JPH05247083A - 抗虚血活性を有する新規なオリゴデオキシリボヌクレオチド類およびその製造方法 - Google Patents
抗虚血活性を有する新規なオリゴデオキシリボヌクレオチド類およびその製造方法Info
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- JPH05247083A JPH05247083A JP4329713A JP32971392A JPH05247083A JP H05247083 A JPH05247083 A JP H05247083A JP 4329713 A JP4329713 A JP 4329713A JP 32971392 A JP32971392 A JP 32971392A JP H05247083 A JPH05247083 A JP H05247083A
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Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
Abstract
(57)【要約】
【目的】 抗虚血活性が賦与されている新規化合物およ
びその製造方法を提供することを目的とする。 【構成】 本発明は、４０００ダルトンと１００００ダ
ルトンとの間の分子量を有する動物起源の新規なオリゴ
デオキシリボヌクレオチド類を開示する。この新規化合
物は、高分子量のデオキシリボ核酸類の化学的または酵
素的な解重合化によるポリデオキシリボヌクレオチド類
の分画により得られるものであり、該新規化合物には十
分な抗虚血活性が賦与されている。
びその製造方法を提供することを目的とする。 【構成】 本発明は、４０００ダルトンと１００００ダ
ルトンとの間の分子量を有する動物起源の新規なオリゴ
デオキシリボヌクレオチド類を開示する。この新規化合
物は、高分子量のデオキシリボ核酸類の化学的または酵
素的な解重合化によるポリデオキシリボヌクレオチド類
の分画により得られるものであり、該新規化合物には十
分な抗虚血活性が賦与されている。
Description
【０００１】
【発明の利用分野】本発明は、４０００−１００００ダ
ルトンの範囲の分子量を有する天然物由来の新規なオリ
ゴデオキシリボヌクレオチド類およびその製造方法に関
する。
ルトンの範囲の分子量を有する天然物由来の新規なオリ
ゴデオキシリボヌクレオチド類およびその製造方法に関
する。
【０００２】
【従来の技術】まず、上記製造方法は、水性媒質中の高
分子量の天然デオキシリボ核酸類に対する解重合化工程
と、続いて適当量の有機溶媒の添加によって得られたオ
リゴデオキシリボヌクレオチド類の沈降化工程とからな
る一般に共通した態様を有していることをここに述べな
ければならない。
分子量の天然デオキシリボ核酸類に対する解重合化工程
と、続いて適当量の有機溶媒の添加によって得られたオ
リゴデオキシリボヌクレオチド類の沈降化工程とからな
る一般に共通した態様を有していることをここに述べな
ければならない。
【０００３】適切な分析的プロフィールおよび前述の薬
理活性に関連した本発明のポリマは、上記範囲内の分子
量を有するオリゴデオキシリビヌクレオチド類の全ての
同族体の中で特別なファミリーを構成する。
理活性に関連した本発明のポリマは、上記範囲内の分子
量を有するオリゴデオキシリビヌクレオチド類の全ての
同族体の中で特別なファミリーを構成する。
【０００４】それと同一の範囲において、以下に示され
るように、上記適切な分析的プロフィール、より詳細に
は、化学的パラメータの値および非常に低い抗虚血活性
について開示された物質と異なる化合物が見出され得
る。上述の化学的パラメータは、アデニン＋チミン／シ
トシン＋グアニン、すなわちＡ＋Ｔ／Ｃ＋Ｇの総モル比
である。このモル比は表１で範囲が示されているが、こ
の範囲は分子量４０００ー１００００ダルトンの範囲内
の化合物を規定するものであると考えられなければなら
ない。その化合物は十分な抗虚血活性が賦与されてお
り、治療という観点から有益なものである。
るように、上記適切な分析的プロフィール、より詳細に
は、化学的パラメータの値および非常に低い抗虚血活性
について開示された物質と異なる化合物が見出され得
る。上述の化学的パラメータは、アデニン＋チミン／シ
トシン＋グアニン、すなわちＡ＋Ｔ／Ｃ＋Ｇの総モル比
である。このモル比は表１で範囲が示されているが、こ
の範囲は分子量４０００ー１００００ダルトンの範囲内
の化合物を規定するものであると考えられなければなら
ない。その化合物は十分な抗虚血活性が賦与されてお
り、治療という観点から有益なものである。
【０００５】この技術分野では、天然のデオキリボ核酸
類の解重合化により得られた低分子量のポリマが既に知
られている。とにかく、次なる考察において徹底的に説
明されているように、既知の化合物が本発明の新規オリ
ゴデオキシリボヌクレオチド類の新規性を予測するもの
であると、あるいは新規化合物を自明なものとは考えら
れない。
類の解重合化により得られた低分子量のポリマが既に知
られている。とにかく、次なる考察において徹底的に説
明されているように、既知の化合物が本発明の新規オリ
ゴデオキシリボヌクレオチド類の新規性を予測するもの
であると、あるいは新規化合物を自明なものとは考えら
れない。
【０００６】欧州特許公開明細書ＥＰ−Ａ−４１６６７
７号は、分子量が１００００ー１０００００の範囲にあ
る天然由来のポリデオキシリボヌクレオチド類を含む組
成物の化粧品への用途を開示する。興味深いことに、プ
リン／ピリミジン（Ｇ＋Ａ／Ｃ＋Ｔ）のモル比は、本発
明の同一パラメータ（表１参照）に関する対応範囲によ
って囲まれている。
７号は、分子量が１００００ー１０００００の範囲にあ
る天然由来のポリデオキシリボヌクレオチド類を含む組
成物の化粧品への用途を開示する。興味深いことに、プ
リン／ピリミジン（Ｇ＋Ａ／Ｃ＋Ｔ）のモル比は、本発
明の同一パラメータ（表１参照）に関する対応範囲によ
って囲まれている。
【０００７】しかしながら、このような開示内容が、本
発明の第１の目的のインベンティブステップを取り上げ
るとは考えられない。
発明の第１の目的のインベンティブステップを取り上げ
るとは考えられない。
【０００８】実施例により、本発明の新規ポリマを、従
来の“稀な”低分子量ポリデオキシリボヌクレオチド類
と等価なものと考えることは正当化されないであろう。
従って、（Ｇ＋Ａ／Ｃ＋Ｔ）のモル比の上記範囲は非常
に大きな化合物のクラスを含むものである。このクラス
には、言及された薬理活性の賦与されたオリゴデオキシ
リボヌクレオチド類と僅かな活性を示すだけのオリゴデ
オキシリボヌクレオチド類の双方が含まれている。
来の“稀な”低分子量ポリデオキシリボヌクレオチド類
と等価なものと考えることは正当化されないであろう。
従って、（Ｇ＋Ａ／Ｃ＋Ｔ）のモル比の上記範囲は非常
に大きな化合物のクラスを含むものである。このクラス
には、言及された薬理活性の賦与されたオリゴデオキシ
リボヌクレオチド類と僅かな活性を示すだけのオリゴデ
オキシリボヌクレオチド類の双方が含まれている。
【０００９】この観察は、表４で示され弱い抗虚血活性
の賦与された製品Ｐ００６７．ＤＶに関する本明細書第
３３−３４頁の内容と共に、表１に与えられている本発
明の化合物に関して定められた（Ｇ＋Ａ／Ｃ＋Ｔ）の値
および範囲を考慮することによって完全に確認されてい
る。
の賦与された製品Ｐ００６７．ＤＶに関する本明細書第
３３−３４頁の内容と共に、表１に与えられている本発
明の化合物に関して定められた（Ｇ＋Ａ／Ｃ＋Ｔ）の値
および範囲を考慮することによって完全に確認されてい
る。
【００１０】上述の考察は明瞭な結論を与えるものであ
る。その結論とは、欧州特許公開明細書ＥＰ−Ａ−４１
６６７７号において、開示されたポリマのクラスを選択
し、あるいは規定するために当業者を結局助力し得るよ
うな、いかなる情報をも与えられていないということで
ある。国際特許出願ＷＯ８７／０６２３５号は、濃色性
（ｈｙｐｅｒｃｈｒｏｍｉｃｉｔｙ）パラメータと旋光
の双方ともより高い値を示し、本発明の第１の目的を構
成する物質と異なる、天然由来のポリデオキシリボヌク
レオチド類について教示する。
る。その結論とは、欧州特許公開明細書ＥＰ−Ａ−４１
６６７７号において、開示されたポリマのクラスを選択
し、あるいは規定するために当業者を結局助力し得るよ
うな、いかなる情報をも与えられていないということで
ある。国際特許出願ＷＯ８７／０６２３５号は、濃色性
（ｈｙｐｅｒｃｈｒｏｍｉｃｉｔｙ）パラメータと旋光
の双方ともより高い値を示し、本発明の第１の目的を構
成する物質と異なる、天然由来のポリデオキシリボヌク
レオチド類について教示する。
【００１１】上記国際特許出願においては、分子量を小
さくしたとき濃色性パラメータが減少するであろうとい
うことが既に開示されている。しかしながら、その文献
がどのようにして比旋光度が付随的に変化したであろう
かという点について、なんの情報を提供していないとい
うことが確認されなければならない。
さくしたとき濃色性パラメータが減少するであろうとい
うことが既に開示されている。しかしながら、その文献
がどのようにして比旋光度が付随的に変化したであろう
かという点について、なんの情報を提供していないとい
うことが確認されなければならない。
【００１２】さらにまた、欧州特許公開明細書ＥＰ−Ａ
−４１６６７７号のように、上記国際特許出願ＷＯ８７
／０６２３５号においては、その化合物の開示された活
性を証明するために重要な特別の値あるいは（Ａ＋Ｔ／
Ｃ＋Ｇ）モル比の範囲については示唆もされていない。
−４１６６７７号のように、上記国際特許出願ＷＯ８７
／０６２３５号においては、その化合物の開示された活
性を証明するために重要な特別の値あるいは（Ａ＋Ｔ／
Ｃ＋Ｇ）モル比の範囲については示唆もされていない。
【００１３】文献に言及された内容の記載からはむし
ろ、（Ａ＋Ｔ／Ｃ＋Ｇ）モル比は、そのようなポリデオ
キシリボヌクレオチド類の化学的特徴に関して考察され
ておらず、もっと一般的な観察が行われていることが明
らかである。
ろ、（Ａ＋Ｔ／Ｃ＋Ｇ）モル比は、そのようなポリデオ
キシリボヌクレオチド類の化学的特徴に関して考察され
ておらず、もっと一般的な観察が行われていることが明
らかである。
【００１４】さらに、上記国際特許出願ＷＯ８７／０６
２３５号は、本発明の非自明性を証明するための、より
実体的な背景を提供している。
２３５号は、本発明の非自明性を証明するための、より
実体的な背景を提供している。
【００１５】上記関連の開示内容においては、１０未満
の濃色性パラメータｈを有するデオキシリボ核酸類の低
分子量ポリマは薬理活性の劇的な減少を示すべきであ
る。加えて、分子量８０００のオリゴデオキシリボヌク
レオチド類については濃色性パラメータｈがほとんど零
であることが確認されている。
の濃色性パラメータｈを有するデオキシリボ核酸類の低
分子量ポリマは薬理活性の劇的な減少を示すべきであ
る。加えて、分子量８０００のオリゴデオキシリボヌク
レオチド類については濃色性パラメータｈがほとんど零
であることが確認されている。
【００１６】これらの提案は直接的に次のような結論を
与える。
与える。
【００１７】ａ．１０未満の濃色性パラメータｈを有す
るオリゴデオキシリボヌクレオチド類は治療用に適さな
い。
るオリゴデオキシリボヌクレオチド類は治療用に適さな
い。
【００１８】ｂ．特に、薬理活性の急激な減少が１０未
満の濃色性パラメータｈに関係するので、実際に用いて
いる当業者は、濃色性パラメータｈが下がれば残りの活
性も減少するであろうと考えるものである。上記国際特
許出願ＷＯ８７／０６２３５に従えば、ｈ＝０のとき
は、ほとんど全ての活性は分子量８０００のポリデオキ
シリボヌクレオチド類の分子量に対応する。
満の濃色性パラメータｈに関係するので、実際に用いて
いる当業者は、濃色性パラメータｈが下がれば残りの活
性も減少するであろうと考えるものである。上記国際特
許出願ＷＯ８７／０６２３５に従えば、ｈ＝０のとき
