JP4806334B2 - 血液学的試料の測定方法および測定装置 - Google Patents
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Description
本明細書における「成熟白血球」とは、成熟リンパ球、単球、および顆粒球(好中球、好酸球、好塩基球)のことをいう。
本明細書における「血小板凝集」とは、血小板が2個以上凝集した粒子をいう。
本明細書における「細胞膜の損傷」とは、細胞膜に特定の物質が通過できるような細孔があくことをいう。
本明細書における「血液学的試料」とは、主に末梢血液をさすが、この他にも、骨髄液、アフェレーシス等によって回収された血液成分を含む試料、腹腔液、尿試料等の白血球成分を含む生体試料も好適な試料である。
〔血液学的試料の処理〕
本発明の測定方法における試料処理工程は、血液学的試料と以下に述べる処理試薬とを混合することにより行なわれることが好ましい。
前記処理試薬は、血液学的試料に含まれる赤血球および成熟白血球の細胞膜に損傷を与え、細胞膜が損傷した血球を収縮させ、少なくとも核酸を染色できる試薬である。具体的には、試料に含まれる赤血球および成熟白血球の細胞膜に損傷を与える界面活性剤および少なくとも核酸を蛍光染色する蛍光色素を含む。
式中、R3は水素原子、低級アルキル基又は低級アルコキシ基、R4は水素原子、アシル基、又は低級アルキル基、R5は水素原子又は置換されていてもよい低級アルキル基、R6は水素原子又は低級アルキル基、R7は水素原子、低級アルキル基又は低級アルコキシ基、およびZは硫黄原子、酸素原子又は低級アルキル基で置換された炭素原子、mは1又は2、Xはアニオンである。
R3およびR7における低級アルコキシ基としては、炭素数1〜6のアルコキシ基を意味し、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ等が挙げられ、中でもメトキシ基、エトキシ基が好ましい。なお、R3およびR7は、水素原子であることが好ましい。
R4におけるアシル基とは、脂肪族カルボン酸から誘導されたアシル基が好ましく、例えば、アセチル、プロピオニル等が挙げられ、中でもアセチル基が好ましい。
R5における置換されていてもよい低級アルキル基とは、1〜3個の水酸基、ハロゲン原子(フッ素、塩素、臭素又はヨウ素)等で置換されていてもよい低級アルキル基を意味し、中でも1個の水酸基で置換されたメチル基、エチル基が好ましい。
X−におけるアニオンは、ハロゲンイオン(フッ素、塩素、臭素又はヨウ素イオン)、ハロゲン化ホウ素イオン(BF4−、BCl4−、BBr4−等)、リン化合物イオン、ハロゲン酸素酸イオン、フルオロ硫酸イオン、メチル硫酸イオン、芳香環にハロゲンあるいはハロゲンをもつアルキル基を置換基として有するテトラフェニルホウ素化合物イオン等が挙げられる。中でも臭素イオン又はBF4−が好ましい。
上記処理試薬を含む溶液と血液学的試料を混合することにより、測定用試料を調製することができる。上述の試薬キットを使用する場合には、まず、界面活性剤を含む溶液(溶血剤)と血液学的試料とを混合し、次いで染色液を混合して、測定用試料としてもよい。
調製した測定用試料はフローサイトメータに導入され、試料中に含まれる細胞、血小板などの散乱光情報および蛍光情報が取得され得る。
散乱光情報としては、角度の異なる二種類の散乱光情報を取得することが好ましい。具体的には前方散乱光と側方散乱光の組み合わせが好ましく用いられる。
取得した散乱光情報および蛍光情報を用いて、目的の細胞群を特定し、造血前駆細胞を計数する。本発明の測定方法は、以下の第1の測定方法〜第5の測定方法に分類できる。以下、順に説明する。
第1の測定方法では、取得した第1散乱光情報および第2散乱光情報に基づいて、骨造血前駆細胞を含む第1細胞群を特定し(第1特定工程)、取得した第1散乱光情報および前記蛍光情報に基づいて、造血前駆細胞を含む第2細胞群を特定し(第2特定工程)、第1細胞群に含まれ且つ第2細胞群に含まれる細胞を造血前駆細胞として計数する。第1特定工程と第2特定工程の順序はいずれが先であってもよい。
