JPH05500364A - 単離したＮ―ホルミル―Ｌ―アスパラギン酸無水物を使用するα―Ｌ―アスパルチル―Ｌ―フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 単離したＮ−ホルミル−し−アスパラギン酸無水物を使用するα−Ｌ−アスパル チル−し一フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩の製造方法発明の背景 本発明はα−Ｌ−アスパルチル−し一フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩（ α−ＡＰＭ　（ＨＣ１））の製造方法に関し、これは蔗糖の約２００倍の甘味を 有する甘味料、α−Ｌ−アスパルチル−し一フェニルアラニンメチルエステル（ α−ＡＰＭ）の製造に使用する。この化合物、ジペプチドの能力は糖を使用する 場合よりはるかに少ない量を使用して食品および飲料に甘味を付与できる。従っ て、数百万の消費者が日常甘味品を断念せずにカロリー摂取を減少できる。又、 サッカリンおよびサイクラメートのような他の甘味料に関係する不愉快な後味も ない。さらに、本発明はＡＰＭ　（ＨＣｌ）のα／β比の増大方法および攪拌し うる粘度を有するＮ−ホルミル−α−Ｌ−アスパルチルーＬ−フェニルアラニン （ＦＡＰ）の反応混合物の製造方法に関する。

α−ＡＰＭは新規てはなく、５ｃｈｌａｔｔｅｒの米国特許第３．４９’２．１ ３１号明細書（１９７０）に記載された。

異る製造方法および関連化合物を含む多数の他の特許はそれ以来発行され、ジペ プチドが低カロリー産業に対し有した効果を報告する多数の文献が発表された。

しかし、現在まて製造方法は高価な単離および回収方法を含み、従ってこれは消 費者が負わねばならない。本発明はｌ容器方法（ｏｎｅ　ｐｏｔ−ｐｒｏｃｅｓ ｓ　）および所望最終生成物の改良収量を有する操作の簡易な製造方法である。

α−Ｌ−アスパルチル−し一フェニルアラニンメチルエステルは本質的に２種の アミノ酸、Ｌ−アスパラギン酸およびＬ−フェニルアラニンから成るジペプチド である。ジペプチドの甘味性はこれらの各個アミノ酸の立体化学によることがし ばらく前から既知てあった。これらの各アミノ酸はＤ又はＬ形で存在しうる。Ｌ −アスパルチル−し−フェニルアラニンエステルは甘いが、相当するＤ−Ｄ、Ｄ −ＬおよびＬ−Ｄ異性体は甘味を有しないことが分った。Ｌ−Ｌジペプチド、Ｄ Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−アスパルチル−ＤＬ−フェニル アラニンおよびＤＬ−アスパルチル−ＤＬ−フェニルアラニンを含む異性体の組 み合せは甘味があるが、ラセミ体がＬ−Ｌ部分の１／２を含むので甘味は１／２ に過ぎない。

ジペプチドはＬ−アスパラギン酸とＬ−フェニルアラニン又はそのメチルエステ ルを結合するカップリング反応により製造される。このカップリング反応はアス パラギン酸部分に結合するアミノ保護基、例えばホルミル、アセチル、アセトア セチル、ベンジル、置換および未置換カルボベンゾキシ、ｔ−ブトキシカルボニ ルおよびヒドロハライド塩なとか必要である。当業者にはしばしばＮ−保護基を 意味するアミノ保護基は、本開示ではホルミル部分か本発明のブロック剤である のでＮ−ホルミルを意味する。Ｎ−ホルミルアスパラギン酸無水物は広く使用さ れる出発物質であり、その方法は広く記載される。

米国特許第４，１７３，５６２号明細書参照。

しかし、大過剰の蟻酸を溶媒として使用する場合、単離したＮ−ホルミルアスパ ラギン酸無水物の収量は比較的低収量であった。例えば２倍過剰の蟻酸は無水物 の溶解性を減少させるためにトルエン又は他の溶媒の添加を必要とし、従って広 汎な溶媒の回収工程が必要となる。