は、ほとんど全ての活性は分子量８０００のポリデオキ
シリボヌクレオチド類の分子量に対応する。
【００１９】これらの結論は真に以下に証明されるであ
ろう本発明の実験的発見とはっきりと対比される。
ろう本発明の実験的発見とはっきりと対比される。
【００２０】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、天然
物由来の新規なオリゴデオキシリボヌクレオチド類およ
びその製造方法を提供することにある。
物由来の新規なオリゴデオキシリボヌクレオチド類およ
びその製造方法を提供することにある。
【００２１】また、本発明の他の目的は、その新規な化
合物の抗虚血活性剤としての用途を提供することにあ
る。
合物の抗虚血活性剤としての用途を提供することにあ
る。
【００２２】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に、請求項１記載の天然物由来のオリゴデオキシリボヌ
クレオチド類の発明は、分子量が４０００−１００００
であり、濃色パラメータｈが１０であり、アデニン＋チ
ミン／シトシン＋グアニン（Ａ＋Ｔ／Ｃ＋Ｇ）の総モル
比が１．１００−１．４５５であり、プリン塩基／ピリ
ミジン塩基（Ａ＋Ｇ／Ｃ＋Ｔ）のモル比が０．８００−
１．１６０であり、比旋光度が＋３０°−＋４８°であ
る分析パラメータを有することを特徴とする。
に、請求項１記載の天然物由来のオリゴデオキシリボヌ
クレオチド類の発明は、分子量が４０００−１００００
であり、濃色パラメータｈが１０であり、アデニン＋チ
ミン／シトシン＋グアニン（Ａ＋Ｔ／Ｃ＋Ｇ）の総モル
比が１．１００−１．４５５であり、プリン塩基／ピリ
ミジン塩基（Ａ＋Ｇ／Ｃ＋Ｔ）のモル比が０．８００−
１．１６０であり、比旋光度が＋３０°−＋４８°であ
る分析パラメータを有することを特徴とする。
【００２３】請求項２記載の発明は、請求項１記載のオ
リゴデオキシリボヌクレオチド類を得る方法であって、
前記オリゴデオキシリボヌクレオチド類化合物は、２０
℃でポリデオキシリボヌクレオチドナトリウム塩の０．
８Ｍ酢酸ナトリウム水溶液に、低級アルキルアルコール
を添加することにより順次沈殿させることによって得ら
れることを特徴とする。
リゴデオキシリボヌクレオチド類を得る方法であって、
前記オリゴデオキシリボヌクレオチド類化合物は、２０
℃でポリデオキシリボヌクレオチドナトリウム塩の０．
８Ｍ酢酸ナトリウム水溶液に、低級アルキルアルコール
を添加することにより順次沈殿させることによって得ら
れることを特徴とする。
【００２４】請求項３記載の発明は、請求項２記載の製
造方法において、前記低級アルキルアルコールは、エチ
ルアルコール、プロピルアルコールおよびイソプロピル
アルコールからなる群より選択されるものであることを
特徴とする。
造方法において、前記低級アルキルアルコールは、エチ
ルアルコール、プロピルアルコールおよびイソプロピル
アルコールからなる群より選択されるものであることを
特徴とする。
【００２５】請求項４記載の発明は、請求項３記載の製
造方法において、前記低級アルキルアルコールは、エチ
ルアルコールであることを特徴とする。
造方法において、前記低級アルキルアルコールは、エチ
ルアルコールであることを特徴とする。
【００２６】請求項５記載の発明は、請求項２記載の製
造方法において、前記ポリデオキシリボヌクレオチドナ
トリウム塩の量は４％ｗ／ｖであることを特徴とする。
造方法において、前記ポリデオキシリボヌクレオチドナ
トリウム塩の量は４％ｗ／ｖであることを特徴とする。
【００２７】請求項６記載の発明は、請求項２または５
記載の製造方法において、前記ポリデオキシリボヌクレ
オチドナトリウム塩は、１５０００−７５０００ダルト
ンの範囲内における分子量を有していることを特徴とす
る。
記載の製造方法において、前記ポリデオキシリボヌクレ
オチドナトリウム塩は、１５０００−７５０００ダルト
ンの範囲内における分子量を有していることを特徴とす
る。
【００２８】請求項７記載の発明は、請求項６記載の製
造方法において、前記ポリデオキシリボヌクレオチドは
繊維素分解活性を有するヌクレオチドであるデフィブロ
チド（ｄｅｆｉｂｒｏｔｉｄｅ）であることを特徴とす
る。
造方法において、前記ポリデオキシリボヌクレオチドは
繊維素分解活性を有するヌクレオチドであるデフィブロ
チド（ｄｅｆｉｂｒｏｔｉｄｅ）であることを特徴とす
る。
【００２９】請求項８記載の発明は、請求項２ないし７
のいずれかに記載の製造方法において、次なる工程： ａ．４％ｗ／ｖのポリデオキシリボヌクレオチド類を含
む０．８Ｍ酢酸ナトリウム溶液への０．８倍の体積量の
アルコールの添加工程、 ｂ．有機相／出発時の水相の体積比を概ね１とするため
に、さらに前記アルコール水溶液への多量のアルコール
添加、およびその後の形成された沈殿物の回収による上
清の除去工程、 ｃ．先の工程ｂからの上清と、アルコール／工程ａの出
発時の０．８Ｍ酢酸ナトリウム緩衝水溶液の体積比を２
とするような量のアルコールとの混合工程、およびその
ような分離条件における目的物質の回収工程、 ｄ．先の工程ｂで得られた沈殿物の０．８Ｍ酢酸ナトリ
ウムへの溶解、該溶液へのアルコール／水溶液の体積比
が１である溶液の添加、遠心分離による沈殿物の除去、
残渣のアルコール水溶液とアルコールとの混合であって
アルコール相／水相の体積比が全体で２倍となるまで行
われる混合、および沈殿物の回収の各工程を含むことを
特徴とする。
のいずれかに記載の製造方法において、次なる工程： ａ．４％ｗ／ｖのポリデオキシリボヌクレオチド類を含
む０．８Ｍ酢酸ナトリウム溶液への０．８倍の体積量の
アルコールの添加工程、 ｂ．有機相／出発時の水相の体積比を概ね１とするため
に、さらに前記アルコール水溶液への多量のアルコール
添加、およびその後の形成された沈殿物の回収による上
清の除去工程、 ｃ．先の工程ｂからの上清と、アルコール／工程ａの出
発時の０．８Ｍ酢酸ナトリウム緩衝水溶液の体積比を２
とするような量のアルコールとの混合工程、およびその
ような分離条件における目的物質の回収工程、 ｄ．先の工程ｂで得られた沈殿物の０．８Ｍ酢酸ナトリ
ウムへの溶解、該溶液へのアルコール／水溶液の体積比
が１である溶液の添加、遠心分離による沈殿物の除去、
残渣のアルコール水溶液とアルコールとの混合であって
アルコール相／水相の体積比が全体で２倍となるまで行
われる混合、および沈殿物の回収の各工程を含むことを
特徴とする。
【００３０】請求項９記載の発明は、請求項２ないし７
のいずれかに記載の製造方法において、ポリデオキシリ
ボヌクレオチドの出発時の溶液に１倍の体積のアルコー
ルを添加することによって一つの中間沈殿物を得、その
上清にさらに１倍の体積のアルコールを添加して前記ポ
リマの沈殿物を得ることを特徴とする。
のいずれかに記載の製造方法において、ポリデオキシリ
ボヌクレオチドの出発時の溶液に１倍の体積のアルコー
ルを添加することによって一つの中間沈殿物を得、その
上清にさらに１倍の体積のアルコールを添加して前記ポ
リマの沈殿物を得ることを特徴とする。
【００３１】請求項１０記載の発明は、請求項１記載の
化合物を得る方法であって、ｐＨ４．１の酢酸／０．５
Ｍ酢酸ナトリウムの緩衝水溶液中の高分子量のデオキシ
リボ核酸のナトリウム塩を熱により解重合することを特
徴とする。
化合物を得る方法であって、ｐＨ４．１の酢酸／０．５
Ｍ酢酸ナトリウムの緩衝水溶液中の高分子量のデオキシ
リボ核酸のナトリウム塩を熱により解重合することを特
徴とする。
【００３２】請求項１１記載の発明は、請求項１０記載
の製造方法において、前記解重合化工程は、前記出発時
の核酸の分子量に応じて６５℃から７５℃まで変化する
温度範囲で少なくとも６時間行われることを特徴とす
る。
の製造方法において、前記解重合化工程は、前記出発時
の核酸の分子量に応じて６５℃から７５℃まで変化する
温度範囲で少なくとも６時間行われることを特徴とす
る。
【００３３】請求項１２記載の発明は、請求項１０また
は１１に記載の製造方法において、前記解重合工程は、
分子量が４０００−１００００ダルトンの範囲になるま
で行われることを特徴とする。
は１１に記載の製造方法において、前記解重合工程は、
分子量が４０００−１００００ダルトンの範囲になるま
で行われることを特徴とする。
【００３４】請求項１３記載の発明は、請求項１０ない
し１２のいずれかに記載の製造方法において、前記０．
５Ｍの酢酸ナトリウム緩衝液中のデオキシリボ核酸濃度
は４％ｗ／ｖまたは約１２％ｗ／ｖであることを特徴と
する。
し１２のいずれかに記載の製造方法において、前記０．
５Ｍの酢酸ナトリウム緩衝液中のデオキシリボ核酸濃度
は４％ｗ／ｖまたは約１２％ｗ／ｖであることを特徴と
する。
【００３５】請求項１４記載の発明は、請求項１３記載
の製造方法において、前記デオキシリボ核酸濃度は約１
２％ｗ／ｖであることを特徴とする。
の製造方法において、前記デオキシリボ核酸濃度は約１
２％ｗ／ｖであることを特徴とする。
【００３６】請求項１５記載の発明は、請求項１０ない
し１４のいずれかに記載の製造方法において、次なる工
程： ａ．高分子量のデオキシリボ核酸の溶解、および必要な
緩衝液モル濃度およびｐＨを与えるための該溶液への酢
酸ナトリウム三水和物と濃（８０％）酢酸の添加工程、 ｂ．先の工程ａで得られた水溶液を６５℃から７５℃ま
で変化する温度範囲で少なくとも６時間加熱する工程、 ｃ．前記加熱処理の終期において温度を３０℃に下げ、
３０％水酸化ナトリウム水溶液で７．８−８．０にｐＨ
調整し、その後８５℃、９０分間再加熱する工程、 ｄ．前記溶液を室温にまで冷却し、濃酢酸で６．５にｐ
Ｈ調整し、水溶液の１．５−２倍の体積比のエタノール
の添加によってオリゴデオキシヌクレオチド類を沈殿さ
せる工程からなることを特徴とする。
し１４のいずれかに記載の製造方法において、次なる工
程： ａ．高分子量のデオキシリボ核酸の溶解、および必要な
緩衝液モル濃度およびｐＨを与えるための該溶液への酢
酸ナトリウム三水和物と濃（８０％）酢酸の添加工程、 ｂ．先の工程ａで得られた水溶液を６５℃から７５℃ま
で変化する温度範囲で少なくとも６時間加熱する工程、 ｃ．前記加熱処理の終期において温度を３０℃に下げ、
３０％水酸化ナトリウム水溶液で７．８−８．０にｐＨ
調整し、その後８５℃、９０分間再加熱する工程、 ｄ．前記溶液を室温にまで冷却し、濃酢酸で６．５にｐ
Ｈ調整し、水溶液の１．５−２倍の体積比のエタノール
の添加によってオリゴデオキシヌクレオチド類を沈殿さ
せる工程からなることを特徴とする。
【００３７】請求項１６記載の発明は、請求項１５記載
の製造方法において、６５℃から７５℃まで変化する温
度範囲で加熱する工程は１０時間未満であることを特徴
とする。
の製造方法において、６５℃から７５℃まで変化する温
度範囲で加熱する工程は１０時間未満であることを特徴
とする。
【００３８】請求項１７記載の発明は、請求項１記載の
オリゴデオキシリボヌクレオチド類を得る方法であっ
て、デオキシリボヌクレアーゼ使用による高分子量のデ
オキシリボ核酸の酵素的解重合化の工程と、該溶液を濃
縮するための限外漉過の工程とからなることを特徴とす
る。
オリゴデオキシリボヌクレオチド類を得る方法であっ
て、デオキシリボヌクレアーゼ使用による高分子量のデ
オキシリボ核酸の酵素的解重合化の工程と、該溶液を濃
縮するための限外漉過の工程とからなることを特徴とす
る。
【００３９】請求項１８記載の発明は、請求項１７記載
の製造方法において、デオキシリボヌクレアーゼによる
酵素性分解は、高分子量の核酸を１％ｗ／ｖ含み、１０
ｍＭの塩化マグネシウムが存在する０．１Ｍ，ｐＨ７の
燐酸緩衝液に対して２４時間行われることを特徴とす
る。
の製造方法において、デオキシリボヌクレアーゼによる
酵素性分解は、高分子量の核酸を１％ｗ／ｖ含み、１０
ｍＭの塩化マグネシウムが存在する０．１Ｍ，ｐＨ７の
燐酸緩衝液に対して２４時間行われることを特徴とす
る。
【００４０】請求項１９記載の発明は、請求項１７また
は１８に記載の製造方法において、前記限外漉過による
