DE10029433A1 - Rhodomycinon-Derivate - Google Patents

Rhodomycinon-Derivate

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DE10029433A1
DE10029433A1 DE10029433A DE10029433A DE10029433A1 DE 10029433 A1 DE10029433 A1 DE 10029433A1 DE 10029433 A DE10029433 A DE 10029433A DE 10029433 A DE10029433 A DE 10029433A DE 10029433 A1 DE10029433 A1 DE 10029433A1
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ditrisarubicin
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Michael Speitling
Iris Gruen-Wollny
Heinz Herbert Fiebig
Hartmut Laatsch
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Bioleads GmbH
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    • C07H15/20—Carbocyclic rings
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    • A—HUMAN NECESSITIES
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Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft die neuen Rhodomycinon-Derivate 2''''''-C¶1¶-C¶4¶-Alkoxy-2'''''', 3''''''-dihydroditrisarubicin C, 2'''-C¶1¶-C¶4¶-Alkoxy-2''', 3'''-dihydroditrisarubicin CR, 2'''-C¶1¶-C¶4¶-Alkoxy-2''', 3'''-dihydroditrisarubicin H, 2''''''-C¶1¶-C¶4¶-Alkoxy-2'''''', 3''''''-dihydroditrisarubicin H, Ditrisarubicin I, Distrisarubicin IR, Cytorhodin Y, Verfahren zu ihrer Herstellung und deren Verwendung als Antitumormittel.

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue Rhodomycinon-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und deren Verwendung als Antitumormittel. Insbesondere betrifft die Erfindung Derivate des γ-Rhodomycinon und des β-Rhodomycinon. Die Erfindung bezieht sich auch auf pharmazeutische Zusammensetzungen, die die Rhodomycinon- Derivate als Bestandteile enthalten, sowie die Verwendung der Verbindungen insbesondere als Medikamente zur Behandlung von Dickdarmkrebs, Lungenkrebs und Leukämie.
Gegenstand der Erfindung sind folgende Verbindungen:
2''''''-C1-C4-Alkoxy-2'''''',3''''''-dihydroditrisarubicin C,
2'''-C1-C4-Alkoxy-2''',3'''-dihydroditrisarubicin CR,
2'''-C1-C4-Alkoxy-2''',3'''-dihydroditrisarubicin H,
2''''''-C1-C4-Alkoxy-2'''''',3''''''-hydroditrisarubicin H,
Ditrisarubicin 1,
Ditrisarubicin IR,
Cytorhodin Y,
deren Tautomere und deren physiologisch verträglichen Salze.
Verbindungen mit ähnlichen Strukturen sind z. B. in EP 167935 und U. Hedtmann (U. Hedtmann, H.-W. Fehlhaber, D. A. Sukatsch, M. Weber, D. Hoffmann, H. P. Kraemer, J. Antibiot. 1992, 45, 1373-1375) beschrieben und zeigen biologische Effekte als Antitumor- Substanzen (Y. Matsuzawa, T. Oki, T. Takeuchi, H. Umezawa, J. Antibiot. 1981, 34, 1596-1607).
Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind z. T. aktiver als das in der Tumortherapie eingesetzte Doxorubicin.
Folgende Substanzen sind besonders bevorzugt:
Cytorhodin Y,
2''''''-Methoxy-2'''''',3''''''-dihydroditrisarubicin C.
In der Beschreibung und den Ansprüchen gelten für die einzelnen Substituenten folgende Definitionen:
Der Term "Alk" in Alkoxy bedeutet ein lineares oder verzweigtes Alkylketten-Radikal der jeweils angegebenen Länge. So bedeutet C1-4- Alkyl z. B. Methyl Ethyl, 1-Propyl, 2-Propyl, 2-Methyl-2-propyl, 2-Methyl-1-propyl, 1-Butyl, 1-But-enyl, 2-Butyl. Bevorzugt sind Methyl und Ethyl, besonders bevorzugt Methyl.
Die erfindungsgemäβen Verbindungen können als solche oder in Form ihrer Salze mit physiologisch verträglichen Säuren vorliegen.
Beispiele für solche Säuren sind: Salzsäure, Zitronensäure, Weinsäure, Milchsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Essigsäure, Ameisensäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Bernsteinsäure, Hydroxybernsteinsäure, Schwefelsäure, Glutarsäure, Asparaginsäure, Brenztraubensäure, Benzoesäure, Glucuronsäure, Oxalsäure, Ascorbinsäure und Acetylglycin.
Die neuen erfindungsgemäßen Verbindungen lassen sich bei Primär- Tumoren oder bei Metastasen einsetzen. Bevorzugt werden die Verbindungen, bei folgenden Krebserkrankungen eingesetzt:
Brustkrebs, Dickdarmkrebs, Magenkrebs, Leukämie, Melanom, Lungenkrebs, Renaler Krebs, Gebärmutterkrebs. Besonders bevorzugt werden Dickdarmkrebs und Lungenkrebs mit den erfindungsgemäßen Verbindungen behandelt.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in üblicher Weise oral oder parenteral (subkutan, intravenös, intramuskulär, intraperitoneal, rektal) verabfolgt werden. Die Applikation kann auch mit Dämpfen oder Sprays durch den Nasen-Rachenraum erfolgen.
Die Dosierung hängt vom Alter, Zustand und Gewicht des Patienten sowie von der Applikationsart ab. In der Regel beträgt die einmalige Wirkstoffdosis bei parenteraler Gabe zwischen etwa 1 und 2000 mg pro m2 Körperoberfläche, üblicherweise bei 10 bis 100 mg pro m2. Bei wiederholter Gabe wird die Dosis reduziert und liegt üblicherweise bei 3 mg bis 30 mg pro m2 Körperoberfläche. Kann der Wirkstoff lokal angewandt werden reduzieren sich die Dosen üblicherweise noch etwas. Bei oraler Gabe sind die Dosen unter Berücksichtigung der Bioverfügbarkeit anzupassen.
Die Verbindungen können in den gebräuchlichen galenischen Applikationsformen fest oder flüssig angewendet werden, z. B. als Tabletten, Filmtabletten, Kapseln, Pulver, Granulate, Dragees, Suppositorien, Lösungen, Salben, Cremes oder Sprays. Diese werden in üblicher Weise hergestellt. Die Wirkstoffe können dabei mit den üblichen galenischen Hilfsmitteln wie Tablettenbindern, Füllstoffen, Konservierungsmitteln, Tablettensprengmitteln, Fließreguliermitteln, Weichmachern, Netzmitteln, Dispergiermitteln, Emulgatoren, Lösungsmitteln, Retardierungsmitteln, Antioxidantien und/oder Treibgasen verarbeitet werden (vgl. H. Sucker et al.: Pharmazeutische Technologie; Thieme-Verlag, Stuttgart, 1978). Die so erhaltenen Applikationsformen enthalten den Wirkstoff normalerweise in einer Menge von 0,1 bis 99 Gew.-%.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auch in Kombination mit weiteren Wirkstoffen zur Krebsbehandlung eingesetzt werden.
Experimenteller Teil Pharmakologische Tests
Alle erfindungsgemäßen Verbindungen fielen im Primärscreening mit der Zelllinie HT29 auf. Für die Verbindungen Cytorhodin Y und 2''''''-Methoxy-2'''''',3''''''-dihydroditrisarubicin C wurden weitergehende Bestimmungen durchgeführt. Für 2''''''-Methoxy-2'''''',3''''''-dihydroditrisarubicin C wurde in der Zelllinie HT29 ein IC50-Wert von 0.026 µg/ml gefunden.
Für Cytorhodin Y wurden folgende Werte bestimmt:
Tumorzelllinien
Brustkrebs: MACL MCF7
Dickdarmkrebs: HT29
Magenkrebs: GXF 251
Leukämie: LXL H460; CNCL SF268
Melanom: MEXF 462NL
Lungenkrebs: LXFL 529L, LXFL 629L
Renal Krebs: RXF 944L
Gebärmutterkrebs: UXF 1138
Zellkulturen
Die humanen Tumorzellen wurden bei 37°C in einer Atmosphäre von 95% Luft und 5% CO2 in Monlayer-Kulturen in RPMI 1640 Medium mit Phenol-Rot und einem Zusatz von 10% fötalem Kalbsserum. Die Zellen werden trypsinisiert und wöchentlich umgesetzt.
