JPH07106150B2

JPH07106150B2 - 新規なｌ−アミノアシラ−ゼ

Info

Publication number: JPH07106150B2
Application number: JP61101042A
Authority: JP
Inventors: 浜夫梅沢; 富雄竹内; 俊治永津; 雅浜田; 秀一岩垂; 郁男松本; 甫森島
Original assignee: Microbial Chemistry Research Foundation; Banyu Phamaceutical Co Ltd
Current assignee: Microbial Chemistry Research Foundation; MSD KK
Priority date: 1985-05-02
Filing date: 1986-05-02
Publication date: 1995-11-15
Anticipated expiration: 2010-11-15
Also published as: EP0201039A2; DE3680574D1; JPS6322188A; US4745067A; EP0201039A3; EP0201039B1

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は食品、医薬、飼料及びその他の工業原料として
有用な光学活性アミノ酸の製造に広く利用可能なＬ−ア
ミノアシラーゼに関するものである。

従来の技術Ｎ−アシル−Ｌ−アミノ酸よりＬ−アミノ酸を与える反
応を触媒する酵素として、動物由来のものでは豚腎アミ
ノアシラーゼ［メソッヅ・イン・エンザイモロジー（Me
thods in Enzymology）第２巻、第109頁（1955年）参
照］、また微生物由来のものとしてはラクトバシルス・
アラビノーサス（Lactobacillus arabinosus）［Park.
R.W.et al,:ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミ
ストリー（Journal of Biological Chemistry）第235
巻、第3193頁（1960年）参照］、コリネバクテリウム
（Corynebacterium）［奥田等：特公昭49−13989号公報
参照］、アスペルギルス（Aspergillus）及びリゾープ
ス（Rhizopus）ファミリー［千畑等：ブレチン・オブ・
ジ・アグリカルチュラル・ケミカル・ソサエテイ・オブ
・ジャパン（Bulletin of the Agricultural Chemical
Society of Japan）21巻、第５号、第304〜第307頁）19
57年）;Solodovnikora,N.I.et al:Inst.Biosin.Belkovy
kh Veshchesto第１巻、第145頁〜151頁（1972年）参
照］等の菌体内に広く分布することが知られている。し
かし主に工業的に利用されているのは、コスト上の問題
により、糸状菌由来のアミノアシラーゼに限られてい
る。現在市販されているアミノアシラーゼとしては、ア
シラーゼアマノ（天野製薬製）、アシラーゼ東京化成
（東京化成製）及びアシラーゼＩ（マイルス・ラボラト
リー製）が知られている。

発明が解決しようとする問題点公知の糸状菌アミノアシラーゼ、例えばアシラーゼアマ
ノなどは、通常のアミノ酸、例えばＬ−メチオニン、Ｌ
−フェニルアラニンなどのＮ−アシル誘導体について広
く加水分解することが知られているが、特殊な合成アミ
ノ酸、例えばＬ−スレオ−Ｎ−アセチル−３−（3,4−
ジベンジルオキシフェニル）セリンなどには作用せず、
パーキンソン氏病の治療薬の合成中間体として有用なＬ
−スレオ−３−（3,4−ジベンジルオキシフェニル）セ
リンを得ることはできない。

問題点を解決するための手段本発明者らは、公知のＬ−アミノアシラーゼよりも基質
特異性の広いＬ−アミノアシラーゼを得るべく公知の保
存菌株も含めて、鋭意探索を続けたところ、放線菌が、
従来のＬ−アミノアシラーゼよりも広い基質特異性を有
するＬ−アミノアシラーゼS₁及びＬ−アミノアシラーゼ
S₂を産生することを見い出し本発明を完成した。

作用本発明は下記の理化学的性状即ち、下記の理化学的性状、即ち、（１）作用及び基質特異性Ｎ−アシル−Ｌ−アミノ酸に作用してＬ−アミノ酸を与
えるＬ−アミノアシラーゼであり、その基質特異性は広
く、天然型のＬ−アミノ酸のＮ−アシル体に加え、非天
然型のＬ−アミノ酸のＮ−アシル体に対しても作用す
る。一方、Ｎ−アシル−Ｄ−アミノ酸、DL−Ｎ−アセチ
ル−α−メチル−ベンジルアミン及びＮ−アセチル−Ｄ
−グルコサミンには作用しない。

（２）安定性温度:50℃では殆んど活性が保持され、60℃でもなお僅
かに活性が残存する（pH7.0 1時間放置）。

pH :pH7.0〜9.0で最も安定であり、pH10.0附近でも比
較的安定である。但し、pH4.0以下では失活する（５℃2
4時間放置）。

（３）反応性温度:50℃までは直線的に活性が増加し、60℃以上では
急激に反応性が失われる。

pH :pH6.5〜9.5で反応性が高く、反応の至適pHは、pH
7.5〜8.5附近である。

（４）分子量 50,000〜60,000（ゲル濾過法）（５）等電点 pI＝7.00〜7.70 （６）ディスク電気泳動 RmBPB＝0.125〜0.167 （７）金属イオンの影響 Fe⁺⁺、Ni⁺⁺、Ag⁺、Hg⁺⁺及びCu⁺⁺によって強く阻害され
る。また、Co⁺⁺によって賦活化される。

（８）阻害剤ｐ−クロロ水銀安息香酸で阻害を受けるが、モノヨード
酢酸では阻害されない。また、エチレンジアミン四酢酸
２ナトリウムにより、緩かに阻害される。

を有する放線菌由来のＬ−アミノアシラーゼS₁及び下記
の理化学的性状、即ち、（１）作用及び基質特異性Ｎ−アシル−Ｌ−アミノ酸に作用してＬ−アミノ酸を与
えるＬ−アミノアシラーゼであり、その基質特異性は広
く、天然型のＬ−アミノ酸のＮ−アシル体に加え、非天
然型のＬ−アミノ酸のＮ−アシル体に対しても作用す
る。一方、Ｎ−アシル−Ｄ−アミノ酸、DL−Ｎ−アセチ
ル−α−メチル−ベンジルアミン及びＮ−アセチル−Ｄ
−グルコサミンには作用しない。