濃縮が次の工程： ａ．出発時の溶液量の１／５になるまで、１００００個
の空隙を有する膜上で、残渣としての酵素分解からの溶
液に対して行われる限外漉過の工程、 ｂ．前記残渣の溶液を、その５倍量の蒸留水に対する量
が一定となるように透析することによってその溶液を脱
塩する工程、 ｃ．前記工程ａおよびｂから集められ、まとめられた透
過物を、３０００ダルトンの空隙を有する膜上での限外
漉過によって出発時の体積の１／５になるまで濃縮する
工程、 ｄ．工程ａと工程ｃのそれぞれの限外漉過からの残渣由
来の前記濃縮された溶液の溶質を回収する工程に従って
行われることを特徴とする。
は１８に記載の製造方法において、前記限外漉過による
濃縮が次の工程： ａ．出発時の溶液量の１／５になるまで、１００００個
の空隙を有する膜上で、残渣としての酵素分解からの溶
液に対して行われる限外漉過の工程、 ｂ．前記残渣の溶液を、その５倍量の蒸留水に対する量
が一定となるように透析することによってその溶液を脱
塩する工程、 ｃ．前記工程ａおよびｂから集められ、まとめられた透
過物を、３０００ダルトンの空隙を有する膜上での限外
漉過によって出発時の体積の１／５になるまで濃縮する
工程、 ｄ．工程ａと工程ｃのそれぞれの限外漉過からの残渣由
来の前記濃縮された溶液の溶質を回収する工程に従って
行われることを特徴とする。
【００４１】請求項２０記載の発明は、請求項１７また
は１８に記載の製造方法において、前記溶液の濃縮が次
の工程： ａ．３０００ダルトンの空隙を有する膜上で前記残渣量
が出発時の１／５になるまで行う限外漉過の工程、 ｂ．前記残渣の溶液を、その５倍量の蒸留水に対する量
が一定となるように透析することによってその溶液を脱
塩する工程、 ｃ．前記残渣から溶質を回収する工程に従ってなされる
ことを特徴とする。
は１８に記載の製造方法において、前記溶液の濃縮が次
の工程： ａ．３０００ダルトンの空隙を有する膜上で前記残渣量
が出発時の１／５になるまで行う限外漉過の工程、 ｂ．前記残渣の溶液を、その５倍量の蒸留水に対する量
が一定となるように透析することによってその溶液を脱
塩する工程、 ｃ．前記残渣から溶質を回収する工程に従ってなされる
ことを特徴とする。
【００４２】請求項２１記載の発明は、請求項１９また
は２０に記載の製造方法において、前記溶質の回収は、
沈殿により、前記溶液を前のように０．８Ｍの塩濃度に
なるまで塩添加することにより、およびその後に１．５
倍量のエタノールを添加することによりなされることを
特徴とする。
は２０に記載の製造方法において、前記溶質の回収は、
沈殿により、前記溶液を前のように０．８Ｍの塩濃度に
なるまで塩添加することにより、およびその後に１．５
倍量のエタノールを添加することによりなされることを
特徴とする。
【００４３】請求項２２記載の発明は、請求項２１記載
の製造方法において、前記添加塩は酢酸ナトリウムであ
ることを特徴とする。
の製造方法において、前記添加塩は酢酸ナトリウムであ
ることを特徴とする。
【００４４】請求項２３記載の発明は、請求項２ないし
２２のいずれかに記載の製造方法において、前記生産物
は脱水、粉砕および乾燥によって沈殿物から得られるこ
とを特徴とする。
２２のいずれかに記載の製造方法において、前記生産物
は脱水、粉砕および乾燥によって沈殿物から得られるこ
とを特徴とする。
【００４５】請求項２４記載の発明は、薬剤として使用
される請求項１記載のオリゴデオキシリボヌクレオチド
類であることを特徴とする。
される請求項１記載のオリゴデオキシリボヌクレオチド
類であることを特徴とする。
【００４６】請求項２５記載の発明は、抗虚血活性を有
するドラッグの製造のための請求項１記載のオリゴヌク
レオチド類の用途であることを特徴とする。
するドラッグの製造のための請求項１記載のオリゴヌク
レオチド類の用途であることを特徴とする。
【００４７】請求項２６記載の発明は、心臓性虚血症
（ｃａｒｄｉａｃ ｉｓｃｈｅｍｉａ）の状態の治療用
ドラッグの製造のための請求項１記載のオリゴデオキシ
リボヌクレオチド類の用途であることを特徴とする。
（ｃａｒｄｉａｃ ｉｓｃｈｅｍｉａ）の状態の治療用
ドラッグの製造のための請求項１記載のオリゴデオキシ
リボヌクレオチド類の用途であることを特徴とする。
【００４８】請求項２７記載の発明は、医薬組成物であ
って、非経口および経口投与に適した形態で製造され、
通常の賦形剤および補形剤と共に、請求項１記載のオリ
ゴデオキシリボヌクレオチド類を活性素として含むこと
を特徴とする。
って、非経口および経口投与に適した形態で製造され、
通常の賦形剤および補形剤と共に、請求項１記載のオリ
ゴデオキシリボヌクレオチド類を活性素として含むこと
を特徴とする。
【００４９】請求項２８記載の発明は、請求項２７記載
の医薬組成物において、４０−１６０ｍｇ／ｍｌの範囲
で前記オリゴデオキシリボヌクレオチド類を含むことを
特徴とする。
の医薬組成物において、４０−１６０ｍｇ／ｍｌの範囲
で前記オリゴデオキシリボヌクレオチド類を含むことを
特徴とする。
【００５０】請求項２９記載の発明は、請求項２８記載
の医薬組成物において、前記活性素の量は８０−１６０
ｍｇ／ｍｌの範囲に含まれることを特徴とする。
の医薬組成物において、前記活性素の量は８０−１６０
ｍｇ／ｍｌの範囲に含まれることを特徴とする。
【００５１】請求項３０記載の発明は、請求項２７記載
の医薬組成物において、単位投与量として２００−１５
００ｍｇ／ｍｌの範囲で前記活性素の量を含むことを特
徴とする。
の医薬組成物において、単位投与量として２００−１５
００ｍｇ／ｍｌの範囲で前記活性素の量を含むことを特
徴とする。
【００５２】
【実施例】表１は、新規オリゴデオキシリボヌクレオチ
ド類の適切な物理化学的および化学的特性を示す。
ド類の適切な物理化学的および化学的特性を示す。
【００５３】表１中の変数の範囲は、実施例（実施例８
に示された製品Ｐ００９７．Ｎの比旋光度＋３２．５
°，実施例９に示された製品Ｐ００９７．Ｍの比旋光度
＋３０．９°）と共に表２（範囲：＋３４°−＋４８
°）を参酌して決められる比旋光度を除き、表２から引
用される。
に示された製品Ｐ００９７．Ｎの比旋光度＋３２．５
°，実施例９に示された製品Ｐ００９７．Ｍの比旋光度
＋３０．９°）と共に表２（範囲：＋３４°−＋４８
°）を参酌して決められる比旋光度を除き、表２から引
用される。
【００５４】表１に掲載されたパラメータは次のように
して決定された。
して決定された。
【００５５】本発明の実施例の天然物質の分子量の決定
は、適当な方法に依存する。ＨＰＬＣ（高速液体クロマ
トグラフィー）法の場合には、標準サンプルの選択が強
く結果に影響する。本発明に関しては、標準サンプルは
分析すべきオリゴデオキシリボヌクレオチド類に関し分
子構造あるいは形状の類似性を参酌して選択された。
は、適当な方法に依存する。ＨＰＬＣ（高速液体クロマ
トグラフィー）法の場合には、標準サンプルの選択が強
く結果に影響する。本発明に関しては、標準サンプルは
分析すべきオリゴデオキシリボヌクレオチド類に関し分
子構造あるいは形状の類似性を参酌して選択された。
【００５６】分子量は、３０℃に調温され、直列に配さ
れたＢｉｏｓｉｌ（登録商標） ＴＳＫ３００とＢｉｏ
ｓｉｌ（登録商標） ＴＳＫ２５０（Ｂｉｏｒａｄ（登
録商標）の２本のカラムを備えた液体クロマトグラフ上
でＨＰＬＣにより決定された。移動相を構成する溶液
は、蒸留水に次の物質を溶解することによって得られ
た。その物質とは、塩化ナトリウム ５．８４４ｇ，Ｎ
ａＨ2 ＰＯ4 Ｈ2 Ｏ ９．２４ｇ，グリシン ２２．５
ｇである。その量は最終的に８５０ｍｌとし、ｐＨを６
規定の水酸化ナトリウム水溶液で６．８に調整し、その
溶液を蒸留水で１リットルまで希釈する。
れたＢｉｏｓｉｌ（登録商標） ＴＳＫ３００とＢｉｏ
ｓｉｌ（登録商標） ＴＳＫ２５０（Ｂｉｏｒａｄ（登
録商標）の２本のカラムを備えた液体クロマトグラフ上
でＨＰＬＣにより決定された。移動相を構成する溶液
は、蒸留水に次の物質を溶解することによって得られ
た。その物質とは、塩化ナトリウム ５．８４４ｇ，Ｎ
ａＨ2 ＰＯ4 Ｈ2 Ｏ ９．２４ｇ，グリシン ２２．５
ｇである。その量は最終的に８５０ｍｌとし、ｐＨを６
規定の水酸化ナトリウム水溶液で６．８に調整し、その
溶液を蒸留水で１リットルまで希釈する。
【００５７】流速は０．５ｍｌ／分とし、注入サンプル
量を６マイクロリッター（以下、ｍｃｌと略す）とし、
流出分の光学密度（吸光度）を２６０ｎｍで測定した。
量を６マイクロリッター（以下、ｍｃｌと略す）とし、
流出分の光学密度（吸光度）を２６０ｎｍで測定した。
【００５８】カラムの較正は、分子量が既知のポリスチ
レンスルホン酸（ナトリウム塩）（提供者：Ｐｏｌｙｍ
ｅｒｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ）
を標準にして行われた。溶液ＡおよびＢは較正に用いら
れた。ｎ．４が含まれた２溶液の各々は０．２５％を標
準とした。溶液Ａでは、４種類のポリスチレンスルホン
酸塩の標準品は１８００，８０００，４６０００，２０
００００の分子量を有している。他方、溶液Ｂでは４６
００，１８０００，１０００００，４０００００の分子
量を有している。
レンスルホン酸（ナトリウム塩）（提供者：Ｐｏｌｙｍ
ｅｒｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ）
を標準にして行われた。溶液ＡおよびＢは較正に用いら
れた。ｎ．４が含まれた２溶液の各々は０．２５％を標
準とした。溶液Ａでは、４種類のポリスチレンスルホン
酸塩の標準品は１８００，８０００，４６０００，２０
００００の分子量を有している。他方、溶液Ｂでは４６
００，１８０００，１０００００，４０００００の分子
量を有している。
【００５９】
【表１】
【００６０】各溶液の注入はほぼ３回繰り返された。サ
ンプルは同一条件で注入された。濃色性パラメータｈは
酵素学の手法（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｏｌ
ｏｇｙ，ｖｏｌ．ＩＩＩ，７０８−７１２頁）に記載さ
れているように（併せて、国際特許出願ＷＯ８７／０６
２３５号も参照のこと）決定された。
ンプルは同一条件で注入された。濃色性パラメータｈは
酵素学の手法（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｏｌ
ｏｇｙ，ｖｏｌ．ＩＩＩ，７０８−７１２頁）に記載さ
れているように（併せて、国際特許出願ＷＯ８７／０６
２３５号も参照のこと）決定された。
【００６１】旋光は、乾燥重量ベースで１％ｗ／ｖのサ
ンプル水溶液を用い、２０℃に調温してナトリウムＤ線
で自動旋光計で決定された。
ンプル水溶液を用い、２０℃に調温してナトリウムＤ線
で自動旋光計で決定された。
【００６２】Ａ＋Ｔ／Ｃ＋ＧおよびＡ＋Ｇ／Ｃ＋Ｔの塩
基モル比の計算には、それに対応するオリゴデオキシリ
ボヌクレオチドのサンプル中の各塩基の重量百分率を必
要とした。この分析は、欧州特許３６０８８２号明細書
に記載されているように、サンプルの加水分解後のイオ
ン交換カラム上でのＨＰＬＣによりなされた。
基モル比の計算には、それに対応するオリゴデオキシリ
ボヌクレオチドのサンプル中の各塩基の重量百分率を必
要とした。この分析は、欧州特許３６０８８２号明細書
に記載されているように、サンプルの加水分解後のイオ
ン交換カラム上でのＨＰＬＣによりなされた。
【００６３】これらの物質が得られうる方法は次の通り
である。
である。
【００６４】［１５０００−７５０００ダルトンの範囲
内の分子量を有するポリデオキシリボヌクレオチドナト
リウム塩を４％ｗ／ｖの量で含む０．８Ｍ酢酸ナトリウ
ム水溶液から徐々に行うポリマの沈殿］この方法は２０
℃で行われ、以下の工程に従って、上記溶液に低級アル
キルアルコールを添加することによって達成される。な
お、低級アルキルアルコールはエチルアルコール，プロ
ピルアルコールおよびイソプロピルアルコールからなる
群より選択される。
