CN114796443A - 一种抗病毒缓释剂及其制备方法与应用 - Google Patents

一种抗病毒缓释剂及其制备方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114796443A
CN114796443A CN202210319112.8A CN202210319112A CN114796443A CN 114796443 A CN114796443 A CN 114796443A CN 202210319112 A CN202210319112 A CN 202210319112A CN 114796443 A CN114796443 A CN 114796443A
Authority
CN
China
Prior art keywords
polypeptide
cyclodextrin
antiviral
parts
release agent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210319112.8A
Other languages
English (en)
Inventor
谷陟欣
黄彪
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chengdu Peide Biomedical Co ltd
Original Assignee
Chengdu Peide Biomedical Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chengdu Peide Biomedical Co ltd filed Critical Chengdu Peide Biomedical Co ltd
Priority to CN202210319112.8A priority Critical patent/CN114796443A/zh
Publication of CN114796443A publication Critical patent/CN114796443A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/28—Steroids, e.g. cholesterol, bile acids or glycyrrhetinic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/40—Cyclodextrins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0043—Nose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses

Abstract

本发明公开了一种抗病毒缓释剂及其制备方法与应用，该缓释剂的原料组成按质量份计包括多肽TG‑28环糊精混合物3～5份、磷脂8～10份、胆固醇4～10份、冻干保护剂12～20份和稳定剂0.03～0.1份，稳定剂可保证脂质体膜的稳定性，提高脂质体的生物黏附性，延长多肽TG‑28在鼻黏膜的滞留时间，同时多肽TG‑28可通过脂质体的磷脂双分子层缓慢释放，从而延长药效时间；冻干保护剂减少了多肽TG‑28药物活性的损失；该缓释剂可在24小时内体外完全释放多肽TG‑28。其制备方法简单，可用于工业生产。本发明的缓释剂是一种冻干粉末，临用前仅需振摇水化，即可重建形成脂质体，可制备鼻腔给药的药物。

Description

一种抗病毒缓释剂及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及药物制剂领域，尤其涉及一种抗病毒缓释剂及其制备方法与应用。
背景技术
