JPH01148192A - カルニチンの製造法 - Google Patents
カルニチンの製造法Info
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- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
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-
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明はカルニチンニトリルを加水分解してカルニチン
を製造する方法に関するものである。
を製造する方法に関するものである。
本発明により製造されるカルニチンは脂肪酸代謝に関連
する物質としてビタミンBT と呼ばれたことがあり
、従来DL体が健胃剤などに使用されてきたが、最近で
は特に5体が注目され、心臓疾患や脂肪血症の治療剤と
して有用でありまた高カロリー輸液としても用いること
ができることが知られている。
する物質としてビタミンBT と呼ばれたことがあり
、従来DL体が健胃剤などに使用されてきたが、最近で
は特に5体が注目され、心臓疾患や脂肪血症の治療剤と
して有用でありまた高カロリー輸液としても用いること
ができることが知られている。
従来の技術
従来DL−カルニチンの製法としては・古くから合成法
が知られているが、合成法は、加熱、鉱酸、アルカリや
有害物質の使用などエネルギー的、公害的に不利であり
、まな生成するカルニチンがD′L体である欠点がある
。最近生化学的方法として4N−トリメチルアミノ酪酸
の水酸化反応(J、Biol、Chem、、 256巻
、1247Ii、1981fl、3−デヒドロカルニチ
ンの還元反応(App’1.Bnvironm、MiO
rObiOl、139巻、329貞、1980年)、4
−クロロ−3−ヒドロキシ酪酸エステルを経由する方法
(公開特公昭59−118093号)、クロトンベタイ
ンを基質とする方法(公開特公昭59−185694号
、同59−11809!1号)、DL−〇−アシルカル
ニチンのエステラーゼによる加水分解法(Eiotec
hnol、Bioeng、、 26巻、911頁、19
84年)が研究された。しかし、これらの方法は、原料
が高価であった〕、酵素が不安定であったシ、高価な補
酵素の補給を必要とするなど工業的に不満足なものとい
わざるをえない。カルニチンニトリルを鉱酸などの使用
により化学的に加水分解することに従来知られていたが
、生化学的加水分解については全く知られていなかった
。
が知られているが、合成法は、加熱、鉱酸、アルカリや
有害物質の使用などエネルギー的、公害的に不利であり
、まな生成するカルニチンがD′L体である欠点がある
。最近生化学的方法として4N−トリメチルアミノ酪酸
の水酸化反応(J、Biol、Chem、、 256巻
、1247Ii、1981fl、3−デヒドロカルニチ
ンの還元反応(App’1.Bnvironm、MiO
rObiOl、139巻、329貞、1980年)、4
−クロロ−3−ヒドロキシ酪酸エステルを経由する方法
(公開特公昭59−118093号)、クロトンベタイ
ンを基質とする方法(公開特公昭59−185694号
、同59−11809!1号)、DL−〇−アシルカル
ニチンのエステラーゼによる加水分解法(Eiotec
hnol、Bioeng、、 26巻、911頁、19
84年)が研究された。しかし、これらの方法は、原料
が高価であった〕、酵素が不安定であったシ、高価な補
酵素の補給を必要とするなど工業的に不満足なものとい
わざるをえない。カルニチンニトリルを鉱酸などの使用
により化学的に加水分解することに従来知られていたが
、生化学的加水分解については全く知られていなかった
。
発明が解決しようとする問題点と問題点を解決するため
の手段 本発明者らに、カル−チンの有用性、特にその光学活性
体の有用性に着目し、エネルギー的、及び公害的に有利
な生化学的加水分解法が、力、ルニチン合成の中間体で
あるカル−チンニトリルに対して適用できれば、工業的
に有利なカルニチンの製法となりうると考え、七のり能
性を、保存微生物、広く自然界から分離した微生物の検
討によって追求した結果、本発明を完成するに至った。
の手段 本発明者らに、カル−チンの有用性、特にその光学活性
体の有用性に着目し、エネルギー的、及び公害的に有利
な生化学的加水分解法が、力、ルニチン合成の中間体で
あるカル−チンニトリルに対して適用できれば、工業的