カップリング反応は溶媒中で行ない、これはα−Ｌ−アスパルチル−し一フェニ ルアラニンメチルエステル（α−ＡＰＭ）のいくつかの特許製造方法で普通の工 程である。ウチャマの米国特許第３，９６２．２０７１、Ｂａｃｈｍａｎの米国 特許第４，１７３，５６２号およびＹａｉｃ旧らのＥＰＯ特許第１２７．４１１ 号参照。２つのアミノ酸のカップリング反応中２種の異性体が中間体として製造 され、これらの立体化学が最終的に特別分子の甘味を決定する。α異性体は純粋 α−ＡＰＭの単離画分が糖の約１３０〜２００倍の甘味を有することで所望生成 物である。しかし、β異性体はこのような甘味を有しない。

本発明はα−ＡＰＭ　（ＭＣＩ）の改良製造法を目的とし、これは製造コストを 減少し、所望最終生成物である。

異性体の収量を増加させる。

ＡＰＭのαおよびβ異性体は下記する：α異性体 Ｈ２Ｎ−Ｃ−ＨＣＨ２−０ β異性体 カップリング反応からαおよびβ異性体の形成およびこれらのそれぞれの割合は 反応の遂行に使用する溶媒の種類、反応が行なわれる温度および溶媒使用量によ ることが決定された。Ｂａｃｈｍａｎの米国特許第４，１７３．５６２号明細書 によれば、７５　：　２５のα／β異性体比は５０°Ｃのカップリング反応で溶 媒として酢酸を使用する場合達成できる。酢酸対フェニルアラニンのモル比は少 なくとも１０：１でなければならない。α／β異性体比は酢酸対し一フェニルア ラニンモル比が６：Ｉに減少する場合６９／３１にかなり低下する。本発明はカ ップリング反応に溶媒として使用する酢酸を一部アルキルエステル、ヒンダード アルコール又はその混合物で置換する場合、α／β比は約８０／２０に増加でき ることを示す。

本開示では、使用するヒンダードアルコールとは第２又は第３アルコールを意味 する。

この方法でこれらの溶媒の使用に属する問題は０．５〜３時間の反応時間後反応 混合物が固化し、攪拌、濃縮、脱ホルミル化、又は反応容器からの取り出しか実 質的に困難になることである。少なくとも２つの理由で攪拌しうる系は必要であ る。第１に、攪拌して反応体を混合することにより完全な反応の達成が保証され る。第２に、溶媒は後に蒸留により除去しなければならない。

先行技術に存する別の問題は、いくつかの手法では２５％文はそれ以上のα−Ａ ＰＭが失なわれることで、これは初めの反応溶液中に残留するからである。米国 特許第４，１７３，５６２号参照。さらに問題は、米国特許第４．１７３，５６ ２号特許明細書ではＮ−ホルミル−し−アスパラギン酸無水物はアスパラギン酸 、大過剰の蟻酸および無水酢酸の反応混合物から製造することである。大過剰の 蟻酸はある時点で蒸留により除去し、最終生成物のコストに添加される酢酸から 分離しなければならない。

米国特許第３，９６２，２０７号明細書は無水Ｌ−アスパラギン酸塩酸塩をＬ− フェニルアラニンメチルエステルとカップリングさせる同様の方法を記載する。

米国特許第３，９６２，２０７号の方法で生ずる問題は、大量のし一フェニルア ラニンメチルエステルを必要とすることにあり、これは方法のコストに添加され る。第２に、かなりの量のトリーペプチドが形成されることで、これは除去しな ければならず、そのため費用がかかり、分離技術を倉入りに行なわねばならない 。本発明ではこれは必要ではない。

米国特許出願番号第１５６，２６８号明細書はホルミル化し一アスパラギン酸無 水物の形成から生ずる反応副生物をＬ−フェニルアラニンとのカップリング反応 に対応し溶媒として供するα−ＡＰＭの１容器方法を記載する。

発明の要約 本発明はα−ＡＰＭ　（ＨＣ１）の製造方法を目的とする。これはＮ−ホルミル −Ｌ−アスパラギン酸無水物を製造し、Ｌ−フェニルアラニンとのカップリング 前に反応副生物から単離する方法である。この単離はＮ−ホルミル−Ｌ−アスパ ラギン酸無水物を濾過して過剰の蟻酸を除去することにより完了する。蟻酸使用 量を最少にするので、Ｎ−ホルミル−し−アスパラギン酸無水物の溶解度を減少 させる追加溶媒は必要としない。α−ＡＰＭ（ＨＣＩ）の収量増加は単離Ｎ−ホ ルミル−し−アスパラギン酸無水物の使用により得られる。カップリング反応を エステル又はヒンダードアルコールにより稀釈すると、本方法ではα−ＡＰＭ　 （ＨＣ１）の収量の改良に有効であることも開示される。

