KR920002337B1

KR920002337B1 - α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 메틸 에스테르 및 이의 염산염의 제조방법

Info

Publication number: KR920002337B1
Application number: KR1019840003049A
Authority: KR
Inventors: 요이시 오자와; 신니찌 기시모도; 에미꼬 시노하라; 다다시 다께모도; 지까히꼬 에구찌
Original assignee: 아지노모도 가부시끼가이샤; 우따다 가쯔히로
Priority date: 1983-06-02
Filing date: 1984-06-01
Publication date: 1992-03-21
Also published as: EP0127977A2; EP0127977A3; DE3467352D1; CA1268598A; EP0127977B1; IE841258L; KR850000466A; IE57518B1; US4618695A

Abstract

내용 없음.

Description

α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 메틸 에스테르 및 이의 염산염의 제조방법

본 발명은 상업적으로 유용한 펩타이드 감미제인 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 메틸 에스테르(α-APM)와 이의 염산염의 제조방법에 관한 것이다.

α-APM의 제조에 대한 여러 가지 방법이 알려져 있다.

대부분의 이들 방법에 따르면, 우선 아미노기를 카복실기, 포르말기, 할로겐화수소 또는 다른 보호기로 보호한 후에, L-아스파르트산(L-Asp)을 이의 무수물로 전환시키고, 그 무수물을 L-페닐알라닌 메틸 에스테르(PM)와 축합시켜 α-APM의 골격을 형성시킨 다음, 보호기를 제거한다.

이들 방법의 단점중의 하나는 α-APM을 L-Asp 또는 L-페닐알라닌(L-Phe)으로부터 합성할 때 부산물로서 β-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 메틸 에스테르(β-APM)의 생성이 불가피하므로 수득할 수 있는 α-APM의 수율이 어느 정도 제한된다는 사실이다. 또한, α 및 β-APM 이성체 혼합물로부터 α-APM을 분리하는 추가의 단계가 필요하다.

과거에, 순수한 α-APM만을 화학적으로 합성하는 여러 가지 방법이 제안되었다.

예를 들면, 일본국 특허원(tokkaisho 56-73053)에는 L-Asp의 NTA(N-티오카복시 무수물)를 PM과 축합시키는 방법이 기재되어 있다.

그러나, 이 방법 또한 최종생성물이 역겨운 냄새가 나는 등의 단점이 있기 때문에 대량생산에는 적합하지 않다.

또다른 일본국 특허원(tokkaisho 48-96557)에는 N-카보벤즈옥시-L-아스파르트산 β-벤질 에스테르로부터 유도된 NCA(N-카복시무수물)을 PM과 축합시킨 다음, 촉매적 환원으로 보호기를 제거하여 α-APM을 수득하는 방법이 기술되어 있으나 이 방법도 비용이 많이 들며, 여러 가지 다른 이유 때문에 대규모 생산방법으로 이용하기는 어려운 것같다.

β-APM 부산물을 생성하지 않고 α-APM을 제조하는 여러 가지 다른 방법들이 또한 알려져 있다.

이들 방법은 실험실에서는 수행할 수 있는 것이지만, 비용, 보조물질의 구입 및 다른 요인의 측면에서 볼 때 이들 방법중의 어느 것도 이용가능성은 거의 없다.

본 발명에 따라, α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르(α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌의 아스파르트산 잔기의 β-카복실그룹의 메틸 에스테르)는 L-Asp β-메틸 에스테르의 NCA를 L-Phe와 축합시켜서 제조할 수 있는 것으로 밝혀졌다.

이러한 방법으로 수득한 디펩타이드는 사용한 합성경로로 인한 필연적인 결과로서 L-Asp와 L-Phe 부분 사이에 β-결합을 갖는 이성체를 전혀 함유하지 않는다.

본 발명은 또한, 예를 들면, 상기의 방법으로 수득가능한 이러한 유형의 디펩타이드로부터 고수율로 α-APM을 제조하는 방법을 제공한다.

본 발명의 발명자들은 이미 α-APM을 메탄올(MeOH)과 염산의 혼합용매 속에 정치시키면 α-APM가 용액으로부터 이의 염산염 형태로 결정화되어 석출되는 동시에 소량의 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르가 용액 속에 생성된다는 것을 발견하였다.