第1細胞群は、取得された2種類の散乱光情報、好ましくは前方散乱光強度および側方散乱光強度に基づいて特定される。第1細胞群は、この2種類の散乱光情報を二軸とするスキャッタグラム(第1スキャッタグラム)中で、造血前駆細胞が出現すると考えられる領域を設定することにより特定されることが好ましい。また、検体によって造血前駆細胞の染色の程度や大きさが異なるため、第1細胞群が出現する領域の設定は検体毎に行なわれることが好ましい。
これらの領域は、使用する色素、濃度に応じて、種々のサイズの造血前駆細胞について蓄積されたデータから、予めスキャッタグラム中に領域を設定しておいてもよい。
第2細胞群は、取得した第1散乱光情報および蛍光情報、好ましくは、前方散乱光情報および蛍光情報に基づいて特定される。第2細胞群は、前方散乱光強度および蛍光強度を二軸とするスキャッタグラム(第2スキャッタグラム)中で造血前駆細胞が出現すると考えられる領域に含まれる細胞集団である。
以上のようにして特定した第1細胞群に含まれ且つ第2細胞群に含まれる細胞を造血前駆細胞として計数する。
第1の測定方法では、第1特定工程および第2特定工程を個別に行なって、第1細胞群および第2細胞群をそれぞれ特定したが、第1細胞群(又は第2細胞群)を先に特定し、次いで第2細胞群(又は第1細胞群)を、先に特定した第1細胞群(又は第2細胞群)の中から特定するようにしてもよい。
すなわち、第2の測定方法は、取得した第1散乱光情報および蛍光情報に基づいて、造血前駆細胞を含む第2細胞群を特定し(第2特定工程)、次いで、特定した第2細胞群の第1散乱光情報および第2散乱光情報に基づいて、前記第2細胞群の中から第1細胞群を特定して(第2の測定方法に特化して言及する場合には、この特定工程を「第1’特定工程」、第1’特定工程で特定される第1細胞群を「第1’細胞群」という)、この第1’細胞群を造血前駆細胞として計数する。あるいは取得した第1散乱光情報および第2散乱光情報に基づいて、造血前駆細胞を含む第1細胞群を特定し(第1特定工程)、次いで特定した第1細胞群の第1散乱光情報および蛍光情報に基づいて、前記第1細胞群の中から第2細胞群を特定し(第2の測定方法に特化して言及する場合には、この特定工程を「第2’特定工程」、第2’特定工程で特定される第2細胞群を「第2’細胞群」という)、この第2’細胞群を造血前駆細胞として計数する。
第2’特定工程においては、先に特定した第1細胞群の第1散乱光情報(好ましくは前方散乱光強度)および蛍光情報(好ましくは蛍光強度)に基づいて、前記第1細胞群の中から、造血前駆細胞を含む集団を特定する(第2’細胞集団の特定)。このようにして特定される第2’細胞群は、第1測定方法における第1細胞群に含まれ且つ第2細胞群に含まれる細胞に該当する。
先ず第1散乱光情報および第2散乱光情報を軸とするスキャッタグラム(第1スキャッタグラム)を作成し、このスキャッタグラムに全ての有形成分(細胞、血小板等)を展開する。この第1のスキャッタグラム中で造血前駆細胞の出現候補領域を設定し、この領域内に出現する第1細胞群を特定する。次に、第1散乱光情報および蛍光情報を二軸とするスキャッタグラム(第2’スキャッタグラム)を作成し、このスキャッタグラムに第1細胞群のみ展開する。第2’スキャッタグラム中で、造血前駆細胞が出現すると考えられる領域に含まれる細胞集団が、第2’細胞群である。第1散乱光情報および蛍光情報を二軸とする第2’スキャッタグラムでは、成熟白血球と幼若白血球が明確に区別されるので、たとえ第1細胞群にリンパ球が含まれていたとしても、第2’スキャッタグラムに展開された第2’細胞群には、リンパ球が含まれない。即ち、第2’細胞群は、実質的に血小板凝集、リンパ球などの他の成分を含まない造血前駆細胞の集団である。従って、第2’細胞群に含まれる細胞を造血前駆細胞として計数すればよい。
