CN1088194C - 测定幼稚细胞用试剂 - Google Patents

测定幼稚细胞用试剂 Download PDF

Info

Publication number
CN1088194C
CN1088194C CN94102901A CN94102901A CN1088194C CN 1088194 C CN1088194 C CN 1088194C CN 94102901 A CN94102901 A CN 94102901A CN 94102901 A CN94102901 A CN 94102901A CN 1088194 C CN1088194 C CN 1088194C
Authority
CN
China
Prior art keywords
cell
amino acid
reagent
blood cell
solubilizer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
CN94102901A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1095481A (zh
Inventor
辻野幸夫
森川隆
滨口幸雄
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sysmex Corp
Original Assignee
Sysmex Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sysmex Corp filed Critical Sysmex Corp
Publication of CN1095481A publication Critical patent/CN1095481A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1088194C publication Critical patent/CN1088194C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5094—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for blood cell populations
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N15/1031—Investigating individual particles by measuring electrical or magnetic effects
    • G01N15/12—Investigating individual particles by measuring electrical or magnetic effects by observing changes in resistance or impedance across apertures when traversed by individual particles, e.g. by using the Coulter principle
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
    • G01N15/1456—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry without spatial resolution of the texture or inner structure of the particle, e.g. processing of pulse signals
    • G01N15/1459—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry without spatial resolution of the texture or inner structure of the particle, e.g. processing of pulse signals the analysis being performed on a sample stream
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N2015/1006—Investigating individual particles for cytology
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
    • G01N2015/1402—Data analysis by thresholding or gating operations performed on the acquired signals or stored data
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/825—Pretreatment for removal of interfering factors from sample
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation
    • Y10T436/25125—Digestion or removing interfering materials
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation
    • Y10T436/2525—Stabilizing or preserving

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Ecology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

可以对含在血液等液体试样中的幼稚细胞进行分类和计数的试剂，其含有：(1)用于固定血球的细胞质及细胞膜的聚氧乙烯型非离子表面活性剂，(2)用于损伤并缩小血球的细胞膜的增溶剂，(3)用于固定血球的细胞质及细胞膜的氨基酸，和(4)使液体的pH值为5.0～9.0、渗透压为150～600mOsm/kg、电导率为6.0～9.0mS/cm的缓冲液，通过该试剂与含有幼稚白血球的被测试样混合，可使幼稚白血球的各类群与其他细胞群产生能分辨程度的差异。