（２）安定性温度:50℃まで失活しないが、60℃では80％の活性が保
持され、さらに70℃においても20％以上の活性が残存す
る（pH7.0 10分間放置）。

pH :pH8.5〜10.0で最も安定であり、pH3.5及びpH11.0
附近でも50％の活性が残存する（５℃24時間放置）。

（３）反応性温度:60℃までは直線的に相対活性は増加し、70℃でも
なお70％以上の反応性が認められる。

pH :pH7.0〜10.0で反応性が高く、反応の至適pHは、pH
8.0〜9.0附近である。

（４）分子量 50,000〜60,000（ゲル濾過法）（５）等電点 pI＝6.38〜7.42 （６）ディスク電気泳動 RmBPB＝0.180〜0.280 （７）金属イオンの影響 Cu⁺⁺、Mn⁺⁺、Co⁺⁺、Hg⁺⁺、Fe⁺⁺、Ni⁺⁺及びAg⁺によって
強く阻害される。

（８）阻害剤ｐ−クロロ水銀安息香酸、Ｌ−システイン及びモノヨー
ド酢酸により強く阻害を受けるが、エチレンジアミン四
酢酸２ナトリウムでは殆んど阻害されない。

を有する放線菌由来のＬ−アミノアシラーゼS₂に関する
ものである。

第１表より本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁は特殊な合
成アミノ酸を含む広い範囲のＬ−アミノ酸のＮ−アシル
誘導体に作用し、公知のＬ−アミノアシラーゼより基質
特異性が広いものである。通常、アシラーゼはアシル基
としてアセチル基、クロロアセチル基などが好ましくベ
ンゾイル基などは加水分解しない場合が多い。一部の細
菌の生産するアシラーゼはエンゾイル基に選択的に作用
するが、アセチル基などは加水分解されない。これに対
し、本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁はアシル基に対し
ても広い基質特異性を示し、アセチル基、クロロアセチ
ル基などが最も好ましいが、ベンゾイル基であっても簡
単に加水分解する。

（２）熱安定性本発明の酵素（Ｌ−アミノアシラーゼS₁）のリン酸カリ
ウム緩衝溶液（pH7.0）を各温度で１時間処理した後、
残存活性を測定した。なお、基質としてＬ−スレオ−Ｎ
−アセチル−３−（3,4−ジベンジルオキシフェニル）
セリン、（以下Ｎ−Ac−DB−DOPSと略す）を用い、37℃
にて１時間反応させ、ニンヒドリン法により遊離したＬ
−スレオ−３−（3,4−ジベンジルオキシフェニル）セ
リン（以下DB−DOPSと略す）を測定することにより酵素
活性を定めた。測定結果を第１図に示す様にpH7.0、60
℃の処理で95％以上が失活するが、50℃以下では全く安
定である。

（３）反応温度本発明の酵素（Ｌ−アミノアシラーゼS₁）をリン酸カリ
ウム緩衝溶液（pH7.0）中で、基質であるＮ−Ac−DB−D
OPSと１時間各種の温度条件で反応させ、相対活性を上
記の方法より測定した。その結果を第２図に示す。アシ
ラーゼ同様、失活限界であるほぼ50℃まで反応性は直線
的の上昇するが、これ以上の温度では急激に失活する。

（４）pH安定性本発明の酵素（Ｌ−アミノアシラーゼS₁）液を各pH条件
下で５℃,24時間放置した。ついで各々をpH7.0に調整し
た後、基質であるＮ−Ac−DB−DOPSと37℃、１時間反応
させ、上記の方法により残存活性を測定した。その結果
を第３図に示す。

本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁は弱塩基性条件下すな
わちpH7.0〜9.0で最も安定であり、pH10.0附近において
も比較的安定である。

（５）反応pH 本発明の酵素（Ｌ−アミノアシラーゼS₁）を37℃で種々
のpH条件下、基質であるＮ−Ac−DB−DOPSと１時間反応
させ、上記の方法により相対活性を測定した。その結果
を第４図に示す。本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁はpH
7.0〜10.0で反応性が高く、至適pHは7.5〜8.5附近であ
る。

（６）分子量セファデックスＧ−100（ファルマシア社製）のゲル濾
過法により、本発明の酵素（Ｌ−アミノアシラーゼS₁）
の分子量を測定した。本酵素のＬ−アミノアシラーゼS₁
の分子量は50,000〜60,000ダルトンの範囲内にある。

なお、標準タンパク標品としてはチトクロームＣ（分子
量12,500）、カーボニックアンヒドラーゼ（分子量29,0
00）、鶏卵アルブミン（分子量45,000）、及び牛血清ア
ルブミン（分子量67,000）を使用した。

（７）等電点アンフォラインPAGプレート（LKB社製）を用いて４℃、
２時間800Vを通電し、本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁
の等電点を測定した。一般に公知のアミノアシラーゼが
酸性タンパクであることに対し本酵素（Ｌアミノアシラ
ーゼS₁）の等電点（pI）は7.00〜7.70の範囲内にあり、
Ｌ−アミノアシラーゼS₁が塩基性タンパクであることを
示す。

（８）ディスク電気泳動 7.5％ポリアクリルアミドゲル（pH8.9）のディスク電気
泳動測定を行い、本酵素（Ｌ−アミノアシラーゼS₁）の
ブロモフェノールブルー（以下BPBと略す）に対する相
対移動度を測定した。Ｌ−アミノアシラーゼS₁のBPBに
対する相対移動度（Rm BPB）は0.125〜0.167である。

（９）金属イオンの影響種々の金属塩を終濃度1mMを含む0.1Mベロナール緩衝液
中に本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁を添加し、37℃、
時間反応させた。その後、基質であるＮ−Ac−DB−DOPS
と37℃、１時間反応させ、上記の方法により相対活性を
測定した。

なお、金属無添加のものの活性を100％とした。その測
定結果を第２表に示す。

本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁は、公知のアミノアシ
ラーゼの多くと同様にCo⁺⁺添加により賦活され、Ni⁺⁺、
Fe⁺⁺、Ag⁺、Hg⁺⁺、及びCu⁺⁺添加により強く活性が阻害
される。