여기에서는 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르가 α-APM의 에스테르 교환반응에 의해 생성되는 것으로 추정된다.

또한, 계에 함유된 화합물들 사이에는 평형이 이루어지는 것으로 추정된다.

본 발명의 발명자들은 추가로 연구한 결과, α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르가 에스테르 교환반응에 의해 α-APM를 생성하고, 이어서 이의 염산염 형태로 결정화되는데, 이때 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르를 특정한 조건하에서 정치시키면, 즉 메탄올 0 내지 20용량%, 진한 염산 8 내지 55용량% 및 물(나머지)로 구성된 혼합용매에 0.01mol/dl 내지 0.3mol/dl의 농도로 용해시켜 0 내지 60℃에서 용액을 유지시키면 염산염의 결정화로 평형이 이동함으로써 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르가 높은 수율(출발물질인 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르를 기준으로 하여 약 85% 또는 그 이상)로 α-APM 염산염으로 전환된다는 것을 알게 되었다.

부수적으로, α-APM 염산염이 매우 불용성이라는 사실도 알려졌다.(참조 : 미합중국 특허 제3,798,207호).

본 발명은 이러한 발견을 근거로 하여 완성하였다.

이와 같은 에스테르 교환반응에 의한 α-APM의 합성방법은 아직까지 전혀 발표되지 않았었다.

본 발명의 방법에서는 적정 농도의 염산을 용매로 사용할 수도 있으며, 필요하다면, 상기에서 언급한 바와 같은 메탄올 0 내지 20용량%, 진한 염산 8 내지 55용량% 및 물(나머지)로 구성된 조성물에 상응하는 조성물을 생성시키기 위하여 적정량의 메탄올을 가할 수도 있다.

고농도의 염산은 펩타이드 결합을 분열시키는 경향이 있는 반면에 저농도일 경우에는 α-APM 염산염의 결정화가 불충분하게 된다.

메탄올의 양이 0%인 경우(즉, 메탄올을 전혀 가하지 않은 경우)에는 에스테르의 가수분해가 일어나며, 과량의 메탄올을 사용하는 경우에는 디에스테르화 반응이 더 잘 일어난다.

상기에서 언급한 조성의 혼합용매에 용해되는 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르의 양은 0.01 내지 0.3mol/dl의 범위이어야 한다.

저농도일 경우, α-APM 염산염의 결정화 반응이 불충분하게 되며, α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르를 더 다량 사용하면, 용매에 완전히 용해되지 않는다.

분자간 에스테르 교환반응은 0 내지 60℃의 온도에서 수행하여야 한다.

온도는 일정하게 유지시키거나 이 온도 범위내에서 변환시킬 수도 있다.

더 높은 반응온도에서는 펩타이드 결합이 분열되며, 저온일 경우에는 에스테르 교환반응이 감소된다.

에스테르 교환반응은 이러한 조건하에서 2 내지 14일 이내에 거의 완결된다.

반응이 끝난 후, α-APM 염산염의 결정을 적당한 방법으로 분리하고, 필요하다면, 계속해서 중화시켜 유리 α-APM를 수득한다.

α-APM 염산염 결정을 분리한 후에 얻은 모액에 상기에서 언급한 조성물이 형성되도록 적정량의 메탄올, 염산 및/또는 물을 가하고, 계속해서 새로운 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르를 가하면, 출발물질로 사용한 모든 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸에스테르가 실제로 손실없이 정량적으로 α-APM 염산염으로 전환될 수 있다.

필요하다면, α-APM 염산염을 탄산나트륨과 같은 적당한 알칼리로 중화시켜 α-APM의 결정을 수득할 수도 있다.

이하에는 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-저급알킬에스테르(α-AP-β-A : α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르도 포함한 디펩타이드 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌의 L-아스파르트산 잔기의 β-카복실산그룹의 저급알킬에스테르)의 제조방법을 기술한다.

