WO2001096352A1 - Rhodomycinon-derivate - Google Patents

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WO2001096352A1
WO2001096352A1 PCT/EP2001/006111 EP0106111W WO0196352A1 WO 2001096352 A1 WO2001096352 A1 WO 2001096352A1 EP 0106111 W EP0106111 W EP 0106111W WO 0196352 A1 WO0196352 A1 WO 0196352A1
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WO
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cquart
dihydroditrisarubicin
alkoxy
cancer
mhz
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PCT/EP2001/006111
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Michael Speitling
Iris GRÜN-WOLLNY
Heinz Herbert Fiebig
Hartmut Laatsch
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Bioleads Gmbh
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/24—Condensed ring systems having three or more rings
    • C07H15/252—Naphthacene radicals, e.g. daunomycins, adriamycins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C12P19/56—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen atom of the saccharide radical directly bound to a condensed ring system having three or more carbocyclic rings, e.g. daunomycin, adriamycin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Definitions

  • the present invention relates to new rhodomycinone derivatives, processes for their preparation and their use as anti-tumor agents.
  • the invention relates to derivatives of ⁇ -rhodomycinone and ß-hodomycinone.
  • the invention also relates to pharmaceutical compositions which contain the rhodomycinone derivatives as constituents, and the use of the compounds in particular as medicaments for the treatment of colon cancer, lung cancer and leukemia.
  • the invention relates to the following compounds:
  • the compounds of the invention are partly. more active than the doxorubicin used in tumor therapy.
  • alk in alkoxy means a linear or branched alkyl chain radical of the length stated in each case.
  • C x _ 4 alkyl means for example methyl, ethyl, 1-propyl, 2-propyl, 2-methyl-2-propyl, 2 Methyl -1-propyl, 1-butyl, 1-butenyl, 2-butyl are preferred Methyl and ethyl, particularly preferably methyl.
  • the compounds according to the invention can be present as such or in the form of their salts with physiologically tolerated acids.
  • acids are: hydrochloric acid, citric acid, tartaric acid, lactic acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, acetic acid, formic acid, maleic acid, fumaric acid, succinic acid, hydroxy succinic acid, sulfuric acid, glutaric acid, aspartic acid, pyruvic acid, benzoic acid, glucuric acid acid, oxalic acid, oxalic acid, as oxalic acid.
  • the new compounds according to the invention can be used in primary tumors or in metastases.
  • the compounds are preferably used in the following cancers:
  • Colon cancer and lung cancer are particularly preferably treated with the compounds according to the invention.
  • the compounds according to the invention can be administered in the usual way orally or parenterally (subcutaneously, intravenously, intramuscularly, intraperitoneally, rectally). It can also be applied with vapors or sprays through the nasopharynx.
  • the dosage depends on the age, condition and weight of the patient and on the type of application.
  • the single-dose dose of active substance when administered parenterally is between about 1 and 2000 mg per m 2 of body surface, usually between 10 and 100 mg per m 2 . With repeated administration, the dose is reduced and is usually 3 mg to 30 mg per m 2 of body surface. If the active ingredient can be applied locally, the doses are usually reduced somewhat. In the case of oral administration, the doses must be adjusted taking bioavailability into account.
  • the compounds can be used in the customary pharmaceutical application forms in solid or liquid form, for example as tablets, film-coated tablets, capsules, powders, granules, dragees, suppositories, solutions, ointments, creams or sprays. These are manufactured in the usual way.
  • the active ingredients can be processed with the usual pharmaceutical auxiliaries such as tablet binders, fillers, preservatives, tablet disintegrants, flow regulators, plasticizers, wetting agents, dispersants, emulsifiers, solvents, retardants, antioxidants and / or propellants (see H. Sucker et al .: Pharmaceuticals Technologie, Thieme-Verlag, Stuttgart, 1978) ..
  • the application forms thus obtained normally contain the active ingredient in an amount of 0.1 to 99% by weight.
  • the compounds according to the invention can also be used in combination with other active substances for cancer treatment.
  • Leukemia LXL H460; CNCL SF268
  • Lung cancer LXFL 529L
  • LXFL 629L Renal cancer RXF 944L
  • the human tumor cells were at J7 ° C in an atmosphere of 95% air and 5% C0 2 in monlayer cultures in RPMI 1640 medium with phenol red and an addition of 10% fetal calf serum. The cells are trypsinized and converted weekly.
  • Cytotoxicity Assay A modified propidium iodide assay was used to determine the antiproliferative activity of the compounds.
  • the cells were harvested from exponential-phase cultures which had grown in RPMI 1640 medium supplemented with 10% fetal calf serum, then counted and in 96-well microtiter plates (100 ⁇ l cell suspension, 1 * 10 5 and 5 * 10 4 cells / ml) plated. After a period of 24 hours in which the cells returned to exponential growth, 50 ⁇ l of pure culture medium were used as a control in 6 wells / plate or 50 ⁇ l
  • the culture medium was incubated for 3 to 7 days (depending on the cell doubling rate) with fresh medium containing propidium iodide
  • the plates were then kept at -18 ° C for 24 hours to kill the cells. After thawing, the fluorescence was measured with a Millipore Cytofluor 2350 microplate reader (excitation 530 nm; emission 620 nm) in order to quantify the total number of cells.
  • the assay contained positive and untreated controls. The concentration of the compounds used was 0.3 and 3 ⁇ g / ml.
  • the growth inhibition was described as treated / control * 100.
  • Varian XL-200 (50.3 MHz), Varian VXR-200 (50.3 MHz), Bruker WM 300 (75.5 MHz), Bruker Avance DRX 500 (125.7 MHz), Varian INOVA 500 (125.7 MHz), Varian VXR-500 (125.7 MHz) ).
  • APT Adttached Proton Test
  • Injection switching valve 6/1 A0263 type Reodyne
  • Sample loop 20 ⁇ l 2) Jasco Multiwavelength Detector MD-910, two pumps, type Jasco Intelligent Prep. Pump PU-987 with mixing chamber, Degasser VDS Degasys DG-1310, on-valve: Reodyne with 20 ⁇ l induction loop, software: Borwin HPLC software;
  • MN silica gel 60 0.05-0.2 mm, 70-270 mesh (Macherey-Nagel &Co); Silica gel for flash chromatography: 30-60 ⁇ m (J. T. Baker); Sephadex LH-20 (Pharmacia); XAD 2, 300-1000 ⁇ m, S ⁇ RVA Heidelberg. The columns were filled wet.
  • Anisaldehyde / sulfuric acid To 100 ml of a stock solution from 85 ml
  • Ehrlich 's reagent 1 g of 4-dimethylaminobenzaldehyde was mixed in one
  • Bacteria storage Dewar flask from 1 ' Air liquid, type BT 37 A.
  • Capillaries for deep-freeze storage diameter 1.75 mm, length 80 mm, from Hirschmann Laborella, Eberstadt.
  • Soil for geological conservation Luvos Heilerde LUVOS JUST GmbH & Co Friedrichshof (obtained from the health food store). The soil was heated to 130 ° C for 3 h, autoclaved for 1 h at 100 ° C and 1.1 bar and finally heated again to 130 ° C for 3 h.
  • Ultraturrax Janke & Munkel KG.
  • Shaker INFORS type ITE rotary shaker.
  • the compounds according to the invention can be obtained from actinomycetes, in particular from the GW 33/1311 strain, which was deposited with the DSMZ in Braunschweig under number 11149.
  • the strain GW 33/1311 already produces 20 mg of anthracyclines from 6 1 culture medium without process optimization.
  • the Actinomycet GW 33/1311 (DSM No. 11149) was incubated on slant agar tubes, then on agar plates for 72 hours at 28 ° C. With these cultures, 60 1 1 Erlenmeyer flasks filled with 165 ml M 2 + nutrient medium were inoculated and incubated for 72 hours at 28 ° C. at approx. 120 rpm.
  • the strain grew as dark red pellets, the nutrient medium was colored red-brown.
  • the culture broth was mixed with Celite and filtered with the filter press.
  • the aqueous filtrate was extracted six times with ethyl acetate.
  • the cell residue mixed with Celite was digested seven times with 2 1 of ethyl acetate, for 15 min with
  • the crude extract dissolved in 250 ml of methanol was degreased by shaking twice with 100 ml of cyclohexane in each case.
  • C 2 -C 4 alcohols can be used as solvents for the compounds of Example 5.
  • Etanol is preferred.
  • the degreased extracts were separated by SC on Sephadex LH-20 (column 30 x 600 mm, CHCl 3 /40% CH 3 0H).
  • Fraction II was separated by PDC on silica gel (4 plates 200 x 400 mm, CHC1 3 / CH 3 0H / CH 3 C00H / H 2 0: 40/10 / 1.4 / 0.8), whereby 4 red ones were checked under UV / Vis control
  • Ditrisarubicin CR Ditrisarubicin CR.
  • the structure was elucidated by evaluating the NMR and mass spectra as well as the acid hydrolysis of the compounds with subsequent comparison thin layer chromatography.
  • IR (KBr): v 3437 (br, OH) cm-1, 2978, 2827, 2777, 1730, 1600, 1445, 1403, 1381, 1322, 1295, 1253, 1222, 1202, 1169, 1117, 1001, 810 , 796, 756, 719, 645, 597.
  • HMQC-NMR inverse CH-COZY, CDC1 3 , INVBTP, Fl 75.5 MHz, F2 300.1 MHz
  • H ⁇ C 1-H ⁇ C-1; 2-H ⁇ C-2; 3-H - C-3; Hl '- »C-1';
  • IR (KBr): v 3432 (br, OH) cm-1, 2925, 2854, 1734, 1610, 1460, 1383, 1261, 1115, 1018, 803.
  • (+) - ESI-MS daughter ion spectrum of 1198: m / z (%) 1198 ([M + H] +, 16), 957 ([M - C12H1705 + H] +, 2), 941 ([M - C13H2105 + H] +, 40), 800 ([M - C20H32NO7 + H] +, 1), 784 ([M - C21H36N07 + H] +, 5), 701 ([M - C25H38O10 + H] +, 70), 544 ([M - C33H53N012 + H] +, 26), 526 (4), 388 (3), 372 (6), 351 (1), 225 (13), 207 (5), 158 ([C8H15N02 + H ] +, 100), 132 ([C6H1103 + H] +, 39), 114 ([C6H10O2 + H] +, 4), 97 (6).