第1’特定工程は、先に第2特定工程により第2細胞群を特定し、特定した第2細胞群の第1散乱光情報(好ましくは前方散乱光強度)および第2散乱光情報(好ましくは側方散乱光強度)に基づいて、前記第2細胞群の中から、造血前駆細胞を含む集団を特定する(第1’細胞集団の特定)。このようにして特定される第1’細胞群は、第1測定方法および第2測定方法における第1細胞群に含まれ且つ第2細胞群に含まれる細胞に該当する。
先ず、取得した第1散乱光情報(好ましくは前方散乱光強度)および蛍光情報(好ましくは蛍光強度)を、第1散乱光情報および蛍光情報を二軸とするスキャッタグラム(第2スキャッタグラム)を作成し、このスキャッタグラムに全ての有形成分(細胞、血小板等)を展開する。この第2スキャッタグラム中で造血前駆細胞を含む第2細胞群の出現候補領域を特定する。次に、第1散乱光情報および第2散乱光情報を二軸とするスキャッタグラム(第1’スキャッタグラム)を作成し、このスキャッタグラムに上記で特定した第2細胞群のみを展開する。第1’スキャッタグラム中で、造血前駆細胞が出現すると考えられる領域に含まれる細胞集団が、第1’細胞群である。第1散乱光情報および第2散乱光情報を二軸とする第1’スキャッタグラムでは、幼若白血球および血小板凝集が、造血前駆細胞が出現する領域とは明確に区別できる領域に出現するので、第1’細胞群には、実質的に血小板凝集、リンパ球、幼若白血球などの他の成分は含まれない。従って、第1’細胞群に含まれる細胞を造血前駆細胞として計数すればよい。
第1および第2の測定方法では、第1細胞集団(又は第1’細胞集団)および第2細胞集団(又は第2’細胞集団)の特定にあたり、いずれの特定工程においても、2種類の情報に基づいて、それぞれの細胞集団を個別に特定し、第1細胞集団に含まれ且つ第2細胞集団に含まれる細胞集団を特定し、これを造血前駆細胞として計数したが、第3の測定方法は、取得した第1散乱光情報、第2散乱光情報、および蛍光情報を用いて、第1細胞集団と第2細胞集団を単一の工程で特定し、第1細胞集団および第2細胞集団の双方に含まれる細胞を決定し、それを造血前駆細胞として計数してもよい。
第4の測定方法は、取得した第1散乱光情報および蛍光情報に基づいて特定する細胞群として、造血前駆細胞を含む第2細胞群に代えて、ゴースト集団以外の細胞(本発明で用いられる測定用試料においては、赤血球は細胞収縮によりゴースト集団となっているので、実質的に全白血球)を含む第3細胞群を特定した場合に適用される方法である。
(4−1)第3特定工程および第3細胞群
第3細胞群は、前方散乱光強度および蛍光強度を二軸とするスキャッタグラムにおいて、赤血球ゴースト集団が出現する領域を除いた領域に出現する細胞集団、すなわち実質的に全白血球の集団である。具体的には、蛍光強度を横軸、前方散乱光強度を縦軸とするスキャッタグラムを描いた場合に、図4に示すように、一点鎖線で囲まれる領域に出現する細胞集団が、第3細胞群となる。尚、第3細胞群の出現領域には、図2で示したように、血小板凝集も含まれていることになる。
第4細胞群は、第3細胞群の第2散乱光情報および蛍光情報、好ましくは側方散乱光情報および蛍光情報に基づいて特定される。蛍光強度および側方散乱光強度を二軸とするスキャッタグラム中に第3細胞群を展開した場合、成熟白血球が出現する領域と幼若白血球が出現する領域とが明確に区別されるので、蛍光強度および側方散乱光強度を二軸とするスキャッタグラム中で造血前駆細胞が含まれると考えられる領域を特定すれば、幼若白血球を含む細胞集団、さらには造血前駆細胞を含む集団の出現領域を特定することができる。ここでの造血前駆細胞の出現候補領域の特定は、第1細胞群や第2細胞群の特定と同様に、検体毎に行なわれることが好ましい。また、使用する色素、濃度に応じて、種々のサイズの造血前駆細胞、成熟白血球について蓄積されたデータから、予め設定しておいてもよい。