内の分子量を有するポリデオキシリボヌクレオチドナト
リウム塩を４％ｗ／ｖの量で含む０．８Ｍ酢酸ナトリウ
ム水溶液から徐々に行うポリマの沈殿］この方法は２０
℃で行われ、以下の工程に従って、上記溶液に低級アル
キルアルコールを添加することによって達成される。な
お、低級アルキルアルコールはエチルアルコール，プロ
ピルアルコールおよびイソプロピルアルコールからなる
群より選択される。
【００６５】ａ．４％ｗ／ｖのポリデオキシリボヌクレ
オチド類を含む０．８Ｍ酢酸ナトリウム溶液に０．８倍
の体積のアルコールを添加し、高分子量のポリデオキシ
リボヌクレオチド画分の大部分を沈殿させる工程。
オチド類を含む０．８Ｍ酢酸ナトリウム溶液に０．８倍
の体積のアルコールを添加し、高分子量のポリデオキシ
リボヌクレオチド画分の大部分を沈殿させる工程。
【００６６】ｂ．先の工程ａで得られた０．８倍の体積
のアルコールを含むアルコール水溶液に、もっと多量の
アルコールを添加し、出発時の水相と有機相との体積比
を概ね１とした。上清を除いて、形成された沈殿物を回
収し、さらに次の工程ｄに記載されているように仕上げ
た。この沈殿物は本発明のポリマと混ざった高分子量ポ
リデオキシリボヌクレオチド画分を含むものである。
のアルコールを含むアルコール水溶液に、もっと多量の
アルコールを添加し、出発時の水相と有機相との体積比
を概ね１とした。上清を除いて、形成された沈殿物を回
収し、さらに次の工程ｄに記載されているように仕上げ
た。この沈殿物は本発明のポリマと混ざった高分子量ポ
リデオキシリボヌクレオチド画分を含むものである。
【００６７】ｃ．先の工程ｂの上清を他のアルコールと
混ぜて、アルコールに対する工程ａの出発時の０．８Ｍ
酢酸ナトリウム緩衝水溶液の体積比を最終的に２とし
た。そのような条件で、本発明のオリゴデオキシリボヌ
クレオチド類の分離、回収を行った。
混ぜて、アルコールに対する工程ａの出発時の０．８Ｍ
酢酸ナトリウム緩衝水溶液の体積比を最終的に２とし
た。そのような条件で、本発明のオリゴデオキシリボヌ
クレオチド類の分離、回収を行った。
【００６８】ｄ．工程ｂで得られた沈殿物を０．８Ｍ酢
酸ナトリウムに溶解した。高分子量ポリデオキシリボヌ
クレオチド画分をその後、アルコールに対する水の体積
比を１とした水溶液を添加することによる沈殿によって
除去した。その沈殿物を遠心分離により除去し、残った
アルコール水溶液にアルコールを混ぜ、有機溶媒の全量
に対する水の体積比を２とした。このようにして形成さ
れ、本発明に従うオリゴヌクレオチド類から構成された
沈殿物を回収した。
酸ナトリウムに溶解した。高分子量ポリデオキシリボヌ
クレオチド画分をその後、アルコールに対する水の体積
比を１とした水溶液を添加することによる沈殿によって
除去した。その沈殿物を遠心分離により除去し、残った
アルコール水溶液にアルコールを混ぜ、有機溶媒の全量
に対する水の体積比を２とした。このようにして形成さ
れ、本発明に従うオリゴヌクレオチド類から構成された
沈殿物を回収した。
【００６９】上記方法に代わるべき別の方法に従えば、
出発時の水溶液に１倍の体積のアルコールを添加するこ
とによって中間沈殿物のみが形成され得る。そのような
条件で、上清にさらに１倍の体積のアルコールを混ぜて
目的のポリマの沈殿物を得る。この方法は収率の低下に
つながる。
出発時の水溶液に１倍の体積のアルコールを添加するこ
とによって中間沈殿物のみが形成され得る。そのような
条件で、上清にさらに１倍の体積のアルコールを混ぜて
目的のポリマの沈殿物を得る。この方法は収率の低下に
つながる。
【００７０】［ｐＨ４．１で、酢酸／酢酸ナトリウム
０．５Ｍの緩衝水溶液中における高分子量デオキシリボ
核酸類の熱による解重合化］この方法は６５℃から７５
℃までの範囲内の温度で少なくとも６時間、好ましくは
１０時間未満の処理時間で行われた。時間は出発時の核
酸の分子量にとにかく依存していた。解重合化は固定さ
れた間隔でポリマ分子量をモニターすることによって続
けられた。この方法は、その分子量が表１に記載された
適切な範囲内におさまるまで行われた。
０．５Ｍの緩衝水溶液中における高分子量デオキシリボ
核酸類の熱による解重合化］この方法は６５℃から７５
℃までの範囲内の温度で少なくとも６時間、好ましくは
１０時間未満の処理時間で行われた。時間は出発時の核
酸の分子量にとにかく依存していた。解重合化は固定さ
れた間隔でポリマ分子量をモニターすることによって続
けられた。この方法は、その分子量が表１に記載された
適切な範囲内におさまるまで行われた。
【００７１】上記０．５Ｍの酢酸ナトリウム緩衝液中で
のデオキシリボ核酸濃度は４％ｗ／ｖあるいは約１２％
であった。高濃度であれば収率は良くなることは明らか
である（実施例６−１１参照）。
のデオキシリボ核酸濃度は４％ｗ／ｖあるいは約１２％
であった。高濃度であれば収率は良くなることは明らか
である（実施例６−１１参照）。
【００７２】この方法は次のような工程からなる。
【００７３】ａ．高分子量のデオキシリボ核酸類の溶解
工程、および必要な緩衝液のモル濃度とｐＨを与えるた
めの酢酸ナトリウム三水和物＋濃（８０％）酢酸の添加
の工程 ｂ．先の工程ａで得られた水性で粘性のある溶液を、６
５℃から７５℃までの範囲内の温度で少なくとも６時間
加熱する工程 ｃ．工程ｂの熱処理の最終段階で３０℃に下げ、３０％
水酸化ナトリウム水溶液で７．８−８．０にｐＨ調整
し、その後再度８５℃で９０分間加熱する工程 ｄ．上記溶液を室温まで冷却し、濃酢酸で６．５にｐＨ
調整し、水の１．５倍−２倍量のアルコールを含む水溶
液中においてエタノールの添加によりオリゴデオキシリ
ボヌクレオチド類を沈殿させる工程。
工程、および必要な緩衝液のモル濃度とｐＨを与えるた
めの酢酸ナトリウム三水和物＋濃（８０％）酢酸の添加
の工程 ｂ．先の工程ａで得られた水性で粘性のある溶液を、６
５℃から７５℃までの範囲内の温度で少なくとも６時間
加熱する工程 ｃ．工程ｂの熱処理の最終段階で３０℃に下げ、３０％
水酸化ナトリウム水溶液で７．８−８．０にｐＨ調整
し、その後再度８５℃で９０分間加熱する工程 ｄ．上記溶液を室温まで冷却し、濃酢酸で６．５にｐＨ
調整し、水の１．５倍−２倍量のアルコールを含む水溶
液中においてエタノールの添加によりオリゴデオキシリ
ボヌクレオチド類を沈殿させる工程。
【００７４】［高分子量デオキシリボ核酸のデオキシリ
ボヌクレアーゼによる解重合化工程および該溶液を濃縮
するための限外漉過工程］酵素的分解を、１０ｍＭの塩
化マグネシウムの存在下、０．１Ｍ、ｐＨ７．０の燐酸
緩衝液中で、２４時間、高分子量の１％ｗ／ｖ核酸類に
対して行った。最終段階で、次のような限外漉過を行っ
た。
ボヌクレアーゼによる解重合化工程および該溶液を濃縮
するための限外漉過工程］酵素的分解を、１０ｍＭの塩
化マグネシウムの存在下、０．１Ｍ、ｐＨ７．０の燐酸
緩衝液中で、２４時間、高分子量の１％ｗ／ｖ核酸類に
対して行った。最終段階で、次のような限外漉過を行っ
た。
【００７５】ａ．上記溶液の体積が出発時の１／５に減
少するまで行う、１００００ダルトンの空隙を有する膜
上での上記溶液の限外漉過の工程 ｂ．概ね５倍量の蒸留水に対して一定量ずつ（すなわ
ち、出発時の量を維持するように該溶液に水を加えて）
限外漉過されて残渣として残った溶液を透析することに
よって該溶液を脱塩する工程 ｃ．３０００ダルトンの空隙を有する限外漉過により、
先の工程ａおよびｂから集められてまとめられた透析液
を出発時の１／５量に濃縮する工程 ｄ．当該溶液を０．８Ｍの塩濃度になるまで塩添加する
ことによって、１００００ダルトンの空隙を有する膜上
での限外漉過工程ａにおいて膜上に残渣として残った溶
液中に溶解されていた第１の溶質、および３０００ダル
トンの空隙を有する膜上での限外漉過工程ｃにおいて膜
上に残渣溶液中に溶解されていた第２の溶質を回収し、
エタノール水溶液（体積比でエタノール：水＝１．５：
１）の添加による沈降化工程。
少するまで行う、１００００ダルトンの空隙を有する膜
上での上記溶液の限外漉過の工程 ｂ．概ね５倍量の蒸留水に対して一定量ずつ（すなわ
ち、出発時の量を維持するように該溶液に水を加えて）
限外漉過されて残渣として残った溶液を透析することに
よって該溶液を脱塩する工程 ｃ．３０００ダルトンの空隙を有する限外漉過により、
先の工程ａおよびｂから集められてまとめられた透析液
を出発時の１／５量に濃縮する工程 ｄ．当該溶液を０．８Ｍの塩濃度になるまで塩添加する
ことによって、１００００ダルトンの空隙を有する膜上
での限外漉過工程ａにおいて膜上に残渣として残った溶
液中に溶解されていた第１の溶質、および３０００ダル
トンの空隙を有する膜上での限外漉過工程ｃにおいて膜
上に残渣溶液中に溶解されていた第２の溶質を回収し、
エタノール水溶液（体積比でエタノール：水＝１．５：
１）の添加による沈降化工程。
【００７６】上記２種の限外漉過工程に代えて、溶液の
濃縮は次の手順に従って行われ得る。
濃縮は次の手順に従って行われ得る。
【００７７】ａ．３０００ダルトンの空隙を有する膜上
に残渣溶液の体積を出発時の１／５にするまで行う限外
漉過工程 ｂ．概ね５倍量の蒸留水に対して一定量の溶液（工程
ａ）を透析することによって脱塩する工程 ｃ．上記工程ｄにおける残渣溶液からの溶質の回収工程 前記工程は、より簡素化した手順の利点をもって、前者
とほぼ同一の収率を与えることが明らかである。
に残渣溶液の体積を出発時の１／５にするまで行う限外
漉過工程 ｂ．概ね５倍量の蒸留水に対して一定量の溶液（工程
ａ）を透析することによって脱塩する工程 ｃ．上記工程ｄにおける残渣溶液からの溶質の回収工程 前記工程は、より簡素化した手順の利点をもって、前者
とほぼ同一の収率を与えることが明らかである。
【００７８】前述の全ての工程において、上記化合物は
脱水、粉砕および続いて乾燥の各工程によって沈殿物か
ら得られた。
脱水、粉砕および続いて乾燥の各工程によって沈殿物か
ら得られた。
【００７９】表２は、以下に記述される薬理アッセイに
用いられた製品の分析プロフィールを示す。
用いられた製品の分析プロフィールを示す。
【００８０】１００００以下の分子量を有し、かつ本発
明のポリマより抗虚血活性の少ないオリゴデオキシリボ
ヌクレオチド製品（実験室コード：Ｐ００６７．Ｄ
Ｖ）を、実施例１５に記述される分画法（ｆｒａｃｔｉ
ｏｎａｔｉｏｎａｌ ｍｅｔｈｏｄ）に従って得た。こ
の製品は次のような分析データ（乾燥重量ベース）を示
した。
明のポリマより抗虚血活性の少ないオリゴデオキシリボ
ヌクレオチド製品（実験室コード：Ｐ００６７．Ｄ
Ｖ）を、実施例１５に記述される分画法（ｆｒａｃｔｉ
ｏｎａｔｉｏｎａｌ ｍｅｔｈｏｄ）に従って得た。こ
の製品は次のような分析データ（乾燥重量ベース）を示
した。
【００８１】分子量 ６６００， 濃色性パラメータｈ １．４， Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ １．４９４， Ａ＋Ｇ／Ｔ＋Ｃ ０．９１４， 比旋光度 ＋３７．２° Ｐ００６７．Ｄ Ｖを得るのに用いられた同一の分画法
は、他のバッチの解重合化されたデオキシリボ核酸類に
適用されたときには、その生産物に同一の分析的な特
性、すなわち高Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃモル比値を与えたことは
ここで述べる価値がある。適当な例が実施例１６に与え
られている。
は、他のバッチの解重合化されたデオキシリボ核酸類に
適用されたときには、その生産物に同一の分析的な特
性、すなわち高Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃモル比値を与えたことは
ここで述べる価値がある。適当な例が実施例１６に与え
られている。
【００８２】
【表２】
【００８３】表３は、本発明の化合物としての製品Ｐ０
０６７．Ｄ Ｖの繊維素分解活性（ｆｉｂｒｉｎｏｌｙ
ｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ）のデータを示す。また、表
