｓにより確認）ａ ＋ ｘ 、ｊＨ−ＮＭＲ（＠ ８図
参照ン吸収スペクトル （ａ）２３７（４５１） ２５６（ｓｈ） ３００（３
，９） ４９５（４，１３）（ｂ）２３６（ｊＬ５１）
２５５（ｓｈ） ２９５（３，９） ４９５（４，１
３）（０）２４２（４，６） −３００（３，９ン ５
７０（４，１）Ｃ！６０ｉ（８２Ｎ２０２２計算分子量
１１８２ （ＦＡＢ−ＭＳにより確認）単離した生成物
はおそらく２種の構造異性成分Ｇおよび工の１＝１混合
物である。これはＩｌｌ−ＮＭＲスペクトル、分解実験
（水素添加分ｗＩ）および全加水分解後の個々の抛単位
の測定から明らかである。
例 １０
トルエンおよびメタノール−水量の分配によるサイトロ
ジンの粗製混合物の分別 サイトロジンの粗製混合物の急速且つ簡単な分別は小な
る極性のフラクション（複合体ｌ）および大なる極性の
７ラクシヨン（複合体Ｉｆ ）ヲ与よるトルエンおよび
メタノール−水量の分配によって遂行される。
ジンの粗製混合物の分別 サイトロジンの粗製混合物の急速且つ簡単な分別は小な
る極性のフラクション（複合体ｌ）および大なる極性の
７ラクシヨン（複合体Ｉｆ ）ヲ与よるトルエンおよび
メタノール−水量の分配によって遂行される。
菌糸の抽出によって得られたサイトロジンの粗製混合物
８３９をメタノール／水（１：１） ５００峨に溶解し
そして溶液をトルエン５００１１１ｆｉで５回抽出する
。合したトルエン層は、Ｘ空蒸発後に主として小なる極
性のサイトロジン〔特にＦ、Ｄ。
８３９をメタノール／水（１：１） ５００峨に溶解し
そして溶液をトルエン５００１１１ｆｉで５回抽出する
。合したトルエン層は、Ｘ空蒸発後に主として小なる極
性のサイトロジン〔特にＦ、Ｄ。
ａ、 ｐ、 ｖ、 ｘ）からなる混合物３２ｊｌを与え
る。
る。
これに対してメタノール／水相は主として大なる極性の
サイトロジン（特にＢ％Ｈ，Ａ％ＭおよびＹ）からなる
混合物４７９を与える。
サイトロジン（特にＢ％Ｈ，Ａ％ＭおよびＹ）からなる
混合物４７９を与える。
これらの２つの生成物に富んだ生成物は、更にそれぞれ
カラムクロマドグ２フイー処理または小滴向流クロマト
グラフィー処理（ＤＯＯＯ）によるかまたはこれらの２
つの操作方法の組合せによる個々のサイトロジンの分離
および単離に対する出発物質として役立つ。
カラムクロマドグ２フイー処理または小滴向流クロマト
グラフィー処理（ＤＯＯＯ）によるかまたはこれらの２
つの操作方法の組合せによる個々のサイトロジンの分離
および単離に対する出発物質として役立つ。
例 １１
特別に変性したシリカゲル上のクロマトグラフィー処理
によるサイトロジンＡおよびＮ＋Ｏの強化 トルエンおよびメタノール−水量の分配によって得られ
た極性のサイトロジンの粗製混合物（複合体ｎ）１０ｊ
ｌをＯＨＯぷ３／水／メタノール（１３０：４０：４０
）溶剤混合物３０ｍ１！に溶離しそして特別に変性した
６１μシリカゲル（ブレース社製品）８７Ｊ＋を充填し
たガラスカラム（５，５Ｘ９５ｃｍ）に適用しそして移
動相としてＪｃ記混合物を使用してクロマトグラフィー
処理する。使用した特別に変性したシリカゲルは２Ｎ
ＨＯｌ、で洗浄して金属イオンを除去し、水で中性洗浄
しそして水性スラリーを５Ｎ ＮａＯＨでＺ６のｐＨ値
まで処理することによって製造される。水層を傾瀉分離
しそして塩基性シリカゲルを脱イオン化水そして最後に
少量のメタノールで洗浄し次に１３０℃で乾燥し、ふる
い処理しそして上述した移動相によるスラリーとしてカ
ラムに充填する。
によるサイトロジンＡおよびＮ＋Ｏの強化 トルエンおよびメタノール−水量の分配によって得られ
た極性のサイトロジンの粗製混合物（複合体ｎ）１０ｊ
ｌをＯＨＯぷ３／水／メタノール（１３０：４０：４０
）溶剤混合物３０ｍ１！に溶離しそして特別に変性した
６１μシリカゲル（ブレース社製品）８７Ｊ＋を充填し
たガラスカラム（５，５Ｘ９５ｃｍ）に適用しそして移
動相としてＪｃ記混合物を使用してクロマトグラフィー
処理する。使用した特別に変性したシリカゲルは２Ｎ
ＨＯｌ、で洗浄して金属イオンを除去し、水で中性洗浄
しそして水性スラリーを５Ｎ ＮａＯＨでＺ６のｐＨ値
まで処理することによって製造される。水層を傾瀉分離
しそして塩基性シリカゲルを脱イオン化水そして最後に
少量のメタノールで洗浄し次に１３０℃で乾燥し、ふる
い処理しそして上述した移動相によるスラリーとしてカ
ラムに充填する。
クロマトグラフィー処理は、はじめに上述した移動相５
．５ｋを使用し次で０ＨＯＩ１５ ／水／メタノール（
１３０：４０：５０）の混合物５．６にで溶離するよう
にして約１００峨／ｈの流速で実施する。溶離液は各１
５ｍｅの７ラクシヨンとして集め、これをＴＬＯによる
検査後に合しそして真空蒸発する。
．５ｋを使用し次で０ＨＯＩ１５ ／水／メタノール（
１３０：４０：５０）の混合物５．６にで溶離するよう
にして約１００峨／ｈの流速で実施する。溶離液は各１
５ｍｅの７ラクシヨンとして集め、これをＴＬＯによる
検査後に合しそして真空蒸発する。
２２の前流の後に１次のものが得られる。
Ｇ土工ｓ Ｂ）の混合物
フラクション ｉｐ 化 合 物
メタノール１βによる洗浄は極性〜非常に極性の化合物
の混合物を有する追加的なフラクションを与える。
の混合物を有する追加的なフラクションを与える。
例 １２
小滴向流クロマトグラフィー処理（ＤＯＯＯ）による極
性サイトロジンの強化された混合物の分離強化された極
性サイトロジンの混合物（例１ＤＫ記載したような分配
のメタノール−水相）５２をＤＣＯりＯ”Ｔトゲラフイ
ー６７０ （Ｂ、ｔｌ ｃｈｉ ）を使用して小滴向流
クロマトグラフィー処理（ＤｏＣ（！ ）によって更に
分離する。試料を不均質な平衡化混合物（ａＨｏｆｌｓ
／水／メタノール／ｎ−プロパツール（４５：９０：
１２０：５ ））の下部層２０−に溶解し、１チの９６
チ強度の酢酸を加えそしてクロマトグラスにポンプ輸送
する。
性サイトロジンの強化された混合物の分離強化された極
性サイトロジンの混合物（例１ＤＫ記載したような分配
のメタノール−水相）５２をＤＣＯりＯ”Ｔトゲラフイ
ー６７０ （Ｂ、ｔｌ ｃｈｉ ）を使用して小滴向流
クロマトグラフィー処理（ＤｏＣ（！ ）によって更に
分離する。試料を不均質な平衡化混合物（ａＨｏｆｌｓ
