JP2720140B2 - フェニル基を有する光学活性α−ヒドロキシカルボン酸の製造法 - Google Patents
フェニル基を有する光学活性α−ヒドロキシカルボン酸の製造法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はフェニル基を有する光学
活性α−ヒドロキシカルボン酸の製造法、更に詳しく
は、後記一般式[I] で示されるラセミ体のα−ヒドロキ
シニトリルのニトリル基に対して不斉加水分解能を有す
る微生物を用いて、後記一般式[II]で示されるフェニル
基を有する光学活性α−ヒドロキシカルボン酸を製造す
る方法に関する。該α−ヒドロキシカルボン酸は、抗生
物質または交感神経作用薬など多種の医農薬品の合成原
料、さらには光学分割剤として工業的に重要である。
活性α−ヒドロキシカルボン酸の製造法、更に詳しく
は、後記一般式[I] で示されるラセミ体のα−ヒドロキ
シニトリルのニトリル基に対して不斉加水分解能を有す
る微生物を用いて、後記一般式[II]で示されるフェニル
基を有する光学活性α−ヒドロキシカルボン酸を製造す
る方法に関する。該α−ヒドロキシカルボン酸は、抗生
物質または交感神経作用薬など多種の医農薬品の合成原
料、さらには光学分割剤として工業的に重要である。
【０００２】
【従来の技術とその課題】フェニル基を有する光学活性
α−ヒドロキシカルボン酸の製造法としては、ラセミ体
を分別結晶やクロマトグラフィーにより光学分割する方
法、および有機化学的に不斉合成する方法などが知られ
ているが、これらの方法は一般に操作が煩雑で低収率で
あり、また、生成物の光学純度が低いなどの問題点を有
している。
α−ヒドロキシカルボン酸の製造法としては、ラセミ体
を分別結晶やクロマトグラフィーにより光学分割する方
法、および有機化学的に不斉合成する方法などが知られ
ているが、これらの方法は一般に操作が煩雑で低収率で
あり、また、生成物の光学純度が低いなどの問題点を有
している。
【０００３】これら問題点を解決する手段として、微生
物を用いる方法が提案されており、例えば、アルカリゲ
ネス属、シュードモナス属、ロドシュウドモナス属、コ
リネバクテリウム属、アシネトバクター属、バチルス
属、マイコバクテリウム属、ロドコッカス属またはキャ
ンディダ属の微生物によりマンデロニトリルまたはマン
デルアミドおよびそれらの置換体を不斉加水分解する方
法〔特開平2-84198 号公報参照〕、シュードモナス属、
アルカリゲネス属、アシネトバクター属、カセオバクタ
ー属、ノカルディア属、バチルス属、ブレビバクテリウ
ム属またはオーレオバクテリウム属等の微生物によりラ
セミ体のマンデロニトリルまたはその誘導体から直接優
位量のR(-)−マンデル酸またはその誘導体を製造する方
法（特開平4-218385号、特開平4-99495 号および特開平
4-99496 号各公報参照）などが知られている。このよう
な場合、より高活性で高光学選択性を有する微生物が得
られれば裨益するところは大きい。
物を用いる方法が提案されており、例えば、アルカリゲ
ネス属、シュードモナス属、ロドシュウドモナス属、コ
リネバクテリウム属、アシネトバクター属、バチルス
属、マイコバクテリウム属、ロドコッカス属またはキャ
ンディダ属の微生物によりマンデロニトリルまたはマン
デルアミドおよびそれらの置換体を不斉加水分解する方
法〔特開平2-84198 号公報参照〕、シュードモナス属、
アルカリゲネス属、アシネトバクター属、カセオバクタ
ー属、ノカルディア属、バチルス属、ブレビバクテリウ
ム属またはオーレオバクテリウム属等の微生物によりラ
セミ体のマンデロニトリルまたはその誘導体から直接優
位量のR(-)−マンデル酸またはその誘導体を製造する方
法（特開平4-218385号、特開平4-99495 号および特開平
4-99496 号各公報参照）などが知られている。このよう
な場合、より高活性で高光学選択性を有する微生物が得
られれば裨益するところは大きい。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、フェニル
基を有する光学活性α−ヒドロキシカルボン酸を工業的
に有利に製造することのできる微生物の探索を行った結
果、新たに土壌より見出したゴルドナ (Gordona)属の微
生物の使用が有効であることを見出し本発明を完成し
た。
基を有する光学活性α−ヒドロキシカルボン酸を工業的
に有利に製造することのできる微生物の探索を行った結
果、新たに土壌より見出したゴルドナ (Gordona)属の微
生物の使用が有効であることを見出し本発明を完成し
た。
【０００５】すなわち、本発明は、ゴルドナ (Gordona)