最初ニ、Ｎ−ホルミル−し−アスパラギン酸無水物は無水酢酸および蟻酸を組合 せて当業者に既知のものと同様の反応方法で製造する。米国特許第３，９３３， ７８１号、第３’、９６２，２０７号および第４，１７３，５６２号明細書参照 。しかし、本発明は最少量の蟻酸（１，３３〜１．３５モル当量１モル、アスパ ラギン酸）を利用し、過剰の蟻酸は濾過又は遠心分離などの多数ある方法のうち の１方法により除去できる。

次にＮ−ホルミルアスパラギン酸無水物は酢酸に懸濁させ、又は溶解し、Ｌ−フ ェニルアラニン（Ｌ−Ｐｈｅ）を添加してカップリングできる。アルキルエステ ル又はヒンダードアルコールは任意にはカップリング反応に添加し、驚くべきこ とにα／β比を改良する。エステルは通常アルコールと無水物を反応させて製造 するが、反応中ヒンダードアルコールはＮ−ホルミルアスパラギン酸無水物を攻 撃しないことは意外である。酢酸は反応の溶媒として添加される。このカップリ ング反応は低攪拌又は無攪拌條件下で行ない、反応混合物を低粘性に保持して攪 拌しつる最終反応混合物を形成できる。

次に生成ジペプチドは蒸留により濃縮し、ＨＣＩにより脱ホルミル化し、メタノ ール、水およびＨＣＩの濃度をα−ＡＰＭ　（ＨＣ１）の高収量を得る有効量に 調整したエステル化する。α−ＡＰＭ　（ＨＣ１）は反応混合物から沈澱し、単 離し、塩基により中和してα−ＡＰＭを形成させる。

本発明はα−ＡＰＭ　（ＨＣ１）の改良製造方法に関する。方法はＬ−アスパラ ギン酸と最少量の蟻酸（アスパラギン酸基準で少なくとも１．３３モル当量）お よび無水酢酸（アスパラギン酸基準で少なくとも約２．０モル当量）と酸化マグ ネシウムのような触媒の存在で混合することにより開始され、Ｎ−ホルミル−し −アスパラギン酸無水物を形成する。適当な触媒は金属酸化物、金属水酸化物お よび金属塩を含み、米国特許第４，５０８゜９１２号および第４．５５０，１８ ０号明細書に開示される。この反応は約５２°Ｃまての温度で行なう。混合物は 約５０°Ｃで少なくとも約２．５時間、好ましくは約６時間攪拌することが好ま しい。蟻酸使用量はアスパラギン酸基準で１，３３から１．３５モル当量が好ま しい。

−次に最終反応混合物は１０〜２０℃に冷却し、形成固体を単離する。単離は遠 心分離又は濾過し、酢酸で洗滌して完了するのがよい。固体Ｎ−ホルミル−Ｌ− アスパラギン酸無水物を単離し、酢酸は恐らく混合物中に残留するであろう。単 離した無水物はアルキルエステル又はヒンダードアルコール又は２種の適当な混 合物および追加の酢酸に添加する。次に形成スラリーはＬ−フェニルアラニンと 好ましくは当量で反応させる。

アルキルエステルおよび／又はヒンダードアルコールは少なくとも約１．２モル １モル、Ｌ−フェニルアラニンに等しＣ）量で添加する場合、α／β比を増加す ることが分った。α／β比はエステル、アルコール又はその組合せのモル量がＬ −フェニルアラニンの約４．７倍である点までエステル又はアルコールの量を増 加するにつれて増大する。この点で飽和レベルに達し、異性体比はエステル又は アルコールをいくら増加しても変らない。

好ましくは、カップリング反応に利用するアルキルエステルは酢酸メチル、酢酸 エチル、酢酸イソプロピル、酢酸ｎ−ブチル、および蟻酸イソプロピルを含む群 から選択する。酢酸メチル（ＭｅＯＡｃ）は好ましいアルキルエステルである。

