JPS60248196A - Ｄ−タガト−スの製造方法 - Google Patents
Ｄ−タガト−スの製造方法Info
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- JPS60248196A JPS60248196A JP8966484A JP8966484A JPS60248196A JP S60248196 A JPS60248196 A JP S60248196A JP 8966484 A JP8966484 A JP 8966484A JP 8966484 A JP8966484 A JP 8966484A JP S60248196 A JPS60248196 A JP S60248196A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、Ｄ−タガトースの製造方法に関するものであ
シ、更に詳細には、アルスロバクタ−属に属し、グルシ
トールからＤ−タガトース産生能を有する細菌を用いて
、グルシトールからＤ−タガトースを製造する方法に関
するものである。
シ、更に詳細には、アルスロバクタ−属に属し、グルシ
トールからＤ−タガトース産生能を有する細菌を用いて
、グルシトールからＤ−タガトースを製造する方法に関
するものである。
従来の技術
り一タガトースは、ケトヘキソースに分類される単糖類
である。その製造方法としては、有機化学的手法が古く
から知られており、例えば、Ｈｅ１ｖ、 Ｃｈｉｍ、Ａ
ｃｔａ、、 Ｖｏｌ、１７ 、７５３頁（１９３４年）
では、Ｄ−ガラクトースをピリジンによって異性化させ
、Ｄ−タガトースが、収率的６５％で製造されることが
、また、Ｃａｒｂｏｈｙｄ、 Ｒｅｓ、、 Ｖｏｌ、１
６．４７４頁（１９７１年）では、Ｄ−フラクトースを
繁雑な合成法によって誘導体に変えた後、Ｄ−タガトー
スが収率的２１％で製造されることが報告されている。
である。その製造方法としては、有機化学的手法が古く
から知られており、例えば、Ｈｅ１ｖ、 Ｃｈｉｍ、Ａ
ｃｔａ、、 Ｖｏｌ、１７ 、７５３頁（１９３４年）
では、Ｄ−ガラクトースをピリジンによって異性化させ
、Ｄ−タガトースが、収率的６５％で製造されることが
、また、Ｃａｒｂｏｈｙｄ、 Ｒｅｓ、、 Ｖｏｌ、１
６．４７４頁（１９７１年）では、Ｄ−フラクトースを
繁雑な合成法によって誘導体に変えた後、Ｄ−タガトー
スが収率的２１％で製造されることが報告されている。
また、微生物によるグルシトール、ガラクトースの代謝
中間物として、Ｄ−タガトースの存在が知られている。
中間物として、Ｄ−タガトースの存在が知られている。
すなわち、Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ、、 Ｖｏｌ、６４，
３９４頁（１９５６年）では、シュードモナス属細菌に
、ダルシト−ルからのＤ−タガトース生成酵素、すなわ
ちＤ−ガラクチトール デヒドロゲナーゼ（ＥＣ１，１
，１，１６）の存在が報告され、また、ＦＥＢＳ Ｌｅ
ｔｔｅｒｓ ＶＯＩ 。
３９４頁（１９５６年）では、シュードモナス属細菌に
、ダルシト−ルからのＤ−タガトース生成酵素、すなわ
ちＤ−ガラクチトール デヒドロゲナーゼ（ＥＣ１，１
，１，１６）の存在が報告され、また、ＦＥＢＳ Ｌｅ
ｔｔｅｒｓ ＶＯＩ 。
１２４、２７０頁（１９８１年）では、マイコバクテリ
ウム・フレイ（′Ｎ１ｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｈ
ｌｅｉ ）がガラクトース２１から最高でタガトースを
約ｓｏ＋ｙ（収率で約２５％）生成することが報告され
ている。
ウム・フレイ（′Ｎ１ｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｈ
ｌｅｉ ）がガラクトース２１から最高でタガトースを
約ｓｏ＋ｙ（収率で約２５％）生成することが報告され
ている。
発明が解決しようとする問題点
近年、生化学工業が急速に発達し、糖質化学の分野にお
いても、新らたな糖質の開発が望まれている。Ｄ−タガ
トースは、試薬として少量市販されているものの、その
大量製造方法が確立されておらず、未だ、食品工業、医
薬品工業、化学工業などの工業原料として使用されるに
至っていない。
いても、新らたな糖質の開発が望まれている。Ｄ−タガ
トースは、試薬として少量市販されているものの、その
大量製造方法が確立されておらず、未だ、食品工業、医
薬品工業、化学工業などの工業原料として使用されるに
至っていない。
問題を解決するための手段
本発明者等は、Ｄ−タガトースを生化学的手段により大
量、安価に製造することを目的に鋭意研究した。
量、安価に製造することを目的に鋭意研究した。