新冠病毒(severe actue respiratory syndrome coronavirus，SARS-CoV-2)是具有包膜的正链RNA病毒，属于冠状病毒β属，其感染引起的肺炎被世界卫生组织命名为COVID-19。研究发现其和其它冠状病毒一样，SARS-CoV-2病毒可以通过刺突糖蛋白(spike，S蛋白)与呼吸系统血管紧张素转化酶(ACE2)结合感染细胞，新型冠状病毒表面的S蛋白是病毒识别靶细胞上相应受体的关键蛋白，其与人细胞表面的ACE2有效结合，导致新型冠状病毒肺炎(COVID-19，简称新冠肺炎)和急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，部分患者病情在短期内发生急剧变化，并出现多脏器衰竭甚至死亡。因此，开发一种安全有效、应用方便的非注射给药抗新冠病毒制剂，具有非常重要的临床意义。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的上述不足，提供一种抗病毒缓释剂及其制备方法与应用。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
本发明提供的一种抗病毒缓释剂，所述缓释剂的原料组成按质量份计包括多肽TG-28环糊精混合物3～5份、磷脂8～10份、胆固醇4～10份、冻干保护剂12～20份和稳定剂0.03～0.1份。
进一步的，所述多肽TG-28环糊精混合物由多肽TG-28、环糊精和水组成，所述多肽TG-28、环糊精和水的质量比为(0.005～0.03)：(0.5～2)：1。
进一步的，所述多肽TG-28为乙酰基修饰的多肽TG-28。
进一步的，所述环糊精为羟丙基-β-环糊精、磺丁基-β-环糊、α-环糊精、γ-环糊精、δ-环糊精中的任一种或多种。
进一步的，所述磷脂为大豆卵磷脂和蛋黄卵磷脂中任一种或多种。
进一步的，所述冻干保护剂为葡萄糖、蔗糖、甘露醇和海藻糖中任一种。
进一步的，所述稳定剂为维生素E和维生素C中任一种或两种。
本发明还提供了上述抗病毒缓释剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤S1，按计量比称取多肽TG-28和环糊精，分别用水制备多肽TG-28溶液和环糊精浆体，然后将多肽TG-28溶液加入到环糊精浆体中，超声混合均匀，得到多肽TG-28环糊精混合物；
步骤S2，按计量比称取磷脂、胆固醇和稳定剂置于容器中，混合，用氯仿溶解，旋转蒸除去有机溶剂，形成均匀的薄膜，然后将步骤S1得到的多肽TG-28环糊精混合物和冻干保护剂加入到所述容器中，用PBS缓冲液旋转洗膜，水化后得到多肽TG-28脂质体混悬液；
步骤S3，将步骤S2得到的多肽TG-28脂质体混悬液冷冻干燥得到多肽TG-28脂质体冻干粉，即为抗病毒缓释剂。
进一步的，步骤S1中，所述多肽TG-28溶液的浓度为5～10mg/mL；步骤S3中，冷冻干燥的时间为28～30h。
本发明还提供了一种药物，所述药物包括上述的抗病毒缓释剂，所述药物通过鼻腔给药途径预防和治疗呼吸系统新冠病毒感染。
本发明的有益效果为：
(1)本发明公开的抗病毒缓释剂的原料组成按质量份计包括多肽TG-28环糊精混合物3～5份、磷脂8～10份、胆固醇4～10份、冻干保护剂12～20份和稳定剂0.03～0.1份，稳定剂保证了脂质体膜的稳定性，还提高脂质体的生物黏附性，延长多肽TG-28在鼻黏膜的滞留时间，有利于多肽TG-28经黏膜吸收，同时多肽TG-28可通过脂质体的磷脂双分子层缓慢释放，从而延长其作用时间；冻干保护剂减少了多肽TG-28药物活性的损失保证了磷脂的活性，该缓释剂可用于鼻腔给药，临用前仅需简单振摇水化，即可重建形成脂质体，适用于鼻腔给药制剂。
(2)本发明的抗病药缓释剂的制备方法中采用冷冻干燥和冻干保护剂减少了多肽TG-28药物活性的损失，同时采用薄膜分散法制备脂质体，多肽TG-28的C端封端乙酰基，呈碱性，使得多肽TG-28在制备过程中分布于内水相，保证了内水相中所含多肽TG-28的量多，使得包封率较高。
(3)本发明制备的抗病毒缓释剂克服了传统脂质体制备的缺点，所制备脂质体的粒径可控在150～250nm，分布均匀，包封率高于85％，活性稳定在90％以上。
(4)本发明的抗病毒缓释剂在制备通过鼻腔给药途径预防和治疗呼吸系统新冠病毒感染药物中的应用，以脂质体负载的含多肽TG-28为主，能够特异性地与SARS-CoV-2S蛋白结合，并且能够有效的阻断S蛋白与ACE2蛋白的结合，不与ACE2作用，特异地阻止病毒感染人的细胞，从而能够用于预防和/或治疗新冠病毒感染。而且鼻腔给药可以将药物直接喷雾到病毒繁殖的部位，使用方便。
附图说明
图1为本发明的抗病毒缓释剂的体外释放曲线图。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例并结合附图，对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例。
