JPH0284198A - 光学活性なα―置換有機酸の製造方法 - Google Patents

光学活性なα―置換有機酸の製造方法

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JPH0284198A
JPH0284198A JP1160653A JP16065389A JPH0284198A JP H0284198 A JPH0284198 A JP H0284198A JP 1160653 A JP1160653 A JP 1160653A JP 16065389 A JP16065389 A JP 16065389A JP H0284198 A JPH0284198 A JP H0284198A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、光学活性なα−置換有機酸の製造方法および
それに用いる微生物ならびに酵素に関する。
本発明の方法で得られる光学活性なα−置換有機酸は、
解熱消炎鎮痛剤等の医薬品、抗生物質およびβ−ブロン
カー等の医薬原料、除草剤および殺虫剤等の農薬および
その原料、超誘電特性を有する化合物の原料、さらには
光学分割剤として有用な化合物である。
（従来の技術） ラセミ体のα−置置換上トリルたはα−置換アミドから
光学活性なα−置換有機酸を、微生物またはその調製物
の生化学的作用によって製造する方法およびそれに用い
る微生物は、アミノニトリルまたはアミノ酸アミドから
の光学活性なアミノ酸の製造についてはかなり知られて
いる（特表昭６３−５００００４、特開昭６０−１８８
３５５等〕 しかし、アミノ酸以外の光学活性なα−置換有機酸を、
対応するラセミ体のニトリルまたはアミドから生化学的
な作用によって製造する方法は、はとんど知られておら
ず、僅かに、α−オキシ酸テアミド化合物よび特定のヒ
ドロキシニトリルから光学活性なα−オキシ酸を製造す
る方法が知られているのみで、それに用いる微生物も僅
かに３種、すなわち、アエロモナス属に属する菌、モラ
キセラ属に属する菌およびトルロプシス属に属する酵母
が知られているのみである（特開昭６１−８８８９４お
よび特公昭５４−１４６６８〕（発明が解決しようとす
る課８） 上述の状況を鑑みて、本発明の課題は、医薬、農薬およ
び各種の工業用原料として有用な各種の光学活性なα−
置換有機酸を、対応するラセミ体のα−ＩＺｔＡ−トリ
ルまたはα−置換アミドから、微生物またはその調製物
の作用により製造する方法およびそれに用いる微生物を
提供することにある。
（課題を解決するための手段） 本発明者らは、上記の課題を解決するため、特異的に光
学活性なα−置換有機酸を生成することのできる微生物
の探索を進めた結果、弐（１）で示されるラセミ体のα
−置置換上トリルたはラセミ体のα−置換アミドを弐（
ＩＩ）で示される光学活性α−置換有機酸に変換する能
力を持つ微生物を見出した。さらに、これら微生物より
、生成される光学活性α−置換有機酸をラセミ化したり
、分解、資化することの少ないものを見出し、本発明を
完成するに至った。
すなわち、本発明は、下記−触式（＋）で示されるラセ
ミ体のα−置置換上トリルたはα−置換アミドに、アル
カリゲネス属、シュウドモナス属、ロドシュウドモナス
属、コリネバクテリウム属、アシネトバクタ−属、バチ
ルス属、マイコバクテリウム属、ロドコッカス属または
キャンディダ属に属する微生物またはその調製物を作用
させ、下記一般式（ｎ）で示される光学活性なα−置換
有機酸を取得することを特徴とする光学活性なα−置換
有機酸の製造方法を提供するものである。
一〇 ｚ Ｒ１−”Ｃ−Ｃ０ＯＨ（ＩＩ） 上記（１）式において、Ｘはニトリル基またはアミド基
である。また、上記（１）および（ＩＩ）式において、
ＲｏおよびＲ２は、それぞれ任意に、ハロゲン、ヒドロ
キシ基、アルキル基、シクロアルキル基、アルコキシ基
、アリール基、アリールオキシ基、複素環基を表す。た
だし、Ｒ８とＲ２が同一の基であることはない。
さらに詳しく説明すると、（１）式、（ＩＩ）式中のＲ
８とＲ２で表すハロゲンとしては、例えば、フッ素、塩
素、ヨウ素、臭素が挙げられる。アルキル基、アルコキ
シ基としては、炭素数１〜８のものが好ましく、炭素数
１〜３のものが特に好ましい。シクロアルキル基として
は、炭素数３〜８のものが好ましく。炭素数３〜６のも
のが特に望ましい。アリール基、アリールオキシ基とし
ては、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェニルオキ
シ基、ナフチルオキシ基等が挙げられる。複素環基とし
ては、異種原子として、窒素、酸素、硫黄の少なくとも
１種を１個から３個含み、３〜１５の炭素から構成され
る複素環からなるものが好ましい。このような複素環と
しては、例えば、チオフェン、インドール、 等が挙げられる。
上述のアルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、
アリール基、アリールオキシ基、複素環基の炭素および
窒素に結合している水素は、各種の置換基によって置換
されていてもよい。かかる置換基としては、例えば、フ
ッ素、塩素、ヨウ素、臭素等のハロゲン、ヒドロキシ基
、チオール基、ニトロ基、アミノ基、フェニル基やナフ
チル基のようなアリール基、フェニルオキシ基やナフチ
ルオキシ基のようなアリールオキシ基、異種原子として
窒素、酸素、硫黄の少なくとも１種を１個から３個含み
、３〜１５の炭素から構成される複素環基および炭素数
が１〜８のアルキル基、炭素数が１〜８のアルコキシ基
、炭素数１〜１０のアシル基等が挙げられる。これらの
置換基中の炭素および窒素に結合した水素が、さらに上
述の置換基で置換されていてもよい。
Ｒ，、Ｒ，のどちらか一方が立体障害の大きな基、例え
ば、ハロゲン、アリール基、アリールオキシ基、複素環
基であるか、これらの基を置換基として含有する基の場
合、光学純度の極めて高い生成物を取得できるので好ま
しい。
本発明の製造法により得ることのできる弐（ＩＩ）の化
合物の代表例を表１に示す。