／水／メタノール／ｎ−プロパツール（４５：９０：
１２０：５ ））の下部層２０−に溶解し、１チの９６
チ強度の酢酸を加えそしてクロマトグラスにポンプ輸送
する。
下部層約３１！、を４０−の流速および５−１０パール
の圧力で３日２８８ガラス管（より ２．７ ｎｍ ）
の系を経てポンプ輸送する。系は静止相（降下方式）と
して上述した混合物の上部層をもって前に充填する。流
出する移動相を各１０−の７ラク７ヨンとして集め、こ
れをＴＬＯおよび分析用ＨＰＬＯによる検査後に合しそ
して真空蒸発する。
の圧力で３日２８８ガラス管（より ２．７ ｎｍ ）
の系を経てポンプ輸送する。系は静止相（降下方式）と
して上述した混合物の上部層をもって前に充填する。流
出する移動相を各１０−の７ラク７ヨンとして集め、こ
れをＴＬＯおよび分析用ＨＰＬＯによる検査後に合しそ
して真空蒸発する。
次のものが得られる。
１−２１ ６６０ Ｖ、Ｌ、Ｂの？Ｊ？イＨ勿２２−２
７ ４５０ Ｂおよび若干小なる極性の化合物（Ｖ％Ｌ
） ３４−５５ ２３０ Ａ％ＭおよびＬ ５６−６３ ２０ＯＡ、Ｍ 例 １６ 逆相分取高圧液体クロマ４トゲラフイー処理（ＨＰＬＯ
）による強化混合物からのサイトロジンＡおよびＮ＋Ｏ
の単離 サイトロジンＡ約４０チおよびＮ＋Ｏ約５５％を含有す
る混合物５［］ｍｇを移動相であるｏｕａｎ５／メタノ
ール７１０％水性酢酸アンモニウム（１５０：１０５０
：３７５）１．５−に溶解しそして１０μリクロソルブ
■ＲＰ−１８（メルク）約３０２を充填した１、６Ｘ２
５ｃｙ＋＋スチールカラムに適用する。クロマドグ２フ
イー処理は２−７分の流速で加圧下で実施しそして４９
０ ｎｍの波長でスはクトロフォトメーターで追い、各
４艷のフラクションを集めそして分析用ＨＰＬＯによる
検査後に合する。分析用ＨＰＬＯは１０μリクロノルプ
■ＲＰ−１８（メルク）を充填した４、６Ｘ２５０ｍＨ
Ｐ印スチールカラム上で遂行する。仕上げるために、合
した７ラクシヨンをカラムの／２量の水およびＣＨＯｎ
５の添加によって相の分離までうすめる。
７ ４５０ Ｂおよび若干小なる極性の化合物（Ｖ％Ｌ
） ３４−５５ ２３０ Ａ％ＭおよびＬ ５６−６３ ２０ＯＡ、Ｍ 例 １６ 逆相分取高圧液体クロマ４トゲラフイー処理（ＨＰＬＯ
）による強化混合物からのサイトロジンＡおよびＮ＋Ｏ
の単離 サイトロジンＡ約４０チおよびＮ＋Ｏ約５５％を含有す
る混合物５［］ｍｇを移動相であるｏｕａｎ５／メタノ
ール７１０％水性酢酸アンモニウム（１５０：１０５０
：３７５）１．５−に溶解しそして１０μリクロソルブ
■ＲＰ−１８（メルク）約３０２を充填した１、６Ｘ２
５ｃｙ＋＋スチールカラムに適用する。クロマドグ２フ
イー処理は２−７分の流速で加圧下で実施しそして４９
０ ｎｍの波長でスはクトロフォトメーターで追い、各
４艷のフラクションを集めそして分析用ＨＰＬＯによる
検査後に合する。分析用ＨＰＬＯは１０μリクロノルプ
■ＲＰ−１８（メルク）を充填した４、６Ｘ２５０ｍＨ
Ｐ印スチールカラム上で遂行する。仕上げるために、合
した７ラクシヨンをカラムの／２量の水およびＣＨＯｎ
５の添加によって相の分離までうすめる。
下部層を分離しそして水で洗滌し、 Ｎａ２８０４上で
乾燥しそして真空蒸発する。純粋な個々の化合物を例７
に記載した操作方法によって再び微量の油性物質、金属
イオンなどから′Ｍ製する。最後に次のデータが得られ
る。
乾燥しそして真空蒸発する。純粋な個々の化合物を例７
に記載した操作方法によって再び微量の油性物質、金属
イオンなどから′Ｍ製する。最後に次のデータが得られ
る。
７ラク７ヨン ■ 化 合 物 系Ｃ中のＲｆ□□−”
１５−１７ 約５ 強化されたサイトロジンＭ （粗製
）０．４１２６−３０ ２２．５ 強化されたサイトロ
ジンＮ＋ＯＯ，３０３５−４０１０，４強化されたサイ
トロジンＡ Ｏ，４１系（！ ： ０ＨＯｊｔ３／メタ
ノール／９９チ強度の酢酸／水Ｎ＋Ｏ： ＩＨ−ＮＭＲ
（第９図参照）吸収スペクトル （ａ） ２３５（４，５６） ２５３（１９ｈ） ２９
３（３，６７） ４９５（４，０４）（ｂ） ２３４（
４，５９） ２５３（８ｈ） ２９３（３，６８） ４
９５（４，１５）（Ｑ）２４０（４，５１） −２８３
（５，８１）５７５（４，！］）０１Ｈ８８Ｎ２０２１
計算分子量 １１７２ （ＦＡＢ−ＭＳにより確認）単
離した生成物は２種の構造異性の成分ＮおよびＯの混合
物（おそら＜１：１）である。これけ１Ｈ−Ｎ）ＡＲス
はクトル、分解実験（水素系加分ｊθｔ）および酸性全
加水分解後の個々の糖単位およびアグリコンの測定から
明らかである。成分サイトロジンＯはｒＴｅｔｒａｈｅ
ｄｒｏｎ ＬｅｔｔｅｒｓＪ第８３１〜８６４頁（１９
７５年）から既知である。
）０．４１２６−３０ ２２．５ 強化されたサイトロ
ジンＮ＋ＯＯ，３０３５−４０１０，４強化されたサイ
トロジンＡ Ｏ，４１系（！ ： ０ＨＯｊｔ３／メタ
ノール／９９チ強度の酢酸／水Ｎ＋Ｏ： ＩＨ−ＮＭＲ
（第９図参照）吸収スペクトル （ａ） ２３５（４，５６） ２５３（１９ｈ） ２９
３（３，６７） ４９５（４，０４）（ｂ） ２３４（
４，５９） ２５３（８ｈ） ２９３（３，６８） ４
９５（４，１５）（Ｑ）２４０（４，５１） −２８３
（５，８１）５７５（４，！］）０１Ｈ８８Ｎ２０２１
計算分子量 １１７２ （ＦＡＢ−ＭＳにより確認）単
離した生成物は２種の構造異性の成分ＮおよびＯの混合
物（おそら＜１：１）である。これけ１Ｈ−Ｎ）ＡＲス
はクトル、分解実験（水素系加分ｊθｔ）および酸性全
加水分解後の個々の糖単位およびアグリコンの測定から
明らかである。成分サイトロジンＯはｒＴｅｔｒａｈｅ
ｄｒｏｎ ＬｅｔｔｅｒｓＪ第８３１〜８６４頁（１９
７５年）から既知である。
例 １４
加圧液体り１１マドグラフイーおよび分取薄層クロマト
グラフィーによる単一の成分サイトロジンＰの単げｔ ダイアグラム■に記載したような培養Ｆ液からの溶液の
抽出によって得られたサイトロジンの粗製混合物６２を
ｃｎａｎ３ ／メタノール／９６チ酢ｉり／水（８０：
１０：１０：２）の混合物を使用して２つの放射状に圧
搾したカートリツ：）（ウォーターズ、Ｐｒｏｐ ＬＣ
／Ｓ７ｅｔｅｍ ５ＱＱ” ）中の３１μシリカケ゛ル
（ブレース社製品） ６２０５’上でクロマトグラフィ