属に属し下記一般式[I] で示されるラセミ体のα−ヒド
ロキシニトリルのニトリル基を不斉加水分解する能力を
有する微生物または該処理物を、中性ないし塩基性の水
性媒体中で、基質である下記一般式[I] で示されるラセ
ミ体のα−ヒドロキシニトリルのニトリルまたはこのニ
トリルに対応するアルデヒドと青酸の混合物に作用させ
ることにより、これら基質から直接優位量の下記一般式
[II]で示されるフェニル基を有する光学活性α−ヒドロ
キシカルボン酸を生成せしめることを特徴とするフェニ
ル基を有する光学活性α−ヒドロキシカルボン酸の製造
法、である。
属に属し下記一般式[I] で示されるラセミ体のα−ヒド
ロキシニトリルのニトリル基を不斉加水分解する能力を
有する微生物または該処理物を、中性ないし塩基性の水
性媒体中で、基質である下記一般式[I] で示されるラセ
ミ体のα−ヒドロキシニトリルのニトリルまたはこのニ
トリルに対応するアルデヒドと青酸の混合物に作用させ
ることにより、これら基質から直接優位量の下記一般式
[II]で示されるフェニル基を有する光学活性α−ヒドロ
キシカルボン酸を生成せしめることを特徴とするフェニ
ル基を有する光学活性α−ヒドロキシカルボン酸の製造
法、である。
【０００６】 〔式中、Ｘはオルト位、メタ位またはパラ位置換を意味
し、置換基は水素、水酸基、炭素数１〜３の脂肪族飽和
アルキル基、炭素数１〜３の脂肪族飽和アルコキシ基、
チオアルキル基、ハロゲン原子、フェニル基、フェノキ
シ基、アミノ基またはニトロ基，ｎは０〜２の整数を表
す。〕
し、置換基は水素、水酸基、炭素数１〜３の脂肪族飽和
アルキル基、炭素数１〜３の脂肪族飽和アルコキシ基、
チオアルキル基、ハロゲン原子、フェニル基、フェノキ
シ基、アミノ基またはニトロ基，ｎは０〜２の整数を表
す。〕
【０００７】上記したところを要旨とする本発明は、前
記一般式[I] で示されるα−ヒドロキシニトリルが、中
性付近ないしは塩基性の水性媒体中で、対応するアルデ
ヒドと青酸との間で容易にラセミ化するという性質を利
用し、このラセミ化反応の系と前記微生物とを共役させ
ることにより前記一般式[I] で示されるα−ヒドロキシ
ニトリルをＤ−またはＬ−体優位に前記一般式[II]で示
されるフェニル基を有する光学活性α−ヒドロキシカル
ボン酸に変換し得るとの本発明者らにより見出された知
見をも含む。本発明でいう優位量とはラセミ体からＤ−
またはＬ−体が50〜100%の収率で得られることを意味す
る。
記一般式[I] で示されるα−ヒドロキシニトリルが、中
性付近ないしは塩基性の水性媒体中で、対応するアルデ
ヒドと青酸との間で容易にラセミ化するという性質を利
用し、このラセミ化反応の系と前記微生物とを共役させ
ることにより前記一般式[I] で示されるα−ヒドロキシ
ニトリルをＤ−またはＬ−体優位に前記一般式[II]で示
されるフェニル基を有する光学活性α−ヒドロキシカル
ボン酸に変換し得るとの本発明者らにより見出された知
見をも含む。本発明でいう優位量とはラセミ体からＤ−
またはＬ−体が50〜100%の収率で得られることを意味す
る。
【０００８】本発明で使用する微生物はゴルドナ属に属
し、一般式[I] で示されるラセミ体のα−ヒドロキシニ
トリルのニトリル基に対し不斉加水分解活性を有し、且
つ、一般式[II]で示されるフェニル基を有する光学活性
α−ヒドロキシカルボン酸を高濃度に蓄積する能力を有
する。
し、一般式[I] で示されるラセミ体のα−ヒドロキシニ
トリルのニトリル基に対し不斉加水分解活性を有し、且
つ、一般式[II]で示されるフェニル基を有する光学活性
α−ヒドロキシカルボン酸を高濃度に蓄積する能力を有
する。
【０００９】該微生物として、具体的には、ゴルドナ
テラエ（Ｇｏｒｄｏｎａ ｔｅｒｒａｅ）ＭＡ−１菌株
〔ＦＥＲＭ ＢＰ−４５３５〕を挙げることができる。
この菌株は本発明者らにより土壌より見出され、工業技
術院 生命工学工業技術研究所に上記番号にて寄託され
ており、その菌学的性質は以下に示すとおりである。
テラエ（Ｇｏｒｄｏｎａ ｔｅｒｒａｅ）ＭＡ−１菌株
〔ＦＥＲＭ ＢＰ−４５３５〕を挙げることができる。
この菌株は本発明者らにより土壌より見出され、工業技
術院 生命工学工業技術研究所に上記番号にて寄託され
ており、その菌学的性質は以下に示すとおりである。