表 本発明における原料化合物である弐（１）で示される化
合物は、公知の方法で製造することができる。〔例えば
、特開昭５１−７０７４４、特開昭５１−１２２０３６
、米国特許４１８６２７０．５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、　８
　　、６４５　（１９８６）　）本発明に用いられる微
生物としては、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅ
ｓ）属、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属
、ロドシュードモナス　（Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ）属、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃ
　ｔｅｒｉｕｍ）属、アシネトバクタ−（Ａｃｉｎｅｔ
ｏｂａｃｔｅｒ）属、ノ＼チルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）
属、マイコバクテリウム（ＭＹｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
）属、ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属、キ
ャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する微生物の中か
ら選ばれた微生物である。
具体的には、以下の微生物を使用することができる。
アルカリゲネス　フェカリス（八！ｃａｌｉｇｅｎｅｓ
　ｆａｅｃａｌｉｓ）　ＡＴＣＣ８７５０、シュードモ
ナスフルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｆｌ
ｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、ＮＲＲｌ、、　Ｂ−９８１（Ｉ
ＦＯ３９２５）、シュードモナス　フルオレンセンス（
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）　
Ｉ　Ｆ　Ｏ３０８１、（ＩＦＯとはｌＮ５Ｔ［ＴＵＴＥ
　ＦＯＲＦＥＲＭＥＮＴＡＴＩＯＮ、　０５ＡＫ八を示
す。）ロドシュードモナス　スフェロイデス（Ｒｈｏｄ
ｏ　ｐｓｅｕｄ。
ｍｏｎａｓ　５ｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ）　Ａ　Ｔ　ＣＣ
ｌ　１１６７、コリネバクテリウム　ニトリロフィラス
（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｎ１ｔｒｉｌｏｐ
ｈｉｌｕｓ）ＡＴＣＣ２１４１９、コリネバクテリウム
　エスピー（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｐ、）
ＫＯ−２４（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−２３５３）、アシネト
バクター　エスピー（八ｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｓ
ｐ。
）ＡＫ　　２２６（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−２４５１）、バ
チルス　サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂＬｉ
ｌｉｓ）　ＣＮ５　（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−２３５４）、
マイコバクテリウム　エスピー（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ　ｓｐ、）　Ａ　Ｃ７７７（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−
２３５２）、ロドコッカス　エスピー（Ｒｈｏｄｏｃｏ
ｃｃｕｓ　ｓｐ、）Ａ　Ｋ　３２　　（Ｆ　ＥＲＭ　　
ＢＰ−１０４６）、シュードモナス　ベシキュラリス（
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｖｅｓｉｃｕｌａｒｉｓ）　
Ａ　Ｔ　ＣＣ１１４２６、キャンディダ　トロピカリス
（Ｃａｎｄｉｄａ　ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）　ＡＴＣＣ
２０３１１゜ロドコッカス　エスピー　ＡＫ　　３２は
、上記の番号で微生物工業技術研究所（Ｆｅｒｍｅｎｔ
ａｔｉｏｎ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ）
に国際寄託されており、菌学的性質はヨーロッパ特許　
２０４５５５　（１９８６）に記載されている。
コリネバクテリウム　エスピー　ＫＯ−２−４、バチル
ス　サブティリス　ＣＮ　　５、マイコバクテリウム　
エスピー　ＡＣ７７７は、新たに土壌中よりニトリル資
化菌として分離したもので、いずれも上記の番号で微生
物工業技術研究所に国際寄託されている。
アシネトバクタ−エスピー　ＡＫ　　２２６は、アクリ
ル酸またはメククリル酸のような不飽和有機酸を対応す
るニトリル化合物より生成するためにすでに分離された
ものである（特公昭６３−２５９６号公報〕本菌株は、
上記の番号で微生物工業技術研究所に国際寄託されてい
る。
コリネバクテリウム　エスピー　ＫＯ−２−４、バチル
ス　サブティリス　ＣＮ　　５、マイコバクテリウム　
エスピー　ＡＣ７７７、アシネトバクタ−エスピー　Ａ
Ｋ　　２２６の菌学的性質は、以下に示すとおりである
。
以上の菌学的性質をパージ−の細菌分類書（Ｂｅｒｇｙ
’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖ
ｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ。
ｇｙ　　第８版（１９７４）　）　、および「マニュア
ル・オブ・クリニカル・マイクロバイオロジー（Ｍａｎ
ｕａｌｏｆ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏ
ｇｙ　）第４版（１９８５年））に基づいて分類した。
ＫＯ−２−４株は、好気性、ダラム陽性、カタラーゼ陽
性の胞子を生じない桿菌であり、鞭毛を着生せず、運動
性はない。さらに、発育の初期は桿状でスナツピングを
伴った発育をし、後に短稈状に断裂するといった多形性
を有するので、コリネ型に属することは明らかである。
また、セルロース分解能を持たないこと、抗酸性でない
こと、絶対好気性でないこと、ＯＦテストが−であるこ
とから、コリネバクテリウム属に属する細菌と同定した
。
ＣＮ　　５株は、主にダラム陽性の桿菌であり、胞子を
形成する。また、鞭毛を着生し、運動性を有することか
ら、Ｂａｃｉ　ｌ　１ａｃｅａｅ科に属することは明ら
かである。さらに、ＣＮ　　５株は好気性であり、カタ
ラーゼ陽性であることより、バチルス属である。さらに
、グルコースよりガスを生成しないこと、デンプンを加
水分解すること、ＶＰテストで陽性であること、硝酸塩
還元能があること、５０°Ｃで生育すること、７％Ｎａ
Ｃｌ含有肉汁で生育すること、コーザークエン酸培地で
クエン酸を利用できることより、本菌はＢａｃｉｌｌｕ
ｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓと同定した。
ＡＣ７７７株は、好気性のグラム陽性桿菌であり、さら
に、断裂して短稈状になる。また、胞子を形成しないの
で、コリネ型細菌に属する。さらに、ＯＦテストが○で
あること、グルコースより酸を生成すること、オキシダ
ーゼ陽性であることから、マイコバクテリウム属と同定
した。
本発明における反応方法は、微生物またはその調製物と
前記式（１）で示されるラセミ体のニトリルやアミドを
接触することにより行われる。微生物またはその調製物
とは、具体的には、前記微生物を培養した培養物、そこ
から集めた菌体または菌体処理物（例えば、菌体の破砕
物または菌体より分離抽出した酵素）、さらには、菌体
または菌体処理物を適当な方法により担体に固定化した
ものを示す。
本発明で使用される微生物の培養は、公知の方法に準じ
て行うことができる。使用する培地は、一般微生物の栄
養源として公知のものが利用でき、グルコース、グリセ
リン、エタノール、シェークロース、デキストリン、酢
酸等の炭素源、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、
アンモニア等の窒素源、酵母エキス、麦芽エキス、ペプ
トン、肉エキス等の有機栄養源、リン酸、マグネシウム
、カリウム、鉄、マンガン等の無機栄養源を適宜組み合
わせて使用できる。また、微生物の本発明における反応
活性を促進する物質として、イソブチロニトリル等のシ
アノ化合物を添加してもよい。
培地のｐＨは５〜１０の範囲で選べばよく、培養温度は
ＩＢ〜５０　’Ｃ１好ましくは２５〜４０″Ｃである。
培養日数は１〜１０日の範囲で活性が最大になるまで培
養すればよい。
本発明における反応条件としては、反応媒体は水、緩衝
液または培養液等の水性媒体、さらには、有機溶媒と水
性媒体の二相系が使用できる。反応媒体中へは、式（１
）で示されるラセミ体を粉末または液状のままで、ある
いは適当な溶媒に溶がして添加する。式（１）で示され
るラセミ体の添加濃度は０．０１〜７０重量％程度、好
ましくは０．１〜４０重量％であり、反応媒体中に完全
溶解しなくてもよい。反応に菌体を使用する場合の菌体
の濃度は、通常０．０５〜２０重世％の範囲でよい。反
応温度は５〜８０°Ｃ２好ましくは１５〜６０’Ｃ１反
応ＰＨは４〜１１、好ましくは６〜１０である。反応は
通常１〜１００時間の範囲である。消費される弐（１）
で示されるラセミ体は、連続的にまたは間歇的に補充し
て、反応液中の濃度が上記の範囲内に維持されるように
添加してもよい。反応は、生成される光学活性α−置換
有機酸の含有率が低下しない範囲で止めればよく、通常
は反応率が８〜６０％の範囲に達するまで行われる。
本発明における目的生成物の回収は、次のようにして行
われる。反応終了液より菌体等の不溶物を除去した後、
ｐＨを８．５とし、ｎ−ブタノール、ベンゼン、ジエチ
ルエーテル、クロロホルム等の溶媒により未反応の式（
１）で示される化合物を抽出除去し、次に、ｐＨを２と
し、ｎ−ブタノール、ベンゼン、ジエチルエーテル、ク
ロロホルム等の溶媒で抽出することにより、目的生成物
を回収する。さらに、目的物の精製は、シリカゲルを用
いたカラムクロマトグラフィーにて適当な溶媒、例えば
、ヘキサン、ジエチルエーテル、クロロホルム、メタノ
ールの混合液にて溶出させることにより行われる。
本発明における反応機構は、ニトリルまたはアミドをカ
ルボン酸に変換する酵素であるアミダーゼ、ニトリルヒ
ドラターゼもしくはニトリラーゼが、ラセミ体のニトリ
ルまたはアミドの一方の異性体にのみ選択的に作用する
こと、すなわち、該酵素による反応速度が光学異性体に
よって非常に大きく異なることに基づくと考えられる。
したがって、本発明によって光学活性な有機酸を作ると
、その結果として、未反応物質または反応中間物質とし
て光学活性なニトリルもしくはアミドが残存または生成
される。
これらのニトリルもしくはアミドは、酸を用いた加水分
解反応により容易に光学活性な有機酸とすることができ
る。すなわち、本発明は、８体と３体もしくは（＋）体
と（−）体の有機酸のどちらをも製造することができる
ものである。また、どちらか一方の光学活性な有機酸の
みを製造することを目的とするならば、未反応物質また
は反応中間体である光学活性なニトリルまたはアミドは
、例えば、アンモニアのようなアルカリを用いた反応に
より容易にラセミ化でき、ラセミ体のニトリルまたはア
ミドとして、本発明の原料として用いることができる。