（10）阻害剤の影響本発明の酵素（Ｌ−アミノアシラーゼS₁）を各種阻害剤
とともに37℃、１時間放置し、その後基質であるＮ−Ac
−DB−DOPSと37℃、１時間反応させ、上記の方法により
その残存活性を測定した。その結果を第３表に示す。

本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁はSH阻害剤であるｐ−
クロル水銀安息香酸で阻害を受けるが、モノヨード酢酸
では阻害されない。またキレート剤であるエチレンジア
ミン四酢酸２ナトリウムにより緩和な阻害を受ける。

次に、Ｌ−アミノアシラーゼS₂の理化学的性状を以下に
記載する。

（１）基質特異性各種アミノ酸のＮ−アシル誘導体を基質としてＬ−アミ
ノアシラーゼS₂の酵素活性を測定した。Ｌ−Ｎ−アセチ
ル−メチオニンを100とした相対活性を第４表に示す。

第４表より、本発明のＬ−アミノアシラーゼS₂は特殊な
合成アミノ酸を含む広い範囲のＬ−アミノ酸のＮ−アシ
ル誘導体に作用する。一方、通常、アシラーゼはＬ−Ｎ
−アシル−アミノ酸のアシル基としてアセチル基、クロ
ロアセチル基などが好ましくベンゾイル基などは加水分
解しない場合が多い。一部の細菌の生産するアシラーゼ
はベンゾイル基に選択的に作用するが、アセチル基など
は加水分解されない。これに対し、本発明のＬ−アミノ
アシラーゼS₂はアシル基に対しても広い基質特異性を示
し、アセチル基、クロロアセチル基などが最も好ましい
が、ベンゾイル基であっても簡単に加水分解する。

（Ｂ）熱安定性本発明の酵素の（Ｌ−アミノアシラーゼS₂）のリン酸カ
リウム緩衝溶液（pH7.0）を各温度で10分間処理した
後、残存活性を測定した。

なお、基質としてＮ−Ac−DB−DOPSを用い、37℃にて１
時間反応させ、ニンヒドリン法により遊離したDB−DOPS
を測定することにより酵素活性を定めた。測定結果を第
５図に示す様に60℃での処理で20％、70℃で70％以上が
失活するが、50℃ではまったく安定である。

（３）反応温度本発明の酵素（Ｌ−アミノアシラーゼS₂）をリン酸カリ
ウム緩衝液（pH7.0）の中で、基質であるＮ−Ac−DB−D
OPSと10分間各種の温度条件下で反応させ、相対活性を
上記方法により測定した。その結果を第６図に示す。こ
の結果によれば反応性はほぼ60℃までほぼ直線的に上昇
し、70℃でも急激には失活することはない。

（４）pH安定性本発明の酵素（Ｌ−アミノアシラーゼS₂）液を各種pH条
件下で５℃、24時間放置した。ついで各々をpH7.0に調
整した後、基質であるＮ−Ac−DB−DOPSと37℃、１時間
反応させ、上記方法により残存活性を測定した。その結
果を第７図に示す。

本発明のＬ−アミノアシラーゼS₂は弱塩基性条件下すな
わちpH8.0〜10.0で最も安定である。

（５）反応pH 本発明の酵素（Ｌ−アミノアシラーゼS₂）を37℃で種々
のpH条件下、基質であるＮ−Ac−DB−DOPSと１時間反応
させ、上記の方法により相対活性を測定した。その結果
を第８図に示す。本発明のＬ−アミノアシラーゼS₂はpH
7.0〜10.0で反応性が高く、至適pHは8.0〜9.0附近であ
る。

（６）分子量セファデックスＧ−100（ファルマシア社製）のゲル濾
過法により、本発明の酵素（Ｌ−アミノアシラーゼS₂）
の分子量を測定した。その結果、本発明のＬ−アミノア
シラーゼS₂の分子量は50,000〜60,000ダルトンの範囲内
にある。

なお、標準タンパク標品としてはチトクロームＣ（分子
量12,500）、カーボニックアンヒドラーゼ（分子量29,0
00）、鶏卵アルブミン（分子量45,000）及び牛血清アル
ブミン（分子量67,000）を使用した。

（７）等電点アンフォラインPAGプレート（LKB社製）を用いて、４
℃、２時間800Vを通電し、本発明のＬ−アミノアシラー
ゼS₂の等電点を測定した。

本酵素（Ｌ−アミノアシラーゼS₂）の等電点（pI）は6.
38〜7.42の範囲にある。

（８）ディスク電気泳動 7.5％ポリアクリルアミドゲル（pH8.9）のディスク電気
泳動を行い、本酵素（Ｌ−アミノアシラーゼS₂）のBPB
に対する相対移動度を測定した。Ｌ−アミノアシラーゼ
S₂のBPBに対する相対移動度（Rm BPB）は0.180〜0.280
である。

（９）金属イオンの影響種々の金属塩を終濃度1mMを含む0.1Mベロナール緩衝液
中に本発明のＬ−アミノアシラーゼS₂を添加し、37℃、
１時間反応させた。その後、基質であるＮ−Ac−DB−DO
PSと37℃、１時間反応させ、上記の方法により相対活性
を測定した。なお、金属塩無添加のものの活性を100％
とした。その測定結果を第５表に示す。

本発明のＬ−アミノアシラーゼS₂は、Co⁺⁺、Ni⁺⁺、M
n⁺⁺、Hg⁺⁺、Fe⁺⁺、Cu⁺⁺及びAg⁺の金属イオンにより阻害
される。

（10）阻害剤の影響本発明の酵素（Ｌ−アミノアシラーゼS₂）を各種阻害剤
とともに37℃、１時間放置し、その後基質であるＮ−Ac
−DB−DOPSと37℃、１時間反応させ、上記の方法により
その残存活性を測定した。その結果を第６表に示す。

本発明のＬ−アミノアシラーゼS₂はSH阻害剤であるｐ−
クロル水銀安息香酸及びモノヨード酢酸により強く阻害
されるが、キレート剤であるエチレンジアミン四酢酸２
ナトリウムでは殆ど阻害されない。また、SH基を有する
アミノ酸であるシステインによっても、本発明のＬ−ア
ミノアシラーゼS₂は阻害される。