【００１０】 MA-1菌株 形 態 多形性桿菌 グラム染色性 ＋ 芽 胞 − 運 動 性 − オキシダーゼ − カタラーゼ ＋ 集落の色調 ピンクないしオレンジ rod-coccus cycle ＋ 集落周辺細胞の伸長 認める 気菌糸の形成 認めず 酸素にたいする態度 好気性 細胞壁のジアミノ酸 meso-シ゛アミノヒ゜メリン酸 グリコリル試験 ＋（グリコリル型） 細胞壁の糖組成 アラビノース ＋ ガラクトース ＋ キノン系 MK-9(H2) アデニン分解 − チロシン分解 − 尿素分解 ＋ 資化性 イノシトール − マルトース − マンニトール ＋ ラムノース ＋ ソルビトール ＋ m-ヒト゛ロキシ-安息香酸ナトリウム − 安息香酸ナトリウム ＋ クエン酸ナトリウム ＋ 乳酸ナトリウム ＋ テストステロン ＋ アセトアミド − ピルビン酸ナトリウム ＋ 0.02% アソ゛化ナトリウム 存在下での生育 ＋ 10℃での生育 ＋ 40℃での生育 ＋ 0.001%クリスタルハ゛イオレット 存在下での生育 ＋ 0.3%フェニルエタノール 存在下での生育 ＋ 5%NaCl存在下での生育 ＋ 7%NaCl存在下での生育 ＋
【００１１】以上の菌学的性質をバージェーの細菌分類
書〔Bergey's Manual of Systematic Bacteriology (19
86) 〕、J. Gen. appl. Microbiol., 34, 341-348 (198
8)および Int. J. Syst. Bacteriol. 39, 371 (1989)に
基づいて分類すると、MA-1菌株はゴルドナ属テラエ種(G
ordona terrae)に属する細菌と同定された。
書〔Bergey's Manual of Systematic Bacteriology (19
86) 〕、J. Gen. appl. Microbiol., 34, 341-348 (198
8)および Int. J. Syst. Bacteriol. 39, 371 (1989)に
基づいて分類すると、MA-1菌株はゴルドナ属テラエ種(G
ordona terrae)に属する細菌と同定された。
【００１２】一般式[I] で示される化合物の代表例とし
ては、マンデロニトリル、２−クロロマンデロニトリ
ル、３−クロロマンデロニトリル、４−クロロマンデロ
ニトリル、４−ヒドロキシマンデロニトリル、４−メチ
ルマンデロニトリル、４−メトキシマンデロニトリル、
４−メチルチオマンデロニトリル、４−アミノマンデロ
ニトリル、４−ニトロマンデロニトリル、３−フェノキ
シマンデロニトリル、フェニルラクトニトリル、４−フ
ェニル−α−ヒドロキシブチロニトリルなどを挙げるこ
とができる。
ては、マンデロニトリル、２−クロロマンデロニトリ
ル、３−クロロマンデロニトリル、４−クロロマンデロ
ニトリル、４−ヒドロキシマンデロニトリル、４−メチ
ルマンデロニトリル、４−メトキシマンデロニトリル、
４−メチルチオマンデロニトリル、４−アミノマンデロ
ニトリル、４−ニトロマンデロニトリル、３−フェノキ
シマンデロニトリル、フェニルラクトニトリル、４−フ
ェニル−α−ヒドロキシブチロニトリルなどを挙げるこ
とができる。
【００１３】次に本発明の一般的実施態様について説明
する。本発明に使用される微生物の培養は、資化し得る
炭素源（グリセロール、グルコース、サッカロース、麦
芽エキス、ラクトース、フルクトースなど）、窒素源
（カザミノ酸、肉エキス、酵母エキスなど）および各微
生物の生育に必須の無機塩（塩化マグネシウム、硫酸ナ
トリウム、塩化カルシウム、硫酸マンガン、塩化鉄、硫
酸亜鉛など）などを含有した通常の培地を用いて行なわ
れる。
する。本発明に使用される微生物の培養は、資化し得る
炭素源（グリセロール、グルコース、サッカロース、麦
芽エキス、ラクトース、フルクトースなど）、窒素源
（カザミノ酸、肉エキス、酵母エキスなど）および各微
生物の生育に必須の無機塩（塩化マグネシウム、硫酸ナ
トリウム、塩化カルシウム、硫酸マンガン、塩化鉄、硫
酸亜鉛など）などを含有した通常の培地を用いて行なわ
れる。
【００１４】培養初期または中期に生育を大きく阻害し
ない濃度のニトリル類（ケイ皮酸ニトリル、ベンジルシ
アニド、イソブチロニトリル、β−フェニルプロピオニ
トリル、ベンゾニトリル、２−シアノピリジン、３−シ
アノピリジン、４−シアノピリジン、１−シクロヘキセ
ニルアセトニトリル、ε−カプロラクタム、γ−ブチロ
ニトリル、ｏ−アミノベンゾニトリルなど）、アミド類
（イソブチルアミド、フェニルアセトアミド、４−ピリ
ジンカルボン酸アミドなど）を添加することはより高い
酵素活性が得られるので好ましい。
ない濃度のニトリル類（ケイ皮酸ニトリル、ベンジルシ
アニド、イソブチロニトリル、β−フェニルプロピオニ
トリル、ベンゾニトリル、２−シアノピリジン、３−シ
アノピリジン、４−シアノピリジン、１−シクロヘキセ
ニルアセトニトリル、ε−カプロラクタム、γ−ブチロ
ニトリル、ｏ−アミノベンゾニトリルなど）、アミド類
（イソブチルアミド、フェニルアセトアミド、４−ピリ