その結果、アルスロバクタ−属に属し、グルシトールか
らＤ−タガトース産生能を有する細菌を、グルシトール
を含有する水溶液に接触させて、Ｄ−タガトースを生成
せしめ、これを採取することによシ、容易に、高収率で
Ｄ−タガトースを製造し得ることを見いだし、本発明を
完成した。
らＤ−タガトース産生能を有する細菌を、グルシトール
を含有する水溶液に接触させて、Ｄ−タガトースを生成
せしめ、これを採取することによシ、容易に、高収率で
Ｄ−タガトースを製造し得ることを見いだし、本発明を
完成した。
すなわち、本発明において、グルシトールからＤ−タガ
トースを製造するの゛に使用される細菌は、アルスロバ
クタ−属に属し、ダル７トールからＤ−タガトース産生
能を有する細菌である。その−例としては、後に説明す
るアルスロバクタ−・グロビフオルミス（Ａｒｔｈｒｏ
ｂａｃｔｅｒ ｇｌｏｂＨｏｒｍｉｓ ）ＳＴ−４８、
または、これの変異株などが有利に利用できる。
トースを製造するの゛に使用される細菌は、アルスロバ
クタ−属に属し、ダル７トールからＤ−タガトース産生
能を有する細菌である。その−例としては、後に説明す
るアルスロバクタ−・グロビフオルミス（Ａｒｔｈｒｏ
ｂａｃｔｅｒ ｇｌｏｂＨｏｒｍｉｓ ）ＳＴ−４８、
または、これの変異株などが有利に利用できる。
アルスロバクタ−・グロビフオルミス ５Ｔ−４８は、
昭和５９年５月１日付で、工業技術院微生物工業技術研
究所に、微生物受託番号 ＦＥＲＭｐ−７５９２として
寄託されている。
昭和５９年５月１日付で、工業技術院微生物工業技術研
究所に、微生物受託番号 ＦＥＲＭｐ−７５９２として
寄託されている。
コノアルスロバクタ−・グロビフオルミス５Ｔ−４８の
菌学的性質を、以下に記載する。
菌学的性質を、以下に記載する。
Ａ、採集地及び分離源
採集地 岡山県津山市
分離源 土 壌
Ｂ、細胞の形態
（１）細胞の形及び大きさ
桿菌 球形および楕円形も少し見られる。
０６〜０．８Ｘ１．０〜２０μ
（２） 細胞の多形性の有無
数は少ないがカーブした細胞が見られる。
（３）運動性の有無 無
（４）鞭毛の着生状態 無
（５）胞子の有無 無
（６） ダラム染色性 陰 性
（７） カプセル（莢膜）の有無 無
（８）抗酸性 無
Ｃ０各培地における生育状態
（１）肉汁寒天平板培養（２８℃ ５日）菌の生育はや
や遅く、５日後に２〜３覇のコロニーを形成する。
や遅く、５日後に２〜３覇のコロニーを形成する。
コロニーは、不透明な混光を滞びた黄白色の円形で、表
面は平滑であり、半レンズ状の隆起をしている。周縁は
金縁で内容は均質である。色素は生成しない。
面は平滑であり、半レンズ状の隆起をしている。周縁は
金縁で内容は均質である。色素は生成しない。
（２） 肉汁寒天斜面培養（２８℃ ５日）菌の生育は
やや遅く、中程度である。コロニーは半透明で混光を滞
びた灰白色をし、糸状で表面は平滑であり扁平外隆起を
している。
やや遅く、中程度である。コロニーは半透明で混光を滞
びた灰白色をし、糸状で表面は平滑であり扁平外隆起を
している。
粘稠であるが、色素は生成しない。
（３） 肉汁液体培養（２８℃ ３日）菌の生育はやや
遅く、全体的に薄く濁ってくる。液表面に厚膜状の生育
がみもれ、粉状の沈殿を形成する。色素、ガスは生成し
ない。
遅く、全体的に薄く濁ってくる。液表面に厚膜状の生育
がみもれ、粉状の沈殿を形成する。色素、ガスは生成し
ない。
（４）肉汁穿刺培養（２８℃ ５日）
培地表面にコロニーの形成がみもれ、穿刺線の上層部に
はとげ状の生育がみられる。ガス、色素は生成しない。
はとげ状の生育がみられる。ガス、色素は生成しない。
（５） 肉汁ゼラチン穿刺培養
（２０℃ ４０日）
培地表面に穿刺部を中心にコロニーが形成され、穿刺線
上層１部にとげ状の生育がみられるが、液化しない。
上層１部にとげ状の生育がみられるが、液化しない。
（２８℃ ４０日）
全体的に生育する。培養終了後、冷却するとゼラチンは
固化する。
固化する。
（６） リドマス・ミルり（２８℃ ４０日）リドマス
は変化せず、ブロム クレゾール・パープル（ＢＣＰ）
は青色となりアルカリ性を示すが、液化、凝固は見られ
ない。
は変化せず、ブロム クレゾール・パープル（ＢＣＰ）
は青色となりアルカリ性を示すが、液化、凝固は見られ
ない。
Ｄ、生理学的性質
（１）硝酸塩の還元 陽 性
（２） 脱窒反応 陽 性
（３） ＭＲテスト 陰 性
（４）ＶＰテスト 陰 性
（５） インドールの生成 陰 性
（６）硫化水素の生成 陽 性
（７） デンプンの加水分解 陽性（非常に弱い）（８
） クエン酸の利用 陽 性 （９）無機窒素源の利用 硝酸塩・アンモニウム塩いずれも利用 ａα 色素の生成 生成せず （ＩＩ） ウレアーゼ 陽 性 ａつ オキシダーゼ 陽 性 θ謙 カタラーゼ 陽 性 Ｏａ 生育の範囲 生育ｐｉ（５〜８ 生育温度５〜３７℃ 食塩濃度Ｏ〜３％ ０９ 酸素に対する態度 好気性 Ｑ６）Ｏ−Ｆテスト 糖（グルコース）をほとんど分解し彦い０１ 糖類から