に有利なカルニチンの製法となりうると考え、七のり能
性を、保存微生物、広く自然界から分離した微生物の検
討によって追求した結果、本発明を完成するに至った。
作用
本発明は、安価に簡単に合成しうるカルニチンニトリル
に、これを加水分解してカルニチンを生成せしめる酵素
(ニトリラーゼの1種)もしくは該酵素を含有する製剤
、生体標品(微生物、細胞)、固定化酵素、固定化菌体
を作用せしめてカルニチンニトリルする方法である。勿
論、生化学的方法の常としてカルニチンニトリルにその
非毒性の塩、例えばクロライドの形でも使用でき、カル
ニチンも塩の形でも製造しうる。
に、これを加水分解してカルニチンを生成せしめる酵素
(ニトリラーゼの1種)もしくは該酵素を含有する製剤
、生体標品(微生物、細胞)、固定化酵素、固定化菌体
を作用せしめてカルニチンニトリルする方法である。勿
論、生化学的方法の常としてカルニチンニトリルにその
非毒性の塩、例えばクロライドの形でも使用でき、カル
ニチンも塩の形でも製造しうる。
本発明方法によれば、常温かつ中性附近という温和な条
件で反応を行なうことができるので、エネルギー的、公
害抑制の面からも従来法に比して有利であり、従来の生
化学的方法のようなカル−チンから誘導した化合物を@
料とするので框なく、カルニチン甘酸の中間体でsb光
学不活性(DL体)のカルニチンニトリルかう光学活性
のカルニチンをえることに本発明の方法によって始めて
可能となった。
件で反応を行なうことができるので、エネルギー的、公
害抑制の面からも従来法に比して有利であり、従来の生
化学的方法のようなカル−チンから誘導した化合物を@
料とするので框なく、カルニチン甘酸の中間体でsb光
学不活性(DL体)のカルニチンニトリルかう光学活性
のカルニチンをえることに本発明の方法によって始めて
可能となった。
本発明に使用する酵素に、一般名でニトリラーゼと呼ば
れ、国際的な酵素分類の命名記号によると、加水分解酵
素の中で鎖状アミド結合に作用するもの(分類&5.5
)に属するものである。トリメチルアミ基を構造に有す
るカルニチンニトリルのような化合物に作用するニトリ
ラーゼの存在については従来全く知見がなく、本発明の
研究で始めて見出されたものでおる。
れ、国際的な酵素分類の命名記号によると、加水分解酵
素の中で鎖状アミド結合に作用するもの(分類&5.5
)に属するものである。トリメチルアミ基を構造に有す
るカルニチンニトリルのような化合物に作用するニトリ
ラーゼの存在については従来全く知見がなく、本発明の
研究で始めて見出されたものでおる。
カルニチンニトリルをカルニチンに変換する酵素を生産
する微生物框、自然界より、カルニチンニトリルからカ
ルニチンを生成する能力に基いて選択分離することがで
きる。具体的には本発明者らが分離した菌株であるla
菌1株6N−23,11N−26,6N−29,6N−
49’i9けることができる。これらの菌株に本発明者
らが分離し、本発明に使用しうるものの代表株として微
生物工業技術研究所に寄託したものであり、その分類学
的性質は次のとおりでらる。
する微生物框、自然界より、カルニチンニトリルからカ
ルニチンを生成する能力に基いて選択分離することがで
きる。具体的には本発明者らが分離した菌株であるla
菌1株6N−23,11N−26,6N−29,6N−
49’i9けることができる。これらの菌株に本発明者
らが分離し、本発明に使用しうるものの代表株として微
生物工業技術研究所に寄託したものであり、その分類学
的性質は次のとおりでらる。
これらの分離菌は、何れも好気性で、ダラム陽性であり
、胞子をつくらぬコリネ形の細菌でアリ、パーゼーズ・
マニュアル・オブ・システマチック・バクテリオロジー
(Bergey’ sManual Of 8yate
matia Bacteriolog7 )第2巻(1
98,6年)に従うと、分類セクション15の、異常、
非胞子形成、グラム陽性桿菌に属する。さらに何れの菌
も細胞壁中にメソ−ジアミノピメリン酸を有し、またマ
イコール酸をふくむのでコリネパクテリウA ((!o
rynebacterium )属に属するものと考え
られる。
、胞子をつくらぬコリネ形の細菌でアリ、パーゼーズ・
マニュアル・オブ・システマチック・バクテリオロジー
(Bergey’ sManual Of 8yate
matia Bacteriolog7 )第2巻(1
98,6年)に従うと、分類セクション15の、異常、
非胞子形成、グラム陽性桿菌に属する。さらに何れの菌
も細胞壁中にメソ−ジアミノピメリン酸を有し、またマ