ジンカルボン酸アミドなど）を添加することはより高い
酵素活性が得られるので好ましい。
【００１５】培養液のpHは 4〜10の範囲で、培養は 5〜
50℃の温度範囲で、１〜７日程度好気的に行い活性が最
大となるまで継続すればよい。
50℃の温度範囲で、１〜７日程度好気的に行い活性が最
大となるまで継続すればよい。
【００１６】不斉加水分解反応は、上記に準じて培養し
た微生物の培養液から分離した菌体または菌体処理物
（乾燥菌体、菌体の破砕物、分離された粗・精製酵素、
固定化菌体・酵素など）を水または緩衝液等の水性媒体
中に懸濁し、これに一般式[I]で示されるラセミ体のα
−ヒドロキシニトリルのニトリルまたはこのニトリルに
対応するアルデヒドと青酸の混合物を接触させることに
よって行われる。
た微生物の培養液から分離した菌体または菌体処理物
（乾燥菌体、菌体の破砕物、分離された粗・精製酵素、
固定化菌体・酵素など）を水または緩衝液等の水性媒体
中に懸濁し、これに一般式[I]で示されるラセミ体のα
−ヒドロキシニトリルのニトリルまたはこのニトリルに
対応するアルデヒドと青酸の混合物を接触させることに
よって行われる。
【００１７】本発明においては、前述のように一般式
[I] で示されるα−ヒドロキシニトリルをラセミ化する
ために、反応中、系を中性付近ないしは塩基性に保つこ
とが必須であり、pHを 4〜11、好ましくは 6.5〜10に調
整する。
[I] で示されるα−ヒドロキシニトリルをラセミ化する
ために、反応中、系を中性付近ないしは塩基性に保つこ
とが必須であり、pHを 4〜11、好ましくは 6.5〜10に調
整する。
【００１８】基質の濃度は、一般式[I] で示されるラセ
ミ体のα−ヒドロキシニトリルに対応するアルデヒドや
青酸に対する酵素の感受性により一概に特定し得ない
が、通常、一般式[I] で示されるラセミ体のα−ヒドロ
キシニトリルとして 0.1〜10重量％、好ましくは 0.2〜
5.0 重量％に相当する濃度である。
ミ体のα−ヒドロキシニトリルに対応するアルデヒドや
青酸に対する酵素の感受性により一概に特定し得ない
が、通常、一般式[I] で示されるラセミ体のα−ヒドロ
キシニトリルとして 0.1〜10重量％、好ましくは 0.2〜
5.0 重量％に相当する濃度である。
【００１９】尚、アルデヒドによる酵素阻害を軽減させ
るために、亜硫酸ナトリウム、酸性亜硫酸ナトリウム、
亜ジチオン酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、酸性亜硫酸
カリウム、亜ジチオン酸カリウム、亜硫酸アンモニウ
ム、酸性亜硫酸アンモニウム、亜ジチオン酸アンモニウ
ムなどの添加が有効である。添加量は、反応液中に１〜
1000mMの範囲でよい。
るために、亜硫酸ナトリウム、酸性亜硫酸ナトリウム、
亜ジチオン酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、酸性亜硫酸
カリウム、亜ジチオン酸カリウム、亜硫酸アンモニウ
ム、酸性亜硫酸アンモニウム、亜ジチオン酸アンモニウ
ムなどの添加が有効である。添加量は、反応液中に１〜
1000mMの範囲でよい。
【００２０】基質に対する微生物の使用量は、乾燥菌体
として0.01〜5.0 重量％、反応温度は０〜50℃、好まし
くは10〜30℃で 0.1〜100 時間反応させればよい。
として0.01〜5.0 重量％、反応温度は０〜50℃、好まし
くは10〜30℃で 0.1〜100 時間反応させればよい。
【００２１】得られた一般式[II]で示されるフェニル基
を有する光学活性α−ヒドロキシカルボン酸は、公知の
方法、例えば遠心分離により微生物を除き、さらに必要
に応じ限外ろ過などにより顆粒成分と蛋白、多糖成分の
除去を行い、また必要であれば活性炭処理を施した後、
減圧濃縮、または酸性下での有機溶媒による抽出を行
い、ベンゼンなどを用いて再結晶を繰り返すことにより
高純度結晶を得ることができる。
を有する光学活性α−ヒドロキシカルボン酸は、公知の
方法、例えば遠心分離により微生物を除き、さらに必要
に応じ限外ろ過などにより顆粒成分と蛋白、多糖成分の
除去を行い、また必要であれば活性炭処理を施した後、
減圧濃縮、または酸性下での有機溶媒による抽出を行
い、ベンゼンなどを用いて再結晶を繰り返すことにより
高純度結晶を得ることができる。
【００２２】
【発明の効果】本発明によれば、光学純度が高く一般式
[II]で示されるフェニル基を有する光学活性α−ヒドロ
キシカルボン酸への選択性がほぼ定量的であり、工業的
要望を満足し得る該α−ヒドロキシカルボン酸の製法が
提供される。
[II]で示されるフェニル基を有する光学活性α−ヒドロ
