JPH06273413A - 幼若細胞測定用試薬 - Google Patents

幼若細胞測定用試薬

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JPH06273413A JP5060037A JP6003793A JPH06273413A JP H06273413 A JPH06273413 A JP H06273413A JP 5060037 A JP5060037 A JP 5060037A JP 6003793 A JP6003793 A JP 6003793A JP H06273413 A JPH06273413 A JP H06273413A
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 血液などの液体試料中に含まれる幼若な細胞
を分類・計数するための試薬を提供する。 【構成】 下記（１）から（４）を含有する、幼若白血
球を含有する被検試料と混合することにより、幼若白血
球の各群を他の細胞群から弁別可能な程度にまで差異を
生じさせる幼若細胞測定用試薬： （１）血球の細胞質および細胞膜を固定化するためのポ
リオキシエチレン系ノニオン界面活性剤、（２）血球の
細胞膜に損傷を与え縮小化するための可溶化剤、（３）
血球の細胞質および細胞膜を固定化するためのアミノ
酸、および（４）液のｐＨを５．０〜９．０、浸透圧を
１５０〜６００ｍＯｓｍ／ｋｇ、電気伝導度を６．０〜
９．０ｍＳ／ｃｍにする緩衝液。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、血液等の液体試料中に
含まれる幼若な細胞を分類・計数するための試薬に関す
るものである。
【０００２】
【従来の技術】健常人の末梢血液中には各種血球（赤血
球、白血球、血小板）が含まれている。もともと血球細
胞は骨髄で作られ、未熟な細胞から分化し成熟とともに
血流中に移動する。
【０００３】例えば顆粒球（好中球、好酸球、好塩基
球）の場合、それぞれ（骨髄芽球→前骨髄球→骨髄球→
後骨髄球）→（杆状核球→分葉核球）というように幼若
な血球から成熟な血球へと分化してゆく。健常人の場
合、後骨髄球以前の幼若な白血球が末梢血液中に出現す
ることはなく、杆状核球も少ない。しかし、特殊な場
合、例えば白血病等の血液疾患、癌の骨髄移転、重症の
感染症等においては、幼若な白血球が出現することがあ
る。このように、幼若白血球を測定することは疾病を診
断する上で極めて重要かつ有意義なことである。
【０００４】血球の自動分類・計数を行う技術として
は、血球像を撮像しその画像を画像処理することによっ
て行うものや、血球を液体中に流し個々の血球から得ら
れた信号を信号処理することによって行うものがある。
現状では精度、コスト等多くの点でフローシステムによ
るものの方が優れている。
【０００５】フローシステムでは、血球を液体中に流し
血球個々に信号（例えば光学的特性の差異に基づく信号
や電気的特性の差異に基づく信号）を検出する。散乱光
や蛍光を検出するフローシステム−サイトメータや、ア
パーチャ（微細孔）に電流を流しておき血球がそのアパ
ーチャを通過する際に発生する電気信号を検出する血球
計数装置がそれぞれの一例である。後者はさらに、直流
電流を供給し血球の電気抵抗の違いに基づく信号を検出
するＤＣ法と数ＭＨｚの高周波電流を供給し血球の誘電
率の違いに基づく信号を検出するＲＦ法とに分類でき
る。ＤＣ法では粒子の体積と比例した大きさの信号が検
出され、ＲＦ法では粒子の内部構造（核の大きさ）、構
成物質の情報を反映した信号が検出される。