酢酸メチルを使用する場合、添加量はモル１モル基準てＬ−フェニルアラニン量 の１．２〜４．７倍であるべきである。使用できるヒンダードアルコールはイソ プロピルアルコールおよび第２又は第３ブチルアルコールである。イソプロピル アルコールは好ましいヒンダードアルコールである。これらは本発明の好ましい 態様であり、決して他のアルキルエステル又はヒンダードアルコールの使用を制 限するものではなく、又本発明の範囲を限定するものでもない。

次に、カップリング反応は上記混合物を約４〜６時間約０〜６０°Ｃ１好ましく は１５〜４０°Ｃの温度で攪拌することにより行なう。カップリング反応中生ず る問題は、反応がＮ−ホルミルτＬ−アスパルチルーＬ−フェニルアラニンを形 成しながら行なわれる場合、混合物又はスラリーは固化、すなわち可能であって も攪拌か極端に困難になる点まで粘度が増加することである。この範囲の高粘度 により攪拌が非常に困難になり、上記の酢酸、エステルおよび／又はヒンダード アルコールの蒸留を阻害する熱伝導の妨害が起こる。カップリング反応直前又は 反応中に添加する酢酸はこの固化を抑止し、すなわち粘度は低下することが分っ た。これは混合により反応の完了が保証されることで重要である。さらに、酸お よびエステルは脱ホルミル化前に蒸留して混合物から除去しなければならない。

反応混合物は反応を有効に完了させるために攪拌できなければならない。

酢酸添加量はＮ−ホルミル−し−アスパラギン酸無水物の合成量による。Ｎ−ホ ルミル−し−アスパラギン酸無水物を酢酸の存在で濾過により単離する場合、い くらかの酢酸は既に存在する。系の酢酸総量はモル１モル基準でＬ−フェニルア ラニンの約６〜１６倍、好ましくはモル１モル基準でＬ−フェニルアラニンの約 １１．１倍であるべきである。従って、酢酸は添加されるＬ−フェニルアラニン の１１．１倍量で添加するとは限らない。

系に存在する酢酸の総モル量がＬ−フェニルアラニンの約１１．１倍であるよう に少量で十分である。

本発明の別の独特の面はカップリング反応混合物の攪拌を調整してカップリング 反応混合物の粘度を低下させることである。カップリング反応中停止し、又は攪 拌速度を低減するとカップリング反応混合物の粘度を劇的に低下させることが分 った。大きな反応容器（１０フィート直径反応容器、５フート長さの擢を存する 機械撹拌機装備）では、５〜４０ｒｐｍのような非常に遅い攪拌および５〜１５ 分毎に攪拌機を簡単に運転するような間欠的攪拌は約６Ｏｒｐｍ又はそれ以上の 攪拌速度で行なう反応に比較するとカップリング反応混合物の粘度を劇的に減少 する。実験室規模の反応容器（４インチ丸底フラスコ、３インチ擢を有する）で は、２００〜３００　ｒｐｍで非常に濃密な反応混合物を生ずるか、５〜ｉ５ｒ ｐｍの攪拌ては撹拌てきる非常に低粘度の反応混合物を生ずる。又、Ｌ−フェニ ルアラニンを反応混合物に添加後約１時間で攪拌機を停止し、反応後、すなわち 約６時間抜攪拌機を再回転すると非常に低粘度を有する反応混合物を生ずる。

しかし、商業規模の操作では、攪拌機を１時間以上の期間停止する場合、沈澱の 沈着およびケーキングのために攪拌機の再回転は非常に困難である。従って、緩 慢攪拌および周期的攪拌は好ましい。

カップリング反応混合物について「攪拌しうる」又は「低粘度」とはガラス容器 又は反応容器で攪拌でき、又は容器に流しこみうる液体を意味する。これらの液 体は一般に約１５．０００ｃｐ以下、有利には１．０００から１０．０００ｃｐ 、好ましくは１５０〜５００ｃｐの粘度を有する。

攪拌要素は本発明の実施では臨界的ではない。任意の標準的攪拌要素、すなわち 、不活性ガスの噴射、振盪、反応容器のタンプリング、機械攪拌などは使用でき る。

機械攪拌は好ましい。攪拌機の正確な構成も臨界的ては５〜約４０　ｒｐｍ　、 好ましくは約２Ｏｒｐｍにセットする。

ｍ７秒の擢先端速度は擢の長さ基準でセットしたｒｐｍて変動するが、本発明の 実施ではｒｐｍは撹拌機速度を一層正確に記載することが分った。約４０ｒｐｍ 以下の任意の撹拌機速度は反応混合物の粘度を低下することで許容しうる。しか し、実験室規模の装置（４インチ　フラスコ）では、４０〜１５０ｒｐｍの撹拌 機速度により攪拌しつる反応混合物か形成する。