  • (+) -ESI-MS daughter ion spectrum of 1198: m / z (%) 1198.
  • (+) -ESI-MS daughter ion spectrum of 1182: ' m / z (%) 1182 ([M + H] +, 17), 957 ([M - C12H1704 + H] +, 8), 941 ([M - C12H1705 + H] +, 5), 925 ([M - C13H2105 + H] +, 20), 800 ([M - C20H32NO6 + H] +, 1), 768 ([M - C21H36N07 + H] +, 2) , 717 (2), 701 ([M - C25H3809 + H] +, 100), 544 ([M - C33H53N011 + HJ +, 28), 526 (5), 387 (3), 372 (3), 356 (7 ), 351 (4), 225 (15), 207 (7), 158 ([C8H15N02 + H] +, 96), 132 ([C6H1103 + H] +, 52), 111 ([C6H70

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Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft die neuen Rhodomycinon-Derivate 2''''''-C1-C4-Alkoxy-2'''''',3''''''-dihydroditrisarubicin C, 2'''-C1-C4-Alkoxy-2''',3'''-dihydroditrisarubicin CR, 2'''-C1-C4-Alkoxy-2''',3'''-dihydroditrisarubicin H, 2''''''-C1-C4-Alkoxy-2'''''',3''''''-dihydroditrisarubicin H, Ditrisarubicin I, Ditrisarubicin IR, Cytorhodin Y, Verfahren zu ihrer Herstellung und deren Verwendung als Antitumormittel.

Description

RHODOMYCINON-DERIVATE
Beschreibung
Die vorliegende Erfindung betrifft neue Rhodomycinon-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und deren Verwendung als Antitumormittel. Insbesondere betrifft die Erfindung Derivate des γ-Rhodomycinon und des ß- hodomycinon. Die Erfindung bezieht sich auch auf pharmazeutische Zusammensetzungen, die die Rhodomycinon- Derivate als Bestandteile enthalten, sowie- die Verwendung der Verbindungen insbesondere als Medikamente zur Behandlung von Dickdarmkrebs , Lungenkrebs und Leukämie .
Gegenstand der Erfindung sind folgende Verbindungen:
2... > ι ι -cι-C4-Alkoxy-2' ' ' ' ' ' ,3' -dihydroditrisarubicin C,
2 ' ■ ' -C^C^Alkoxy-2 ' ' ' ,3 ' ' ' -dihydroditrisarubicin CR, 2 ' ' ■ -C1-C4-Alkoxy-2' ' • ,3 ' ■ ' -dihydroditrisarubicin H, 2 ι ι . ι « ι -C^C^Alkoxy-2' ' ' ' ' ' , 3 ' ' ' ■ ' ' -dihydroditrisarubicin H, Ditrisarubicin I, Ditrisarubicin IR, Cytorhodin Y, deren Tautomere und deren physiologisch verträglichen Salze.
Verbindungen mit ähnlichen Strukturen sind z. B. in EP 167935 und ü. Hedtmann (U. Hedtmann, H.-W. Fehlhaber, D. A. Sukatsch, M. Weber, D. Hoffmann, H. P. Kraemer, J. Antibiot. 1992, 45, 1373- 1375) beschrieben und zeigen biologische Effekte als Antitumor- Substanzen (Y. Matsuzawa, T. Oki, T. Takeuchi, H. Umezawa, J. Antibiot. 1981, 34, 1596-1607).
Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind z.T. aktiver als das in der Tumortherapie eingesetzte Doxorubicin.
Folgende Substanzen sind besonders bevorzugt:
Cytorhodin Y,
2 ι ι i . ι ι -Methoxy-2 ' • ' ' ' ' , 3 ' ■ ' ' ' ' dihydroditrisarubicin C
In der Beschreibung und den Ansprüchen gelten für die einzelnen Substituenten folgende Definitionen:
Der Term „Alk" in Alkoxy bedeutet ein lineares oder verzweigtes Alkylketten-Radikal der jeweils angegebenen Länge. So bedeutet Cx_ 4-Alkyl z.B. Methyl, Ethyl, 1-Propyl, 2-Propyl, 2-Methyl-2-propyl, 2 -Methyl -1-propyl, 1-Butyl, 1-But-enyl, 2-Butyl. Bevorzugt sind Methyl und Ethyl, besonders bevorzugt Methyl.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können als solche oder in Form ihrer Salze mit physiologisch verträglichen Säuren vorliegen. Beispiele für solche Säuren sind: Salzsäure, Zitronensäure, Weinsäure, Milchsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Essigsäure, Ameisensäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Bernsteinsäure, Hydroxybemsteinsäure, Schwefelsäure, Glutarsäure, Asparaginsäure, Brenztraubensäure, Benzoesäure, Glucuronsäure, Oxalsäure, Ascorbinsäure und Acetylglycin.
Die neuen erfindungsgemäßen Verbindungen lassen sich bei Primär Tumoren oder bei Metastasen einsetzen. Bevorzugt werden die Verbindungen, bei folgenden Krebserkrankungen eingesetzt:
Brustkrebs, Dickdarmkrebs, Magenkrebs, Leukämie, Melanom, Lungenkrebs, Renaler Krebs, Gebärmutterkrebs. Besonders bevorzugt werden Dickdarmkrebs und Lungenkrebs mit den erfindungsgemäßen Verbindungen behandelt.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in üblicher Weise oral oder parenteral (subkutan, intravenös, intramuskulär, intraperitoneal, rektal) verabfolgt werden. Die Applikation kann auch mit Dämpfen oder Sprays durch den Nasen-Rachenraum erfolgen.
Die Dosierung hängt vom Alter, Zustand und Gewicht des Patienten sowie von der Applikationsart ab. In der Regel beträgt die einamlige Wirkstoffdosis bei parenteraler Gabe zwischen etwa 1 und 2000 mg pro m2 Körperoberfläche, üblicherweise bei 10 bis 100 mg pro m2. Bei wiederholter Gabe wird die Dosis reduziert und liegt üblicherweise bei 3 mg bis 30 mg pro m2 Körperoberfläche. Kann der Wirkstoff lokal angewandt werden reduzieren sich die Dosen üblicherweise noch etwas. Bei oraler Gabe sind die Dosen unter Berücksichtigung der Bioverfügbarkeit anzupassen.
Die Verbindungen können in den gebräuchlichen galenischen Applikationsformen fest oder flüssig angewendet werden, z.B. als Tabletten, Filmtabletten, Kapseln, Pulver, Granulate, Dragees, Suppositorien, Lösungen, Salben, Cremes oder Sprays. Diese werden in üblicher Weise hergestellt. Die Wirkstoffe können dabei mit den üblichen galenischen Hilfsmitteln wie Tablettenbindern, Füllstoffen, Konservierungsmitteln, Tablettensprengmitteln, Fließreguliermitteln, Weichmachern, Netzmitteln, Dispergiermitteln, Emulgatoren, Lösungsmitteln, Retardierungsmitteln, Antioxidantien und/oder Treibgasen verarbeitet werden (vgl. H. Sucker et al.: Pharmazeutische Technologie, Thieme-Verlag, Stuttgart, 1978) .. Die so erhaltenen Applikationsformen enthalten den Wirkstoff normalerweise in einer Menge von 0,1 bis 99 Gew.-%.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auch in Kombination mit weiteren Wirkstoffen zur Krebsbehandlung eingesetzt werden.
Experimenteller Teil
Pharmakologische Tests
Alle erfindungsgemäßen Verbindungen fielen im Primarscreening mit der Zelllinie HT29 auf. Für die Verbindungen Cytorhodin Y und 2. ι > i ι ι -Methoxy-2 ''•'«' ,3 ' ' ' ' ' 'dihydroditrisarubicin C wurden weitergehende Bestimmungen durchgeführt. Für
2.. ι ι > ι -Methoxy-2 ' ' ' ' ' ' , 3 ■ ' ' ' ■ ' dihydroditrisarubicin C wurde in der Zelllinie HT29 ein IC50-Wert von 0.026 μg/ml gefunden.
Für Cytorhodin Y wurden folgende Werte bestimmt:
Figure imgf000004_0001
Tumorzelllinien:
Brustkrebs: MACL MCF7 Dickdarmkrebs : HT29
Magenkrebs: GXF 251
Leukämie: LXL H460; CNCL SF268
Melanom: MEXF 462NL
Lungenkrebs : LXFL 529L, LXFL 629L Renal Krebs: RXF 944L
Gebärmutterkrebs: ÜXF 1138
Zellkulturen: Die humanen Tumorzellen wurden bei J7 °C in einer Atmosphäre von 95 % Luft und 5 % C02 in Monlayer-Kulturen in RPMI 1640 Medium mit Phenol -Rot und einem Zusatz von 10 % fötalem Kalbsserum. Die Zellen werden trypsinisiert und wöchentlich umgesetzt.
Cytotoxizitäts Assay: um die antiproliferative Wirkung der Verbindungen festzustellen, wurde ein modifizierter Propidium-Iodid Assay benutzt. Die Zellen wurden von Exponential-Phasen Kulturen geerntet, die im RPMI 1640 Medium ergänzt mit 10 % fötalem Kalbsserum, gewachsen waren, anschließend gezählt und in 96 well Mikrotiterplatten (100 μl ZeilSuspension, 1*105 und 5*104 Zellen/ml) ausplattiert. Nach einer Zeit von 24 h, in der die Zellen wieder in das exponentielle Wachstum gelangten, wurden 50 μl reines Kulturmedium als Kontrolle in 6 Wells/ Platte oder 50 μl
Kulturmedium mit den Testverbindungen in die Wells gegeben. Nach
3 bis 7 Tagen Inkubation (abhängig von der Zellverdopplungsrate) wurde das Kulturmedium durch frisches Medium mit Propidium Iodid
(6 μg/ml) ersetzt. Die Platten wurden anschließend 24 h bei -18 °C aufbewahrt, um die Zellen abzutöten. Nach dem Auftauen wurde die Fluoreszenz mit einem Millipore Cytofluor 2350-Mikroplate- Reader (Anregung 530 nm; Emission 620 nm) gemessen, um die gesamte Zellzahl zu quanti izieren. Der Assay enthielt positive und unbehandelte Kontrollen. Die Konzentration der eingesetzten Verbindungen betrug 0.3 und 3 μg/ml .