ー処理する。試料を移動相５〇−に溶解し、平衡化した
カラムに適用しそして３５コ／分の流速でそれぞＵｌ−
２３ｎｔの７ジク／ヨン含集めそしてＨＰＬＯによって
Ｊ′ト画する。７ラク／ヨン４１〜５６は８８条純度の
サイトロジンＰ（系人中のＲｆＯ，４２） ２２０〜を
与える。この生成物４０ηを系Ａを使用して分取薄層ク
ロマトグラフィー〔予備被覆したＴＬＯシート、ノリカ
ゲル６０ Ｆ’２５４（メルク社製品）〕によって更に
精製する。
グラフィーによる単一の成分サイトロジンＰの単げｔ ダイアグラム■に記載したような培養Ｆ液からの溶液の
抽出によって得られたサイトロジンの粗製混合物６２を
ｃｎａｎ３ ／メタノール／９６チ酢ｉり／水（８０：
１０：１０：２）の混合物を使用して２つの放射状に圧
搾したカートリツ：）（ウォーターズ、Ｐｒｏｐ ＬＣ
／Ｓ７ｅｔｅｍ ５ＱＱ” ）中の３１μシリカケ゛ル
（ブレース社製品） ６２０５’上でクロマトグラフィ
ー処理する。試料を移動相５〇−に溶解し、平衡化した
カラムに適用しそして３５コ／分の流速でそれぞＵｌ−
２３ｎｔの７ジク／ヨン含集めそしてＨＰＬＯによって
Ｊ′ト画する。７ラク／ヨン４１〜５６は８８条純度の
サイトロジンＰ（系人中のＲｆＯ，４２） ２２０〜を
与える。この生成物４０ηを系Ａを使用して分取薄層ク
ロマトグラフィー〔予備被覆したＴＬＯシート、ノリカ
ゲル６０ Ｆ’２５４（メルク社製品）〕によって更に
精製する。
主要バンドの溶離をＣＨＣβ３／メタノール（１：１）
による抽出によって実施する。濾過した抽出液をＮａ２
１（ＰＯ４の水溶液で中和しそして相の分離捷で水でう
ずめる。分ガＬし／こｃＨｃｉ３層金水で洗滌し、無水
のＮａ２ＳＯ４上で乾燥しそして真空蒸発する。残留物
を少成のａａａｇｘにとかしそして石油エーテルで沈殿
する。純粋な乾燥したす〜イトロジンＰ１５〜が得られ
る。
による抽出によって実施する。濾過した抽出液をＮａ２
１（ＰＯ４の水溶液で中和しそして相の分離捷で水でう
ずめる。分ガＬし／こｃＨｃｉ３層金水で洗滌し、無水
のＮａ２ＳＯ４上で乾燥しそして真空蒸発する。残留物
を少成のａａａｇｘにとかしそして石油エーテルで沈殿
する。純粋な乾燥したす〜イトロジンＰ１５〜が得られ
る。
ヱ： ｉＨ−ＮＭＲ（第１０図参照）
吸収スはクトル（ｎｍ）
（Ｑ、） ２３５（４，６３） ２５４（Ｓｂ２．３３
） ２５３（３，９０） ４９４（４，１３）（ｂ）
２３５（４，６０） ２５４（Ｓｂ２．３１） ２９３
（３，８５） ４９４（４，１２）（ｃ） ２４４（４
，３３） −５７０（３，５９） ６２０（３，７１）
！ｊ６０１（８２Ｎ２０２１ 計算分子−ｂＬ： １１
６６（ＦＡＢ−Ｍ日により確認）例 １５ 分取加圧液体クロマトグラフィーおよび薄層クロマトグ
ラフィーによるサイトロジンＶの単離ダイアグラム■に
記載したような培養ｐ液からの溶液の抽出によって得ら
れたサイトロジンの粗製混合物７２をＣＩ（０ｇ５ ／
メタノール／９６チ酢酸／水（８０：１０：１０：２
）の混合物を使用して２つの放射状に圧搾したカートリ
ッジ（ウォーターズ社製品、Ｐｒｅｐ ＬＣ／Ｓｙｅｔ
ｅｍ ５００■）中の６１μシリカゲル（ブレース社製
品）６２０ｙ」二でクロマトグラフィー処理する。試料
を移動相６５ｍ１に溶解し、平衡化したカラムに適用し
そして２５ ｒｎｌ ７分の流速で各２３ ｍｅのフラ
クションを集めそしてＨＰＬＯによって評価する。フ２
り７ヨン２９〜３４は８０φ純度のサイトロジン■（系
人中のＲｆ Ｏ，５８） １９５うを与える。この生成
物６０１１１Ｆを系Ａを使用して分取薄層クロマトグラ
フ・イー〔予備被覆し７’ｉＨＴＬＣシート、／リカゲ
ル６０（メルク社製品）〕にＬつで史に精製する。得ら
れた主なバンドの溶離およびサイトロジンＶの単離を例
１４に記載したように遂行する。純粋なＶ１６ηがイり
ら九る。
） ２５３（３，９０） ４９４（４，１３）（ｂ）
２３５（４，６０） ２５４（Ｓｂ２．３１） ２９３
（３，８５） ４９４（４，１２）（ｃ） ２４４（４
，３３） −５７０（３，５９） ６２０（３，７１）
！ｊ６０１（８２Ｎ２０２１ 計算分子−ｂＬ： １１
６６（ＦＡＢ−Ｍ日により確認）例 １５ 分取加圧液体クロマトグラフィーおよび薄層クロマトグ
ラフィーによるサイトロジンＶの単離ダイアグラム■に
記載したような培養ｐ液からの溶液の抽出によって得ら
れたサイトロジンの粗製混合物７２をＣＩ（０ｇ５ ／
メタノール／９６チ酢酸／水（８０：１０：１０：２
）の混合物を使用して２つの放射状に圧搾したカートリ
ッジ（ウォーターズ社製品、Ｐｒｅｐ ＬＣ／Ｓｙｅｔ
ｅｍ ５００■）中の６１μシリカゲル（ブレース社製
品）６２０ｙ」二でクロマトグラフィー処理する。試料
を移動相６５ｍ１に溶解し、平衡化したカラムに適用し
そして２５ ｒｎｌ ７分の流速で各２３ ｍｅのフラ
クションを集めそしてＨＰＬＯによって評価する。フ２
り７ヨン２９〜３４は８０φ純度のサイトロジン■（系
人中のＲｆ Ｏ，５８） １９５うを与える。この生成
物６０１１１Ｆを系Ａを使用して分取薄層クロマトグラ
フ・イー〔予備被覆し７’ｉＨＴＬＣシート、／リカゲ
ル６０（メルク社製品）〕にＬつで史に精製する。得ら
れた主なバンドの溶離およびサイトロジンＶの単離を例
１４に記載したように遂行する。純粋なＶ１６ηがイり
ら九る。
ｖ ： ｉＨ−１ｉＭＲ（第１１図参照）吸収スペクト
ル （ａ） ２３５（４，７２） ２５４（Ｓｂ２．４８）
２９０（４，０４） ４９５（４，２０）（ｂ） ２
３５（４，７３） ２５４（Ｓｂ４．４８） ２９０（
４，０６） ４９４（４，２４）Ｃ６ｏＨａａ）！２０
２ｏ計算分子ｊｉｔ 二１１５２ （ＦＡＢ−ＭＳによ
り確認）例 １６ カジノ、クロマドグシフイーおよび分取ジル゛層りロマ
トグラフィーによるザ−ｒ ｌ・ロジンにの単離ダイア
クラム■に記載したような培養物の溶液の抽出によって
得られたサイトロジンの粗製混合物６２をｐＨ７，５の
水１００−に溶解しそして酢酸エチルで再抽出する。有
機層を真空蒸発し、得られた残留物をｃａｃｊ１３１５
ｍｌＫ溶解しそして溶液を石油エーテルで１０回処理
する。沈殿を遠心処理によって分Ｐ４ｔ、 Ｌ、 、石
油エーテルで洗滌しそして４屹窒乾燥して５．６１をイ
Ｕる。この生成１１・ｉ′Ｊ／＋ ５０ ｔｒｒｙをＯ