Description

测定幼稚细胞用试剂
本发明是关于对含在血液等液体试样中的幼稚细胞进行分类和计数时所用试剂的发明。
在健康人的末稍血液中含有各种血球(红血球、白血球、血小板)。最初，血细胞是在骨髓中生成的，从未成熟的细胞分化，在成熟的过程中移送到血流中。
例如，粒细胞(中性白细胞、嗜酸性白细胞、嗜碱细胞)分别要经过(成髓细胞→前骨髓细胞→骨髓细胞→后骨髓细胞)→(杆状核细胞→分叶核细胞)的过程，从幼稚的血球向成熟的血球分化。对于健康人，后骨髓细胞以前的幼稚白血球不会出现在末稍血液中，杆状核细胞也少。可是在特殊情况下，例如，得了白血病等血液病、骨髓癌转移、重症感染时，往往就出现幼稚白血球。因此，测定幼稚白血球对于诊断疾病是极其重要而且有意义的。
作为血球的自动分类和计数的技术，现有通过对血球摄像，再将其图像进行处理的方法和使血球在液体中流动，而后把从每个血球得到的信号进行信号处理的方法。现阶段，从精密度、成本等诸方面考虑，使用流动系统的测定方法较好。
在流动系统中，可检测血球在液体中流动时每个血球的信号(例如由于光学特性的差异而得到的信号和由于电学特性的差异而产生的信号)。该方法可以分别举出检测散射光和荧光的流动系统信号检测计和在微孔中流过电流、检测血球  通过该微孔时产生的电信号的血球计数装置的例子。后者又可进一步分为供给直流电流然后检测由于血球的电阻的不同而产生的信号的DC法和供给数MHz的高频电流、检测出由于血球的介电常数的不同而产生的信号的RF法。在DC法中可检测出与粒子的体积成比例大小的信号，RF法可检测出反映粒子的内部结构(核的大小)、构成物质情况的信号。
例如在①WO88/09504号公报、②特开平3-252556号公报中记载了联合使用DC法和RF法对白血球的5个类群及异常细胞进行分类和计数的方法。
在①中记载了使用聚氧乙烯型非离子表面活性剂或聚氧乙烯型阴离子表面活性剂对正常(成熟的)白血球的5个类群(淋巴细胞、单细胞、中性白细胞、嗜酸性白细胞、嗜碱细胞)及异常细胞进行分类、计数(例如在图18中示出了淋巴母细胞n、成髓细胞1、其他未成熟粒细胞k、左方移动(left shift)j的分布)。再者，所谓左方移动是指核的分叶少的中性白细胞(杆状核中性白细胞)的增加，但是在此是指杆状核中性白细胞而言。
在②中记载了在低渗透压、酸性的条件下使用聚氧乙烯型非离子表面活性剂对白血球的5个类群及其他异常细胞(图5示出了白血球病细胞等异常细胞e的分布)进行分类、计数。
另一方面，血球的稀释液和保存液也是公知的。例如已经知道的含有氨基酸的液体。可是这些液体是为了使氨基酸吸附在细胞膜外壁上以保持细胞的形态(保护细胞)而使用的。
上述①、②的技术虽可进行幼稚血球的分类和计数，但是以把成熟白血球分成5个类群作为第一目的。由于是附带地进行幼稚细胞的分类和计数，所以存在着具有不能分类的幼稚细胞以及其分类精密度不够等问题。
例如，单用聚氧乙烯型非离子表面活性剂，就存在着成熟白血球和幼稚血球的辨别不充分(成熟白血球的收缩小)及红血球的溶血不充分(血影细胞(ghost)大)等问题。
本发明着眼于幼稚细胞的分类和计数，其目的在于提供可提高其分类、计数的精密度的试剂。
本发明的目的在于提供含有下述(1)至(4)的物质的测定幼稚细胞用试剂，通过该试剂与含有幼稚白血球的被测试样混合，可使得幼稚白血球的各类群与其他细胞群产生能分辨程度的差异。
(1)用于固定血球的细胞质及细胞膜的用下式表示的聚氧乙烯型非离子表面活性剂：
R1-R2-(CH2CH2O)n-H
[式中，R1表示碳原子数为10～25的烷基、链烯基或炔基；R2表示O、 或COO；
n表示10～40的整数]；
(2)用于损伤并缩小血球的细胞膜的增溶剂，选自以下2组中至少1种的增溶剂：
a)第1组增溶剂：
·N-月桂酰肌氨酸钠
·月桂酰甲基β-丙氨酸钠
·月桂酰肌氨酸
b)第2组增溶剂：
·正辛基葡糖苷
·CHAPS(3-[(3-胆酰氨基丙基)二甲基铵]-1-丙磺酸盐)
·CHAPSO(3-[(3-胆酰氨基丙基)二甲基铵]-2-羟基-1-丙磺酸盐)
·MEGA8(辛酰基-N-甲基葡糖酰胺)
·MEGA9(壬酰基-N-甲基葡糖酰胺)
·MEGA10(癸酰基-N-甲基葡糖酰胺)
·蔗糖单癸酸盐
·N-甲酰基甲基亮氨酰基丙氨酸
(3)用于固定血球的细胞质及细胞膜的氨基酸；
(4)液体的pH值为5.0～9.0、渗透压为150～600mOsm/kg(毫渗透压摩尔/千克)、电导率为6.0～9.0mS/cm(毫西门子/厘米)的缓冲液。
本发明中所使用的聚氧乙烯型非离子表面活性剂虽然可以使用上述各式所表示的物质，但合适的是加成摩尔数n为10～30 R1是碳原子数为10～20的烷基、链烯基或炔基R2是O(氧原子)的物质。这些表面活性剂均衡地具有对红血球的溶血作用和对白血球的固定化作用这两种特性。特别合适的是C18H34O(CH2CH2O)16H、C18H34O(CH2CH2O)15H。