L-아스파르틸-L-페닐알라닌 알킬에스테르는, L-페닐알라닌(L-Phe)알킬에스테르가 L-아스파르트산(L-Asp)과 결합하여 α-카복실그룹에서 펩타이드 결합을 형성하느냐 또는 β-카복실 그룹에서 펩타이드 결합을 형성하느냐에 따라 두가지 이성체 형태(α-APA 또는β-APA)로 존재한다.

이러한 두가지 이성체 형태 중에서 α-이성체(α-APA)는 감미제로서 상업적인 가치가 있으며, 알킬기가 메틸(α-APM)인 경우에 최고의 감미효과를 나타낸다.

β-이성체는 쓴맛을 내는 것으로 또한 알려졌다.

감미제로서 유용한 α-APA, 특히 α-APM을 제조하는 많은 제조방법이 제시되었다.

이들 중에서 실제로 이용할 수 있는 대부분의 공정들은 적당한 방법으로 미리 보호한 아미노기를 함유하는 L-Asp를 무수물로 전환시키고; 보호된 무수물을 L-페닐알라닌 메틸 에스테르(PM)와 축합시켜 펩타이드 결합을 형성시키고; 보호기를 제거하여 α-APM과 β-APM(β-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 메틸 에스테르)의 혼합물을 수득하고, 생성된 혼합물로부터 α-APM만을 결정화하여 분리하거나 α-APM-염산염과 같은 다른 적당한 형태로 분리하는 단계를 포함한다.

이들 방법 모두가 다음과 같은 불가피한 문제점들을 가지고 있다 : 즉 (1) 이들 공정들은 원래 β-이성체를 부산물로 생성하기 때문에, β-APM 또는 이의 N-보호된 유도체를 분별결정, 추출 또는 다른 방법으로 제조공정 도중에 제거하여야 한다; (2) α-APM가 아닌 β-APM의 생성이 불가피하다.

그 결과, 수득가능한 α-APM의 수율이 사실상 제한을 받게 된다; (3) 따라서, 상업적인 관점에서 저렴한 비용으로 α-APM를 얻기 위해서는 분리된 β-APM 또는 이와 관련된 화합물을 가수분해하여 L-Asp와 L-Phe을 회수하여 재사용하여아 한다.

그 결과, 제조단계가 복잡하게 된다; (4) L-Asp의 아미노기는 가격이 비싼 카보벤즈옥시기(Z), 포르밀기 등으로 보호하여아 한다.

또한 이들 보호기들은 환원 또는 공업적인 생산에 있어서 정교한 장치가 요구되는 염산을 사용하여 제거하여야 한다; (5) L-Asp보다 더 비싼 L-Phe를 축합반응을 위해서 이의 메틸 에스테르(L-Phe-OMe)로 전환시켜야 하기 때문에 에스테르화 반응의 수율은 최종 생성물 α-APM의 수율에 상당한 영향을 미치게 된다.

α-APM의 통상적인 화학적 합성방법에서의 난점들을 극복하기 위하여 본 발명의 발명자들은 주요한 중간체인 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르(α-AP-β-M)를 거쳐 β-이성체를 생성시키지 않는 α-APM의 완전한, 신규한 합성방법을 제공하게 되었다.

주요한 중간체의 합성방법과 당해 중간체로부터의 α-APM 제조방법은 이하에 기술한다.

L-아스파르트산 β-메틸 에스테르의 N-카복시 무수물(NCA)은, 예를 들면, L-Asp β-메틸 에스테르 또는 이의 염산염을 포스겐 또는 이의 이량체와 반응시켜 제조할 수 있다.

또한, L-Asp β-메틸 에스테르 또는 이의 염산염은 티오닐 클로라이드 또는 HCl 등의 산 촉매의 존재하에 L-Asp를 메탄올로 에스테르화하여 수득할 수도 있다.

L-Asp β-메틸 에스테르를 이의 N-카복시 무수물로 전환시키면 L-Asp β-메틸 에스테르의 아미노기는 보호되고 α-카복시기는 활성화된다.

N-카복시 무수물과 L-Phe의 축합반응은 다음과 같이 수행한다 :

반응 매질로서는 물 단독 또는 물과 수용성 유기용매의 혼합용매[이하에서는 간략하게 수성 용매라고 한다]를 사용해야 한다.