更に公知のＬ−アミノアシラーゼ及び本発明のＬ−アミ
ノアシラーゼ類の基質特異性及び熱安定性に関して比較
した。

（Ａ）基質特異性本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁、Ｌ−アミノアシラー
ゼS₂及び公知のＬ−アミノアシラーゼの基質特異性につ
いて測定し、その結果を第７表に示した。

本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁、Ｌ−アミノアシラー
ゼS₂と市販のＬ−アミノアシラーゼの作用をＬ−Ｎ−ア
セチル−メチオニン、Ｄ−Ｎ−アセチル−メチオニン及
びＬ−スレオ−Ｎ−アセチル−３−（3,4−ジベンジル
オキシフェニル）セリンを基質として比較した。用いた
Ｌ−アミノアシラーゼはＬ−体にのみ作用するが、特殊
な基質、すなわち、Ｌ−スレオ−Ｎ−アセチル−３−
（3,4−ジベンジルオキシフェニル）セリンに対して
は、本発明の酵素のみしか作用しなかった。

（Ｂ）熱安定性本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁及びＬ−アミノアシラ
ーゼS₂の熱安定性の比較検討を行った。

測定法各酵素溶液（pH7.0）0.5mlを60℃で各所定時間加熱処理
し、ついで氷冷後基質である0.02MのＮ−Ac−DB−DOPS
溶液0.5mlを加え、37℃で１時間放置した。その後ニン
ヒドリン法によりDB−DOPSを測定することによりその活
性を定めた。その結果を第９図に示す。

以上の結果より、本発明のＬ−アミノアシラーゼS₂はＬ
−アミノアシラーゼS₁以外の公知のアシラーゼ類よりも
広い基質特異性を備えている。一方、本発明のＬ−アミ
ノアシラーゼS₂は基質特異性の点でＬ−アミノアシラー
ゼS₁とほぼ同等であるが、熱安定性の面で本発明のＬ−
アミノアシラーゼS₂はＬ−アミノアシラーゼS₁よりもす
ぐれている。

本発明において使用するＬ−アミノアシラーゼ産生微生
物としては、本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁及びＬ−
アミノアシラーゼS₂を生産することができる放線菌に属
する微生物であれば、野生株、変異株、または細胞融合
法、遺伝子操作法、若しくは、その他の遺伝的手法で誘
導される組換え株等いずれも用いることができ、例えば
Ｌ−アミノアシラーゼS₁を生産する能力を有する微生物
の具体例としては、アクチノミセス・アウレオバーテイ
シラーツス（Actinomyces aureoverticillatus）IMC S
−0234（ISP 5080（FERM P−7216）；アクチノミセス・
ビカラー（Actinomyces bicolor）IMC S−0276（ISP 51
40）；ストレプトミセス・ブラストマイセティクス（St
reptomyses blastmycetics）IMC S−0189（ISP 5029）
（FERM P−7217）；ストレプトミセス・チャルトリウシ
ス（Streptomyces chartreusis）IMC S−0226（ISP 508
5）；ストレプトミセス・フラボペルシクス（Streptomy
ces flavopersicus）IMC S−0204（ISP 5093）；アクチ
ノミセス・フラボトリシニ（Actinomyces flavotricin
i）IMC S−0219（ISP 5152）；ストレプトバーテイシリ
ウム・グリゼオカルネウム（Streptoverticillium gris
eocareum）IMC S−0237（ISP 5004）；ストレプトミセ
ス・ハチジョーエンシス（Streptomyces hachijoensi
s）IMC S−0244（ISP 5114）（FERM P−7218）；ストレ
プトミセス・ハルステデイ（Streptomyces halstedii）
IMC S−0194（ISP 5068）；ストレプトバーテイシリウ
ム・ヒロシメンセ（Streptoverticillium hiroshimens
e）IMC S−0179（ISP 5037）（FERM P−7252）；ストレ
プトミセス・テンダエ（Streptomyces tendae）IMC S−
0168（ISP 5101）；ストレプトミセス・トヨカエンシス
（Streptomyces toyocaensis）IMC S−0163（ISP 503
0）（FERM P−7253）などが好適に使用される。これら
の菌株はすべて文献記載の公知の保存菌である。また、
前記の菌株のうち、微工研寄託番号としてFERM P−721
6、FERM P−7217、FERM P−7218を付した菌株は昭和58
年９月５日以来、またFERM P−7252、FERM P−7253を付
した菌株は昭和58年９月20日以来、工業技術院微生物工
業技術研究所に寄託されている。また、新規な本発明の
Ｌ−アミノアシラーゼS₂産生能を有する菌の具体例とし
て、例えばストレプトバーチシリウム・リモファシエン
シス（Streptoverticillium rimofaciens）MH240−CPF7
が挙げられる。上記のストレプトバーチシリウム・リモ
ファシエンスMH240−CPF7は本発明らにより茨城県大宮
町の土壌より分離された菌株で、その菌学的性状は、以
下に示す通りである。

ストレプトバーチシリウム・リモファシエンスMH240−C
PF7の菌学的性質 1.形態 MH240−CPF7株は、顕微鏡下で、分枝した基中菌糸より
輪生枝を有する気菌糸を伸長する。また気菌糸の先端に
10個以上の胞子の連鎖が認められるが、らせん形成は認
められない。この胞子の大きさは、0.6×0.8〜1.4ミク
ロン位であり、胞子の表面は平滑である。

2.各種培地における生育状態（１）シュクロース・硝酸塩寒天培地（27℃培養）無色の発育上にうっすらと白色の気菌糸を着生し、溶解
性色素は認められない。

（２）グルコース・アスパラギン寒天培地（27℃培養）うす黄茶色［2gc,Bamboo］の発育上に、うっすらと白色
の気菌糸を着生し、溶解性色素は認められない。

（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ISP−培地
5,27℃培養）うす黄茶色［2le,Mustard］の発育上に、うっすらと白
色の気菌糸を着生し、溶解性色素は認められない。

（４）スターチ・無機塩寒天培地（ISP−培地4,27℃培
養）うす黄茶色［2le,Mustard］の発育上、わずかに白色の
気菌糸を着生し、溶解性色素は認められない。

（５）チロシン寒天培地（ISP−培地7,27℃培養）うす黄茶色［2le,Mustard］の発育上に、白ないし茶白
色の気菌糸を着生する。溶解性色素は茶色味を帯びる程
度である。