ＨＣλ５／メタノール／９６チ酢酸／水（８〇二１０：
１０：２）の混合物？ｆ：使用してゾリカゲ′ル６０［
：１５〜４．０μ（メルク社製品）〕８０７＋でり「１
７トグラフイー処理する。試料を少量の上記移動相に溶
解しそして平衡化したガラス製カラムに適用する。２１
０−の前流後に各５−の７ラクシヨンを集める。合した
フラクション６４〜７６はサイトロジンに１５Ｗを含有
する（ ＨＰＬＯによって評価した純度６２チ）。
ル （ａ） ２３５（４，７２） ２５４（Ｓｂ２．４８）
２９０（４，０４） ４９５（４，２０）（ｂ） ２
３５（４，７３） ２５４（Ｓｂ４．４８） ２９０（
４，０６） ４９４（４，２４）Ｃ６ｏＨａａ）！２０
２ｏ計算分子ｊｉｔ 二１１５２ （ＦＡＢ−ＭＳによ
り確認）例 １６ カジノ、クロマドグシフイーおよび分取ジル゛層りロマ
トグラフィーによるザ−ｒ ｌ・ロジンにの単離ダイア
クラム■に記載したような培養物の溶液の抽出によって
得られたサイトロジンの粗製混合物６２をｐＨ７，５の
水１００−に溶解しそして酢酸エチルで再抽出する。有
機層を真空蒸発し、得られた残留物をｃａｃｊ１３１５
ｍｌＫ溶解しそして溶液を石油エーテルで１０回処理
する。沈殿を遠心処理によって分Ｐ４ｔ、 Ｌ、 、石
油エーテルで洗滌しそして４屹窒乾燥して５．６１をイ
Ｕる。この生成１１・ｉ′Ｊ／＋ ５０ ｔｒｒｙをＯ
ＨＣλ５／メタノール／９６チ酢酸／水（８〇二１０：
１０：２）の混合物？ｆ：使用してゾリカゲ′ル６０［
：１５〜４．０μ（メルク社製品）〕８０７＋でり「１
７トグラフイー処理する。試料を少量の上記移動相に溶
解しそして平衡化したガラス製カラムに適用する。２１
０−の前流後に各５−の７ラクシヨンを集める。合した
フラクション６４〜７６はサイトロジンに１５Ｗを含有
する（ ＨＰＬＯによって評価した純度６２チ）。
系Ａを使用した分取ＴＬＣ［メルクの予備被覆したＴＬ
Ｏシート、シリカゲル６０〕（例１４および１５参照）
によって生成物を更に精製して純粋なサイトロジンに３
．６■を得る。Ｋ：ロードマイシンＹ ［ｒＮａｔｕｒ
ｗｉｓｓ、 Ｊ第４８巻第７１７頁（１９６１年）およ
びｒ Ｐｈａｒｍａｚｉｅ Ｊ第２７巻第７８２〜７８
９頁（１９７２年）参照〕としてＩＨ−ＮＭＲによって
確認される。Ｃ４０Ｈ５５Ｎ１０１４計算分子量７７１
゜例 １７ カラム液体クロマトグラフィーおよび分取薄層クロマト
グラフィーによるサイトロジンＬの単離 ダイアグラム■に記載したような培養物からの溶液の抽
出によって得られたサイトロジンの粗製混合物６２を１
５〜４０μシリカゲル６０（メルク）ｓｏｏｔ上でクロ
マトグラフィー処理する。
Ｏシート、シリカゲル６０〕（例１４および１５参照）
によって生成物を更に精製して純粋なサイトロジンに３
．６■を得る。Ｋ：ロードマイシンＹ ［ｒＮａｔｕｒ
ｗｉｓｓ、 Ｊ第４８巻第７１７頁（１９６１年）およ
びｒ Ｐｈａｒｍａｚｉｅ Ｊ第２７巻第７８２〜７８
９頁（１９７２年）参照〕としてＩＨ−ＮＭＲによって
確認される。Ｃ４０Ｈ５５Ｎ１０１４計算分子量７７１
゜例 １７ カラム液体クロマトグラフィーおよび分取薄層クロマト
グラフィーによるサイトロジンＬの単離 ダイアグラム■に記載したような培養物からの溶液の抽
出によって得られたサイトロジンの粗製混合物６２を１
５〜４０μシリカゲル６０（メルク）ｓｏｏｔ上でクロ
マトグラフィー処理する。
８０：１０：１０： ２の比（系Ａ）の１．６１をもっ
て出発し次いでヘプタンスルホン酸０．０１％の添加に
よって変性した同じ混合物４Ｌ、それから７０：２０：
１０： １の五６℃そして最後にヘプタンスルホン酸０
．０１％を加えた５０：５０：５： ２の２．８λから
なる０ＨＣｊｌｔ５ 、メタノール、９６％酢酸および
水の勾配溶剤混合物を溶離に対して使用する。試料をは
じめに述べた混合物５〇−に溶解しそして平衡化したカ
ラムに適用する。
て出発し次いでヘプタンスルホン酸０．０１％の添加に
よって変性した同じ混合物４Ｌ、それから７０：２０：
１０： １の五６℃そして最後にヘプタンスルホン酸０
．０１％を加えた５０：５０：５： ２の２．８λから
なる０ＨＣｊｌｔ５ 、メタノール、９６％酢酸および
水の勾配溶剤混合物を溶離に対して使用する。試料をは
じめに述べた混合物５〇−に溶解しそして平衡化したカ
ラムに適用する。
１、６５１の初留後に、各２５ｒｎｌの７ラクシヨンを
集めそしてＴＬＯおよびＨＰＬＯＫよって評価する。
集めそしてＴＬＯおよびＨＰＬＯＫよって評価する。
フラクション１６１〜２２５は成分りの２４−を含有す
る混合物１．１１を与える。この物質を再び曲ｎｏ−ｙ
／ ４７ノーｎ、 ／ Ｑ Ａ ４ Ｗｈ 酪／ ＋
（只ｎ＝１０：１０：２）の混合物を使用して１５〜
４０μシリカゲル６０（メルク社製品）１６Ｏｆ上でク
ロマトグラフィー処理することによって分離する。
る混合物１．１１を与える。この物質を再び曲ｎｏ−ｙ
／ ４７ノーｎ、 ／ Ｑ Ａ ４ Ｗｈ 酪／ ＋
（只ｎ＝１０：１０：２）の混合物を使用して１５〜
４０μシリカゲル６０（メルク社製品）１６Ｏｆ上でク
ロマトグラフィー処理することによって分離する。
試料を移動相に溶解しそして平衡化したカラムに適用し
そして７００−の初留後に各１０１ｎｌの７ラク７ヨン
を集める。１６４％を含有する７ラク７ヨン９１〜１０
２（３１■）およびＬ６８チを含有する７ラクシヨン１
０３〜１１８（４４η）を合しそして得られた生成物５
０ηを更に分取ＴＬＣ（例１４および１５におけるよう
に系Ａを使用して予備被覆したＴＬＯ７−）シリカゲル
６０（メルク社製品）上で実施する）によって分離する
。
そして７００−の初留後に各１０１ｎｌの７ラク７ヨン
を集める。１６４％を含有する７ラク７ヨン９１〜１０
２（３１■）およびＬ６８チを含有する７ラクシヨン１
０３〜１１８（４４η）を合しそして得られた生成物５
０ηを更に分取ＴＬＣ（例１４および１５におけるよう
に系Ａを使用して予備被覆したＴＬＯ７−）シリカゲル
６０（メルク社製品）上で実施する）によって分離する
。
７４チの純度（ＨＰＩＩＯ）のサイトロジンＬ１８■が
得られる。このものは、最終分取ＴＬＯ後に純粋ナサイ
トロジンＬの１４岬を与える。
得られる。このものは、最終分取ＴＬＯ後に純粋ナサイ