キシカルボン酸への選択性がほぼ定量的であり、工業的
要望を満足し得る該α−ヒドロキシカルボン酸の製法が
提供される。
【００２３】
【実施例】次に、本発明を実施例により更に詳細に説明
する。
する。
【００２４】実施例１ Ｌ−３−フェニル乳酸の製造 (1) 培養 ゴルドナ テラエ MA-1 菌株を、誘導剤として0.05％ベ
ンジルシアニドを添加した下記の培地中で、30℃、72時
間好気的に培養した。
ンジルシアニドを添加した下記の培地中で、30℃、72時
間好気的に培養した。
【００２５】 グリセロール 20g 酵母エキス 3g リン酸一カリウム 6.8g リン酸二ナトリウム 7.1g 硫酸ナトリウム 2.8g 塩化マグネシウム 0.4g 塩化カルシウム 0.04g 硫酸マンガン 0.03g 塩化鉄 0.006g 硫酸亜鉛 0.003g 蒸留水 1000ml ｐＨ 7.5
【００２６】(2) 不斉加水分解反応 培地から菌体を採取し、遠心分離により菌体を50mMリン
酸緩衝液(pH 8.2)で洗浄した。得られた沈殿菌体を10mM
フェニルラクトニトリルを含む上記緩衝液に懸濁し、30
℃で96時間振盪しながら反応を行った。使用した菌体は
ＯＤ630 ＝20であった。
酸緩衝液(pH 8.2)で洗浄した。得られた沈殿菌体を10mM
フェニルラクトニトリルを含む上記緩衝液に懸濁し、30
℃で96時間振盪しながら反応を行った。使用した菌体は
ＯＤ630 ＝20であった。
【００２７】反応終了後、反応液を遠心し菌体を除去し
た後、上清中のフェニル乳酸含量を液体クロマトグラフ
ィー（カラム；Wakosil ODS 5C18、キャリア液；0.1Mリ
ン酸：アセトニトリル＝３：１、モニター；254nm)で分
析した。また、生成したフェニル乳酸の分離は 6N NaOH
で pH 12とし、等量の酢酸エチルエステルで未反応のフ
ェニルラクトニトリルを２回抽出除去後、水層を硫酸で
pH 1.2 とし、等量の酢酸エチルエステルを加え２回抽
出した。酢酸エチルエステル層を分取し、エバポレータ
ーで蒸発乾固後、水に溶解させ、光学分割カラム(MCI g
el CRS-10W、キャリアー液；2mM CuSO4 ・5H2O：アセト
ニトリル＝85：15）を用いて分析した。結果を表１に示
す。
た後、上清中のフェニル乳酸含量を液体クロマトグラフ
ィー（カラム；Wakosil ODS 5C18、キャリア液；0.1Mリ
ン酸：アセトニトリル＝３：１、モニター；254nm)で分
析した。また、生成したフェニル乳酸の分離は 6N NaOH
で pH 12とし、等量の酢酸エチルエステルで未反応のフ
ェニルラクトニトリルを２回抽出除去後、水層を硫酸で
pH 1.2 とし、等量の酢酸エチルエステルを加え２回抽
出した。酢酸エチルエステル層を分取し、エバポレータ
ーで蒸発乾固後、水に溶解させ、光学分割カラム(MCI g
el CRS-10W、キャリアー液；2mM CuSO4 ・5H2O：アセト
ニトリル＝85：15）を用いて分析した。結果を表１に示
す。
【００２８】
【００２９】実施例２ Ｌ−３−フェニル乳酸の製造 実施例１と同様にして得た沈殿菌体を10mMフェニルアル
デヒドと10mMシアン化カリウムを含むリン酸緩衝液(pH
8.2)に懸濁し、30℃で96時間振盪しながら反応を行っ
た。使用した菌体はＯＤ630 ＝20であった。反応終了
後、反応液を遠心し菌体を除去した後、上清中のフェニ
ル乳酸含量と光学純度を実施例１に示した方法で分析し
た。結果を表２に示す。
デヒドと10mMシアン化カリウムを含むリン酸緩衝液(pH
8.2)に懸濁し、30℃で96時間振盪しながら反応を行っ
た。使用した菌体はＯＤ630 ＝20であった。反応終了
後、反応液を遠心し菌体を除去した後、上清中のフェニ
ル乳酸含量と光学純度を実施例１に示した方法で分析し
た。結果を表２に示す。
【００３０】
【００３１】実施例３ Ｌ−４−フェニル−α−ヒドロキシ酪酸の製造 実施例１と同様にして得た沈殿菌体を10mM４−フェニル
−α−ヒドロキシブチロニトリルを含むリン酸緩衝液(p
H 8.2)に懸濁し、30℃で96時間振盪しながら反応を行っ
た。さらに、アルデヒドによる酵素阻害を軽減するため
に 100mM亜硫酸ナトリウムを加えた反応も同様に行っ
た。使用した菌体はＯＤ630 ＝20であった。反応終了
後、反応液を遠心し菌体を除去した後、上清中の４−フ
ェニル−α−ヒドロキシ酪酸含量と光学純度を実施例１
に示した方法で分析した。結果を表３に示す。
−α−ヒドロキシブチロニトリルを含むリン酸緩衝液(p
H 8.2)に懸濁し、30℃で96時間振盪しながら反応を行っ
た。さらに、アルデヒドによる酵素阻害を軽減するため