３は、比較のため、繊維素分解剤プラスミンおよびプラ
スミノーゲンから誘導された蛋白分解酵素の各繊維素分
解活性をも示す。なお、プラスミンはヒトの治療によく
用いられるものである。
０６７．Ｄ Ｖの繊維素分解活性（ｆｉｂｒｉｎｏｌｙ
ｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ）のデータを示す。また、表
３は、比較のため、繊維素分解剤プラスミンおよびプラ
スミノーゲンから誘導された蛋白分解酵素の各繊維素分
解活性をも示す。なお、プラスミンはヒトの治療によく
用いられるものである。
【００８４】上記活性は、パラニトロアニリド（ｐＮ
Ａ）と等価に結合しているペプチド基質Ｓ−２２５１か
ら加水分解されたｐＮＡのｍｃｇ（マイクログラム）の
単位で示されている。
Ａ）と等価に結合しているペプチド基質Ｓ−２２５１か
ら加水分解されたｐＮＡのｍｃｇ（マイクログラム）の
単位で示されている。
【００８５】上記結合は、繊維素分解剤の作用に対して
選択的に感受性が高いものである。
選択的に感受性が高いものである。
【００８６】結果として、溶液中で遊離しているｐＮＡ
の量は、検定後の化合物の繊維素分解活性に直接関係し
ている。
の量は、検定後の化合物の繊維素分解活性に直接関係し
ている。
【００８７】繊維素分解活性は、Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅ
ｍｏｓｔａｓ．４８（３），２６６−２６９頁，１９８
２年に掲載されているＪ．Ｈ． Ｖｅｒｈｅｉｊｅｎ
とＡｌｉｉによる「プラズマ中における測定に適用可能
で簡単な外因性（組織タイプ）プラスミノーゲン活性因
子の感受性の高い分光測定アッセイ」に記述されている
ように、トリペプチドＳ−２２５１（Ｈ−Ｄ−ｖａｌｉ
ｌ−Ｌ−ｌｅｕｃｉｌ−Ｌ−ｌｙｓｉｎｅ パラニトロ
アニリド ジヒドロクロリド Ｋａｂｉ−Ｍｉｌａｎ）
を用いて試験管内で調べられた。
ｍｏｓｔａｓ．４８（３），２６６−２６９頁，１９８
２年に掲載されているＪ．Ｈ． Ｖｅｒｈｅｉｊｅｎ
とＡｌｉｉによる「プラズマ中における測定に適用可能
で簡単な外因性（組織タイプ）プラスミノーゲン活性因
子の感受性の高い分光測定アッセイ」に記述されている
ように、トリペプチドＳ−２２５１（Ｈ−Ｄ−ｖａｌｉ
ｌ−Ｌ−ｌｅｕｃｉｌ−Ｌ−ｌｙｓｉｎｅ パラニトロ
アニリド ジヒドロクロリド Ｋａｂｉ−Ｍｉｌａｎ）
を用いて試験管内で調べられた。
【００８８】プラズマオイグロブリン画分はラビットの
耳の端の静脈から血液（８ｍｌ）を採血することによっ
て調製された。採血は、既に２ｍｌの三塩基クエン酸ナ
トリウム３．８％ｗ／ｖ溶液を収容した注射器を用いて
行われた。遠心分離により得られたプラズマを、０．５
ｍｌに等分に分け、各小分けに１ｍｌのオリゴヌクレオ
チド溶液を添加した。この添加は、最終的なプラズマ濃
度を２００ｍｃｇ／ｍｌと８００ｍｃｇ／ｍｌにするよ
うな方法で行われた。その溶液に０．１ｍｌのウロキナ
ーゼ（５０Ｕ．／ｍｌ）水溶液を添加し、プラスミノー
ゲンをプラスミンに変換した。ｐＨを５．４とするため
に酢酸を添加した後、＋４℃の冷蒸留水で溶液の量を
８．５ｍｌに調整してオイグロブリン沈殿を得た。ここ
で、試験管を４℃の冷蔵庫へ移し、２時間置くことによ
って本工程を完了した。遠心分離を１０分間行い、上清
を捨てた。残渣は０．３ｍｌのトリス塩酸緩衝液で混
ぜ、懸濁状態とした。この０．３ｍｌの懸濁液に０．４
ｍｌのトリス塩酸緩衝液を添加した後、３７℃で１０分
間インキュベートした。その後、トリペプチドＳ−２２
５１（蒸留水５ｍｌ中に基質８．２５ｍｇが存在してい
る）を添加し、３７℃でさらに５分間インキュベートし
た。酵素分解の進行は、０．１ｍｌの１％酢酸および
０．６ｍｌの０．１５Ｍ塩化ナトリウム水溶液を添加す
ることによって止めた。試験溶液中に遊離したクロモゲ
ンの量は分光測定によって決定された。参照標準曲線
は、４０ｍｃｇ，８０ｍｃｇ，１６０ｍｃｇ，３２０ｍ
ｃｇの各配合で同一試験で検定されたバクテリアプラス
ミンＵ．Ｓ．（Ｂｉｏｓｉｎｔｅｘ製）を用いて作成さ
れた。実験は全てについて６回繰返し行われた。どの実
験においてもサンプルと４種類の濃度のプラスミンにつ
いて検定されている。結果は表３に示されている。
耳の端の静脈から血液（８ｍｌ）を採血することによっ
て調製された。採血は、既に２ｍｌの三塩基クエン酸ナ
トリウム３．８％ｗ／ｖ溶液を収容した注射器を用いて
行われた。遠心分離により得られたプラズマを、０．５
ｍｌに等分に分け、各小分けに１ｍｌのオリゴヌクレオ
チド溶液を添加した。この添加は、最終的なプラズマ濃
度を２００ｍｃｇ／ｍｌと８００ｍｃｇ／ｍｌにするよ
うな方法で行われた。その溶液に０．１ｍｌのウロキナ
ーゼ（５０Ｕ．／ｍｌ）水溶液を添加し、プラスミノー
ゲンをプラスミンに変換した。ｐＨを５．４とするため
に酢酸を添加した後、＋４℃の冷蒸留水で溶液の量を
８．５ｍｌに調整してオイグロブリン沈殿を得た。ここ
で、試験管を４℃の冷蔵庫へ移し、２時間置くことによ
って本工程を完了した。遠心分離を１０分間行い、上清
を捨てた。残渣は０．３ｍｌのトリス塩酸緩衝液で混
ぜ、懸濁状態とした。この０．３ｍｌの懸濁液に０．４
ｍｌのトリス塩酸緩衝液を添加した後、３７℃で１０分
間インキュベートした。その後、トリペプチドＳ−２２
５１（蒸留水５ｍｌ中に基質８．２５ｍｇが存在してい
る）を添加し、３７℃でさらに５分間インキュベートし
た。酵素分解の進行は、０．１ｍｌの１％酢酸および
０．６ｍｌの０．１５Ｍ塩化ナトリウム水溶液を添加す
ることによって止めた。試験溶液中に遊離したクロモゲ
ンの量は分光測定によって決定された。参照標準曲線
は、４０ｍｃｇ，８０ｍｃｇ，１６０ｍｃｇ，３２０ｍ
ｃｇの各配合で同一試験で検定されたバクテリアプラス
ミンＵ．Ｓ．（Ｂｉｏｓｉｎｔｅｘ製）を用いて作成さ
れた。実験は全てについて６回繰返し行われた。どの実
験においてもサンプルと４種類の濃度のプラスミンにつ
いて検定されている。結果は表３に示されている。
【００８９】１００００未満の分子量を有するオリゴデ
オキシリボヌクレオチド類が弱いか、あるいは全くない
繊維素分解活性を示すということが表３のデータから引
き出され得る。
オキシリボヌクレオチド類が弱いか、あるいは全くない
繊維素分解活性を示すということが表３のデータから引
き出され得る。
【００９０】このことは、さらに国際特許出願８７／０
６２３５の教示内容を考慮して既に期待されるべきであ
った。抗虚血活性測定は、生体外（ｅｘ−ｖｉｖｏ）に
出され、単離され、かつ潅流されたラビットの心臓上で
行われた。この測定は基本的にはＰ．Ｄ．Ｈｅｎｒｙに
よる論文“虚血性ラビット心臓における心筋痙縮および
ミトコンドリアのカルシウム蓄積”（Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙ
ｓｉｏｌ．２３３頁、１９７７年）に記載されている。
６２３５の教示内容を考慮して既に期待されるべきであ
った。抗虚血活性測定は、生体外（ｅｘ−ｖｉｖｏ）に
出され、単離され、かつ潅流されたラビットの心臓上で
行われた。この測定は基本的にはＰ．Ｄ．Ｈｅｎｒｙに
よる論文“虚血性ラビット心臓における心筋痙縮および
ミトコンドリアのカルシウム蓄積”（Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙ
ｓｉｏｌ．２３３頁、１９７７年）に記載されている。
【００９１】虚血性が発症する前に、試験化合物を開始
から４０分間、４００ｍｃｇ／ｍｌの濃度でかつ２０ｍ
ｌ／分の流速で潅流した。
から４０分間、４００ｍｃｇ／ｍｌの濃度でかつ２０ｍ
ｌ／分の流速で潅流した。
【００９２】虚血状態（４０分間）では、その流速を
０．２ｍｌ／分に下げた。この状態の最終段階では、出
発時の流速を元に戻し、さらにそれを２０分間維持し
た。この実験は全てにつき６回繰返し行われた。虚血状
態および次の潅流状態の間、上記処置された心臓の左心
室の拡張末期の血圧（最小血圧）を決定し、未処置の心
臓（コントロール群）を参照して評価した。
０．２ｍｌ／分に下げた。この状態の最終段階では、出
発時の流速を元に戻し、さらにそれを２０分間維持し
た。この実験は全てにつき６回繰返し行われた。虚血状
態および次の潅流状態の間、上記処置された心臓の左心
室の拡張末期の血圧（最小血圧）を決定し、未処置の心
臓（コントロール群）を参照して評価した。
【００９３】
【表３】
【００９４】表４は、該表中に示されているように決定
された検査の下で、虚血状態および次の潅流状態におけ
る当該化合物の抗虚血活性を示す。表４からは、表１に
示された分析プロフィールに従うオリゴデオキシリボヌ
クレオチド類は十分に抗虚血活性を示すことが明らかで
ある。その反対に、表１に示された範囲１．１００−
１．４５５から外れたＡ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ塩基モル比（１．
４９４）を有する製品Ｐ００６７．Ｄ Ｖは、非常に活
性が低いことが証明された。
された検査の下で、虚血状態および次の潅流状態におけ
る当該化合物の抗虚血活性を示す。表４からは、表１に
示された分析プロフィールに従うオリゴデオキシリボヌ
クレオチド類は十分に抗虚血活性を示すことが明らかで
ある。その反対に、表１に示された範囲１．１００−
１．４５５から外れたＡ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ塩基モル比（１．
４９４）を有する製品Ｐ００６７．Ｄ Ｖは、非常に活
性が低いことが証明された。
【００９５】これらのデータの意味するところは、前述
の実験モデルでは、心臓性虚血症が潅流液体の流れを遅
くする場合、心臓が心室痙縮により機能的に証明される
ダメージを受けることを参酌すれば、一層理解され得
る。続く潅流状態では、出発時の流速を戻す条件で、既
に先の状態で観察された拡張期の血圧（最小血圧）値の
上昇と共に、最も悪い欠陥が引き起こされ、心臓不整脈
の同時発生の兆候がある。
の実験モデルでは、心臓性虚血症が潅流液体の流れを遅
くする場合、心臓が心室痙縮により機能的に証明される
ダメージを受けることを参酌すれば、一層理解され得
る。続く潅流状態では、出発時の流速を戻す条件で、既
に先の状態で観察された拡張期の血圧（最小血圧）値の
上昇と共に、最も悪い欠陥が引き起こされ、心臓不整脈
の同時発生の兆候がある。
【００９６】表４のデータから、最終的な潅流状態で
は、本発明のオリゴヌクレオチド類は実験的に誘導され
た虚血症からの実質的な防御を提供する。従って、本発
明のオリゴヌクレオチド類は、心臓の拡張期の抵抗の減
少と共に、心臓の通常の収縮活性を実質的に維持する。
は、本発明のオリゴヌクレオチド類は実験的に誘導され
た虚血症からの実質的な防御を提供する。従って、本発
明のオリゴヌクレオチド類は、心臓の拡張期の抵抗の減
少と共に、心臓の通常の収縮活性を実質的に維持する。
【００９７】上記のように示された実験の結果として、
新規な化合物は心臓性虚血症の治療に有益に利用され得
る。本発明の他の目的は、活性素としての新規物質を含
有する投薬形態の提供にある。前述の処方は、非経口お
よび経口投与の両方に用いられ得る。
新規な化合物は心臓性虚血症の治療に有益に利用され得
る。本発明の他の目的は、活性素としての新規物質を含
有する投薬形態の提供にある。前述の処方は、非経口お
よび経口投与の両方に用いられ得る。
【００９８】非経口用の組成物は、密閉されたアンプル
内の非発熱性の滅菌溶液の形態、あるいは密閉容器内に
収容された水性滅菌溶媒に即座に溶解されるべき真空凍
結乾燥物とすることができる。
内の非発熱性の滅菌溶液の形態、あるいは密閉容器内に
収容された水性滅菌溶媒に即座に溶解されるべき真空凍
結乾燥物とすることができる。
【００９９】公知の防腐剤と共に従来の緩衝液（クエン
酸塩、リン酸塩その他）で調製された等張液は、水性溶
媒として用いられ得る。
酸塩、リン酸塩その他）で調製された等張液は、水性溶
媒として用いられ得る。