トロジンＬの１４岬を与える。
Ｌ ： ＩＨ−ｎＭＲ（第１２図参照）＠取スペクトル
（ｎｍ） （ａ）２３５（４，５９）２５３（Ｓｈ）２９５（３，
８６）４．９５（４，１）（１））２３５（４，６）
２ｓｓ（ｓｈ）２９５（３，９１）４９５（４，１３）
（ｃ）２４４（４，６１） ３０３（３，８７）５７０
（４，０６１０（４，１５） Ｃ５４）］、４５Ｎ１０１１計算分子量：６４１例 １
８ 分取「逆相」高圧液体クロマトグラフィーによるサイト
ロジンＭの単離 分析用ＨＰＬＯにおいて明確なテーリングを示すシリカ
ゲル上の分取ＨＰＬＯからのサイトロジンＡのバッチ５
０■をｏＨｃｌ１５ ／メタノール／１０％水性酢酸ア
ンモニウム（１５０：１０５０：３７５）の混合物２
Ｔｎｌに溶解しそして１０μリクロソルブ＠’ＲＰ−１
８（メルク社製品）約３５２を充填した１、６Ｘ２５ｃ
ｒｎのスチールカラム上に適用する。
（ｎｍ） （ａ）２３５（４，５９）２５３（Ｓｈ）２９５（３，
８６）４．９５（４，１）（１））２３５（４，６）
２ｓｓ（ｓｈ）２９５（３，９１）４９５（４，１３）
（ｃ）２４４（４，６１） ３０３（３，８７）５７０
（４，０６１０（４，１５） Ｃ５４）］、４５Ｎ１０１１計算分子量：６４１例 １
８ 分取「逆相」高圧液体クロマトグラフィーによるサイト
ロジンＭの単離 分析用ＨＰＬＯにおいて明確なテーリングを示すシリカ
ゲル上の分取ＨＰＬＯからのサイトロジンＡのバッチ５
０■をｏＨｃｌ１５ ／メタノール／１０％水性酢酸ア
ンモニウム（１５０：１０５０：３７５）の混合物２
Ｔｎｌに溶解しそして１０μリクロソルブ＠’ＲＰ−１
８（メルク社製品）約３５２を充填した１、６Ｘ２５ｃ
ｒｎのスチールカラム上に適用する。
溶離は２ ｍｅ ７分の流速で加圧下で実施しそして４
９０ ｎｍの波長でフロースペクトロ７オトメーターで
追跡し、各４ ｍｌのフラクションを集めそして分析用
ＨＰＬＣ！による検査後に合する（例１６）。
９０ ｎｍの波長でフロースペクトロ７オトメーターで
追跡し、各４ ｍｌのフラクションを集めそして分析用
ＨＰＬＣ！による検査後に合する（例１６）。
７ラク／ヨン 化 合 物 Ｒｆ−系Ａ１Ｂ−２０１０
ｍＶ サイトロジンＭ Ｏ，２７４９−５５２ｓｍｙ
サイトロジンＡ Ｏ，２７サイトロジンＭは移動相系Ａ
全使用したシリカゲル上のＴＬＯまたはＨＰＬＯによっ
てンまサイトロジンＡから区別することはできない。分
Ｉ’１１は予備被覆したＴＬＯプレートまたはシートシ
リカゲルｓｉ ６０ （メルク）上でＣＨＯｆ！３／メ
タノール／９９チ酢酸（７５：１５：１０：２ ）の混
合物（系０）を使用してＴＬＯ処理することによって達
成される。Ｒｆ＝ｏ、４１（Ａ）および０．３７ （Ｍ
）。
ｍＶ サイトロジンＭ Ｏ，２７４９−５５２ｓｍｙ
サイトロジンＡ Ｏ，２７サイトロジンＭは移動相系Ａ
全使用したシリカゲル上のＴＬＯまたはＨＰＬＯによっ
てンまサイトロジンＡから区別することはできない。分
Ｉ’１１は予備被覆したＴＬＯプレートまたはシートシ
リカゲルｓｉ ６０ （メルク）上でＣＨＯｆ！３／メ
タノール／９９チ酢酸（７５：１５：１０：２ ）の混
合物（系０）を使用してＴＬＯ処理することによって達
成される。Ｒｆ＝ｏ、４１（Ａ）および０．３７ （Ｍ
）。
Ｍ ： ｊＨ−ＮＭＲ（第１３図参照）吸収スペクトル
（ｎｍ） （ａ） ２３５（４，５０） ２５３（ｓｈ） ２９５
（３，８３） ４９５（４，１０）（ｂ） ２３５（４
，５８，） ２５６（Ｓｈ） ２９６（３，８９） ４
９６（４，１５）（ｃ） ２４４（４，５９） −３０
５（３，８７） ６１０（４，１０）（，５４Ｈ４５Ｎ
１０１２計算分子舒： ６５７（ＦＡＢ−ＭＳにより確
認）例 １９ 分取高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＯ）にょるり
−イトロジンＷの単離 極性フラクション「Ｙ」８０ｒｎｙを水で飽和した０）
ＩＣら／メタノール／９６％１￥「酸／トリエチルアミ
ン（８０：１０：１０二０．０１）からなる移動相２ｒ
ｎｅにＨ解しそして７μリクロソルプ■５ｉ６０（メル
ク社製品）１１［］ｒを充填した３、２Ｘ２５ｃｍのス
チールカラムに適用しそして８ｍＩ！／分の流速で加圧
下でクロマトグラフィー処理する。各４ ｍｌのフラク
ションを集めそして分析用ＨＰＬｃによって検査しそし
て合しそして普通の方法で処理する。若干の確認されな
い他の成分以外に、何通の予備被覆したＴＬＣプレート
シリカゲル６゜（メルク社製品）に対する系Ｃ中でＲｆ
＝ ０．２３を示す化合物サイトロジンＷ １．５
ＩＱが得られる。
（ｎｍ） （ａ） ２３５（４，５０） ２５３（ｓｈ） ２９５
（３，８３） ４９５（４，１０）（ｂ） ２３５（４
，５８，） ２５６（Ｓｈ） ２９６（３，８９） ４
９６（４，１５）（ｃ） ２４４（４，５９） −３０
５（３，８７） ６１０（４，１０）（，５４Ｈ４５Ｎ
１０１２計算分子舒： ６５７（ＦＡＢ−ＭＳにより確
認）例 １９ 分取高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＯ）にょるり
−イトロジンＷの単離 極性フラクション「Ｙ」８０ｒｎｙを水で飽和した０）
ＩＣら／メタノール／９６％１￥「酸／トリエチルアミ
ン（８０：１０：１０二０．０１）からなる移動相２ｒ
ｎｅにＨ解しそして７μリクロソルプ■５ｉ６０（メル
ク社製品）１１［］ｒを充填した３、２Ｘ２５ｃｍのス
チールカラムに適用しそして８ｍＩ！／分の流速で加圧
下でクロマトグラフィー処理する。各４ ｍｌのフラク
ションを集めそして分析用ＨＰＬｃによって検査しそし
て合しそして普通の方法で処理する。若干の確認されな
い他の成分以外に、何通の予備被覆したＴＬＣプレート
シリカゲル６゜（メルク社製品）に対する系Ｃ中でＲｆ
＝ ０．２３を示す化合物サイトロジンＷ １．５
ＩＱが得られる。
二二
吸収スペクトル
（ａ） ２３５（４，５３） ２５３（Ｓｈ） ２９３
（３，６４） ４９５（４，０１）（ｂ） ２３５（４
，５７） ２５３（ｓｈ） ２ソ３（３，６５） ４９
５（４，１３）＜ｃ） ２４１（４，４９） ２８２（
３，７８） ５７５（３，８１）６１０（３，９６） ０６０Ｈ８８Ｎ２０２２計算分子量：１１８４前述した