酸及びガスの生成の有無酸 ガス Ｌ−アラビノース 十 − Ｄ−キンロース 十 − Ｄ−グルコ−ス −− Ｄ−フラクトース −− ショ糖 −− 乳 糖 −〜 マンニトール −− グリセロール − 〜 ０印 生育ｐＨｐＨ７６２ （フロテオースペフトン・グルコース培地）αｊ セル
ロースの分解 陰 性 （割 温度抵抗性 ８０℃、１０分の処理で菌生育せず
Ｃ１′Ｄ 栄養要求性 な し 本菌株は、上述の苗学的性質から、バーシーズ・マニュ
アル・オフ鎗ディタミネイティブ・バクテリオロジ−（
Ｂｅｒｇｅｙｓ ｍａｎｕａｌ ｏｆ ｄｅｔｅｒｍｉ
ｎａｔｉｖｅｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ ） 第７版（
１９５７年）、第８版（１９７４年）に準じて分類すれ
ば、グラム陰性、好気性の桿菌であり、胞子を形成せず
、運動性なく、また、カタラーゼおよびオキシダーゼが
陽性であり、多形性も一部みられ、土壌中より分離され
たことからアルスロバクタ−属に属する。更に、詳細に
見れば、本菌株は、糖類からの酸の生成が少なく、硝酸
塩を還元し、インドールの生成がなく、窒素源として硝
酸塩、アンモニウム塩を利用できる。また、クエン酸も
利用できるが色素を生成せず、更に、３７℃でも生育し
、デンプンも弱いが分解することから、アルスロバクタ
−・グロビフォルミス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｇ
ｌｏｂｉｆｏｒｍｉｓ ）と同定され、アルスロバクタ
−・グロビノオルミス ５Ｔ−４８と命名された。
） クエン酸の利用 陽 性 （９）無機窒素源の利用 硝酸塩・アンモニウム塩いずれも利用 ａα 色素の生成 生成せず （ＩＩ） ウレアーゼ 陽 性 ａつ オキシダーゼ 陽 性 θ謙 カタラーゼ 陽 性 Ｏａ 生育の範囲 生育ｐｉ（５〜８ 生育温度５〜３７℃ 食塩濃度Ｏ〜３％ ０９ 酸素に対する態度 好気性 Ｑ６）Ｏ−Ｆテスト 糖（グルコース）をほとんど分解し彦い０１ 糖類から
酸及びガスの生成の有無酸 ガス Ｌ−アラビノース 十 − Ｄ−キンロース 十 − Ｄ−グルコ−ス −− Ｄ−フラクトース −− ショ糖 −− 乳 糖 −〜 マンニトール −− グリセロール − 〜 ０印 生育ｐＨｐＨ７６２ （フロテオースペフトン・グルコース培地）αｊ セル
ロースの分解 陰 性 （割 温度抵抗性 ８０℃、１０分の処理で菌生育せず
Ｃ１′Ｄ 栄養要求性 な し 本菌株は、上述の苗学的性質から、バーシーズ・マニュ
アル・オフ鎗ディタミネイティブ・バクテリオロジ−（
Ｂｅｒｇｅｙｓ ｍａｎｕａｌ ｏｆ ｄｅｔｅｒｍｉ
ｎａｔｉｖｅｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ ） 第７版（
１９５７年）、第８版（１９７４年）に準じて分類すれ
ば、グラム陰性、好気性の桿菌であり、胞子を形成せず
、運動性なく、また、カタラーゼおよびオキシダーゼが
陽性であり、多形性も一部みられ、土壌中より分離され
たことからアルスロバクタ−属に属する。更に、詳細に
見れば、本菌株は、糖類からの酸の生成が少なく、硝酸
塩を還元し、インドールの生成がなく、窒素源として硝
酸塩、アンモニウム塩を利用できる。また、クエン酸も
利用できるが色素を生成せず、更に、３７℃でも生育し
、デンプンも弱いが分解することから、アルスロバクタ
−・グロビフォルミス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｇ
ｌｏｂｉｆｏｒｍｉｓ ）と同定され、アルスロバクタ
−・グロビノオルミス ５Ｔ−４８と命名された。
本発明でいう、アルスロバクタ−属に属し、グルシトー
ルからＤ−タガトース産生能を有する細菌を、グルシト
ールを含有する水溶液に接触させてＤ−タガ）・−スを
生成せしめ、これを採取するとは、ダルシト−ルからＤ
−タガトース産生能を有する、例えば、アルスロバクタ
−・グロビフオルミス ５Ｔ−４８、−ｉたけ、この変
異株などの細菌をグルシトールを含有する栄養培地で培
養する。望ましくは、振とう、通気攪拌などの好気的条
件下で培養し、培養液中にＤ−タガトースを生成せしめ
、これを採取するか、または、このようにして培養した
後、得られる細菌を用いて水溶液中のグルシトールをＤ
−タガトースに変換する。望ましくは、振とう、通気攪
拌、酸素の圧入なとの好気的条件下で変換させ、生成す
るＤ−タガトースを採取すればよい。
ルからＤ−タガトース産生能を有する細菌を、グルシト
ールを含有する水溶液に接触させてＤ−タガ）・−スを