上記発明により製造したＮ−ホルミル−α−アスパルチル−し−フェニルアラニ ンのαおよびβ異性体（α／βＦ−ＡＰ）は高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬ Ｃ）により分析でき、これらの方法が約７９．５：２０．５の異例の高α／β比 を形成することを示す。

任意には、酢酸および任意のエステル（酢酸メチル、蟻酸イソプロピルなど）又 はヒンダードアルコールは下記脱ホルミル化工程前に反応混合物から除去する。

好ましくは、酢酸およびエステルは約１５〜約２５インチ水銀で真空蒸留する。

真空蒸留はα／βＦ−ＡＰの脱ホルミル化に使用するＨＣＩの添加前に行なう。

酢酸、エステルおよび／又はアルコールは回収し、次のカップリング反応に使用 するために再循環する。

次にＮ−ホルミル−し−アスパルチル−し−フェニルアラニンのαおよびβ異性 体を脱ホルミル化する。塩酸、および任意にはメタノールは異性体混合物に添加 してα／βＦ−ＡＰを脱ホルミル化し、α／β−ＡＰを形成させる。過剰のメタ ノールも反応混合物に存在する任意の残留酢酸および蟻酸と反応して酢酸メチル および蟻酸メチルを形成し、これらは酢酸又は蟻酸よりはるかに低い沸点を有し 、従って一層低い温度で蒸留して系から除去できる。

次にα／β−ＡＰおよびこれらの各種メチルエステルの形成混合物はα−ＡＰＭ 　（ＨＣ１）の高収量を得る十分量にＨＣＩ、メタノールおよび水の濃度を調整 してエステル化する。メタノール濃度は約１〜約ＩＯ重量％、好ましくは約３〜 約５重量％であるべきである。ＨＣＩ濃度は約９〜約１８重量％、好ましくは約 １２．５〜約１４．５重量％であるべきである。水濃度は約３２〜約５０重量％ 、好ましくは約３７〜約４２重量％であるべきである。従って、水、ＨＣＩおよ びメタノール濃度の調整後、反応混合物は約３５°Ｃ以下の温度、好ましくは環 境温度（２０〜３０℃）で温和に攪拌する。エステル化は約４〜約ｌＯ日、通例 約６日で完了する。

α−Ｌ−アスパルチル−し一フェニルアラニンメチルエステルの形成塩酸塩（α −ＡＰＭ　（ＨＣ１））　、α−ＡＰＭ−ＨＣＩ・２Ｈ２０はβ−ＡＰＭ　（Ｈ ＣＩ）より水溶液中の溶解度が低いのてβ−異性体から容易に分離される。Ａｒ １ｙｏｓｈｉの米国特許第３．７９８，２０７号明細書参照。α異性体は溶液か ら沈澱し、濾過、遠心分離、デカンテーション又は多数の他の通例方法のうちの １つにより分離する。

次にα−ＡＰＭ　（ＨＣ１）は塩基により中和してＡＰＭを形成し、これは次に 当業者に眉知の結晶化技術により回収する。

八個は本発明を特に実証するために供する。これらの例は例示のためにのみ示し 、発明の精神及び範囲を限定するものとして解すべきではない。物質および方法 は当業者に対し本開示から明らかであろう。

例１ 酸化マグネシウム（０，１２１ｇ、０．００３モル）は窒素下で１９．３ｇ　（ ０，４モル）の９５％蟻酸に溶解した。次に無水酢酸（６９，３ｇ、０．６５５ モル）を溶液に添加し、１０〜１５分攪拌した。混合物の温度は４０°Ｃに上昇 した。Ｌ−アスパラギン酸（３９，９３ｇ、０．３０モル）を混合物に添加し、 形成スラリーは約５０°Ｃで６時間攪拌した。Ｎ〜ホルミル−し−アスパラギン 酸無水物はこの点で形成し、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）により分っ た。次に混合物は濾過し、３０ｇの酢酸で洗滌してＮ−ホルミル−Ｌ−アスパラ ギン酸無水物を単離した。Ｌ−アスパラギン酸からＮ−ホルミル−し−アスパラ ギン酸無水物の収量は８０％であった。Ｎ−ホルミル−し−アスパラギン酸無水 物はいくらか酢酸を含み、これはカップリング工程の溶媒として使用するために 残す。