イコール酸をふくむのでコリネパクテリウA ((!o
rynebacterium )属に属するものと考え
られる。
従来コリネ形細菌の分類の困難性が指摘されてきたが上
記した新しい分類書では化学的分類をとシ入れた結果、
比較的明確な区別が属の間でにできるようになっている
。しかしなお困難な点があることを述べておきたい。化
学的分類に従うと、上の分離菌に、メノージアミノピメ
リン酸を細胞壁に有することと、マイコール酸の比較的
短鎖のもの(クロマトグラフィーから判断)t−含むこ
とからコリネバクテリウム属、カゼトパクタ−(0aa
eobacter )属およびロドコッカス(Rhod
ococcua )属が分類の候補となる。事実、上記
分類書にもこれら3属の間の区別の困難なことが述べら
れている。本発明者らに、ロドコッカス属は、ノカルジ
ア形を示すと記載されているが、上の分離菌ではコリネ
形は通常みられるがノカルジア形はみられないので区別
されると判定した。また、カセオパクター属は1菌種の
み記載されており、絶対好気性とされ、分離源がチーズ
であることが記載されている。一方コリネパクテリウム
属菌に通性嫌気性のものが大部分であるが絶対好気性の
菌もふくみ、また士から分離され九菌が含まれている。
記した新しい分類書では化学的分類をとシ入れた結果、
比較的明確な区別が属の間でにできるようになっている
。しかしなお困難な点があることを述べておきたい。化
学的分類に従うと、上の分離菌に、メノージアミノピメ
リン酸を細胞壁に有することと、マイコール酸の比較的
短鎖のもの(クロマトグラフィーから判断)t−含むこ
とからコリネバクテリウム属、カゼトパクタ−(0aa
eobacter )属およびロドコッカス(Rhod
ococcua )属が分類の候補となる。事実、上記
分類書にもこれら3属の間の区別の困難なことが述べら
れている。本発明者らに、ロドコッカス属は、ノカルジ
ア形を示すと記載されているが、上の分離菌ではコリネ
形は通常みられるがノカルジア形はみられないので区別
されると判定した。また、カセオパクター属は1菌種の
み記載されており、絶対好気性とされ、分離源がチーズ
であることが記載されている。一方コリネパクテリウム
属菌に通性嫌気性のものが大部分であるが絶対好気性の
菌もふくみ、また士から分離され九菌が含まれている。
このようなことから本発明者らに上の分離菌ヲコリネバ
クテリウム属の菌と同定した。
クテリウム属の菌と同定した。
以下、分離株の性質の共通性に基いて、若干のグループ
に分けて分類学的性質を記載する。
に分けて分類学的性質を記載する。
先ず全分離株に共通する性質を述べると、上記した“と
おり、何れもダラム陽性、好気性のコリネ形の桿菌であ
り、胞子をつくらず、抗酸性も運動性もない。肉汁寒天
培養でコロニーに小さく、周縁に金縁、隆起に半レンズ
−凸状、表面に平滑で光沢に半透明で拡散性の色素につ
くらない。肉汁液体培養で、表面に環状に生育し、中等
度に濁った生育tする。ゼラチンを液化せず、vPテス
ト、インドールの生成、でん粉の加水分解に倒れも陰性
である。無機窒素源(硝酸塩およびアンモニウム塩)の
利用はグルコース培地で何れも陽性である。カタラーゼ
、脱窒反応、ウレアーゼにともに陽性であり、オキシダ
ーゼに陰性である。O−FテストId )lughLθ
1f80n法で酸の生成から発酵性と判定されるが、ガ
スの生成に認めない。クエン酸の利用はKoaerの培
地で何れも陽性である。IJ I−マスミルクの反応の
変化はほとんどなく、還元、凝固、液化にない。塘から
の酸生成に第1表に示した以外に、何れも、D−グルコ
ース、D−フラクトース、イックトール、D−マニトー
ル%りIJセリンに対して陽性であり、D−ガラクトー
ス、シュクロース、ラクトース、マルトース、テン粉に
対して陰性である。ガスの発生は認められない。26〜
40℃で生育し、20℃でに生育しないか、極めて僅か
な生育しがしない。何れも細胞壁中にメソ−ジアミノピ
メリン酸を有し、また細胞中に比較的短鎖のマイコール
酸をふくむ。
おり、何れもダラム陽性、好気性のコリネ形の桿菌であ
り、胞子をつくらず、抗酸性も運動性もない。肉汁寒天
培養でコロニーに小さく、周縁に金縁、隆起に半レンズ
−凸状、表面に平滑で光沢に半透明で拡散性の色素につ
くらない。肉汁液体培養で、表面に環状に生育し、中等
度に濁った生育tする。ゼラチンを液化せず、vPテス
ト、インドールの生成、でん粉の加水分解に倒れも陰性
である。無機窒素源(硝酸塩およびアンモニウム塩)の