最合适的增溶剂是N-月桂酰肌氨酸钠，除此之外也可使用上述的其他增溶剂。对于液用浓度虽没有逐一说明，但只要调整到使红血球血影细胞及裸核的成熟白血球可以有效地收缩的浓度就可以了。
对于氨基酸，构成蛋白质的任何氨基酸均可使用。构成蛋白质的氨基酸如表1所示，大致可分为中性氨基酸、酸性氨基酸、碱性氨基酸。若使用作为酸性氨基酸的谷氨酸时，其浓度为1～50g/l(优选8～12g/l，例如10.0g/l)。若使用作为中性氨基酸的脂肪族氨基酸-缬氨酸时，使用的浓度为1～50g/l(优选8～12g/l，例如10.0g/l)。
从幼稚细胞的固定、幼稚白血球的分类这方面考虑，特别合适的是含硫的氨基酸，最合适的是蛋氨酸(如表1所示细分类成氨基酸＞中性氨基酸＞脂肪族氨基酸＞含硫氨基酸＞蛋氨酸)。
          分类      名称
  中性氨基酸 脂肪族氨基酸     甘氨酸丙氨酸
    支链一氨一基酸     缬氨酸亮氨酸异亮氨酸
   羟氨基基酸     丝氨酸苏氨酸
   含氨基硫酸     半胱氨酸蛋氨酸
   酰氨基胺酸 天冬酰胺谷氨酰胺
  亚氨基酸     脯氨酸
    芳氨香基族酸     苯丙氨酸酪氨酸色氨酸
酸性氨基酸     天冬氨酸谷氨酸
碱性氨基酸     赖氨酸精氨酸组氨酸
另外，对于用于本发明的缓冲液，可以使用HEPES、磷酸缓冲液等各种缓冲液，并且最好向其中加入作为pH调节剂的氢氧化钠、作为渗透压调节剂的食盐等，把缓冲液的pH值调到5.0～9.0、渗透压调到150～600mOsm/kg、电导率调到6.0～9.0mS/cm。
通过将这样调制出的本发明的试剂与含有幼稚白血球的被测试样(具体指血液)混合，可以产生能把幼稚白血球的各类群与其他细胞群分辨出来这样程度的差异来。
本发明的试剂的重要作用如下：
(1)使用本发明的聚氧乙烯型非离子表面活性剂时，幼稚白血球的细胞膜较成熟白血球的细胞膜难以受到损伤。
(2)氨基酸及聚氧乙烯型非离子表面活性剂可从细胞膜的损伤处进入到幼稚白血球的细胞内，固定细胞内成分及细胞膜。
一般认为，聚氧乙烯型非离子表面活性剂的加成摩尔数n越小，其溶血作用越强，n越大，溶血作用越弱。按照本发明发现，n为10以上时，具有使细胞稳定的作用。
一般来说，细胞膜的强度(抵抗力)的顺序细分为成熟白血球＞幼稚白血球＞红血球。可是使用本发明的试剂时，意外地成为幼稚白血球＞成熟白血球＞红血球的顺序。即幼稚白血球较成熟白血球的损伤程度小。
本发明的试剂与血液混合时，可产生以下的作用。
在pH5.0～8.0的条件下，使用本发明的聚氧乙烯型非离子表面活性剂时，各细胞均受到损伤，但其损伤的程度有差别。即红血球的细胞膜受到损伤，红血球立即溶血。成熟白血球的细胞膜受到损伤，细胞内成分全部溶出，成为裸核化状态。幼稚白血球的细胞膜也受到损伤，但是在细胞内成分溶出之前，聚氧乙烯型非离子表面活性剂及氨基酸从细胞膜的损伤处侵入到细胞内，使细胞膜及细胞内成分固定。因此，可在保持细胞膜、细胞质的状态下，使幼稚白血球得到固定。
对细胞进行分类时，要在细胞间产生能够分辨的差异，并且需要使这种状态维持一定的时间。为此，以前的方法是在使用表面活性剂后，添加固定化剂，固定细胞。例如在特开昭54-22891号(USP No.4099917)中记载了使用甲醛作为固定化剂，在特开昭61-502277号(USP No.4751179)中记载了使用戊二醛作为固化剂。可是本申请中的固定化方法与以前的方法不同。以前的固定方法是从外部作用在细胞膜上进行的，而本申请的固定是在细胞内部进行的。
然而，在上述的状态下，幼稚白血球和成熟白血球、红血球血影细胞的区别还是不充分的。当通过增溶剂使得红血球血影细胞和裸核化的成熟白血球收缩，便有可能把各幼稚白血球与成熟白血球、红血球血影细胞区分开来。
通过计测在形态上产生差异的每个血球，可以对幼稚白血球进行稳定的、精度良好的分类和计数。图1表示使用DC法及RF法得到的二维散布图的模式图。a、b、c、d分别是原始细胞(包含粒细胞系的原始细胞a1及淋巴细胞系的原始细胞a2)、骨髓细胞和后骨髓细胞、前骨髓细胞、杆状核中性白细胞。e是红血球血影细胞及成熟白血球。可以看到红血球和成熟白血球已经收缩到可以完全与各类幼稚白血球区分的程度。
如果首先将血液和含有氨基酸的液体混合，接着在其混合液中加入上述表面活性剂时，从最终的组成上来看与本发明中使用的试剂是相同的，但此时不会产生与本发明相同的作用和效果。这两者之间，在作用和效果上有很大的差别。现说明如下：