Cytotoxizitäts-Assay
Um die antiproliferative Wirkung der Verbindungen festzustellen, wurde ein modifizierter Propidium-Iodid Assay benutzt. Die Zellen wurden von Exponential-Phasen Kulturen geerntet, die im RPMI 1640 Medium ergänzt mit 10% fötalem Kalbsserum gewachsen waren, anschließend gezählt und in 96 well Mikrotiterplatten (100 µl Zellsuspension, 1.105 und 5.104 Zeiten/ml) ausplattiert. Nach einer Zeit von 24 h, in der die Zellen wieder in das exponentielle Wachstum gelangten, wurden 50 µl reines Kulturmedium als Kontrolle in 6 Wells/Platte oder 50 µl Kulturmedium mit den Testverbindungan in die Wells gegeben. Nach 3 bis 7 Tagen Inkubation (abhängig von der Zellverdopplungsrate) wurde das Kulturmedium durch frisches Medium mit Propidium-Iodid (6 µg/ml) ersetzt. Die Platten wurden anschließend 24 h bei -18°C aufbewahrt, um die Zellen abzutöten. Nach dem Auftauen wurde die Fluoreszenz mit einem Millipore Cytofluor 2350-Mikroplate- Reader (Anregung 530 nm; Emission 620 nm) gemessen, um die gesamte Zellzahl zu quantifizieren. Der Assay enthielt positive und unbehandelte Kontrollen. Die Konzentration der eingesetzten Verbindungen betrug 0,3 und 3 µg/ml.
Die Wachstumsinhibition wurde beschrieben als behandelt/Kontrolle * 100.
Bei der Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen wurden folgende Materialien und Methoden verwendet.
IR-Spektren
Perkin-Elmer 1600 Series FTIR; Perkin-Elmer 297 Infrared Spectrophotometer; Beckman DU-640; Shimadzu FT-IR; (KBr-Preßlinge und Film).
UV-Spektren
HP 8451A Diode Array Spectrophotomneter, Jasco Multiwavelength Detektor MD-910.
1H-NMR-Spektren
Varian XL 200 (200 MHz); Varian VXR 200 (200 MHz), Bruker WM 300 (300,1 MHz), Bruker Avance DRX 500 (499,8 MHz), Varian INOVA 500 (499,8 MHz), Varian VXR 500 (499,8 MHz). Kopplungskonstanten (J) in Hz.
Abkürzungen:
s = Singulett, d = Dublett, dd = Doppeldublett, t = Triplett, q = Quartett, m = Multiplett, br = breit.
13C-NMR-Spektren
Varian XL-200 (50,2 MHz), Varxian VXR-200 (50,3 MHz), Bruker WM 300 (75,5 MHz), Bruker Avance DRX 500 (125,7 MHz), Varian INOVA 500 (125.7 MHz), Varian VXR-500 (125,7 MHz). Chemische Verschiebung in δ-Werten relativ zu Tetramethylsilan als internem Standard: Abkürzungen: APT (Attached Proton Test): CH/CH3-Signale stehen nach oben, C/CH2-Signale stehen nach unten.
Massenspektren
EI-MS mit Varian MAT 731 (70 eV), Varian 311A (70 eV), AMD-402 (70 eV); Hochauflösungen wurden mit Perfluorkerosin als Vergleichssubstanz durchgeführt; FAB-MS mit Finnigan MAT 95 A, AMD Intectra AMD-402, Matrix: 3-Nitrobenzylalkohol; DCI-MS mit Finnigan MAT 95 A, Reaktandgas: NH3; ESI-MS mit Quadro Triple Quadrupole Mass Spectrometer (VG Micromass), Finnigan TSQ 7000 mit nano-ESI-API-Ionenquelle.
HPLC
Alle Eluenten wurden über Membranfilter (Wasser: Celluloseacetat, Porenweite 45 µm, Sartorius, Göttingen; Acetonitril: Filter RC-Vlies verstärkt, Porenweite 45 µm, Sartorius, Göttingen) filtriert und 10 min durch Ultraschall entgast; Analytische Anlage: 1) Knauer Spektral-Digital-Photometer A0293, zwei Knauer Pumpen Typ 64 A0307, Programm: Knauer. HPLC-Software V2.22, Mischkammer: Knauer: A0285; Aufgabe-Ventil: Knauer Injektions-Schaltventil 6/1 A0263 (Typ Reodyne); Probenschleife 20 µl; 2) Jasco Multiwavelength Detector MD-910, zwei Pumpen Typ Jasco Intelligent Preg. Pump PU-987 mit Mischkammer, Degasser VDS Degasys DG-1310, Aufgabe-Ventil: Reodyne mit 20 µl Injektionsschleife, Software: Borwin HPLC-Software; Präparative Anlagen: Analog den analytischen, nur mit 1) Knauer präparative Durchflußküvette (d = 0,5 mm), Probenschleife 500 µl; 2) Jasco präparative Durchflußküvette, Probenschleife 500 µl; Analytische Säulen: 1) Vertex 4 × 250 mm mit 4 × 4 mm Vorsäule: Stationäre Phase: Eurochrom Eurospher RP 60-10 C18 60 Å 7-12 µm, 2) Vertex 4 × 250 mm mit 4 × 4 mm Vorsäule: Stationäre Phase: Merck Lichrosorb RP C18 7 µm, 3) Vertex 4.6 × 250 mm mit 4 × 4 mm Vorsäule: Stationäre Phase: ODS-AQ/303; Präparative Säule: Vertex 16 × 250 mm mit 16 × 30 mm Vorsäule: Stationäre Phase: Eurochrom Europrep RP 60-10 C18 60 Å 7-12 µm. Lösungsmittel für die HPLC: Für die Trennungen wurde durch fraktionierte Destillation zurückgewonnenes Acetonitril/Wasser-Azeotrop (83,7% Acetonitril/16,3% Wasser, Sdp. 78,5°C) eingesetzt.
Material Dünnschichtchromatographie (DC)
DC-Folien Polygram SIL G/UV254, (Macherey-Nagel & CO), basisches SiO2: DC-Folien (Polygram SIL G/U254; Macharey-Nagel & Co) wurden mit 0,2 N Natriumacetat Lösung getränkt und an der Luft getrocknet; saures SiO2: DC-Foien (Polygram SIL G/UV254; Macherey-Nagel & Co) wurden mit 0,2 N Oxalsäure getränkt und an der Luft getrocknet; Rf-Werte beziehen sich, wenn nicht anders angegeben, auf das bei der SC angegebene Laufmittel.
Präparative Dickschichtchromatogaphie (PDC)
Eine Aufschlämmung von je 55 g Kieselgel P/UV254 (Macherey-Nagel & Co) in 120 ml Wasser goß man auf waagerecht liegende Glasplatten (20 × 40 cm oder zwei 20 × 20 cm), ließ an der Luft trocknen und aktivierte 3 h bei 130°C; oxalsaure PDC-Platten: wie zuvor, jedoch Aufschlämmung mit 0,2 N Oxalsäure.
Säulenchromatographie (SC)
MN Kieselgel 60: 0,05-0,2 mm, 70-270 mesh (Macherey-Nagel & Co); Kieselgel für Flash-Chromatographie: 30-60 µm (J. T. Baker); Sephadex LH-20 (Pharmacia); XAD 2, 300-1000 µm, SERVA Heidelberg. Die Säulen wurden naß gefüllt.
Sprühreagenzien
Anisaldehyd/Schwefelsäure: Zu 100 ml einer Stammlösung aus 85 ml Methanol, 14 ml Eisessig und 1 ml Schwefelsäure fügte man 1 ml Anisaldehyd hinzu. Das Reagenz war ca. 7 d haltbar. Ehrlich's Reagenz: 1 g 4-Dimethylaminobenzaldehyd wurden in einer Mischung von 25 ml Salzsäure (37proz.) und 75 ml Methanol gelöst. - Kaliumpermanganat: Als Sprühreagenz diente eine 0,05proz. wäßrige Kaliumpermanganat-Lösung.