生成せしめ、これを採取するとは、ダルシト−ルからＤ
−タガトース産生能を有する、例えば、アルスロバクタ
−・グロビフオルミス ５Ｔ−４８、−ｉたけ、この変
異株などの細菌をグルシトールを含有する栄養培地で培
養する。望ましくは、振とう、通気攪拌などの好気的条
件下で培養し、培養液中にＤ−タガトースを生成せしめ
、これを採取するか、または、このようにして培養した
後、得られる細菌を用いて水溶液中のグルシトールをＤ
−タガトースに変換する。望ましくは、振とう、通気攪
拌、酸素の圧入なとの好気的条件下で変換させ、生成す
るＤ−タガトースを採取すればよい。
培養方法としては、グルシトール、ソルピトールなどの
糖アルコールとともにアルスロバクタ−属の属する細菌
が必要とする栄養源、例えば、炭素源、窒素源、無機塩
などを含有する培地、望ましくは、微酸性ないし微アル
カリ性の液体培地に、ダル／トールからＤ−タガトース
産生能を有する細菌を植菌し、約２０〜３５℃で、１〜
１５日間好気的条件下で培養すればよい。
糖アルコールとともにアルスロバクタ−属の属する細菌
が必要とする栄養源、例えば、炭素源、窒素源、無機塩
などを含有する培地、望ましくは、微酸性ないし微アル
カリ性の液体培地に、ダル／トールからＤ−タガトース
産生能を有する細菌を植菌し、約２０〜３５℃で、１〜
１５日間好気的条件下で培養すればよい。
培養中に、ダル／トールからＤ−タガトースに変換させ
、培養液中にＤ−タガトースを生成蓄積せしめる場合に
は、ダル／トールを約１０〜１ｏｏｗ／／ｖチ含有する
液体培地を用いるのが望ましい。
、培養液中にＤ−タガトースを生成蓄積せしめる場合に
は、ダル／トールを約１０〜１ｏｏｗ／／ｖチ含有する
液体培地を用いるのが望ましい。
また、培養が、細菌の増殖と、細菌のダル／トールから
Ｄ−タガトースへの変換能を高めることとを目的とする
のであれば、ダル／トール、ソルビトールなどの糖アル
コールが適宜選択できるが、細菌の増殖が速く、細菌の
ダル／トールがらＤ−タガトースへの変換能が高く、シ
かも安価であるなどの点から、ソルビトールを含有する
培地を用いるのが望ましい。
Ｄ−タガトースへの変換能を高めることとを目的とする
のであれば、ダル／トール、ソルビトールなどの糖アル
コールが適宜選択できるが、細菌の増殖が速く、細菌の
ダル／トールがらＤ−タガトースへの変換能が高く、シ
かも安価であるなどの点から、ソルビトールを含有する
培地を用いるのが望ましい。
また、例えば、ラクトースを加水分解するなどして得ら
れるＤ−ガラクトースとＤ−グルコースとの混合物をラ
ネーニッケル触媒などで水素添加し、ダル／トールとソ
ルビトールとの混合物とし、この混合物を含有する栄養
培地にダル／トールからＤ−タガトース産生能を有する
細菌を植菌して培養し、細菌のダル／トールからＤ−タ
ガトース産生能を高めるとともに培養液中にＤ−タガ）
−スを生成蓄積せしめることも有利に採用できる。
れるＤ−ガラクトースとＤ−グルコースとの混合物をラ
ネーニッケル触媒などで水素添加し、ダル／トールとソ
ルビトールとの混合物とし、この混合物を含有する栄養
培地にダル／トールからＤ−タガトース産生能を有する
細菌を植菌して培養し、細菌のダル／トールからＤ−タ
ガトース産生能を高めるとともに培養液中にＤ−タガ）
−スを生成蓄積せしめることも有利に採用できる。
また、前述のような培養方法によって得られた細菌を、
ダル／トールを含有する水溶液と接触、望ましくは好気
的条件下で接触させ、Ｄ−タガトースに変換させること
も有利に採用できる。この変換に用いられる細菌は、培
養液から分離された生の細菌に限る必要はなく、例えば
、生の細菌を中性ないし微酸性下でトルエン２，４−シ
イ：・ツクアネートなどのジイソシアネート化合物や、
ゲルタールアルデヒドなどのジアルデヒド化合物で処理
した細菌、半透膜製のホローファイバーに封入した細菌
、寒天、ゼラチン、アルギン酸塩などを包括し、ビーズ
状、シート状などの各種形状に固定化した細菌などとし
て、ダル／トールからＤ−タガトースへの変換に、繰り
返し利用すれば、好都合である。
ダル／トールを含有する水溶液と接触、望ましくは好気
的条件下で接触させ、Ｄ−タガトースに変換させること
も有利に採用できる。この変換に用いられる細菌は、培
養液から分離された生の細菌に限る必要はなく、例えば
、生の細菌を中性ないし微酸性下でトルエン２，４−シ
イ：・ツクアネートなどのジイソシアネート化合物や、
ゲルタールアルデヒドなどのジアルデヒド化合物で処理
した細菌、半透膜製のホローファイバーに封入した細菌
、寒天、ゼラチン、アルギン酸塩などを包括し、ビーズ
状、シート状などの各種形状に固定化した細菌などとし
て、ダル／トールからＤ−タガトースへの変換に、繰り