Die Wachstumsinhibition wurde beschrieben als behandelt/Kontrolle * 100.
Bei der Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen wurden folgende Materialien und Methoden verwendet.
IR-Spektren:
Perkin-Elmer 1600 Series FTIR; Perkin-Elmer 297 Infrared
Spectrophotometer; Beckman Dü-640; Shimadzu FT-IR; (KBr-Preßlinge und Film) .
UV-Spektren:
HP 8451A Diode Array Spectrophotometer, Jasco Multiwavelength Detektor MD-910.
"H-NMR-Spektren: Varian XL 200 (200 MHz) , Varian VXR 200 (200 MHz) , Bruker WM 300 (300.1 MHz), Bruker Avance DRX 500 (499.8 MHz), Varian INOVA 500 (499.8 MHz), Varian VXR 500 (499.8 MHz). Kopplungskonstanten (J") in Hz . Abkürzungen: s = Singulett, d = Dublett, dd = Doppeldublett, t = Triplett, q = Quartett, m = Multiplett, br = breit. —
"C-NMR-Spektren:
Varian XL-200 (50.3 MHz), Varian VXR-200 (50.3 MHz), Bruker WM 300 (75.5 MHz), Bruker Avance DRX 500 (125.7 MHz), Varian INOVA 500 (125.7 MHz), Varian VXR-500 (125.7 MHz). Chemische Verschiebung in δ-Werten relativ zu Tetramethylsilan als internem Standard. Abkürzungen: APT (Attached Proton Test) : CH/CH3- Signale stehen nach oben, C/CH2- Signale stehen nach unten.
Massenspektren:
EI-MS mit Varian MAT 731 (70 eV) , Varian 311A (70 eV) , AMD-402 (70 eV) ; Hochauflösungen wurden mit Perfluorkerosin als
Vergleichssubstanz durchgeführt; FAB-MS mit Finnigan MAT 95 A, AMD Intectra AMD-402, Matrix: 3 -Nitrobenzylalkohol; DCI-MS mit Finnigan MAT 95 A, Reaktandgas: NH3; ESI -MS mit Quadro Triple Quadrupole Mass Spectrometer (VG Micromass) , Finnigan TSQ 7000 mit nano-ESI -API -Ionenquelle.
HPLC:
Alle Eluenten wurden über Membranfilter (Wasser: Celluloseacetat, Porenweite 45 μm, Sartorius, Göttingen; Acetonitril: Filter RC-Vlies verstärkt, Porenweite 45 μm, Sartorius, Göttingen) filtriert und 10 min durch Ultraschall entgast; Analytische Anlage : 1) Knauer Spektral -Digital -Photometer A0293, zwei Knauer Pumpen Typ 64 A0307, Programm: Knauer HPLC-Software V2.22, Mischkammer: Knauer: A0285, Aufgäbe-Ventil : Knauer
Injektions- Schaltventil 6/1 A0263 (Typ Reodyne) ; Probenschleife 20 μl; 2) Jasco Multiwavelength Detector MD-910, zwei Pumpen Typ Jasco Intelligent Prep. Pump PU-987 mit Mischkammer, Degasser VDS Degasys DG-1310, Aufgäbe-Ventil: Reodyne mit 20 μl In ektionsschleife, Software: Borwin HPLC-Software; Präparative Anlagen: Analog den analytischen, nur mit 1) Knauer präparative Durchflußküvette (d = 0.5 mm), Probenschleife 500 μl; 2) Jasco präparative Durchflußküvette, Probenschleife 500 μl; Analytische Säulen: 1) Vertex 4 x 250 mm mit 4 x 4 mm Vorsäule: Stationäre Phase: Eurochrom Eurospher RP 60-10 C18 60 Ä 7-12 μm, 2) Vertex 4 x 250 mm mit 4 x 4 mm Vorsäule: Stationäre Phase: Merck Lichrosorb RP C18 7 μm, 3) Vertex 4.6 x 250 mm mit 4 x 4 mm Vorsäule: Stationäre Phase: ODS-AQ/303; Präparative Säule: Vertex 16 x 250 mm mit 16 x 30 mm Vorsäule: Stationäre Phase: Eurochrom Europrep RP 60-10 C18 60 Ä 7-12 μm; Lösungsmittel für die HPLC: Für die Trennungen wurde durch fraktionierte Destillation zurückgewonnenes Acetonitril/Wasser-Azeotrop (83.7 % Acetonitril/16.3 % Wasser, Sdp. 78.5 °C) eingesetzt
Material
DünnschichtChromatographie (DC) :
DC-Folien Polygram SIL G/UV2S4 (Macherey-Nagel & Co) , basisches Si02: DC-Folien (Polygram SIL G/üV254; Macherey-Nagel & Co) wurden mit 0.2 N Natriumacetat-Lösung getränkt und an der Luft getrocknet; saures Si02: DC-Folien (Polygram SIL G/UV2S4; Macherey-Nagel & Co) wurden mit 0.2 N Oxalsäure getränkt und an der Luft getrocknet. i?f-Werte beziehen sich, wenn nicht anders angegeben, auf das bei der SC angegebene Laufmittel.
Präparative Dickschichtchromatogaphie (PDC) :
Eine Aufschlämmung von je 55 g Kieselgel P/UV254 (Macherey-Nagel & Co) in 120 ml Wasser goß man auf waagerecht liegende Glasplatten (20 x 40 cm oder zwei 20 x 20 cm), ließ an der Luft trocknen und aktivierte 3 h bei 130 °C; oxalsaure PDC-Platten: wie zuvor, jedoch Aufschlämmung mit 0.2 N Oxalsäure.
Säulenchromatographie (SC) :
MN Kieselgel 60: 0.05-0.2 mm, 70-270 mesh (Macherey-Nagel & Co) ; Kieselgel für Flash-Chromatographie: 30-60 μm (J. T. Baker); Sephadex LH-20 (Pharmacia); XAD 2, 300-1000 μm, SΞRVA Heidelberg. Die Säulen wurden naß gefüllt.
Sprühreagenzien
Anisaldehyd/Schwefelsäure: Zu 100 ml einer Stammlösung aus 85 ml
Methanol, 14 ml Eisessig und 1 ml Schwefelsäure fügte man 1 ml Anisaldehyd hinzu. Das Reagenz war ca. 7 d haltbar.
Ehrlich 's Reagenz: 1 g 4-Dimethylaminobenzaldehyd wurden in einer
Mischung von 25 ml Salzsäure (37proz.) und 75 ml Methanol gelöst.
— Kaliumpermanganat: Als Sprühreagenz diente eine 0.05proz. wäßrige Kaliumpermanganat -Lösung . INPTC : 2 - (p- Iodophenyl) -3 - (p-nitrophenyl) - 5 -phenyl - 2H- tetrazoliumchlorid; Lösung I: 0.5 g INPTC wurden in 100 ml Methanol gelöst; Lösung II: 5 g in 10 ml Wasser gelöstes KOH wurden mit Methanol auf 100 ml aufgefüllt. Die mit Lösung I besprühte DC-Folie wurde 5 min bei Raumtemperatur stehen gelassen und dann 5 min auf 75 °C erwärmt. Anschließend wurde die Folie mit Lösung II besprüht. CarbonylVerbindungen ergaben gelbe bis orange Flecken.
Mikrobiologisches Material
Bakterienlagerung: Dewargefäß Fa. 1 'Air liquid, Typ BT 37 A. — Kapillaren zur Tiefkühllagerung: Durchmesser 1.75 mm, Länge 80 mm, Fa. Hirschmann Laborgeräte, Eberstadt. — Erde für Erdkulturhaltung: Luvos Heilerde LUVOS JUST GmbH & Co Friedrichshof (aus dem Reformhaus bezogen) . Die Erde wurde zum Sterilisieren 3 h auf 130 °C erhitzt, 1 h bei 100 °C und 1.1 bar autoklaviert und abschließend nochmals 3 h auf 130 °C erhitzt. — Ultraturrax: Janke & Munkel KG. — Schüttler: Rundschüttler INFORS Typ ITE. — Autoklav: Albert Dargatz Autoklav, Volumen 119 1, Betriebstemperatur 121 °C, Betriebsdruck 1 kg/cm2. — Antibiotika-Testplättchen: 9 mm Durchmesser, Schleicher & Schüll No. 321 261. —Nährbodenbestandteile: Glukose, Bacto Pepton, Bacto Agar, Hefe-Extrakt und Malz-Extrakt von Fa. Merck; Chitin von Sigma. — Antischaum-Lösung: Niax PPG 2025, Union Carbide Belgium N.V. Zwijndrecht. — Petrischalen: Durchmesser 94 mm, Höhe 16 mm, Fa. Greiner Labortechnik, Nürtingen. — Celite: Celite France S. A., Rueil-Malmaison Cedex — Laminar-Flow-Box: Kojair KR- 125, Reinraumtechnik GmbH, Rielasingen-Worblingen 1, Deutschland.
M2 +-Agar
Malzextrakt 10 . 0 g Hefeextrakt 4 . 0 g Glucose 4 . 0 g Leitungswasser 1000 ml
Bei festem Medium zusätzlich 18.0 g Agar-Zusatz. Mit 2 N Natronlauge auf pH 8.0 eingestelltes Medium ergab nach dem Autoklavieren pH 7.1 bis 7.4.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen lassen sich aus Actinomyceten gewinnen, insbesondere aus dem Stamm GW 33/1311 , der bei der DSMZ in Braunschweig unter der Nummer 11149 hinterlegt wurde. Der Stamm GW 33/1311 produziert ohne Verfahrensoptimierung schon 20mg Anthracycline aus 6 1 Kulturmedium. Der Actinomycet GW 33/1311 (DSM-Nr. 11149) wurde auf Schrägagarröhrchen, dann auf Agarplatten jeweils 72 h bei 28 °C inkubiert. Mit diesen Kulturen wurden 60 mit je 165 ml M2 +-Nährmedium gefüllte 1 1-Erlenmeyerkolben beimpft und 72 h bei 28 °C mit ca. 120 Upm inkubiert. Der Stamm wuchs als dunkelrote Pellets, das Nährmedium war rotbraun gefärbt. Zum Aufarbeiten wurde die Kulturbrühe mit Celite vermischt und mit der Filterpresse filtriert. Das wässrige Filtrat extrahierte man sechsmal mit Ethylacetat. Der mit Celite vermischte Zellrückstand wurde siebenmal mit je 2 1 Ethylacetat digeriert, 15 min mit
Ultraschall behandelt und filtriert. Die vereinigten organischen Phasen ergaben 1.2 g eines dunkel rotbraunen, öligen Eindampfrückstandes .