酢酸メチル４６．３５ｇ、４９．８ｍｌおよび酢酸（１５９，８ｇ、１５２．１ ｍ１）をＮ−ホルミル−し−アスパラギン酸無水物（４１，１ｇ、４．３６ｇの 酢酸を含む）に添加した。Ｌ−フェニルアラニン（３９，６５ｇ、０．２４モル ）をヒ記混合物に添加し、約２５°Ｃて約５時間攪拌した。ＨＰＬＣ分析により 約７８％のα異性体および約２２％のβ異性体を有するＮ−ホルミル−し−アス パルチル−し−フェニルアラニンであることか分った。混合物は２０“の水銀真 空下で６０〜７３°Ｃで蒸留して１２０ｍ１の溶媒を除去した。メタノール（５ ８，５ｍ１）および３５％ＨＣＩ　（２６，７ｍ１）をＮ−ホルミル−Ｌ−アス パルチル−し−フェニルアラニンに添加し、混合物は６０℃に加熱し、３０分攪 拌した。混合物は常圧で約７０〜７５℃の温度で蒸留して蟻酸メチルおよび酢酸 メチルを除去した。さらに１０８ｎ＋１のメタノールを添加しながら蒸留を続け た。温度が８５°Ｃに達するまで蒸留を続け、次に温度が３０°Ｃに低下するま で真空を適用した。塩酸（３２，４ｍ１）、水（２１，７ｍ１）およびメタノー ル（９ｍｌ）を添加し、混合物は室温（２２〜２７°Ｃ）で６日攪拌し、その間 α−Ｌ−アスパルチル−し−フェニルアラニンメチルエステルの塩酸塩が形成し 、沈澱した。飽和ブライン（５０ｍｌ）を使用して生成物を洗滌した。生成物、 α−Ｌ−アスパルチル−し一フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩２水物白色 結晶５８．８ｇを得、７２重量％のα−Ｌ−アスパルチル−し一フェニルアラニ ンを含み、Ｌ−フェニルアラニン出発量基準で６０％収量であった。

例２ Ｎ−ホルミル−し−アスパラギン酸無水物を濾過し、酢酸で洗滌して単離した。

異るアルキルエステルおよびヒンダードアルコールを各秤量で溶媒として使用し てα／β異性体比に対し酢酸メチル以外のエステルおよびアルコールの効果を測 定した。異るエステルおよびアルコールは使用量および各溶媒の使用により得た α／β異性体比と共に表１に表示する。

Ｎ−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸無水物（２８，６ｇ、０．２０モル）は窒素 雰囲気下で１００ｍ１の酢酸および０．９０モルの特別の共溶媒によりスラリー 化した。

Ｌ−フェニルアラニン（３３，０４ｇ、０．２０モル）を各反応混合物に添加し 、次に２０ｍ１の追加の酢酸で洗滌した。各混合物は室温（２２〜２７°Ｃ）で 約５時間攪拌した。カップリング反応が完結に向うにつれ、スラリーは一層濃厚 で、一層高ぼるようになった。次に各スラリーを約５０°Ｃで１時間加熱し、メ タノールおよび水のｌＯ：１混合物をすべての固体が溶解するまで添加した。