（６）栄養寒天培地（27℃培養）発育はうす黄茶色［2ng,Dull Gold］であり、気菌糸を
着生せず、溶解性色素はわずかに茶色味を帯びる程度で
ある。

（７）イースト・麦芽寒天培地（ISP−培地2,27℃培
養）黄茶色［3le Cinnamon］の発育上に、黄白色ないし茶白
色の気菌糸を着生する。溶解性色素は茶色味を帯びる程
度である。

（８）オートミール寒天培地（ISP−培地3,27℃培養）うす黄茶色［2le,Mustard］の発育上に茶白［3ba,Pear
l］の気菌糸を着生し、溶解性色素は茶色味を帯びる程
度である。

（９）グリセリン・硝酸塩寒天培地（27℃培養）無色の
発育上に、うっすらと白色の気菌糸を着生し、溶解性色
素は認められない。

（10）スターチ寒天培地（27℃培養）うす黄茶色［2gc,Bamboo］の発育上に、白色の気菌糸を
着生し、溶解性色素は認められない。

（11）リンゴ酸石灰寒天培地（27℃培養）無色の発育上に、わずかに白色の気菌糸を着生し、溶解
性色素は認められない。

（12）セルロース培地（濾紙片添加合成液、27℃培養）無色の発育上に、うっすらと白色の気菌糸を着生し、溶
解性色素は認められない。

（13）ゼラチン穿刺培養 15％の単純ゼラチン培地（20℃培養）では、発育はうす
黄茶色であり、気菌糸は着生せず、茶色の溶解性色素は
生産する。

また、グルコース、ペプトン、ゼラチン培地（27℃培
養）では、発育はうす茶色であり、気菌糸は着生せず、
茶色の溶解性色素を生産する。

（14）脱脂牛乳（37℃培養）発育は無色ないしうす茶色であり、気菌糸は着生せず、
溶解性色素はわずかに茶色味を帯びる程度である。

なお、色調の記載について［］内に示す標準はコンテ
イナー・コーポレーション・オブ・アメリカ（Containe
r Corporation of America）のカラー・ハーモニイ・マ
ニュアル（Color harmony mannual）を用いた。

3.生理学的性質（１）生育温度範囲グルコース・アスパラギン寒天培地（グルコース１％、
アスパラギン0.5％、K₂HPO₄0.5％、ひも寒天3.0％pH7.
0）を用い、20℃、24℃、27℃、30℃、50℃の各温度で
試験の結果、50℃を除いてそのいずれの温度でも発育し
たが、最適生育温度は27℃〜37℃附近と思われる。

（２）ゼラチンの液化（15％単純ゼラチン培地、20℃培
養；グルコース・ペプトン・ゼラチン培地27℃培養）単純ゼラチン培地では液化が認められず、グルコース・
ペプトン・ゼラチン培地の場合に、極めて弱い液化が培
養後14日目頃より始まる。

（３）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地
及びスターチ寒天培地、いずれも27℃培養）スターチ・無機塩寒天培地、スターチ寒天培地ともに培
養後、７日目頃よりスターチの水解性が認められ、その
作用は弱い方である。

（４）脱脂牛乳の凝固及びペプトン化（脱脂牛乳、37℃
培養）培養後、５日目頃より凝固が始まり、約２週間で凝固が
完了し、直ちにペプトン化が始まる。その作用は弱い方
である。

（５）メラニン様色素の生成（トリプトン・イースト・
ブロス、ISP−培地1;ペプシン・イースト・鉄・寒天、I
SP−培地6;チロシン、ISP−培地７、いずれも27℃培
養）トリプトン・イースト・ブロス及びペプトン・イー
スト・ブロス、ペプトン・イースト・鉄・寒天培地では
陽性であり、チロシン寒天培地では陰性である。

（６）炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培
地、ISP−培地9,27℃培養）Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、イノシトール及び
Ｄ−マンニトールを利用して発育し、Ｌ−アラビノー
ス、Ｄ−キシロース、シュクロース、Ｌ−ラムノース及
びラフィノースは利用されない。

（７）リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天培地、27
℃培養）陰性である。

（８）硝酸塩の還元反応（0.1％硝酸カリ含有ペプトン
水、ISP−培地8,27℃培養）陰性である。

以上の性状を要約すると、以下の如くである。すなわ
ち、MH240−CPF7株の気菌糸は輪生枝を有し、らせん形
成は認められず、胞子の表面は平滑であり、種々の培地
でうす黄茶色の発育上に、白色ないし茶白色の気菌糸を
着生し、溶解性色素は認められないか又は茶色味を帯び
る程度である。またメラニン様色素の生成はトリプトン
・イースト・ブロス及びペプトン・イースト・鉄寒天培
地で陽性、チロシン寒天培地では陰性である。蛋白分解
力、スターチの水解性はともに弱い方である。なお、細
胞壁に含まれる2,6−ジアミノピメリン酸はLL−型であ
る。

これらの性状より、MH240−CPF7株はストレプトバーチ
シリウム（Strepotoverticillium）属に属するものと考
えられる。更に近縁の既知菌種を検索するとストレプト
ミセス・リモファシエンス（Streptomyces rimofacien
s）（特公昭42−7598号公報参照）が挙げられる。

次に理化学研究所微生物系統保存施設（JCM）よりスト
レプトミセス・リモファシエンスを入手し、MH240−CPF
7株と比較検討した。

その結果を第８表に示す。

第８表から明らかなように、MH240−CPF7株とストレプ
トミセス・リモファシエンスの性状は全く合致してい
る。なお、特公昭42−7598号公報におけるストレプトミ
セス・リモファシエンスの菌学的性質に関する記載によ
れば、炭素源の利用試験に、プリドハム・ゴトリーブの
培地に発育しないため、ツアペック培地を使用している
が、この比較試験では両者ともプリドハム・ゴトリーブ
培地に生育し、糖利用能の判定は容易であった。加うる
に、両者とも抗生物質デストマイシンを生産すること
は、同種であることを否めない。したがって、MH240−C
PF7株をストレプトバーチシリウム・リモファシエンス
（Streptoverticillum rimofaciens）MH240−CPF7株と
同定した。なお、MH240−CPF7株は工業技術院微生物工
業技研研究所に微工研菌寄第8599号（FERM P−8599）と
して寄託されている。