유기용매를 단독으로 사용하게 되면, 유기용매에 대한 L-Phe-ONa의 낮은 용해도 때문에 축합 수율이 낮아진다.

수성 용매를 사용하면 N-카복시 무수물의 용해도가 높기 때문에 반응이 순조롭게 진행된다.

적합한 수용성 유기용매는 아세토니트릴, 테트라히드로푸란, 디옥산 및 아세톤이며, 이들 중에서 반응 수율의 관점에서 아세토니트릴이 가장 바람직한 용매이다.

본 발명에 따르는 축합반응은 약알칼리성 조건하에서 수행하여야 한다.

산성 조건은 L-Phe의 아미노기의 반응성을 감소시키게 되므로 축합반응이 거의 일어나지 않는다.

또한, 강알칼리성 조건도 N-카복시무수물의 중합, 에스테르 결합의 가수분해 및 발생가능한 다른 부반응 때문에 바람직하지 않다.

이러한 문제들을 피하기 위해서는, 약 9.5 내지 11의 pH 범위에서 반응을 수행하여야 한다.

반응물과 반응하지 않는 염기성 물질을 pH 조절제로 사용할 수 있으며, 탄산염이나 중탄산염 등의 약염기를 사용하는 것이 바람직하다.

반응온도, 사용하는 반응물의 양(몰비) 및 다른 반응조건은 이하에 상세히 기술한다.

N-카복시-α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르(즉, 축합반응의 생성물)는 매우 불안정하고, 수득된 축합 반응용액을 염산이나 황산과 같은 적당한 무기산으로 간단히 산성화하여 탈카복실화할 수 있다.

그러므로, 탈카복실화 하기전에 용액으로부터 N-카복시-α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 메틸 에스테르를 분리할 필요는 없다.

탈카복실화된 생성물(α-AP-β-M)은 다음 단계(예를 들면, 분자간 에스테르 교환반응)에 사용하기 전에 반응혼합물로부터 분리하거나 또는 분리하지 않을 수도 있다.

이 화합물을 분리하는 경우에는, 예를 들면, 다음의 방법으로 수행할 수 있다 :

L-Asp β-메틸 에스테르의 NCA와 L-Phe-ONa의 축합반응으로 수득한 용액을 아세토니트릴로 세척하여 미반응 NCA를 제거하고, 수층을 묽은 황산과 같은 무기산으로 산성화함으로써 탈카복실화하여 α-AP-β-M을 생성시킨 다음, 메탄올을 가하여 무기염을 침전시키고, 여과하여 회수하고, 여액을 농축시켜 목적하는 α-AP-β-M의 백색 결정을 수득한다.

α-APM은, 예를들면, α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르(α-AP-β-M)를 적절한 조성의 메탄올/염산 혼합용매에 용해시키고, 생성된 용액을 정치시켜 제조할 수 있다.

분자간 에스테르 교환반응은 자연적으로 진행되어 α-APM을 생성하며, 생성된 α-APM은 용액으로부터 이의 염산염 형태의 결정으로 석출된다.

유리 α-APM은, 필요하다면, 이의 염산염을 통상적으로 중화시켜 용이하게 수득할 수 있다.

중간체 α-AP-β-M을 α-APM으로 전환시키는 공정은 종래의 공정에 비하여 아래에 기술하는 바와 같은 뚜렷한 산업적인 잇점을 가지고 있다.

즉, (1) 이론적으로, 당해 중간체를 제조할때에는 L-Asp와 L-Phe 사이의 β-결합이 형성되지 않고, α-이성체만이 생성되기 때문에, 종래의 공정에서는 불가피한 β-이성체(β- APM 또는 N-보호된 β-APM)의 분리단계가 필요하지 않다.

이것은 전체 제조공정에서 상당한 간소화와 α-APM의 높은 수율을 제공함을 의미하고, 또한 β-이성체의 가수분해에 의한 L-Asp와 L-Phe의 회수에 정교한 장치를 사용하지 않아도 된다.

(2) L-Phe과의 축합물의 L-Asp β-메틸 에스테르 부분의 아미노기가 CO₂(카밤산 형태)로 보호되기 때문에, α-AP-β-M 중간체는 보호기 제거단계를 거치지 않고 자연적인 탈카복실화 반응으로 축합물로부터 직접 제조할 수 있다.