各混合物を秤量し、１ｇの試料を取り出し、ＨＰＬＣで分析した。各溶媒の使用 により得たα／β比は表１に表示する。

表　Ｉ 酢酸メチル　７１．５ｍｌ　７９：２１酢酸エチル　８８．Ｏｍｌ　８０：２０ 酢酸イソプロピル　１０５．５ｍｌ　８１：１９酢酸ｎ−ブチル　１１８．５ｍ ｌ　８１：１９蟻酸メチル　５５．５ｍｌ　７６：２４蟻酸イソプロピル　７１ ．Ｏｍｌ　７８：２２イソプロピルアルコール　６９．０１１１１　７７：２３ 第２ブチルアルコール　８２．５ｍ１　７８：２２第３ブチルアルコール　８５ ．Ｏｍｌ　７９：２１酢酸のみ　５１．５ｍｌ　７６：２４ 例３ Ｎ−ホルミル−し−アスパラギン酸無水物は例１に示す手順に従って製造し、初 めの反応混合物から濾過し、酢酸で洗滌して単離した。１３．３ｇ（０，１モル ）のＮ−ホルミル−し−アスパラギン酸無水物は３４．４１ｇ（０，４０５モル ）の酢酸メチルと混合し、次いで１４．５７ｇ　（０，０９モル）のＬ−フェニ ルアラニンを混合物に添加した。約３時間攪拌後、スラリーは一夜室温（２０〜 ２５°Ｃ）に放置した。形成混合物はメタノールおよび水の９：ｌ混合液に溶解 した。Ｎ−ホルミル−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンのα／β異性体 比はＨＰＬＣにより８０：２０であることが分った。

国際ｖ４葺報告

Claims (30)