本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁及びＬ−アミノアシラ
ーゼS₂は次のように製造することができる。

本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁及びＬ−アミノアシラ
ーゼS₂はＬ−アミノアシラーゼ生産菌である任意の放線
菌を栄養源含有培地に接種して好気的に発育させること
によって得られる。栄養源としては、細菌、放線菌など
の栄養源として公知のものが使用できる。例えば、炭素
源としては市販されているグリセリン、グルコース、ラ
クトース、ショ糖、デンプン、マルトース、糖蜜などの
炭水化物、大豆油、綿実油など植物油、及び動物脂肪な
どが、窒素源としては市販されているペプトン、肉エキ
ス、コーンスティープリカー、コーングルーテンミール
、ファルマメディア、大豆粉、落花生粉、酵母エキ
ス、Ｎ−Ｚ−アミン、カゼイン、硝酸ソーダ、及び硫酸
アンモニウムなどが、無機塩としては食塩、リン酸塩、
炭酸カルシウム、及び硫酸マグネシウムなどが挙げられ
る。その他、必要に応じて微量の金属塩を添加すること
もできる。これらのものは本発明のＬ−アミノアシラー
ゼS₁及びＬ−アミノアシラーゼS₂の生産に役立つもので
あればよい。

培養温度に関しては、本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁
及びＬ−アミノアシラーゼS₂を生産する範囲であればい
ずれでもよく、好ましくは20℃〜30℃である。また、培
養時間は通常１日ないし10日間、好気的に培養すること
が望ましい。

培養時のpH値は、Ｌ−アミノアシラーゼS₁及びＬ−アミ
ノアシラーゼ_２が生産される値であれば、特に限定はさ
れないが、好ましくは、pH7.0〜8.0が望ましい。

本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁及びＬ−アミノアシラ
ーゼS₂は菌体外に放出されやすく、主として培養濾液中
に存在する。

よって、本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁及びＬ−アミ
ノアシラーゼS₂は、他の一般の糸状菌由来のＬ−アミノ
アシラーゼの調製法とは異なり、菌体を破壊し、酵素を
抽出することなく、培養濾液そのままを酵素液として利
用することができる。また必要に応じて、通常の生化学
的手段により精製することができる。すなわち、硫安分
別沈澱法、メンブラン濃縮法、カラムライト（富士化
学社製）クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラ
フィー、ゲルクロマトグラフィー及び電気泳動法等を適
宜組み合せて純化することもできる。

実施例以下に本発明を実施例により具体的に説明するが、これ
らの実施例によって本発明は限定されるものではない。

実施例１スターチ1.0％、グルコース1.0％、肉エキス0.75％、ポ
リペプトン0.75％、塩化ナトリウム0.3％、硫酸マグネ
シウム0.1％、硫酸銅0.0007％、硫酸第一鉄0.001％、塩
化マンガン0.0008％、及び硫酸亜鉛0.0002％を含む滅菌
した培地100mlを含む500ml容エルレンマイヤーフラスコ
に本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁の生産菌の１つであ
るストレプトミセス・ハチジョーエンシス（Streptomyc
es hachijoensis IMC S−0244（ISP−5114）（FERM P
−7218））を無菌的に植菌し27℃にて４日間振とう培養
し、これを種母とした。同様の培地組成、操作で、500m
l容エルレンマイヤーフラスコ100本を作製し、上記種母
フラスコより2ml当り種母をそれぞれに添加した。添加
後フラスコを28℃、４日間振とう培養した。フラスコの
内容物を集め吸引濾過により菌体を除去し、瀘液7.5
を得た。培養瀘液は、限外濾過モジュール（旭化成社AC
L−1010）により400mlまで濃縮した。さらに濃縮液に0.
02Mリン酸カリウム緩衝液（pH7.0）200mlを加え、再び
上記限外濾過モジュールにより300mlまで濃縮する操作
を２回くり返した後、内液を上記緩衝液で押し出し粗調
製酵素溶液630mlを得た。Ｌ−アミノアシラーゼ活性
は、Ｌ−スレオ−Ｎ−アセチル−３−（3,4−ジベンジ
ルオキシフェニル）セリンを基質として37℃１時間反応
させ、生成するＬ−スレオ−３−（3,4−ジベンジルオ
キシフェニル）セリンをニンヒドリン法にて測定するこ
とにより決定した。即ち、反応はＮ塩酸を系内に加え酵
素を変性させることにより終了させ、生成するＬ−スレ
オ−３−（3,4−ジベンジルオキシフェニル）セリンを
系内よりブタノールに転溶させた。ブタノール抽出液
は、ニンヒドリン法にて発色させ、570nmの吸光度で比
色定量した。脱アセチル体100μg/mlの濃度を与えるＬ
−アミノアシラーゼ活性を１単位と定義する上記粗調製
酵素溶液の単位は5.92×10⁴単位であった。また一連の
操作の回収率は98％以上であった。

実施例２実施例１により調製された粗調製酵素溶液400ml（3.76
×10⁴単位）をあらかじめ5mMのリン酸カリウム緩衝液
（pH7.0）にて平衡化させたカラムライト（富士化学
工業社）の塔（内径3.7cm×高さ30cm）に通し、Ｌ−ア
ミノアシラーゼS₁を吸着させた。上記緩衝液200mlを流
し、塔を同緩衝液で洗浄後、緩衝液濃度を0.5Mまで直線
的に増加させる方法によりＬ−アミノアシラーゼS₁を溶
離せしめた。

本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁は、0.2〜0.3Mのリン
酸カリウム緩衝液（pH7.0）で溶離され、活性画分を集
め5mMリン酸カリウム緩衝液（pH7.0,5℃）に対して透析
を行い、200mlの精製酵素液を得た。一連の操作の回収
率は80％であり、比活性は約11倍上昇した。

実施例３実施例２により調製した酵素溶液はさらにイオン交換セ
ファディクス等により精製することができる。即ち予め
5mMのリン酸カリウム緩衝液にて平衡化したCM−セファ
ディクスＣ−50（ファルマシア社）の塔（内径3.0cm
×高さ25.0cm）に通し、Ｌ−アミノアシラーゼS₁を吸着
させる。