在前者的情况下，氨基酸作用在细胞膜外部，首先保持了细胞的形态。而后，即使向其中添加表面活性剂，但由于氨基酸对细胞的保护机能业已产生作用，所以表面活性剂就不能充分发挥作用，即不能对幼稚白血球进行分类。为了使幼稚白血球产生充分的差别，有必要在氨基酸对细胞产生保护机能之前，使得细胞膜损伤，而且在损伤的同时，使氨基酸侵入到细胞内部。另外，在损伤细胞膜后，即使添加氨基酸也不会产生与本发明相同的作用和效果。重要的是让氨基酸不是在细胞外部而是在内部产生作用。为此，需要将氨基酸和上述表面活性剂包含在同一液体中。
此外，使用本发明的试剂时，不仅使用电阻抗检测方法(DC法、RF法)，也可以使用光学式流动信号检测计。检测出流动信号检测计的前方散射光FSC和测方散射光SSC，可得到以前方散射光强度FSC和侧方散射光强度SSC为轴的散布图，该图几乎与图1的散布图相同。前方散射光反映了细胞的外部情况(大小)、侧方散射反映了内部情况(核的大小和复杂程度)。由此可以知道DC信号强度DC和前方散射光强度FSC、RF信号强度RF和侧方散光强度SSC是分别相对应的。
以下对本发明的试剂的合适实施例加以说明。
实施例1
试剂组成
①聚氧乙烯型非离子表面活性剂
C18H34-O-(CH2CH2O)16-H                  24.0g
②增溶剂
(阴离子表面活性剂)
←N-月桂酰肌氨酸钠                             1.5g
③氨基酸
(含硫氨基酸)
DL-蛋氨酸                                      20.0g
④缓冲液
HEPES                                          12.0g
NaOH(1当量)                                   0.3g
⑤渗透压调节剂
NaCl                                          4.0g
⑥水
使整个体积成为1000ml的量
用上述组成的试剂，将血液稀释到256倍。在pH值为6.8、π(渗透压)为350mOsm/kg·H2O、ρ(电导率)为7.4mS/cm、液体温度为33℃的条件下，恒温13秒后，在6秒内用RF/DC法计测各个细胞。
图2、3、4是以得到的RF信号强度和DC信号强度为轴的二维散布图的例子。各图是不同血液试样的测定结果。图2是从慢性骨髓性白血病患者、图3是从出现淋巴系的幼稚细胞的患者、图4是从健康人采取的末稍血液的测定结果。
图2的试样是含有很多原始细胞(成髓细胞)、骨髓细胞、后骨髓细胞、前骨髓细胞及杆状核细胞的试样，但它们是以原始细胞(成髓细胞)的集团a1、骨髓细胞及后骨髓细胞的集团b、前骨髓细胞的集团c、杆状核细胞的集团d的状态分布的。另外各集团a1、b、c、d分别是成髓细胞、骨髓细胞及后骨髓细胞、前骨髓细胞、杆状核细胞的集团这一结果是通过测定从血液试样中分离采集的各细胞试样、并且通过视算法的相关试验而确认的。再者，e是红血球血影细胞和成熟白血球集团。可以看出它们都经过了充分的收缩，不会妨碍对幼稚细胞的分类。
图3的试样中所含有的幼稚细胞是淋巴系的幼稚细胞(淋巴肿瘤细胞和异型淋巴细胞)，这些细胞分布成f。f是淋巴系的幼稚细胞这一结果是通过与上述相同的手段而确认的。此外，e是红血球血影细胞及成熟白血球的集团。
图4的试样是健康人的。其中只含有微量的杆状核细胞(杆状核中性白细胞)，不含有其他的幼稚细胞。杆状核细胞分布成d，这与图2分布的领域相同。
图5、6分别是急性淋巴性白血病患者、急性骨髓性白血病患者的测定结果。a2表示淋巴性的原始细胞、a1表示骨髓性的原始细胞的集团。使用细胞分类计确认了各集团是淋巴母细胞、成髓细胞。
这样，就可以把幼稚白血球与成熟的白血球区分出来，幼稚白血球又可分类成原始细胞、骨髓细胞和后骨髓细胞、前骨髓细胞、杆状核细胞，进而也可分类成淋巴母细胞、成髓细胞。
上述实施例1中是在以下的范围内使用的。
①C1834O(CH2CH2O)16H        5～50g(20～28g)
②月桂酰肌氨酸钠                  0.1～2.0g(1.2～2.0g)
③DL-蛋氨酸                      1～50g(16～24g)
④pH                         5.0～10.0(6.0～8.0)
⑤π                         150～500(250～380)
⑥ρ                         3.0～12.0(6.0～9.0)
⑦稀释倍数                   100～500(200～300)
⑧液温                       25.0～40.0(30.0～34.0)
                            *( )是优选的范围