返し利用すれば、好都合である。
以上述べた各種の方法によシ生成、蓄積したＤ−タガト
ースを含有する水溶液は、適当な分離方法、例えば、遠
心分離、ｆ過などの方法によって細菌と分離され、採取
される。
ースを含有する水溶液は、適当な分離方法、例えば、遠
心分離、ｆ過などの方法によって細菌と分離され、採取
される。
得られたＤ−タガトース液は、必要により、例えば、硫
安塩析、水酸化亜鉛吸着などによる除蛋白、活性炭吸着
による脱色、Ｈ型、ＯＨ型イオン交換樹脂による脱塩な
どの方法で精製し、濃縮してシラツブ状の高純度り一タ
ガトースを採取することも、また、このシラツブを更に
濃縮し、乾燥粉末化して非晶質粉末状のＤ−タガトース
とするか、更に、このシラツブに、例えば、アルコール
、アセトンなどの親水性有機溶媒を加え、必要によシＤ
−タガトースの種晶を加え、Ｄ−タガトースの結晶を晶
出させ、これをｒ別するか、遠心分離するかなどの方法
によシ最高純度のＤ−タガ）−ス結晶を採取することも
自由にできる このようにして製造されるＤ−タガトースは、ダル／ト
ールに対して５０Ｗ／／ｗ以上の高収率で得られ、大量
、安価に供給できる工業的製造方法として好適である。
安塩析、水酸化亜鉛吸着などによる除蛋白、活性炭吸着
による脱色、Ｈ型、ＯＨ型イオン交換樹脂による脱塩な
どの方法で精製し、濃縮してシラツブ状の高純度り一タ
ガトースを採取することも、また、このシラツブを更に
濃縮し、乾燥粉末化して非晶質粉末状のＤ−タガトース
とするか、更に、このシラツブに、例えば、アルコール
、アセトンなどの親水性有機溶媒を加え、必要によシＤ
−タガトースの種晶を加え、Ｄ−タガトースの結晶を晶
出させ、これをｒ別するか、遠心分離するかなどの方法
によシ最高純度のＤ−タガ）−ス結晶を採取することも
自由にできる このようにして製造されるＤ−タガトースは、ダル／ト
ールに対して５０Ｗ／／ｗ以上の高収率で得られ、大量
、安価に供給できる工業的製造方法として好適である。
従って、Ｄ−タガトースの用途も、従来のように試薬に
限定されることなく、食品工業、医薬品工業、化学工業
などの原料、中間体などとして自由に利用できる。
限定されることなく、食品工業、医薬品工業、化学工業
などの原料、中間体などとして自由に利用できる。
以下、実施例について述べる。
実施例 １
硫酸アンモニウム ０２′Ｎ／／ｖ％、リンば−カリウ
ム ０．２４ ′Ｎ／／Ｖ％、リン酸二カリウム ０５
６Ｗ／／ｖチ、硫酸マグネシウム・７水塩００１Ｗ／／
ｖ私酵母エキス ０５Ｗ／／ｖ％、グルシトール ２ｗ
／／ｖ％および脱イオン水からなる培養液１０Ｏｒｎｌ
ずつを５００−容振とうフラスコ２０本にと’）％ １
２０℃で２０分間オートクレーブした後、アルスロバク
タ−・グロピフォルミス ５Ｔ−４８ＦＥＲＭ Ｐ−７
５９２を１白金耳ずつ植菌し、３０℃で７日間振とり培
養した。
ム ０．２４ ′Ｎ／／Ｖ％、リン酸二カリウム ０５
６Ｗ／／ｖチ、硫酸マグネシウム・７水塩００１Ｗ／／
ｖ私酵母エキス ０５Ｗ／／ｖ％、グルシトール ２ｗ
／／ｖ％および脱イオン水からなる培養液１０Ｏｒｎｌ
ずつを５００−容振とうフラスコ２０本にと’）％ １
２０℃で２０分間オートクレーブした後、アルスロバク
タ−・グロピフォルミス ５Ｔ−４８ＦＥＲＭ Ｐ−７
５９２を１白金耳ずつ植菌し、３０℃で７日間振とり培
養した。
培養終了液をガスクロマトグラフィーで分析したところ
、グルシトールは検出されず、Ｄ−タガトースは原料グ
ルシトールの約８５％の収率であった。培養終了後、培
養液を遠心分離して細菌と上清とを別々に採取した。
、グルシトールは検出されず、Ｄ−タガトースは原料グ
ルシトールの約８５％の収率であった。培養終了後、培
養液を遠心分離して細菌と上清とを別々に採取した。
得られた上清に２５Ｗ／ｖ％硫酸亜鉛を１／１ｏ容加え
ｐＨ７６に調整し、遠心分離して上清を採取した。
ｐＨ７６に調整し、遠心分離して上清を採取した。
この上清を、常法に従って、活性炭を用いて脱色し、次
いで、ダイヤイオン５ＫＩＢ（Ｈ型、三菱化成工業■製
造の商品名）誉よびダイヤイオンＷＡ３０（ＯＲ型、三
菱化成工業■製造の商品名）を用いて脱塩し、減圧濃縮
して濃度約９５チの透明なシラツブを得た。これに約３
倍容の無水エタノールを加えて混合し、室温に放置して
Ｄ−タガトースの結晶を晶出させた。本結晶をｒ別し、
無水エタノールで洗浄した。得られた結晶をできるだけ
少量の水に溶解し、これに３倍容の無水エタノールを加
えてＤ−タガトースを再結し、同様にｐ別、洗浄し、Ｄ
−タガトースの結晶を採取した。
いで、ダイヤイオン５ＫＩＢ（Ｈ型、三菱化成工業■製
造の商品名）誉よびダイヤイオンＷＡ３０（ＯＲ型、三
菱化成工業■製造の商品名）を用いて脱塩し、減圧濃縮