【０１００】経口用の処方は、タブレット、コートされ
たタブレット、ゼラチン、カプセル、顆粒の形態で利用
に供せられ得る。前記投薬の形態は公知技術に従って製
造され得る。
たタブレット、ゼラチン、カプセル、顆粒の形態で利用
に供せられ得る。前記投薬の形態は公知技術に従って製
造され得る。
【０１０１】例えば、経口用の投薬形態は、粉末あるい
は顆粒を直接加圧することによって製造され得るが、結
着剤、潤滑剤および公知の成分を含んでもよい。非経口
投与用の投薬形態は、活性素を４０ｍｇ／ｍｌから２０
０ｍｇ／ｍｌの範囲、好ましくは８０ｍｇ／ｍｌから１
６０ｍｇ／ｍｌの範囲（上記真空凍結乾燥物では、滅菌
溶媒中の物質の最終濃度にあたる）で含有してもよい。
これに対して、経口投与の場合には、単位投薬量は２０
０ｍｇと１５００ｍｇとの間である。
は顆粒を直接加圧することによって製造され得るが、結
着剤、潤滑剤および公知の成分を含んでもよい。非経口
投与用の投薬形態は、活性素を４０ｍｇ／ｍｌから２０
０ｍｇ／ｍｌの範囲、好ましくは８０ｍｇ／ｍｌから１
６０ｍｇ／ｍｌの範囲（上記真空凍結乾燥物では、滅菌
溶媒中の物質の最終濃度にあたる）で含有してもよい。
これに対して、経口投与の場合には、単位投薬量は２０
０ｍｇと１５００ｍｇとの間である。
【０１０２】
【表４】
【０１０３】〔実施例１〕 ［酢酸ナトリウムの存在下、エタノール添加によるデフ
ィブロチド水溶液からの分画沈殿による本発明に従うオ
リゴヌクレオチド類の単離（Ｐ００８５．ＣとＰ００８
５．ＭＩＩ）］４２０ｇのデフィブロチド（ロット番号
８２）を１０．５ｌ中に溶解し（最終濃度４％ｗ／
ｖ）、１１５５ｇの０．８Ｍ酢酸ナトリウム三水和物を
添加した。この溶液を２０℃に調温し、その後０．８倍
の体積の９５％アルコールを添加した。上清は遠心分離
により回収された。その際の高分子量ポリデオキシリボ
ヌクレオチド類の沈殿物は廃棄した。そして、上記上清
には０．２倍の体積のエタノールを添加して有機相／水
相の総体積比を１とした。遠心分離を再び行った。その
際の沈殿物を回収し、乾燥し、粉砕した。概ね９７．６
ｇを回収した（ポリデオキシリボヌクレオチドと本発明
のオリゴデオキシリボヌクレオチド類との混合物からな
る製品Ｐ００８５．Ｂ）。上記上清には、より多量のエ
タノールが添加され有機相／水相の体積比を２とした。
このようにして４０．５ｇの固形物を回収した（製品Ｐ
００８５．Ｃ）。
ィブロチド水溶液からの分画沈殿による本発明に従うオ
リゴヌクレオチド類の単離（Ｐ００８５．ＣとＰ００８
５．ＭＩＩ）］４２０ｇのデフィブロチド（ロット番号
８２）を１０．５ｌ中に溶解し（最終濃度４％ｗ／
ｖ）、１１５５ｇの０．８Ｍ酢酸ナトリウム三水和物を
添加した。この溶液を２０℃に調温し、その後０．８倍
の体積の９５％アルコールを添加した。上清は遠心分離
により回収された。その際の高分子量ポリデオキシリボ
ヌクレオチド類の沈殿物は廃棄した。そして、上記上清
には０．２倍の体積のエタノールを添加して有機相／水
相の総体積比を１とした。遠心分離を再び行った。その
際の沈殿物を回収し、乾燥し、粉砕した。概ね９７．６
ｇを回収した（ポリデオキシリボヌクレオチドと本発明
のオリゴデオキシリボヌクレオチド類との混合物からな
る製品Ｐ００８５．Ｂ）。上記上清には、より多量のエ
タノールが添加され有機相／水相の体積比を２とした。
このようにして４０．５ｇの固形物を回収した（製品Ｐ
００８５．Ｃ）。
【０１０４】９７．６ｇのＰ００８５．Ｂを２．４５ｌ
の蒸留水中に溶解し、２６９．５ｇの酢酸ナトリウム三
水和物を添加した。この溶液を２０℃に調温し、この溶
液に１倍の体積のエタノールを添加し、得られた懸濁物
を遠心分離した。上清にはより多量のエタノールを添加
し、最終的なエタノール／水の総体積比を２とした。３
１．２ｇ（製品Ｐ００８５．Ｍ．ＩＩ）を回収した。
の蒸留水中に溶解し、２６９．５ｇの酢酸ナトリウム三
水和物を添加した。この溶液を２０℃に調温し、この溶
液に１倍の体積のエタノールを添加し、得られた懸濁物
を遠心分離した。上清にはより多量のエタノールを添加
し、最終的なエタノール／水の総体積比を２とした。３
１．２ｇ（製品Ｐ００８５．Ｍ．ＩＩ）を回収した。
【０１０５】オリゴデオキシリボヌクレオチド類の総回
収量、すなわちＰ００８５．Ｃ＋Ｐ００８５．Ｍ．ＩＩ
は７１．７ｇ（収率１７．１％）であった。
収量、すなわちＰ００８５．Ｃ＋Ｐ００８５．Ｍ．ＩＩ
は７１．７ｇ（収率１７．１％）であった。
【０１０６】〔実施例２〕 ［酢酸ナトリウム存在下、デフィブロチド含有水溶液か
らのエタノールによる分画沈殿によるオリゴヌクレオチ
ド類（Ｐ００８５．Ｄ．ＩＶ）の単離］１７０００ダル
トンの分子量を有するデフィブロチド製品２０ｇを５０
０ｍｌの蒸留水中に溶解した。５５ｇの酢酸ナトリウム
三水和物を添加し、その結果として得られた透明溶液を
２０℃に調温した。５００ｍｌ（１倍の体積量）のエタ
ノールをその後添加し、３０００回転／分で５分間の遠
心分離により沈殿物を集めた。その上清には５００ｍｌ
（すなわち、水相の体積に対応する量の２倍の体積量）
のエタノールが添加された。固形物を回収し、脱水し、
粉砕し、オーブン内で乾燥した。このようにして２．１
０ｇの目的物を得た。収率は１０．５％であった。
らのエタノールによる分画沈殿によるオリゴヌクレオチ
ド類（Ｐ００８５．Ｄ．ＩＶ）の単離］１７０００ダル
トンの分子量を有するデフィブロチド製品２０ｇを５０
０ｍｌの蒸留水中に溶解した。５５ｇの酢酸ナトリウム
三水和物を添加し、その結果として得られた透明溶液を
２０℃に調温した。５００ｍｌ（１倍の体積量）のエタ
ノールをその後添加し、３０００回転／分で５分間の遠
心分離により沈殿物を集めた。その上清には５００ｍｌ
（すなわち、水相の体積に対応する量の２倍の体積量）
のエタノールが添加された。固形物を回収し、脱水し、
粉砕し、オーブン内で乾燥した。このようにして２．１
０ｇの目的物を得た。収率は１０．５％であった。
【０１０７】〔実施例３〕 ［酢酸ナトリウム存在下、ポリデオキシリボヌクレオチ
ド水溶液からのエタノールによる分画沈殿によるオリゴ
ヌクレオチド類（Ｐ００８５．Ｄ Ｖ）の単離］４３０
００ダルトンの分子量を有するポリデオキシリボヌクレ
オチドのナトリウム塩２０ｇを蒸留水５００ｍｌ中に溶
解した。その後、実施例２と同様の方法で目的物を得
た。最終的には、２．１４６ｇを得た（収率７．３
％）。このようにして単離した物質は次のような分析特
性を有していた（乾燥重量ベースでのデータ）。
ド水溶液からのエタノールによる分画沈殿によるオリゴ
ヌクレオチド類（Ｐ００８５．Ｄ Ｖ）の単離］４３０
００ダルトンの分子量を有するポリデオキシリボヌクレ
オチドのナトリウム塩２０ｇを蒸留水５００ｍｌ中に溶
解した。その後、実施例２と同様の方法で目的物を得
た。最終的には、２．１４６ｇを得た（収率７．３
％）。このようにして単離した物質は次のような分析特
性を有していた（乾燥重量ベースでのデータ）。
【０１０８】分子量 ６７００ 濃色性パラメータ ３．４ Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ １．３７５ Ｇ＋Ａ／Ｔ＋Ｃ ０．８２５ 比旋光度 ＋４３．４° 〔実施例４〕 ［実施例２の手順によるオリゴヌクレオチド類（製品Ｐ
００８５．Ｄ ＶＩ）の単離］２６２００の分子量を有
するデフィブロチド（ロット番号１５７）２０ｇを実施
例２に従って処理した。１．５４ｇ（収率７．７％）を
最終的に回収した。分析データ（乾燥重量ベースでのデ
ータ）は次の通りであった。
００８５．Ｄ ＶＩ）の単離］２６２００の分子量を有
するデフィブロチド（ロット番号１５７）２０ｇを実施
例２に従って処理した。１．５４ｇ（収率７．７％）を
最終的に回収した。分析データ（乾燥重量ベースでのデ
ータ）は次の通りであった。
【０１０９】分子量 ５９００ 濃色性パラメータ ５．７ Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ １．３４３ Ｇ＋Ａ／Ｔ＋Ｃ ０．８３５ 比旋光度 ＋４１．６° 〔実施例５〕 ［酢酸ナトリウム存在下、ポリデオキシリボヌクレオチ
ド水溶液からのエタノールによる分画沈殿によるオリゴ
ヌクレオチド類（Ｐ００８５．Ｄ ＶＩＩ）の単離］７
５０００の分子量を有するポリデオキシリボヌクレオチ
ドのナトリウム塩２０ｇを５００ｍｌの蒸留水中に溶解
した。そして、先の実施例２と同様の手順で処理した。
次のような特性（乾燥重量ベースでのデータ）を有する
化合物０．７８ｇを得た（収率３．９％）。
ド水溶液からのエタノールによる分画沈殿によるオリゴ
ヌクレオチド類（Ｐ００８５．Ｄ ＶＩＩ）の単離］７
５０００の分子量を有するポリデオキシリボヌクレオチ
ドのナトリウム塩２０ｇを５００ｍｌの蒸留水中に溶解
した。そして、先の実施例２と同様の手順で処理した。
次のような特性（乾燥重量ベースでのデータ）を有する
化合物０．７８ｇを得た（収率３．９％）。
【０１１０】分子量 ６１００ 濃色性パラメータ ７．１ Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ １．４１５ Ｇ＋Ａ／Ｔ＋Ｃ ０．８６０ 比旋光度 ＋４３．６° 〔実施例６〕 ［酢酸ナトリウム／酢酸緩衝水溶液中での化学的解重合
による本発明のオリゴヌクレオチド類の製造（製品Ｐ０
１３０．Ａ）］８００ｇの高分子量デオキシリボ核酸
（分子量７００，０００以上）を５２８０ｍｌの水中に
穏やかな加熱によって溶解した。４２６．４ｇの酢酸ナ
トリウム三水和物を添加し、次いで１０１６ｍｌの８０
％酢酸をさらに添加してｐＨ４．１に調整し、その後そ
の粘性溶液（最終ポリマ濃度：１２．７％ｗ／ｖ，酢酸
ナトリウムのモル濃度：０．５Ｍ）を７５℃で６時間加
熱した。この後、温度を３０℃まで下げ、３０％水酸化
ナトリウム水溶液で７．８−８．０にｐＨ調整し、さら
にその溶液を８５。Ｃで９時間加熱した。冷却後、８０
％酢酸（ＣＨ3 ＣＯＯＨ）でｐＨを６．５に戻した。こ
の溶液に、エタノール／水相の体積比を１．５としたア
ルコール水溶液を添加することによって沈殿物を得た。
回収された固形分は洗浄され、粉砕され、乾燥された。
７４５ｇの目的物を得た（収率：９３．１％）。
による本発明のオリゴヌクレオチド類の製造（製品Ｐ０
１３０．Ａ）］８００ｇの高分子量デオキシリボ核酸
（分子量７００，０００以上）を５２８０ｍｌの水中に
穏やかな加熱によって溶解した。４２６．４ｇの酢酸ナ
トリウム三水和物を添加し、次いで１０１６ｍｌの８０
％酢酸をさらに添加してｐＨ４．１に調整し、その後そ
の粘性溶液（最終ポリマ濃度：１２．７％ｗ／ｖ，酢酸
ナトリウムのモル濃度：０．５Ｍ）を７５℃で６時間加
熱した。この後、温度を３０℃まで下げ、３０％水酸化
ナトリウム水溶液で７．８−８．０にｐＨ調整し、さら
にその溶液を８５。Ｃで９時間加熱した。冷却後、８０
％酢酸（ＣＨ3 ＣＯＯＨ）でｐＨを６．５に戻した。こ
の溶液に、エタノール／水相の体積比を１．５としたア
ルコール水溶液を添加することによって沈殿物を得た。
回収された固形分は洗浄され、粉砕され、乾燥された。
７４５ｇの目的物を得た（収率：９３．１％）。
【０１１１】〔実施例７〕 ［酢酸ナトリウム／酢酸緩衝水溶液中での化学的解重合
による本発明のオリゴヌクレオチド類の製造（製品Ｐ０
１３０．Ｃ）］８００ｇの高分子量デオキシリボ核酸を
実施例６と同様にして処理した。最終的には、７６５ｇ
の生産物を得た（収率：９５．６％）。
による本発明のオリゴヌクレオチド類の製造（製品Ｐ０
１３０．Ｃ）］８００ｇの高分子量デオキシリボ核酸を
実施例６と同様にして処理した。最終的には、７６５ｇ
の生産物を得た（収率：９５．６％）。
【０１１２】〔実施例８〕 ［酢酸ナトリウム／酢酸緩衝水溶液中で解重合による新
規物質の製造（製品Ｐ００９７．Ｎ）］５０ｇの高分子
量の核酸類を温度７０。Ｃで１ｌの水中に溶解した。８
０ｇのＣＨ3 ＣＯＯＮａ３Ｈ2 Ｏと１９０ｍｌの８０％
ＣＨ3 ＣＯＯＨ（最終的にｐＨ４．１）を添加した（ポ
リマ濃度：４％ｗ／ｖ，酢酸ナトリウムモル濃度：０．