(3) 종래의 공정에서는, L-Phe를 보호되거나 또는 보호되지 않은 아미노기를 갖는 L-Asp와 축합시키기 전에 이의 메틸 에스테르로 전환시켜야 하므로 α-APM의 수율은 에스테르화 단계의 수율에 의해서 부분적으로 제약을 받는다.

이와는 달리, 본 발명의 공정에서는 이러한 에스테르화 단계를 수행하지 않기 때문에 L-Asp보다 일반적으로 더 비싼 물질인 L-Phe를 기준으로 하여 더 높은 수율로 α-APM를 수득할 수 있다.

(4) 분자간 에스테르 교환반응으로 인하여 메탄올을 더욱 효과적으로 이용할 수 있다.

(5) 라세미화가 일어날 가능성은 전혀 없다.

(6) α-APM은 총 수율이 높고 저렴한 화학물질을 사용하기 때문에 저렴한 가격으로 제조할 수 있다.

중간체인 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르(α-AP-β-M)의 제조방법은 이하에 더욱 상세히 기술할 것이다.

(a) L-아스파르트산 β-메틸 에스테르의 제조방법은 문헌에 기술되어 있다(참조 :Karoly Jakus, et al., Hung. 149,544, Aug, 31, 1962, Appl, Dec. 22, 1960).

(b) L-Asp β-메틸 에스테르의 N-카복시 무수물의 제조방법도 또한 문헌에 기술되어 있다(일본국 공개 특허공보(소) 제43-20181호).

(c) α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르는, 예를 들면, 다음에 기술하는 바와 같이 제조할 수 있다.

L-Asp-메틸 에스테르의 NCA와 L-Phe을 축합시키기 위해서는 각 반응물을 용액 상태로 사용하는 것이 바람직하다.

예를 들면, 1.7몰의 L-Phe을 탄산나트륨, 탄산칼륨 또는 탄산암모늄과 같은 탄산염 1 내지 10(보통 1.7)몰, 또는 중탄산나트륨 또는 중탄산칼륨과 같은 중탄산염 1 내지 20(보통 3.4)몰, 1 내지 20ι(보통 7ι)의 물, 보통 1.7ι의 1N-수산화나트륨 및 아세토니트릴, 프로피오니트릴, 테트라하이드로푸란, 디옥산, 아세트산과 같은 수용성 유기용매 2 내지 20ι(보통 9ι)와 혼합하고, 혼합물을 -25℃ 내지 0℃(보통 약-10℃)로 냉각시킨다.

반응온도가 높으면 수율이 낮아지는 반면에 온도가 낮으면 동결이 일어나 교반이 어렵게 된다.

한편, 0.85 내지 3.4몰(보통 1당량 또는 약간 과량)의 L-Asp β-메틸 에스테르의 정제된 N-카복시 무수물을 아세토니트릴과 같이 상기에서 언급한 수용성 유기용매 1 내지 10ι(보통 3ι)에 용해시키고 용액을 동결이 일어나지 않을 온도, 예를 들면, -25℃ 내지 0℃(보통 -15℃ 내지 -10℃)로 냉각시킨다.

생성된 무수물의 냉각용액을 상기에서 제조한 L-Phe용액에 가하고, 혼합물을 -25℃ 내지 0℃(보통 약 -10℃)에서 온화하게 교반하면서 정치시킨다.

약 2시간 후에 교반을 중지하고, 수층을 분리하여 아세토니트릴로 세척하고, 묽은 황산 또는 염산과 같은 무기산으로 중화시켜 탈카복실화 한다.

5 내지 20ι의 메탄올을 가하고, 침전된 황산나트륨을 여과하여 제거한 다음, 여액을 농축시켜 α-AP-β-M의 결정을 수득한다.

수율 : 85%

(d) α-APM은 다음에 기술하는 방법에 따라 α-AP-β-M으로부터 제조할 수 있다.

α-AP-β-M을, 예를 들면, 메탄올 0 내지 20용량%, 진한 염산 8 내지 55% 및 물(나머지)로 구성된 메탄올/염산 혼합용매에 용해시키고, 용액을 실온에 정치시켜 침전된 α-APM-염산염을 모은다.