利用はグルコース培地で何れも陽性である。カタラーゼ
、脱窒反応、ウレアーゼにともに陽性であり、オキシダ
ーゼに陰性である。O−FテストId )lughLθ
1f80n法で酸の生成から発酵性と判定されるが、ガ
スの生成に認めない。クエン酸の利用はKoaerの培
地で何れも陽性である。IJ I−マスミルクの反応の
変化はほとんどなく、還元、凝固、液化にない。塘から
の酸生成に第1表に示した以外に、何れも、D−グルコ
ース、D−フラクトース、イックトール、D−マニトー
ル%りIJセリンに対して陽性であり、D−ガラクトー
ス、シュクロース、ラクトース、マルトース、テン粉に
対して陰性である。ガスの発生は認められない。26〜
40℃で生育し、20℃でに生育しないか、極めて僅か
な生育しがしない。何れも細胞壁中にメソ−ジアミノピ
メリン酸を有し、また細胞中に比較的短鎖のマイコール
酸をふくむ。
以下分離株の性質から更に共通の性質をもつものを群別
して、I、II、In、fVの群に分けて、以上に述べ
た以外の分類的性質を第1表に記載する。
して、I、II、In、fVの群に分けて、以上に述べ
た以外の分類的性質を第1表に記載する。
第1表
骨 −0により−のものもある。
鰻 酢酸鉛試験紙法でに十と判定されるものもめるが、
Tf9工培地(triple sugar 1ron
agar )では±以上のような性質を有する菌は夫々
の群について数珠づつ分離された。これらの菌の性質を
前記した分類書の記載と比較するとコリネバクテリウム
属として記載されている何れの菌種とも一致するものは
なかった。そこでこれらの菌ヲコリネパクテリウム属m
種(0orynebaateri −um ap、 )
と同定して@I詳の代表様6N−25、第■群の代表様
11N−26、第厘詳の代表様6N−29、第■群の代
表様<S、N−49t−微生物工業技術研究所(以下微
工研と省略す)に寄託した。
Tf9工培地(triple sugar 1ron
agar )では±以上のような性質を有する菌は夫々
の群について数珠づつ分離された。これらの菌の性質を
前記した分類書の記載と比較するとコリネバクテリウム
属として記載されている何れの菌種とも一致するものは
なかった。そこでこれらの菌ヲコリネパクテリウム属m
種(0orynebaateri −um ap、 )
と同定して@I詳の代表様6N−25、第■群の代表様
11N−26、第厘詳の代表様6N−29、第■群の代
表様<S、N−49t−微生物工業技術研究所(以下微
工研と省略す)に寄託した。
微工研に寄託した菌株名と微工研の寄託番号を対応して
示すと次のとおりである。
示すと次のとおりである。
6]1−25 ・・・微工研菌寄第97/λ号11M
−26・・・微工研菌寄第?デ31号6N−29・・・
微工研°菌寄第972デ号6N−49・・・微工研菌寄
第22ノO号これらの微生物は、野生株、変異株の何れ
も使用でき、微生物またはその培養液から抽出した酵素
も本発明に使用できる。さらに、この酵素活性を有する
固定化酵素、固定化微生物も勿論使用できる。
−26・・・微工研菌寄第?デ31号6N−29・・・
微工研°菌寄第972デ号6N−49・・・微工研菌寄
第22ノO号これらの微生物は、野生株、変異株の何れ
も使用でき、微生物またはその培養液から抽出した酵素
も本発明に使用できる。さらに、この酵素活性を有する
固定化酵素、固定化微生物も勿論使用できる。
これらの微生物を培養して必要なアミダーゼ活性をふく
む標品をえるには、通常の培養法によればよく、特に説
明を要しないが、基質として用いるカルニチンニトリル
を含有する培地に生育せしめ九場合にニトリラーゼ活性
の高い培養物をえることができる。また固形培地、液体
培地の何れも使用可能である。
む標品をえるには、通常の培養法によればよく、特に説
明を要しないが、基質として用いるカルニチンニトリル
を含有する培地に生育せしめ九場合にニトリラーゼ活性
の高い培養物をえることができる。また固形培地、液体
培地の何れも使用可能である。
上記のようにしてつくったニトリラーゼ活性を含む微生
物またにそれによシつくった酵素標品をカルニチンニト
リルに作用せしめる方法は、基質をふくむ溶液に酵素標
品を加えて反応が進行するまで培養すればよいが、微生
物を酵素標品とする培#は微生物の培養液に基質を加え
て反応せしめてもよく、また、微生物の培養液から分離
しfc酵素標品、菌体、洗浄菌、凍結乾燥菌体、アセト
ン乾燥菌体など物理化学的、生化学的に処理した菌体、
抽出液、精製物、固定化処理標品などの形でも基質と接
触せしめることができる。