【０００６】例えば、ＷＯ８８／０９５０４号公報、
特開平３−２５２５５６号公報には、ＤＣ法とＲＦ法
とを組み合わせて白血球の５分類及び異常球を分類・計
数することが記載されている。
【０００７】には、ポリオキシエチレン系ノニオン界
面活性剤又はポリオキシエチレン系アニオン界面活性剤
を用いて、正常（成熟）白血球の５分類（リンパ球、単
球、好中球、好酸球、好塩基球）及び異常細胞を分類・
計数することが記載されている（例えば図１８にはリン
パ芽球ｎ、骨髄芽球ｌ、その他の未成熟顆粒球ｋ、左方
移動（ｌｅｆｔ ｓｈｉｆｔ）ｊの分布が示されてい
る）。なお、左方移動とは核の分葉の少ない好中球（杆
状核好中球）が増加したことをいうのであるが、ここで
は杆状核好中球のことを言っている。
【０００８】には、低浸透圧、酸性の条件下でポリオ
キシエチレン系ノニオン界面活性剤を用い白血球の５分
類及びその他の異常球（図５には白血球病細胞等の異常
細胞ｅの分布が示されている）を分類・計数することが
記載されている。
【０００９】一方、血球の希釈液や保存液も各種公知で
ある。例えばアミノ酸を含有した液が知られている。し
かしそれはアミノ酸を細胞膜外壁に吸着させ細胞の形態
を保持する（細胞保護）ために用いられるものである。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】上記，の技術は幼
若血球の分類や計数を行っているものの、成熟白血球の
５分類を第１の目的とし、それに付随した形で幼若球の
分類や計数を行うものであるため、分類できない幼若球
があったり、またその分類精度についても不充分なもの
であった。
【００１１】例えば、ポリオキシエチレン系ノニオン界
面活性剤だけでは、成熟白血球と幼若血球との弁別が不
充分である（成熟白血球の収縮が小さい）、赤血球の溶
血が不充分である（ゴーストが大きい）等の問題があっ
た。
【００１２】本発明は、幼若細胞の分類・計数を主眼に
おいて、その分類・計数の精度を向上させる試薬を提供
することを目的とする。
【００１３】
【課題を解決するための手段】本発明の目的は、下記
（１）から（４）を含有する、幼若白血球を含有する被
検試料と混合することにより、幼若白血球の各群を他の
細胞群から弁別可能な程度にまで差異を生じさせる幼若
細胞測定用試薬： （１）血球の細胞質および細胞膜を固定化するための次
式で表されるポリオキシエチレン系ノニオン界面活性
剤： Ｒ1−Ｒ2−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)n−Ｈ ［式中、Ｒ1は炭素数１０〜２５のアルキル、アルケニ
ルまたはアルキニル基；
【化２】 ｎは１０〜４０の整数を表す］ （２）血球の細胞膜に損傷を与え縮小化するための可溶
化剤であって、以下の２つのグループからなる群から選
択される少なくとも１種の可溶化剤： ａ)第１のグループの可溶化剤： ・Ｎ−ラウロイルサルコシン酸ナトリウム ・ラウロイルメチルβ−アラニンナトリウム ・ラウロイルサルコシン ｂ)第２のグループの可溶化剤： ・ｎ−オクチルβ−グルコシド ・ＣＨＡＰＳ (3-[(3-クロルアミドプロピル)ジメチ
ルアンモニオ]-1-プロパンスルホネート) ・ＣＨＡＰＳＯ (3-[(3-クロルアミドプロピル)ジメチ
ルアンモニオ]-2-ヒドラキシ-1-プロパンスルホネート) ・ＭＥＧＡ８ (オクタノイル-N-メチルグルカミド) ・ＭＥＧＡ９ (ノナノイル-N-メチルグルカミド) ・ＭＥＧＡ１０ (デカノイル-N-メチルグルカミド) ・シュークロースモノカプレート ・Ｎ−ホルミルメチルロイシルアラニン （３）血球の細胞質および細胞膜を固定化するためのア
ミノ酸、および （４）液のｐＨを５．０〜９．０、浸透圧を１５０〜６
００ｍＯｓｍ／ｋｇ、電気伝導度を６．０〜９．０ｍＳ
／ｃｍにする緩衝液、によって達成される。
【００１４】本発明におけるポリオキシエチレン系ノニ
オン界面活性剤としては、前記の式で示したものが使用
できるが、付加モル数ｎが１０〜３０、Ｒ1が炭素数１
０〜２０のアルキル、アルケニル又はアルキニル基、Ｒ
2が０のものが好適である。これらの界面活性剤は赤血
球に対する溶血力と白血球細胞の固定化という２つの特
性をバランスよく合わせ持つからである。特にＣ18Ｈ34
Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）16Ｈ、Ｃ18Ｈ34Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）
15Ｈが適している。
【００１５】可溶化剤についてはＮ−ラウロイルサルコ
シン酸ナトリウムが特に適しているが、これ以外にも前
記のものが使用できる。濃度については個々に説明しな
いが、赤血球ゴースト及び裸核化成熟白血球を効果的に
収縮できる濃度に調整して使用すればよい。
【００１６】アミノ酸についてはタンパク質を構成する
アミノ酸であれば何でも使用できる。タンパク質構成ア
ミノ酸は表１に示すように、中性アミノ酸、酸性アミノ
酸、塩基性アミノ酸と大分類される。酸性アミノ酸であ
るグルタミン酸を用いる場合は１〜５０ｇ／ｌの濃度で
使用できる（好適には８〜１２ｇ／ｌ、例えば１０．０
ｇ／ｌ）。中性アミノ酸の脂肪族アミノ酸であるバリン
を用いる場合には１〜５０ｇ／ｌの濃度で使用できる
（好適には８〜１２ｇ／ｌ、例えば１０．０ｇ／ｌ）。
【００１７】幼若細胞の固定、幼若白血球の分類という
点で特に適していたのは含硫アミノ酸であり、メチオニ
ンが特に好適であった（表１に示すように、アミノ酸＞
中性アミノ酸＞脂肪族アミノ酸＞含硫アミノ酸＞メチオ
ニンのように細分類されている）。
【表１】 また本発明に使用する緩衝液としては、ＨＥＰＥＳ、リ
ン酸バッファーなどの各種緩衝液を用いうるが、これに
ｐＨ調整剤としての水酸化ナトリウム、浸透圧調整剤と
しての食塩などを加えて、緩衝液のｐＨを５．０〜９．
０、浸透圧を１５０〜６００ｍＯｓｍ／ｋｇ、電気伝導
度を６．０〜９．０ｍＳ／ｃｍとすることが好ましい。
【００１８】かくして調製される本発明の試薬を幼若白
血球を含有する被検試料（具体的には血液）と混合する
ことにより、幼若白血球の各群を他の細胞群から弁別可
能な程度にまで差異を生じさせることができる。
【００１９】
【作用】本発明の試薬の作用を考える上で重要なのは次
の点である。
【００２０】（１）．本発明におけるポリオキシエチレ
ン系ノニオン界面活性剤を用いると幼若白血球の方が成
熟白血球よりも細胞膜の損傷を受けにくい。
【００２１】（２）．アミノ酸及びポリオキシエチレン
系ノニオン界面活性剤が細胞膜の損傷箇所から幼若白血
球の細胞内に侵入し細胞内成分及び細胞膜を固定化す
る。
【００２２】一般に、ポリオキシエチレン系ノニオン界
面活性剤は付加モル数ｎが小さいもの程強い溶血力を有
し、ｎが大きくなる程溶血力は弱くなることは知られて
いた。本発明によりｎが１０以上のものは細胞を安定化
させる作用を持つことが判明した。
【００２３】一般的には、細胞膜の強さ（抵抗力）は成
熟白血球＞幼若白血球＞赤血球の順であるといわれてい
る。しかし、本発明の試薬を用いた場合には、以外にも
幼若白血球＞成熟白血球＞赤血球の順になる。すなわち
幼若白血球の方が成熟白血球よりも損傷の程度が小さ
い。