５Ｍ）。その結果として得られた溶液を７０℃で２４時
間加熱した。冷却後、温度を３０℃に下げた後は実施例
６と同様にして処理した。３３．５ｇの生産物を得た
（収率：６７％）。
規物質の製造（製品Ｐ００９７．Ｎ）］５０ｇの高分子
量の核酸類を温度７０。Ｃで１ｌの水中に溶解した。８
０ｇのＣＨ3 ＣＯＯＮａ３Ｈ2 Ｏと１９０ｍｌの８０％
ＣＨ3 ＣＯＯＨ（最終的にｐＨ４．１）を添加した（ポ
リマ濃度：４％ｗ／ｖ，酢酸ナトリウムモル濃度：０．
５Ｍ）。その結果として得られた溶液を７０℃で２４時
間加熱した。冷却後、温度を３０℃に下げた後は実施例
６と同様にして処理した。３３．５ｇの生産物を得た
（収率：６７％）。
【０１１３】分子量 ８１００ 濃色性パラメータ ５．３ Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ １．０３７ Ｇ＋Ａ／Ｔ＋Ｃ ０．８６５ 比旋光度 ＋３２．５° 〔実施例９〕 ［酢酸ナトリウム／酢酸緩衝水溶液中で解重合による新
規物質の製造（製品Ｐ００９７．Ｍ）］５０ｇの高分子
量の核酸類を実施例８と同様の方法で処理したが、解重
合時間については１６時間に減らし、沈殿は２倍の体積
のエタノールの添加によりなされた。この結果、３５．
５ｇの目的物を回収した（収率：７１％）。分析データ
（乾燥重量ベース）は次の通りであった。
規物質の製造（製品Ｐ００９７．Ｍ）］５０ｇの高分子
量の核酸類を実施例８と同様の方法で処理したが、解重
合時間については１６時間に減らし、沈殿は２倍の体積
のエタノールの添加によりなされた。この結果、３５．
５ｇの目的物を回収した（収率：７１％）。分析データ
（乾燥重量ベース）は次の通りであった。
【０１１４】分子量 ６２００ 濃色性パラメータ １．０ Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ １．１６７ Ｇ＋Ａ／Ｔ＋Ｃ ０．８３０ 比旋光度 ＋３０．９° 〔実施例１０〕 ［酢酸ナトリウム／酢酸緩衝水溶液中で解重合によるオ
リゴヌクレオチド類の製造（製品Ｐ０１２３．Ｂ）］１
００ｇの高分子量の核酸類を６６０ｍｌの水中に溶解し
た。溶解は穏やかな加熱により行われた。５３．５ｇの
ＣＨ3 ＣＯＯＮａ３Ｈ2 Ｏと１２７ｍｌの酢酸とをその
順に添加した。最終ｐＨを４．１とし、ポリマ濃度を１
２．７％ｗ／ｖとした（塩モル濃度：０．５Ｍ）。この
結果として得られた溶液を６５℃で１６時間加熱し、そ
の後実施例６と同様にして処理した。７８．６ｇの生産
物を得た。分析データ（乾燥重量ベース）は次の通りで
あった。
リゴヌクレオチド類の製造（製品Ｐ０１２３．Ｂ）］１
００ｇの高分子量の核酸類を６６０ｍｌの水中に溶解し
た。溶解は穏やかな加熱により行われた。５３．５ｇの
ＣＨ3 ＣＯＯＮａ３Ｈ2 Ｏと１２７ｍｌの酢酸とをその
順に添加した。最終ｐＨを４．１とし、ポリマ濃度を１
２．７％ｗ／ｖとした（塩モル濃度：０．５Ｍ）。この
結果として得られた溶液を６５℃で１６時間加熱し、そ
の後実施例６と同様にして処理した。７８．６ｇの生産
物を得た。分析データ（乾燥重量ベース）は次の通りで
あった。
【０１１５】分子量 ９４００ 濃色性パラメータ ６．４ Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ １．１７４ Ｇ＋Ａ／Ｔ＋Ｃ ０．９４１ 比旋光度 ＋３８．９° 〔実施例１１〕 ［酢酸ナトリウム／酢酸緩衝水溶液中で解重合によるオ
リゴヌクレオチド類の製造（製品Ｐ０１２３．Ｈ）］１
００ｇの高分子量デオキシリボ核酸を実施例１０に記載
されたような方法で処理した。解重合時間を２２時間に
固定した。得られた８５．９ｇの目的物の分析データ
（乾燥重量ベース）は次の通りであった。
リゴヌクレオチド類の製造（製品Ｐ０１２３．Ｈ）］１
００ｇの高分子量デオキシリボ核酸を実施例１０に記載
されたような方法で処理した。解重合時間を２２時間に
固定した。得られた８５．９ｇの目的物の分析データ
（乾燥重量ベース）は次の通りであった。
【０１１６】分子量 ７０００ 濃色性パラメータ １．９ Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ １．３０５ Ｇ＋Ａ／Ｔ＋Ｃ ０．８７５ 比旋光度 ＋３５．４° 〔実施例１２〕 ［デオキシリボヌクレアーゼによる高分子量デオキシリ
ボ核酸の酵素的解重合による本発明に従うオリゴヌクレ
オチド類の製造（製品Ｐ０１０２．Ａ，Ｐ０１０２．
Ｂ）］１０ｇの高分子量核酸類を、１０ｍＭのＭｇＣｌ
2 を含む１リットルの０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７）中
に溶解した。最終的な粘性をもち、オパールのような光
沢を放っている溶液に、３．６７ｇの未処理のデオキシ
リボヌクレアーゼを添加した。
ボ核酸の酵素的解重合による本発明に従うオリゴヌクレ
オチド類の製造（製品Ｐ０１０２．Ａ，Ｐ０１０２．
Ｂ）］１０ｇの高分子量核酸類を、１０ｍＭのＭｇＣｌ
2 を含む１リットルの０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７）中
に溶解した。最終的な粘性をもち、オパールのような光
沢を放っている溶液に、３．６７ｇの未処理のデオキシ
リボヌクレアーゼを添加した。
【０１１７】酵素的分解は３７℃で２４時間行われた。
１００００ダルトンの空隙を有する膜上での限外漉過に
よって、最終的に溶液量を出発時の１／５に減らした。
０．８ｌの透過液を集めた。
１００００ダルトンの空隙を有する膜上での限外漉過に
よって、最終的に溶液量を出発時の１／５に減らした。
０．８ｌの透過液を集めた。
【０１１８】残渣としての濃縮物を、１リットルの水に
対する量が一定となるように透析することによって脱塩
し、これに２２ｇの０．８Ｍ酢酸ナトリウム三水和物を
添加し、続いて１．５倍の体積のエタノールを添加して
沈殿物を得た。４．８８ｇの目的物（収率：４９％）を
得た（製品Ｐ０１０２．Ａ）。
対する量が一定となるように透析することによって脱塩
し、これに２２ｇの０．８Ｍ酢酸ナトリウム三水和物を
添加し、続いて１．５倍の体積のエタノールを添加して
沈殿物を得た。４．８８ｇの目的物（収率：４９％）を
得た（製品Ｐ０１０２．Ａ）。
【０１１９】限外漉過および透析を経た透過物を合わ
せ、それを出発時の１／５量に濃縮した。濃縮は、３０
００ダルトンの空隙を有する膜上での限外漉過により行
った。その溶液を、５倍量の水に対する量が一定となる
ように透析することによって脱塩し、凍結乾燥した。
せ、それを出発時の１／５量に濃縮した。濃縮は、３０
００ダルトンの空隙を有する膜上での限外漉過により行
った。その溶液を、５倍量の水に対する量が一定となる
ように透析することによって脱塩し、凍結乾燥した。
【０１２０】２４．７ｇの目的物（収率：２５％）を得
た（製品Ｐ０１０２．Ｂ）。
た（製品Ｐ０１０２．Ｂ）。
【０１２１】〔実施例１３〕 ［デオキシリボヌクレアーゼによる高分子量デオキシリ
ボ核酸の酵素的解重合によるオリゴヌクレオチド類の製
造（製品０１８６／９１２２０Ａ，０１８６／９１２２
０Ｂ）］５．５ｇの高分子量デオキシリボ核酸類のナト
リウム塩を、１０ｍＭのＭｇＣｌ2 を含む１リットルの
０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７）中に溶解した。この後
は、実施例１２の方法に準じた。
ボ核酸の酵素的解重合によるオリゴヌクレオチド類の製
造（製品０１８６／９１２２０Ａ，０１８６／９１２２
０Ｂ）］５．５ｇの高分子量デオキシリボ核酸類のナト
リウム塩を、１０ｍＭのＭｇＣｌ2 を含む１リットルの
０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７）中に溶解した。この後
は、実施例１２の方法に準じた。
【０１２２】残渣溶液から、１．１４ｇの化合物（収
率：２０．７％，製品０１８６／９１２２０．Ａ）を得
た。その化合物の分析特性（乾燥重量ベース）は次の通
りであった。
率：２０．７％，製品０１８６／９１２２０．Ａ）を得
た。その化合物の分析特性（乾燥重量ベース）は次の通
りであった。
【０１２３】分子量 ５０００ 濃色性パラメータ ５．４ Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ １．２６６ Ｇ＋Ａ／Ｔ＋Ｃ １．１０６ 比旋光度 ＋３９．１° その透過液から２．２０ｇの化合物収率：４０％，製品
０１８６／９１２２０．Ｂ）を得た。その化合物の分析
特性（乾燥重量ベース）は次の通りであった。
０１８６／９１２２０．Ｂ）を得た。その化合物の分析
特性（乾燥重量ベース）は次の通りであった。
【０１２４】分子量 ４６００ 濃色性パラメータ ０．８ Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ １．１６８ Ｇ＋Ａ／Ｔ＋Ｃ １．０８７ 比旋光度 ＋３７．４° 〔実施例１４〕 ［高分子量デオキシリボ核酸の酵素的解重合によるオリ
ゴヌクレオチド類の製造（製品０１８６／９１２１
７）］１１ｇの高分子量核酸類を、先の実施例１３に記
載された１．１リットルの緩衝液中に溶解した。消化は
実施例１２の方法に従ってデオキシリボヌクレアーゼを
用いて行われた。溶液の量は、３０００ダルトンの空隙
を有する膜上での限外漉過によって出発時の１／５の量
に減らした。その残渣について、その５倍量の蒸留水に
対する量が一定となるような透析を行って脱塩処理した
後、その溶液に塩添加を行って実施例１２に記載された
ように沈殿した製品Ｐ０１０２．Ａを得た。最終的に、
次のような特性（乾燥重量データ）を有する生産物を
８．２５ｇ得た（収率：７５％）。
ゴヌクレオチド類の製造（製品０１８６／９１２１
７）］１１ｇの高分子量核酸類を、先の実施例１３に記
載された１．１リットルの緩衝液中に溶解した。消化は
実施例１２の方法に従ってデオキシリボヌクレアーゼを
用いて行われた。溶液の量は、３０００ダルトンの空隙
を有する膜上での限外漉過によって出発時の１／５の量
に減らした。その残渣について、その５倍量の蒸留水に
対する量が一定となるような透析を行って脱塩処理した
後、その溶液に塩添加を行って実施例１２に記載された
ように沈殿した製品Ｐ０１０２．Ａを得た。最終的に、
次のような特性（乾燥重量データ）を有する生産物を
８．２５ｇ得た（収率：７５％）。
【０１２５】分子量 ５６００ 濃色性パラメータ ５．８ Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ １．１４０ Ｇ＋Ａ／Ｔ＋Ｃ １．０１０ 比旋光度 ＋４１．５° 〔実施例１５〕 ［製品Ｐ００６７．Ｄ Ｖ．を得るために用いられた方
法］ポリデオキシリボヌクレオチド類の沈殿物から得ら
れた１．６８ ｌの母液を、国際特許出願／８７／０６
２３５号明細書に記載された方法に従う高分子量デオキ
シリボ核酸（ロット番号７３のデフィブロチドの製品）
の解重合によって得た。まだ、母液は理論上は１２５０
ｇのデオキシリボ核酸類、１部（同量）の酢酸緩衝水溶
液および１．５部（１．５倍量）のエタノールを含有し
ている。これにさらに０．５部に相当する１３．６リッ
トルの上記同一の有機溶媒（エタノール）を添加した。
このようにして重さ３６．４ｇの生産物を沈殿させた。
法］ポリデオキシリボヌクレオチド類の沈殿物から得ら
れた１．６８ ｌの母液を、国際特許出願／８７／０６
２３５号明細書に記載された方法に従う高分子量デオキ
シリボ核酸（ロット番号７３のデフィブロチドの製品）
の解重合によって得た。まだ、母液は理論上は１２５０
ｇのデオキシリボ核酸類、１部（同量）の酢酸緩衝水溶
液および１．５部（１．５倍量）のエタノールを含有し
ている。これにさらに０．５部に相当する１３．６リッ
トルの上記同一の有機溶媒（エタノール）を添加した。
このようにして重さ３６．４ｇの生産物を沈殿させた。
【０１２６】〔実施例１６〕 ［製品Ｐ００６７．Ｄ ＩＶ．の単離］ポリデオキシリ
ボヌクレオチド類の沈殿物から得られた１．６８リット