諸例における成分は、以下に記載する測定条件を１吏用
して確認した。
（３，６４） ４９５（４，０１）（ｂ） ２３５（４
，５７） ２５３（ｓｈ） ２ソ３（３，６５） ４９
５（４，１３）＜ｃ） ２４１（４，４９） ２８２（
３，７８） ５７５（３，８１）６１０（３，９６） ０６０Ｈ８８Ｎ２０２２計算分子量：１１８４前述した
諸例における成分は、以下に記載する測定条件を１吏用
して確認した。
プロトン共鳴スペクトル（ＩＨ−ＮＭＲスペクトル）は
ＨＸ−２７０ＢＲＵＫＥｉＲＦｏｕｒｉｅｒ トランス
ホーム核磁気共鳴スペクトロメーターを使用して２７０
ＭＨｚで記録した。濃度は２〜４〜／ ９９．８チｃ
Ｄｃｆｌ♂０．５ｍｅであり、製造後直接溶液を９９．
５％０２０甲の５％ Ｎａ２００３０．１−と共に振Ｉ
ｔ Ｌ タ。
ＨＸ−２７０ＢＲＵＫＥｉＲＦｏｕｒｉｅｒ トランス
ホーム核磁気共鳴スペクトロメーターを使用して２７０
ＭＨｚで記録した。濃度は２〜４〜／ ９９．８チｃ
Ｄｃｆｌ♂０．５ｍｅであり、製造後直接溶液を９９．
５％０２０甲の５％ Ｎａ２００３０．１−と共に振Ｉ
ｔ Ｌ タ。
図中の星印によって示されるシグナルは、１０〜３範囲
の低分子量不純化および残留溶剤から誘導される。
の低分子量不純化および残留溶剤から誘導される。
πｌスはクトルはＦＡＢ （速原子衝撃）イオン源を使
用してＭＳ−９０２８−ＡＪｎ工質量分析計を使用して
記録した。物質はチオグリセロールマトリックス中にお
いてイオン源に挿入する。しばしば塩化アンモニウムが
加えられる。
用してＭＳ−９０２８−ＡＪｎ工質量分析計を使用して
記録した。物質はチオグリセロールマトリックス中にお
いてイオン源に挿入する。しばしば塩化アンモニウムが
加えられる。
吸収スはクトルｅよ（ａ）水／メタノール（１：９）、
（ｂ）１０チのメタノール中のＩＮ ＨＣｌ１．、（ｃ
） １０チのメタノール中（１） １Ｎ ＮａＯＨ中で
２００〜７００ｎｍの範囲で記録し７た。
（ｂ）１０チのメタノール中のＩＮ ＨＣｌ１．、（ｃ
） １０チのメタノール中（１） １Ｎ ＮａＯＨ中で
２００〜７００ｎｍの範囲で記録し７た。
物質の畠度は１０〜３ｏｔｎｇ／ｎであり、ｎｍでの吸
収極大およびモル吸光係数ＣＱｏｇりを記録した。
収極大およびモル吸光係数ＣＱｏｇりを記録した。
細胞骨性活性度の測定
本発明の化合物の細胞増殖抑制活性度をＬ１２１０マウ
ス白血病細胞に対して測定した。特に次の試験系を使用
した。
ス白血病細胞に対して測定した。特に次の試験系を使用
した。
（ａ） 増殖試験
この方法においては、細胞が試験管内で放射性ＤＮＡプ
レカーサー（例えば１４０−標識チミジン）を混入でき
る程度を、試験物質の種々な濃度を使用して細胞を培養
した後に測定した。未処理のＬ１２１０細胞を同じ試験
条件に付しそして比較対照として使用する。方法は以下
に簡単に記載する通りである。
レカーサー（例えば１４０−標識チミジン）を混入でき
る程度を、試験物質の種々な濃度を使用して細胞を培養
した後に測定した。未処理のＬ１２１０細胞を同じ試験
条件に付しそして比較対照として使用する。方法は以下
に簡単に記載する通りである。
指数段階の生長物中のＬ１２１０細胞（ＲＰＭ工１６４
０中５Ｘ１０５／ｄ）を試験物質の種々な濃度を有する
ミクロタイター（微量滴定）プレート中で７２時間培養
する（３７℃、５チａｏ２．９５％相対湿度）。比較対
照は単に新鮮な培地を使用して培養した培地である。す
べての測定は４組で実施した。６５時間後に、細胞中の
ＤＮＡを放射標識するために１４０＋ミジン５０μμ（
１，５μＣ１／−）を加える。７時間培養した後、細胞
を吸引びｉ過し、１）ＮＡを５％強度のトリクロロ酢酸
で沈殿させそして次に水およびメタノールで連続的に洗
滌する。
０中５Ｘ１０５／ｄ）を試験物質の種々な濃度を有する
ミクロタイター（微量滴定）プレート中で７２時間培養
する（３７℃、５チａｏ２．９５％相対湿度）。比較対
照は単に新鮮な培地を使用して培養した培地である。す
べての測定は４組で実施した。６５時間後に、細胞中の
ＤＮＡを放射標識するために１４０＋ミジン５０μμ（
１，５μＣ１／−）を加える。７時間培養した後、細胞
を吸引びｉ過し、１）ＮＡを５％強度のトリクロロ酢酸
で沈殿させそして次に水およびメタノールで連続的に洗
滌する。
５０℃で乾燥しそしてシンチレーション液体５蛇を加え
たｐ、ＤＮｈに混入した放射活性度を測定する。
たｐ、ＤＮｈに混入した放射活性度を測定する。
結果は未処理比較対照のチとしての試験物質による培養
後のシンチレーション計数の比として記録する。使用量
−活性度曲線をこのようにして測定した数値から訪棉し
そして工Ｃ５０すなわち試験条件−トで比較対照に比較
して放射性チミジンの混入會５０饅減少する濃度をグラ
フ的に測定うる。不明ＩＹ＋＋＋ ６に記載した化合物
に対するＩＬ！５Ｑ値を第１六に要約しそしてアトリア
マイジン（ＡＤＭ ）と比較する。
後のシンチレーション計数の比として記録する。使用量
−活性度曲線をこのようにして測定した数値から訪棉し
そして工Ｃ５０すなわち試験条件−トで比較対照に比較
して放射性チミジンの混入會５０饅減少する濃度をグラ
フ的に測定うる。不明ＩＹ＋＋＋ ６に記載した化合物
に対するＩＬ！５Ｑ値を第１六に要約しそしてアトリア
マイジン（ＡＤＭ ）と比較する。
（ｂン 軟賀寒大中のＬ１２１０白血鈎細胞のコロニー
の形この方法を使用して数世代にわたる細胞の生長特性
に対する試験物質の作用を検出する（細胞循環期間が１
０〜１２時間である場合、約１４の連続的世代が７日の
試験期間において観察される）。
の形この方法を使用して数世代にわたる細胞の生長特性
に対する試験物質の作用を検出する（細胞循環期間が１
０〜１２時間である場合、約１４の連続的世代が７日の
試験期間において観察される）。
この試験においては、細胞増殖抑制作用を有する物質は
未処理の比較対照物に比較して見出されるコロニーの数
の減少をもたらす。特に試験は次のように実施される。
未処理の比較対照物に比較して見出されるコロニーの数
の減少をもたらす。特に試験は次のように実施される。
１プレート当り５００の白血病細胞を、試験物質の種々
な濃度を使用して６７℃で１時間培養する。次に細胞を
マツコイ（ＭｃＯｏｙ） ５ ａ培地で２回洗滌しそし