Isolierung
Den in 250 ml Methanol gelösten Rohextrakt entfettete man durch zweimaliges Ausschütteln mit jeweils 100 ml Cyclohexan. Ebenso können für die Verbindungen des Beispiels 5 als Lösungsmitttel C2- C4 -Alkohole verwendet werden. Bevorzugt ist hierbei Etanol. Die entfetteten Extrakte wurden durch SC an Sephadex LH-20 (Säule 30 x 600 mm, CHCl3/40 % CH30H) getrennt. Nach 500 ml Vorlauf teilte man unter DC- ontrolle (CHC13/CH30H/NH3 (aq) : 100/5/0.05) in 7 Fraktionen: Fraktion I: RE = 0.45-0.03, 30 mg; Fraktion II: RE = 0.70-0.40, orange-rote Fluoreszenz, 460 mg; Fraktion III: Rf = 0.31-0.15, orange-rote Fluoreszenz, 110 mg; Fraktion IV: RE = 0.47-0.28, orange-rote Fluoreszenz, 280 mg; Fraktion V: Rf = 0.95-0.41, 90 mg; Fraktion VI: R£ = 0.55-0.25, 10θ"mg; Fraktion VII: RE = 0.65-0.15, 70 mg), die jeweils noch Substanzgemische enthielten. Das biologische und pharmakologische Screenring ergab, dass sich die gesuchten aktiven Substanzen in den Fraktionen -II - IV befanden.
Fraktion II wurde durch PDC an Kieselgel (4 Platten 200 x 400 mm, CHC13/CH30H/CH3C00H/H20: 40/10/1.4/0.8) getrennt, wodurch man unter UV/Vis -Kontrolle 4 rote Fraktionen erhielt: Ha (R£ = 0.75-0.60, 80 mg), Ilb (R£ = 0.63-0.55, 180 mg), IIc (Rf = 0.50-0.33, 110 mg), Ild (R£ = 0.40-0.20, 50 mg).
Fraktion Ilb wurde durch PDC an Kieselgel (200 x 400 mm, dreifache Entwicklung mit CHC13/CH30H/NH3 (aq) : 100/8/0.1) getrennt. Man erhielt 35 mg Ilbl (Re = 0.59-0.50), 25 mg IIb2 (R£ = 0.54-0.41) und 28 mg IIb3 (R£ = 0.45-0.32). Durch SC an Sephadex LH-20 (Säule 30 x 600 mm, CHC /40 % CH30H) erhielt man aus Ilbl 23 mg 2 ' ' ' ' ■ ' -Methoxy-2 • ' " ' ' , 3 ' ' ' ' ' ' -dihydroditrisarubicin C im Gemisch mit Ditrisarubicin C, aus IIb2 15 mg 2' ' ' -Methoxy-2' ' ' ,3' ' ' -dihydroditrisarubicin H,
2" ' ' ' ' -Methoxy-2' - > • ■ • t ' • ' ' ' • -dihydroditrisarubicin H im
Gemisch mit Ditrisarubicin H und aus IIb3 13 mg
2 < • • -Methoxy-2' '' ,3' '' -dihydroditrisarubicin CR im Gemisch mit
Ditrisarubicin CR.
Fraktion Ilc wurde durch PDC an Kieselgel (200 x 400 mm, dreifache Entwicklung mit CHC13/CH30H/NH3 (aq) : 100/10/0.1) getrennt. Man erhielt 35 mg IIcl (R£ = 0.56-0.40) und 30 mg IIc2 (R£ = 0.44-0.31). Durch SC an Sephadex LH-20 (Säule 30 x 600 mm, ■
CHC1./40 CH3OH) erhielt man aus IIc2 25 mg Ditrisarubicin I/IR.
Fraktion III wurde durch PDC an Kieselgel (4 Platten 200 x 400 mm, CHCl3/CH3OH/NH3(aq) : 100/10/1) getrennt. Man erhielt 24 mg lila
(R. 0.36-0.25) und 26 mg Illb (R£ = 0.25-0.13). Durch SC an Sephadex LH-20 (Säule 30 x 600 mm, CHCl3/40 % CH3OH) erhielt man aus Illb 15 mg Cytorhodin Y.
Die Strukturaufklärung erfolgte durch Auswertung der NMR und Massenspektren sowie der sauren Hydrolyse der Verbindungen mit anschließender Vergleichsdünnschichtchromatographie .
Beispiel 1 Cytorhodin Y
Figure imgf000010_0001
R£ = 0.24 (CHCl3/CH3OH/NH3(aq) : 100/10/1) .
IR (KBr) : v = 3437 (br, OH) cm-1, 2978, 2827, 2777, 1730, 1600, 1445, 1403, 1381, 1322, 1295, 1253, 1222, 1202, 1169, 1117, 1001, 810, 796, 756, 719, 645, 597.
UV/Vis (CH3CN-H20-Azeotrop) : λmax = 199 nm, 235, 255, 295, 495. DCI-MS (NH3) : m/z (%) = 930 ( [M (C48H68N2016) + H] +, 100) . 'H-NMR (CDC13, 300.1 MHz) : δ = 13.89 (s br; 1 H, OH), 12.82 (s br; 1 H, OH), 12.26 (s br; 1 H, OH) , 7.90 (d, 3J = 7.4 Hz; 1 H, 1-H) , 7.70 (t, 3J = 7.4 Hz; 1 H, 2-H) , 7.28 (d, 3J = 7.4 Hz; 1 H, 3-H) , 5.48 (d, 3J = 2.9 Hz; 1 H, 1' -H) , 5.21 (m; 2 H, 10-H, 1" " -H) , 4.99 (d, 3J = 2.9 Hz; 1 H, 1" -H) , 4.82 (s br; 1 H, 1"' -H) , 4.50 (br q, 3J = 6.8 Hz; 1 H, 5' ' -H) , 4.21 (br q, 3J = 6.7 Hz; 1 H, 5"' -H), 4.06 (m; 1 H, 3" -H), 3.87 (br q, 3 J = 6.8 Hz; 1 H, 5' -H), 3.68 (m; 2 H, 4'-H, 4"' -H) , 3.52 (s br; 1 H, 4" -H) , 3.38 (s br; 1 H, 4""-H) , 3.12 (br q, 3J = 6.8 Hz; 1 H, 5"" -H) , 2.97 (m; 1 H, 7-Hb) , 2.77 (m; 1 H, 7 -Ha), 2.15 (s br; 12 H, 2 N(CH3)2), 2.15-1.55 (m; 19 H, 8-H2, 13-H2, 2' -H2, 3' -H, 2" -H2, 2" ' -H2, 3" ' -H2, 2" " -H2, 3"" -H, 3 OH), 1.25 (m; 6 H, 6' -H3, 6"' -H3) , 1.12 (d, 3J = 6.8 Hz; 3 H, 6" -H3), 0.99 (t, 3J = 6.8 Hz; 3 H, 14-H3), 0.82 (d, 3J = 6.8 Hz; 3 H, 6""-H3) . "C-NMR und APT (CDC13, 125.7 MHz) : δ = 191.0 (C-5, Cquart) , 185.6 (C-12, Cquart) , 162.6 (C-4, Cquart) , 158.3 (C-ll, Cquart) , 156.3 (C-6, Cquart), 140.2 (C-lOa, Cquart) , 138.3 (C-6a, Cquart), 137.0 (C-2, CH) , 133.9 (C-12a, Cquart), 124.3 (C-3; CH) , 119.5 (C-1, CH) , 116.3 (C-4a, Cquart), 110.4 (C-5a, Cquart), 110.2 (C-lla; Cquart), 100.3 (C-1' ", CH) , 99.5 (C-1", CH) , 97.7 (C-1', CH) , 90.9 (C-1' " ', CH) , 83.7 (C-4", CH) , 77.4 (C-9, Cquart), 74.4 (C-4', CH) , 69.7 (C-10, CH) , 68.4 (C-5'", CH) , 68.0 (C-5', CH) , 67.3 (C-4' ", CH) , 66.8 (C-5", CH) , 66.4 (C-5"", CH) , 65.9 (C-4"", CH) , 65.6 (C-3", CH) , 61.4 (C-3', CH) , 59.5 (C-3"" , CH) , 43.4 (C-3'-NCH3, 2 CH3 ) , 42.0 (C-3"" -NCH3, 2 CH3), 34.3 (C-2"; CH2) , 29.8 (C-2"" ; CH2) , 29.8 (C-2', CH2), 26.5 (C-13, CH2) , 25.5 (C-3'", CH2) , 24.7 (C-8, CH2) , 24.0 (C-2'", CH2) , 20.9 (C-7, CH2) , 18.1 (C-6' , CH3) , 17.0 (C-6" , CH3) , 17.0 (C-6"', CH3) , 16.5 (C-6"", CH3) , 7.0 (C-14, CH3) . HMQC-NMR (inverses CH-COSY, CDC13, INVBTP, Fl 75.5 MHz, F2 300.1 MHz) (H → C) : 1-H → C-1; 2-H → C-2; 3-H - C-3; H-l' -» C-1';