に 100mM亜硫酸ナトリウムを加えた反応も同様に行っ
た。使用した菌体はＯＤ630 ＝20であった。反応終了
後、反応液を遠心し菌体を除去した後、上清中の４−フ
ェニル−α−ヒドロキシ酪酸含量と光学純度を実施例１
に示した方法で分析した。結果を表３に示す。
【００３２】
【００３３】実施例４ Ｄ−マンデル酸の製造 実施例１と同様にして得た沈殿菌体を10mMマンデロニト
リルを含むリン酸緩衝液(pH 8.2)に懸濁し、30℃で24時
間振盪しながら反応を行った。使用した菌体はＯＤ630
＝20であった。反応終了後、反応液を遠心し菌体を除去
した後、上清中のマンデル酸含量と光学純度を実施例１
に示した方法で分析した。結果を表４に示す。
リルを含むリン酸緩衝液(pH 8.2)に懸濁し、30℃で24時
間振盪しながら反応を行った。使用した菌体はＯＤ630
＝20であった。反応終了後、反応液を遠心し菌体を除去
した後、上清中のマンデル酸含量と光学純度を実施例１
に示した方法で分析した。結果を表４に示す。
【００３４】
【００３５】実施例５ Ｄ−マンデル酸およびその誘導体の製造 実施例１と同様にして得た沈殿菌体を所定濃度の基質を
含むリン酸緩衝液(pH8.2)に懸濁し、30℃で所定時間振
盪しながら反応を行った。使用した菌体はＯＤ630 ＝10
〜30であった。反応終了後、各々の反応液を遠心し菌体
を除去した後、上清中のそれぞれの基質に対応するマン
デル酸およびマンデル酸誘導体の含量と光学純度を実施
例１に示した方法で分析した。結果を表５に示す。
含むリン酸緩衝液(pH8.2)に懸濁し、30℃で所定時間振
盪しながら反応を行った。使用した菌体はＯＤ630 ＝10
〜30であった。反応終了後、各々の反応液を遠心し菌体
を除去した後、上清中のそれぞれの基質に対応するマン
デル酸およびマンデル酸誘導体の含量と光学純度を実施
例１に示した方法で分析した。結果を表５に示す。
【００３６】
Claims (2)
- 【請求項１】 ゴルドナ（Ｇｏｒｄｏｎａ）属に属し下
記一般式［Ｉ］で示されるラセミ体のα−ヒドロキシニ
トリルのニトリル基を不斉加水分解する能力を有する微
生物または該処理物を、中性ないし塩基性の水性媒体中
で、基質である下記一般式［Ｉ］で示されるラセミ体の
α−ヒドロキシニトリルに作用させることにより、該基
質から直接優位量の下記一般式［ＩＩ］で示されるフェ
ニル基を有する光学活性α−ヒドロキシカルボン酸を生
成せしめることを特徴とするフェニル基を有する光学活
性α−ヒドロキシカルボン酸の製造法。 〔式中、Ｘはオルト位、メタ位またはパラ位置換を意味
し、置換基は水素、水酸基、炭素数１〜３の脂肪族飽和
アルキル基、炭素数１〜３の脂肪族飽和アルコキシ基、
チオアルキル基、ハロゲン原子、フェニル基、フェノキ
シ基、アミノ基またはニトロ基，ｎは０〜２の整数を表
す。〕 - 【請求項２】 ゴルドナ（Ｇｏｒｄｏｎａ）属に属し下
記一般式［Ｉ］で示されるラセミ体のα−ヒドロキシニ
トリルのニトリル基を不斉加水分解する能力を有する微
生物または該処理物を、中性ないし塩基性の水性媒体中
で、基質である下記一般式［Ｉ］で示されるラセミ体の
α−ヒドロキシニトリルに対応するアルデヒドと青酸の
混合物に作用させることにより、該基質から直接優位量
の下記一般式［ＩＩ］で示されるフェニル基を有する光
学活性α−ヒドロキシカルボン酸を生成せしめることを
特徴とするフェニル基を有する光学活性α−ヒドロキシ
カルボン酸の製造法。 〔式中、Ｘはオルト位、メタ位またはパラ位置換を意味
し、置換基は水素、水酸基、炭素数１〜３の脂肪族飽和
アルキル基、炭素数１〜３の脂肪族飽和アルコキシ基、
チオアルキル基、ハロゲン原子、フェニル基、フェノキ
シ基、アミノ基またはニトロ基，ｎは０〜２の整数を表
す。〕
Priority Applications (5)
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|---|---|---|---|
| JP5037275A JP2720140B2 (ja) | 1993-02-03 | 1993-02-03 | フェニル基を有する光学活性α−ヒドロキシカルボン酸の製造法 |
| EP94300704A EP0610048B1 (en) | 1993-02-03 | 1994-01-31 | Process for producing optically active alpha-hydrocarboxylic acid having phenyl group |
| SG1996003174A SG50514A1 (en) | 1993-02-03 | 1994-01-31 | Process for producing optically active alpha-hydrocarboxylic acid having phenyl group |