物またにそれによシつくった酵素標品をカルニチンニト
リルに作用せしめる方法は、基質をふくむ溶液に酵素標
品を加えて反応が進行するまで培養すればよいが、微生
物を酵素標品とする培#は微生物の培養液に基質を加え
て反応せしめてもよく、また、微生物の培養液から分離
しfc酵素標品、菌体、洗浄菌、凍結乾燥菌体、アセト
ン乾燥菌体など物理化学的、生化学的に処理した菌体、
抽出液、精製物、固定化処理標品などの形でも基質と接
触せしめることができる。
基質濃度框、バッチ式、連続式の何れによるかによって
も異るが、バッチ式では一般に媒質中I11〜30%、
好ましくqa5〜10%程度で、連続式でにこれよりや
\濃度を低下させた方がよい。
も異るが、バッチ式では一般に媒質中I11〜30%、
好ましくqa5〜10%程度で、連続式でにこれよりや
\濃度を低下させた方がよい。
反応に、普通5〜60℃、好ましくは25〜50℃附近
、pH4〜10附近で行われる。灰石時間は、静置、攪
拌、流下等の手段、あるいに酵素標品の形態、力価によ
って異ってくるので一様でにないが、パッチ法でに通常
1〜150時間程度でおる。
、pH4〜10附近で行われる。灰石時間は、静置、攪
拌、流下等の手段、あるいに酵素標品の形態、力価によ
って異ってくるので一様でにないが、パッチ法でに通常
1〜150時間程度でおる。
反応の進行に、薄層クロマトグラフィーによりカルニチ
ンの生成を追跡して、あるいはペアンンらの酵素法によ
るL−カルニチンの分析により行なう。総カルニチン中
に占めるL体と9体と比率あるいは光学純度に、反応液
からシリカゲルのクロマトグラフィーによりカルニチン
ヲ分離し、L−フェニルアラニンのカルニチンアミドに
変換し友後、高速液体クロマトグラフィーでL−フェニ
ルアラニンのL−カルニチンアミドとL−フェニルアラ
ニンのD−カルニチンアミドの両者の面積比で決定する
ことができる。反応終了後、反応液をイオン交換樹脂の
カラムにかけ、稀塩酸で溶出、濃縮することによりL−
カルニチンクロライドとして回収される。
ンの生成を追跡して、あるいはペアンンらの酵素法によ
るL−カルニチンの分析により行なう。総カルニチン中
に占めるL体と9体と比率あるいは光学純度に、反応液
からシリカゲルのクロマトグラフィーによりカルニチン
ヲ分離し、L−フェニルアラニンのカルニチンアミドに
変換し友後、高速液体クロマトグラフィーでL−フェニ
ルアラニンのL−カルニチンアミドとL−フェニルアラ
ニンのD−カルニチンアミドの両者の面積比で決定する
ことができる。反応終了後、反応液をイオン交換樹脂の
カラムにかけ、稀塩酸で溶出、濃縮することによりL−
カルニチンクロライドとして回収される。
次に本発明の実施例を示す。
実施91J1
グルコースα5%、ペプトン(L2596、肉エキx1
15%、酵母エキスα15 To、 Na(!4112
5%、DL−カルニチンニトリル・クロライド1.0憾
の組成の培地(pH7,2)を30−入れた500−の
三角フラスコに、11t2表に示した゛菌株を植菌して
26℃で72時間培養したものを遠心分離して菌体をえ
る。これを水にけん濁して遠心分離し九後、DL−カル
ニチンニトリル・クロライドをふくむ100mMりん酸
ナトリウムー水酸化ナトリウム緩衝液(pE7.0)に
加えてもとの生育培養の濃度とし、同時にDL−カルニ
チンニトリル・クロライドの濃度は5優としたものを調
製する。この液5〇−をふくむ300−三角フラスコを
26℃で72時間靜装置応させたとき反応液中には左旋
性の光学活性カルニチンが生成して−た。酵素法による
分析結果は第2表に示したL−カルニチン濃度であり、
生成カルニチン中のL−カルニチンの含fi(1体の比
率は第2表に示したとおりであった。
15%、酵母エキスα15 To、 Na(!4112
5%、DL−カルニチンニトリル・クロライド1.0憾
の組成の培地(pH7,2)を30−入れた500−の
三角フラスコに、11t2表に示した゛菌株を植菌して
26℃で72時間培養したものを遠心分離して菌体をえ
る。これを水にけん濁して遠心分離し九後、DL−カル
ニチンニトリル・クロライドをふくむ100mMりん酸
ナトリウムー水酸化ナトリウム緩衝液(pE7.0)に
加えてもとの生育培養の濃度とし、同時にDL−カルニ
チンニトリル・クロライドの濃度は5優としたものを調
製する。この液5〇−をふくむ300−三角フラスコを
26℃で72時間靜装置応させたとき反応液中には左旋
性の光学活性カルニチンが生成して−た。酵素法による
分析結果は第2表に示したL−カルニチン濃度であり、
生成カルニチン中のL−カルニチンの含fi(1体の比
率は第2表に示したとおりであった。
@2表
実施f12
菌株として6N−49を用い、生育培養の培地として、
グルコース1%、IUH@01 (L 1%、ペプト
ンα5鳴、MaO215%、K、HPO,(L 75S
% KBIPO@ l 2 5
%、 Mg804 ・ 7H10105
%。
グルコース1%、IUH@01 (L 1%、ペプト
ンα5鳴、MaO215%、K、HPO,(L 75S
% KBIPO@ l 2 5
%、 Mg804 ・ 7H10105
%。
lPe804 @ 7 HgOα01%、DTJカルニ
チンニトリル・クロライド1係の組成の培地(pH7,
2)を用−る他は実施例1と同様に実施した。反応72
時間で反応液中に左旋性のカルニチンが生成し、L−カ
ルニチンのa度に1a1q/−、カル−チン中のL−カ
ルニチンの率は6(L5鳴でめった。反応120時間で
[L−カルニチンの生成量は22.17q/−であった
。
チンニトリル・クロライド1係の組成の培地(pH7,
2)を用−る他は実施例1と同様に実施した。反応72
時間で反応液中に左旋性のカルニチンが生成し、L−カ
ルニチンのa度に1a1q/−、カル−チン中のL−カ
ルニチンの率は6(L5鳴でめった。反応120時間で
[L−カルニチンの生成量は22.17q/−であった
。
反応120時間の反応液を強酸性陽イオン交換樹脂(ナ
トリウム型)カラムに通して、カル−チンとカルニチン
ニトリルを吸着させ、ついで酢酸アンモニウムの稀薄溶
液f:流してカルニチンをカルニチンニトリルよシ分け
てカルニチン分画t−a縮し、アルコール添加冷却する
ことによシ、左旋性カルニチンを回収しな。
トリウム型)カラムに通して、カル−チンとカルニチン
ニトリルを吸着させ、ついで酢酸アンモニウムの稀薄溶
液f:流してカルニチンをカルニチンニトリルよシ分け
てカルニチン分画t−a縮し、アルコール添加冷却する
ことによシ、左旋性カルニチンを回収しな。
実施ガ3
使用菌株として6N−49t−用い、生育培地としてグ
リセリン3%、ペプトン15%、肉エキスcL3%、酵
母エキスα5%、NaCj(L25係の組成の培地(p
H7,2)を用いる他は、実施例1と同様に実施した場
合、反応48時間のL−カルニチン生成@B2taq/
−でめった。
リセリン3%、ペプトン15%、肉エキスcL3%、酵
母エキスα5%、NaCj(L25係の組成の培地(p
H7,2)を用いる他は、実施例1と同様に実施した場
合、反応48時間のL−カルニチン生成@B2taq/
−でめった。
実施例4
実施列1の如く培養してえた菌株6N−49の一体を2
ooq/−の濃度になるよう生理食塩水に懸濁した液1
0−に4%アルギン酸ナトリウム液1O−t−加え混合
した後、15gIの塩化カルシウム溶液にこの混合液を
徐々に滴下して、粒状の固定化菌体をえた。この固定化
菌体全1iiDL−カルニチンニトリル・クロライド1
4をふくむpH7,0の燐酸緩衝液20dに加え、30
℃で16時間反応させたところ、−−カルニチン(塩酸
塩)がt6q/−の濃度に生成してい念。
ooq/−の濃度になるよう生理食塩水に懸濁した液1
0−に4%アルギン酸ナトリウム液1O−t−加え混合
した後、15gIの塩化カルシウム溶液にこの混合液を
徐々に滴下して、粒状の固定化菌体をえた。この固定化
菌体全1iiDL−カルニチンニトリル・クロライド1
4をふくむpH7,0の燐酸緩衝液20dに加え、30
℃で16時間反応させたところ、−−カルニチン(塩酸
塩)がt6q/−の濃度に生成してい念。
発明の効果
本発明は上述したようにカルニチン合成の中間体で安価
に合成されるDL−カル−チンニトリルに微生物まfc
はその生産する酵素を作用させて、カルニチン、特に光
学活性のL−カルニチンを収率よく生成せしめるもので
、工業的な光学活性カルニチンの判決を提供する−ので
ある。
に合成されるDL−カル−チンニトリルに微生物まfc
はその生産する酵素を作用させて、カルニチン、特に光
学活性のL−カルニチンを収率よく生成せしめるもので
、工業的な光学活性カルニチンの判決を提供する−ので
ある。
特許出願人 パイオール株式会社
代表者 中白 清
手続補正書(自発)
平成瓦年2月IO日
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、カルニチンニトリルを加水分解してカルニチンを生
成せしめる活性を有する酵素(ニトリラーゼ)もしくは
、該酵素を有する微生物をカルニチンニトリルに作用せ