모액에 새로운 α-AP-β-M을 가하고, 상기의 조건을 만족하도록 용액의 조성을 조성하면, α-AP-β-M는 α-APM로 거의 완전히 전환된다.

α-L-아스파르틸-L-페닐알라린 알킬에스테르 중에서 α-APM(메틸 에스테르) 이외에 다른 에틸에스테르, 프로필 에스테르 및 기타 동족체를 포함한 저급알킬 에스테르만이 감미제로서 유용하다.

이들 동족체의 제조에 상응하는 중간체 α-AP-β-A는 α-AP-β-M과 유사한 방법으로 제조할 수 있다.

다음 실시예는 본 발명을 구체적으로 설명하는 것이나 그 범위를 제한하는 것은 아니다.

[실시예 1]

L-Asp β-메틸 에스테르 염산염의 제조

-30℃로 유지한 메탄올(830ml)에 티오닐클로라이드(124ml)를 서서히 가하고, L-Asp(160g)을 교반하면서 조금씩 가하여 등명한 용액을 얻는다.

온도를 점차적으로 실온까지 상승시키고, 디에틸에테르(2,400ml)를 적가한다.

목적하는 L-Asp β-메틸 에스테르는 이의 염산염 형태로 침전되며, 이를 여과하여 수거하고, 에테르로 세척한다.

수율 : 177g(75%).

[실시예 2]

L-Asp β-메틸 에스테르의 N-카복시 무수물의 제조

L-Asp β-메틸 에스테르 염산염(0.1몰)을 무수 테트라하이드로푸란(THF, 808ml)에 현탁시키고, 생성된 현탁액에 포스겐 이량체(20.2ml)를 가한 다음, 혼합물을 20℃ 내지 30℃(실온)에서 교반한다.

혼합물이 약 5시간 후에 등명하게 되면 용액을 감압하, 30℃ 이하에서 농축시켜 N-카복시 무수물의 결정을 수득한다.

수율 : 16.4g(95%).

이때 결정이 생성되지 않으면, 농축물을 N-카복시 무수물을 용해시키지도 않고 분해하지도 않는 유기용매(즉, n-헥산)로 세척하고, 다음 단계에서 나머지 THF, 포스겐 이량체, 포스겐과 HCl을 제거한다.

[실시예 3]

α-AP-β-M의 제조

L-Phe(28g, 0.17몰)과 탄산나트륨(17g, 0.16몰)을 물(680ml)에 용해시킨다.

이 용액에 1N 수산화나트륨(170ml)과 아세토니트릴(850ml)을 가하고, 혼합물을 -10℃로 냉각시킨다.

미리 -10℃로 냉각시킨, 아세토니트릴(272ml)중의 L-Asp-β 메틸 에스테르의 N-카복시 무수물(0.13몰)용액을 상기에서 제조한 L-Phe 알칼리성 용액에 교반하면서 가한다.

혼합물을 추가로 2시간 동안 -10℃에서 교반하고, 분리된 아세토니트릴 층을 제거한 다음, 수층을 1ι의 아세토니트릴로 세척한다.

황산을 가하여 pH를 5로 조절하고, 수층에 메탄올(1,700ml)을 가하여 무기염을 침전시킨 다음, 여과하여 제거하고, 여액을 40℃에서 농축시켜 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르를 결정으로 석출시킨다.

생성된 결정을 여과하여 모은다.

수율 : 29.8g(74.5%)

[실시예 4]

α-APM 염산염의 제조

메탄올(1.0ml), 진한염산(3.4ml) 및 물(5.1ml)을 혼합하고, 혼합용매 7ml에 4.2g의 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르를 용해시킨 다음, 용액을 25℃에서 유지시킨다.

α-APM 염산염은 시간이 경과함에 따라 양이 증가하면서 결정화되어 석출되며, 8일후에 여과하여 2.93g(약 62% 수율)을 회수한다.

같은 실험을 반복하여 14일 후에 4.16g(88% 수율)의 생성물을 수득한다.