多肽TG-28，其氨基酸序列为YHTPEKDTSFV，能够特异性地与SARS-CoV-2S蛋白结合，并且能够有效的阻断S蛋白与ACE2蛋白的结合，不与ACE2作用，特异地阻止病毒感染人的细胞，从而能够用于预防和/或治疗新冠病毒感染。多肽TG-28与COVID-19的S蛋白结合常数KD值约为2.69×10-8M，结合慢且结合后基本不解离，而且在假病毒中和实验中证明多肽TG-28成浓度依赖性阻止病毒进入细胞。
实施例1-实施例10中采用的多肽TG-28均通过如下方法制备得到。
多肽TG-28通过Fmoc固相合成法获得，具体过程为：从C端至N端方向进行，首先将C端第一个氨基酸即Fmoc Asn OH激活、偶联到CTC树脂，然后将保护基团Fmoc去保护得到XAsn+CTC树脂；再将C端第二个氨基酸即Fmoc Ser OH激活、偶联；按照这个程序依次从C端接入氨基酸，直至最后一个氨基酸；加入乙酸酐，用DMF洗涤3次，再用甲醇洗涤，置氮气干燥器内过夜干燥；将干燥后的树脂加入含有TIPS的TFA切割液进行切割；过滤后于滤液中加入冰乙醚对多肽TG-28进行沉淀，并置于旋转蒸发仪旋蒸后获得多肽TG-28；加水溶解多肽TG-28后，通过高效液相的C18柱，其流动相A：0.1％TFA+水；流动相B：0.075％TFA+乙腈，分离、纯化，冷冻干燥后，LC-MS/MS鉴定分析，获得C端乙酰化、纯度95％以上的绿色高效肽。
实施例1
一种抗病毒缓释剂，由如下质量份数的原料制备而成：多肽TG-28环糊精混合物3份、大豆卵磷脂8份、胆固醇4份、甘露醇12份、维生素E0.05份，余量为水。
抗病毒缓释剂的制备过程如下：
步骤S1，制备多肽TG-28环糊精混合物的具体过程为：取10mg的多肽TG-28加入到1mL的蒸馏水中，震荡混匀，制得母液，其浓度为10mg/mL。将PBS缓冲液(8g氯化钠(NaCl)，0.2g氯化钾(KCl)，0.27g磷酸二氢钾(KH2PO4)，1.42g磷酸氢二钠(Na2HPO4)，加水1L，盐酸调到pH 7.4)加热至35-45℃，先将羟丙基-β-环糊精和水混合得到环糊精浆体，环糊精和水的最佳比例为1:100，将多肽TG-28母液按1:3加入环糊精浆体，超声混合均匀，得到多肽TG-28环糊精混合物；
采用薄膜分散法制备。称8份大豆卵磷脂、4份胆固醇、0.05份维生素E，置圆底烧瓶中，加入适量氯仿溶解，40℃水浴旋转蒸除有机溶剂，使脂质在器壁上形成一层均匀的薄膜。将3份多肽TG-28环糊精混合物溶入含有12份甘露醇的PBS缓冲液中，旋转洗膜，水化一定时间后，冰水浴探头超声15分钟，即得TG-28脂质体混悬液。混悬液放入-20℃冰箱冷冻24小时一定时间，然后在室温下解冻，反复冻融。
步骤S2，冷冻干燥28h即得多肽TG-28脂质体冻干粉。
测定抗病毒缓释剂平均粒径为(200±35)nm，球状，均匀，包封率93.4％，常温下保存60天，溶液物理化学性质稳定，低温4℃下保存180天，溶液均匀稳定无分层和变质现象。
实施例2
一种抗病毒缓释剂，由如下质量份数的原料制备而成：多肽TG-28环糊精混合物3份、大豆磷脂10份、胆固醇5份、甘露醇14份、稳定剂0.03份，余量为水。
步骤S1，所述制备多肽TG-28环糊精混合物的具体过程为：取10mg的多肽TG-28加入到1mL的蒸馏水中，震荡混匀，制得母液，其浓度为10mg/mL。将PBS缓冲液(8g氯化钠(NaCl)，0.2g氯化钾(KCl)，0.27g磷酸二氢钾(KH2PO4)，1.42g磷酸氢二钠(Na2HPO4)，加水1L，盐酸调到pH 7.4)加热至35-45℃，先将羟丙基-β-环糊精环糊精和水混合得到环糊精浆体，环糊精和水的最佳比例为1:100，将多肽TG-28母液按1:3加入环糊精浆体，超声混合均匀，得到多肽TG-28环糊精混合物；
采用薄膜分散法制备。称10份大豆卵磷脂、5份胆固醇和0.03份维生素C，置圆底烧瓶中，加入适量氯仿溶解，40℃水浴旋转蒸除有机溶剂，使脂质在器壁上形成一层均匀的薄膜。将3份多肽TG-28环糊精混合物溶入含有14份甘露醇的PBS缓冲液中，旋转洗膜，水化一定时间后，冰水浴探头超声15分钟，即得多肽TG-28脂质体混悬液。混悬液放入-20℃冰箱冷冻24小时一定时间，然后在室温下解冻，反复冻融。
步骤S2，冷冻干燥28h即得TG-28脂质体冻干粉。
测定抗病毒缓释剂平均粒径为(205±32)nm，球状，均匀，包封率92.1％，常温下保存60天，溶液物理化学性质稳定，低温4℃下保存180天，溶液均匀稳定无分层和变质现象。