以上のようにして特定された第1細胞群に含まれ且つ第4細胞群に含まれる細胞を計数する。第1細胞群は血小板凝集が含まれておらず、第4細胞群には成熟白血球が含まれていないので、第1細胞群に含まれ且つ第4細胞群に含まれる細胞は、実質的に血小板凝集、成熟白血球が含まれない造血前駆細胞あるいは幼若白血球の集団である。すなわち、たとえ第1細胞群にリンパ球が含まれていたとしても、第1細胞群に含まれ且つ第4細胞群に含まれる細胞には、リンパ球が除かれているので、実質的に造血前駆細胞あるいは幼若白血球を、高精度に計数することができる。
第5の測定方法では、第4の測定方法の第3特定工程を実行して第3細胞群を特定し、第4特定工程を実行して第3細胞群のうち第4細胞群を特定し、これを造血前駆細胞として計数する。第3特定工程および第3細胞群については上記(4−1)で記した通りであり、第4特定工程および第4細胞群については上記(4−2)で記した通りである。
本発明の血液学的試料に含まれる造血前駆細胞と血小板凝集とを弁別する方法は、本発明の測定方法における試料処理工程;前記処理された試料に光を照射することによって生じる前方散乱光情報と、側方散乱光情報とを取得する工程;および前記前方散乱光情報と前記側方散乱光情報とに基づいて、造血前駆細胞を含む第1細胞群を特定することで、造血前駆細胞を含む細胞集団と血小板凝集とを弁別する方法である。
本発明の測定装置は、血液学的試料に含まれる赤血球および成熟白血球の細胞膜に損傷を与え、細胞膜が損傷した血球を収縮させ、核酸を染色できる蛍光色素で染色処理する試料処理手段;前記処理された試料に光を照射することによって生じる第1散乱光情報と、第1散乱光とは角度の異なる散乱光に基づく第2散乱光情報と、蛍光情報とを取得する取得手段;前記第1散乱光情報および前記第2散乱光情報に基づいて造血前駆細胞を含む第1細胞群を特定する第1特定手段;前記第1散乱光情報および前記蛍光情報に基づいて造血前駆細胞を含む第2細胞群を特定する第2特定手段;および前記第1細胞群に含まれ且つ前記第2細胞群に含まれる細胞を造血前駆細胞として計数する計数手段を含む。
図6に示す装置は、測定部1と、解析部2と、解析部2と測定部1とを接続する信号ケーブル3とを有する。測定部1に本発明の装置の試料処理手段および取得手段が含まれ、解析部2に本発明の第1特定手段、第2特定手段および計数手段が含まれる。
測定部1は、操作者が各種設定入力を行うための液晶タッチパネル10、測定動作を開始するためのスタートスイッチ11、および検体を吸引するためのプローブ12を備えている。また、測定部1の内部には、図7に示されるようなフローサイトメータが搭載されている。解析部2は、測定部1から送信された情報の処理や、測定部1の動作を制御する制御部6と、各種測定結果などを表示する表示部たる出力部7と、操作者が検体情報等を入力するためのキーボード8とを備えている。
光源(例えば赤半導体レーザ:波長633nm)21から出射されたビームは、コリメートレンズ22を介してシースフローセル23のオリフィス部を照射する。ノズル20から吐出されたオリフィス部を通過する血球から発せられる前方散乱光は集光レンズ24とピンホール板25を介して前方散乱光検出器(フォトダイオード)26に入射する。一方、オリフィス部を通過する血球から発せられる側方散乱光は、集光レンズ27とダイクロイックミラー28を介して側方散乱光検出器(フォトマルチプライアチューブ)29に入射する。また、オリフィス部を通過する血球から発せられる側方蛍光は、集光レンズ27とダイクロイックミラー28とフィルタ28’とピンホール板30を介して側方蛍光検出器(フォトマルチプライアチューブ)31に入射する。前方散乱光検出器26から出力される前方散乱光信号と、側方散乱光検出器29から出力される側方散乱光信号と、側方蛍光検出器31から出力される側方蛍光信号とは、それぞれアンプ32,33,34により増幅され、制御部6に入力される。