| DE69420754T DE69420754T2 (de) | 1993-02-03 | 1994-01-31 | Verfahren zur Herstellung von Phenylgruppe enthaltende optisch-aktiven Alpha-Hydroxycarbonsäuren |
| US08/191,164 US5580765A (en) | 1993-02-03 | 1994-02-03 | Process for producing optically active a-hydroxycarboxylic acid having phenyl group using gordona terrae |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5037275A JP2720140B2 (ja) | 1993-02-03 | 1993-02-03 | フェニル基を有する光学活性α−ヒドロキシカルボン酸の製造法 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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|---|---|
| US (1) | US5580765A (ja) |
| EP (1) | EP0610048B1 (ja) |
| JP (1) | JP2720140B2 (ja) |
| DE (1) | DE69420754T2 (ja) |
| SG (1) | SG50514A1 (ja) |
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| JP3163224B2 (ja) * | 1994-10-14 | 2001-05-08 | 三菱レイヨン株式会社 | 菌体または固定化菌体の懸濁液の保存方法 |
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| DE19848129A1 (de) | 1998-10-19 | 2000-04-20 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung chiraler Carbonsäuren aus Nitrilen mit Hilfe einer Nitrilase oder Mikroorganismen, die ein Gen für die Nitrilase enthalten |
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| FR2822460B1 (fr) * | 2001-03-26 | 2005-04-29 | Rhodia Chimie Sa | Procede de preparation enantioselectif d'acides carboxyliques optiquement actifs par hydrolyse enzymatique de nitriles |
| WO2003006501A2 (en) * | 2001-07-11 | 2003-01-23 | Maxygen Holdings, Ltd. | G-csf conjugates |
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| AU2003251523A1 (en) | 2002-06-13 | 2003-12-31 | Diversa Corporation | Processes for making (r)-ethyl 4-cyano-3-hydroxybutyric acid |
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| JP4584242B2 (ja) | 2003-02-27 | 2010-11-17 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア | 改変されたニトリラーゼおよびカルボン酸の製造方法におけるその使用 |
| AT412092B (de) * | 2003-02-27 | 2004-09-27 | Dsm Fine Chem Austria Gmbh | Verfahren zur herstellung chiraler alpha-hydroxycarbonsäuren durch enzymatische hydrolyse von chiralen cyanhydrinen |