して濃度約９５チの透明なシラツブを得た。これに約３
倍容の無水エタノールを加えて混合し、室温に放置して
Ｄ−タガトースの結晶を晶出させた。本結晶をｒ別し、
無水エタノールで洗浄した。得られた結晶をできるだけ
少量の水に溶解し、これに３倍容の無水エタノールを加
えてＤ−タガトースを再結し、同様にｐ別、洗浄し、Ｄ
−タガトースの結晶を採取した。
Ｄ−タガトースのグルシトールに対する収率け、約７０
％であった。
％であった。
このようにして得られた結晶を同定するため、Ｓｉｇｍ
ａ社が市販している試薬り一タガトース結晶と、その理
化学的性質を比較実験した。この実験においては、Ｓｉ
ｇｍａ社の試薬り一タガトース結晶を標準り一タガトー
スと呼び、本発明の方法で得られたＤ−タガトース結晶
を本発明調製品と呼ぶ。
ａ社が市販している試薬り一タガトース結晶と、その理
化学的性質を比較実験した。この実験においては、Ｓｉ
ｇｍａ社の試薬り一タガトース結晶を標準り一タガトー
スと呼び、本発明の方法で得られたＤ−タガトース結晶
を本発明調製品と呼ぶ。
（１） ペーパークロマトグラフィーでの比較東洋沢紙
Ａ５０にスポットし、展開溶媒■（ｎ−ブタノール：酢
酸：水＝ １２ ： ａ ： ５）、または、展開溶媒
ｍｌ（酢酸エチル：ピリジン：水＝ １２ ： ５ ：
４ ）を用いて上昇法で展開し、アルカリ性硝酸銀で
発色し、Ｒｆ値を比較した。
Ａ５０にスポットし、展開溶媒■（ｎ−ブタノール：酢
酸：水＝ １２ ： ａ ： ５）、または、展開溶媒
ｍｌ（酢酸エチル：ピリジン：水＝ １２ ： ５ ：
４ ）を用いて上昇法で展開し、アルカリ性硝酸銀で
発色し、Ｒｆ値を比較した。
（２）融点の比較
（３）比旋光度の比較
（４）赤外線吸収スペクトルの比較
ＫＢｒ錠剤法による赤外線吸収スペクトルの結果を図面
に示す。
に示す。
図面から明らかなように、標準り一タガトースの吸収ス
ペクトルと本発明調製品のそれはよく一致している。
ペクトルと本発明調製品のそれはよく一致している。
以上の結果から明らかなように、本発明の方法で得られ
た結晶は、Ｄ−タガトースであると判断される。
た結晶は、Ｄ−タガトースであると判断される。
実施例 ２
グルシトール ４ｗ／ｖ％を含有する０、０５Ｍリン酸
塩緩衝液（ｐ）（，７０） １ ｔに、実施例１の方法
により培養液２ｔから得た細菌を加えて混合し、この混
合液約１００コずつを５００ ｒｎｌ容振とうフラスコ
に分注し、３２℃で５日間振とうし、グルシトールをＤ
−タガトースに変換させ、次いで遠心分離して細菌を除
去し、得られた上清を実施例１の方法に準じて、活性炭
で脱色し、Ｈ型、ＯＨ型イオン交換樹脂にて脱塩、精製
し、更に濃縮して、濃度約９０チのシラツブを原料のグ
ルシトールに対して固形物当り９３％の収率で採取した
。
塩緩衝液（ｐ）（，７０） １ ｔに、実施例１の方法
により培養液２ｔから得た細菌を加えて混合し、この混
合液約１００コずつを５００ ｒｎｌ容振とうフラスコ
に分注し、３２℃で５日間振とうし、グルシトールをＤ
−タガトースに変換させ、次いで遠心分離して細菌を除
去し、得られた上清を実施例１の方法に準じて、活性炭
で脱色し、Ｈ型、ＯＨ型イオン交換樹脂にて脱塩、精製
し、更に濃縮して、濃度約９０チのシラツブを原料のグ
ルシトールに対して固形物当り９３％の収率で採取した
。
本市のＤ−タガトース純度は、固形物当シ約９７チであ
った。
った。
実施例 ３
実施例１の培養液のうち、グルシトールをンルビトール
に代えた以外は同じ組成とした培養液１５ｔを３０１容
ジャーファーメンタ−２基にとす、１２０℃で２０分間
滅菌した後、３０℃に冷却し、これに、同組成の培養液
に３０℃で１日間振とり培養したアルスロバクターーグ
ロビフオルミス ＳＴ−４−８ＦＥＲＭ Ｐ ７５９２
の種培養液を１ｖ／ｖ％植菌し、３０℃で２日間通気攪
拌培養し、次いで遠心分離して菌体を採取ｔ−’ 、こ
れを０．０２Ｍ’Ｊン酸塩緩衝液（ｐＨ６，８）にて懸
濁し、再び遠心分離して集菌した。
に代えた以外は同じ組成とした培養液１５ｔを３０１容
ジャーファーメンタ−２基にとす、１２０℃で２０分間
滅菌した後、３０℃に冷却し、これに、同組成の培養液
に３０℃で１日間振とり培養したアルスロバクターーグ
ロビフオルミス ＳＴ−４−８ＦＥＲＭ Ｐ ７５９２
の種培養液を１ｖ／ｖ％植菌し、３０℃で２日間通気攪
拌培養し、次いで遠心分離して菌体を採取ｔ−’ 、こ
れを０．０２Ｍ’Ｊン酸塩緩衝液（ｐＨ６，８）にて懸
濁し、再び遠心分離して集菌した。
このようにして得られた細菌を、グルシトール５ｗ／ｖ
％を含有する００２Ｍリン酸塩緩衝液（ＩｌｌＨ６８）
１０Ｌとともに２０１容ジャーファーメンタ−にとり、
通気攪拌しつつ３５℃で３日間保って、ダルシト−ルを
Ｄ−タガトースに変換させ、次いで、遠心分離して細菌