【００２４】本発明の試薬と血液とが混合されると次の
ような作用が生じる。
【００２５】ｐＨ５．０〜８．０の下で本発明における
ポリオキシエチレン系ノニオン界面活性剤を使用する
と、各細胞とも損傷を受けるが、その程度に差が出る。
すなわち、赤血球の細胞膜は損傷を受け、赤血球はただ
ちに溶血する。成熟白血球は細胞膜に損傷を受け細胞内
成分が溶出てしまい、裸核化状態になる。幼若白血球も
細胞膜に損傷を受けるが、細胞内成分が溶出してしまう
前にポリオキシエチレン系ノニオン界面活性剤及びアミ
ノ酸が細胞膜の損傷箇所から細胞内に侵入し、細胞膜及
び細胞内成分を固定化する。このことにより細胞膜、細
胞質を保持した状態で幼若白血球が固定化される。
【００２６】細胞を分類するには細胞間に弁別可能な程
度の差異を生じせしめ、その状態を一定時間維持する必
要がある。そのために界面活性剤を用いた後に固定化剤
を添加し細胞を固定化することが従来行われていた。例
えば、特開昭５４−２２８９１号（ＵＳＰ Ｎｏ．４，
０９９，９１７）には固定化剤としてホルムアルデヒド
を用いること、特開昭６１−５０２２７７号（ＵＳＰ
Ｎｏ．４，７５１，１７９）にはグルタルアルデヒドを
用いることが記載されている。しかし、本願における固
定化は従来の固定化とは異なる。従来の固定化は細胞膜
に対して外部から作用させて行うものであるが、本願の
固定化は細胞内部で行うものである。
【００２７】さて、上記の状態では、幼若白血球と成熟
白血球・赤血球ゴーストとの弁別はまだ不充分である。
可溶化剤が赤血球ゴーストと裸核化した成熟白血球を収
縮させることにより、各幼若白血球を成熟白血球・赤血
球ゴーストから弁別することが可能となる。
【００２８】このようにして形態上の差異が生じた血球
を個々に計測することにより、幼若白血球が安定して精
度よく分類・計数される。図１にＤＣ法及びＲＦ法によ
り得られる二次元スキャッタグラムの模式図の一例を示
す。ａ、ｂ、ｃ、ｄはそれぞれ芽球（顆粒球系の芽球ａ
１及びリンパ球系の芽球ａ２を含む）、骨髄球と後骨髄
球、前骨髄球、杆状核好中球の各群である。ｅは赤血球
ゴースト及び成熟白血球の群である。赤血球と成熟白血
球は各幼若白血球と完全に弁別可能な程度に収縮化され
てしまうことがわかる。
【００２９】ところで、まず血液とアミノ酸含有液とを
混合し、次にその混合液に上記界面活性剤を添加したと
すると、最終的には組成の点で本発明の試薬を用いたと
きと同じになる。しかし、この場合には本発明と同じ作
用・効果は生じない。両者の間には作用・効果において
大きな違いがある。そのことを説明する。
【００３０】前者の場合、アミノ酸が細胞膜外部に作用
し、まず細胞の形態を保持する。そこへ界面活性剤を添
加してもすでにアミノ酸による細胞保護機能が働いてい
るため界面活性剤は充分機能しない。すなわち幼若白血
球の分類はできないのである。幼若白血球の弁別を充分
に生じさせるためには、アミノ酸による細胞保護機能が
働く前に細胞膜を損傷させ、しかも損傷と同時に細胞内
部にアミノ酸を侵入させる必要がある。また、細胞膜を
損傷させた後にアミノ酸を添加しても本発明と同じ作用
・効果は生じない。アミノ酸を細胞外部からではなく内
部で作用させる点が重要である。このため、アミノ酸と
上記界面活性剤とは同じ液に含有されている必要があ
る。
【００３１】なお、本発明の試薬を用いた場合には、電
気インピーダンス検出方式（ＤＣ法、ＲＦ法）だけでは
なく、光学式のフローサイトメータで使用することも可
能である。フローサイトメータの前方散乱光ＦＳＣと側
方散乱光ＳＳＣを検出し、前方散乱光強度ＦＳＣと側方
散乱光強度ＳＳＣを軸とするスキャッタグラムを得ると
図１とほぼ同様のスキャッタグラムが得られる。前方散
乱光は粒子の外部情報（大きさ）を反映し、側方散乱光
は内部情報（核の大きさや複雑度）を反映する。このこ
とからＤＣ信号強度ＤＣと前方散乱光強度ＦＳＣ、ＲＦ
信号強度ＲＦと側方散乱光強度ＳＳＣとがそれぞれ対応
することが理解されよう。
【００３２】
【実施例】本発明の試薬の好適な実施例について説明す
る。
【００３３】実施例Ｉ 試薬組成 ポリオキシエチレン系ノニオン界面活性剤 Ｃ18Ｈ34−Ｏ−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）16−Ｈ ２４．０ｇ 可溶化剤 （アニオン界面活性剤） Ｎ−ラウロイルサルコシン酸ナトリウム １．５ｇ アミノ酸 （含硫アミノ酸） ＤＬ−メチオニン ２０．０ｇ 緩衝液 ＨＥＰＥＳ １２．０ｇ ＮａＯＨ（１規定） ０．３ｇ 浸透圧調製剤 ＮａＣｌ ４．０ｇ 水 全容積を１０００ｍｌにする量 上記組成の試薬を用いて血液を２５６倍に希釈した。ｐ
Ｈは６．８、π（浸透圧）は３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ・Ｈ
2Ｏ、ρ（電気伝導度）は７．４ｍＳ／ｃｍ、液温は３
３℃。この条件下で１３秒インキュベートした後、６秒
間ＲＦ／ＤＣ法にて粒子を個々に計測した。
【００３４】図２，３，４は得られたＲＦ信号強度とＤ
Ｃ信号強度を軸とする二次元スキャッタグラムの一例で
ある。各図は異なる血液検体の測定結果である。図２は
慢性骨髄性白血病患者、図３はリンパ系の幼若球が出現
した患者、図４は健常人からそれぞれ採取された末梢血
液の測定結果である。
【００３５】図２の検体は、芽球（骨髄芽球）、骨髄
球、後骨髄球、前骨髄球及び杆状核球を多く含有するも
のであったが、これらは芽球（骨髄芽球）の集団ａ１、
骨髄球及び後骨髄球の集団ｂ、前骨髄球の集団ｃ、杆状
核球の集団ｄとして分布した。なお、各集団ａ１、ｂ、
ｃ、ｄがそれぞれ骨髄芽球、骨髄球及び後骨髄球、前骨
髄球、杆状核球の集団であることは、血液検体から各細
胞を分離採取した試料を測定すること、及び視算法との
相関試験により確認された。なお、ｅは赤血球ゴースト
と成熟白血球の集団である。いずれも充分収縮されてお
り幼若細胞の分類に支障をきたさないことがわかる。
【００３６】図３の検体は、幼若細胞としてはリンパ系
の幼若球（リンパ腫細胞や異型リンパ球）を含有してい
るものであったが、これらはｆに分布した。ｆがリンパ
系の幼若球であることは上記と同様の手段で確認され
た。なお、ｅは赤血球ゴースト及び成熟白血球の集団で
ある。
【００３７】図４の検体は健常人のものである。わずか
に杆状核球（杆状核好中球）を含有しているのみであ
り、他の幼若な細胞は含有されていない。杆状核球はｄ
に分布した。これは図２における領域と同じ領域に分布
した。
【００３８】図５，６はそれぞれ急性リンパ性白血病患
者、急性骨髄性白血病患者の測定結果である。ａ２はリ
ンパ性の芽球、ａ１は骨髄性の芽球の集団を示す。各集
団がリンパ芽球、骨髄芽球であることはセルソータを用
いて確認した。
【００３９】このように、幼若白血球を成熟白血球から
弁別することができ、幼若白血球は芽球、骨髄球と後骨
髄球、前骨髄球、杆状核球のように分類でき、さらにリ
ンパ芽球、骨髄芽球の分類もできた。
【００４０】ところで、上記実施例Ｉにおいては次の範
囲で使用可能であった。
【００４１】 Ｃ18Ｈ34Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）16Ｈ ５〜５０ｇ（２０〜２８ｇ） Ｎ−ラウロイルサルコシン酸 ナトリウム ０．１〜２．０ｇ（１．２〜２．０ｇ） ＤＬ−メチオニン １〜５０ｇ（１６〜２４ｇ） ｐＨ ５．０〜１０．０（６．０〜８．０） π １５０〜５００（２５０〜３８０） ρ ３．０〜１２．０（６．０〜９．０） 希釈倍率 １００〜５００（２００〜３００） 液温 ２５．０〜４０．０（３０．０〜３４．０） ＊（）はより好適な範囲実施例II 実施例Ｉのアミノ酸（含硫アミノ酸）：メチオニンの代
わりに酸性アミノ酸であるグルタミン酸を用いた。使用
量は１０．０ｇ（濃度は１０．０ｇ／ｌ）とした。その
他は同じ条件を用いた。なお、グルタミン酸の使用可能
範囲は１〜５０ｇで好適には８〜１２ｇであった。
【００４２】実施例III 実施例Ｉのアミノ酸（含硫アミノ酸）：メチオニンの代
わりに分枝鎖アミノ酸であるバリンを用いた。使用量は
１０．０ｇ（濃度は１０．０ｇ／ｌ）。その他は同じ条
件を用いた。なお、バリンの使用可能範囲は１〜５０ｇ
で好適には８〜１２ｇであった。
【００４３】実施例IV 実施例Ｉのポリオキシエチレン系ノニオン界面活性剤と
可溶化剤を代えた。それぞれＣ18Ｈ34−Ｏ−（ＣＨ2Ｃ
Ｈ2Ｏ）15−Ｈ、ＣＨＡＰＳを用いた。Ｃ18Ｈ34−Ｏ−
（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）15−Ｈの使用量は５．０ｇ（５．０ｇ
／ｌ）、ＣＨＡＰＳは０．３ｇ（０．３ｇ／ｌ）とし
た。その他は同じ条件を用いた。使用可能範囲はＣ18Ｈ
34−Ｏ−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）15−Ｈについては１〜９ｇ
（好適には３〜７ｇ）、ＣＨＡＰＳについては０．１〜
０．５ｇ（好適には０．２〜０．４ｇ）であった。な
お、使用したアミノ酸はメチオニンである。
【００４４】実施例Ｖ 実施例Ｉのポリオキシエチレン系ノニオン界面活性剤、
可溶化剤及びアミノ酸を代えた。それぞれＣ18Ｈ34−Ｏ
−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）15−Ｈ、ＭＥＧＡ８、バリンを用い
た。Ｃ18Ｈ34−Ｏ−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）15−Ｈの使用量は
５．０ｇ（５．０ｇ／ｌ）、ＭＥＧＡ８は５．０ｇ
（５．０ｇ／ｌ）、バリンは２０．０ｇ（２０．０ｇ／
ｌ）とした。その他は同じ条件を用いた。使用可能範囲
はＣ18Ｈ34−Ｏ−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）15−Ｈについては１
〜９ｇ（好適には３〜７ｇ）、ＭＥＧＡ８については１
〜８ｇ（好適には４〜６ｇ）、バリンについては１〜５
０ｇ（好適には１６〜２４ｇ）であった。
【００４５】これらＩ〜Ｖまでの実施例を比べると、各
幼若白血球集団の出現領域は同じであった。分類結果
（計数値）の精度は実施例Ｉが最良でII及びIII、IV及
びＶの順であった。
【００４６】実施例Ｉ〜Ｖの試薬の組成を以下の表２に
まとめた。
【００４７】
【表２】
【００４８】
【発明の効果】本発明により幼若白血球の分類・計数が
可能となった。
【００４９】さらに幼若白血球を細分化して分類・計数
することが可能となった。
【００５０】また、本発明の試薬は１液性であるので、
自動分析装置への使用に適している。また、電気インピ
ーダンス検出型の装置のみならず光学式の装置に使用す
ることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】血液試料を本発明の試薬を用いて測定したとき
の、ＤＣ信号強度とＲＦ信号強度を軸とする二次元スキ
ャッタグラムの模式図の一例を示す。
【図２】慢性骨髄性白血病患者から採取された末梢血液
を本発明の試薬を用いて測定したときの、ＤＣ信号強度
とＲＦ信号強度を軸とする二次元スキャッタグラムを示
す。
【図３】リンパ系の幼若球が出現した患者から採取され
た末梢血液を本発明の試薬を用いて測定したときの、Ｄ
Ｃ信号強度とＲＦ信号強度を軸とする二次元スキャッタ
グラムを示す。
【図４】健常人から採取された末梢血液を本発明の試薬
を用いて測定したときの、ＤＣ信号強度とＲＦ信号強度
を軸とする二次元スキャッタグラムを示す。
【図５】急性リンパ性白血病患者から採取された末梢血
液を本発明の試薬を用いて測定したときの、ＤＣ信号強
度とＲＦ信号強度を軸とする二次元スキャッタグラムを
示す。
【図６】急性骨髄性白血病患者から採取された末梢血液
を本発明の試薬を用いて測定したときの、ＤＣ信号強度
とＲＦ信号強度を軸とする二次元スキャッタグラムを示
す。

Claims (6)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 下記（１）から（４）を含有する、幼若
    白血球を含有する被検試料と混合することにより、幼若
    白血球の各群を他の細胞群から弁別可能な程度にまで差
    異を生じさせる幼若細胞測定用試薬： （１）血球の細胞質および細胞膜を固定化するための次
    式で表されるポリオキシエチレン系ノニオン界面活性
    剤： Ｒ1−Ｒ2−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)n−Ｈ ［式中、 Ｒ1は炭素数１０〜２５のアルキル、アルケニルまたは
    アルキニル基； 【化１】 ｎは１０〜４０の整数を表す］ （２）血球の細胞膜に損傷を与え縮小化するための可溶
    化剤であって、以下の２つのグループからなる群から選
    択される少なくとも１種の可溶化剤： ａ)第１のグループの可溶化剤： ・Ｎ−ラウロイルサルコシン酸ナトリウム ・ラウロイルメチルβ−アラニンナトリウム ・ラウロイルサルコシン ｂ)第２のグループの可溶化剤： ・ｎ−オクチルβ−グルコシド ・ＣＨＡＰＳ (3-[(3-クロルアミドプロピル)ジメチ
    ルアンモニオ]-1-プロパンスルホネート) ・ＣＨＡＰＳＯ (3-[(3-クロルアミドプロピル)ジメチ
    ルアンモニオ]-2-ヒドラキシ-1-プロパンスルホネート) ・ＭＥＧＡ８ (オクタノイル-N-メチルグルカミド) ・ＭＥＧＡ９ (ノナノイル-N-メチルグルカミド) ・ＭＥＧＡ１０ (デカノイル-N-メチルグルカミド) ・シュークロースモノカプレート ・Ｎ−ホルミルメチルロイシルアラニン （３）血球の細胞質および細胞膜を固定化するためのア
    ミノ酸、および （４）液のｐＨを５．０〜９．０、浸透圧を１５０〜６
    ００ｍＯｓｍ／ｋｇ、電気伝導度を６．０〜９．０ｍＳ
    ／ｃｍにする緩衝液。
  2. 【請求項２】 アミノ酸がタンパク質を構成するアミノ
    酸である、請求項１に記載の試薬。
  3. 【請求項３】 アミノ酸が含硫アミノ酸である請求項２
    に記載の試薬。
  4. 【請求項４】 含硫アミノ酸がメチオニンである請求項
    ３に記載の試薬。
  5. 【請求項５】 アミノ酸がグルタミン酸である請求項２
    に記載の試薬。
  6. 【請求項６】 アミノ酸がバリンである請求項２に記載
    の試薬。
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