したがって、工業的な実施においては、高収率で目的の
光学活性有機酸の製造を行うことができる。
本発明で用いられる微生物が有するアミダーゼ、ニトリ
ルヒドラターゼもしくはニトリラーゼは、ラセミ体のニ
トリルまたはアミドに作用する際に、光学異性体によっ
てその反応速度が大きく異なる場合があるという特異性
を持っている。本発明者らは、上述の微生物から、かか
る特異性を持ったニトリラーゼやアミダーゼを単離した
。その−例として、アシネトバクタ−エスピー　ＡＫ　
　２２６株から単離したニトリラーゼについて、以下に
説明する。
（１）酵素の調製方法 アシネトバクタ−エスピー　ＡＫ　　２２６を培養して
、本発明のニトリラーゼを製造しようとする場合、上記
の培地および反応活性を促進する物質を添加して、上記
の培養条件にて１〜３日培養する。
次に、得られた培養物からニトリラーゼが調製されるが
、精製法として通常の酵素精製法を用いることができる
。遠心分離等によって菌体を集め、超音波処理、ダイノ
ミル等の機械的方法によって菌体を破砕する。細胞片等
の固形物を遠心分離によって除き、粗酵素を得、超遠心
分離分画、塩析、有機溶媒沈澱、吸着クロマトグラフィ
ー、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマト
グラフィー等を行うことにより精製される。これについ
ては、実施例にて一例を記載する。
（２）力価の測定法 リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ８，０）０．５μｍｏｎ、
２−（４’−イソブチルフェニル）プロピオニトリル１
．３４μＩＩＩｏｌ、および適当量の酵素液を加え、０
．５ｒａになるように混合して、３０°Ｃにて３０分反
応させた後、８０％酢酸０．１ｄを添加して反応を停止
させた。生成した２−（４°−イソブチルフェニル）プ
ロピオン酸およびアンモニアの量を測定した。２−（４
″−イソブチルフェニル）プロピオン酸の測定は、高速
液体クロマトグラフィーにより行い、その条件としては
、μＢｏｎｄａｐａｋ　　Ｃ１８カラムを用い、０．０
５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ３）にアセトニトリルを５０％
（Ｖ／Ｖ）混合した溶媒を用い、２５４　ｎｍの吸光度
にて検出した。
生成されるアンモニアの測定法としては、Ｊ。
Ｃｌ１ｎ、　Ｐａｔｈ、　１３．１５６　（１９６０）
を用いた。
１分間に１μｍｏｌの２−（４”−イソブチルフェニル
）プロピオン酸またはアンモニアを生成する酵素量を１
単位とした。
（３）酵素の性質 本発明のニトリラーゼは純粋な形で単離されており、次
の性質を有する。
（ｉ）作用；ニトリル化合物１分子を加水分解して、有
機酸１分子とアンモニア１分子を生成する。
ラセミ体の２−（４’−イソブチルフェニル）プロピオ
ニトリルに対しては、そのＳ一体へ作用する速度がＲ一
体より著しく速く、結果的に、光学活性なＳ−（＋）−
２〜（４°−イソブチルフェニル）プロピオン酸を生成
する。これについては、実施例に記載する。
（ｉｉ）基質特異性；下記の表２に示すように、脂肪族
ニトリル、芳香族ニトリル等の多くのニトリル化合物に
作用する。一方、α−位にアミン基を持つものには作用
しない。
表 （ｉｉｉ　）至適ｐＨ，ｐＨ８，Ｏ付近。
（ｉｖ）安定ｐＨ；６０°Ｃ１６０分間各ｐＨの緩衝液
で処理したところ、ＰＨ５，８〜６．７が安定である。
（Ｖ）至適温度；４５°Ｃ〜６０°Ｃ付近において最大
となる。
（ｖｉ）吸収スペクトル；２２３ｎｍおよび２８０ｎｍ
付近に最大吸収を有する。
（ｖｉ）分子量；八５ａｈｉｐａｋ　　Ｇ　Ｓ　−６２
０（旭化成社製）を用いる高速液体クロマトグラフィー
にて、約５８０，０００と算出される。
（暢）サブユニットの分子ｌ、５ＤＳ−ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動により、４２，０００〜４７，０００
と算出される。
以上のように、本酵素は、脂肪族ニトリル、芳香族ニト
リル等に広く作用する新しいニトリラーゼであり、また
、２−（４″−イソブチルフェニル）プロピオニトリル
を基質とすると、光学特異性を持って加水分解するとい
うすぐれた効果を有する酵素である。
（実施例） 次に、実施例により本発明をより詳細に説明する。ただ
し、これら実施例は本発明の範囲を限定するものではな
い。なお、特に説明がない限りは、実施例中の％は重量
％を示す。
実施例１ Ｓ−（＋）−α−フェニルプロピオン酸の製造グルコー
ス１％、酵母エキス０．５％、ペプトン０．５％、リン
酸１カリウム０．１２％、リン酸２カリウム０．０８％
、硫酸マグネシウム０゜０２％、硫酸第１鉄０．００３
％、塩化ナトリウム０．１％、イソブチロニトリル０．
１％を含み、ｐＨを７．２とした殺菌培地２０００ｍｌ
に、あらかじめ同培地で培養したコリネバクテリウム　
ニトリロフィラス　ＡＴＣＣ２１４１９を２％植菌し、
３２°Ｃで２日振盪培養した。培養後、遠心分離にて菌
体（乾菌体５．２ｇ）を集め、これを０．０１Ｍリン酸
バッファー（ｐＨ８，０）１６０ｄを含む三角フラスコ
中に懸濁させた後、α−フェニルプロピオニトリル１．
６ｇを加え、３２°Ｃで振盪しながら反応させた。２０
時間後に反応を終了し、遠心分離により菌体を除去した
後、その上清液のｐＨを８．５に調整し、クロロホルム
２００ｄを添加して未反応のα−フェニルプロピオニト
リルを抽出除去した。水層のｐ　Ｈを１．　０〜２．０
に塩酸にて調整した後、クロロホルム２００ｄを添加し
て、目的物を抽出した。これを減圧ａ縮した後、シリカ
ゲルカラム（５００ｍｇ）でヘキサン−ジエチルエーテ
ル（９５：　５　ｖ／ｖ）で精製した。目的の溶出液を
減圧濃縮したところ、４７５■のＳ−（＋）−α−フェ
ニルプロピオン酸を得た。
比旋光度：　〔α）３＝＋７５°　（Ｃ＝１．６５゜ク
ロロホルム） 比旋光度より、光学純度９８％を示した。
なお、本物質はＴＬＣクロマトグラフィーおよび高速液
体クロマトグラフィーにて単一であった。