上記緩衝液800mlを流して塔を洗浄した後直線的に緩衝
液濃度を増加させることにより酵素活性画分を溶出せし
める。

本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁は、0.08〜0.12Mのリ
ン酸カリウム緩衝液（pH7.0）にて溶出された。一連の
操作の回収率は90％であり、比活性は、実施例１、及び
実施例２の酵素溶液に比較して、それぞれ85倍及び7.3
倍に上昇した。

実施例４実施例３により調製された酵素溶液はさらにDEAE−セフ
ァデックスＡ−50（ファルマシア社）によって精製さ
れる。即ち、1200単位の酵素を含む酵素液を予め5mMリ
ン酸緩衝液にて平衡化させておいたDEAE−セファデック
スＡ−50カラム（内径1.6cm×高さ11.0cm）に通し100
mlの上記緩衝液でカラムを洗浄後、緩衝液濃度を直線的
に増加させることによって酵素活性画分を溶出せしめ
た。

本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁は、0.2〜0.25Mのリン
酸緩衝液（pH7.0）で溶離した。一連の操作の回収率は8
5％であった。また比活性は実施例３のものに比べ1.7倍
上昇した。

実施例５実施例４にて調製した精製酵素について、セファデック
スＧ−100（ファルマシア社）を用いたゲル濾過を行
った。予め50mMのリン酸カリウム緩衝液で平衡化された
セファデックスＧ−100カラム（内径1.7cm×高さ81.5
cm）に実施例４にて調製した精製酵素0.2mgアルブミン
換算量及びそれぞれ0.5〜1mgの各種タンパク標品を含む
0.5％グリセリン溶液1.0mlを通した。溶出液は上記緩衝
液を3.6ml/時の流速で流し、溶出液と2.0mlずつフラク
ションコレクターにて分取した。酵素活性は280nmの吸
光度、Lowry法によるタンパク定量及び酵素活性等によ
り検出した。ゲルクロマトグラフィーの結果、精製酵素
が単一タンパクバンドであり、かつ排除体積の1.4倍附
近に溶出されることにより分子量が50,000〜60,000であ
ることが証明された。

実施例６グルコース３％、ファルマメディア1.5％、塩化ナト
リウム0.3％、硫酸マウネシウム0.1％、硫酸銅0.0007
％、硫酸第一鉄0.0001％、塩化マンガン0.0008％及び硫
酸亜鉛0.0002％を含む滅菌した培地100mlを含む500ml容
エルレンマイヤーフラスコに本発明のＬ−アミノアシラ
ーゼS₂生産菌であるストレプトバーチシリウム・リモフ
ァシエンスMH240−CPF7株を無菌的に植菌し、27℃にて
３日間振盪培養し、これらを種母とした。前記と同様の
培地1.5ずつを５容エルレンマイヤーフラスコ18本
に分注し、滅菌後前記種母10mlずつを各フラスコに添加
し、27℃で４日間振盪培養した。ついで各フラスコの培
養物を集め、吸引濾過により菌体を除去し、濾液19.6
を得た。

こうして得られた培養濾液を、予め5mMのリン酸カリウ
ム緩衝液（pH7.0）にて平衡化させたカラムライト
（富士化学社製）２を充填したカラムに通し、Ｌ−
アミノアシラーゼS₂を吸着させた。水７で該カラムを
洗浄後、0.5Mリン酸カリウム緩衝液（pH7.0）５によ
りＬ−アミノアシラーゼS₂を溶出し、活性画分を集め、
粗製酵素溶液1.95を得た。実施例１と同様にしてＬ−
アミノアシラーゼ活性を測定したところ、この粗製酵素
溶液の活性単位は1.69×10⁵単位であり、また一連の操
作の回収率は95％以上であった。

実施例７実施例６により調製された粗酵素溶液1.95（1.69×10
⁵単位）に硫酸アンモニウム540gを加え、45％飽和溶液
とし、予め45％飽和硫酸アンモニウム溶液で平衡化され
たトヨパールHW−65（東洋曹達社製）を充填したカラ
ム（内径2.5cm×高さ25cm）に通し、Ｌ−アミノアシラ
ーゼS₂を吸着させた。

ついで45％飽和硫酸アンモニウム溶液で洗浄後、35％飽
和硫酸アンモニウム溶液を流し、さらに25％飽和硫酸ア
ンモニウム溶液を流してＬ−アミノアシラーゼS₂を溶出
した。活性画分を集め、2mMトリス−塩酸緩衝液（pH8.
2）に対して透析を行い、精製酵素液440ml（収率95％以
上）を得た。

実施例８実施例７で得られた酵素液を予め2mMトリス−塩酸緩衝
液（pH8.2）で平衡化させたDEAE−トヨパール650M
（東洋曹達社製）のカラム（内径2cm×高さ21.5cm）
通し、Ｌ−アミノアシラーゼS₂を吸着させた。ついでト
リス−塩酸緩衝液（pH8.2）の濃度を5mMから200mMに直
線的に増加させることにより、Ｌ−アミノアシラーゼS₂
を溶出し、活性画分を集め、精製酵素液84ml（7.7×104
単位）（収率59％）を得た。

実施例９実施例８で得られた精製酵素液84ml（比活性7.7×10⁴単
位）を水に対して透析し、予め5mMリン酸カリウム緩衝
液（pH7.0）で平衡化させたCM−トヨパール650M（東
洋曹達社製）のカラム（内径2cm×高さ28cm）通した。
こうして得られたCM−トヨパール650Mカラム通過液215m
lに硫酸アンモニウム60.9gを加え、予め45％飽和硫酸ア
ンモニウム溶液で平衡化させたトヨパールHW−65（東
洋曹達社製）のカラム（内径2cm×高さ45cm）に通し、
Ｌ−アミノアシラーゼS₂を吸着させた。ついで硫酸アン
モニウム溶液の濃度を直線的に減少させることにより、
Ｌ−アミノアシラーゼS₂を溶出した。活性画分を集め、
5mMトリス−塩酸緩衝液（pH8.2）に対して透析を行い、
精製酵素液105ml（比活性2323単位/280nm吸光度）（収
率46％）を得た。