図9は、本発明の第1の測定方法に対応する情報処理を示すフローチャートの一例である。制御部6は、測定部1で検出された前方散乱光信号、側方散乱光信号および蛍光信号を、信号ケーブル3を介して受信する(ステップS1)。制御部6はこれらの信号を解析し、それぞれの信号強度を算出する(ステップS2)。次に、試料中の有形成分(細胞や血小板など)の前方散乱光強度および側方散乱光強度を用い、前方散乱光強度および側方散乱光強度を二軸とする第1スキャッタグラムを作製する(ステップS3)。第1スキャッタグラム中、造血前駆細胞が出現すると考えられる造血前駆細胞候補領域を設定し、この領域内に含まれる第1細胞群を特定する(ステップS4)。また、試料中の有形成分の前方散乱光強度および蛍光強度を用い、前方散乱光強度および蛍光強度を二軸とする第2スキャッタグラムを作成する(ステップS5)。第2スキャッタグラム中、造血前駆細胞が出現すると考えられる造血前駆細胞候補領域を設定し、この領域内に含まれる第2細胞群を特定する(ステップS6)。次いで、第1細胞群に含まれ且つ第2細胞群に含まれる細胞の蛍光強度および側方散乱光強度を用いて、蛍光強度および側方散乱光強度を二軸とする第3スキャッタグラムを作成する(ステップS7)。この第3スキャッタグラムに出現する細胞(第1細胞群に含まれ、且つ第2細胞群にも含まれる細胞)を造血前駆細胞として計数し(ステップS8)、この計数結果と第3スキャッタグラムとを出力部7に出力する(ステップS9)。
なお、図9のフローチャートにおいて、ステップS3およびステップS4の後にステップS5およびステップS6を実行するのではなく、ステップS3およびステップS4の前にステップS5およびステップS6を実行してもよい。
なお、ステップS3およびS4の後にステップS5〜S9を実行するのではなく、ステップS3およびS4の前にステップS5〜S9を実行してもよい。
〔血液学的試料〕
180人のヒトから採取した末梢血液180検体を血液学的試料(以下、試料ともいう)として用いた。
以下の成分を含む溶血剤Aおよび染色液Aを用いた。
グリシン 15.7g/lL
ポリオキシエチレン(16)オレイルエーテル 25000ppm
N−ラウロイルサルコシン酸ナトリウム 750ppm
HEPES 50mM
精製水 1l
水酸化ナトリウム pHが7.0となる量
プロピジウムアイオダイド 20ppm
エチレングリコール 1L
対照として、実施例1で用いたものと同じ血液学的試料を検体とし、抗CD34モノクローナル抗体を用いてCD34陽性細胞を測定した。なお、ここで測定される抗CD34モノクローナル抗体で検出されるCD34陽性細胞は造血前駆細胞に相当する。
実施例1で算出された造血前駆細胞の比率と、比較例1で算出された造血前駆細胞の比率との相関を示すグラフを、図16に示す。
図16より、従来用いられている汎用フローサイトメータを用いた際の測定結果(比較例1の測定結)と、本実施例での測定結果とがよく相関していることがわかる。このことより、本実施例の方法によると正確に造血前駆細胞を測定できることが示された。
〔血液学的試料〕
180人のヒトから採取した末梢血液180検体を血液学的試料(以下、試料ともいう)として用いた。
以下の成分を含む溶血剤Bおよび染色液Bを用いた。
アラニン 19.8g/lL
ポリオキシエチレン(16)オレイルエーテル 25000ppm
N−ラウロイルサルコシン酸ナトリウム 750ppm
HEPES 50mM
精製水 1l
水酸化ナトリウム pHが7.0となる量
色素A 50ppm
エチレングリコール 1L
実施例2で用いた試料を検体として用いること以外は比較例1と同様の方法で造血前駆細胞を測定し、全白血球に対する造血前駆細胞の比率を算出した。
実施例2で算出された造血前駆細胞の比率と、比較例2で算出された造血前駆細胞の比率との相関を示すグラフを、図21に示す。
図21より、従来用いられている汎用フローサイトメータを用いた際の測定結果(比較例2の測定結果)と、本実施例での測定結果とがよく相関していることがわかる。このことより、本実施例の方法によると正確に造血前駆細胞を測定できることが示された。
被験者Aから所定の間隔をあけて11回血液試料を採取し、この11検体を被験者Aからの試料とした。また、被験者Bから所定の間隔をあけて11回血液試料を採取し、この11検体を被験者Bからの試料とした。