実施例２ Ｓ−（＋）−α−フェニルプロピオン酸の製造実施例１
と同様に、殺菌培地５００緘に、あらかじめ同培地で培
養した微生物を２％植菌し、３２°Ｃで２日振盪培養し
た。培養後、遠心分離にて菌体を集め、これを０．０１
Ｍリン酸バッファー（ｐＨ８，０）３０ｍｌを含む三角
フラスコにＱｉさせた後、α−フェニルプロピオニトリ
ル３００■を加え、３２°Ｃで振盪しながら反応させた
。
反応液から遠心分離にて菌体を除去した後、実施例１と
同様にクロロホルム抽出を行ってα−フェニルプロピオ
ン酸を得、高速液体クロマト分析にて光学特異性を調べ
た。この結果を下記表３に示す。
表 実施例２と同様に、微生物は培養後、遠心分離にて菌体
を集め、これを０．０１Ｍリン酸バッフｙ−（ｐＨ８，
０）３０Ｉｎ１を含む三角フラスコに懸濁させた、α−
フェニルプロピオンアミド３００■を加え、３２°Ｃで
振盪しながら反応させた。
反応液から遠心分離にて菌体を除去した後、実施例２と
同様にしてα−フェニルプロピオン酸を得、高速液体ク
ロマト分析にて光学特異性を調べた。この結果を表４に
示す。
なお、光学特異性をみる高速液体クロマト分析は、Ｓ−
（−）−１−（ナフチル）エチルアミドとして分析する
方法（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａ
ｐｈｙ、　３７８．　ｐ４０９〜４１８　（１９８６）
）を用いた。
実施例３ Ｓ−（＋）−α−フェニルプロピオン酸の製造表 実施例４ Ｓ−（＋）−イブプロフェンの製造 実施例１と同様に、殺菌培地５００　ｍｌに、あらかじ
め同培地で培養したアシネトバクタ−エスピー　ＡＫ　
　２２６を２％植菌し、３２°Ｃで３５時間培養した。
培養後、遠心分離にて菌体を集め、これを０．１Ｍリン
酸バッファー（Ｐ刊８．０）３０ｄを含む三角フラスコ
に懸濁させた後、２−（４゛−イソブチルフェニル）プ
ロピオニトリル９０ｍｇを加え、３２°Ｃで振盪しなが
ら反応させた。１６時間後に反応を終了し、遠心分離に
より菌体を除去した後、その上清液のｐＨを８．５に調
整し、クロロホルム３０ｒｄを添加して未反応の２−　
（４’−イソブチルフェニル）プロピオニトリルを抽出
除去した。水層のｐＨを１．０〜２．０に塩酸にて調整
した後、クロロホルム３０ｄを添加して、目的物を抽出
した。これを減圧濃縮した後、シリカゲルカラムにてヘ
キサン−ジエチルエーテル（３：ｌｖ／ｖ）にて溶出さ
せることにより精製した。
目的の溶出液を減圧濃縮したところ、５２■のＳ（＋）
　−２−（４’−イソプチルフヱニル）プロピオン［！
得た。
比旋光度：　〔α）”＝＋５２．７°　（Ｃ＝１゜エタ
ノール） 融点：４９°Ｃ 比旋光度より光学純度は９８％であった。なお、本物質
はＴＬＣクロマトグラフィーおよび高速液体クロマトグ
ラフィーにて単一であった。
実施例５ Ｓ−（＋）−ナプロキセンの製造 実施例１と同様に、殺菌培地５００ｄに、あらかじめ同
培地で培養したロドコッカス　エスピーＡＫ　　３２を
２％植菌し、３２°Ｃで３０時間培養した。培養後、遠
心分離にて菌体を集め、これを０．０１Ｍリン酸バッフ
ァー（ｐＨ８，０）３０戒を含む三角フラスコに懸濁さ
せた後、２−（６’−メトキシ−２゛−ナフチル）プロ
ピオニトリル９０■を加え、３２°Ｃで振盪しながら反
応させた。３０時間後に反応を終了し、遠心分離により
菌体を除去した後、その上滑液のｐＨを８．５に調整し
、クロロホルム３０ｄを添加して未反応物および反応副
生物を抽出除去した。水層のＰＨを１．０〜２．０に塩
酸にて調整した後、クロロホルム３０ｍ１を添加して、
目的物を抽出した。これを減圧濃縮した後、シリカゲル
カラムにてヘキサン−ジエチルエーテル（７：　３　ｖ
／ｖ）にて溶出させることにより精製した。目的の溶出
液を減圧濃縮したところ、３７■のＳ−（＋）−２−（
６”−メトキシ−２′−ナフチル）プロピオン酸を得た
。
〔α〕υ＝＋６２．８°　（Ｃ＝１．クロロホルム） 融点：１５３°Ｃ 比旋光度より光学純度は９５％であった。なお、本物質
はＴＬＣクロマトグラフィーおよび高速液体クロマトグ
ラフィーにて単一であった。
実施例６ （＋）−プラノプロフェンの製造 実施例１と同様に、殺菌培地５００ｄに、あらかじめ同
培地で培養したコリネバクテリウム　エスピー　ＫＯ−
２−４を５％植菌し、３２°Ｃで３５時間培養した。培
養後、遠心分離にて菌体を集め、これを０．１Ｍリン酸
バッファー（ｐ　Ｈ８゜０）３０＋ｆを含む三角フラス
コに懸濁させた後、２−（５＋１−　（１）ベンゾピラ
ノ　（２，３−ｂ　）ピリジン−フィル）プロピオニト
リル９０■を加え、３２“Ｃで激しく振盪しながら反応
させた。２４時間後に反応を終了し、遠心分離により菌
体を除去した後、その上清液のｐＨを８．５に調整し、
クロロホルム３０ｍ２を添加して、原料のニトリル化合
物および対応するアミド化合物を抽出除去した。水層の
ｐ　Ｈを１．０〜２．０に塩酸にて調整した後、クロロ
ホルム３０Ｉｎｌを添加して、目的物を抽出した。
これを減圧濃縮した後、シリカゲルカラムにてヘキサン
−ジエチルエーテル（３：１ｖ／ｖ）にて溶出させるこ
とにより精製した。目的の溶出液を減圧ｆｉ縮したとこ
ろ、４２■の（＋）−２−（５ｕ−（１）ベンゾピラノ
　（２，３−ｂ　）ピリジン−７−イル）プロピオン酸
（（＋）−プラノプロフェン）を得た。
（α〕ド＝＋４３．３°　（Ｃ＝１゜０．メタノール） 融点＝１８４〜１８５°Ｃ 比旋光度より光学純度は９６％であった。なお、本物質
はＴＬＣクロマトグラフィーおよび高速液体クロマトグ
ラフィーにて単一であった。
実施例７ アシネトバクタ−エスピー　ＡＫ　　２２６のニトリラ
ーゼの精製 グルコースの代わりに酢安１％とする以外は、実施例４
と同様にして２１培養し、遠心分離により菌体４０ｇを
集めた。菌体を０．０１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ
６，５）で洗浄後、０．０３Ｍリン酸カリウム緩衝液（
ＰＨ６，５）１６０ｍｌに懸濁し、９ＫＨｚにおける超
音波処理を約３０分行い、菌体を破砕した。破砕菌体は
１５．０００×ｇ、２０分間の遠心分離で除去し、無細