实施例3
一种抗病毒缓释剂，由如下质量份数的原料制备而成：多肽TG-28环糊精混合物4份、大豆卵磷脂9份、胆固醇8份、葡萄糖14份、维生素C0.1份，余量为水。
步骤S1，所述制备多肽TG-28环糊精混合物的具体过程为：取8mg的多肽TG-28加入到1mL的蒸馏水中，震荡混匀，制得母液，其浓度为8mg/mL。将PBS缓冲液(8g氯化钠(NaCl)，0.2g氯化钾(KCl)，0.27g磷酸二氢钾(KH2PO4)，1.42g磷酸氢二钠(Na2HPO4)，加水1L，盐酸调到pH 7.4)加热至35-45℃，先将磺丁基-β-环糊精和水混合得到环糊精浆体，环糊精和水的最佳比例为1:100，将多肽TG-28母液按1:5加入环糊精浆体，超声混合均匀，得到多肽TG-28环糊精混合物；
采用薄膜分散法制备。称9份大豆卵磷脂、8份胆固醇和0.05份维生素C，置圆底烧瓶中，加入适量氯仿溶解，40℃水浴旋转蒸除有机溶剂，使脂质在器壁上形成一层均匀的薄膜。将4份多肽TG-28环糊精混合物溶入含有14份葡萄糖的PBS缓冲液中，旋转洗膜，水化一定时间后，冰水浴探头超声15分钟，即得多肽TG-28脂质体混悬液。混悬液放入-20℃冰箱冷冻24小时一定时间，然后在室温下解冻，反复冻融。
步骤S2，冷冻干燥29h即得多肽TG-28脂质体冻干粉。
测定抗病毒缓释剂平均粒径为(198±26)nm，球状，均匀，包封率91.4％，常温下保存60天，溶液物理化学性质稳定，低温4℃下保存180天，溶液均匀稳定无分层和变质现象。
实施例4
一种抗病毒缓释剂，由如下质量份数的原料制备而成：多肽TG-28环糊精混合物5份、大豆卵磷脂10份、胆固醇8份、甘露醇18份、(维生素C和维生素E)0.1份，余量为水。
步骤S1，所述制备多肽TG-28环糊精混合物的具体过程为：取10mg的多肽TG-28加入到1mL的蒸馏水中，震荡混匀，制得母液，其浓度为10mg/mL。将PBS缓冲液(8g氯化钠(NaCl)，0.2g氯化钾(KCl)，0.27g磷酸二氢钾(KH2PO4)，1.42g磷酸氢二钠(Na2HPO4)，加水1L，盐酸调到pH 7.4)加热至35-45℃，先将磺丁基-β-环糊精和水混合得到环糊精浆体，环糊精和水的最佳比例为1:100，将多肽TG-28母液按1:3加入环糊精浆体，超声混合均匀，得到多肽TG-28环糊精混合物；
采用薄膜分散法制备。称10份大豆卵磷脂、8份胆固醇和0.1份(维生素C和维生素E)，置圆底烧瓶中，加入适量氯仿溶解，40℃水浴旋转蒸除有机溶剂，使脂质在器壁上形成一层均匀的薄膜。将5份多肽TG-28环糊精混合物溶入含有18份甘露醇的PBS缓冲液中，旋转洗膜，水化一定时间后，冰水浴探头超声15分钟，即得多肽TG-28脂质体混悬液。混悬液放入-20℃冰箱冷冻24小时一定时间，然后在室温下解冻，反复冻融。
步骤S2，冷冻干燥30h即得多肽TG-28脂质体冻干粉。
测定抗病毒缓释剂平均粒径为(200±45)nm，球状，均匀，包封率90％，常温下保存60天，溶液物理化学性质稳定，低温4℃下保存180天，溶液均匀稳定无分层和变质现象。
实施例5
一种抗病毒缓释剂，由如下质量份数的原料制备而成：多肽TG-28环糊精混合物5份、大豆卵磷脂10份、胆固醇6份、海藻糖20份、(维生素C和维生素E)0.08份，余量为水。
步骤S1，所述制备多肽TG-28环糊精混合物的具体过程为：取10mg的多肽TG-28加入到1mL的蒸馏水中，震荡混匀，制得母液，其浓度为10mg/mL。将PBS缓冲液(8g氯化钠(NaCl)，0.2g氯化钾(KCl)，0.27g磷酸二氢钾(KH2PO4)，1.42g磷酸氢二钠(Na2HPO4)，加水1L，盐酸调到pH 7.4)加热至35-45℃，先将α-环糊精和水混合得到环糊精浆体，环糊精和水的最佳比例为1:100，将多肽TG-28母液按1:3加入环糊精浆体，超声混合均匀，得到多肽TG-28环糊精混合物；
采用薄膜分散法制备。称10份大豆卵磷脂、6份胆固醇和0.08份(维生素C和维生素E)，置圆底烧瓶中，加入适量氯仿溶解，40℃水浴旋转蒸除有机溶剂，使脂质在器壁上形成一层均匀的薄膜。将5份多肽TG-28环糊精混合物溶入含有20份海藻糖的PBS缓冲液中，旋转洗膜，水化一定时间后，冰水浴探头超声15分钟，即得多肽TG-28脂质体混悬液。混悬液放入-20℃冰箱冷冻24小时一定时间，然后在室温下解冻，反复冻融。
步骤S2，冷冻干燥28h即得多肽TG-28脂质体冻干粉。
测定抗病毒缓释剂平均粒径为(225±30)nm，球状，均匀，包封率95.4％，常温下保存60天，溶液物理化学性质稳定，低温4℃下保存180天，溶液均匀稳定无分层和变质现象。
实施例6
一种抗病毒缓释剂，由如下质量份数的原料制备而成：多肽TG-28环糊精混合物5份、蛋黄卵磷脂10份、胆固醇6份、海藻糖20份、(维生素C和维生素E)0.08份，余量为水。
步骤S1，所述制备多肽TG-28环糊精混合物的具体过程为：取5mg的多肽TG-28加入到1mL的蒸馏水中，震荡混匀，制得母液，其浓度为5mg/mL。将PBS缓冲液(8g氯化钠(NaCl)，0.2g氯化钾(KCl)，0.27g磷酸二氢钾(KH2PO4)，1.42g磷酸氢二钠(Na2HPO4)，加水1L，盐酸调到pH 7.4)加热至35-45℃，先将α-环糊精和水混合得到环糊精浆体，环糊精和水的最佳比例为1:100，将多肽TG-28母液按1:3加入环糊精浆体，超声混合均匀，得到多肽TG-28环糊精混合物；
采用薄膜分散法制备。称10份蛋黄卵磷脂、6份胆固醇和0.08份(维生素C和维生素E)，置圆底烧瓶中，加入适量氯仿溶解，40℃水浴旋转蒸除有机溶剂，使脂质在器壁上形成一层均匀的薄膜。将5份多肽TG-28环糊精混合物溶入含有20份海藻糖的PBS缓冲液中，旋转洗膜，水化一定时间后，冰水浴探头超声15分钟，即得多肽TG-28脂质体混悬液。混悬液放入-20℃冰箱冷冻24小时一定时间，然后在室温下解冻，反复冻融。
步骤S2，冷冻干燥28h即得TG-28脂质体冻干粉。
测定抗病毒缓释剂平均粒径为(230±25)nm，球状，均匀，包封率95.5％，常温下保存60天，溶液物理化学性质稳定，低温4℃下保存180天，溶液均匀稳定无分层和变质现象。
实施例7
一种抗病毒缓释剂，由如下质量份数的原料制备而成：多肽TG-28环糊精混合物4份、大豆卵磷脂9份、胆固醇10份、蔗糖16份、维生素E0.01份，余量为水。
步骤S1，所述制备多肽TG-28环糊精混合物的具体过程为：取10mg的多肽TG-28加入到1mL的蒸馏水中，震荡混匀，制得母液，其浓度为10mg/mL。将PBS缓冲液(8g氯化钠(NaCl)，0.2g氯化钾(KCl)，0.27g磷酸二氢钾(KH2PO4)，1.42g磷酸氢二钠(Na2HPO4)，加水1L，盐酸调到pH 7.4)加热至35-45℃，先将γ-环糊精和水混合得到环糊精浆体，环糊精和水的最佳比例为1:100，将多肽TG-28母液按1:3加入环糊精浆体，超声混合均匀，得到多肽TG-28环糊精混合物；
采用薄膜分散法制备。称9份大豆卵磷脂、10份胆固醇和0.1份维生素E，置圆底烧瓶中，加入适量氯仿溶解，40℃水浴旋转蒸除有机溶剂，使脂质在器壁上形成一层均匀的薄膜。将4份多肽TG-28环糊精混合物溶入含有16份蔗糖的PBS缓冲液中，旋转洗膜，水化一定时间后，冰水浴探头超声15分钟，即得多肽TG-28脂质体混悬液。混悬液放入-20℃冰箱冷冻24小时一定时间，然后在室温下解冻，反复冻融。
步骤S2，冷冻干燥28h即得TG-28脂质体冻干粉。
测定抗病毒缓释剂平均粒径为(160±31)nm，球状，均匀，包封率89.2％，常温下保存60天，溶液物理化学性质稳定，低温4℃下保存180天，溶液均匀稳定无分层和变质现象。
实施例8
一种抗病毒缓释剂，由如下质量份数的原料制备而成：多肽TG-28环糊精混合物3份、大豆卵磷脂9份、胆固醇10份、海藻糖16份、维生素E0.1份，余量为水。
步骤S1，所述制备多肽TG-28环糊精混合物的具体过程为：取10mg的多肽TG-28加入到1mL的蒸馏水中，震荡混匀，制得母液，其浓度为10mg/mL。将PBS缓冲液(8g氯化钠(NaCl)，0.2g氯化钾(KCl)，0.27g磷酸二氢钾(KH2PO4)，1.42g磷酸氢二钠(Na2HPO4)，加水1L，盐酸调到pH 7.4)加热至35-45℃，先将γ-环糊精和水混合得到环糊精浆体，环糊精和水的最佳比例为1:100，将多肽TG-28母液按1:3加入环糊精浆体，超声混合均匀，得到多肽TG-28环糊精混合物；
采用薄膜分散法制备。称9份大豆卵磷脂、10份胆固醇和0.1份维生素E，置圆底烧瓶中，加入适量氯仿溶解，40℃水浴旋转蒸除有机溶剂，使脂质在器壁上形成一层均匀的薄膜。将3份多肽TG-28环糊精混合物溶入含有16份海藻糖的PBS缓冲液中，旋转洗膜，水化一定时间后，冰水浴探头超声15分钟，即得多肽TG-28脂质体混悬液。混悬液放入-20℃冰箱冷冻24小时一定时间，然后在室温下解冻，反复冻融。