て０，３チ寒天の添加後最終的にベトリ皿に注加する。
な濃度を使用して６７℃で１時間培養する。次に細胞を
マツコイ（ＭｃＯｏｙ） ５ ａ培地で２回洗滌しそし
て０，３チ寒天の添加後最終的にベトリ皿に注加する。
比較対照は単に新鮮な培地を使用して培養する。ある場
合においては、１時間の培養の代りに、種々な濃度の試
験物質を上部寒天層中に混合して培養時間を通して細胞
の連続的露出を達成する。尽天が固化し／こ後、プレー
トヲ培誓ｎｉ？中で３７Ｃで７日間培養する（５％ＣＯ
２，９５％相対湿度）。次に６０μの直径を４了する得
られたコロニー数を計算する。
合においては、１時間の培養の代りに、種々な濃度の試
験物質を上部寒天層中に混合して培養時間を通して細胞
の連続的露出を達成する。尽天が固化し／こ後、プレー
トヲ培誓ｎｉ？中で３７Ｃで７日間培養する（５％ＣＯ
２，９５％相対湿度）。次に６０μの直径を４了する得
られたコロニー数を計算する。
結果は米処理の比較対照のチとしての処理し／こ寒天ノ
゛レート中のコロニー斂として記録する。
゛レート中のコロニー斂として記録する。
工Ｃ５ｏ ｋこのようにしてイυられ７′Ｃ，使用量−
活性度曲線か１．）測定しそして物質の作用の測定とし
て役立７こぜる。本づ６明の化合イ勿に対する結果ｚ次
表に吸約しそしでアトリーｆマイシンと比較すめ。
活性度曲線か１．）測定しそして物質の作用の測定とし
て役立７こぜる。本づ６明の化合イ勿に対する結果ｚ次
表に吸約しそしでアトリーｆマイシンと比較すめ。
表
ＡＩ）Ｍ ６．０Ｘ１０−３２．２Ｘ１０ ４．４Ｘ１
０−２サイトロジンＤ ２．８Ｘ１０ ３．４Ｘ１０
１．２Ｘ１０’−５ｕ Ａ １．ｌＸ１０ ５．０Ｘｉ
Ｕ １．３Ｘ１０−’／／ Ｇ＋−Ｉ ２．８ＸＩＬ］
（ｉｎ−’ ２ Ｘｌ０−’サイトロジン０ ５．５
ｘ１０ １．５ｘ１０ ３．４ｘ１０−３／／ Ｄ ２
．８Ｘ１［］−’ ３．７Ｘ１０−３２．８Ｘ１０−’
ｔ／ Ｆ ２．４ｘ１０−’ ２．８Ｘ１０−２４．２
ｘ１０−２１／ Ｊ ４．４ ＊） ／Ｉ Ｆ ２．５Ｘ１０−２１．４Ｘ１０−” ２．８
ｘ１［］−２１１Ｐ ２．６Ｘ１０ ３．２ｘｌＯ−’
２．８ｘｉＤ−’ｐ ｖ ２．９Ｘ１ｏ−’ ２．７
Ｘ１［］−’ ２ ｘｌ＋］−’〃Ｋ ３．７ＸＩＦ３
３ Ｘ１０”” ３．１Ｘ１０−２〃 Ｌ ３ Ｘ１０
” ２．１Ｘ１０−’ １．７５／／ Ｍ ２．８Ｘ１
０−’ １．６Ｘ１１）−１，”＋、９ＸＨＪ−’’／
Ｎ ５ Ｘｌ［］−５２，５Ｘ１０づ ４，５×１０
−２（圧）＊）試験未了
０−２サイトロジンＤ ２．８Ｘ１０ ３．４Ｘ１０
１．２Ｘ１０’−５ｕ Ａ １．ｌＸ１０ ５．０Ｘｉ
Ｕ １．３Ｘ１０−’／／ Ｇ＋−Ｉ ２．８ＸＩＬ］
（ｉｎ−’ ２ Ｘｌ０−’サイトロジン０ ５．５
ｘ１０ １．５ｘ１０ ３．４ｘ１０−３／／ Ｄ ２
．８Ｘ１［］−’ ３．７Ｘ１０−３２．８Ｘ１０−’
ｔ／ Ｆ ２．４ｘ１０−’ ２．８Ｘ１０−２４．２
ｘ１０−２１／ Ｊ ４．４ ＊） ／Ｉ Ｆ ２．５Ｘ１０−２１．４Ｘ１０−” ２．８
ｘ１［］−２１１Ｐ ２．６Ｘ１０ ３．２ｘｌＯ−’
２．８ｘｉＤ−’ｐ ｖ ２．９Ｘ１ｏ−’ ２．７
Ｘ１［］−’ ２ ｘｌ＋］−’〃Ｋ ３．７ＸＩＦ３
３ Ｘ１０”” ３．１Ｘ１０−２〃 Ｌ ３ Ｘ１０
” ２．１Ｘ１０−’ １．７５／／ Ｍ ２．８Ｘ１
０−’ １．６Ｘ１１）−１，”＋、９ＸＨＪ−’’／
Ｎ ５ Ｘｌ［］−５２，５Ｘ１０づ ４，５×１０
−２（圧）＊）試験未了
【図面の簡単な説明】
添（＝ｊ図而面おいて第１〜１６図はそれぞれ下記のサ
イトＯ：）ンのＩＨ−Ｎ〜ｉＲを示ｔグラフでろる。 第 １１’Ｎ Ａ ；４１２図 Ｂ 第３図 Ｈ 第４図 Ｅ 第５図 Ｆ 第６図 Ｄ 第７図 Ｃ 第８図 Ｇ÷工 第９図 Ｎ＋０ 第１０図 Ｐ 第１１図 Ｖ 第１２図 Ｌ 第１３図 ＪＡ 特許出願人 ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト手続
捕正書 昭和５９年９月１３日 １．１許庁長官 志 賀 学 殿 １、事件の表示 昭和５９年’ｌ、ＩＩ’許願第１２７６４４号２、発明
の名称 アントラザイクリン誘尋体およびその製法３、補１１ユ
をする者 事件との関係 特許用り、ｌ１人 名称 ヘギスト・アクチェンケ゛セル／ヤフト４、代
１甲 ノ（ −１，１ ５、補正命令の１」例 （自発） 昭和 年 月 １−１（発送日 眩 ）６・ｉ’ｉｌｉ
ＩＥｏ）対家 明イ１１旨（）の発明の詳、！（！Ｉ
な１況明の欄Ｚ補正の内容 １）第５２員第７行の（−ｓｈ、 ３８２ Ｊを「ｓｈ
、 ３．８２ Ｊと袖正します。 ２）第７０頁第１行の「４．９５ （４，１） ｊをｒ
４９５（４，１月と補正します。 ６）第７１頁下から第７行の１９９％酢酸」を「９９％
酢敏／水」と補正します。 以上
イトＯ：）ンのＩＨ−Ｎ〜ｉＲを示ｔグラフでろる。 第 １１’Ｎ Ａ ；４１２図 Ｂ 第３図 Ｈ 第４図 Ｅ 第５図 Ｆ 第６図 Ｄ 第７図 Ｃ 第８図 Ｇ÷工 第９図 Ｎ＋０ 第１０図 Ｐ 第１１図 Ｖ 第１２図 Ｌ 第１３図 ＪＡ 特許出願人 ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト手続
捕正書 昭和５９年９月１３日 １．１許庁長官 志 賀 学 殿 １、事件の表示 昭和５９年’ｌ、ＩＩ’許願第１２７６４４号２、発明
の名称 アントラザイクリン誘尋体およびその製法３、補１１ユ
をする者 事件との関係 特許用り、ｌ１人 名称 ヘギスト・アクチェンケ゛セル／ヤフト４、代
１甲 ノ（ −１，１ ５、補正命令の１」例 （自発） 昭和 年 月 １−１（発送日 眩 ）６・ｉ’ｉｌｉ
ＩＥｏ）対家 明イ１１旨（）の発明の詳、！（！Ｉ
な１況明の欄Ｚ補正の内容 １）第５２員第７行の（−ｓｈ、 ３８２ Ｊを「ｓｈ
、 ３．８２ Ｊと袖正します。 ２）第７０頁第１行の「４．９５ （４，１） ｊをｒ
４９５（４，１月と補正します。 ６）第７１頁下から第７行の１９９％酢酸」を「９９％
酢敏／水」と補正します。 以上
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）式Ｉ 〔式中Ｒ１は水素または一０Ｒ５を意味し、Ｒ２は一０
Ｒ４または一〇〇 〇Ｒ’５を表わし、ここでＲ５は０
１〜Ｃ３−アルキルでありそしてＲ５およびＲ４は同一
または相異なりて水素であるかまたは下ｔ１［組成すな
わちＲｏａ−ｄ、Ｆ−Ｒｏｄ、 Ｒｏａ−ｄＦ−Ｃ１ｎ
Ａ。 Ｒｏａ４Ｆ”ｘＣｌｎ、 ＢＳＲｏａ−Ｒｏｄ−Ｒｏｄ
、 Ｒｏａ−Ｒｏｄ−Ｃ１ｎＡ。 Ｒｏａ−Ｒｏｄ−Ａ、ｃｕ、 ＲＯ（１−ＲＯｄ−ＲＯ
（１，Ｒｏａ−ｄＦ−Ａｃｕ 。 ＲＯａ−ＲｏｄまたはＲｏａ−ｄＦ（これら式中Ｒｏａ
はロドサミンであり、ｄＦはデオキシフコースであり、
Ｒｏｄはロジノースであり、 ＡＣＵはアキュロース（
ａａｕｘｏｓｅ）であり、Ｃ１ｎ Ａはシネルロース（
ｃｉｎｅｒｕｌｏｓｅ） ＡでありそしてＣ１ｎ Ｂは
シネルロースＢでありそしてｄＦ＝ｃｉｎ １３は２個
の糖単位が通常の配糖体結合の他に付加的なエーテル橋
により結合していることを意味する〕を有する糖組み合
せを表わすものとする〕を有する化合物ならびにその生
理学的に受容しうる酸付加塩。 ２）Ｒ１がＯＲ３基でありそしてＲ２が一０Ｒ４基であ
り、ここでＲ３およびＲ４は前記特許請求の範囲第１項
に示された糖組み合せである前記特許請求の範囲第１項
記載の式Ｉを有する化合物ならびにその生理学的に受容
しうる酸付加塩。 ３）Ｒ３が糖組み合せＲｏａ−Ｒｏｄ−Ａｃｕでありモ
してＲ４が糖組み合せＲｏａ−Ｒｏｄ−Ａｃｕである前
記特許請求の範囲第２項記載の化合物ならびにその生理
学的に受容しうる酸付加塩。 ４）Ｒ３が糖組み合せＲｏａ４？−Ｃ１ｎ Ａでありそ
してＲ４が糖組み合せＲｏ ａ −Ｒｏｄ−Ｒｏ ｄで
ある前記特許請求の範囲第２項記載の化合物ならびにそ
の生理学的に受容しうる酸付加塩。 ５）Ｒ３およびＲ４が糖組み合せＲｏａ −ＲＯ（１−
ＲＯ（１である前記特許請求の範囲第２項記載の化合物
ならびにその生理学的に受容しうる酸付加塩。 ６）式が糖組み合せＲｏａ−ｄＦ＝Ｃ１ｎ Ｂでありモ
してＲ４が糖組み合せＲｏａ−ｄＦ−Ｃ１ｎ Ａである
前記特許請求の範囲第２項記載の化合物ならびにその生
理学的に受容しうる酸付加塩。 ７）Ｒ５が糖組み合せＲｏａ−ｄＦ−Ｃ１ｎ Ａであり
そしてＲ４が糖組み合せＲｏａ−Ｒｏｄ−Ａｃｕである
前記特許請求の範囲第２項記載の化合物ならびにその生
理学的に受容しうる酸付加塩。 ８）Ｒ３が糖組み合せＲｏａ−Ｒｏｄ−Ａｃｕでありそ
してＲ４が糖組み合せＲｏａ−Ｒｏｄ−Ｒｏｄである前
記特許請求の範囲第２項記載の化合物ならびにその生理
学的に受容しうる酸付加塩。 ９）Ｒ３が糖組み合せＲｏａ−Ｒｏｄ−Ｒｏｄでありそ
してＲ４が糖組み合せＲｏａ４Ｆ−Ｒｏｄである前記特
許請求の範囲第２項記載の化合物ならびにその生理学的
に受容しうる酸付加塩。 １０） Ｒ５およびＲ４がそれぞれ糖組み合せＲｑａ−
ｄＦ−Ｒｏｄである前記特許請求の範囲第２項記載の化
合物ならびにその生理学的に受容しうる酸付加塩。 １１） Ｒ１が水素でありそしてＲ２が一０Ｒ４基であ
りここでＲ４は前記特許請求の範囲第１項に示された糖
組み合せの１種である前記特許請求の範囲第１項記載の
式１を有する化合物ならびにその生理学的に受容しうる
酸付加塩。 １２） Ｒ４が糖組み合せＲｐａ−Ｒｏｄ−Ｒｏｄであ
る前記特許請求の範囲第１１項記載の化合物ならびにそ
の生理学的に受容しうる酸付加塩。 １３） Ｒ４が糖組み合せＲｏａ−Ｒｏｄである前記特
許請求の範囲第１１項記載の化合物ならびにその生理学
的に受容しうる酸付加塩。 １４） Ｒ４が糖組み合せＲＯＩ！Ｌ−ｄＦ’である前
記特許請求の範囲第１１項記載の化合物ならびにその生
理学的に受容しうる酸付加塩。 １５）微生物ストレプトマイシス・ゾルプラセンス（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐｕｒｐｕｒａｓｃｅｎｓ）
（Ｙ−１１４７２）を栄養培地の存在下に好気性条件下
に発酵させそして生成された化合物を有機溶媒を用いて
抽出しそして次にクロマトグラフィーまたは分配により
培養液体および菌糸体から単離することを特徴とする特
許 １項記載の式Ｉを有する化合物６製法。 １６）微生物ストレプトマイシス・プルプラセンスを炭
素源および窒素源ならびに無機栄養塩ならびに痕跡元素
を含有する栄養培地中で温度２４〜４０℃およびｐＨ６
．５〜ａ５で発酵させ、生成゛された化合物を培養液体
からは酢酸エチルまたはクロルホルムを用いてそして菌
糸体からははじめに水性アセトンを用いて抽出し、分離
された水性相から次に酢酸エチルで抽出し、合した酢酸
エチル抽出液を濃縮しそしてベンゼンまたはトルエン中
にとり、得られた溶液を酢酸塩緩衝液を用いてｐＨ ３
． ５で抽出しそして得られた溶液からクロマトグラフ
ィーまたは分配により弐Ｉの化合物を単離することを特
徴とする前記特許請求の範囲第１５項記載の方法。 １７）式夏の化合物のりｐマトグラフィー単離がシリカ
ゲルカラムでのクロマトグラフィー、逆相吸着剤、小滴
−向流クロマトグラフィーまたは分配クロマトグラフィ
ーそして次に薄層または高圧液体クロマドグシフイーに
より遂行されることを特徴とする特許 範囲第１６項記載の方法。 １８）前記特許請求の範囲第１項記載の式■を有する化
合物を場合により慣用の薬学的担体および／または安定
剤と共に治療上適当な投与形態となすことを特徴とする
医薬の製法。 １９ン 前記特許請求の範囲第１項記載の式■を有する
化合物を含有することを特徴とする医薬。 ２０）医薬として使用するための前記特許請求のｄα囲
第１項記載の式Ｉを有する化合物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3323025.0 | 1983-06-25 | ||
| DE3323025A DE3323025A1 (de) | 1983-06-25 | 1983-06-25 | Anthracyclin-derivate, ein mikrobiologisches verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als cytostatika |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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