しめてカルニチンを生成せしめることを特徴とするカル
ニチンの製造法。 2、生成するカルニチンが光学活性体である特許請求の
範囲第1項記載の製造法。 3、使用する微生物が好気性でグラム陽性であり胞子を
つくらぬコリネ形の細菌である特許請求の範囲第1項記
載の製造法。 4 使用する微生物が菌株6N−23(微工研菌寄第9
712号)、11N−26(微工研菌寄第9731号)
、6N−29(微工研菌寄第9729号)、6N−49
(微工研菌寄第9730号)で代表される分類学的性質
を有する細菌である特許請求の範囲第1項記載の製造法
。
Priority Applications (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP62305830A JPH0669381B2 (ja) | 1987-12-04 | 1987-12-04 | カルニチンの製造法 |
US07/279,004 US5041375A (en) | 1987-12-04 | 1988-12-02 | Method of producing carnitine |
KR1019880016137A KR890010206A (ko) | 1987-12-04 | 1988-12-03 | 카르니틴의 제조방법 |
EP88311489A EP0319344B1 (en) | 1987-12-04 | 1988-12-05 | Method of producing carnitine |
DE8888311489T DE3878421T2 (de) | 1987-12-04 | 1988-12-05 | Verfahren zur herstellung von carnitin. |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP62305830A JPH0669381B2 (ja) | 1987-12-04 | 1987-12-04 | カルニチンの製造法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH01148192A true JPH01148192A (ja) | 1989-06-09 |
JPH0669381B2 JPH0669381B2 (ja) | 1994-09-07 |
Family
ID=17949887
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP62305830A Expired - Lifetime JPH0669381B2 (ja) | 1987-12-04 | 1987-12-04 | カルニチンの製造法 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5041375A (ja) |
EP (1) | EP0319344B1 (ja) |
JP (1) | JPH0669381B2 (ja) |
KR (1) | KR890010206A (ja) |
DE (1) | DE3878421T2 (ja) |
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JP2684238B2 (ja) * | 1990-10-09 | 1997-12-03 | 旭化成工業株式会社 | アシルカルニチンエステラーゼ及びその製造法 |
US5863750A (en) * | 1996-12-18 | 1999-01-26 | Cytec Tech Corp | Methods for the detoxification of nitrile and/or amide compounds |
US6060265A (en) * | 1996-12-18 | 2000-05-09 | Cytec Technology Corporation | Methods for the detoxification of nitrile and/or amide compounds |
US6368804B1 (en) * | 1999-07-12 | 2002-04-09 | E. I. Du Pont De Nemours & Company | Method for stabilizing nitrilase activity and preserving microbial cells |