【特許請求の範囲】
1. １．次の工程： （ａ）蟻酸および無水酢酸の反応混合物中でＬ−アスパラギン酸をホルミル化し てＮ−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸無水物を得、 （ｂ）Ｎ−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸無水物を単離し、 （ｃ）Ｎ−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸無水物とＬ−フェニルアラニンをα， β−Ｎ−ホルミル−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニン異性体を得る有効 温度でカップリングし、 （ｄ）有効量の塩酸を添加して異性体を脱ホルミル化し、 （ｅ）反応混合物から残留酢酸および蟻酸を除去し、（ｆ）有効量のメタノール 、水および塩酸を反応混合物に添加して脱ホルミル化異性体をエステル化してα −およびβ−ＡＰＭ塩酸塩を得、α−ＡＰＭ−塩酸塩はそこに沈澱し、および （ｇ）α−ＡＰＭ塩酸塩を単離する工程を含むことを特徴とする、α−ＡＰＭ塩 酸塩の製造方法。
2. ２．工程（ｃ）は反応混合物が撹拌しうるように反応混合物の粘度を減少させる のに十分量の添加酢酸量の存在で行なう、請求項１記載の方法。
3. ３．カップリング工程は適量のアルキルエステル、ヒンダードアルコール又はそ の混合物の存在で行なう、請求項２記載の方法。
4. ４．カップリング工程（ｃ）は脱ホルミル化工程（ｄ）前に反応混合物に存在す る酢酸、ヒンダードアルコールおよびエステルを真空蒸留することをさらに含み 、脱ホルミル化工程（ｄ）は反応混合物に存在するいくらかの蟻酸および酢酸を エステル化するのに有効量のメタノールを添加することをさらに含み、および工 程（ｅ）は形成する酢酸メチルおよび蟻酸メチルの除去を含む、請求項１、２又 は３に記載の方法。
5. ５．除去工程（ｅ）は常圧蒸留により行なう、請求項４記載の方法。
6. ６．除去工程（ｅ）は真空蒸留により行なう、請求項４記載の方法。
7. ７．単離したα−ＡＰＭ塩酸塩を塩基により中和してＡＰＭを形成する、請求項 ４記載の方法。
8. ８．存在する酢酸の総モル量はＬ−フェニルアラニンのモル量の少なくとも６倍 である、請求項４記載の方法。
9. ９．存在する酢酸の総モル量はＬ−フェニルアラニンのモル量の約１１倍である 、請求項８記載の方法。
10. １０．アルキルエステルはＬ−フェニルアラニンのモル量の少なくとも１．２倍 のモル量で工程（ｃ）で添加する、請求項４記載の方法。
11. １１．アルキルエステルは酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、酢酸ｎ −ブチル、蟻酸イソプロピル又はその混合物である、請求項１０記載の方法。
12. １２．ヒンダードアルコールはＬ−フェニルアラニンのモル量の少なくとも１． ２倍のモル量で工程（ｃ）に添加する、請求項４記載の方法。
13. １３．ヒンダードアルコールはイソプロピルアルコール、第２ブチルアルコール 、第３ブチルアルコール又はその混合物である、請求項１２記載の方法。
14. １４．アルキルエステルおよびヒンダードアルコールの混合物はＬ−フェニルア ラニンのモル量の少なくとも１．２倍のモル量で工程（ｃ）に添加する、請求項 ４記載の方法。
15. １５．カップリング工程（ｃ）は撹拌せずに行なう、請求項４記載の方法。
16. １６．カップリング工程（ｃ）は撹拌しうる最終反応混合物を形成するのに十分 な撹拌条件下で行なう、請求項４記載の方法。
17. １７．撹拌は機械撹拌機により達成する、請求項１６記載の方法。
18. １８．機械撹拌機は約４０回転／分（ｒｐｍ）未満で回転する、請求項１７記載 の方法。
19. １９．機械撹拌機は反応を通して周期的に運転する、請求項１７記載の方法。
20. ２０．撹拌条件は： （ａ）Ｌ−フェニルアラニンの添加後最初の約１／２時間烈しく撹拌し、および （ｂ）その後ゆっくり又は間欠的に撹拌する、請求項１６記載の方法。
21. ２１．撹拌は機械撹拌機により達成し、および（ａ）烈しい撹拌は約６０ｒｐｍ の撹拌機速度で行ない、 （ｂ）ゆっくりした撹拌は約２０ｒｐｍの撹拌機速度で行ない、および （ｃ）間欠撹拌は１５分毎に少なくとも１回少なくとも１分撹拌機を運転して達 成する、 請求項２０記載の方法。
22. ２２．α−ＡＰＭ塩酸塩の製造に使用する副生物からＮ−ホルミル−Ｌ−アスパ ルチックアンヒドリドを実質的に単離する製造方法において、無水酢酸およびあ る量の蟻酸を含む反応混合物中でＬ−アスパラギン酸をホルミル化してＮ−ホル ミル−Ｌ−アスパルチックアンヒドリドを得、溶媒を全く添加せずにＮ−ホルミ ル−Ｌ−アスパルチックアンヒドリドを単離する工程を特徴とする、上記Ｎ−ホ ルミル−Ｌ−アスパラギン酸無水物の製造方法。
23. ２３．蟻酸量はＬ−アスパラギン酸１モルにつき１．３５モル当量を超えない、 請求項２２記載の方法。
24. ２４．（ａ）蟻酸および無水酢酸の最初の反応混合物中でＬ−アスパラギン酸を ホルミル化してＮ−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸無水物を得、 （ｂ）Ｎ−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸無水物を単離し、 （ｃ）Ｎ−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸無水物とＬ−フェニルアラニンを（ｉ ）酢酸および（ｉｉ）適当量のアルキルエステル、ヒンダードアルコール又はそ の混合物の存在で約５〜約４０℃の温度でカップリングしてα，β−Ｎ−ホルミ ル−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニン異性体を得、 （ｄ）酢酸および酢酸メチルを反応混合物から真空蒸留し、 （ｅ）有効量のＨＣｌおよびメタノールを添加して異性体を脱ホルミル化し、 （ｆ）蟻酸および酢酸を反応混合物から真空蒸留し、（ｇ）有効量のメタノール およびＨＣｌを反応混合物に添加して脱ホルミル化異性体をエステル化し、α， β−ＡＰＭ塩酸塩を得、α−ＡＰＭ−塩酸塩はそこに沈澱し、および （ｈ）α−ＡＰＭ−塩酸塩を単離する、ことを特徴とする、α−ＡＰＭ塩酸塩の 製造方法。
25. ２５．（ｉ）酢酸対Ｌ−フェニルアラニンのモル比は少なくとも約１１：１であ り、（ｉｉ）メタノールは真空蒸留工程（ｆ）中酢酸および蟻酸を除去するため 相当するメチルエステルを形成するのに有利な有効量で反応に添加する、請求項 ２４記載の方法。
26. ２６．ヒンダードアルコール、アルキルエステル又はその混合物対Ｌ−フェニル アラニンのモル比は少なくとも約１．２：１である、請求項２５記載の方法。
27. ２７．アルキルエステルは酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、酢酸ｎ −ブチル、蟻酸イソプロピル又はその混合物である、請求項２６記載の方法。
28. ２８．ヒンダードアルコールはイソプロピルアルコール、第２ブチルアルコール 、第３ブチルアルコール又はその混合物である、請求項２６記載の方法。
29. ２９．カップリング工程（ｃ）は撹拌しうる最終反応混合物の形成に十分な撹拌 条件下で行なう、請求項２５記載の方法。
30. ３０．撹拌は約３０ｒｐｍ未満の速度で機械撹拌機により達成する、請求項２８ 記載の方法。