10-H -> C-10; 1' ' ' -H -» C-1"" ; 1" -H -» C-1"; 1" ' -H → C-1'"; 5" -H → C-5' ' ; 5 ' ' -H ->• C-5"'; 3"-H → C-3"; 5' -H → C-5'; 4 ' - H → C - 4 ' ; 4" -H -> C-4'"; 4"-H -→ C-4"; 4"" -H → C-4""; 5" " -H -» C-5' ' ' : 7-H2 →- C-7; NCH3 → NCH3; 3' -H → C-3'; 3" ' ' -H -» C-3' ' ' : 2" -H2 -> C-2' ' ; 6' -H3 - C-6' ; 6" ' -H3 → C-6" ' ; 6" -H3 → C-6" ; 14-H3 -> C-14; 6"" -H3 -» C-6" " . HMBC-NMR (inverses COLOC, CDC13, INV4LPLRND, Fl 75.5 MHz, F2 300.1 MHz) (H → C) : 1-H IJ → C-1; 1-H 3J → C-12; 1-H 3J ->■ C-3; 1-H 3J -» C-4a; 2-H IJ -» C-2; 2-H 2J -→- C-3; 2-H 3J → C-4; 2-H 3J → C-12a; 2-H 4J → C-4a; 3-H IJ -» C-3; 3-H 2J → C-4; 3-H 3J → C-1; 3-H 3J → C-4a; l' -H 3J → C-10; l' -H 3J → C-5' ; l' -H 3J → C-3'; 10-H 2J → C-lOa; 10-H 3J → C-ll; 10-H 3J → C-6a; 10-H 3J - → C-1' ; 10-H 3J → C-13; 10-H 3J → C-8; 1""-H 3J - C-9; 1"" -H 3J → C-5""; 1" " -H 3J → C-3"" ; l" -H 3J → C-4'; 1" -H 3J -» C-5"; 1" -H 3J - C-3" ; 1" ' -H 3J → C-4"; 1" ' -H 3J → C-5" '; 1"' -H 3J -» C-3'"; 5"-H 2J -» C-4" ; 5" -H 2J → C-6"; 5" ' -H 2J -» C-4" '; 5"' -H 2J -» C-6'"-; 5' -H 2J → C-4' ; 5' -H 2J → C-6' ; 4'H 2J -» C-3' ; 4' -H 3J → C-1' ' ; 4' -H 3J → C-2' ; 4'"-H 3J → C-2'"; 4" -H 2J → C-3" ; 4" -H 3J → C-1"'; 4" -H 3J → C-2" ; 4' "' -H 2J → C-3'"'; 4"" -H 3J → C-2"" ; 5' " ' -H 2J -» C-4" "; 5"" -H 2J → C-6"" ; 7-Hb 2J → C-6a; 7-Hb 2J → C-8; 7-Hb 3J → C-6; 7-Hb 3J → C-lOa; 7-Hb 3J -» C-9; 7-Ha 2J → C-6a; 7-Ha 2J -» C-8; 7-Ha 3J → C-10a; 13-H2 2J → C-9; 13-H2 2J - C-l-4; 13-H2 3J -» C-8; 6'-H3 2J -» C-5' ; 6' -H3 3J → C-4'; 6"'-H3 2J → C-5"'; 6' " -H3 3J - C-4'"; 6' ' -H3 2j - C-5"; 6" -H3 3J → C-4"; 14-H3 2J - C-13; 14-H3 3J → C-9; 6" " -H3 2J → C-5' " ' ; 6" " -H3 3J - C-4' ' ' ' . - NOESY-NMR (CDC13, NOESYTP, Fl 300.1 MHz, F2 300.1 MHz) (H <-> H) : 1-H - 2-H; 2 -H ^ 3-H; l' -H <-> 10 -H; 1' -H - -» 2 ' -H2; 10-H 5' ' ' ' -H; 10 -H ^ 8 -Ha; 1 ' ' ' ' -H <r» 2 ' ' ' ' -H2; 1' ' ' ' -H - - 14-H3; 1 ' ' ' ' -H <-» 6 ' ' ' ' -H3 ; 1 ' ' -H <→- 4 ' -H;
1' -H 2 ' ' -H2; 1' ' -H <-» 6' ' -H3; 1 ' ' ' -H - - 4 ' ' -H; 1 ' ' ' -H 2' ■ -H2; 1' ' ■ -H 6' ' ' -H3; 5' ' -H 3' ' -H; 5' ' -H 4' ' -H; 5 ' ' -H <→- 6' ' -H3; 5 ' ' ' -H - - 4 ' ' ' -H; 5 ' ' ' -H -> 2 ' ' • -H; 5 ' ' ' -H 3 ' ' ' -H; 5' ' -H 6' ' ■ -H3; 3' ' -H - 4' ' -H; 3 ' ' -H <- 2 ' ' -H; 3 ' ' -H <H- 6' H3; 5' -H <-» 4 ' -H; 5' -H 2' -H; 5 ' -H «→- 6 ' -H3 ; 5 ' -H <-» 3 ' -H; 4' -H 3' -H; 4 ' -H <β> 6' -H3; 4 ' ' ' -H <→- 2 ' ' ' -H; 4 ' ' ' -H <H> 3 ' ' ' -H2; 4' ' -H <-» 6' ' ' -H3; 4' ' -H 6' ' -H3; 4 ' ' ' ' -H -> 5 ' ' ' ' -H; 4 ' ' ' ' -H - - 3' ' ' -H; 4 ' ' ' ' -H 6' ' ' ' -H3; 5 ' ' ' ' -H «- 3 ' ' ' ' -H; 5 ' ' ' ' -H <-»
14-H3; 5 -H - 6' ' ' ' -H3; 7-Hb 7 -Ha.
C48H68N2Oιe Ber. 928.45562 Gef. 928.45562.
Beispiel 2
2 ' ' ' ' ' ' -Methoxy-2 ' , 3 ' ' ' ' ' ' dihydroditrisarubicin C (2a) ;
2 ' • ' -Methoxy-2 ' ■ ' , 3 ', ■ -dihydroditrisarubicin CR (2b)
Figure imgf000012_0001
Figure imgf000013_0001
2' ' ' ' " -Methoxy-2' ' ' ' ' ' ,3' ' " ' 'dihydroditrisarubicin C (2a) : R£ = 0.43 (CHCl3/CH3OH/NH3(aq) : 100/6/0.05).-
IR (KBr) : v = 3432 (br, OH) cm-1, 2925, 2854, 1734, 1610, 1460, 1383, 1261, 1115, 1018, 803.
UV/Vis (CH3CN-H20-Azeotrop) : λmax = 235 nm, 255, 291, 499. (+)-ESI-MS: m/z (%) - 1198 ( [M (C61H84N2022 ) + H] +, 26), 941 (29), 599 ( [M + H]2+, 76) . (+)-ESI-MS Tochterionenspektrum von 1198: m/z (%) = 1198 ( [M + H]+, 16), 957 ( [M - C12H1705 + H] +, 2), 941 ( [M - C13H2105 + H] +, 40), 800 ([M - C20H32NO7 + H] +, 1), 784 ( [M - C21H36N07 + H] +, 5), 701 ( [M - C25H38O10 + H]+, 70), 544 ( [M - C33H53N012 + H] +, 26), 526 (4), 388 (3), 372 (6), 351 (1), 225 (13), 207 (5), 158 ( [C8H15N02 + H]+, 100), 132 ( [C6H1103 + H]+, 39), 114 ( [C6H10O2 + H]+, 4) , 97 (6) .
"H-NMR (CDC13, 300.1 MHz) : δ = 13.78 (s br; 1 H, OH), 12.89 (s br; 1 H, OH), 12.19 (s br; 1 H, OH) , 7.91 (d, 3J = 7.4 Hz; 1 H, 1-H) , 7.73 (t, 3J = 7.4 Hz; 1 H, 2-H), 7.33 (d, 3J = 7.4 Hz; 1 H, 3-H), 5.48 (m; 2 H, l'-H, l' ' ' '-H) , 5.15 (s br; 1 H, 7-H), 5.05 (m; 2 H, l' ' -H, l' ' '-H) , 5.01 (m; 1 H, 10-H) , 4.98 (m; 2 H, l' ' ' ' '-H, 1" " ' '-H) , 4.68-4.40 (m; 4 H, 2 ' ' ' -H, 5 ' ' -H, 5 ' ' ' -H, 5' ' ' ' ' -H), 4.34 (m; 1 H, 3 ' ■ -H) , 4.12-3.98 (m; 3 H, 4' ' -H, 5'-H, 5' ' ' ' ' ' -H) , 3.82 (m; 1 H, 5' ' ' ' -H) , 3.78 (s br; 1 H, 4' -H) , 3.72 (s br; 1 H, 4' ' ' ' -H) , 3.58 (m; 1 H, 4' ' ' ' ' -H) , 3.41 (s; 3 H, 2 ' ' ' ' ' ' -OCH3) , 2.46 (m), 2.23-2.01 (m) , 2.15 (2 s; 12 H, 2 N(CH3)2) , 1.82-1.62 (m) , 1.82-1.62 (m) , 1.32-1.19 (m; 12 H, 6'-CH3, 6' " -CH3, 6' ' ' ' -CH3, 6' ' ' ' ' ' -CH3) , 1.12-1.01 (m; 9 H, 6' ' -CH3, 6" ' " -CH3, 14-H3) . 13C-NMR und APT (CDC13, 125.7 MHz) : δ = 208.2 (C-4' " , Cquart), 207.5 (C-4J' • ' ' ' ' , Cquart), 191.5 (C-5, Cquart) , 186.7 (12-C,
Cquart) , 162.2 (C-4, Cquart) , 156.7 (C-ll, Cquart), 156.7 (C-6, Cquart) , 137.8 (C-lOa, Cquart) , 136.8 (C-2, CH) , 135.9 (C-6a, Cquart) , 134.2 (C-12a, Cquart) , 125.0 (C-3; CH) , 119.9 (C-1, CH) , 116.4 (C-4a, Cquart) , 111.9 (C-5a, Cquart), 111.6 (C-lla; Cquart) , 102.6 (C-11, CH) , 100.1 (C-l, , , , , , # CH) , 99.1 (C-11 1,
CH) , 98.1 (C-1 , CH) , 96.6 (C-1" ' X CH) , 91.3 (C-1' ' ', CH) ,
78.8 (C-2' ' ' ' 1 ', CH) , 77.8 (C-5' ", CH) , 75.9 (C-4' - ' ', CH) , 75.0 (C-4' ' 1 ', CH) , 74.7 (C-4', CH) , 71.9 (C-9, Cquart) , 71.7 (C-7, CH) , 71.3 (C-5' ' 1 ' ' ', CH) , 71.1 (C-10, CH) , 67.9 (C-S' ' ' 1, CH) , 67.7 (C-5' , CH) , 66.4 (C-3", CH) , 66.2 (C-4", CH) , 65.8 (C-5", CH) , 65.8 (C-5" '", CH) , 62.8 (C-2'", CH) , 62.0 (C-3', CH) ,
61.8 (C-3' "', CH) , 56.9 (C-2 " " " -OCH3) , 44.0 (C-3""-NCH3, 2 CH3) , 43.9 (C-3' -NCH3, 2 CH3) , 39.7 (C-3" ' , CH2), 39.6 (C-3"" " , CH2) , 33.0 (C-8, CH2) , 30.6 (C-13; CH2) , 29.5 (C-2"", CH2) , 29.5 (C-2', CH2 ) , 26.5 (C-2", CH2) , 23.8 (C-3'"", CH2) , 23.8 (C-2"' ", CH2) , 17.9 (C-6"" , CH3) , 17.9 (C-6', CH3), 16.0 (C-6'" , CH3 ) , 15.9 (C-6", CH3) , 15.9 (C-6'"", CH3) , 14.9 (C-6""", CH3 ) , 6.6 (C-14, CH3) .
2'" -Methoxy-2' " ,3' " -dihydroditrisarubicin CR (2b) RE = 0.40 (CHCl3/CH3OH/NH3(aq) 100/6/0.05) . (+) -ESI-MS: m/z (%) = 1198 ( [M (C61H84N2022 ) + H] +, 26), 941 (29) , 599 ( [M + H]2 + , 76) .
(+) -ESI-MS Tochterionenspektrum von 1198: m/z (%) = 1198 .([M + H]+, 16), 957 ( [M — C12H1705 + H]+, 2), 941 ( [M - C13H2105 + H] +, 40) , 800 ( [M - C20H32NO7 + H]+, 1) , 784 ( [M - C21H36N07 + H]+, 5) , 701 ( [M - C25H38O10 + H]+, 70) , 544 ( [M - C33H53N012 + H] +, 26) , 526 (4) , 388 (3) , 372 (6) , 351 (1) , 255 (8), 207 (5) , 158
( [C8H15N02 + H]+, 100) , 132 ( [C6H1103 + H]+, 39), 114 ( [C6H10O2 + H]+, 4), 97 (2) .
"H-NMR (CDC13, 300.1 MHz) : δ = 13.78 (s br; 1 H, OH) , 12.89 (s br; 1 H, OH), 12.19 (s br; 1 H, OH) , 7.91 (d, 3J. = 7.4 Hz; 1 H, 1-H) , 7.73 (t, 3J = 7.4 Hz; 1 H, 2-H), 7.33 (d, 3J = 7.4 Hz; 1 H, 3-H) , 5.48 (m; 2 H, l' -H, l' ' ' '-H), 5.15 (s br; 1 H, 7-H) , 5.05 (m; 2 H, 1' ' ' ' ■ -H, 1' ' ' ' ' ' -H) , 5.01 (s br; 1 H, 10 -H) , 4.98 (m; 2 H, 1" -H, l' ' ' -H) , 4.68-4.40 (m; 4 H, 2 ' ' ' ' ' ' -H, 5 ' ' -H, 5 ' ' ' ' ' -H, 5' ' ' ' ' ' -H) , 4.34 (m; 1 H, 3' ' ' ' ' -H) , 4.12-3.98 (m; 3 H, 4' ' ' ' ' -H, 5' -H, 5" ' -H) , 3.82 (m; 1 H, 5 ' ' ' ' -H) , 3.78 (s br; 1 H, 4 ' -H) , 3.72 (s br; 1 H, 4, , , , -H), 3.58 (m; 1 H, 4 ' ' -H) , 3.41 (s; 3 H, 2" ' -OCH3) , 2.40 (m) , 2.23-2.01 (m) , 2.15 (2 s; 12 H, 2 N(CH3)2), 1.82-1.62 (m) , 1.32-1.19 (m; 12- H, 6' -CH3, 6' ' ' -CH3, 6' ' ' ' -CH3, 6' ' ' ' ' ' -CH3) , 1.12-1.01 (m; 9 H, 6' ' -CH3, 6, , , , , -CH3, 14-H3) .
Beispiel 3
2 ' ' ' -Methoxy-2 ' ' ' ,3 ' ' ' -dihydroditrisarubicin H (3a) ,
2 ' ' ' ' ' ' -Methoxy-2 ' ' ' ' ' ' , 3 ' ' ' ' ' ' -dihydroditrisarubicin H (3b)
Figure imgf000015_0001
2' ' ' -Methoxy-2' " ,3' " -dihydroditrisarubicin H (3a) R£ = 0.42 (CHCl3/CH3OH/NH3(aq) : 100/6/0.05) .
IR (KBr) : v = 3424 (br, OH) cm-1, 2935, 1736, 1708, 1603, 1467, 1441, 1403, 1384, 1298, 1261, 1198, 1119, 1003. UV/Vis (CH3CN-H20-Azeotrop) : λmax = 235 nm, 255, 291, 499.
(+) -ESI-MS: m/z (%) = 1182 ( [M (C61H84N2021) + H] +, 12) , 957
(11) , 592 ( [M + H]2 + , 100) .'
( + ) -ESI-MS Tochterionenspektrum von 1182:' m/z (%) = 1182 ( [M + H]+, 17), 957 ( [M - C12H1704 + H] + , 8) , 941 ( [M - C12H1705 + H] +, 5) , 925 ([M - C13H2105 + H]+, 20) , 800 ( [M - C20H32NO6 + H] +, 1) , 768 ( [M - C21H36N07 + H]+, 2) , 717 (2) , 701 ( [M - C25H3809 + H] +, 100), 544 ( [M - C33H53N011 + HJ+, 28) , 526 (5), 387 (3) , 372 (3), 356 (7) , 351 (4), 225 (15) , 207 (7) , 158 ( [C8H15N02 + H]+, 96) , 132 ( [C6H1103 + H]+, 52), 111 ( [C6H702 + H] +, 34) . "H-NMR (CDC13, 499.9 MHz) : δ - 13.69 (s br; 1 H, OH) , 12.82 (s br; 1 H, OH), 12.02 (s br; 1 H, OH), 7.82 (d, 3 J = 7.4 Hz; 1 H, 1-H) , 7.65 (t, 3J = 7.4 Hz; 1 H, 2-H) , 7.22 (d, 3J = 7.4 Hz; 1 H, 3-H),
6.83 (m; 1 H, 2 -H) , 6.05 (m; 1 H, 3 ' ' ' ' ' ' -H) , 5.48 (s br; 1
H, 1' -H) , 5.42 (s br; 1 H, 1' ' ' ' -H) , 5.19 (dd, 3J = 7.9 Hz , 3J = 2.9 Hz; 1 H, 1' ' ' ' ' ' -H) , 5.10 (s br; 1 H, 7-H) , 4.98 (s br; 1 H, 10-H), 4.95 (s br; 1 H, 1 ' ' ' -H) , 4.89 (s br; 2 H, l' ' -H, l' ' " ' -H), 4.55 (m; 1 H, 5 ' ■ ' ■ ' - -H) , 4.51 (m; 1 H, 5 ' ' -H) , 4.44
(m; 1 H, 5, , , , ' -H) , 4.21 (m; 1 H, 5' ' '-H) , 3.99 (m; 1 H, 5' -H) , 3.83 (m; 1 H, 5' ' ' ' -H) , 3.78 (m; 2 H, 2" ' -H, 4 ' -H) , 3.70 (s br; 1 H, 4' ' ' ' -H) , 3.62 (s br; 1 H, 4 ' ' -H) , 3.54 (s br; 1 H,
4' I , , ' -H), 3.38 (2 s; 3 H, 2' ' ' -OCH3) , 2.80 (m; 1 H, 3 ' ' ' -Hb) , 2.62 (m; 1 H, 3'" -Ha) , 2.16 (2 S; 12 H, 2 N(CH3)2) , 2.18-1.65 (m) , 1.38 (m; 3 H, 6""" -H3) , 1.25 (m; 9 H, 6' -H3, 6"' -H3, 6" " -H3), 1.08 (m; 9 H, 14-H3, 6" -H3, 6"'" -H3) . 13C-NMR und APT (CDC13, 125.7 MHz) : δ = 207.6 (C-4'" , Cquart) , 5 197.0 (C-4""", Cquart) , 190.6 (C-5, Cquart), 185.8 (12-C,
Cquart) , 162.4 (C-4, Cquart) , 157.8 (C-6, Cquart) , 157.0 (C-ll, Cquart) , 143.2 (C-2""", CH) , 138.3 (C-10a, Cquart) , 137.0 (C-2, CH) , 136.4 (C-6a, Cquart) , 133.4 (C-12a, Cquart), 127.1 (C-3""" , CH) , 124.6 (C-3; CH) , 119.6 (C-1, CH) , 115.9 (C-4a,
10 Cquart) , 111.9 (C-5a, Cquart), 111.6 (C-lla; Cquart) , 101.9
(C-1', CH) , 100.2 (C-1'" , .CH) , 98.5 (C-1", CH) , 98.4 (C-1"' ", CH) , 97.2 (C-1"", CH) , 95.2 (C-1'" " ', CH) , 79.0 (C-2" ', CH) , 76.3 (C-4" , C-4' "" , 2 CH) , 74.1 (C-4"", CH) , 73.8 (C-4', CH) , 71.9 (C-5'", CH) , 71.7 (C-9, Cquart) , 70.9 (C-7, CH) , 70.4
15 (C-5" " " , CH) , 70.3 , (C-10, CH) , 68.6 (C-5"", CH) , 68.4 (C-5', CH) , 66.3 (C-5'"", CH) , 66.2 (C-5", CH) , 61.5 (C-3"", C-3', 2 CH) , 56.9 (2' "-OCH3), 44.0 (C-3"" -NCH3, 2 CH3 ) , 43.9 (C-3' -NCH3, 2 CH3), 39.8 (3"'-C, CH2) , 32.9 (C-8, CH2) , 30.6 (C-13, CH2) , 29.7 (C-2"", CH2) , 29.3 (C-2', CH2) , 24.7
20. (C-3""', CH2), 24.6 (C-3", CH2), 24.5 (C-2", C-2'"", 2 CH2), 18.0 (C-6"", CH3), 17.8 (C-6', CH3), 17.2 (C-6' / / / / CH3), 17.0 (C-6", CH3), 16.0 (C-6'", CH3), 14.8 (C-6 .' ι t i ι r i CH3) , 6.6 (C-14, CH3) . HMQC-NMR (inverses CH-COSY, CDC13, INVBTP, Fl 125.7 MHz, F2 499.9
25 MHz) (H -> C) : Alle erwarteten Kopplungen wurden gefunden. 1-H —» C-1; 2-H - C-2; 3-H →- C-3; 2-H"'" -> C-2'""'; 3-H""" →
C-3 ; l'-H -» C-1'; 1" " -H -» C-1" " ; l'""'-H -
C-1 ; 7-H → C-7; 10-H → C-10; 1" ' -H → C-1'"; 1' ' -H →
C-1 1" " ' -H → C-1' " " ; 5" " " -H → C-5" " " ; 5" -H →
30 C-5 5" " ' -H -> C-5" ' " ; 5' " -H →- C-5" ' ; 5'-H → C-5';
5' ' H -» C-5""; 2'"-H → C-2'"; 4'-H - C-4'; 4""-H →
C-4 '; 4"-H → C-4"; 4'""-H → C-4'""; 3'"-H2 -> C-3"';
3" ' -H → C-3""; 3'-H → C-3'; NCH3 -» NCH3 ; 8-H2 → C-8; 13-H2
- C-13; 6"'"'-H3 → C-6"""; 6'-H3 -> C-6'; 6' ' ' -H3 → C-6'";
35 6" ' -H3 → C-6' " ' ; 14-H3 -> C-14; 6' ' -H3 → C-6' ' ; 6" ' " -H3 →
C-6 , , , ,. — HMBC-NMR (inverses COLOC, CDC13, INV4LPLRND, Fl 125.7
MHz F2 499.9 MHz) (H → C) : 1-H IJ → C-1; 1-H 3J → C-12; 1-H 3J
→ C-3; 1-H 3J → C-4a; 1-H 4J → C-5; 2-H IJ → C-2; 2 -H 2J →
C-1 2-H 3J → C-4; 2-H 3J - C-12a; 2-H 4J → C-4a; 3-H IJ →- 0 C-3 3-H 2J - C-4; 3-H 2J → C-2; 3-H 3J - C-1; 3-H 3J → C-4a;
2' ' 1 ' ' -H 2J → C-1' •'■•'; 2"""-H 3J → C-4' '■'•>; 3> -H 3J
-> C -1' ' ' ' ' ' ; 3""M-H 3J → C-5"""; 1' -H 3J -» C-7; 1' -H 3J →
C-5 ; l'-H 3J→ C-3' ; 1' ' ' ' -H 3J → C-10; 1""-H 3J → C-5' " ' ;
1' ' ' -H 3J → C-3' ' ' '; 1" ' ' " -H 2J → C-2' " ' " ; l'""'-H 3J - 5 C-3 ...... !• i > i ■ > -H 3J → C-4' " ' ' ; 1' ' ' " ' -H 3J → C-5' •''"';
1' ' ' " -H 4J → C-4' ' ' " '; 7-H 2J -» C-6a; 7-H 2J → C-8; 7-H 3J → C-6; 7-H 3J → C-lOa; 7-H 3J → C-1'; 7-H 3J → C-9; 10-H 2J ->■ C-lOa; 10-H 2J -> C-9; 10-H 3J → C-11; 10-H 3J → C-6a; 10-H 3J → C-1""; 10-H 3J' → C-13; 10-H 3J -» C-8; 1' " -H 2J -» C-2' " ; 1"' -H 3J -→- C-3'"; 1"'-H 3J → C-4"; 1" ' -H 3J → C-5"'; 7-H 3J → C-1" "; 7-H 3J -» C-9; 7-H 4J -» C-13; 1" -H 3J → C-4' ; 1"-H 3J -4 C-5"; 1' ' " ' -H 3J → C-4" " ; 1" " '-H 3J → C-5" " ' ; 5" ' " ' -H 2J → C-4' " ' " ; .5" " " -H 2 J -> C-6' 5"" "-H 3J -» C-1' "" '; 5"-H 2J → C-4"; 5" -H 2J → C-6" ; 5" " 'H 2J -> C-4" ' " ; 5" " ' -H 2J -» C-6" " ' ; 5"' -H 2J -> C-4" ' ; 5' " -H 2J - C-6' " ; 5" ' -H 3J -> C-1" ' ; 5' -H 2J → C- 4 ' ; 5' -H 2J - C-6'; 5'-H 3J - C-1' ; 5' -H 3J → C-3'; 5""-H 2J -» C-4" "; 5" " -H 2J →- C-6" " ; 5" " -H 3J -» C-1" " ; 5' ' " -H 3J -» C-3""; 4' -H 2J → C-3'; 4' -H 3J → C-1"; 4' -H 3J -> C-2' ; 4' -H 3J -» C-6' ; 4" " -H 2J -> C-3 " " ; 4" " -H 3 J -» C-1" ' " ;
' -H 3J -» C-2""; 4""-H 3J -» C-6"" ; 4" -H 3J -» C-1'" ; 4"' " -H 3J →- C-1" '"' ; 3'" -H2 2J → C-4"'; 3' " -H2 2J → C-2'" ; 3' " -H2 3J -> C-1'"; 3"' -Hb 3J → C-5' "; 6"" " -H3 2J -> C-5"" "; 6" "" -H3 3J -> C-4'," '"; 6' -H3 2J → C-5'; 6' -H3 3J → C-4' ; 6"' -H3 2J -> C-5'"; 6" ' -H3 3J → C-4' "; 6" " -H3 2J - C-5""; 6"" -H3 3J -» C-4""; 6"-H3 2J - C-5" ; 6" -H3 3J - C-4"; 6"'" -H3 2J - C-5""; 6"'" -H3 3J → C-4" " '; 14-H3 2J → C-13; 14-H3 3J →- C-9. - TOCSY-NMR (CDC13, TOCSYTP, Fl 499.9 MHz, F2 499.9 MHz) (H H) : 1-H 2 -H →> 3 -H; 2 " " ' • -H - -
3 " ' ' ' ' -H 1' ' ' ' " -H; 1' -H 4 ' -H 3' -H <-> 2' -H2; l' " , -H
4 ' ' ' ' -H <→> 3 ' ' ' ' -H <→> 2' ' ' ' -H2; 7-H 8-H2; l"-H θ 4"-H 2 " -H2 3' ' -H2; 1 ' ' ■ -H - - 2 ' ' ' -H 3 ' " -H2 ; 1' ' ' ' ' -H
4 " " ' -H O- 2 ' ' ' ' ' -H2 «-» 3 -H2; 5 ' ' ' ' " -H - - 6 ' ' ' ' ' ' -H3 ; 5 ' ' -H
<-» 6' ' -H3; 5' ' ' ' ' -H 6" ' ' ' -H3; 5 ' ' ' -H <-> 6 ' ' ' -H3 ; 5' -H «→- 6' -H3; 5' ' ' ' -H <→> 6' ' " -H3; 13-H2 14-H3.
Beispiel 4
Ditrisarubicin I (4a) Ditrisarubicin IR (4b)
Figure imgf000017_0001
Figure imgf000018_0001
R£ = 0.43 (CHCl3/CH3OH/NH3(aq) : 100/10/1) .
(+) -FAB-MS: m/z (%) = 1170 ( [M (C60H84N2O2.1) + H] +, 11) , 1058
(12) , 946 (30) , 786 (91), 770 (100) , 752 (62) .
(-) -FAB-MS : m/z (%) = 1168 ( [M - H]-, 100) . - DCI-MS (NH3) : m/z
(%) = 1205 ([M + 2 NH3 + H] +, 35) , 1187 ( [M + NH3 + H]+, 59) , 1171 ( [M + H]+, 100) .
'H-NMR (CDC13, 300.1 MHz) : δ = 13.78 (s br; 1 H, OH) , 12.89 (s br; 1 H, OH), 12.19 (s br; 1 H, OH), 7.91 (d, 3J = 7.4 Hz; 1 H, 1-H) , 7.72 (t, 3J = 7.4 Hz; 1 H, 2-H), 7.34 (d, 3J = 7.4 Hz; 1 H, 3-H) , 5.48 (m; 2 H, l' -H, l' " ' -H) , 5.16 (m; 1 H, 7-H) , 5.10-5.01 (m; 4 H, 10-H, 1" -H, l' " -H, 1" ' ' "-H) , 4.97 (m; 1 H, l' " " -H) , 4-.58-4.42 (m; 3 H, 5 ' ' -H, 5 ' ' ' -H, 5' " " -H) , 4.34 (m; 1 H, 5' ' ' ' " -H) , 4.12 (m; 1 H, 3' ' -H) , 4.00 (m; 1 H, 5' -H) , 3.87 (m; 1 H, 5 ' ' ' ' -H) , 3.79 (S br; 1 H, 4 ' -H) , 3.72 (s br; 1 H, 4 ' ' ' ' -H) , 3.69 (m; 2 H, 4"-H, 4" " ' -H) , 2.50 (m) , 2.23-2.01 (m) , 2.16 (2 s; 12 H, 2 N(CH3)2) , 1.82-1.62 (m) , 1.32-1.19 (m; 12 H, 6' -CH3,
6' "-CH3, 6" "-CH3, 6' -CH3), 1.12-1.01 (m; 9 H, 6" -CH3,
6' ' ' ' ' -CH3, 14-H3) .
