JPH10503185A

JPH10503185A - カンナビノイドリセプターアンタゴニスト

Info

Publication number: JPH10503185A
Application number: JP8505069A
Authority: JP
Inventors: ファーヘイ，ケナン・ジョゼフ; コッペル，ゲイリー・アレン; カリナン，ジョージ・ジョゼフ
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 1994-07-15
Filing date: 1995-07-06
Publication date: 1998-03-24
Also published as: US5747524A; DE69532162T2; AU2962295A; CA2194684A1; EP0766559B1; EP0766559A1; EP0766559A4; ATE254456T1; US5596106A; WO1996002248A1; DE69532162D1; ES2210301T3

Abstract

(57)【要約】本出願は、あるアリールベンゾ［ｂ］チオフェンおよびベンゾ［ｂ］フラン化合物が哺乳動物のカンナビノイドリセプターをブロックまたは阻害することを開示するものである。本出願は、カンナビノイドリセプターのアンタゴニストである新規化合物および該化合物を含有する医薬製剤をも開示する。

Description

【発明の詳細な説明】カンナビノイドリセプターアンタゴニスト本発明は哺乳動物中枢神経系のＣＢ−１（カンナビノール−１）リセプターの活性なアンタゴニストであるアリール−ベンゾ［b］チオフェンおよびベンゾ［b ］フラン化合物に関するものである。カンナビノイドは一般にマリファナとして知られている植物であるｃａｎｎａｂｉｓｓａｔｉｖａ由来の化合物である。天然のカンナビノイドの最も活性な化学的化合物は、テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）、特に（−）−△⁹− ＴＨＣである。この化合物は１９６０年代に分離・同定されて以来、これまでにカンナビノールの効果と薬理に関する科学的検討が多くなされてきた。しかしながら、ＴＨＣの発見以前に、マリファナ使用の効果と薬理は数千年にわたり知られてきた。マリファナの使用と濫用はいずれも初期のヒトの記録の中に記されている。マリファナを主体にした医薬は数世紀にわたって知られており、多くの民間の草本治療薬の大黒柱となってきた。マリファナの持つ多くの有益な薬理特性の中には、哺乳動物およびヒトにおける鎮痛、血圧ならびに眼内圧の低下、および制吐活性がある。特に現在では、癌患者において化学療法誘発性の悪心を改善するか、もしくは緑内障患者の眼内圧を低下させるためにマリファナを使用するというようなある場合において、マリファナ使用を公認すべきであるかどうかについて多くの討論がなされている。ＴＨＣの解明後、多くの合成化合物が発見され、癌患者の治療に臨床使用されてきており、これらの中にはナビロン（Nabilone）、ナボルテート（Nabortate）、およびレボナントロドール（Levonantrodol）がある。しかしながら、これら薬剤は有用ではあるが、多かれ少なかれある程度のＴＨＣの負の薬理特性を有するため、それらの一般使用は制限されている。マリファナの有益な効果が長きにわたって知られているように、その負の効果もよく知られている。マリファナ（および後にＴＨＣに関連することが解った）の顕著な負の薬理としては、知覚の心理的歪曲、短期記憶の低下、運動協調の低下、鎮静、および多幸症がある。マリファナの長期使用は嗜癖をもたらすと考えられている。マリファナの長い歴史にはその使用と濫用が織り込まれてきた。１９８０年代まで、カンナビノール、最も具体的にはＴＨＣの中枢神経系に対する作用のメカニズムは不明であった。非常に有力な、放射性標識合成ＴＨＣアゴニスト（ＣＰ５５９４０、ＨＵ２１０、およびＨＵ２１１）の出現に伴って、ＴＨＣの薬理の分子的根拠が研究によって解明され始めた。１９８８年に、△⁹ＴＨＣおよび他の合成アゴニストが結合する特異的リセプターがあることが解った。ラジオオートグラフを用いて、カンナビノールリセプターはラット脳の海馬領域に局在することがわかった（Herkenham,M.,Ann.NY Ac ad．Sci.,645:19-32頁（1992）およびその中の参考文献参照）（この年表の総説については、Mechoulam,R.らの、CNS Drugs,2(4),255-260（1994）参照）。次いで、末梢組織、特に免疫系に主として局在すると思われる別の異なるリセプターがあることがみいだされた（Lynn,A.B.とHerkenham,M,の、J.Pharm．and Exp.Th er.,268(3),1612-1623頁（1994）参照）。両リセプターは精製され、アミノ酸配列が決定され、クローニングされ、そして実験細胞系中で発現させられた。カンナビノイドとその合成アゴニストの両方に結合する２つのリセプターは、ＣＢ− １（中枢神経系に局在する受容体）およびＣＢ−２（末梢組織にみられるリセプター）と呼ばれている。一般に、本発明と最も密接な関係がある、カンナビノイドの中枢神経系に対する作用に関連する多くのカンナビノイドの薬理はＣＢ−１リセプターの作用と直接関連している。ＣＢ−１リセプターのアゴニストである合成および天然の化合物は予想される実験的およびヒトでの薬理を説明するが、ＣＢ−１とほとんど結合しない、密接に関連した化合物では説明されない（これら所見に関する総説はMechoulam,R.らの、Biochem.Pharm.,48(8),1537-1544(199 4)参照）。１９９２年に、ＣＢ−１リセプターの内因性リガンドが、アナンダミドであるアラキドン酸のＮ−エタノールアミンアミドであることが発見された（Devane,W .A.らの、Science,258,1946-1949頁、(1992)参照）。この新しい神経伝達物質の発見によりアナンダミドの調節と薬理に関する研究が盛んに行なわれるようになってきた。予備的結果は、内因性アナンダミドで処理された動物はカンナビノイドで処理された動物と同様の行動を示すことを示している。ＣＢ−１リセプターの脳内における局在領域とカンナビノイドおよびアナンダミドの薬理が類似しているため、アナンダミドが感覚・知覚、認識、記憶、痛覚、および気分変化のような機能の鍵となる調節物質であるとの一連の証拠になっている。ヒトではＣＢ −１リセプターのアゴニストがカンナビノイドであることが非常にはっきりしているので、同じ外挿法によって、ＣＢ−１リセプターのアンタゴニストが有するであろうと思われる薬理を予想することは妥当と思われる。したがって、感覚・知覚ならびに認識低下、およびしばしばマリファナの使用に関連する状態、嗜眠および欝病のような気分変化をきたした患者では、これらの事象を悪化させる調節因子はアナンダミド−ＣＢ−１相互作用が不適切に高いかまたは調節が適切になされていないことを強く暗示する。アナンダミド−ＣＢ −１アンタゴニストは患者がこれらの症状を有する状態に有用であろう。当該技術分野において、いずれもアナンダミドおよびカンナビノイド類似体でないカンナビノールリセプターの部分アゴニストまたはアンタゴニストに関する２つの報告がみられる。この化合物の最初のものである、部分アゴニストであるアミノアルキルインドール（図１参照）は、Pacheco,M.