ルの母液を、国際特許出願／８７／０６２３５号明細書
に記載された方法に従う高分子量デオキシリボ核酸（ロ
ット番号７２のデフィブロチドの製品）の解重合によっ
て得た。まだ、母液は理論上は１２５０ｇのデオキシリ
ボ核酸類を含有している。この母液を実施例１５と同様
に処理した。
ボヌクレオチド類の沈殿物から得られた１．６８リット
ルの母液を、国際特許出願／８７／０６２３５号明細書
に記載された方法に従う高分子量デオキシリボ核酸（ロ
ット番号７２のデフィブロチドの製品）の解重合によっ
て得た。まだ、母液は理論上は１２５０ｇのデオキシリ
ボ核酸類を含有している。この母液を実施例１５と同様
に処理した。
【０１２７】次のような特性（乾燥重量ベース）を有す
る３４．８ｇの製品Ｐ００６７．ＤＩＶを得た。
る３４．８ｇの製品Ｐ００６７．ＤＩＶを得た。
【０１２８】分子量 ６１００ 濃色性パラメータ ０ Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ １．５０８ Ｇ＋Ａ／Ｔ＋Ｃ ０．９１７ 比旋光度 ＋３５．９° 〔実施例１７〕 ［非経口用の医薬組成物］ 密閉アンプル オリゴデオキシリボヌクレオチド類 ２５０ｍｇ クエン酸三ナトリウム塩二水和物 ２５ｍｇ メチルパラヒドロキシ安息香酸 ３．１３ｍｇ プロピルパラヒドロキシ安息香酸 ０．６２ｍｇ 蒸留水 ２．５ｍｌ 〔実施例１８〕 ［経口用の医薬組成物］ 硬質ゼラチンカプセル オリゴデオキシリボヌクレオチド類 ３５０ｍｇ 乳糖 ５６．７５ｍｇ コロイド状二酸化シリコン ０．７ｍｇ ステアリン酸マグネシウム ３ｍｇ
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ジュゼッペ プリーノ イタリア 20100 ミラノ ヴィア カラ ッチョロ 92 (72)発明者 ロベルト ポルタ イタリア 22012 コモ チェルノッビオ ヴィア アクゥイレイア １ (72)発明者 アルマンド チェドロ イタリア 21040 ミラノ チスラーゴ ヴィア マッツィーニ 330 (72)発明者 ダニーロ モルトラシオ イタリア 22069 コモ ロヴェラスカ ヴィア レオナルド ダ ヴィンチ ５
Claims (30)
- 【請求項１】 分子量が４０００−１００００であり、
濃色パラメータｈが１０であり、アデニン＋チミン／シ
トシン＋グアニン（Ａ＋Ｔ／Ｃ＋Ｇ）の総モル比が１．
１００−１．４５５であり、プリン塩基／ピリミジン塩
基（Ａ＋Ｇ／Ｃ＋Ｔ）のモル比が０．８００−１．１６
０であり、比旋光度が＋３０°−＋４８°である分析パ
ラメータを有することを特徴とする天然物由来のオリゴ
デオキシリボヌクレオチド類。 - 【請求項２】 請求項１記載のオリゴデオキシリボヌク
レオチド類を得る方法であって、前記オリゴデオキシリ
ボヌクレオチド類化合物は、２０℃でポリデオキシリボ
ヌクレオチドナトリウム塩の０．８Ｍ酢酸ナトリウム水
溶液に、低級アルキルアルコールを添加することにより
順次沈殿させることによって得られることを特徴とする
オリゴデオキシリボヌクレオチド類の製造方法。 - 【請求項３】 請求項２記載の製造方法において、前記
低級アルキルアルコールは、エチルアルコール、プロピ
ルアルコールおよびイソプロピルアルコールからなる群
より選択されるものであることを特徴とするオリゴデオ
キシリボヌクレオチド類の製造方法。 - 【請求項４】 請求項３記載の製造方法において、前記
低級アルキルアルコールは、エチルアルコールであるこ
とを特徴とするオリゴデオキシリボヌクレオチド類の製
造方法。 - 【請求項５】 請求項２記載の製造方法において、前記
ポリデオキシリボヌクレオチドナトリウム塩の量は４％
ｗ／ｖであることを特徴とするオリゴデオキシリボヌク
レオチド類の製造方法。 - 【請求項６】 請求項２または５記載の製造方法におい
て、前記ポリデオキシリボヌクレオチドナトリウム塩
は、１５０００−７５０００ダルトンの範囲内における
分子量を有していることを特徴とするオリゴデオキシリ
ボヌクレオチド類の製造方法。 - 【請求項７】 請求項６記載の製造方法において、前記
ポリデオキシリボヌクレオチドは繊維素分解活性を有す
るヌクレオチドであるデフィブロチド（ｄｅｆｉｂｒｏ
ｔｉｄｅ）であることを特徴とするオリゴデオキシリボ
ヌクレオチド類の製造方法。 - 【請求項８】 請求項２ないし７のいずれかに記載の製
造方法において、次なる工程： ａ．４％ｗ／ｖのポリデオキシリボヌクレオチド類を含
む０．８Ｍ酢酸ナトリウム溶液への０．８倍の体積量の
アルコールの添加工程、 ｂ．有機相／出発時の水相の体積比を概ね１とするため
に、さらに前記アルコール水溶液への多量のアルコール
添加、およびその後の形成された沈殿物の回収による上
清の除去工程、 ｃ．先の工程ｂからの上清と、アルコール／工程ａの出
発時の０．８Ｍ酢酸ナトリウム緩衝水溶液の体積比を２
とするような量のアルコールとの混合工程、およびその
ような分離条件における目的物質の回収工程、 ｄ．先の工程ｂで得られた沈殿物の０．８Ｍ酢酸ナトリ
ウムへの溶解、該溶液へのアルコール／水溶液の体積比
が１である溶液の添加、遠心分離による沈殿物の除去、
残渣のアルコール水溶液とアルコールとの混合であって
アルコール相／水相の体積比が全体で２倍となるまで行
われる混合、および沈殿物の回収の各工程を含むことを
特徴とするオリゴデオキシリボヌクレオチド類の製造方
法。 - 【請求項９】 請求項２ないし７のいずれかに記載の製
造方法において、ポリデオキシリボヌクレオチドの出発
時の溶液に１倍の体積のアルコールを添加することによ
って一つの中間沈殿物を得、その上清にさらに１倍の体
積のアルコールを添加して前記ポリマの沈殿物を得るこ
とを特徴とするオリゴデオキシリボヌクレオチド類の製
造方法。 - 【請求項１０】 請求項１記載の化合物を得る方法であ
って、ｐＨ４．１の酢酸／０．５Ｍ酢酸ナトリウムの緩
衝水溶液中の高分子量のデオキシリボ核酸のナトリウム
塩を熱により解重合することを特徴とするオリゴデオキ
シリボヌクレオチド類の製造方法。 - 【請求項１１】 請求項１０記載の製造方法において、
前記解重合化工程は、前記出発時の核酸の分子量に応じ
て６５℃から７５℃まで変化する温度範囲で少なくとも
６時間行われることを特徴とするオリゴデオキシリボヌ
クレオチド類の製造方法。 - 【請求項１２】 請求項１０または１１に記載の製造方
法において、前記解重合工程は、分子量が４０００−１
００００ダルトンの範囲になるまで行われることを特徴
とするオリゴデオキシリボヌクレオチド類の製造方法。 - 【請求項１３】 請求項１０ないし１２のいずれかに記
載の製造方法において、前記０．５Ｍの酢酸ナトリウム
緩衝液中のデオキシリボ核酸濃度は４％ｗ／ｖまたは約
１２％ｗ／ｖであることを特徴とするオリゴデオキシリ
ボヌクレオチド類の製造方法。 - 【請求項１４】 請求項１３記載の製造方法において、
前記デオキシリボ核酸濃度は約１２％ｗ／ｖであること
を特徴とするオリゴデオキシリボヌクレオチド類の製造
方法。 - 【請求項１５】 請求項１０ないし１４のいずれかに記
載の製造方法において、次なる工程： ａ．高分子量のデオキシリボ核酸の溶解、および必要な
緩衝液モル濃度およびｐＨを与えるための該溶液への酢
酸ナトリウム三水和物と濃（８０％）酢酸の添加工程、 ｂ．先の工程ａで得られた水溶液を６５℃から７５℃ま
で変化する温度範囲で少なくとも６時間加熱する工程、 ｃ．前記加熱処理の終期において温度を３０℃に下げ、
３０％水酸化ナトリウム水溶液で７．８−８．０にｐＨ
調整し、その後８５℃、９０分間再加熱する工程、 ｄ．前記溶液を室温にまで冷却し、濃酢酸で６．５にｐ
Ｈ調整し、水溶液の１．５−２倍の体積比のエタノール
の添加によってオリゴデオキシヌクレオチド類を沈殿さ
せる工程からなることを特徴とするオリゴデオキシリボ
ヌクレオチド類の製造方法。 - 【請求項１６】 請求項１５記載の製造方法において、
６５。Ｃから７５。Ｃまで変化する温度範囲で加熱する
工程は１０時間未満であることを特徴とするオリゴデオ
キシリボヌクレオチド類の製造方法。 - 【請求項１７】 請求項１記載のオリゴデオキシリボヌ
クレオチド類を得る方法であって、デオキシリボヌクレ
アーゼ使用による高分子量のデオキシリボ核酸の酵素的
解重合化の工程と、該溶液を濃縮するための限外漉過の
工程とからなることを特徴とするオリゴデオキシリボヌ
クレオチド類の製造方法。 - 【請求項１８】 請求項１７記載の製造方法において、
デオキシリボヌクレアーゼによる酵素性分解は、高分子
量の核酸を１％ｗ／ｖ含み、１０ｍＭの塩化マグネシウ
ムが存在する０．１Ｍ，ｐＨ７の燐酸緩衝液に対して２
４時間行われることを特徴とするオリゴデオキシリボヌ
クレオチド類の製造方法。 - 【請求項１９】 請求項１７または１８に記載の製造方
法において、前記限外漉過による濃縮が次の工程： ａ．出発時の溶液量の１／５になるまで、１００００個
の空隙を有する膜上で、残渣としての酵素分解からの溶
液に対して行われる限外漉過の工程、 ｂ．前記残渣の溶液を、その５倍量の蒸留水に対する量
が一定となるように透析することによってその溶液を脱
塩する工程、 ｃ．前記工程ａおよびｂから集められ、まとめられた透
過物を、３０００ダルトンの空隙を有する膜上での限外
漉過によって出発時の体積の１／５になるまで濃縮する
工程、 ｄ．工程ａと工程ｃのそれぞれの限外漉過からの残渣由
来の前記濃縮された溶液の溶質を回収する工程に従って
行われることを特徴とするオリゴデオキシリボヌクレオ
チド類の製造方法。 - 【請求項２０】 請求項１７または１８に記載の製造方
法において、前記溶液の濃縮が次の工程： ａ．３０００ダルトンの空隙を有する膜上で前記残渣量
が出発時の１／５になるまで行う限外漉過の工程、 ｂ．前記残渣の溶液を、その５倍量の蒸留水に対する量
が一定となるように透析することによってその溶液を脱
塩する工程、 ｃ．前記残渣から溶質を回収する工程に従ってなされる
ことを特徴とするオリゴデオキシリボヌクレオチド類の
製造方法。 - 【請求項２１】 請求項１９または２０に記載の製造方
法において、前記溶質の回収は、沈殿により、前記溶液
を前のように０．８Ｍの塩濃度になるまで塩添加するこ
とにより、およびその後に１．５倍量のエタノールを添
加することによりなされることを特徴とするオリゴデオ
キシリボヌクレオチド類の製造方法。 - 【請求項２２】 請求項２１記載の製造方法において、
前記添加塩は酢酸ナトリウムであることを特徴とするオ
リゴデオキシリボヌクレオチド類の製造方法。 - 【請求項２３】 請求項２ないし２２のいずれかに記載
の製造方法において、前記生産物は脱水、粉砕および乾
燥によって沈殿物から得られることを特徴とするオリゴ
デオキシリボヌクレオチド類の製造方法。 - 【請求項２４】 薬剤として使用される請求項１記載の
オリゴデオキシリボヌクレオチド類。 - 【請求項２５】 抗虚血活性を有するドラッグの製造の
ための請求項１記載のオリゴヌクレオチド類の用途。 - 【請求項２６】 心臓性虚血症（ｃａｒｄｉａｃ ｉｓ
ｃｈｅｍｉａ）の状態の治療用ドラッグの製造のための
請求項１記載のオリゴデオキシリボヌクレオチド類の用
途。 - 【請求項２７】 非経口および経口投与に適した形態で
製造され、通常の賦形剤および補形剤と共に、請求項１
記載のオリゴデオキシリボヌクレオチド類を活性素とし
て含むことを特徴とする医薬組成物。 - 【請求項２８】 請求項２７記載の医薬組成物におい
て、４０−１６０ｍｇ／ｍｌの範囲で前記オリゴデオキ
シリボヌクレオチド類を含むことを特徴とする医薬組成
物。 - 【請求項２９】 請求項２８記載の医薬組成物におい
て、前記活性素の量は８０−１６０ｍｇ／ｍｌの範囲に
含まれることを特徴とする医薬組成物。 - 【請求項３０】 請求項２７記載の医薬組成物におい
て、単位投与量として２００−１５００ｍｇ／ｍｌの範
囲で前記活性素の量を含むことを特徴とする医薬組成
物。
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