を除去し、得られた上清を実施例１の方法に準じて、活
性炭、イオン交換樹脂を用いて精製し、濃縮した後、無
水エタノールを加えてＤ−タガトースの結晶を晶出させ
、更に、再結してＤ−タガトースの結晶を採取した。
％を含有する００２Ｍリン酸塩緩衝液（ＩｌｌＨ６８）
１０Ｌとともに２０１容ジャーファーメンタ−にとり、
通気攪拌しつつ３５℃で３日間保って、ダルシト−ルを
Ｄ−タガトースに変換させ、次いで、遠心分離して細菌
を除去し、得られた上清を実施例１の方法に準じて、活
性炭、イオン交換樹脂を用いて精製し、濃縮した後、無
水エタノールを加えてＤ−タガトースの結晶を晶出させ
、更に、再結してＤ−タガトースの結晶を採取した。
Ｄ−タガト−ス結晶のグルシトールに対する収率は、約
８６％であった。
８６％であった。
本結晶の理化学的性質も、実施例】の場合と同様に、Ｓ
ｉｇｍａ社の試薬り一タガトース結晶とよく一致した。
ｉｇｍａ社の試薬り一タガトース結晶とよく一致した。
発明の効果
上記したことから明らかなように、本発明によれば、従
来きわめて収率が低く、その製造が繁雑であったＤ−タ
ガトースの製造を容易にし、その収率を大幅に向上する
ことができる。
来きわめて収率が低く、その製造が繁雑であったＤ−タ
ガトースの製造を容易にし、その収率を大幅に向上する
ことができる。
従って、本発明の方法は、Ｄ−タガトースの工業的製造
方法として好適であり、大量、安価な供給を可能にし、
従来予想すらできなかった食品工業、医薬品工業、化学
工業などの原料、中間体などへの用途を可能にするもの
である。
方法として好適であり、大量、安価な供給を可能にし、
従来予想すらできなかった食品工業、医薬品工業、化学
工業などの原料、中間体などへの用途を可能にするもの
である。
図面は、標準り一タガトースと本発明調製品との赤外線
吸収スペクトルを示す図である。 特許出願人 株式会社林原生物化学研究所 手続補正書 昭和６０年６月２８日 特許庁長官 志 賀 学 殿 １、事件の表示 昭和５９年特許願第８９６６４号 ２ 発明の名称 り一タガトースの製造方法 ３、 補正をする者 事件との関係 特許出願人 ５ 補正の対象 ６、補正の内容 （１）「特許請求の範囲」の項を、別紙の通り補正しま
す。 （２）明細書第２頁第３行記載の１Ｄ−タガト−スの製
造方法」を［Ｄ−タガトースの生成方法および製造方法
Ｊに補正します。 （３）同頁第５行記載の「グルシトール」を「グルシト
ール（別名、Ｄ−ガラクチトール）」に補正します。 法および製造する方法」に補正し捷す。 （５）明細書第１２頁第１９行記載の「アルギン酸塩な
どを」を［に−カラギーナン、アルギン酸塩などで」に
補正します。 ２、特許請求の範囲 （２） アルスロバクタ−属に属し、グルシトールから
Ｄ−タガトース産生能を有する細菌を、グルシトールを
含有する水溶液に接触させてＤ−タガトースを生成せし
め、これを採取することを特徴とするＤ−タガトースの
製造方法。 エ アルスロバクタ−属に属し、グルシトールからＤ−
タガトース産生能を有する細菌を、グルシトールを含有
する水溶液に好気的条件下で接触させることを特徴とす
る特許請求の範囲り逼記載のＤ−タガトースの製造方法
。 臣 アルスロバクタ−属に属する細菌が、アルスロバク
タ−・グロピフオルミネ ５Ｔ−４８ＦＥＢＭＰ−７５
９２であることを特徴とする特許請求の範囲 ２ ３
記載のＤ−タガトースの 製造方法。
吸収スペクトルを示す図である。 特許出願人 株式会社林原生物化学研究所 手続補正書 昭和６０年６月２８日 特許庁長官 志 賀 学 殿 １、事件の表示 昭和５９年特許願第８９６６４号 ２ 発明の名称 り一タガトースの製造方法 ３、 補正をする者 事件との関係 特許出願人 ５ 補正の対象 ６、補正の内容 （１）「特許請求の範囲」の項を、別紙の通り補正しま
す。 （２）明細書第２頁第３行記載の１Ｄ−タガト−スの製
造方法」を［Ｄ−タガトースの生成方法および製造方法
Ｊに補正します。 （３）同頁第５行記載の「グルシトール」を「グルシト
ール（別名、Ｄ−ガラクチトール）」に補正します。 法および製造する方法」に補正し捷す。 （５）明細書第１２頁第１９行記載の「アルギン酸塩な
どを」を［に−カラギーナン、アルギン酸塩などで」に
補正します。 ２、特許請求の範囲 （２） アルスロバクタ−属に属し、グルシトールから
Ｄ−タガトース産生能を有する細菌を、グルシトールを
含有する水溶液に接触させてＤ−タガトースを生成せし
め、これを採取することを特徴とするＤ−タガトースの
製造方法。 エ アルスロバクタ−属に属し、グルシトールからＤ−
タガトース産生能を有する細菌を、グルシトールを含有
する水溶液に好気的条件下で接触させることを特徴とす
る特許請求の範囲り逼記載のＤ−タガトースの製造方法