INPTC: 2-(p-Iodophenyl)-3-(p-nitrophenyl)-5-phenyl-2H- tetrazoliumchlorid; Lösung I: 0,5 g INPTC wurden in 100 ml Methanol gelöst; Lösung II: 5 g in 10 ml Wasser gelöstes KOH wurden mit Methanol auf 10,0 ml aufgefüllt. Die mit Lösung I besprühte DC-Folie wurde 5 min bei Raumtemperatur stehen gelassen und dann 5 min auf 75°C erwärmt. Anschließend wurde die Folie mit Lösung II besprüht. Carbonylverbindungen ergaben gelbe bis orange Flecken.
Mikrobiologisches Material
Bakterienlagerung: Dewargefäß Fa. l'Air liquid, Typ BT 37 A. - Kapillaren zur Tiefkühllagerung: Durchmesser 1,75 mm, Länge 80 mm, Fa. Hirschmann Laborgeräte, Eberstadt. - Erde für Erdkulturhaltung: Luvos Heilerde LUVOS JUST GmbH & Co Friedrichshof (aus dem Reformhaus bezogen). Die Erde wurde zum Sterilisieren 3 h auf 130°C erhitzt, 1 h bei 100°C und 1,1 bar autoklaviert und anschließend nochmals 3 h auf 130°C erhitzt. - Ultraturrax: Janke & Munkel KG. - Schüttler: Rundschüttler INFORS Typ ITE. - Autoklav: Albert Dargatz Autoklav, Volumen 119 l, Betriebstemperatur 121°C; Betriebsdruck 1 kg/cm2. - Antibiotika-Testplättchen: 9 mm Durchmesser, Schleicher & Schüll No. 321 261. - Nährbodenbestandteile: Glukose, Pepton, Bacto Agar, Hefe-Eztrakt und Malz-Extrakt von Fa. Merck; Chitin von Sigma. - Antischaum-Lösung: Niax PPG 2025, Union Carbide Belgium N.V. Zwijndrecht. - Petrischalen: Durchmesser 94 mm, Höhe 16 mm, Fa. Greiner Labortechnik, Nürtingen. - Celite: Celite France S. A., Rueil-Malmaison Cedex - Laminar-Flow-Box: Kojair KR-125, Reinraumtectvnik GmbH, Rielasingen-Worblingen 1, Deutschland.
M2 +-Agar
Malzextrakt 10,0 g
Hefeextrakt 4,0 g
Glucose 4,0 g
Leitungswasser 1000 ml
Bei festem Medium zusätzlich 18. 0 g Agar-Zusatz. Mit 2 N Natronlauge auf pH 8,0 eingestelltes Medium ergab nach dem Autoklavieren pH 7,1 bis 7,4.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen lassen sich aus Actinomyceten gewinnen, insbesondere aus dem Stamm GW 33/1311, der bei der DSMZ in Braunschweig unter der Nummer 11149 hinterlegt wurde. Der Stamm GW 33/1311 produziert ohne Verfahrensoptimierung schon 20 mg Anthracycline aus 6 l Kulturmedium.
Der Actinomycet GW 33/1311 (DSM-Nr. 11149) wurde auf Schrägagarröhrchen, dann auf Agarplatten jeweils 72 h bei 28°C inkubiert. Mit diesen Kulturen wurden 60 mit je 165 ml M2 +-Nährmedium gefüllte 1 l-Erlenmeyerkolben beimpft und 72 h bei 28°C mit ca. 120 Upm inkubiert. Der Star wuchs als dunkelrote Pellets, das Nährmedium war rotbraun gefärbt. Zum Aufarbeiten wurde die Kulturbrühe mit Celite vermischt und mit der Filterpresse filtriert. Das wässrige Filtrat extrahierte man sechsmal mit Ethylacetat. Der mit Celite vermischte Zellrückstand­ wurde siebenmal mit je 2 l Ethylacetat digeriert, 15 min mit Ultraschall behandelt und filtriert. Die vereinigten organischen Phasen ergaben 1,2 g eines dunkel rotbraunen, öligen Eindampfrückstandes.
Isolierung
Den in 250 ml Methanol gelösten Rotextrakt entfettete man durch zweimaliges Ausschütteln mit jeweils 100 ml Cyclohexan. Ebenso können für die Verbindungen des Beispiels 5 als Lösungsmitttel C2-C4- Alkohole verwendet werden. Bevorzugt ist hierbei Etanol. Die entfetteten Extrakte wurden durch SC an Sephadex LH-20 (Säule 30 × 600 mm, CHCl3/44% CH3OH) getrennt. Nach 500 ml Vorlauf teilte man unter DC-Kontrolle (CHCl3/CH3OH/NH3(aq): 100/5/0,05) in 7 Fraktionen: Fraktion I: Rf = 0,45-0,03, 30 mg; Fraktion II: Rf = 0,70-0,40, orange-rote Fluoreszenz, 460 mg; Fraktion III: Rf = 0,31-0,15, orange-rote Fluoreszenz, 110 mg; Fraktion IV: Rf = 0,47-0,28, orange-rote Fluoreszenz, 280 mg; Fraktion V: Rf = 0,35-0,41, 90 mg; Fraktion VI: Rf = 0,55-0,25, 100 mg; Fraktion VII: Rf = 0,65-0,15; 70 mg), die jeweils noch Substanzgemische enthielten. Das biologische und pharmakologische Screenring ergab, dass sich die gesuchten aktiven Substanzen in den Fraktionen II-IV befanden.
Fraktion II wurde durch PDC an Kieselgel (4 Platten 200 × 400 mmm, CHCl3/CH3OH/CH3COOH/H2O: 40/10/1,4/0,8) getrennt, wodurch man unter UV/Vis-Kontrolle 4 rote Fraktionen erhielt: IIa (Rf = 0,75-0,60, 80 mg), IIb (Rf = 0,63-0,55, 180 mg), IIc (Rf = 0,50-0,33, 110 mg), IId (Rf = 0,40-0,20, 50 mg).
Fraktion IIb wurde durch PDC an Kieselgel (200 × 400 mm, dreifache Entwicklung mit CHCl3/CH3OH/NH3(aq): 100/8/0,1) getrennt. Man erhielt 35 mg IIb1 (Rf = 0,59-0,50), 25 mg IIb2 (Rf = 0,54-0,41) und 28 mg IIb3 (Rf = 0,45-0,32): Durch SC an Sephadex LH-20 (Säule 30 × 600 mm, CHCl3/40% CH3OH) erhielt man aus IIb1 23 mg 2''''''-Methoxy-2'''''',3''''''-dihydroditrisarubicin C im Gemisch mit Ditrisarubicin C, aus IIb2 15 mg 2'''-Methoxy-2''',3'''-dihydroditrisarubicin H, 2''''''-Methoxy-2'''''',3''''''-dihydroditrisarubicin H im Gemisch mit Ditrisarubicin H und aus IIb3 13 mg 2'''-Methoxy-2''',3'''-dihydroditrisarubicin CR im Gemisch mit Ditrisarubicin CR.
Fraktion IIc wurde durch PDC an Kieselgel (200 × 400 mm, dreifache Entwicklung mit CHCl3/CH3OH/NH3(aq): 100/10/0,1) getrennt. Man erhielt 35 mg IIc1 (Rf = 0,55-1,40) und 30 mg IIc2 (Rf = 0,44-0,31). Durch SC an Sephadex LH-20 (Säule 30 × 600 mm, CHCl3/40% CH3OH) erhielt man aus IIc2 25 mg Ditrisarubicin I/IR.
Fraktion III wurde durch PDC an Kieselgel (4 Platten 200 × 400 mm, CHCl3/CH3OH/NH3(aq): 100/10/1) getrennt. Man erhielt 24 mg IIIa, (Rf = 0,36-0,25) und 26 mg IIIb (Rf = 0,25-0,13). Durch SC an Sephadex LH-20 (Säule 30 × 600 mm, CHCl3/40% CH3OH) erhielt man aus IIIb 15 mg Cytorhodin Y.
Die Strukturaufklärung erfolgte durch Auswertung der NMR und Massenspektren sowie der sauren Hydrolyse der Verbindungen mit anschließender Vergleichsdünnschichtchromatographie.
Beispiel 1
Cytorhodin Y
Rf = 0.24 (CHCl3/OH3OH/NH3(aq): 100/10/1).
IR (KBr): ν = 3437 (br, OH) cm-1, 2978, 2827, 2777, 1730, 1600, 1445, 1403, 1381, 1322, 1295, 1253, 1222, 1202, 1169, 1117, 1001, 810, 796, 756, 7197, 645, 597.
UV/Vis (CH3CN-H2O-Azeotrop): λmax = 199 nm, 235, 255, 295, 495.
DCI-MS (NH3): m/z (%) = 930 ([M(C48H68N2O16)+H]+, 100).
1H-NMR (CDCl3, 300.1 MHz): δ = 13.89 (s br; 1H, OH), 12.82 (s br; 1H, OH), 12.26 (s br; 1H, OH), 7.90 (d, 3J = 7.4 Hz; 1H, 1-H), 7.70 (t, 3J = 7.4 Hz; 1H, 2-H), 7.28 (d, 3J = 7.4 Hz; 1H, 3-H), 5.48 (d, 3J = 2.9 Hz; 1H, 1'-H), 5.21 (m; 2H, 10-H, 1""-H), 4.99 (d, 3J = 2.9 Hz; 1H, 1"-H), 4.82 (s br; 1H, 1'''-H), 4.50 (br q, 3J = 6.8 Hz; 1H, 5"-H), 4.21 (br q, 3J = 6.7 Hz; 1H, 5'''-H), 4.06 (m; 1H, 3"-H), 3.87 (br q, 3J = 6.8 Hz; 1H, 5'-H), 3.68 (m; 2H, 4'-H, 4'''-H), 3.52 (s br; 1H, 4"-H), 3.38 (s br; 1H, 4""-H), 3.12 (br q, 3J = 6.8 Hz; 1H, 5""-H), 2.97 (m; 1H, 7-Hb), 2.77 (m; 1H, 7-Ha), 2.15 (s br; 12H, 2 N(CH3)2), 2.15-1.55 (m; 19H, 8-H2, 13-H2, 2'-H2, 3'-H, 2"-H2, 2'''-H2; 3'''-H2, 2""-H2, 3""-H, 3OH), 1.25 (m; 6H; 6'-H3, 6'''-H3), 1.12 (d, 3J = 6.8 Hz; 3H, 6"-H3), 0.99 (t, 3J = 6.8 Hz; 3H, 14-H3), 0.82 (d, 3J = 6.8 Hz; 3H, H3).
13C-NMR und APT (CDCl3, 125.7 MHz): δ = 191.0 (C-5, Cquart), 185.6 (C-12; Cquart), 162.6 (C-4, Cquart), 158.3 (C-11, Cquart), 156.3 (C-6, Cquart), 140.2 (C-10a, Cquart), 138.3 (C-6a, Cquart), 137.0 (C-2, CH), 133.9 (C-12a, Cquart), 124.3 (C-3, CH), 119.5 (C-1, CH), 116.3 (C-4a, Cquart), 110.4 (C-5a, Cquart), 110.2 (C-11a; Cquart), 100.3 (C-1''', CH), 99.5 (C-1", CH), 97.7 (C-1', CH), 90.9 (C-1"", CH), 83.7 (C-4", CH), 77.4 (C-9, Cquart), 74.4 (C-4', CH), 69.7 (C-10; CH); 68.4 (C-5''', CH), 68.0 (C-5', CH), 67.3 (C-4''', CH), 66.8 (C-5", CH), 66.4 (C-5"", CH), 65.9 (C-4"", CH), 65.6 (C-3", CH), 61.4 (C-3', CH), 59.5 (C-3""-, CH), 43.4 (C-3'-NCH3, 2 CH3), 42.0 (C-3""-NCH3, 2 CH3), 34.3 (C-2"; CH2), 29.8 (C-2"", CH2), 29.8 (C-2', CH2), 26.5 (C-13, CH2), 25.5 (C-3''', CH2), 24.7 (C-8, CH2), 24.0 (C-2''', CH2), 20.9 (C-7, CH2), 18.1 (C-6', CH3), 17.0 (C-6", CH3), 17.0 (C-6''', CH3), 16.5 (C-6"", CH3), 7.0 (C-14, CH3).
HMQC-NMR (inverses CH-COSY, CDCl3, INVBTP, F1 75.5 MHz, F2 300.1 MHz) (H → C): 1-H → C-1; 2-H → C-2; 3-H → C-3; H-1' → C-1'; 10-H → C-10; 1""-H → C-1""; 1"-H → C-1"; 1'''-H → C-1'''; 5"-H → C-5"; 5'''-H → C-5'''; 3"-H → C-3"; 5'-H → C-5'; 4'-H → C-4'; 4'''-H → C-4'''; 4"-H → C-4"; 4""-H → C-4""; 5""-H → C-5""; 7-H2 → C-7; NCH3 → NCH3; 3'-H → C-3'; 3""-H → C-3""; 2"-H2 → C-2"; 6'-H3 → C-6'; 6'''-H3 → C-6'''; 6"-H3 → C-6"; 14-H3 → C-14; 6""-H3 → C-6"".
HMBC-NMR (inverses COLOC, CDCl3, INV4LPLRND, F1 75.5 MHz, F2 300.1 MHz) (H → C): 1-H 1J → C-1; 1-H 3J → C-12; 1-H 3J → C-3; 1-H 3J → C-4a; 2-H 1J → C-2; 2-H 2J → C-3; 2-H 3J → C-4; 2-H 3J → C-12a; 2-H 4J → C-4a; 3-H 1J → C-3; 3-H 2J → C-4; 3-H 3J → C-1; 3-H 3J → C-4a; 1'-H 3J → C-10-; 1'-H 3J → C-5'; 1'-H 3J → C-3'; 10-H 2J → C-10a; 10-H 3J → C-11; 10-H 3J → C-6a; 10-H 3J → C-1'; 10-H 3J → C-13; 10-H 3J → C-8; 1""-H 3J → C-9; 1""-H 3J → C-5; 1""-H 3J → C-3""; 1"-H 3J → C-4'; 1"-H 3J → C-5"; 1"-H 3J → C-3"; 1'''-H 3J → C-4"; 1'''-H 3J → C-5'''; 1'''-H 3J → C-3'''; 5"-H 2J → C-4"; 5"-H 2J → C-6"; 5'''-H 2J → C-4'''; 5'''-H 2J → C-6'''; 5'-H 2J → C-4'; 5'-H 2J → C-6'; 4'H 2J → C-3'; 4'-H 3J → C-1"; 4'-H 3J → C-2'; 4'''-H 3J → C-2'''; 4"-H 2J → C-3"; 4"-H 3J → C-1'''; 4"-H 3J → C-2"; 4""-H 2J → C-3""; 4""-H 3J → C-2""; 5""-H 2J → C-4""; 5""-H 2J → C-6""; 7-Hb 2J → C-6a; 7-Hb 2J → C-8; 7-Hb 3J → C-6; 7-Hb 3J → C-10a; 7-Hb 3J → C-9; 7-Ha 2J → C-6a; 7-Ha 2J → C-8; 7-Ha 3J → C-10a; 13-H2 2J → C-9; 13-H2 2J → C-14; 13-H2 3J → C-8; 6'-H3 2J → C-5'; 6'-H3 3J → C-4'; 6'''-H3 2J → C-5'''; 6'''-H3 3J → C-4'''; 6"-H3 2J → C-5"; 6"-H3 3J → C-4"; 14-H3 2J → C-13; 14-H3 3J → C-9; 6""-H3 2J → C-5""; 6""-H3 3J → C-4"". NOESY-NMR (CDCl3, NOESYTP, F1 300.1 MHz, F2 300.1 MHz) (H → H): 1-H ↔ 2-H; 2-H ↔ 3-H; 1'-H ↔ 10-H; 1'-H ↔ 2'-H2; 10-H ↔ 5""-H; 10-H ↔ 8-Ha; 1""-H ↔ 2""-H2; 1""-H ↔ 14-H3; 1""-H ↔ 1"-H ↔ 4'-H; 1"-H ↔ 2"-H2; 1"-H ↔ 6"-H3; 1'''-H ↔ 4"-H; 1'''-H ↔ 2'''-H2; 1'''-H ↔ 6'''-H3; 5"-H ↔ 3"-H; 5"-H ↔ 4"-H; 5"-H ↔ 6"-H3; 5'''-H ↔ 4'''-H; 5'''-H ↔ 2'''-H; 5'''-H ↔ 3'''-H; 5'''-H ↔ 6'''-H3; 3"-H ↔ 4"-H; 3"-H ↔ 2"-H; 3"-H ↔ 6"-H3; 5'-H ↔ 4'-H; 5'-H ↔ 2'-H; 5'-H ↔ 6'-H3; 5'-H ↔ 3'-H; 4'-H ↔ 3'-H; 4'-H ↔ 6'-H3; 4'''-H ↔ 2'''-H; 4'''-H ↔ 3'''-H2; 4'''-H ↔ 6'''-H3; 4"-H ↔ 6"-H3; 4""-H ↔ 5""-H; 4""-H ↔ 3""-H; 4""-H ↔ 6""-H3; 5""-H ↔ 3""-H; 5""-H ↔ 14-H3; 5""-H ↔ 6""-M3; 7-Hb ↔ 7-Ha.
C48H68N2O16
Berechnet:
928.45562
Gefunden:
928.45562.
Beispiel 2
2''''''-Methoxy-2'''''',3''''''-dihydroditrisarubicin C (2a)
2'''-Methoxy-2''',3'''-dihydroditrisarubicin CR (2b)
2''''''-Methoxy-2'''''',3''''''-dihydroditrisarubicin C (2a)
Rf
= 0.43 (CHCl3
/CH3
OH/NH3
(aq): 100/6/0.05).
IR (KBr): ν = 3432 (br, OH) cm-1, 2925, 2854, 1734, 1640, 1460, 1383, 1261, 1115, 1018, 803.
UV/Vis (CH3
CN-H2
O-Azeotrop): λmax = 235 nm, 255 291, 499.
(+)-ESI-MS: m/z (%) = 1198 ([M(C61H84N2O22)+H]+, 26), 941 (29), 599 ([M+H]2+, 76).
(+)-ESI-MS Tochterionenspektrum von 1198: m/z (%) = 1198 ([M+ H)+; 16), 957 ([M-C12H17O5+H]+, 2), 941 ([M-C13H21O5+H]+, 40), 800 ([M-C20H32NO7+H]+, 1), 784 ([M-C21H36NO7+H]+, 5), 701 ([M-C25H38O10+H]+, 70), 544 ([M-C33H53NO12+H]+, 26), 526 (4), 388 (3), 372 (6), 351 (1), 225 (13), 207 (5), 158 ([C8H15NO2+H]+; 100), 132 ([C6H11O3+H]+, 39), 114 ([C6H10O2+H]+; 4); 97 (6).
1
H-NMR (CDCl3
, 300.1 MHz): δ = 13.78 (s br; 1H, OH); 12.89 (s br; 1H, OH), 12.19 (s br; 1H, OH), 7.91 (d, 3J = 7.4 Hz; 1H, 1-H), 7.73 (t, 3J = 7.4 Hz; 1H, 2-H), 7.33 (d, 3J = 7.4 Hz; 1H, 3-H), 5.48 (m; 2H, 1'-H, 1""-H), 5.15 (s br; 1H, 7-H), 5.05 (m; 2H, 1"-H, 1'''-H), 5.01 (m; 1H, 10-H), 4.98 (m; 2H, 1'''''-H, 1''''''-H), 4.68-4.40 (m; 4H, 2'''-H, 5"-H, 5'''-H, 5""-H), 4.34 (m; 1H, 3"-H), 4.12-3.98 (m; 3H, 4"-H, 5'-H, 5''''''-H), 3.82 (m; 1H, 5""-H), 3.78 (s br; 1H, 4'-H), 3.72 (s br; 1H, 4""-H), 3.58 (m; 1H, 4'''''-H), 3.41 (s; 3H, 2''''''-OCH3), 2.46 (m), 2.23-2.01 (m), 2.15. (2s; 12H, 2 N(CH3)2), 1.82-1.62 (m), 1.82-1.62 (m), 1.32-1.19.(m; 12H, 6'-CH3, 6'''-CH3, 6""-CH3, 6''''''-CH3), 1.12-1.01 (m; 9H, 6"-CH3, 6'''''-CH3, 14-H3).
13
C-NMR und APT (CDCl3
, 125.7 MHz): δ = 208.2 (C-4''', Cquart), 207.5 (C-4'''''', Cquart), 191.5 (C-5, Cquart), 186.7 (12-C, Cquart), 162.2 (C-4, Cquart), 156.7 (C-11, Cquart), 156.7 (C-6, Cquart), 137.8 (C-10a, Cquart), 136.8 (C-2, CH), 135.9 (C-6a, Cquart), 134.2 (C-12a, Cquart), 125.0 (C-3; CH), 119.9 (C-1, CH), 116.4 (C-4a, Cquart), 111.9 (C-5a, Cquart), 111.6 (C-11a; Cquart), 102.6 (C-1', CH), 100.1 (C-1'''''', CH), 99.1 (C-1", CH), 98.1 (C-1''''', CH), 96.6 (C-1"", CH), 91.3 (C-1''', CH), 78.8 (C-2'''''', CH), 77.8 (C-5''', CH), 75.9 (C-4"", CH), 75.0 (C-4"", CH), 74.7 (C-4', CH), 71.9 (C-9, Cquart), 71.7 (C-7, CH), 71.3 (C-5''''''; CH), 71.1 (C-10, CH), 67.9 (C-5"", CH), 67.7 (C-5', CH), 66.4 (C-3", CH), 66.2 (C-4", CH), 65.8 (C-5", CH), 65.8 (C-5''''', CH), 62.8 (C-2''', CH), 62.0 (C-3', CH), 61.8 (C-3''''', CH), 56.9 (C-2''''''-OCH3), 44.0 (C-3""-NCH3, 2 CH3), 43.9 (C-3'-NCH3, 2 CH3), 39.7 (C-3''', CH2), 39.6 (C-3'''''', CH2), 33.0 (C-8, CH2), 30.6 (C-13; CH2), 29.5 (C-2"", CH2), 29.5 (C-2', CH2), 26.5 (C-2", CH2), 23.8 (C-3''''', CH2), 23.8 (C-2''''', CH2), 17.9 (C-"", CH3), 17.9 (C-6', CH3), 16.0 (C-6''', CH3), 15.9 (C-6", CH3), 15.9 (C-6''''', CH3), 14.9 (C-6'''''', CH3), 6.6 (C-14, OH3).
2'''-Methoxy-2''',3'''-dihydroditrisarubicin CR (2b)
Rf
= 0.40 (CHCl3
/CH3
OH/NH3
(aq): 100/6/0.5).
(+)-ESI-MS: m/z (%) = 1198 ([M(C61H84N2O22)+H]+, 26), 941 (29), 599 ([M+H]2+, 76).
(+)-ESI-MS Tochterionenspektrum von 1198: m/z (%) = 1198 ([M+­ H]+, 16), 957 ([M-C12H17O5+H]+, 2), 941 ([M-C13H21O5+H]+, 40), 800 ([M-C20H32NO7+H]+, 1), 784 ([M-C21H36NO7+H]+, 5), 701 ([M-C25H38O10+H]+, 70), 544 ([M-C33H53NO12+H]+, 26), 526 (4); 388 (3); 372 (6), 351 (1), 255 (8), 207 (5), 158 ([C8H15NO2+H]+, 100), 132 ([C6H11O3+H]+, 39), 114 ([C6H10O2+H]+, 4), 97. (2).
1
H-NMR (CDCl3
, 300.1 MHz): δ = 13.78 (s br; 1H, OH), 12.89 (s br; 1H, OH), 12.19 (s br; 1H, OH), 7.91 (d, 3J = 7.4 MHz; 1H, 1-H), 7.73 (t, 3J = 7.4 Hz; 1H, 2-H), 7.33 (d, 3J = 7.4 Hz; 1H, 3-H), 5.48 (m; 2H, 1'-H, 1""-H), 5.15 (s br; 1H, 7-H), 5.05 (m; 2H, 1'''''-H, 1''''''-H), 5.01 (s br; 1H, 10-H), 4.98 (m; 2H, 1"-H, 1'''-H), 4.68-4.40 (m; 2''''''-H, 5"-H, 5'''''-H, 5''''''-H), 4.34 (m; 1H, 3'''''-H), 4.12-3.98 (m; 3H, 4'''''-H, 5'-H, 5'''-H), 3.82 (m; 1H, 5""-H), 3.78 (s br; 1H, 4'-H), 3.72 (s br; 1H, 4""-H), 3.58 (m; 1H, 4"-H), 3.41 (s; 3H, 2'''-OCH3), 2.40 (m), 2.23-2.01 (m), 2.15 (2s; 12H, 2 N(CH3)2), 1.82-1.62 (m), 1.32-1.19 (m; 12H, 6'-CH3, 6'''-CH3, 6""-CH3, 6''''''-CH3), 1.12-1.01 (m; 9H, 6"-CH3, 6'''''-CH3
, 14-H3).
Beispiel 3
2'''-Methoxy-2''',3'''-dihydroditrisarubicin H (3a)
2''''''-Methoxy-2'''''',3''''''-dihydroditrisarubicin H (3b)
2'''-Methoxy-2''',3'''-dihydroditrisarubicin H (3a)
Rf
= 0.42 (CHCl3
/CH3OH/NH3(aq): 100/6/0.005).
IR (KBr): ν = 3424 (br, OH) cm-1, 2935, 1736, 1708, 1603, 1467, 1441, 1403, 1384, 1298, 1261, 1198, 1119, 1003.
UV/Vis (CH3
CN-H2
O-Azeotrop): λmax = 235 nm, 255, 291, 499.
(+)-ESI-MS: m/z (%) = 1182 ([M(C61H84N2O21)+H]+, 12), 957 (11), 592 ([M+H]2+, 100).
(+)-ESI-MS Tochterionenspektrum von 1182: m/z (%) = 1182 ([M+H]+, 17), 957 ([M-C12H17O4+H]+, 8), 941 ([M-C12H17O5+H]+, 5), 925 ([M-C13H21O5+H]+, 20), 800 ([M-C20H32NO6+H]+, 1), 768 ([M-C21H36NO7+H]+, 2), 717 (2), 701 ([M-C25H38O9+H]+, 100), 544 ([M-C33H53NO11+H]+, 28), 526 (5), 387 (3), 372 (3), 356 (7), 351 (4), 225 (15), 207 (7), 158 ([C8H15NO2+H]+, 96), 132 ([C6H11O3+H]+, 52), 111 ([C61H7O2+H]+, 34).
1
H-NMR (CDCl3, 499.9 MHz): δ = 13.69 (s br; 1H, OH), 12.82 (s br; 1H, OH), 12.02 (s br; 1H, OH), 7.82 (d, 3J = 7.4 Hz; 1H, 1-H), 7.65 (t, 3J = 7.4 Hz; 1H, 2-H), 7.22 (d, 3J = 7.4 Hz; 1H, 3-H), 6.83 (m; 1H, 2''''''-H), 6.05 (m; 1H, 3''''''-H), 5.48 (s br; 1H, 1'-H), 5.42 (s br; 1H, 1""-H), 5.19 (dd, 3J = 7.9 Hz, 3J = 2.9 Hz; 1H, 1''''''-H), 5.10 (s br; 1H, 7-H), 4.98 (s br; 1H, 10-H), 4.95 (s br; 1H, 1'''-H), 4.89 (s br; 2H, 1"-H, 1''''''-H), 4.55 (m; 1H, 5''''''-H), 4.51 (m; 1H, 5"-H), 4.44 (m; 1H, 5'''''-H), 4.21 (m; 1H, 5'''-H), 3.99 (m; 1H, 5'-H), 3.83 (m; 1H, 5""-H), 3.78 (m; 2H, 2'''-H, 4'-H), 3.70 (s br; 1H, 4""-H), 3.62 (s br; 1H, 4"-H), 3.54 (s br; 1H 4'''''-H), 3.38 (2s; 3H, 2'''-OCH3
), 2.80 (m; 1H, 3'''-Hb), 2.62 (m; 1H, 3'''-Ha), 2.16 (2s; 12H, 2 N(CH3)2); 2.18--1.65 (m), 1.38 (m; 3H, 6''''''-H3), 1.25 (m; 9H, 6'-H3, 6'-H3, 6""-H3), 1.08 (m; 9H, 14-H3, 6"-H3, 6'''''-H3).
13
C-NMR und APT (CDCl3
, 125.7 MHz): δ = 207.6 (C-4''', Cquart), 197.0 (C-4'''''', Cquart), 190.6 (C-5, Cquart), 185.8 (12-C, Cquart), 162.4 (C-4, Cquart), 157.8 (C-6, Cquart), 157.0 (C-11, Cquart), 143.2 (C-2'''''', CH), 138.3 (C-10a, Cquart), 137.0 (C-2, CH), 136.4 (C-6a, Cquart), 133.4 (C-12a, Cquart), 127.1 (C-3'''''', CH), 124.6 (C-3; CH), 119.6 (C-1, CH), 115.9 (C-4a, Cquart), 111.9 (C-5a, Cquart), 111.6 (C-11a, Cquart), 101.9 (C-1', CH), 100.2 (C-1''', CH), 98.5 (C-1", CH), 98.4 (C-1''''', CH), 97.2 (C-1"", CH), 95.2 (C-1'''''', CH), 79.0 (C-2''', CH), 76.3 (C-4", C-4''''', 2CH), 74.1 (C-4"", CH), 73.8 (C-4', CH), 71.9 (C-5''', CH), 71.7 (C-9, Cquart), 70.9 (C-7, CH), 70.4 (C-5'''''', CH), 70.3 (C-10, CH), 68.6 (C-5"", CH), 68.4 (C-5', CH), 66.3 (C-5''''', CH), 66.2 (C-5", CH), 61.5 (C-3"", C-3', 2 CH), 56.9 (2'''-OCH3), 44.0 (C-3"" NCH3, 2 CH3), 43.9 (C-3'-NCH3, 2 CH3), 39.8 (3'''-C; CH2), 32.9 (C-8, CH2), 30.6 (C-13, CH2), 29.7 (C-2"", CH2), 29.3 (C-2', CH2), 24.7 (C-3''''', CH2), 24.6 (C-3", CH2), 2.45 (C-2", C-2''''', 2 CH2), 18.0 (C-6"", CH3), 17.8 (C-6', CH3), 17.2 (C-6''''', CH3), 17.0 (C-6", CH3), 16.0 (C-6''', CH3), 14.8 (C-6'''''', CH3), 6.6 (C-14, CH3).
HMQC-NMR (inverses CH-COSY, CDCl3
, INVBTP, F1 125.7 MHz, F2 499.9 MHz) (H → C): Alle erwarteten Kopplungen wurden gefunden. 1-H → C-1; 2-H → C-2; 3-H → C-3; 2-H''''' → C-2''''''; 3-H''''' → C-3''''''; 1'-H → C-1'; 1""-H → C-1"", 1''''''-H → c-1''''''; 7-H → C-7; 10-H → C-10; 1'''-H → C1'''; 1"-H C-1"; 1""-H → C-1'''''; 5''''''-H → C-5''''''; 5"-H → c-5"; 5'''''-H → C-5'''''; 5'''-H → C-5'''; 5'-H → C-5'; 5""-H → C-5""; 2'''-H → C-2'''; 4'-H → C-4'; 4""-H → C-4""; 4"-H → C-4"; 4'''''-H → C-4'''''; 3'''-H2 → C-3'''; 3""-H → C-3""; 3'-H → C-3'; NCH3 → NCH3; 8-H2 → C-8; 13-H2 → C-13; 6''''''-H3 → C-6''''''; 6'-H3 → C-6'; 6'''-H3 → C-6'''; 6""-H3 → C-6""; 14-H3 → C-14; 6"-H3 → C-6"; 6'''''-H3 → C-6'''''. - HMBC-NMR (inverses COLOC, CDCl3
, INV4LPRND, F1 125.7 MHz, F2 499.9 MHz) (H → C): 1-H 1J → C-1; 1-H 3J → C-12; 1-H 3J → C-3; 1-H 3J → C-4a; 1-H 4J → C-5; 2-H 1J → C-2; 2-H 2J → C-1; 2-H 3J → C-4; 2-H 3J → C-12a; 2-H 4J → C-4a; 3-H 1J → C-3; 3-H 2J → C-4; 3-H 2J → C-2; 3-H 3J → C-1; 3-H 3J → C-4a; 2''''''-H 2J → C-1''''''; 2''''''-H 3J → C-4''''''; 3''''''-H 3J → C-1''''''; 3''''''-H 3J → C-5''''''; 1'-H 3J → C-7; 1'-H 3J → C-5'; 1'-H 3J → C-3'; 1""-H 3J → C-10; 1""-H 3J → C-5""; 1""-H 3J → C-3""; 1''''''-H 2J → C-2''''''; 1''''''-H 3J → C-3''''''; 1''''''-H 3J → C-4''''''; 1''''''-H 3J → C-5''''''; 1''''''-H 4J → C-4''''''; 7-H 2J → C-6a; 7-H 2J → C-8; 7-H 3J → C-6; 7-H 3J → C-10a; 7-H 3J → C-1; 7-H 3J → C-9; 10-H 2J → C-10a; 10-H 2J → C-9; 10-H 3J → C-11; 10-H 3J → C-6a; 10-H 3J → C-1""; 10-H 3J → C-13; 10-H 3J → C-8; 1'''-H 2J → C-2'''; 1'''-H 3J → C-3'''; 1'''-H 3J → C-4"; 1'''-H 3J → C-5'''; 7-H 3J → C-1""; 7-H 3J → C-9; 7-H 4J → C-13; 1"-H 3J → C-4'; 1"-H 3J → C-5"; 1'''''-H 3J → C-4""; 1'''''-H 3J → C-5''''''; 5''''''-H 2J → C-4''''''; 5''''''-H 2J → C-6''''''; 5''''''-H 3J → C-1''''''; 5"-H 2J → C-4"; 5"-H 2J → C-6"; 5'''''-H 2J → C-4'''''; 5'''''-H 2J → C-6'''''; 5'''-H 2J → C-4'''; 5'''-H 2J → C-6'''; 5'''-H 3J → C-1'''; 5'-H 2J → C-4'; 5'-H 2J → C-6'; 5'-H 3J → C-1'; 5'-H 3J → C-3'; 5""-H 2J → C-4""; 5""-H 2J → C-6""; 5""-H 3J → C-1""; 5""-H 3J → C-3""; 4'-H 2J → C-3'; 4'-H 3J → C-1"; 4'-H 3J → C-2'; 4'-H 3J → C-6'; 4""-H 2J → C-3""; 4""-H 3J → C-1'''''; 4""-H 3J → C-2""; 4""-H 3J → C-6""; 4"-H 3J → C-1'''; 4'''''-H 3J → C-1''''''; 3'''-H 2J → C-4'''; 3'''-H2 2J → C-2'''; 3'''-H2 3J → C-1'''; 3'''-Hb 3J → C-5'''; 6''''''-H3 2J → C-5''''''; 6''''''-H3 3J → C-4''''''; 6'-H3 2J → C-5'; 6'-H3 3J → C-4'; 6'''-H3 2J → C-5'''; 6'''-H3 3J → C-4'''; 6""-H3 2J → C-5""; 6""-H3 3J → C-4""; 6"-H3 2J → C-5"; 6"-H3 3J → C-4"; 6'''''-H3 2J → C-5""; 6'''''-H3 3J → C-4'''''; 14-H3 2J → C-13; 14-H3 3J → C-9. - TOCSY-NMR (CDCl3, TOGSYTP, F1 499.9 MHz; F2 499.9 MHz) (H ↔ H): 1-H ↔ 2-H ↔ 3-H; 2''''''-H ↔ 3''''''-H ↔ 1''''''-H; 1'-H ↔ 4'-H ↔ 3'-H ↔ 2'-H2; 1""-h ↔ 4""-H ↔ 3""-H ↔ 2""-H2; 7-H ↔ 8-H2; 1"-H ↔ 4"-H ↔ 2"-H2 ↔ 3"-H2; 1'''-H ↔ 2'''-H ↔ 3'''-H2; 1'''''-H ↔ 4'''''-H ↔ 2'''''-H2 ↔ 3'''''-H2; 5''''''-H ↔ 6''''''-H3; 5"-H ↔ 6"-H3; 5'''''-H ↔ 6'''''-H3; 5'''-H ↔ 6'''-H3; 5'-H ↔ 6'-H3; 5""-H ↔ 6""-H3; 13-H2 ↔ 14-H3.
Beispiel 4
Ditrisarubicin I (4a)
Ditrisarubicin IR (4b)
Rf = 0.43 (CHCl3/CH3OH/NH3(aq): 100/10/1).
(+)-FAB-MS: m/z (%) = 1170 ([M(C60H84N2O21)+H]+, 11), 1058 (12), 946 (30), 786 (91), 770 (100), 752 (62).
(-)-FAB-MS m/z (%) = 1168 ([M-H]-, 100). - DCI-MS (NH3): m/z (%) = 1205 ([M+2NH3+H]+, 35), 1187 ([M+NH3+H]+, 59), 1171 ([M+H]+, 140).
1H-NMR (CDCl3, 300.1 MHz): δ = 13.78 (s br; 1H; OH), 12.89 (s br; 1H, OH), 12.19 (s br; 1H, OH), 7.91 (d, 3J = 7.4 Hz; 1H, 1-H), 7.72 (t, 3J = 7.4 Hz; 1H, 2-H), 7.34 (d, 3J = 7.4 Hz; 1H, 3H), 5.48 (m; 2H, 1'-H, 1""-Ha), 5.16 (m; 1H, 7-H), 5.10-5.01 (m; 4H, 10-H, 1"-H, 1'''-H, 1''''''-H), 4.97 (m; 1H, 1'''''-H), 4.58-4.42 (m; 3H, 5"-H, 5'''-H, 5'''''-H), 4.34 (m; 1H, 5''''''-H), 4.12 (m; 1H, 3"-H), 4.00 (m; 1H, 5'-H.), 3.87 (m; 1H, 5""-H), 3.79 (s br; 1H, 4'-H), 3.72 (s br; 1H, 4""-H), 3.69 (m; 2H, 4"-H, 4'''''-H), 2.50 (m), 2.23-2.01 (m), 2.16 (2s; 12H, 2 N(CH3)2), 1.82-1.62 (m), 1.32-1.19 (m; 12H, 6'-CH3 6'''-CH3, 6""-CH3, 6''''''-CH3), 1.12-1.01 (m; 9H, 6"-CH3, 6'''''-CH3, 14-H3).
13C-NMR und APT (CDCl3, 125.7 MHz): δ = 210.9 (C-4'''''', Cquart), 210.1 (C-4''', Cquart), 190.7 (C-5, Cquart), 186.1 (12-C, Cquart), 162.7 (C-4, Cquart), 157.7 (C-11, Cquart), 157.1 (C-6, Cquart), 138.3 (C-10a, Cquart), 137.1 (C-2, CH), 136.5 (C-6a, Cquart), 133.6 (C-12a, Cquart), 124.7 (C-3; CH), 119.7 (C-1, CH), 116.2 (C-4a, Cquart), 112.1 (C-5a, Cquart), 111.8 (C-11a; Cquart), 101.9 (C-1', CH), 100.2 (C-1''', CH), 99.4 (C-1", CH), 99.0 (C-1'''''', CH), 98.6 (C-1''''', CH), 97.4 (C-1"", CH), 83.1 (C-4", CH), 75.6 (C-4'''''', CH), 74.2 (C-4"", CH), 74.1 (C-4', CH), 71.8 (C-9, Cquart), 71.0 (C-7, CH), 71.0 (C-5''', CH), 71.0 (C-5'''''', CH), 70.5 (C-10, CH), 68.7 (C-5"", CH), 68.5 (C-5', CH), 66.7 (C-5", CH), 66.5 (C-5''''', CH), 65.4 (C-3", CH), 61.5 (C-3', CH), 61.4 (C-3"", CH), 43.4 (C-3""-NCH3, 2 CH3), 43.3 (C-3'-NCH3, 2 CH3), 34.3 (C-2", CH2), 33.7 (C-3''',, CH2), 33.6 (C-3'''''', CH2), 32.9 (C-8, CH2), 30.7 (C-13; CH2), 29.8 (C-2"", CH2), 29.3 (C-2', CH2), 28.6 (C-2'''''', CH2), 27.6 (C-2''', CH2), 24.7 (C-3''''', CH2), 24.6 (C-2''''', CH2), 18.1 (C-6"", CH3), 17.8 (C-6', CH3), 17.1 (C-6''''', CH3), 16.9 (C-6", CH3), 14.9 (C-6'''''', CH3), 14.8 (C-6''', CH3), 6.6 (C-14, CH3)
Beispiel 5 2''''''-C2-C4-Alkoxy-2'''''',3''''''-dihydroditrisarubicin C (5a); 2'''-C2-C4-Alkoxy-2''',3'''-dihydroditrisarubicin CR(5b); 2'''- C2-C4-Alkoxy-2''',3'''-dihydroditrisarubicin H (5c); 2''''''-C2-C4-Alkoxy-2'''''',3''''''-dihydroditrisarubicin H (5d)
Die Darstellung erfolgt analog zu den Verbindungen der Beispiele 2a und 2b für die Verbindungen 5a und 5b, sowie der Beispiele 3a und 3b für die Verbindungen 5c und 5d, wobei als Lösungsmittel statt Methanol Ethanol, Propanol, Isopropanol oder die Butanole verwendet werden.
Beispiel 6 Hydrolyse der Anthracycline für die strukturelle Aufklärung
  • A) Analytisch: Man suspendierte ca. 3 mg der Anthracycline in 5 ml 0.1 N HCl und rührte 35 min bei 90°C. Anschließend extrahierte man die Lösung dreimal mit jeweils 5 ml CHCl3. Die organische Phase wurde i. Vak. eingeengt, in CHCl3/CH3OH aufgenommen und unter DC (CHCl3/CH3OH: 93/7) untersucht. Die Wasserphase wurde mittels DC überprüft: Laufmittel 1-Butanol/CH3COOH/H2O: 4/1/1; Anfärbung mit Anisaldehyd/Schwefelsäure. Die Zucker wurden über ihre Rf-Werte und Anfärbungen identifiziert.
  • B) Präparatiy: Man suspendierte 150 mg der vereinigten roten Fraktionen in 50 ml 0.1 N HCl und rührte 45 min bei 90°C. Anschießend extrahierte man die Lösung fünfmal mit jeweils 70 ml CHCl3. Der Eindampfrückstand der organischen Phase wurde mittels PDC an Kieselgel (CHCl3/CH3OH/NH3(aq): 100/8/0.05) getrennt. Man erhielt 25 mg rote Fraktion 1 (Rf = 0.55-0.50) und 36 mg rote Fraktion II (Rf = 0.49-0.45). Durch SC an Sephadex LH-20 (Säule 30 × 600 mm, CHCl3/40% CH3OH) erhielt man aus I 21 mg y-Rhodomycinon und aus II 27 mg β-Rhodomycinon.
γ-Rhodomycinon: Rf = 0.51 (CHCl3/CH3OH: 93/7). - IR (KBr): ν = 3384 (br OH) cm-1, 2938, 1592, 1456, 1418, 1388, 1319, 1293, 1274, 1253, 1166, 1141, 1090 1023, 979, 949, 921, 900, 826, 810, 786, 738, 714. - CD (CH3CN; 2.70.10-5 mol/l): λmax (Θ) = 204.6 nm (- 12694), 235.0 (6959), 250.6 (5317), 298.0 (- 3476), 351.2 (2262), 385.0 (- 499), 402.8 (- 1036), 427.0 (- 633), 445.4 (- 547), 478.2 (129), 486.2 (- 197), 498.8 (493). - UV/Vis (CH3CN-H2O-Azeotrop): λmax = 235 nm, 255, 295, 495, 527. - EI-MS (70 eV): m/z (%) = 370 (M+, 59), 352 (32), 323 (17), 298 (35), 295 (53), 270 (100). - 1H-NMR (CDCl3, 300.1 MHz): δ = 13.82 (s br; 1H, OH), 12.72 (s br; 1H, OH), 13.24 (s br; 1H, OH), 7.88 (d, 3J = 7.4 Hz; 1H, 1-H), 7.71 (t, 3J = 7.4 Hz; 1H, 2-H), 7.31 (d, 3J = 7.4 Hz; 1H, 3-H), 4.78 (s br; 1H, 10-H); 2.91 (ABXY; 2H, 7-H2), 1.96 (m; 4H, 8-H2, 13-H2), 1.11 (t, 3J = 7.5 Hz; 3H, 14-H3).
β-Rhodomycinon: Rf = 0.46 (CHCl3/CH3OH: 91/7). - IR (KBr): ν = 3387 (br OH) cm-1, 2925, 1718, 1605, 1458, 1383, 1250, 1201, 1167, 1128, 1070, 1023, 980, 943, 920, 898, 828, 755, 691. - CD (CH3CN; 2.53.10-5 mol/l): λmax (Θ) = 203.8 nm (- 12711), 232.8 (15357), 289.4 (- 5056), 342.0 (4576); 385.0 (- 605.), 400.4 (- 686), 419.8 (392), 428.8 (- 19), 498.8 (493). - UV/VIS (CH3CN- H2O-Azeotrop): λmax = 235 nm, 255; 255; 291, 495. - EI-MS (70 eV): m/z (%) = 386 (M+, 9), 368 (57), 351 (48), 314 (100), 312 (83), 311 (85), 296 (84), 283 (25), 276 (18), 218 (23), 91 (79), 57 (34). -
1H-NMR ([D6]DMSO, 300.1 MHz): δ = 13.25-11.60 (br m, 3H, OH), 7.84 (m; 2H, 1-H, 2-H), 7.40 (m; 1H, 3-H), 5.48 (s br; 1H, OH), 4.99 (m; 1H, 7-H), 4.97 (s; 1H, 10-H), 4.62 (s br; 1H, OH), 1.96 (ABX; 2H, 8-H2), 1.66 (m; 2H, 13-H2), 0.98 (t, 3J = 7.5 Hz; 3H, 14-H3).
Tabelle 1
Ergebnisse der analytischen Hydrolyse (Quantifizierung nach NMR-Daten); Ditri = Ditrisarubicin; β-Rho = β-Rhodomycinon); γ-Rho = γ-Rhodomycinon; RhN = Rhodos-amin; dF = 2-Deoxyfucose; Rho = Rhodosamin; CinA = Cinerulose A; CinB = Cinerulose B

Claims (9)

1. Verbindung ausgewählt aus der Gruppe testend aus aus 2''''''-C1- C4-Alkoxy-2'''''',3''''''-dihydroditrisarubicin C, 2'''-C1-C4- Alkoxy-2''',3'''-dihydroditrisarubicin CR; 2"-C1-C4- Alkoxy-2''',3'''-dihdroditrtsarubicin H, 2''''''-C1-C4- Alkoxy-2'''''',3''''''-dihydroditrisarubirin H, Ditrisarubicin I; Ditrisarubicin IR, Cytorhodin Y, deren Tautomere und deren physiologisch verträglichen Salze.
2. Verbindung nach Anspruch 1, wobei Alkoxy Methoxy bedeutet.
3. Arzneimittel enthaltend Verbindungen nach Anspruch 1 oder 2, neben den üblichen Träger und Hilfsstoffen.
4. Arzneimittel nach Anspruch 3, die außerdem noch weitere Wirkstoffe zur Krebsbehandlung enthalten.
5. Verwendung von Verbindungen nach Anspruch 1 oder 2, zur Herstellung von Arzneimitteln für die Behandlung von Krebserkrankungen.
6. Verwendung nach Anspruch 5, zur Behandlung von einer oder mehrerer der Krebserkrankungen Brustkrebs, Dickdarmkrebs, Magenkrebs, Leukämie, Melanom, Lungenkrebs, Renaler Krebs oder Gebärmutterkrebs.
7. Actinomycet GW 33/1311 (DSM-Nr. 11149).
8. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen nach Anspruch 1 oder 2 unter Verwendung eines Actinomyceten.
9. Verfahren nach Anspruch 1, wobei der Actinomycet nach Anspruch 7 verwendet wird.
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