13C-NMR und APT (CDC13, 125.7 MHz): δ = 210.9 (C-4 ', Cquart),
210.1 (C-4"', Cquart), 190.9 (C-5, Cquart), 186.1 (12-C, Cquart), 162.7 (C-4, Cquart), 157.7 (C-11, Cquart), 157.1 (C-6, Cquart), 138.3 (C-lOa, Cquart), 137.1 (C-2, CH) , 136.5 (C-6a, Cquart), 133.6 (C-12a, Cquart), 124.7 (C-3; CH) , 119.7 (C-1, CH) ,
116.2 (C-4a, Cquart), 112.1 (C-5a, Cquart), 111.8 (C-lla; Cquart), 101.9 (C-1', CH) , 100.2 (C-1'", CH) , 99.4 (C-1", CH) ,
99.0 (C-1'"'", CH) , 98.6 (C-1""', CH) , 97.4 (C-1"", CH) ,
83.1 (C-4", CH) , 75.6 (C-4'"", CH) , 74.2 (C-4"", CH) , 74.1 (C-4', CH) , 71.8 (C-9, Cquart), 71.0 (C-7, CH) , 71.0 (C-5'",
CH) , 71.0 (C-5""", CH), 70.5 (C-10, CH) , 68.7 (C-5"", CH) , 68.5 (C-5', CH) , 66.7 (C-5", CH) , 66.5 (C-5"'", CH) , 65.4 (C-3", CH) , 61.5 (C-3', CH) , 61.4 (C-3"", CH) , 43.4 (C-3" ' ' -NCH3, 2 CH3), 43.3 (C-3 '-NCH3, 2 CH3 ) , 34.3 (C-2", CH2), 33.7 (C-3"', CH2), 33.6 (C-3""", CH2), 32.9 (C-8, CH2),
30.7 (C 13; CH2), 29.8 (C-2"", CH2), 29.3 (C-21, CH2 ) , 28.6 (C-2' ' ' ", CH2), 27.6 (C-2"', CH2) , 24.7 (C-3'"", CH2) , 24.6 (C-2' ' ' ', CH2), 18.1 (C-6"", CH3), 17.8 (C-6', CH3) , 17.1 (C-61 ' ' ', CH3), 16.9 (C-6", CH3), 14.9 (C-6""", CH3 ) , 14.8 (C-61 ' » CH3), 6.6 (C-14, CH3) . Beispiel 5:
2' ' ' -C2-C4-Alkoxy-2" "" ,3" "" -dihydroditrisarubicin C (5a) 2" C2-C4-Alkoxy-2" ' ,3" ' -dihydroditrisarubicin CR (5b) 2' ' C2-C4-Alkoxy-2" ' ,3' " -dihydroditrisarubicin H (5c); 2" •'- C-C -Alkoxy-2" '"' ,3"" " -dihydroditrisarubicin H
(5d
Die Darstellung erfolgt analog zu den Verbindungen der Beispiele 2a und 2b für die Verbindungen 5a und 5b, _sowie der Beispiele 3a und 3b für die Verbindungen 5c und 5d, wobei als Lösungsmittel statt Methanol Ethanol, Propanol, Isopropanol oder die Butanole verwendet werden.
Beispiel 6
Hydrolyse der Anthracycline für die strukturelle Aufklärung
A) Analytisch: Man suspendierte ca. 3 mg der. Anthracycline in 5 ml 0.1 N HC1 und rührte 35 min bei 90 °C. Anschließend • extrahierte man die Lösung dreimal mit jeweils 5 ml CHC13. Die organische Phase wurde i. Vak. eingeengt, in CHC13/CH30H aufgenommen und unter DC (CHC13/CH30H: 93/7) untersucht. Die Wasserphase wurde mittels DC überprüft: Laufmittel 1-Butanol/CH3COOH/H20: 4/1/1; Anfärbung mit
Anisaldehyd/Schwefelsäure. Die Zucker wurden über ihre R£-Werte und Anfärbungen identifiziert.
B) Präparativ: Man suspendierte 150 mg der vereinigten roten Fraktionen in 50 ml 0.1 N HC1 und rührte 45 min bei 90 °C.
Anschießend extrahierte man die Lösung fünfmal mit jeweils 70 ml CHC13. Der Eindampfrückst nd der organischen Phase wurde mittels PDC an Kieselgel (CHC13/CH30H/NH3 (aq) : 100/8/0.05) getrennt. Man erhielt 25 mg rote Fraktion I (RE = 0.55-0.50) und 36 mg rote Fraktion II (R£ = 0.49-0.45). Durch SC an Sephadex LH-20 (Säule 30 x 600 mm, CHCl3/40 % CH3OH) erhielt man aus I 21 mg γ-Rhodomycinon und aus II 27 mg ß-Rhodomycinon.
γ-Rhodomycinon: R£ = 0.51. (CHC13/CH30H: 93/7). - IR (KBr) : v = 3384 (br OH) cm-1, 2938, 1592, 1456, 1418, 1388, 1319, 1293,
1274, 1253, 1166, 1141, 1090, 1023, 979, 949, 921, 900, 826, 810, 786, 738, 714. —CD (CH3CN; 2.70 • 10-5 mol/1) : λmax (Θ) = 204.6 nm (- 12694), 235.0 (6959), 250.6 (5317), 298.0 (- 3476), 351.2 (2262), 385.0 (- 499), 402.8 f- 1036), 427.0 (- 633), 445.4 (- 547), 478.2 (129), 486.2 (- 197), 498.8 (493). - UV/Vis
(CH3CN-H20-Azeotrop) : λmax = 235 nm, 255, 295, 495, 527. - EI-MS (70 eV) : m/z (%) = 370 (M+, 59) , 352 (32) , 323 (17) , 298 (35) , 295 (53) , 270 (100) . - "H-NMR (CDC13, 300.1 MHz) : δ = 13.82 (s br; 1 H, OH) , 12.72 (s br; 1 H, OH) , 13.24 (s br; 1 H, OH), 7.88 (d, 3J = 7.4 Hz; 1 H, 1-H) , 7.71 (t, 3J = 7.4 Hz; 1 H, 2-H) , 7.31 (d, 3J = 7.4 Hz; 1 H, 3-H) , 4.78 (s br; 1 H, 10-H) , 2.91 (ABXY; 2 H, 7-H2) , 1.96 (m; 4 H, 8-H2, 13-H2) , 1.11 (t, 3J = 7.5 Hz; 3 H, 14-H3) .
ß- Rhodomycinon: RE = 0.46 (CHC13/CH30H: 93/7) . - IR (KBr) : v = 3387 (br OH) cm-1, 2925, 1718, 1605, 1458, 1383, 1250, 1201, 1167,
1128, 1070, 1023, 980, 943, 920, 898, 828, 755, 691. - CD (CH3CN; 2.53 • 10-5 mol/1) : λmax (Θ) = 203.8 nm (- 12711) , 232.8 (15357) , 289.4 (- 5056) , 342.0 (4576) , 385.0 (- 605) , 400.4 (- 686) , 419.8 (392) , 428.8 (-19), 498.8 (493) . - UV/Vis (CH3CN- H20-Azeotrop) : λmax = 235 nm, 255, 291, 495. - EI-MS (70 eV) : m/z (%) = 386 (M+, 9) , 368 (57), 351 (48) , 314 (100), 312 (83), 311 (85) , 296 (84) , 283 (25), 276 (18), 218 (23) , 91 (79) , 57 (34) . - "H-NMR ([D61DMSO, 300.1 MHz) : δ = 13.25-11.60 (br m; 3H, OH) , 7.84 (m; 2 H, 1-H, 2-H), 7.40 (m; 1 H, 3-H) , 5.48 (s br; 1 H, OH) , 4.99 (m; 1 H, 7-H) , 4.97 (s; 1 H, 10-H) , 4.62 (s br; 1 H, OH) , 1.96 (ABX; 2 H, 8-H2), 1.66 (m; 2 H, 13-H2), 0.98 (t, 3J = 7.5 Hz; 3 H, 14-H3) .
Tabelle 1: Ergebnisse der analytischen Hydrolyse (Quantifizierung nach NMR-Daten) ; Ditri = Ditrisarubicin; ß-Rho = ß- Rhodomycinon) ; γ-Rho = γ- Rhodomycinon ; RhN = Rhodosamin ; dF = 2 -Deoxyf ucose ; Rho = Rhodosamin ,- CinA = Cinerulose A ; CinB = Cinerulose B .
Figure imgf000020_0001

Claims

Ansprüche
1. Verbindung ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 2" ' ' " -C - C4-Alkoxy-2 ' ' ' ' ' ' ,3 ■ ' ' ' ' ' -dihydroditrisarubicin C, 2 " • -C1-C4- Alkoxy-2' ' ',3" '-dihydroditrisarubicin CR, 2" ' -C1-C4- Alkoxy-2 " ' ,3 " ' -dihydroditrisarubicin H, 2" " " -Cj-C,- Alkoxy-2 ' ' ' ' ' ' ,3 ' ' ' ' ' ' -dihydroditrisarubicin H, Ditrisarubicin I, Ditrisarubicin IR, Cytorhodin Y, deren Tautomere und deren physiologisch verträglichen Salze.
2. Verbindung nach Anspruch 1 wobei Alkoxy Methoxy bedeutet.
3. Arzneimittel enthaltend Verbindungen nach Anspruch 1 oder 2 neben den üblichen Träger und Hilfsstoffen.
4. Arzneimittel nach Anspruch 3, die außerdem noch weitere Wirkstoffe zur Krebsbehandlung enthalten.
5. Verwendung von Verbindungen nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung von Arzneimtteln für die Behandlung von
Krebserkrankungen.
6. Verwendung nach Anspruch 5 zu Behandlung von einer oder mehrerer der Krebserkrankungen Brustkrebs, Dickdarmkrebs, Magenkrebs, Leukämie, Melanom, Lungenkrebs, Renaler Krebs oder Gebärmutterkrebs.
7. Actinomycet GW 33/1311 (DSM-Nr.11149)
8. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen nach Anspruch 1 oder 2 unter Verwendung eines Actinomyceten.
9. Verfahren nach Anspruch 8, wobei der Actinomycet nach Anspruch 7 verwendet wird.
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0167935A2 (de) * 1984-07-03 1986-01-15 Microbial Chemistry Research Foundation Anthracyclinderivate, deren Verfahren zur Herstellung und deren pharmazeutische Zusammensetzung und deren Benützung als Arznei
US4713371A (en) * 1983-06-25 1987-12-15 Hoechst Aktiengesellschaft Anthracycline derivatives and their use as cytostatics
EP0403963A2 (de) * 1989-06-20 1990-12-27 Hoechst Aktiengesellschaft Neue Anthracyclin-Derivate, ein Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel
EP0420552A2 (de) * 1989-09-26 1991-04-03 Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai Antifungales Antibiotikum und seine Herstellung und Verwendung

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4713371A (en) * 1983-06-25 1987-12-15 Hoechst Aktiengesellschaft Anthracycline derivatives and their use as cytostatics
EP0167935A2 (de) * 1984-07-03 1986-01-15 Microbial Chemistry Research Foundation Anthracyclinderivate, deren Verfahren zur Herstellung und deren pharmazeutische Zusammensetzung und deren Benützung als Arznei
EP0403963A2 (de) * 1989-06-20 1990-12-27 Hoechst Aktiengesellschaft Neue Anthracyclin-Derivate, ein Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel
EP0420552A2 (de) * 1989-09-26 1991-04-03 Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai Antifungales Antibiotikum und seine Herstellung und Verwendung

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