US20240228429A1 (en) * | 2023-01-04 | 2024-07-11 | Hubei Xujie Pharmaceutical Co., Ltd | Process for producing l-carnitine |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2294999A1 (fr) * | 1974-12-18 | 1976-07-16 | Anvar | Procede de preparation d'amides par hydrolyse biologique |
IT1142201B (it) * | 1980-06-24 | 1986-10-08 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Procedimento per la produzione enzimatica di l-carnitina |
US4366250A (en) * | 1980-09-24 | 1982-12-28 | Anvar | Preparation process of optically active α-aminated acids by biological hydrolysis of nitriles |
US4642290A (en) * | 1982-12-06 | 1987-02-10 | Sih Charles J | Process for preparing a compound for use in the production of L-carnitine |
JPS59183694A (ja) * | 1983-04-05 | 1984-10-18 | Hamari Yakuhin Kogyo Kk | 光学活性なカルニチンの生化学的製造法 |
ZA852808B (en) * | 1984-04-20 | 1985-11-27 | Wisconsin Alumni Res Found | Process for preparing l-carnitine |
DK261685A (da) * | 1985-06-11 | 1986-12-12 | Novo Industri As | Fremgangsmaade til fremstilling af optisk aktive, organiske forbindelser |
GB2195630B (en) * | 1986-08-26 | 1990-07-18 | Chuo Kaseihin Co Inc | Method for producing carnitine, l-carnitineamide hydrolase and method for producing same |
-
1987
- 1987-12-04 JP JP62305830A patent/JPH0669381B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-12-02 US US07/279,004 patent/US5041375A/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-12-03 KR KR1019880016137A patent/KR890010206A/ko not_active Application Discontinuation
- 1988-12-05 DE DE8888311489T patent/DE3878421T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-12-05 EP EP88311489A patent/EP0319344B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0669381B2 (ja) | 1994-09-07 |
US5041375A (en) | 1991-08-20 |
DE3878421T2 (de) | 1993-06-03 |
EP0319344A2 (en) | 1989-06-07 |
EP0319344A3 (en) | 1990-05-30 |
DE3878421D1 (de) | 1993-03-25 |
KR890010206A (ko) | 1989-08-07 |
EP0319344B1 (en) | 1993-02-10 |
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