[실시예 5]

α-APM 염산염의 제조

메탄올(1.3ml), 진한 염산(3.4ml) 및 물(5.1ml)을 혼합하고, 혼합용매 6.4ml에 4.2g의 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르를 용해시킨 다음, 용액을 25℃로 유지시킨다.

실시예 4에 언급한 바와 같이, α-APM 염산염은 시간이 경과함에 따라 결정화되어 석출되며, 8일 후에는 3.3g(70% 수율)을 회수하여 모은다.

같은 실험을 반복하여 11일 후에 4.1g(87%)의 생성물을 수득한다.

[실시예 6]

α-APM 염산염의 제조

실시예 5에서 수득한 모액에 1.2ml의 진한 염산을 가하고, 생성된 용액에 4.2g의 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르를 용해시킨다.

용액은 30℃로 유지시킨다.

8일 후에 수득한 α-APM 염산염의 수율은 4.6g(97% 수율)이다.

[실시예 7]

α-APM 염산염의 제조

메탄올(1.2ml), 진한 염산(3.0ml)과 물(5.8ml)을 혼합하고, 생성된 혼합용매 7ml에 4.2g의 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르를 용해시킨다.

생성된 용액은 처음 1일 동안은 40℃에서 유지시키고, 그후 5일 동안은 25℃에서 유지시킨다.

α-APM 염산염의 수율은 3.4g(72% 수율)이다.

[실시예 8]

α-APM의 제조

4g의 α-APM 염산염의 100ml의 물에 용해시키고, 생성된 용액을 저온에서 유지하면서 탄산나트륨 포화 수용액으로 pH 4.8로 조정한다.

생성된 중화용액을 밤새 5℃에서 유지시킨다.

침전된 결정을 여과하여 모으고, 건조시켜 2.65g의 α-APM을 수득한다.

[실시예 9]

α-APM 염산염의 제조

물(7.0ml)과 진한 염산(3.0ml)을 혼합하고 생성된 혼합용매 7ml에 4.2g의 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르를 용해시킨 다음, 생성된 용액을 8일동안 25℃에서 유지시킨다.

α-APM 염산염의 수율은 1.28g(27% 수율)이다.

전술한 바와 같이, 본 발명의 방법은 저렴한 비용으로 α-APM만을 수득할 수 있는 최초의 화학적 합성법을 제공한다.

Claims

메탄올 0 내지 20용량%, 진한 염산 8 내지 55용량% 및 물(나머지 양)을 함유하는 메탄올/염산(염산을 진한 염산과 물을 기준으로 하여 표현하는 경우) 혼합용매에 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르를 0.01 내지 0.3몰/dl의 농도로 용해시키고; 생성된 용액을 0 내지 60℃에서 유지시켜 분자간 에스테르 교환반응을 일으키고, 생성된 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 메틸 에스테르를 이의 염산염 형태로 결정화하여 석출시키고; 생성된 염산염을 분리하거나; 이것을 알칼리를 사용하여 중화시켜 유리 에스테르를 수득하는 단계들을 포함함을 특징으로 하여, α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 메틸 에스테르 및 이의 염산염을 제조하는 방법.
L-아스파르트산 β-메틸 에스테르의 N-카복시 무수물을 약알칼리성 조건하에 수성 용매속에서 L-페닐알라닌과 축합시키고; 생성된 N-카복시-α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르를 탈카복실화시키는 단계들을 포함하여 제조된 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 β-메틸 에스테르를, 메탄올 0 내지 20용량%, 진한 염산 8 내지 55용량% 및 물(나머지 양)을 함유하는 메탄올/염산(염산을 진한 염산과 물을 기준으로 하여 표현하는 경우)혼합용매에 0.01 내지 0.3몰/dl의 농도로 용해시키고; 생성된 용액을 0 내지 60℃에서 유지시켜 분자간 에스테르 교환 반응을 일으키고, 생성된 α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 메틸 에스테르를 이의 염산염 형태로 결정화하여 석출시키고; 생성된 염산염을 분리하거나; 이것을 알칼리를 사용하여 중화시켜 유리 에스테르를 수득하는 단계들을 포함함을 특징으로 하여, α-L-아스파르틸-L-페닐알라닌 메틸 에스테르 및 이의 염산염을 제조하는 방법.