步骤S2，冷冻干燥30h即得TG-28脂质体冻干粉。
测定抗病毒缓释剂平均粒径为(165±10)nm，球状，均匀，包封率85.2％，常温下保存60天，溶液物理化学性质稳定，低温4℃下保存180天，溶液均匀稳定无分层和变质现象。
实施例9
一种抗病毒缓释剂，由如下质量份数的原料制备而成：多肽TG-28环糊精混合物3份、大豆卵磷脂8份、胆固醇4份、海藻糖12份、维生素C0.03份，余量为水。
步骤S1，所述制备多肽TG-28环糊精混合物的具体过程为：取10mg的多肽TG-28加入到1mL的蒸馏水中，震荡混匀，制得母液，其浓度为10mg/mL。将PBS缓冲液(8g氯化钠(NaCl)，0.2g氯化钾(KCl)，0.27g磷酸二氢钾(KH2PO4)，1.42g磷酸氢二钠(Na2HPO4)，加水1L，盐酸调到pH 7.4)加热至35-45℃，先将δ-环糊精和水混合得到环糊精浆体，环糊精和水的最佳比例为1:100，将多肽TG-28母液按1:3加入环糊精浆体，超声混合均匀，得到多肽TG-28环糊精混合物；
采用薄膜分散法制备。称8份大豆卵磷脂、4份胆固醇和0.03份维生素C，置圆底烧瓶中，加入适量氯仿溶解，40℃水浴旋转蒸除有机溶剂，使脂质在器壁上形成一层均匀的薄膜。将3份多肽TG-28环糊精混合物溶入含有12份海藻糖的PBS缓冲液中，旋转洗膜，水化一定时间后，冰水浴探头超声15分钟，即得多肽TG-28脂质体混悬液。混悬液放入-20℃冰箱冷冻24小时一定时间，然后在室温下解冻，反复冻融。
步骤S2，冷冻干燥28h即得TG-28脂质体冻干粉。
测定抗病毒缓释剂平均粒径为(250±19)nm，球状，均匀，包封率95.1％，常温下保存60天，溶液物理化学性质稳定，低温4℃下保存180天，溶液均匀稳定无分层和变质现象。
实施例10
一种抗病毒缓释剂，由如下质量份数的原料制备而成：多肽TG-28环糊精混合物5份、大豆卵磷脂10份、胆固醇6份、(海藻糖和甘露醇)16份、(维生素C和维生素E)0.08份，余量为水。
步骤S1，所述制备多肽TG-28环糊精混合物的具体过程为：取10mg的多肽TG-28加入到1mL的蒸馏水中，震荡混匀，制得母液，其浓度为10mg/mL。将PBS缓冲液(8g氯化钠(NaCl)，0.2g氯化钾(KCl)，0.27g磷酸二氢钾(KH2PO4)，1.42g磷酸氢二钠(Na2HPO4)，加水1L，盐酸调到pH 7.4)加热至35-45℃，先将δ-环糊精和水混合得到环糊精浆体，环糊精和水的最佳比例为1:100，将多肽TG-28母液按1:3加入环糊精浆体，超声混合均匀，得到多肽TG-28环糊精混合物；
采用薄膜分散法制备。称10份大豆卵磷脂、6份胆固醇和0.08份(维生素C和维生素E)，置圆底烧瓶中，加入适量氯仿溶解，40℃水浴旋转蒸除有机溶剂，使脂质在器壁上形成一层均匀的薄膜。将5份多肽TG-28环糊精混合物溶入含有16份(海藻糖和甘露醇)的PBS缓冲液中，旋转洗膜，水化一定时间后，冰水浴探头超声15分钟，即得多肽TG-28脂质体混悬液。混悬液放入-20℃冰箱冷冻24小时一定时间，然后在室温下解冻，反复冻融。
步骤S2，冷冻干燥28h即得TG-28脂质体冻干粉。
测定抗病毒缓释剂平均粒径为(250±45)nm，球状，均匀，包封率94.4％，常温下保存60天，溶液物理化学性质稳定，低温4℃下保存180天，溶液均匀稳定无分层和变质现象。
为了更好的阐述本发明的上述抗病毒缓释剂的抗新冠病毒效果，进行了如下试验研究：
(1)对实施例1-实施例10制备得到的抗病毒缓释剂进行抑制新冠病毒假病毒侵染细胞试验：
将非洲绿猴肾细胞(Vero-E6)均匀铺至孔板中，待细胞生长至80％开始进行实验，细胞培养使用常规完全培养基。将相同浓度的新型冠状病毒与缓释剂孵育10分钟，将孵育后病毒假入孔中，随后正常培养48小时，通过qPCR检测病毒浓度。随后继续培养，3小时、6小时、9小时再加入新型冠状病毒，通过qPCR检测病毒浓度。加入病毒进入细胞存活越少，说明药物效果越好。
其中阳性对照为20μM多肽TG-28、阴性对照为相同体积生理盐水。
实验结果本发明能有效起到保护作用，防范新冠病毒假病毒侵染。具体结果如下表1所示：
表1
Figure BDA0003570965530000131
Figure BDA0003570965530000141
(2)对本发明制备得到的抗病毒缓释剂进行体外释放试验：
取实施例1-实施例10所制备的抗病药缓释剂，加水溶解，制成5mL溶液，置透析袋中，放在装有50mL 0.2M的pH7.4磷酸盐缓冲液锥形瓶中，温度控制在(37±0.5)℃，以浆板法测定体外性能，转速为100r/min，设计取样时间为2、4、6、8、12、16、20、24h。每次取样5mL，同时补充同体积的PBS。释放液经0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液20μL进液相色谱仪，测定峰面积，代入标准曲线计算浓度，得出每阶段释药量。其色谱条件为：色谱柱C18，其流动相A：0.1％TFA+水；流动相B：0.075％TFA+乙腈，流速1.0mL/min，检测波长210nm；洗脱程序为：1-2min，流动相A；2-20min，流动相B浓度为0-40；20-25mi，流动相B浓度为40-100。结果如图1所示，本申请的抗病毒缓释剂体外长效完全释放多肽TG-28。
以上未涉及之处，适用于现有技术。
虽然已经通过示例对本发明的一些特定实施例进行了详细说明，但是本领域的技术人员应该理解，以上示例仅是为了进行说明，而不是为了限制本发明的范围，本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例来做出各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的方向或者超越所附权利要求书所定义的范围。本领域的技术人员应该理解，凡是依据本发明的技术实质对以上实施方式所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种抗病毒缓释剂，其特征在于，所述缓释剂的原料组成按质量份计包括多肽TG-28环糊精混合物3～5份、磷脂8～10份、胆固醇4～10份、冻干保护剂12～20份和稳定剂0.03～0.1份。
2.如权利要求1所述的抗病毒缓释剂，其特征在于，所述多肽TG-28环糊精混合物由多肽TG-28、环糊精和水组成，所述多肽TG-28、环糊精和水的质量比为(0.005～0.03)：(0.5～2)：1。
3.如权利要求2所述的抗病毒缓释剂，其特征在于，所述多肽TG-28为乙酰基修饰的多肽TG-28。
4.如权利要求2所述的抗病毒缓释剂，其特征在于，所述环糊精为羟丙基-β-环糊精、磺丁基-β-环糊精、α-环糊精、γ-环糊精、δ-环糊精中的任一种或多种。
5.如权利要求1所述的抗病毒缓释剂，其特征在于，所述磷脂为大豆卵磷脂和蛋黄卵磷脂中的任一种或多种。
6.如权利要求1所述的抗病毒缓释剂，其特征在于，所述冻干保护剂为葡萄糖、蔗糖、甘露醇和海藻糖中任一种或多种。
7.如权利要求1所述的抗病毒缓释剂，其特征在于，所述稳定剂为维生素E和维生素C中任一种或两种。
8.一种抗病毒缓释剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、按计量比称取多肽TG-28和环糊精，分别用水制备多肽TG-28溶液和环糊精浆体，然后将多肽TG-28溶液加入到环糊精浆体中，超声混合均匀，得到多肽TG-28环糊精混合物；
S2、按计量比称取磷脂、胆固醇和稳定剂置于容器中，混合，用氯仿溶解，旋转蒸除去有机溶剂，形成均匀的薄膜，然后将步骤S1得到的多肽TG-28环糊精混合物和冻干保护剂加入到所述容器中，用PBS缓冲液旋转洗膜，水化后得到多肽TG-28脂质体混悬液；
S3、将步骤S2得到的多肽TG-28脂质体混悬液冷冻干燥得到多肽TG-28脂质体冻干粉，即为抗病毒缓释剂。
9.如权利要求8所述的抗病毒缓释剂的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述多肽TG-28溶液的浓度为5～10mg/mL；步骤S3中，冷冻干燥的时间为28～30h。
10.一种药物，其特征在于，所述药物包括如权利要求1所述的抗病毒缓释剂，所述药物通过鼻腔给药途径预防和治疗呼吸系统新冠病毒感染。
CN202210319112.8A 2022-03-29 2022-03-29 一种抗病毒缓释剂及其制备方法与应用 Pending CN114796443A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210319112.8A CN114796443A (zh) 2022-03-29 2022-03-29 一种抗病毒缓释剂及其制备方法与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210319112.8A CN114796443A (zh) 2022-03-29 2022-03-29 一种抗病毒缓释剂及其制备方法与应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114796443A true CN114796443A (zh) 2022-07-29

Family

ID=82531438

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210319112.8A Pending CN114796443A (zh) 2022-03-29 2022-03-29 一种抗病毒缓释剂及其制备方法与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114796443A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TIAN et al. Formulation and biological activity of antineoplastic proteoglycans derived from Mycobacterium vaccae in chitosan nanoparticles
FR2565490A1 (fr) Solide sec hydrosoluble renfermant une substance proteinique bioactive
JPH01500116A (ja) インシユリン製剤
FR2681326A1 (fr) Nouveaux derives peptidiques, leur preparation et leur utilisation comme medicaments.
CN111249449A (zh) 一种细胞外囊泡—白介素-10纳米靶向药物及其制备方法和应用
KR102316762B1 (ko) 건조 분말 펩티드 약제
CN101020715B (zh) 鹿茸神经生长因子(deer ngf)提取及其制备方法
JPH05247083A (ja) 抗虚血活性を有する新規なオリゴデオキシリボヌクレオチド類およびその製造方法
Kwon et al. Insulin microcrystal suspension as a long-acting formulation for pulmonary delivery
CN110540586B (zh) 一种皮肤创伤修复肽rl-rf10及其提纯方法与应用
CN106178092B (zh) 制备高度浓缩的纤维蛋白原溶液的方法以及通过使用其制备纤维蛋白封闭剂的方法
CN106832000B (zh) 一种可在肿瘤细胞溶酶体内发生形貌转换的多肽脂质体
CA2375640A1 (en) Dry powder compositions
WO2018196819A1 (zh) 一种包裹有难溶于水药物的蛋白质颗粒及其制备方法
CN114796443A (zh) 一种抗病毒缓释剂及其制备方法与应用
CN111529695A (zh) 一种环糊精可溶性ace2及其制备方法和应用
JPH04279530A (ja) 成長因子を投与するためのドラッグデリバリーシステム
CN113616620B (zh) 安罗替尼白蛋白纳米颗粒及其制备方法和用途、及包含其的制剂
WO2012081531A1 (ja) 疾病抑制剤
CN112933037B (zh) 一种抗增生性瘢痕外用药物制剂
CN115177742A (zh) 一种载药脑靶向外泌体的制备方法及其应用
CN111569143B (zh) 一种蛇毒凝血酶原激活物及基于蛇毒凝血酶原激活物的快速止血材料
CN110464835B (zh) 一种胰岛素柔性微粒及其制剂
CN102988402A (zh) 一种含有环磷腺苷化合物药物组合物及其制备方法
JP7046990B2 (ja) 医薬的特性が改善されたプロドラッグペプチド

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination