JP2007225595A - 幼若白血球分析用試薬及び試薬キット - Google Patents
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Abstract
【解決手段】試料中の赤血球及び成熟白血球の細胞膜に損傷を与える界面活性剤と、損傷した血球を収縮させる可溶化剤と、糖と、核酸を染色する色素と、を含有する幼若白血球分析用試薬を提供する。この分析用試薬を用いることで、骨髄芽球や幼若顆粒球などの幼若白血球や成熟白血球を精度良く分析することが可能となり、且つ試料の処理条件の許容範囲が広がる。
【選択図】図10
Description
R2I及びR3Iにおける低級アルキル基は上記と同様であり、低級アルコキシ基としては、炭素数1〜6のアルコキシを意味する。例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基等が挙げられるが、これらのうちメトキシ基及びエトキシ基が好ましい。なお、R2I及びR3Iは水素原子であることが好ましい。
R4Iにおけるアシル基とは、脂肪族カルボン酸から誘導されたアシル基が好ましい。具体的には、アセチル基、プロピオニル基等が挙げられ、これらのうちアセチル基が好ましい。また、低級アルキル基は上記と同様である。
R5Iにおける低級アルキル基とは上記と同様であり、置換されていてもよい低級アルキル基とは、1〜3個の水酸基、ハロゲン原子(フッ素、塩素、臭素又はヨウ素)等で置換されていてもよい低級アルキル基を意味する。これらのうち、1個の水酸基で置換されたメチル基及びエチル基が好ましい。
Zにおける低級アルキル基とは上記と同様であり、Zとしては硫黄原子であることが好ましい。
X-におけるアニオンは、ハロゲンイオン(フッ素、塩素、臭素又はヨウ素イオン)、ハロゲン化ホウ素イオン(BF4-、BCl4-、BBr4-等)、リン化化合物イオン、ハロゲン酸素酸イオン、フルオロ硫酸イオン、メチル硫酸イオン、芳香環ハロゲンあるいはハロゲンをもつアルキル基を置換基として有するテトラフェニルホウ素化合物イオン等が挙げられる。これらのうち臭素イオンまたはBF4-が好ましい。
色素A
以下の組成の第一試薬A及び第二試薬を調整した。
<第一試薬A>
ポリオキシエチレン(16)オレイルエーテル(日光ケミカルズ) 20000ppm
N−ラウロイルサルコシン酸ナトリウム 500ppm
アラビノース 39.6g/L
HEPES 10mM
精製水 1L
上記を混合し、さらにNaOHを添加してpHを7.0に調整した。第一試薬Aの浸透圧は280mOsm/kg、電気伝導度は0.59mS/cmであった。
<第二試薬>
色素A 20ppm
エチレングリコール1L
試薬と血液試料Aとを35℃で反応させること以外は実施例1と同様にして、骨髄芽球比率を算出した。骨髄芽球比率は42.6%であった。なお、実施例2で作成された第一の二次元分布図は図4に示され、第二の二次元分布図は図5に示される。
ポリオキシエチレン(16)オレイルエーテル 24.0g/L、N−ラウロイルサルコシン酸ナトリウム 1.5g/L、DL−メチオニン 20.0g/L、HEPES 12.0g/L、1N−NaOH 0.3g/L、NaCl 4.0g/L及び色素A 3.0mg/Lを含む試薬1mLと血液試料B33μLとを混合して反応させること以外は、実施例1と同様にして骨髄芽球比率を算出した。骨髄芽球比率は25.1%であった。なお、比較例1で作成された第一の二次元分布図は図6に示され、第二の二次元分布図は図7に示される。この試薬の浸透圧は350mOsm/kg、電気伝導度は7.4mS/cmであった。
試薬と血液試料Bとを35℃で反応させること以外は比較例1と同様にして、骨髄芽球比率を算出した。骨髄芽球比率は7.2%であった。なお、比較例2で作成された第一の二次元分布図は図8に示され、第二の二次元分布図は図9に示される。
第一試薬Bは、アラビノースではなくキシリトールを39.56g/L、ポリオキシエチレン(16)オレイルエーテルを20000ppmではなく25000ppm、N−ラウロイルサルコシン酸ナトリウムを500ppmではなく750ppm含有させること以外は第一試薬Aと同様にして調製された。第一試薬Bの浸透圧は280mOsm/kg、電気伝導度は0.59mS/cmであった。
第一試薬Cは、キシリトールではなく、アラビノースを39.52g/L含有させること以外は第一試薬Bと同様にして調製された。第一試薬Cの浸透圧は280mOsm/kg、電気伝導度は0.62mS/cmであった。
第一試薬Dは、キシリトールではなく、アラニンを23.16g/L含有させること以外は第一試薬Bと同様にして調製された。第一試薬Dの浸透圧は280mOsm/kg、電気伝導度は0.61mS/cmであった。
第一試薬Eは、キシリトールではなく、グリシンを19.52g/L含有させること以外は第一試薬Bと同様にして調製された。第一試薬Eの浸透圧は280mOsm/kg、電気伝導度は0.63mS/cmであった。
血液試料Aではなく血液試料Cを用いること以外は比較例1と同様にして骨髄芽球比率を算出した。また、血液試料Aではなく血液試料Dをもちいること、及び7秒間ではなく12秒間試薬と血液試料Cとを反応させること以外は比較例1と同様にして骨髄芽球比率を算出した。
以下の組成を含む第一試薬Fを調整した。
ポリオキシエチレン(16)オレイルエーテル 25000ppm
N−ラウロイルサルコシン酸ナトリウム 750ppm
キシリトール 37.0g/L
HEPES 10mM
精製水 1L
上記を混合し、さらにNaOHを添加してpHを7.0に調整した。第一試薬Fの浸透圧は280mOsm/kg、電気伝導度は0.64mS/cmであった。
また、第二試薬は実施例1で調整したものと同様のものを用いた。
血液試料Dではなく血液試料Gを用いること以外は実施例5と同様にして骨髄芽球比率を算出した。骨髄芽球比率は5.5%であった。なお、実施例8で作成された第一の二次元分布図は図13に示され、第二の二次元分布図は図14に示される。
血液試料Dではなく血液試料Fを用いること以外は実施例5と同様にして幼若顆粒球比率を算出した。幼若顆粒球比率は12.4%であった。なお、実施例9で作成された第一の二次元分布図は図15に示され、第二の二次元分布図は図16に示される。
Claims (15)
- 試料に含まれる幼若白血球を分析するための試薬であって、
赤血球及び成熟白血球の細胞膜に損傷を与える界面活性剤と、損傷した血球を収縮させる可溶化剤と、糖と、核酸を染色する色素と、を含有する幼若白血球分析用試薬。 - 前記可溶化剤が、サルコシン誘導体、サルコシン誘導体の塩、コール酸誘導体、及びメチルグルカンアミドからなる群より選択される少なくとも1つである、請求項1又は2記載の試薬。
- 前記糖が、キシリトール、アラビノース、グルコース、マンニトール、ソルビトール、リビトールからなる群より選択される少なくとも1つである、請求項1〜3の何れかに記載の試薬。
- 前記糖を10〜75g/L含有する請求項1〜4の何れかに記載の試薬。
- 塩化ナトリウムを実質的に含有しない、請求項1〜5の何れかに記載の試薬。
- pHが5.0〜9.0である、請求項1〜6の何れかに記載の試薬。
- 浸透圧が150〜600mOsm/kgである、請求項1〜7の何れかに記載の試薬。
- 試料に含まれる幼若白血球を分析するための試薬キットであって、
赤血球及び成熟白血球の細胞膜に損傷を与える界面活性剤と、
損傷した血球を収縮させる可溶化剤と、
浸透圧調整剤とを含有し、
浸透圧が150〜600mOsm/kgであり、電気伝導度が6mS/cm未満である第一試薬、及び
核酸を染色する色素を含有する第二試薬を含む幼若白血球分析用試薬キット。 - 前記第一試薬の浸透圧が3mS/cm以下である請求項9記載の試薬キット。
- 前記浸透圧調整剤が、糖及びアミノ酸からなる群より選択される少なくとも1つのである請求項9又は10記載の試薬キット。
- 前記アミノ酸がグリシン及びアラニンからなる群より選択される少なくとも1つである請求項11記載の試薬キット。
- 前記アミノ酸を1〜50g/L含有する請求項11又は12記載の試薬。
- 前記第一試薬の塩化ナトリウムの濃度が3g/L未満である請求項9〜13の何れかに記載の試薬。
- 試料に含まれる幼若白血球を分析するための試薬キットであって、
赤血球及び成熟白血球の細胞膜に損傷を与える界面活性剤と、損傷した血球を収縮させる可溶化剤と、糖と、を含有する第一試薬、及び
核酸を染色する色素を含有する第二試薬を含む幼若白血球分析用試薬キット。
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