らの、J.Pharmacol.Exp. Ther.,257,170-183頁（1991）およびCompton,D.R.らの、J.Pharmacol.Exp.Ther. ,263,1118-1126頁（1992）に示されている。アンタゴニストであるハローアリールピラゾール（ＳＲ141716A）（図２参照）は特許出願ＥＰ0576357Ａ１に示された。ＣＢ−１アンタゴニストであるＳＲ１４１７１６Ａはin vivoおよびin vitr oモデルにおいてカンナビノイドとアナンダミド両方の作用をブロックすることが示されている（Rinaldi-Carmons,M.らの、FEBS Letters,350,240-244頁(1994) 参照）。本発明は、哺乳動物のカンナビノール−１リセプターにおけるアナンダミドの１またはそれ以上の作用に拮抗する方法に用いるための、式：［式中、Ｒ¹はＣ₁−Ｃ₄アルコキシ、トリフルオロメチルスルホニルオキシ、ヒドロキシ、またはシアノであり、Ｒ²およびＲ³はそれぞれ独立してＣ₁−Ｃ₄アルキルもしくはＣ₁−Ｃ₄アルコキシてあり、Ｒ⁴はＣＯ、ＣＨＯＨ、もしくはＣＨ₂ であり、Ｒ⁵はＯもしくはＳである（ただしＲ¹がヒドロキシである場合はＲ⁵はＯである）］で示される化合物を提供するものである。式Ｉのある化合物は新規であると思われ、本発明の別の目的として提供される。したがって本発明は式Ｉ［式中、Ｒ¹はシアノであり、Ｒ²およびＲ³はそれぞれ独立してＣ₁−Ｃ₄アルキルもしくはＣ₁−Ｃ₄アルコキシであり、Ｒ⁴はカルボニルであり、Ｒ⁵は酸素もしくは硫黄である］の化合物を提供するものである。本発明は活性成分である式（Ｉ）の新規化合物と医薬的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含有する医薬製剤をも提供する。用語「Ｃ₁−Ｃ₄アルキル」には、炭素数１〜４の直鎖または分岐鎖状のアルキル鎖を表わす。典型的な直鎖もしくは分岐鎖Ｃ₁−Ｃ₄アルキル基には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、およびｔ−ブチルが含まれる。用語「Ｃ₁−Ｃ₄アルコキシ」は、エーテル部分を形成するためにＣ₁−Ｃ₄アルキル基と直接結合した酸素原子を表わす。Ｃ₁−Ｃ₄アルコキシ基の例には、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、およびブトキシが含まれる。Ｒ¹は好ましくは、メトキシ、トリフルオロメチルスルホニルオキシ、ヒドロキシ、またはシアノである。最も好ましくは、Ｒ¹はシアノである。Ｒ²は好ましくはメチルまたはメトキシである。Ｒ³は好ましくはメトキシである。Ｒ⁴は好ましくはカルボニルである。Ｒ⁵は好ましくは−Ｏ−である。特に好ましい化合物はＲ¹がシアノであり、Ｒ²がメトキシであり、Ｒ³がメトキシであり、Ｒ⁴がカルボニルであり、Ｒ⁵がＯであるか、もしくはＲ²がメチルであり、Ｒ³がメトキシであり、Ｒ⁴がカルボニルであり、Ｒ⁵がＯであるか、またはＲ²がメトキシであり、Ｒ³がメトキシであり、Ｒ⁴がカルボニルであり、Ｒ⁵ がＳである化合物である。式Ｉの化合物は２種類の関連化学群、すなわち、ベンゾチオフェン群とベンゾフラン群に属する。１．ベンゾチオフェン群この群の化合物には、Ｒ¹〜Ｒ⁴が先に定義した通りであり、Ｒ⁵がＳである、以下のすべての化合物が含まれる。この群の好ましい化合物のうちで最も好ましい化合物はＲ¹基がＣＮであり、Ｒ² とＲ³がメトキシ基であり、Ｒ⁴がカルボニルであるものである。この置換体は、以下の構造を有する最も好ましい化合物である［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）ベンゾ（ｂ）チエン−３−イル］［４−シアノフェニル］メタノンを定義するものである。好ましいベンゾチオフェン化合物を合成するための一般的反応式を以下の反応式Ｉに示す。上記反応式のようなベンゾチオフェン合成は当該技術分野においてもよく知られている。Jonesらの、J.Med.Chem.,1984,Vol.27,No.8,1057-1066頁には、上記の基本的反応式が開示されており、一方、この反応式の変法が米国特許第413381 4号、第4358593号、第4380635号、および第4418068号に記載されている。上記反応式Ｉに示す通り、出発物質の４−メトキシアセトフェノンはメタノール中で臭素化され、示したハロ中間体が形成された。アリール硫化物および塩基はこの中間体と反応し、硫黄−アセチル架橋によって連結されたジアリール中間体を形成する。この中間体の所望のベンゾ（ｂ）チオフェンバックボーンへの環化は上昇した温度でポリリン酸と反応させることにより達成される。示したように、４−メトキシフェニル部分はカチオン転位を介してベンゾチフェンの２位に配置される傾向がある。次いで、２−アリール−ベンゾ（ｂ）チオフェン中間体をFriedel-Crafts環境下でアリールアシルハロゲン化物と反応させる。求電子的置換は、主として、示したチオフェン環の３位（Ｃ₃）に生じる。この群の最も好ましい化合物を製造するには、４−メトキシ基をシアノまたはニトリル基で置換するが、この置換には、求電子性が低いためより多くの触媒が存在する必要がある。２．ベンゾ（ｂ）フラン群本群の化合物を合成するための一般的反応式を下記の反応式ＩＩに示す。一般的に上記反応式はベンゾフラン群の最も好ましい化合物である［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）ベンゾ［ｂ］フラン−３−イル］−３（４ −シアノフェニル）−メタノンの合成を示す。３−（４−メトキシフェニル）中間体化合物の合成はDuraniとKapilの、A Convenient Synthesis of 2-Aryl-3 Ar oylbenzo[b] furans，Indian Journal of Chemistry，Vol.22B，1983年５月、48 9-490頁に詳細に記載されている。反応式ＩＩに示すように、２−ヒドロキシ− ４−メトキシベンズアルデヒドを、強酸中でジアリールケトンと反応させ、示したベンゾピリリウム塩中間体化合物を形成させる。次いで、この中間体を酸化し、当業者によく知られている［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）− ベンゾ［ｂ］フラン−３−イル］−３−（４−メトキシフェニル）メタノン中間体を製造する。次に、この中間体をよく知られた手順によって脱アルキル化し、示した４−ヒドロキシ中間体を形成させる。次に、２段階工程を用いて４−ヒドロキシ部分を上記のニトリル基に変換する。最初に、このヒドロキシ基はトリフレートエステル誘導体に変換し、次いでこの化合物を触媒存在下でシアン化物源と反応させ、好ましい化合物への変換を完了する。メトキシ部分をシアノ部分に変換するための一般的手順は一部ChambersとWiddowsonの、Nickel Catalysed Conversion of Phenol Triflates to Aromatic Nitriles and Acids，J.Chem.Soc.Perkin Trans .I,1989,1365頁に記載されている。変換のための好ましい試薬は、ヒドロキシ− トリフレート変換を生じる非極性溶媒中のトリエチルアミンならびにトリフリミド（（ＣＦ₃ＳＯ₂）₂Ｎフェニル）と、そしてトリフレートをシアノに変換させるアセトニトリル、シアン化カリウム、ならびにニッケル−ビス−トリフェニルホスフィンクロリドと亜鉛末金属およびトリフェニルホスフィンである。