| US7198927B2 (en) | 2004-12-22 | 2007-04-03 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Enzymatic production of glycolic acid |
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| KR100722155B1 (ko) * | 2006-01-05 | 2007-05-28 | 엔자이텍 주식회사 | 효소적 방법에 의한 광학활성 2-클로로만델릭산 에스테르와 2-클로로만델릭산의 제조 방법 |
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| US7871802B2 (en) | 2007-10-31 | 2011-01-18 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Process for enzymatically converting glycolonitrile to glycolic acid |
| US7741088B2 (en) | 2007-10-31 | 2010-06-22 | E.I. Dupont De Nemours And Company | Immobilized microbial nitrilase for production of glycolic acid |
| CN109781921A (zh) * | 2019-03-22 | 2019-05-21 | 上海海洋大学 | 一种利用反相高效液相色谱法快速检测苯乳酸含量的方法 |
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| DK314989A (da) * | 1988-06-27 | 1989-12-28 | Asahi Chemical Ind | Fremgangsmaade til fremstilling af optisk aktive alfa-substituerede organiske syrer, samt mikroorganismer og enzymer anvendelige ved fremgangsmaaden |
| US5283193A (en) * | 1988-06-27 | 1994-02-01 | Asahi Kasei Kogyo K.K. | Process for producing optically active α-substituted organic acid and microorganism and enzyme used therefor |
| EP0449648B1 (en) * | 1990-03-30 | 1999-05-12 | Nitto Chemical Industry Co., Ltd. | Process for producing R(-)-mandelic acid and derivatives thereof |
| DE69126762T2 (de) * | 1990-11-14 | 1997-10-23 | Nitto Chemical Industry Co Ltd | Biologisches Verfahren zur Herstellung von Alpha-Hydroxyamid und Alpha-Hydroxysäure |
-
1993
- 1993-02-03 JP JP5037275A patent/JP2720140B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-01-31 DE DE69420754T patent/DE69420754T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-01-31 SG SG1996003174A patent/SG50514A1/en unknown
- 1994-01-31 EP EP94300704A patent/EP0610048B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-02-03 US US08/191,164 patent/US5580765A/en not_active Expired - Lifetime
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