胞抽出液を得た。これを０．０３Ｍリン酸カリウム緩衝
液（ｐＨ６，５）にて透析し、１００，０００Ｘｇ、２
時間の超遠心分離を行い、上清液をＤＥＡＥ−セルロー
スのカラムを通過させ、０〜０゜５Ｍ塩化ナトリウムを
含む０．０５Ｍリン酸カリラム緩衝液（ｐＨ６，５）の
直線的な濃度勾配で酵素を溶出させた。活性区分を集め
、０．０１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６，５）で透
析後、ヒドロキシアパタイトのカラムを通過させ、０゜
０１〜０．２Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６゜５）の
直線的な濃度勾配で酵素を溶出させた。活性画分を集め
、０．０３Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６，５）で透
析後、前記と同様にして、ＤＥＡＥ−セルロースのカラ
ムおよびヒドロキシアパタイトのカラムで精製した。活
性画分は限外濾過により濃縮し、０．０５Ｍリン酸カリ
ウム緩衝液（ｐＨ６，５）で平衡化した５ｅｐｈａｃｒ
ｙｌ　Ｓ−４００によるゲル濾過クロマトグラフィーを
行った。
こうして、ニトリラーゼを均一に精製した。この精製過
程を表５に示す。
表 実施例８ Ｓ−（＋）−イブプロフェンの生成経過実施例７で均一
に精製されたニトリラーゼを用いて、以下の条件にて反
応経過をみた。リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ８，ｏ）１
００μｍｏｆ、２−（４°−イソブチルフェニル）プロ
ピオニトリル４゜７７μｍｏｎ、ニトリラーゼ０．０２
単位を含む反応液１　ｍｌを３２°Ｃにて、充分振盪し
て反応させた。
各反応時間における２−（４’−イソブチルフェニル）
プロピオニトリル、２−（４°−イソブチルフェニル）
プロピオン酸、およびアンモニアを定量した。結果は図
面に示すとおりである。生成したＳ−（＋）−２−（４
’−イソブチルフェニル）プロピオン酸の光学純度は、
６時間で９８％、２４時間で９６％、４０時間で９５％
であった。
実施例９ Ｒ−（−）−イブプロフェンの製造 実施例４で記載した、クロロホルム抽出した未反応の２
−（４°−イソブチルフェニル）プロピオニトリルを減
圧濃縮した。この試料に、脱イオン水５ｍｌおよび濃硫
酸５ｄを添加した。混合物を１０５°Ｃにて、７時間攪
拌しながら反応させた。反応終了後、これにクロロホル
ム２０ｄを添加して目的物を抽出した。抽出物を減圧濃
縮し、ヘキサン−ジエチルエーテル（３：１ｖ／ｖ）で
溶出させるシリカゲルカラムクロマトグラフィーを用い
て精製した。目的の溶出液を減圧濃縮し、４４ｍｇのＲ
（−）−２−（４’−イソブチルフェニル）プロピオン
酸を得た。
〔α）”＝−５０，０°　（Ｃ＝１．　　エタノ−ル） 融点：４８〜４９°Ｃ 比旋光度より、本島はＲ体含量９５％であった。
薄層クロマト分析にて、本島は単一スポットを示した。
実施例１０ Ｓ−（＋）−イブプロフェンの製造 実施例４と同様の方法でアシネトバクタ−エスピー　Ａ
Ｋ　　２２６株を培養した。遠心分離にて菌体（乾菌体
９５０■）を集め、これを０．１Ｍリン酸バッファー（
ｐＨ８，０）３０成を含む三角フラスコに懸濁させた。
この懸濁液に２−（４’イソブチルフエニル）プロピオ
ニトリル１．５ｇを含むヘキサン５緘を添加して、３２
“Ｃにて振盪しながら反応させた。１６時間後に反応を
終了し、遠心分離により゛菌体を除去した。水２７０戚
と苛性ソーダを加えて、水層のｐＨを８．５とした。
ヘキサン層を除いた。さらに、クロロホルム３００ｄを
添加して、未反応の２−（４”−イソブチルフェニル）
プロピオニトリルを完全に除去した。水層のｐＨを塩酸
にて１．０に調整した。クロロホルム３００戚を添加し
て目的物を抽出した。抽出物を減圧濃縮し、ヘキサン−
ジエチルエーテル（３：１ｖ／ｖ）で溶出させるシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィーを用いて精製した。目的
の溶出液を減圧濃縮して、６７０■のＳ−（＋）　−２
−（４“−イソブチルフェニル）プロピオン酸を得た。
〔α）”＝＋５６．Ｏ°　（Ｃ＝１．エタノール）融点
＝４９〜５０°Ｃ 比旋光度より、本島は３体含量９８．５％であった。薄
層クロマト分析にて、本島は単一スポットを示した。
実施例１１ Ｒ−（−）−マンデル酸の製造 グルコース１％、酵母エキス０．５％、ペプトン０．５
％、リン酸２カリウム０．２％、塩化ナトリウム０．１
％、硫酸第１鉄０．００３％を含み、ｐＨを７．０とし
た殺菌培地１００　ｍｌに、あらかじめ同培地で培養し
たアルカリゲネス　フェカリス　ＡＴＣＣ８７５０を４
％植菌した。これを２日間３２°Ｃにて振盪培養した。
培養終了後、遠心分離で菌体（乾菌体６０ｍｇ）を隼め
、これを０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ８，０）１５
０雁に懸濁した。この懸濁液５０ｍ１に、マンゾロニト
リル２５０■を加えて、３２°Ｃで４時間振盪しながら
反応させた。反応液より遠心分離にて菌体を除去した。
上清液のｐ　Ｈを８．５に調整した。
これにクロロホルム５０ｍ１を添加して、未反応のマン
ゾロニトリルを抽出した。水層のｐＨを塩酸にて１．０
と調整した。ジエチルエーテル４０ｍｅを添加して、目
的物を抽出した。抽出物を減圧濃縮し、ヘキサン−酢エ
チ（５０：５０ｖ／ｖ）で溶出させる（ヘキサンにて調
製した５００■の）シリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーを用いて精製した。目的の溶出液を減圧ｆｉ縮し、７
６ｍｇのＲ−（−）−マンデル酸を得た。
（α）２０＝−１４１°　（Ｃ＝１．ＨｚＯ）融点：１
３０〜１３２°Ｃ 比旋光度より、８体含量は９２．２％であった。
この試料をＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ
ｒａｐｈｙ＋　２１６Ｌ４０６　（１９８１）の′方法
にしたがって、高速液体クロマト分析したところ、８体
含量は９１％であった。
実施例１２ Ｒ−（−）−マンデル酸の製造 実施例１１と同じ組成の培地１１を作った。これにシュ
ードモナス　ベシキュラリス　ＡＴＣＣ１１４２６また
はキャンディダ　トロピカリスＡＴＣＣ２０３１１を移
植した。これを培養した。集めた菌体（乾菌体量はそれ
ぞれ１．７６ｇ、７．１４ｇ）を、それぞれ１００戚と
５００−の１．０Ｍリン酸バッファー（ｐＨ８，０）に
懸濁した。それぞれの懸濁液１００成に、マンデルアミ
ド２．０ｇを加えた。混合液を３２°Ｃにて４０時間、
振盪しながら反応させた。反応液から菌体などの不溶物
を遠心分離にて除去した。上清液のｐＨを１．０に富周
整した。これにジエチルエーテル５０−を添加して、目
的物を抽出した。抽出物は実施例１１と同様に精製した
。シュードモナス　ベシキュラリス　ＡＴＣＣ１１４２
６による反応液から、７９５■のＩ？−（−）−マンデ
ル酸が得られた。
〔α）”＝−１５３°　（Ｃ＝　１　、）１２０）融点
＝１３４〜１３５°Ｃ キャンディダ　トロピカリス　ＡＴＣＣ２０３１１によ
る反応液から、９４０ｍｇのＲ−（−）−マンデル酸が
得られた。
（α）　”＝−１４７°　（Ｃ＝０．　５．　、＋１２
０）融点＝１３３〜ｉ　３４　’ｃ 比旋光度より算出したところ、精製試料のＲ体含量は、
それぞれ１００％、９８％であった。
実施例１３ Ｓ−（−）−２−クロロプロピオン酸の製造実施例１１
と同様にしてマイコバクテリウムエスピー　ＡＣ７７７
を培養した。菌体（乾菌体７１０ｍｇ）を８０ｄの０，
１Ｍリン酸バッファー　（ｐＨ８，０）に懸濁した。こ
の懸濁液２０ｍ１に、２−クロロプロピオニトリル２０
０■を添加した。混合液を３２°Ｃで２時間振盪しなが
ら反応させた。不溶物を遠心分離にて反応液から除去し
た。上清液のｐＨを苛性ソーダにて９に調整した。
この上清液に２０７ｄのクロロホルムを加えて、未反応
の２−クロロプロピオニトリルを除去した。
水層のｐＨを塩酸にて１に調整した。水層に２０成のｎ
−ブタノールを加えて、目的物を抽出した。
ｎ−ブタノール層を減圧濃縮し、クロロホルム−メタノ
ール（１０：　１　ｖ／ｖ）で溶出させる（クロロホル
ムにて調製した５００■の）シリカゲルカラムクロマト
グラフィーを用いて精製した。目的の溶出液を減圧濃縮
して、５９ｍｇのＳ−（−）−２−クロロプロピオン酸
を得た。
〔α）ｐ＝−８，４＠（Ｃ＝１．Ｈ２Ｏ）比旋光度より
算出したところ、３体含量は８０％であった。高速液体
クロマト分析および薄層クロマト分析にて本孔は単一で
あった。
実施例１４ Ｓ−（−Ｌ２−ブロモプロピオン酸の製造実施例１２と
同様にマイコバクテリウム　エスピー　ＡＣ７７７株を
培養した。菌体（乾菌体７１０ｍｇ）を２０ｍ１の０．
１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ８，０）に懸濁した。この
懸濁液に、２−ブロモプロピオニトリル２００■を添加
した。混合液を３２°Ｃにて３０時間、振盪しながら反
応させた。遠心分離により反応液中の不溶物を除去した
。上清液のｐＨを苛性ソーダにて８．５に調整した。こ
れにクロロホルム２０成を加えて、未反応の２−ブロモ
プロピオニトリルを抽出した。水層のｐＨを硫酸にて１
．５に調整した。これにｎブタノール４０ｄを添加して
、目的物を抽出した。ｎ−ブタノール層を減圧濃縮し、
クロロホルム−メタノール（１０：ｌｖ／ｖ）で）吉用
させる（クロロホルムにて調製した５　００　ｍｇの）
シリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いて精製した
。
目的の溶出液を減圧濃縮したところ、４５■の５（−）
−２−ブロモプロピオン酸を得た。
〔α）”、、’＝−１９，９°　（Ｃ＝１．メタノール
）この試料は比旋光度より、Ｓ体含量８６％であった。
高速液体クロマト分析および薄層クロマト分析にて、こ
の試料は単一であった。
実施例１５ （＋）−２−フェノキシプロピオン酸の製造実施例１１
と同様に、マイコノバクテリウムエスピー　ＡＣ７７７
株を培養した。菌体（乾菌体７１０ｍｇ）をＯ，１Ｍリ
ン酸バッファー（ｐＨ８，０）１００−に懸濁した。こ
の懸濁液１０ｍ１に、２−フェノキシプロピオニトリル
１００＋ｎｇを添加した。混合液を３２°Ｃにて３時間
、振盪しながら反応させた。反応液から遠心分離にて不
溶物を除去した。上清液のｐＨを苛性ソーダにて９に調
整した。これにクロロホルム１０ｍ１を加えて、未反応
の２−フェノキシプロピオニトリルおよび２−フェノキ
シプロピオンアミドを除去した。水層のｐ　Ｈを塩酸に
て１に調整した。この水層にクロロホルム１０ｄを加え
て、目的物を抽出した。クロロホルム層を減圧濃縮して
、実施例１と同様に精製したところ、３４ｍｇの２−フ
ェノキシプロピオン酸が得られた。実施例２と同様に、
高速液体クロマト分析にて光学純度を調査した。（＋）
体のみが生成していることがわかった。
実施例１６ （＋）−２−フェノキシプロピオン酸の製造実施例１１
と同様の方法で、ロドコッカス　エスピー　ＡＫ　　３
２株を培養した。菌体（乾菌体２７０ｍｇ）を１００　
ｍｌのＯ，１Ｍリン酸バフ７７−（ｐＨ８，０）に懸濁
した。この！！！濁液１０ｄに、２−フェノキシプロピ
オンアミド１００ｍｇを添加した。混合液を３２°Ｃに
て３時間、振盪しながら反応させた。遠心分離により、
反応液から不溶物を除去した。上清液のｐＨを苛性ソー
ダにて９に調整した。これにクロロホルム１０ｍ１を加
えて、未反応のアミドを除去した。上清のｐＨを塩酸に
て１に調整した。これにクロロホルム１０ｄを加えて、
目的物を抽出した。クロロホルム層を減圧濃縮し、実施
例１と同様の方法で精製したところ、４２■の２−フェ
ノキシプロピオン酸が得られた。
実施例２と同様に、この試料の光学特異性を調査した。
（＋）体のみが生成していた。
実施例１７ Ｓ−（＋）−２−フェニル−〇−酪酸の製造実施例５と
同様に培養して得られたロドコッカス　エスピー　ＡＫ