造血前駆細胞は、以下の組成を含む溶血剤Cおよび染色液Cを用いること以外は実施例1と同様の方法で測定された。また、全白血球に対する造血前駆細胞の割合を算出した。
キシリトール 35.5g/lL
ポリオキシエチレン(16)オレイルエーテル 20000ppm
N−ラウロイルサルコシン酸ナトリウム 750ppm
HEPES 30mM
精製水 1l
水酸化ナトリウム pHが7.0となる量
色素A 20ppm
エチレングリコール 1L
実施例3で用いた試料を検体として用いること以外は比較例1と同様にして造血前駆細胞を測定し、全白血球に対する造血前駆細胞の比率を算出した。
実施例3および比較例3による被験者Aについての測定結果を図21に、被験者Bについての測定結果を図22に示す。図22および23は、採血開始を0日とし、所定の期間中にそれぞれ11回採血を行い、造血前駆細胞の増減をモニターした結果を示すグラフである。図22および23からわかるように、実施例3の測定結果と、従来用いられている方法による測定結果(比較例3の測定結果)はほぼ連動していることがわかる。このことより、本実施例の方法によると正確に造血前駆細胞を測定できることが示された。
Claims (17)
- 血液学的試料に含まれる赤血球および成熟白血球の細胞膜に損傷を与え、細胞膜が損傷した血球を収縮させ、核酸を染色できる蛍光色素で染色処理する試料処理工程;
処理された試料に、光を照射することによって生じる第1散乱光情報と、第1散乱光とは角度の異なる散乱光に基づく第2散乱光情報と、蛍光情報とを取得する取得工程;
前記第1散乱光情報および前記第2散乱光情報に基づいて、造血前駆細胞を含む第1細胞群を特定する第1特定工程;
前記第1散乱光情報および前記蛍光情報に基づいて、造血前駆細胞を含む第2細胞群を特定する第2特定工程;および
前記第1細胞群に含まれ且つ前記第2細胞群に含まれる細胞を造血前駆細胞として計数する計数工程
を含む血液学的試料の測定方法。 - 前記計数工程において、
前記第1細胞群に含まれ且つ前記第2細胞群に含まれる細胞を、前記蛍光情報および前記第2散乱光情報を二軸とするスキャッタグラム中に展開し、前記スキャッタグラムに出現する細胞を造血前駆細胞として計数する、請求項1に記載の測定方法。 - 前記第2特定工程は、前記第1細胞群の第1散乱光情報および蛍光情報に基づいて、前記第1細胞群の中から第2細胞群を特定する工程である、請求項1に記載の方法。
- 前記第1特定工程は、前記第2細胞群の第1散乱光情報および第2散乱光情報に基づいて、前記第2細胞群の中から第1細胞群を特定する工程である、請求項1に記載の方法。
- 前記第1特定工程は、前記第1散乱光情報および前記第2散乱光情報を二軸とする第1のスキャッタグラム中に造血前駆細胞の出現候補領域を設定し、前記候補領域内に出現する細胞群を前記第1細胞群として特定する工程であり、
前記第2特定工程は、前記第1散乱光情報および前記蛍光情報を二軸とする第2のスキャッタグラム中に造血前駆細胞の出現候補領域を設定し、前記候補領域内に出現する細胞群を前記第2細胞群として特定する工程である、請求項1〜4のいずれかに記載の方法。 - 前記試料処理工程において、前記染色処理により造血前駆細胞とその他の白血球との間に蛍光強度の差異を生じさせる請求項1〜5のいずれかに記載の方法。
- 血液学的試料に含まれる赤血球および成熟白血球の細胞膜に損傷を与え、細胞膜が損傷した血球を収縮させ、核酸を染色できる蛍光色素で染色処理する試料処理工程;
処理された試料に、光を照射することによって生じる第1散乱光情報と、第1散乱光とは角度の異なる散乱光に基づく第2散乱光情報と、蛍光情報とを取得する取得工程;
前記第1散乱光情報および前記第2散乱光情報に基づいて、造血前駆細胞を含む第1細胞群を特定する第1特定工程;
前記第1散乱光情報および前記蛍光情報に基づいて、ゴースト集団以外の細胞集団を、第2細胞群として特定する第2特定工程;
前記第2散乱光情報および前記蛍光情報に基づいて、前記第2細胞群の中から、少なくとも成熟白血球を含まない第3細胞群を特定する第3特定工程;および
前記第1細胞群に含まれ且つ前記第3細胞群に含まれる細胞を計数する計数工程を含む血液学的試料の測定方法。 - 前記第1散乱光情報が前方散乱光強度であり、前記第2散乱光情報が側方散乱光強度であり、前記蛍光情報が蛍光強度である、請求項1〜7の何れかに記載の方法。
- 前記処理工程は、赤血球および成熟白血球の細胞膜に損傷を与える界面活性剤と、損傷した血球を収縮させる可溶化剤と、核酸を染色する蛍光色素と、血液学的試料とを混合することにより行なわれる請求項1〜8のいずれかに記載の方法。
- 血液学的試料に含まれる赤血球および成熟白血球の細胞膜に損傷を与え、細胞膜が損傷した血球を収縮させ、核酸を染色できる蛍光色素で染色処理する試料処理手段;
処理された試料に、光を照射することによって生じる第1散乱光情報と、第1散乱光とは角度の異なる散乱光に基づく第2散乱光情報と、蛍光情報とを取得する取得手段;及び
前記第1散乱光情報および前記第2散乱光情報に基づいて造血前駆細胞を含む第1細胞群を特定し、前記第1散乱光情報および前記蛍光情報に基づいて造血前駆細胞を含む第2細胞群を特定し、前記第1細胞群に含まれ且つ前記第2細胞群に含まれる細胞を造血前駆細胞として計数する制御部;
を含む血液学的試料の測定装置。 - 前記第1細胞群が、前記第1散乱光情報および前記第2散乱光情報を二軸とする第1のスキャッタグラム中に設定された造血前駆細胞の出現候補領域に出現する細胞群であり、
前記第2細胞群が、前記第1散乱光情報および前記蛍光情報を二軸とする第2のスキャッタグラム中に設定された造血前駆細胞の出現候補領域に出現する細胞群である、
請求項10に記載の測定装置。 - 前記制御部は、前記第1細胞群に含まれ且つ前記第2細胞群に含まれる細胞を、前記蛍光情報および前記第2散乱光情報を二軸とする第3のスキャッタグラム中に展開し、前記第3のスキャッタグラムに出現する細胞を造血前駆細胞として計数する、請求項10又は11に記載の測定装置。
- 前記第1細胞群に含まれ且つ前記第2細胞群に含まれる細胞が出現しているスキャッタグラム、および前記造血前駆細胞の計数結果のうち少なくとも1つを表示する表示部をさらに備える請求項10〜12の何れかに記載の装置。
- 血液学的試料に含まれる赤血球および成熟白血球の細胞膜に損傷を与え、細胞膜が損傷した血球を収縮させ、核酸を染色できる蛍光色素で染色処理する試料処理工程;
処理された試料に、光を照射することによって生じる第1散乱光情報と、第1散乱光とは角度の異なる散乱光に基づく第2散乱光情報と、蛍光情報とを取得する工程;
前記蛍光情報及び前記第1散乱光情報に基づいてゴースト集団以外の細胞集団を特定する工程;
前記第2散乱光情報及び蛍光情報に基づいて、前記ゴースト以外の細胞集団の中から造血前駆細胞を特定し、計数する工程、を含む血液学的試料の測定方法。 - 前記特定工程において、前記細胞集団を、前記蛍光情報及び前記第1散乱光情報を二軸とするスキャッタグラム中に展開し、前記スキャッタグラムに前記細胞集団の出現候補領域を設定し、この出現候補領域中に出現する細胞群を前記細胞集団として特定し、
前記計数工程において、前記細胞集団を前記第2散乱光情報及び前記蛍光情報を二軸とするスキャッタグラム中に展開し、前記スキャッタグラムに前記造血前駆細胞の出現候補領域を設定し、この出現候補領域中に出現する細胞群を造血前駆細胞として特定し、計数する、請求項14記載の方法。 - 前記赤血球及び前記成熟白血球の細胞膜に損傷を与える界面活性剤と、損傷した血球を収縮させる可溶化剤と、糖とを含有する試薬と前記血液学的試料とを混合することにより、
前記血液学的試料に含まれる前記赤血球および前記成熟白血球の細胞膜に損傷を与え、且つ損傷した血球を収縮させる、請求項14または15記載の方法。 - 前記糖が、キシリトール、アラビノース、グルコース、マンニトール、ソルビトール、リビトールからなる群より選択される少なくとも1つである、請求項14〜16のいずれかに記載の方法。
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