発明の効果本発明のＬ−アミノアシラーゼS₂及びＬ−アミノアシラ
ーゼS₂は安価な培地中で産生菌により多量に産生され、
しかも菌体外へ放出されることから、特別な抽出操作を
施すことなく、培養濾液をそのまま酵素溶液として利用
することができる。さらに特にＬ−アミノアシラーゼS₂
の基質特異性の広いこと及び耐熱性にすぐれていること
から、天然のアミノ酸はもとより、非天然型アミノ酸の
光学分割を行うことができ、加えてその際に微生物によ
る汚染に対し特別の操作をすることなく、また基質濃度
をより高くすることが可能である。

また本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁及びＬ−アミノア
シラーゼS₂は、公知のＬ−アミノアシラーゼよりも広い
基質特異性を有する。たとえば、公知のアシラーゼであ
るアシラーゼアマノが作用しないDL−スレオ−Ｎ−アセ
チル−３−（3,4−ジベンジルオキシフェニル）セリン
に本発明のＬ−アミノアシラーゼを作用させると、該化
合物のＬ体のアセチルアミノ基のみを特異的に加水分解
して、パーキンソン氏病の治療薬として有用なＬ−スレ
オ−３−（3,4−ジヒドロキシフェニル）−Ｎ−メチル
セリンの合成中間体であるＬ−スレオ−３−（3,4−ジ
ベンジルオキシフェニル）セリンを得ることができる。

したがって、本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁及びＬ−
アミノアシラーゼS₂を利用することにより、光学活性ア
ミノ酸の工業的製法の簡略化及び効率化が可能である。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁の熱安定性
を、第２図はその反応温度（至適温度）を、第３図はそ
のpH安定性を、第４図は反応pH（至適pH）をそれぞれ示
す。第５図は本発明のＬ−アミノアシラーゼS₂の熱安定性
を、第６図はその反応温度（至適温度）を、第７図はそ
のpH安定性を、第８図は反応pH（至適pH）をそれぞれ示
す。また第９図は本発明のＬ−アミノアシラーゼS₁（●
−●）とＬ−アミノアシラーゼS₂（○−○）との熱安定
性に関する比較を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き微生物の受託番号ＦＥＲＭＰ−８５９９ (72)発明者松本郁男東京都杉並区高井戸西１丁目23番地14号 (72)発明者森島甫東京都目黒区中目黒１丁目１番32−301号審査官冨永みどり (56)参考文献特公昭43−24456（ＪＰ，Ｂ２)

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記の理化学的性状、即ち、（１）作用及び基質特異性Ｎ−アシル−Ｌ−アミノ酸に作用してＬ−アミノ酸を与
えるＬ−アミノアシラーゼであり、その基質特異性は広
く、天然型のＬ−アミノ酸のＮ−アシル体に加え、非天
然型のＬ−アミノ酸のＮ−アシル体に対しても作用す
る。一方、Ｎ−アシル−Ｄ−アミノ酸、DL−Ｎ−アセチ
ル−α−メチル−ベンジルアミン及びＮ−アセチル−Ｄ
−グルコサミンには作用しない。（２）安定性温度:50℃では殆んど活性が保持され、60℃でもなお僅
かに活性が残存する（pH7.0 1時間放置）。 pH :pH7.0〜9.0で最も安定であり、pH10.0附近でも比
較的安定である。但し、pH4.0以下では失活する（５℃2
4時間放置）。（３）反応性温度:50℃までは直線的に活性が増加し、60℃以上では
急激に反応性が失われる。 pH :pH6.5〜9.5で反応性が高く、反応の至適pHは、pH
7.5〜8.5附近である。（４）分子量 50,000〜60,000（ゲル濾過法）（５）等電点 pI＝7.00〜7.70 （６）ディスク電気泳動 RmBPB＝0.125〜0.167 （７）金属イオンの影響 Fe⁺⁺、Ni⁺⁺、Ag⁺、Hg⁺⁺及びCu⁺⁺によって強く阻害され
る。また、Co⁺⁺によって賦活化される。（８）阻害剤ｐ−クロロ水銀安息香酸で阻害を受けるが、モノヨード
酢酸では阻害されない。また、エチレンジアミン四酢酸
２ナトリウムにより、緩かに阻害される。を有する放線菌由来のＬ−アミノアシラーゼS₁及び下記
の理化学的性状、即ち、（１）作用及び基質特異性Ｎ−アシル−Ｌ−アミノ酸に作用してＬ−アミノ酸を与
えるＬ−アミノアシラーゼであり、その基質特異性は広
く、天然型のＬ−アミノ酸のＮ−アシル体に加え、非天
然型のＬ−アミノ酸のＮ−アシル体に対しても作用す
る。一方、Ｎ−アシル−Ｄ−アミノ酸、DL−Ｎ−アセチ
ル−α−メチル−ベンジルアミン及びＮ−アセチル−Ｄ
−グルコサミンには作用しない。（２）安定性温度:50℃まで失活しないが、60℃では80％の活性が保
持され、さらに70℃においても20％以上の活性が残存す
る（pH7.0 10分間放置）。 pH :pH8.5〜10.0で最も安定であり、pH3.5及びpH11.0
附近でも50％の活性が残存する（５℃24時間放置）。（３）反応性温度:60℃までは直線的に相対活性は増加し、70℃でも
なお70％以上の反応性が認められる。 pH :pH7.0〜10.0で反応性が高く、反応の至適pHは、pH
8.0〜9.0附近である。（４）分子量 50,000〜60,000（ゲル濾過法）（５）等電点 pI＝6.38〜7.42 （６）ディスク電気泳動 RmBPB＝0.180〜0.280 （７）金属イオンの影響 Cu⁺⁺、Mn⁺⁺、Co⁺⁺、Hg⁺⁺、Fe⁺⁺、Ni⁺⁺及びAg⁺によって
強く阻害される。（８）阻害剤ｐ−クロロ水銀安息香酸、Ｌ−システイン及びモノヨー
ド酢酸により強く阻害を受けるが、エチレンジアミン四
酢酸２ナトリウムでは殆んど阻害されない。を有する放線菌由来のＬ−アミノアシラーゼS₂。