　　３２株の懸濁液１０ｄに、２−フェニル−ｎ−ブチ
ロニトリル１５０■を添加した。混合液を３２°Ｃにて
１８時間、振盪しながら反応させた。遠心分離により、
反応液から不溶物を除去した。上清液のｐＨを苛性ソー
ダにて８．５に調整した。これに３０成のクロロホルム
を添加して、未反応のニトリルと対応するアミドを除去
した。水層のｐＨを塩酸により２，０に調整した。これ
にクロロホルム３０ｄを加えることにより、目的物を抽
出した。抽出物を減圧濃縮し、実施例１と同様に精製し
たところ、６４■のＳ−（＋）−２−フェニル−ｎ−酪
酸が得られた。
〔α）’、；＝８８０．０°　（Ｃ＝０．９．）ルエン
）比旋光度より、光学純度９３％であった。薄層クロマ
ト分析及び高速液体クロマト分析にて、この試料は単一
であった。
実施例１８ Ｓ−（−）−３−クロロ−２−メチルプロピオン酸の製
造実施例１１と同様に、マイコバクテリウム　エスピー
　ＡＣ７７７株を培養した。菌体（乾菌体７１０ｍｇ）
を０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ８，０）１００ｄに
懸澗し、三角フラスコに入れた。この懸濁液５０ｍ１に
、３−クロロ−２−メチルプロピオニトリル５００■を
添加した。混合液を３２°Ｃで、４時間、振盪しながら
反応させた。
遠心分離により、菌体より微生物を除去した。上清液の
ｐＨを塩酸にて１．０に調整した。そこにｎ−ブタノー
ル３０ｄを添加して、目的物を抽出した。抽出物を減圧
濃縮し、クロロホルム−メタノール（１０：ｌｖ／ｖ）
にて溶出させる（クロロホルムにて上用製した１ｇの）
シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。
目的の抽出液を減圧濃縮したところ、２４３■の５−（
−）−３−クロロ−２−メチルプロピオン酸を得た。
〔α〕甘せ−１４．０°　（Ｃ＝１．メタノール）この
試料を（ＩＲ，２Ｒ）−（−）−１−（４−ニトロフェ
ニル）−２−アミノ−１，３−プロパンジオールとアミ
ド化して、高速液体クロマト分析（Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ
ｒａｐｈｉａ。
釘、　４７７　（１９８７））　した。ピークは単一で
、８体のみが生成していた。
（発明の効果） 本発明を利用することにより、各種の光学活性なα−置
換有機酸を、光学不活性な物質を原料として、微生物を
用いて常温常圧の反応条件下で製造することができる。
本発明の利用は、経済上非常に有利である。
さらに、本発明によれば、光学純度が８０％以上、有機
酸の種類によっては９０％以上という極めて高純度の光
学活性α−置換有機酸を、収率よく得ることができる。
本発明は、詳細に、かつ、特にその具体化においては実
施例をもって述べてきたが、本発明の精神と範囲からは
ずれることがないならば、本発明の中で各種の変化や変
更ができることは、この技術分野の者には明らかであろ
う。
【図面の簡単な説明】
図面は精製ニトリラーゼを用いた２−（４’−イソブチ
ルフェニル）プロピオン酸の生成経過を示すグラフであ
る。

Claims (5)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）下記一般式（ I ）で示されるラセミ体のα−置
    換ニトリルまたはα−置換アミドに、アルカリゲネス属
    、シュウドモナス属、ロドシュウドモナス属、コリネバ
    クテリウム属、アシネトバクター属、バチルス属、マイ
    コバクテリウム属、ロドコッカス属またはキャンディダ
    属に属する微生物またはその調製物を作用させ、下記一
    般式（II）で示される光学活性なα−置換有機酸を取得
    することを特徴とする光学活性なα−置換有機酸の製造
    方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｒ＿１およびＲ＿２はハロゲン原子、ヒドロキ
    シ基、置換または無置換のアルキル基、置換または無置
    換のシクロアルキル基、置換または無置換のアルコキシ
    基、置換または無置換のアリール基、置換または無置換
    のアリールオキシ基、置換または無置換の複素環基を表
    す。ただし、Ｒ＿１とＲ＿２は同一になることはない。 そして、Ｘはニトリル基またはアミド基を表す。） ▲数式、化学式、表等があります▼（II） （式中、Ｒ＿１およびＲ＿２は上記と同一である。）
  2. （２）コリネバクテリウムエスピー（Ｃｏｒｙｎｅｂａ
    ｃｔｅｒｉｕｍｓｐ．）ＫＯ−２−４株〔ＦＥＲＭＢＰ
    −２３５３〕。
  3. （３）バチルスサブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂ
    ｔｉｌｉｓ）ＣＮ５株〔ＦＥＲＭＢＰ−２３５４〕。
  4. （４）マイコバクテリウムエスピー（Ｍｙｃｏｂａｃｔ
    ｅｒｉｕｍｓｐ．）ＡＣ７７７株〔ＦＥＲＭＢＰ−２３
    ５２〕。
  5. （５）一般式（ I ）で示されるラセミ体のα−装置換
    ニトリルまたはα−置換アミドを、一般式（II）で示さ
    れる光学活性なα−置換有機酸に変換することのできる
    微生物から分離されたアミダーゼまたはニトリラーゼ。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｒ＿１およびＲ＿２はハロゲン原子、ヒドロキ
    シ基、置換または無置換のアルキル基、置換または無置
    換のアルコキシ基、置換または無置換のシクロアルキル
    基、置換または無置換のアリール基、置換または無置換
    のアリールオキシ基、置換または無置換の複素環基を表
    す。ただし、Ｒ＿１とＲ＿２は同一でない。そして、Ｘ
    はニトリル基またはアミド基を表す。） ▲数式、化学式、表等があります▼（II） （式中、Ｒ＿１およびＲ＿２は上記と同一である。）
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