反応式Ｉに従って、好ましい化合物の誘導体化合物は当業者もしくは同じ化学作用によって容易に製造される。他のベンゾ［ｂ］フラン誘導体は以下の反応式ＩＩＩに示す。上記反応式はフラン環と３−（４−メトキシフェニル）環の間に種々の架橋を有する種々のベンゾ［ｂ］フラン誘導体の合成を示している。反応式ＩおよびＩＩに示すように、典型的な架橋はカルボニル基である。反応式ＩＩＩは、２つの異なる架橋基、すなわち、カルビノールとメチレンの形成を示す。これらすべての化合物は好ましくは、示した工程によって（４−メトキシフェニル）−メタノン塩基中間体から形成される。反応式Ｉ−ＩＩ中の他のすべての工程を用いるこれらの工程の詳細な説明は、本明細書の以下の特定の実施例中に示されよう。最終的に好ましいベンゾ［ｂ］フラン化合物は以下の反応式ＩＶに一般的に略述されたようにベンゾ［ｂ］フラン中間体のFriedel-Craftsアシル化を介して合成することができ、特定の実施例に詳細に定義される。上記反応式ＩＶのための一般的方法はJ.Astoinの、J.Heterocyclic Chemistry ,1977,Vol.14,861-869頁に記載されている。以下の特定の実施例は本発明を限定するものと考えるべきではなく、単に、現時点で最も好ましい化合物を合成するための最良の方法を例示しているだけである。実施例１ α−（３’−メトキシフェノキシ）−４−メチルアセトフェノンの合成４−メチル−α−ブロモアセトフェノン５１．０５ｇ（０．２４モル）を無水（ジメチルホルムアミド）ＤＭＦ２００ｍＬに溶解させ、さらに３−メトキシフェノール３５ｇ（０．２８モル）を加えた。反応混合物をメカニカルスターラーで撹拌し、無水Ｋ₂ＣＯ₃８０ｇ（０．５８モル）を加えた。この反応を、窒素環境下、周囲温度で進行させた。１８時間後、この反応混合物を濾過して無機塩を除去した。ＤＭＦを減圧蒸発によって除去し、得られる濃厚な油状物をＥｔＯＡｃ２５０ｍＬに溶解し、塩水で洗浄した。ＥｔＯＡｃ層を取り出し、無水Ｎａ₂ ＳＯ₄を介する濾過によって乾燥し、次いでこの溶媒を蒸発によって除去した。得られる油状物をＥｔ₂Ｏから結晶し、淡黄色固形の標記化合物３７ｇを得た。ＰＭＲ：提唱された構造と一致ＭＳ：ｍ／ｅ＝２５６（Ｍ＋）ＦＤＥＡ：理論値：Ｃ，７４．９８；Ｈ，６．２９実測値：Ｃ，７５．１７；Ｈ，６．３８実施例２６−メトキシ−２−（４−メチルフェニル）ベンゾ［ｂ］フランの合成２−（３−メトキシフェノキシ）−４’−メチルアセトフェノン３０ｇ（０．１２モル）をキシレン３００ｍＬに溶解し、次いでポリリン酸（ＰＰＡ）４５ｇを加えた。この反応混合物をマグネチックスターラーで撹拌し、窒素環境下に保った。この反応物を１８時間加熱還流した（１３５℃）。反応物を約９０℃に冷却し、水５００ｍＬを加えた。反応物をＰＰＡがすべて水層に溶解するまで撹拌した。キシレン層を取り出し、水で２回抽出した。このキシレン層を無水Ｎａ₂ ＳＯ₄で濾過して乾燥し、蒸発させて溶媒を除去した。得られた固形物を熱い酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）から結晶し、白色固形の標記化合物５ｇを得た。ＰＭＲ：提唱された構造と一致ＭＳ：ｍ／ｅ＝２３８（Ｍ＋）ＦＤＥＡ：理論値：Ｃ，８０．６５；Ｈ，５．９２実測値：Ｃ，８０．５７；Ｈ，５．９７Ｃ₁₆Ｈ₁₄Ｏ₂ＭＷ＝２３８．２９実施例３［６−メトキシ−２−（４−メチルフェニル）ベンゾ［ｂ］フラン−３−イル］［４−シアノフェニル］メタノンの合成６−メトキシ−２−（４−メチルフェニル）ベンゾ［ｂ］フラン１ｇ（４．２ｍモル）をジクロロメタン２５ｍＬに溶解し、次いで４−シアノベンゾイルクロリド８３０ｍｇ（５．０ｍモル）を加えた。この反応物を撹拌し、窒素環境下に保った。この反応混合物にＴｉＣｌ₄２．７５ｍＬ（２５ｍモル）を徐々に加えた。反応を４時間進行させ、メタノール（ＭｅＯＨ）５ｍＬを加えて反応を止めた。溶媒を蒸発させて除去し、粗物質をヘキサン−ＥｔＯＡｃ（９：１）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけた。所望の分画をｔｌｃによって決定し、混合し、次いで蒸発させて固体とした。得られた生成物をジエチルエーテル（Ｅｔ₂Ｏ）から結晶した。これにより、黄色粉末状の標記化合物３２５ｍｇが得られた。ＰＭＲ：提唱された構造と一致ＭＳ：ｍ／ｅ＝３６８（Ｍ＋）ＦＤＥＡ：理論値：Ｃ，７８．４６；Ｈ，４．６６；Ｎ，３．８１実測値：Ｃ，７８．２８；Ｈ，４．６１；Ｎ，３．５２実施例４［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−ベンゾ［ｂ］フラン−３− イル］−３−（４−ヒドロキシフェニル）−メタノンの合成ＤＭＦ４０ｍＬ中の［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−ベンゾ［ｂ］フラン−３−イル］−３−（４−メトキシフェニル）−メタノン２ｇ（５．１５ｍモル）およびナトリウムエタンチオール１．３ｇ（１５．４５ｍモル）の懸濁液を８０℃に加熱し、ＴＬＣ３５％酢酸エチル：ヘキサンで２０分ごとにチェックした。４時間後に出発物質が消費されたとき、この混合物を室温に冷却し、酢酸エチル１５０ｍＬで希釈し、１ＮＨ₂ＳＯ₄（１００ｍＬ）で２回洗浄した。次に、有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、ロートベープ（rotovape）して褐色油状物とし、次いでこれを３５％酢酸エチル：ヘキサンを用いるシリカ重力クロマトグラフィーによって精製した。輝黄色固形の標記化合部化合物１．１５ｇ（収率６０％）を得た。ＰＣｈｅｍ：ＮＭＲＱＥ３００ＭＨｚｄ６−ＤＭＳＯ中：（３．８５ｐｐｍ，ｓ，３Ｈ），（３．９０ｐｐｍ，ｓ，３Ｈ），（６．８５ｐｐｍ，ｄ，２Ｈ），（６．９５ｐｐｍ，ｄｄ，１Ｈ），（７．００ｐｐｍ，ｄ，２Ｈ），（７．３０ｐｐｍ，ｄｓ，１Ｈ），（７．４０ｐｐｍ，ｓ，１Ｈ），（７．６０ｐｐｍ，ｄ，２Ｈ），（７．７５ｐｐｍ，ｄ，２Ｈ）。実施例５［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−ベンゾ［ｂ］フラン−３− イル］−３−（フェニル−４−トリフレート）−メタノンの合成実施例４の中間体１．１５ｇ（３．０７ｍモル）の溶液を、トリ−エチルアミン０．９２ｍＬ（６．６１ｍモル）を含む塩化メチレン４０ｍＬに溶解した。これに１５分かけて塩化メチレン１０ｍＬ中のトリフリミド１．１５ｇ（３．２３ｍモル）の溶液を加えた。添加後、混合物を室温で４８時間撹拌した。次に、この混合物を塩化メチレン１００ｍＬで希釈し、１ＮＨ₂ＳＯ₄で２回、脱イオン水で２回、飽和ＮａＨＣＯ₃で２回、次いでさらに水で１回洗浄した。Ｎａ₂ＳＯ₄ で乾燥し、黄色非晶質物質である標記化合物１．４ｇ（８９．７％）を得た。ＰＣｈｅｍ：ＮＭＲＱＥ３００ＭＨｚＣＤＣｌ₃中：（３．８０ｐｐｍ，ｓ，３Ｈ），（３．９０ｐｐｍ，ｓ，３Ｈ），（６．７５ｐｐｍ，ｄ，２Ｈ），（６．９５ｐｐｍ，ｄｄ，１Ｈ），（７．１０ｐｐｍ，ｄｓ，１Ｈ），７．２０ｐｐｍ，ｄ，２Ｈ），（７．４５ｐｐｍ，ｄ，２Ｈ），（７．６０ｐｐｍ，ｄ，１Ｈ），（７．８５ｐｐｍ，ｄ，２Ｈ）。ＭＳＦＤ＋＝５０６。実施例６［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−ベンゾ［ｂ］フラン−３−イル］−３−（４−シアノフェニル）−メタノンの合成ＫＣＮ１５６ｍｇ（２．３９ｍモル）、ニッケルトリフェニルホスフィンジクロリド７１ｍｇ（０．１０９ｍモル）、トリフェニルホスフィン５７ｍｇ（０．２１７ｍモル）、および亜鉛末４３ｍｇ（０．６５２ｍモル）を含有する乾燥アセトニトリル４ｍＬ中の実施例５の化合物１．１ｇ（２．１７ｍモル）の溶液を６５℃で２時間加熱した。次に、この混合物を室温に冷却し、塩化メチレン１００ｍＬで希釈し、水で２回洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥した。次に、この混合物を１００％塩化メチレンを用いるシリカフラッシュクロマトグラフィーで精製し、回転蒸発して乾燥し、１００％酢酸エチルから結晶して、標記化合物５８０ｍｇ（７０％）を得た。ＰＣｈｅｍ：ＮＭＲＱＥ３００ＭＨｚｄ６−ＤＭＳＯ中：（３．７５ｐｐｍ，ｓ，３Ｈ），（３．８５ｐｐｍ，ｓ，３Ｈ），（６．８５ｐｐｍ，ｄ，２Ｈ），（６．９５ｐｐｍ，ｄｄ，１Ｈ），（７．３５ｐｐｍ，ｄｓ，１Ｈ），（７．４５ｐｐｍ，ｄ，２Ｈ），（７．５０ｐｐｍ，ｄ，１Ｈ），（７．８０ｐｐｍ，ｓ，４Ｈ）。ＭＳＦＤ＋＝３８４。Ｃ₂₄Ｈ₁₇ＮＯ₄の理論ＥＡ（理論値／実測値）：Ｃ，７５．１９／７５．３５；Ｈ，４．４７／４．５２；Ｎ，３．６５／３．６６。実施例７［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）ベンゾ［ｂ］チエン−３−イル］［４−メトキシフェニル］メタノンの合成塩化メチレン１００ｍＬ中の６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）ベンゾ［ｂ］チオフェン１．５４ｇ（９ｍモル）およびｐ−塩化アニソイル１．６２（６ｍモル）の溶液を調製し、０℃に冷却した。これに５分間かけてＡｌＣｌ₃ １．２０ｇ（９ｍモル）を少量ずつ加えた。１時間後、この反応混合物を氷水１５０ｍＬに注ぎ入れ、塩化メチレン各７５ｍＬで３回抽出した。塩化メチレン抽出物を混合し、１ＮＮａＯＨ３０ｍＬ、次いで水で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させて乾燥した。粗生成物をヘキサン中の３０％ＥｔＯＡｃで溶出するシリカクロマトグラフィーにかけた。生成物をアセトン−メタノールから結晶した。これにより淡黄色固形の標記化合物２．１１ｇを得た。ＰＭＲ：提唱された構造に一致ＭＳｍ／ｅ＝４０４（Ｍ＋）。ＥＡ：理論値：Ｃ，７１．２７；Ｈ，４．９８；Ｓ，７．９３；Ｏ，１５．８２。実測値：Ｃ，７１．５０；Ｈ，５．００；Ｓ，７．９８；Ｏ，１５．７７。Ｃ₂₄Ｈ₂₀Ｏ₄Ｓ実施例８［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）ベンゾ［ｂ］チエン−３−イル］［４−ヒドロキシフェニル］メタノンの合成ＤＭＦ２ｍＬ中の［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）ベンゾ［ｂ］チエン−３−イル］［４−メトキシフェニル］メタノン０．４ｇ（１ｍモル）の溶液をＤＭＦ中の０．５Ｍナトリウムエタンチオール３ｍＬの溶液に加えた。この反応混合物を４時間８０℃に加熱した。反応混合物を冷却し、水１０ｍＬおよびEｔＯＡｃ１０ｍＬで希釈し、１ＮＨＣｌで中和した。反応混合物をＥｔＯＡｃ各３０ｍＬで３回抽出した。混合有機抽出物を塩水各２０ｍＬずつで４回洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、蒸発させて乾燥した。粗生成物をヘキサン中の３０％ＥｔＯＡｃで溶出するシリカクロマトグラフィーにかけ、蒸発させて乾燥した。これにより黄色固形の標記化合物０．３１ｇを得た。ＰＭＲ：提唱された構造に一致ＭＳｍ／ｅ＝３９０（Ｍ＋）ＦＤ。ＥＡ：理論値：Ｃ，７０．７５；Ｈ，４．６５。実測値：Ｃ，７０．９３；Ｈ，４．５６。Ｃ₂₃Ｈ₁₈Ｏ₄Ｓ実施例９［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）ベンゾ［ｂ］チエン−３−イル］［４−トリフルオロメチルスルホニルオキシフェニル］メタノンの合成塩化メチレン１００ｍＬおよびトリエチルアミン１．５７ｇ（１５．５ｍモル）中の［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）ベンゾ［ｂ］チエン−３ −イル］［４−ヒドロキシフェニル］メタノン３ｇ（７．７ｍモル）の溶液を調製した。この反応混合物に塩化メチレン５０ｍＬ中のトリフリミド２．８ｇ（７．７２ｍモル）の溶液を３０分間かけて徐々に加えた。窒素環境下、室温で１６時間反応を進行させた。反応混合物を１ＮＨ₂ＳＯ₄ １００ｍＬ、次いで２ＮＮａＯＨ１００ｍＬで３回、そして最後に水１００ｍＬで洗浄した。有機層を無水Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、生成物を結晶させた。これにより黄色固形の標記化合物２．５ｇを得た。ＰＭＲ：提唱された構造に一致ＭＳｍ／ｅ＝５２２（Ｍ＋）ＦＤ。ＥＡ：理論値：Ｃ，５５．１７；Ｈ，３．２８。実測値：Ｃ，５４．３７；Ｈ，３．２１。実施例１０［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）ベンゾ［ｂ］チエン−３−イル］［４−シアノフェニル］メタノンの合成実施例７の化合物２ｇ（３．８３ｍモル）の懸濁液を、ＫＣＮ２７４ｍｇ（４．２１ｍモル）、ニッケルトリフェニルホスフィンジクロリド１２５ｍｇ（０．１９ｍモル）、トリフェニルホスフィン１０１ｍｇ（０．３８ｍモル）、および亜鉛末３８ｍｇ（０．５８ｍモル）を含有する無水アセトニトリル５ｍＬ中で調製した。この反応混合物を窒素環境下、９０分間６５℃に加熱した。反応混合物を室温に冷却し、塩化メチレン１００ｍＬで希釈した。反応混合物を濾過し、水各１５０ｍＬで２回洗浄した。有機層を無水Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させた。粗生成物をＭｅＯＨから２回再結晶した。これにより黄色粉末の標記化合物１．１ｇを得た。ＰＭＲ：提唱された構造に一致ＭＳｍ／ｅ＝３９９（Ｍ＋）ＦＤ。ＥＡ：理論値：Ｃ，７２．１６；Ｈ，４．２９；Ｎ，３．５１。実測値：Ｃ，７１．９６；Ｈ，４．３３；Ｎ，３．５０。Ｃ₂₄Ｈ₁₇ＮＯ₃Ｓ実施例１１［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）ベンゾ［ｂ］フラン−３−イル］［４−シアノフェニル］メタノンの別の合成塩化メチレン３Ｌ中の６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）ベンゾ［ｂ］フラン１６０ｇ（０．６３モル）および４−シアノベンゾイルクロリド１５４．３ｇ（０．９３モル）の溶液を調製した。この溶液にＴｉＣｌ₄２０３．６ｍＬ（１．８５モル）を徐々に加えた。この反応混合物を窒素環境下で４時間加熱還流した。反応混合物を氷３ｋｇに注ぎ、１６時間で反応を止めた。有機層を分配し、２０％ＮａＨＣＯ₃溶液各５Ｌで２回洗浄し、最後に塩水５Ｌで洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ₄で乾燥し、蒸発させて油状物とした。粗生成物を２０％ＥｔＯＡｃ−ＣＨ₂Ｃｌ₂で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけた。これにより１５６ｇを得、これを再度、２０％ＥｔＯＡｃ−Ｅｔ₂Ｏで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけてさらに精製し、溶出溶媒から結晶した。これにより黄色粉末の標記化合物１００．１ｇを得た。実施例１２６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）ベンゾ［ｂ］チエン−３−イル］［４−ｎ−プロピルオキシフェニル］メタノンの合成ＤＭＦ２０ｍＬ中の［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）ベンゾ［ｂ］チエン−３−イル］［４−ヒドロキシフェニル］メタノン１．１７ｇ（３ｍモル）の溶液を調製した。この溶液に炭酸カリウム１．０３ｇ（７．５０ｍモル）を加え、この混合物を１００℃に加熱した。１５分後、１−ブロモプロパン２．７３ｍＬ（３０ｍモル）を加え、この反応物をさらに４０分間加熱した。この反応混合物を冷却し、濾過した。濾液を水２５ｍＬに加え、これをＥｔＯＡｃ各２０ｍＬで３回抽出した。混合抽出物を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、蒸発させて固体とした。これにより標記化合物を収率８０％で得た。ＰＭＲ：提唱された構造に一致ＭＳｍ／ｅ＝４３２（Ｍ＋）ＦＤ。ＥＡ：理論値：Ｃ，７２．２０；Ｈ，５．５９。実測値：Ｃ，７２．００；Ｈ，５．６５。Ｃ₂₆Ｈ₂₄ＮＯ₄Ｓ実施例１３［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）ベンゾ［ｂ］チエン−３−イル］［４−ｎ−ブチルオキシフェニル］メタノンの合成実施例１２と同じ方法で、黄色固形の標記化合物（収率７７％）を製造した。ＰＭＲ：提唱された構造に一致ＭＳｍ／ｅ＝４４６（Ｍ＋）ＦＤ。ＩＲ：３０１１，２９６３，２９３８，１５９９，１４７６，１２５４，１１６６ｃｍ^-1（ＣＨＣｌ₃）実施例１４［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）ベンゾ［ｂ］フラン−３−イル］［４−メトキシフェニル］メタノンの合成アシル化剤にｐ−アニソイルクロリドを用い、実施例３と同じ方法で、標記化合物を製造した。実施例１５［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）ベンゾ［ｂ］フラン−３−イル］［４−メトキシフェニル］メタノールの合成［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）ベンゾ［ｂ］フラン−３−イル］［４−メトキシフェニル］メタノン１ｇ（２．５６ｍモル）の溶液をＴＨＦ２５ｍＬ中で製造した。この溶液に、ＬｉＡｌＨ₄１ｇ（２５．４ｍモル）を１０分間かけて少量ずつ加えた。室温、窒素環境下で反応を進行させた。１６時間後、水５ｍＬを加えて反応を止めた。この懸濁液に１５％（ｗ／ｗ）ＮａＯＨ３ｍＬ、次いで水３ｍＬを加えた。この懸濁液を濾過した。得られた濾液を２層に分けた。上（有機）層をとり、蒸発させて乾燥させた。粗生成物をＣＨＣｌ₃ で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにかけた。これにより、無色ゴム状の標記化合物８００ｍｇを得た。ＰＭＲ：提唱された構造に一致ＭＳｍ／ｅ＝３９０（Ｍ＋）ＦＤ。ＥＡ：理論値：Ｃ，７３．８３；Ｈ，５．６８。実測値：Ｃ，７４．１０；Ｈ，５．６６。実施例１６［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）ベンゾ［ｂ］フラン−３−イル］［４−メトキシフェニル］メタンの合成［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）ベンゾ［ｂ］フラン−３−イル］［４−メトキシフェニル］メタノール４００ｍｇ（１．０２ｍモル）の溶液をｎ−プロピルベンゼン１０ｍＬに溶解し、次いでこの溶液に、ＬｉＡｌＨ₄ ２００ｍｇｇ（５．２５ｍモル）を加えた。この反応混合物を窒素環境下で４５分間加熱還流した。１６時間後、水５ｍＬを加えて反応を止めた。この懸濁液に１５％（ｗ／ｗ）ＮａＯＨ３ｍＬ、次いで水３ｍＬを加えた。この懸濁液を濾過した。得られた濾液を２層に分けた。上（有機）層をとり、蒸発させて乾燥させた。粗生成物をヘキサン中の２０％ＥｔＯＡｃで溶出するクロマトグラフィーにかけた。最終生成物をエーテルから結晶した。これにより、低融点の固形である標記化合物１００ｍｇを得た。ＰＭＲ：提唱された構造に一致ＭＳｍ／ｅ＝３７４（Ｍ＋）ＦＤ。他の式Ｉの化合物の製造法は当該技術分野でよく知られているか、または所望の終末化合物に応じて、上記手順のいずれか１つに従い、異なった別の試薬を用いることによって容易に置き換えられる。本発明の化合物は好ましくは投与する前に処方される。したがって、本発明の別の目的は、式Ｉの化合物と医薬的に許容される担体、希釈剤、もしくは賦形剤を含む医薬製剤である。本医薬製剤はよく知られた、容易に利用可能な成分をを用いる知られた方法によって製造される。本発明の組成物を製造するには、活性成分を通常担体と混合するかもしくは担体で希釈するか、またはカプセル、サシェー、紙、または他の容器の形であってよい担体内に包まれるであろう。担体を希釈剤として用いる場合は、担体は固形、半固形、または活性成分のビークル、賦形剤もしくは媒質として作用する液体物質であってよい。この組成物は錠剤、丸剤、粉末剤、トローチ剤、サシェー剤、カシェー剤、エリキシル剤、懸濁剤、エマルジョン剤、溶液剤、シロップ剤、エアロゾル剤、例えば１０重量％までの活性成分を含む軟膏、軟および硬ゼラチンカプセル剤、坐剤、無菌注射溶液剤、および無菌包装粉末剤の形であり得る。適切な担体、賦形剤、および希釈剤の例には、乳糖、デキストロース、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、デンブン、ゴム、アカシア、リン酸カルシウム、アルギネート、トラガカント、ゼラチン、珪酸カルシウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水シロップ、メチルセルロース、メチルおよびプロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウム、および鉱物油が含まれる。該製剤にはさらに潤滑剤、湿潤剤、乳化剤・懸濁化剤、保存剤、甘味剤、もしくは香味剤が含まれる。本発明の組成物は当該技術分野でよく知られた方法を用いて患者に投与した後に、活性成分が速やかにか、持続的に、もしくは遅れて放出されるように製剤化してよい。この組成物は各用量として活性成分約５〜約５００ｍｇ、より好ましくは約２５〜約３００ｍｇを含有する単位投与剤形に製剤することが好ましい。最も好ましい単位投与剤形は活性成分約１０〜約２００ｍｇを含有する。用語「単位投与剤形」とは、各単位が所望の治療効果をもたらすように計算された活性成分の予め決定された量を適切な医薬担体と一緒に含む、ヒト対象および他の哺乳動物のための単位用量として適切な物理的に分離した単位をいう。以下の製剤例は、単に例示であって、本発明の範囲を何ら限定するものではない。製剤例１硬ゼラチンカプセルは以下の成分を用いて製造される。量（ｍｇ／カプセル）活性成分２５０デンプン（乾燥）２００ステアリン酸マグネシウム１０総量４６０ｍｇ上記成分を混合し、４６０ｍｇ量を硬ゼラチンカプセルに充填する。製剤例２錠剤は以下の成分を用いて製造される。量（ｍｇ／錠）活性成分２５０セルロース（微結晶）４００二酸化シリコン（発煙）１０ステアリン酸５総量６６５ｍｇ成分を混合し、圧縮して重量６６５ｍｇの錠剤を形成する。製剤例３以下の成分を含有するエアロゾル溶液を製造する。重量％活性成分０．２５エタノール２９．７５プロペラント２２７０．００（クロロジフルオロメタン）総量１００．００活性化合物をエタノールで混合し、この混合物をプロペラント２２の一部に加え、−３０℃に冷却し、充填装置に移した。次に、所要量をステンレススチール容器に入れ、残りのプロペラントで希釈する。次いでバルブ装置を容器に装着する。製剤例４活性成分６０ｍｇを含有する錠剤を以下のごとく製造する。活性成分６０ｍｇデンプン４５ｍｇ微結晶セルロース３５ｍｇポリビニルピロリドン４ｍｇナトリウムカルボキシメチルデンプン４．５ｍｇステアリン酸マグネシウム０．５ｍｇタルク１ｍｇ総量１５０ｍｇ活性成分、デンプン、およびセルロースをＮｏ．４５メッシュＵ．Ｓ．ふるいに通し、完全に混合する。得られる粉末とポリビニルピロリドンの溶液を混合し、次いでＮｏ．１４メッシュＵ．Ｓ．ふるいに通す。そのように製造した顆粒を５０℃で乾燥し、Ｎｏ．１８メッシュＵ．Ｓ．ふるいを通す。次にこの顆粒に、予めＮｏ．６０メッシュＵ．Ｓ．ふるいを通した、ナトリウムカルボキシメチルデンプン、ステアリン酸マグネシウム、およびタルクを加えて混合した後、打錠器で圧縮して重量１５０ｍｇの錠剤を得る。製剤例５活性成分各８０ｍｇを含有するカプセルを以下のごとく製造する。活性成分８０ｍｇデンプン５９ｍｇ微結晶セルロース５９ｍｇステアリン酸マグネシウム２ｍｇ総量２００ｍｇ活性成分、セルロース、デンプン、およびステアリン酸マグネシウムをＮｏ．４５ふるいに通し、２００ｍｇ量を硬ゼラチンカプセルに充填する。製剤例６活性成分各２２５ｍｇを含有する坐剤は以下のごとく製造してよい。活性成分２２５ｍｇ飽和脂肪酸グリセリド２０００ｍｇ総量２２２５ｍｇ活性成分をＮｏ．６０メッシュＵ．Ｓ．ふるいに通し、予め必要最小限の熱で溶かした飽和脂肪酸グリセリドに懸濁した。次に、この混合物を表示容量２ｇの坐剤鋳型に注ぎ入れ、冷却した。製剤例７用量５ｍＬあたり活性成分５０ｍｇを含有する懸濁剤を以下のごとく製造する。活性成分５０ｍｇナトリウムカルボキシメチルセルロース５０ｍｇシロップ１．２５ｍＬ安息香酸溶液０．１０ｍＬ香味剤適宜着色剤適宜精製水終量５ｍＬ活性成分をＮｏ．４５メッシュＵ．Ｓ．ふるいに通し、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよびシロップと混合し、なめらかなペーストとする。安息香酸溶液、香味剤、および着色剤をいくらかの水で希釈してペーストに加え、撹拌する。次いで、十分量の水を加え、所要量とする。製剤例８静注用製剤は以下のごとく製造してよい。活性成分１００ｍｇマンニトール１００ｍｇ精製水終量２００ｍＬカンナビノイドリセプターを刺激することで種々の生理機能に影響がみられることが示されている。本発明の式Ｉの化合物は、カンナビノイド刺激に関連するヒトを含む哺乳動物の種々の障害を治療する能力を有すると考えられている。そのような障害には、鬱病、認識機能障害、記憶低下、敏捷性ならびに知覚・認知の低下が含まれるがこれらに限定されるものではない。式Ｉの化合物はカンナビノイドリセプターのアンタゴニストとして作用する。カンナビノイドリセプターに対する式Ｉの化合物のアンタゴニスト活性を証明するための実験を行なった。式Ｉの化合物の、［１α、２β−（Ｒ）−５α］− （−）−５−（１，１−ジメチルペプチル）−２−［５−ヒドロキシ−２−（３ −ヒドロキシプロピル）シクロヘキシル−フェノール（ＣＰ−５５９４０）の結合阻害能、および細胞へのｃＡＭＰの蓄積を増大させる能力について試験した。カンナビノイドリセプタークローンの細胞培養と安定な発現チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）およびネズミＬｔｋ細胞は、Amer ican Type Culture Collection（Rockville,MD）から得た。ＣＨＯ細胞は、５％ＣＯ₂環境中、１０％ウシ胎児血清、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ）、ペニシリン（５０Ｕ／ｍＬ）、およびストレプトマイシン（５０ｕｇ／ｍＬ）で置換したα− ＭＥＭからなる増殖培地中で維持された。Ｌｔｋ細胞は、５％ＣＯ₂中、ウシ胎児血清（１０％）、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ）、ペニシリン（５０Ｕ／ｍＬ）、およびストレプトマイシン（５０ｕｇ／ｍＬ）を含有するダルベッコ改良基礎培地（０．４５％グルコース）中で培養された。ラットカンナビノイドリセプターｃＤＮＡはＣＨＯ細胞中で安定して発現された。ヒトカンナビノイドリセプター遺伝子の完全なコード領域を含む２．２キロベース（ｋｂ）Ｓｓｔ１−ＥｃｏＲ１断片をｐＣＤ−ＰＳベクターのＳｓｔ１およびＥｃｏＲ１部位にサブクローンし、これをリン酸カルシウム沈降法を用いてＣＨＯ細胞にトランスフェクトした。リセプター含有プラスミドを、同じように作製されたネオマイシン耐性遺伝子を含むプラスミドと共トランスフェクトした。トランスフェクション後、この細胞をネオマイシンで選択し、個々のネオマイシン耐性クローンを増殖させて細胞系を樹立した。ヒトカンナビノイド（ＣＢ−１）ｃＤＮＡは、リセプターの発現レベルを増幅させるように設計された以下の構造を有するＬ細胞中で安定して発現し、これにより放射性リガンド結合アッセイに必要な細胞数は低下した。ヒトカンナビノイドリセプター遺伝子の完全なコード領域を含む２．２キロベース（ｋｂ）Ｓｓｔ１−ＥｃｏＲ１断片をｐＣＤ−ＰＳベクターのＳｓｔ１およびＥｃｏＲ１部位にサブクローンし、プラスミドｈＳＫＲ６ｐ１を作製した。ｈＳＫＲ６ｐ１から３．３ｋｂＳａｌｌ−Ｎｄｅｌ断片を取り出し、その末端を平滑にした後、プラスミドｐｔｋｍｕＡＲＳ−４の平滑Ｓａｌｌ部位に挿入した。得られたプラスミドは、クローニングベクターｐＣＤに最初に組み込まれたＳＶ４０初期領域プロモーターおよびポリアデニル化配列と隣合ったリセプター遺伝子コード配列を含んでいた。このプラスミドは、リン酸カルシウム沈降法によってネズミＬｔｋ細胞にトランスフェクトされた。トランスフェクション後、Ｌ細胞はＨＡＴ培地中で選択された。３〜４週間後に個々のＨＡＴ耐性クローンを分離し、増殖させて樹立細胞系を得、少なくとも３カ月間培養して、リセプターの発現を安定化させた。このようにして、ヒトＣＢ−１リセプターを発現する２つの細胞系（すなわち、ＣＨＯおよびＬｔｋ）が樹立された。原形質膜の製造１７５ｃｍ²培養フラスコ中で増殖し、コンフルエントとなったＬｔｋ細胞を冷リン酸緩衝生理食塩水で１回洗浄し、２００ｍＭショ糖を加えたアッセイ緩衝液（５０ｍＭトリス、５ｍＭＥＤＴＡ、５ｍｇ／ｍＬＢＳＡ、ｐＨ７．４）中に掻き取った。次に、細胞を１０００×ｇで４℃、１０分間遠心した。上清を捨て、ペレットを氷冷アッセイ緩衝液中に再懸濁し、Tekmar Tissumizer(Cincinna ti,0H,USA)を用いて最大速度の９５％で３０秒間ホモゲナイズし、次いで２０００×ｇで、２〜４℃、１５分間遠心した。上清を４３０００×ｇで３０分間再度遠心した。２００ｍＭショ糖を含有する、最少量のアッセイ緩衝液にペレットを再懸濁させ、使用するまで−８０℃に保存した。すべての実験は、ジクロロメタン／トルエン（１：１０ｖ／ｖ）に１時間、次いでメタノールに３０分間浸漬し、次いで最後に１００％メタノールですすいだガラス試験管中で行なった。試験管は使用前に一夜空気乾燥させた。放射性リガンド結合アッセイ競合および飽和結合アッセイは［³Ｈ］ＣＰ５５９４０を放射性リガンドに用いて行なわれた。急速濾過結合アッセイ（Felder,C.C.らの、Proc.Natl.Acad.Su .,90,7656-7660頁(1993)参照）は、以前に公表された方法に基づき、以下の改良を施して開発された。すべてのリガンドは、５０ｍｇ／ｍＬ脂肪酸不含ＢＳＡを含有するアッセイ緩衝液（ＢＳＡの最終濃度は５ｍｇ／ｍＬ未満）で希釈された。アッセイ溶液を、最終膜濃度を４０〜４００μｇ蛋白／ｍＬとし、最終アッセイ容量０．５ｍＬで、シリコン処理試験管中で３０℃、１時間インキュベーションした。膜を、Inotech(Lansing，MI)９６または４８−位セルハーベスターを用い、０．１％ポリエチレンイミン（ｖ／ｗ）（ｐＨ７．４）で前処理したＧＦ／Ｂフィルター（Whatman，Maidstone，England）で急速に濾過した。膜を、氷冷洗浄用緩衝液ｊ（５０ｍＭトリス、０．５ｍｇ／ｍＬＢＳＡ、ｐＨ７．４）３ｍＬで３回洗浄した。洗浄した膜を含むフィルターを、シンチレーションバイアルに移し、各バイアルに０．１％（ｖ／ｖ）トリトンＸ−１００１ｍＬを加えて一夜インキュベーションし、次いでシンチレーションカクテル（Hydrofluor; National Diagnostics，Manville，NJ）を加えた。蛋白濃度は、記載したようにバイオインコニニック（bioinchoninic）酸蛋白試薬（Pierce，Rockford，IL）を用いて測定された。結合試験データは、加重非線形最小自乗曲線をFeldmanの一般モデルに適合させる、ＬＩＧＡＮＤプログラムもしくはＧｒａｐｈＰａｄプログラム（GraphPad Software，San Diego，CA）を用いて分析された。式Ｉの化合物の、有力で特異的な結合の結果を表１に示す。ｃＡＭＰ蓄積のアッセイこのアッセイの目的は、ＣＢ−１シグナル形質導入経路に対するＣＢ−１結合化合物の影響を証明すること、すなわち、結合化合物がin vitroでアゴニストまたはアンタゴニストとして働くかどうかを確証することである。ＣＨＯ細胞は、アナンダミドを含むかまたは含まない、ホルスコリン（１０^-6 Ｍ）含有増殖培地中で４時間プレインキュベーションされた。この増殖培地を、示したアンタゴニストを含むかまたは含まない、ホルスコリン（１０^-6Ｍ）およびアナンダミド含有血清不含増殖培地と交換した後、５分間サイクリックＡＭＰの蓄積を測定した。データはトリプリケートで行なった３回の実験の平均±Ｓ．Ｅ．である。実施例６の化合物についての結果を表２に示す。このアッセイにおいて、ホルスコリン（ＦＳＫ）はｃＡＭＰレベルをその基礎レベル（ＢＳＬ）以上に上昇させる。アナンダミド（ＡＮＭ）の添加はホルスコリンによって誘導されるｃＡＭＰの上昇を阻害する。実施例６の化合物はアナンダミドの生物学的作用を阻害する（すなわち、ＩＣ₅₀約５００ｎＭで、アナンダミドによって生じるｃＡＭＰの低下を打ち消す）。Ｎタイプカルシウムチャンネル電流に対する影響この一連の実験において、式Ｉの化合物は、その内在性リガンドであるアナンダミドによって活性化されるとＣＢ−１リセプターと結合してＣＢ−１のシグナル形質導入経路を阻害するだけでなく、さらに、in vitroのＣＢ−１シグナル経路の調節下で他の神経細胞オルガネラ（細胞小器官）にも作用することが証明されている。すなわち、式Ｉの化合物は、アナンダミドもしくはカンナビノイドによって閉じるＮ−タイプのカルシウムチャンネルを開く（Mackie,K.とHille,B. の、Proc.Natl.Acad.Sci.,89,3825-3829頁(1992)参照）。物質ＤＭＥＭはBiowhittakerとGIBCOから得、ＦＢＳはHyCloneから、ウシ血清アルブミン（脂肪酸不含）、ジメチル−スルフォキシド、ならびにＮＥＭはSigmaから、ＰＴＸはListから、ω−ＣｇＴＸはPeninsula Labsから、またテトロドトキシンはCalbiochemから得た。ＷＩＮ５５２１２−２は、Sterling Reserch Group から提供された。ＣＰ５５９４０はPfizer Central Researchから提供された。アナンダミドは既述したように合成された。純度は、石油エーテル／エーテル／メタノール（比６：４０：４）の溶出系を用いる薄層クロマトグラフィーによってモニターされた。予想されたように、アナンダミドはＲ_F０．５の単一スポットとして移動した。¹ 細胞の培養と調製Ｎ１８（神経芽細胞腫細胞系）細胞（３２〜４１代継代）を、標準的細胞培養技術を用いて５％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）含有ＤＭＥＭ中でガラスカバースリップ断片上に増殖させた。記録前６〜１４日目に、培地を０．５％ＦＢＳおよび２％ジメチルスルフォキシド含有ＤＭＥＭに交換することにより細胞を「分化」させた。ＰＴＸ（Pertussis Toxin）実験において、５００ｎｇ／ｍＬＰＴＸ含有培地中でさらに１６〜２０時間増殖させた。コントロール細胞は、ニューロンが M.S.Shapiro（University of Washington，seattle，WA）から提供された以外は、同じように処理された。電流の記録全細胞電圧制御（クランプ）法を用いて電流を記録した。ピペットをヘマトクリットガラス（ＶＷＲ）から引っ張って作り、火炎研磨した。ピペット溶液は、１００ｍＭＣｓＣｌ、１０ｍＭＥＧＴＡ、５ｍＭＭｇＣｌ₂、４０ｍＭＨＥＰＥＳ、３ｍＭＮａ₂ＡＴＰ、および０．２ｍＭＧＴＰを含み、ＣｓＯＨでｐＨ７．３０とした。記録するには、細胞を含むカバースリップを記録用チャンバー（２００μＬ）に移し、１６０ｍＭＮａＣｌ、５ｍＭＣａＣｌ₂、４ｍＭＫＣｌ、１ｍＭＭｇＣｌ₂、１０ｍＭＨＥＰＥＳ、および８ｍＭグルコースを含有する外部溶液（ＮａＯＨでｐＨ７．３５とする）を用いて１〜２ｍＬ／分の速度で一定に還流した。テトロドトキシン（２００ｎＭ）を加えて、電圧をゲートで制御されたナトリウム電流をブロックし、カンナビノイドの付着を低下させるためにすべての記録用溶液中にはウシ血清アルブミン（３μＭ）が存在した。次に、カンナビノイドアゴニストであるＷＩＮ５５２１２と本発明の化合物を加えた。Ｉ_caは、２５−ｍｓｅｃ脱分極パルスが０ｍＶとなる終わり付近で測定され、１００μＭＣｄＣｌ₂に感受性な電流の成分として定義された。溶液リザーバーは、一連のソレノイド（筒形コイル）バルブによって選択され、溶液交換は＜１分で達成された。すべての実験において、細胞は、保持電圧−６５ｍＶの電圧制限下で保持された。電圧プロトコールを作製し、データをデジタル化して記録し、ＢＡＳＩＣ−ＦＡＳＴＬＡＢ（Indec Systems，Capitola，CA）を用いて分析した。電流を４ｋＨｚでサンプリングし、接合電位は補正していない。継代数と分化の持続時間によって潜在的反応変化をコントロールするため、可能な場合は実験測定とコントロール測定を交互に行なった。適切な場合はデータを平均 ±標準誤差で表わす。尚、この種の実験では、ＷＩＮ５５２１２（便利なため使用された）はアナンダミドと同じに作用することが示されている（Felderら、既述、参照）。この実験からの、実施例６の化合物に関するデータを表３に示す。アゴニストであるＷＩＮ５５２１２はＣＢ−１リセプターを介してＮ−タイプのカルシウムチャンネルを阻害し、したがって、電流は電圧制限に対して−６５ｐＡに低下する。式Ｉの化合物（実施例６）を添加すると、ＣＢ−１リセプターを介してＮ− タイプカルシウムチャンネルが開き、この電流は−１５０ｐＡに増加する。Ｏｘｏ−ＭおよびＣｄ²⁺は細胞オルガネラの完全性と電流制御の特異性を示すコントロールである。したがって、この実験は、式Ｉの化合物が内因性リガンドであるアナンダミドもしくはアゴニストのin vitroでの作用に拮抗することよって主要な神経細胞オルガネラを制御する能力があることを証明している。アナンダミドアンタゴニストのin vivo作用以下の実験は、活性で有用な中枢神経系物質を評価するための伝統的モデルである、マウス行動の標準モデル（Open Field Assay）およびin vivoにおいて、式Ｉの化合物がアナンダミドのもたらす鎮静作用を阻害する能力を有することを証明している。 Open Field Assayは、大きな解放領域に置かれたマウスの運動（水平および垂直）を評価するものである。すなわち、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに対し、アナンダミド２ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．）を注射する２８分前に、実施例６の化合物２０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．）を注射した。このマウスを、マウスの垂直および水平運動の数を測定する装置（Digiscan Automated Open Field）の大きな領域の中心に置く。各試験期間は５分間である。この期間の終了時に、マウスをスキャナーから取り出し、記録したデータを自動分析し、統計的に評価する。より詳細なことは、Crawley,J.の、J.Neurosci.,12(9),3380-3391頁(1992)に記載されている。この実験の結果は表４〜５に示している。表からわかるように、アナンダミドは重度の鬱病と動物の運動の鎮静を引き起こすが、水平探査活性（Horizontal E xploratory Activity）および総距離探査行動（Total Distance Exploratory Be havior）に関しては、実施例６の化合物を投与することにより逆転する。適用式Ｉの化合物は、ヒトＣＢ−１リセプターに結合し、アナンダミドとカンナビノイドの両方によって惹起される細胞性の、シグナル−形質導入事象を抑制することができる。in vivoではこの化合物はマウスにおけるアナンダミドの影響を軽減することが示されている。海馬のＣＢ−１リセプターの局在およびカンナビノイドの既知の薬理作用、およびそれらのアナンダミドとの連絡（Howlett,A.C. らの、TINS,13(10),420-423頁（1990）参照）により、カンナビノイドによってみられるのと同様の総合的症状を呈するヒトを含む哺乳動物はＣＢ−１リセプターアンタゴニスト（式Ｉの化合物）の恩恵を受けるであろう。多くの病的状態は、種々の病因によって生じるものの、共通の総合的症状を有する。これらの病的状態（下記の適用中に列記した）は、カンナビノイドの使用もしくは濫用によって生じることはないが、これらの症状はかなり似ているので、内因性因子であるアナンダミドは、有望な寄与因子であろうと思われる。したがって、式Ｉの化合物は多くの疾病の総合的症状の治療において有益であろう。さらに、疾病の原因因子ならびにそれらの相互作用の治療および総合的症状の治療はよく理解されていないか、または実際に別々の病状ではないかも知れないので、本発明は単に症状の治療に限定されると解釈すべきでない。ヒトを含む哺乳動物において式Ｉの化合物の有益な効果がみられると思われる症状には、鬱病、認識機能低下、精神的敏捷性の低下、記憶の低下、および感覚・知覚の低下が含まれるがこれに限定されるものではない。これらの症状は種々の病的状態、症候群、および疾病に生じる。これらの症状の程度、重要性、および特性は病状間、ならびにそれら疾病のあるものに罹患した種々の個体間で大きく異なる。以下に、式Ｉの化合物の恩恵に預かるであろうヒトを含む哺乳動物の疾病のいくつかを挙げる。アルツハイマー病、頭部外傷、老人性痴呆症、および脳腫瘍など。さらに、このカテゴリーに含まれるであろう病的状態は、当該技術分野の多くの参考文献中に詳細に述べられている（例えば、「Harrison's Principles of Internal Medicine」、Isselbacher,K.J.ら編、第９版、McGraw-Hill Book Co. , New York，1980、第３節、「Alterations in Nervous Function」参照）。さらに、これらのあらゆる疾病の症状の変動性による本発明のこの化合物の使用、治療プロトコール、および用量レベルの決定は担当医師の裁量による。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ０７Ｄ 333/54 9455−4ＣＣ０７Ｄ 333/54 333/56 9455−4Ｃ 333/56 333/60 9455−4Ｃ 333/60 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者カリナン，ジョージ・ジョゼフアメリカ合衆国46181インディアナ州トラファルガー、ボックス468、ルーラル・ルート１番

Claims

【特許請求の範囲】１．カンナビノール−１リセプターにおいてアナンダミドのアンタゴニストとして使用する医薬を製造するための、式：［式中、Ｒ¹はＣ₁−Ｃ₄アルコキシ、トリフルオロメチルスルホニルオキシ、ヒドロキシ、もしくはシアノであり、Ｒ²およびＲ³はそれぞれ独立してＣ₁−Ｃ₄アルキルもしくはＣ₁−Ｃ₄アルコキシであり、Ｒ⁴はＣＯ、ＣＨＯＨ、もしくはＣＨ₂であり、Ｒ⁵はＯもしくはＳである（ただし、Ｒ¹がヒドロキシである場合は、Ｒ⁵はＯである）］で示される化合物の使用。２．Ｒ²がメチルまたはメトキシであり、Ｒ³がメトキシである請求項１に記載の使用。３．Ｒ¹がメトキシ、トリフルオロメチルスルホニルオキシ、ヒドロキシ、またはシアノである請求項２に記載の使用。４．Ｒ¹がシアノである請求項３に記載の使用。５．Ｒ²がメトキシであり、Ｒ⁵が−Ｏ−である請求項４に記載の使用。６．Ｒ²がメチルであり、Ｒ⁵が−Ｏ−である請求項４に記載の使用。７．Ｒ²がメトキシであり、Ｒ⁵が−Ｓ−である請求項４に記載の使用。８．式：［式中、Ｒ¹はシアノであり、Ｒ²およびＲ³はそれぞれ独立してＣ₁−Ｃ₄アルキルもしくはＣ₁−Ｃ₄アルコキシであり、Ｒ⁴はカルボニルであり、Ｒ⁵は酸素もしくは硫黄である］で示される化合物。９．Ｒ²およびＲ³が共にメトキシであり、Ｒ⁵が−Ｏ−である請求項８に記載の化合物。１０．Ｒ²がメチルであり、Ｒ³がメトキシであり、Ｒ⁵が−Ｏ−である請求項８に記載の化合物。１１．Ｒ²およびＲ³が共にメトキシであり、Ｒ⁵が−Ｓ−である請求項８に記載の化合物。１２．請求項８に記載の化合物の有効量と、医薬的に許容される担体、賦形剤、もしくは希釈剤を含む医薬組成物。