实施例II
使用酸性氨基酸谷氨酸代替实施例I的氨基酸(含硫氨基酸)-蛋氨酸。使用量为10.0g(浓度为10.0g/l)。其他条件相同。此外，谷氨酸的可以使用范围是1～50g，优选8～12g。
实施例III
使用支链氨基酸缬氨酸代替实施例I的氨基酸(含硫氨基酸)-蛋氨酸。使用量为10.0g(浓度为10.0g/l)。其他条件相同。此外，缬氨酸的可以使用范围是1～50g，优选8～12g。
实施例IV
改变实施例I的聚氧乙烯型非离子表面活性剂和增溶剂。分别使用C18H34-O-(CH2CH2O)15-H和CHAPS。C18H34-O-(CH2CH2O)15-H的使用量为5.0g(5.0g/l)、CHAPS的使用量为0.3g(0.3g/l)，其他条件相同。可以使用的范围，对于C18H34O(CH2CH2O)15-H是1～9g(优选3～7g)、对于CHAPS是0.1～0.5g(优选0.2～0.4g)。另外，使用的氨基酸是蛋氨酸。
实施例V
改变实施例I的聚氧乙烯型非离子表面活性剂、增溶剂及氨基酸。分别使用C18H34-O-(CH2CH2O)15-H、MEGA8、缬氨酸。C18H34-O-(CH2CH2O)15-H的使用量为5.0g(5.0g/l)、MEGA8为5.0g(5.0g/l)、缬氨酸为20.0g(20.0g/l)。其他条件相同。可以使用的范围，对于C18H34O(CH2CH2O)15-H是1～9g(优选3～7g)、MEGA8是1～8g(优选4～6g)、缬氨酸是1～50g(优选16～24g)。
比较这些I～V的实施例时，可看出各幼稚白血球集团的出现区域相同。分类结果(计数值)的精密度以实施例I为最佳，其后的顺序为II及III、IV及V。
实施例I-V的试剂组成归纳在以下表2中。
                           表2
    实施例I     实施例II     实施例III
    组成   浓度   组成   浓度     组成     浓度
聚氧乙烯型表面活性剂增溶剂/表面活性剂氨基酸类型缓冲剂渗透压调节剂 C18H34O(CH2CH2O)15H24.0g阴离子表面活性剂N-月桂酰肌氨酸钠1.5g含硫氨基酸DL-蛋氨酸20.0gHEPES12.0g1N NaOH0.3gNaCl4.0g 5～50(20～28)0.1～2.0(1.2～2.0)1～50(16～24)pH5.0～10.0(6.0～8.0)ρ(ms/cm)3.0～12.0(6.0～9.0)π(mOsm/kg.H2O)150～500(250～380) ←←酸性氨基酸L-谷氨酸10.0g←← 1～50(8～12) ←←脂肪族氨基酸L-缬氨酸10.0g←← 1～50(8～12)
水 1000ml   1000ml 1000ml
                           表2(续)
    实施例IV     实施例V
    组成   浓度   组成 浓度
聚氧乙烯型表面活性剂增溶剂/表面活性剂氨基酸类型缓冲剂渗透压调节剂 C18H34O(CH2CH2O)16H5.0g增溶剂CHAPS0.3g含硫氨基酸DL-蛋氨酸20.0g←← 1～9(3～7)0.1～0.5(0.2～0.4)1～50(16～24)pH5.0～10.0(6.0～8.0)ρ(ms/cm)3.0～12.0(6.0～9.0)π(mOsm/kg.H2O)150～500(250～380) ←增溶剂MEGA85.0gL-缬氨酸20.0g←← 1～8(4～6)1～50(16～24)
水 1000ml   1000ml
对于所有的实施例○稀释倍数100～500倍(200～300倍)○液温25.0～40.0℃(30.0～34.0℃)←表示与实施例I相同的条件
按照本发明可以进行幼稚白血球的分类和计数。
进而，还可把幼稚白血球再细分并进行分类和计数。
另外，本发明的试剂由于是单一液体，所以适用于自动分析装置。
还有，不仅可以在电阻抗性检测装置、也可在光学式的装置中使用。
图的简单说明
图1表示使用本发明的试剂测定血液试样时，以DC信号强度和RF信号强度为轴的二维散布图的模式图的例子。
图2表示使用本发明的试剂测定从慢性骨髓性白血病患者采取的末稍血液时，以DC信号强度和RF信号强度为轴的二维散布图。
图3表示使用本发明的试剂测定从出现淋巴系幼稚细胞的患者采取的末稍血液时，以DC信号强度和RF信号强度为轴的二维散布图。
图4表示使用本发明的试剂测定从健康人采集的末稍血液时，以DC信号强度和RF信号强度为轴的二维散布图。
图5表示使用本发明的试剂测定从急性淋巴性白血病患者采取的末稍血液时，以DC信号强度和RF信号强度为轴的二维散布图。
图6表示使用本发明的试剂测定从急性骨髓性白血病患者采取的末稍血液时，以DC信号强度和RF信号强度为轴的二维散布图。

Claims (5)

1.测定幼稚细胞用试剂，它含有下述(1)～(4)的物质，通过该试剂与含有幼稚白血球的被测试样混合，可以使得幼稚白血球的各类群与其他细胞群产生能分辨程度的差异，
(1)浓度为5-50克/升的、用于固定血球的细胞质及细胞膜的用下式表示的聚氧乙烯型非离子表面活性剂：
R1-R2-(CH2CH2O)n-H
式中，R1表示碳原子数为10-25的烷基、链烯基或炔基；R2表示O、
Figure C9410290100021
或COO；
n表示10-40的整数；
(2)用于损伤并缩小血球的细胞膜的增溶剂，选自以下2组中至少1种的增溶剂：
a)第1组增溶剂：
·N-月桂酰肌氨酸钠
·月桂酰甲基β-丙氨酸钠
·月桂酰肌氨酸
b)第2组增溶剂：
·正辛基葡糖苷
·3-[(3-胆酰氨基丙基)二甲基铵]-1-丙磺酸盐
·3-[(3-胆酰氨基丙基)二甲基铵]-2-羟基-1-丙磺酸盐
·辛酰基-N-甲基葡糖酰胺
·壬酰基-N-甲基葡糖酰胺
·癸酰基-N-甲基葡糖酰胺
·蔗糖单癸酸盐
·N-甲酰基甲基亮氨酰基丙氨酸，
所述增溶剂的浓度使得红血球血影细胞及裸核的成熟白血球可以有效地收缩；
(3)浓度为1-50克/升的、用于固定血球的细胞质及细胞膜的、构成蛋白质的氨基酸。
(4)使液体的pH值为5.0-9.0、渗透压为150-600毫渗透压克分子/千克、电导率为6.0-9.0毫西门子/厘米的缓冲液。
2.权利要求1所述的试剂，其中氨基酸是含硫氨基酸。
3.权利要求2所述的试剂，其中含硫氨基酸是蛋氨酸。
4.权利要求1所述的试剂，其中氨基酸是谷氨酸。
5.权利要求1所述的试剂，其中氨基酸是缬氨酸。
CN94102901A 1993-03-19 1994-03-19 测定幼稚细胞用试剂 Expired - Lifetime CN1088194C (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP06003793A JP3301646B2 (ja) 1993-03-19 1993-03-19 幼若細胞測定用試薬
JP60037/93 1993-03-19

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1095481A CN1095481A (zh) 1994-11-23
CN1088194C true CN1088194C (zh) 2002-07-24

Family

ID=13130481

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN94102901A Expired - Lifetime CN1088194C (zh) 1993-03-19 1994-03-19 测定幼稚细胞用试剂

Country Status (10)

Country Link
US (1) US5413938A (zh)
EP (1) EP0617281B1 (zh)
JP (1) JP3301646B2 (zh)
KR (1) KR100287583B1 (zh)
CN (1) CN1088194C (zh)
AU (1) AU665508B2 (zh)
CA (1) CA2119390C (zh)
DE (1) DE69419053T2 (zh)
ES (1) ES2132352T3 (zh)
TW (1) TW297093B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101046439B (zh) * 2006-03-29 2011-01-19 希森美康株式会社 血样的测定方法及测定装置

Families Citing this family (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3467310B2 (ja) * 1994-04-21 2003-11-17 シスメックス株式会社 白血球分析用試薬及び白血球の分類方法
JP3324050B2 (ja) * 1994-10-31 2002-09-17 日本光電工業株式会社 白血球分類用試薬および白血球分類方法
US5691204A (en) * 1995-04-21 1997-11-25 Abbott Laboratories Compositions and methods for the rapid analysis of reticulocytes
FR2735579B1 (fr) * 1995-06-13 1997-09-19 Hycel Groupe Lisabio Procede de discrimination et d'isolement de sous-populations de leucocytes a partir d'echantillons sanguins par traitement par du polyoxyethylene 9-lauryl ether, et reactif pour sa mise en oeuvre
JP4042925B2 (ja) * 1996-11-20 2008-02-06 シスメックス株式会社 幼若白血球の分類計数法
US5830701A (en) * 1997-03-28 1998-11-03 Tao Medical Electronics Co., Ltd. Method of detecting hematopoietic progenitor cells
JP3783808B2 (ja) * 1997-05-19 2006-06-07 シスメックス株式会社 白血球分類計数用試薬
KR19980042627A (ko) * 1997-11-20 1998-08-17 이에츠구히사시 유약백혈구의 분류계수법
US6225124B1 (en) * 1999-06-02 2001-05-01 Sysmex Corporation Diluting reagent and method compelling time-independent consistency in MCV assay
US6900023B1 (en) 1999-09-02 2005-05-31 Sysmex Corporation Method for classifying and counting leukocytes
US6916658B2 (en) * 2001-07-27 2005-07-12 Beckman Coulter, Inc. Method for measurement of immature granulocytes
JP4227019B2 (ja) * 2001-10-23 2009-02-18 デンカ生研株式会社 血液中の血球と菌の分離方法および血液中の菌の検出方法
JP4212827B2 (ja) * 2002-05-16 2009-01-21 シスメックス株式会社 骨髄液有核細胞自動分析方法
AU2003243945A1 (en) 2002-06-24 2004-01-06 Sysmex Corporation Method of classifying and counting leucocytes
JP4118618B2 (ja) * 2002-07-01 2008-07-16 シスメックス株式会社 試料分析装置
US20040166540A1 (en) * 2003-02-24 2004-08-26 Sysmex Corporation Methods of detecting CD34 positive and negative hematopoietic stem cells in human samples
US7678578B2 (en) 2005-02-07 2010-03-16 Beckman Coulter, Inc. Cell permeabilization and stabilization reagent and method of use
US7541190B2 (en) * 2005-02-07 2009-06-02 Beckman Coulter, Inc. Method of measurement of cellular hemoglobin
JP4806342B2 (ja) * 2006-01-27 2011-11-02 シスメックス株式会社 幼若白血球分析用試薬及び試薬キット
US7625757B2 (en) * 2006-01-27 2009-12-01 Sysmex Corporation Reagent for immature leukocyte analysis and reagent kit
JP4806334B2 (ja) * 2006-11-27 2011-11-02 シスメックス株式会社 血液学的試料の測定方法および測定装置
EP2166354B1 (en) * 2007-06-25 2012-11-07 Sysmex Corporation Reagent and reagent kit for analysis of primitive leukocyte
RU2435164C2 (ru) 2007-06-25 2011-11-27 Сисмекс Корпорейшн Реактив и набор реактивов для анализа незрелых лейкоцитов
CN101349644B (zh) * 2007-07-20 2012-06-27 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 一种白细胞分类试剂和其使用方法
CN101475754A (zh) * 2008-01-04 2009-07-08 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 不对称菁类荧光染料,组合物及在生物样品染色中的用途
US20110027826A1 (en) * 2008-05-02 2011-02-03 Arkray, Inc. Leukocyte analysis method and analysis reagent for use in the method
CN101602762B (zh) * 2008-06-10 2013-10-16 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 不对称菁类化合物、其制备方法及应用
CN101726579B (zh) * 2008-10-17 2014-06-18 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 血液检测试剂和方法
CN101723874B (zh) * 2008-10-31 2013-09-11 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 花菁类化合物及其在生物样品染色中的用途
JP5168658B2 (ja) * 2008-11-21 2013-03-21 国立大学法人高知大学 血球分析装置、血球分析方法及びコンピュータプログラム
CN101750476B (zh) * 2008-12-08 2015-06-03 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 血液分析试剂及其使用方法
CN101750274B (zh) * 2008-12-17 2014-06-25 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 白细胞分类计数试剂、试剂盒以及白细胞分类计数的方法
CN101988082B (zh) * 2009-07-31 2015-04-08 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 白细胞分类计数试剂、试剂盒及其制备方法和白细胞分类计数的方法
JP5416232B2 (ja) * 2012-01-23 2014-02-12 シスメックス株式会社 血液学的試料の測定装置
US20140377374A1 (en) * 2012-02-08 2014-12-25 University Of Florida Research Foundation, Inc. Materials and methods for treating diarrhea
JP6319959B2 (ja) * 2013-07-05 2018-05-09 国立大学法人信州大学 白血球数及び左方移動を指標とした細菌感染症の検出
CN106687810B (zh) * 2014-12-31 2019-10-22 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 一种非诊断目的的有核红细胞报警方法、装置及流式细胞分析仪
KR101849698B1 (ko) * 2017-08-24 2018-04-18 한국화학연구원 생체 조직 크기 조절용 조성물 및 상기 조성물을 이용한 생체 조직의 크기 조절 방법
KR20190094509A (ko) * 2018-02-05 2019-08-14 한국화학연구원 스페로이드 투명화용 조성물, 이를 이용한 스페로이드 투명화 방법 및 이를 포함하는 키트
CN111024563A (zh) * 2019-12-30 2020-04-17 深圳开立生物医疗科技股份有限公司 一种白细胞分类试剂

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4099917A (en) 1977-07-21 1978-07-11 Technicon Instruments Corporation Process for preparing a cell suspension from blood for discrimination of white blood cells and platelets from other blood particles
JPS5743364A (en) 1980-06-27 1982-03-11 Union Carbide Corp Non-aquous battery
US4751179A (en) 1984-05-31 1988-06-14 Coulter Electronics, Inc. Method and reagents for differential determination of four populations of leukocytes in blood
JP2935529B2 (ja) * 1990-03-01 1999-08-16 シスメックス株式会社 白血球分類方法および試薬
AU613642B2 (en) 1987-05-29 1991-08-08 Toa Medical Electronics Co., Ltd. Method for classifying leukocytes and reagents
JP2778745B2 (ja) * 1989-06-19 1998-07-23 東亜医用電子株式会社 血液中の白血球弁別測定用試薬
JP2836865B2 (ja) * 1989-10-23 1998-12-14 東亜医用電子株式会社 血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬
US5242832A (en) * 1990-03-01 1993-09-07 Toa Medical Electronics Co., Ltd. Reagent for measurement of leukocytes and hemoglobin in blood
DE4018502A1 (de) * 1990-06-09 1991-12-12 Merck Patent Gmbh Verfahren und mittel zur beseitigung von truebungen in biologischen fluessigkeiten
CA2048302A1 (en) * 1990-08-15 1992-02-16 Victoria P. Meucci Solubilization reagent for biological test samples
DE69327775T2 (de) * 1992-11-19 2000-06-21 Sysmex Corp Verfahren zur Vorbehandlung für Blutanalyse

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101046439B (zh) * 2006-03-29 2011-01-19 希森美康株式会社 血样的测定方法及测定装置

Also Published As

Publication number Publication date
KR100287583B1 (ko) 2001-05-02
EP0617281A2 (en) 1994-09-28
AU5785694A (en) 1994-09-22
JP3301646B2 (ja) 2002-07-15
CA2119390A1 (en) 1994-09-20
JPH06273413A (ja) 1994-09-30
DE69419053D1 (de) 1999-07-22
EP0617281B1 (en) 1999-06-16
ES2132352T3 (es) 1999-08-16
AU665508B2 (en) 1996-01-04
TW297093B (zh) 1997-02-01
CN1095481A (zh) 1994-11-23
CA2119390C (en) 1997-04-08
DE69419053T2 (de) 1999-10-21
EP0617281A3 (en) 1995-09-06
KR940022088A (ko) 1994-10-20
US5413938A (en) 1995-05-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1088194C (zh) 测定幼稚细胞用试剂
US5389549A (en) Method for classifying leukocytes and a reagent used therefor
CN1084474C (zh) 白血球分析用试剂及白血球的分类方法
Gong et al. Value of CD23 determination by flow cytometry in differentiating mantle cell lymphoma from chronic lymphocytic leukemia/small lymphocytic lymphoma
CA2027452C (en) Method for classifying leukocytes and a reagent used therefor
EP1542008B1 (en) Method of classifying and counting leucocytes
EP0882983B1 (en) Reagent and method for classification and counting of leukocytes
JP2619900B2 (ja) 血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬および方法
JP4042925B2 (ja) 幼若白血球の分類計数法
CN1198144C (zh) 用于血样中血红蛋白的测量和白细胞的测定的试剂
RU2435164C2 (ru) Реактив и набор реактивов для анализа незрелых лейкоцитов
EP0131020A1 (en) METHOD FOR THE VOLUME DIFFERENTIATION OF LEUKOCYTES.
AU613642B2 (en) Method for classifying leukocytes and reagents
JP4484375B2 (ja) 異常細胞検出方法
CN1034242C (zh) 筛选细胞或成形体的方法和设备
Zarev et al. Comparative study of monocyte enumeration by flow cytometry: improved detection by combining monocyte-related antibodies with anti-CD163
JP2004028615A (ja) リンパ球サブセットの異常を検出する方法
US7300763B2 (en) Method of testing myelotoxicity with the use of flow cytometer
Daramy et al. Investigating the impact of shear flow on nanoparticle-protein interactions
Cobbold Human leukocyte differentiation antigens: monoclonal antibody computer databases as a tool for the future
CN117825243A (zh) 血细胞分析仪、血液分析方法以及感染标志参数的用途
Pedraza et al. Acute Leukemias: Ultrastructural, Cytochemical, and Immunologic Diagnostic Approaches
STETLER-STEVENSON FLOW CYTOMETRIC DETECTION OF B-CELL NON-HODGKIN'S LYMPHOMA
Peiper et al. l~ nocytoloEtc Analysis of MJllllmmt Lymllieaas

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C53 Correction of patent for invention or patent application
CB02 Change of applicant information

Applicant after: Sysmex Corp.

Applicant before: East Asian Medical Electronic Co., Ltd.

COR Change of bibliographic data

Free format text: CORRECT: APPLICANT; FROM: EAST ASIA MEDICAL ELECTRONICS CO., LTD. TO: SYSMEX CO., LTD.

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C17 Cessation of patent right
CX01 Expiry of patent term

Expiration termination date: 20140319

Granted publication date: 20020724