。 臣 アルスロバクタ−属に属する細菌が、アルスロバク
タ−・グロピフオルミネ ５Ｔ−４８ＦＥＢＭＰ−７５
９２であることを特徴とする特許請求の範囲 ２ ３
記載のＤ−タガトースの 製造方法。
Claims (3)
- （１） アルスロバクタ−属に属し、グルシトールから
Ｄ−タガトース産生能を有する細菌を、グルシトールを
含有する水溶液に接触させてＤ−タガトースを生成せし
め、これを採取することを特徴とするＤ−タガトースの
製造方法。 - （２） アルスロバクタ−属に属し、グルシトールから
Ｄ−タガトース産生能を有する細菌を、グルシトールを
含有する水溶液に好気的条件下で接触させることを特徴
とする特許請求の範囲第１項記載のＤ−タガトースの製
造方法。 - （３） アルスロバクタ−属に属する細菌が、アルスロ
バクタ−奉グロビフオルミス ＳＴ−４８ＦＥＲＭ Ｐ
−７５９２であることを特徴とする特許請求の範囲第１
項または第２項記載のＤ−タガトースの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8966484A JPS60248196A (ja) | 1984-05-05 | 1984-05-05 | Ｄ−タガト−スの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8966484A JPS60248196A (ja) | 1984-05-05 | 1984-05-05 | Ｄ−タガト−スの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60248196A true JPS60248196A (ja) | 1985-12-07 |
| JPH0419835B2 JPH0419835B2 (ja) | 1992-03-31 |
Family
ID=13977013
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8966484A Granted JPS60248196A (ja) | 1984-05-05 | 1984-05-05 | Ｄ−タガト−スの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60248196A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63126469A (ja) * | 1986-08-29 | 1988-05-30 | バイオスフエリツクス インコ−ポレ−テツド | 低カロリ−炭水化物甘味料及び増量剤としてのｄ−タガト−ス |
| US6057135A (en) * | 1992-01-16 | 2000-05-02 | Kraft Foods, Inc. | Process for manufacturing D-tagatose |
| WO2002006506A1 (de) * | 2000-07-17 | 2002-01-24 | Novabiotec Dr. Fechter Gmbh | Verfahren zur enzymatischen herstellung von seltenen monosacchariden, insbesondere von tagatose |
-
1984
- 1984-05-05 JP JP8966484A patent/JPS60248196A/ja active Granted
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63126469A (ja) * | 1986-08-29 | 1988-05-30 | バイオスフエリツクス インコ−ポレ−テツド | 低カロリ−炭水化物甘味料及び増量剤としてのｄ−タガト−ス |
| US6057135A (en) * | 1992-01-16 | 2000-05-02 | Kraft Foods, Inc. | Process for manufacturing D-tagatose |
| WO2002006506A1 (de) * | 2000-07-17 | 2002-01-24 | Novabiotec Dr. Fechter Gmbh | Verfahren zur enzymatischen herstellung von seltenen monosacchariden, insbesondere von tagatose |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0419835B2 (ja) | 1992-03-31 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |