JPH0889267A - Ｓ−（＋）−マンデルアミドおよびその誘導体の製造法 - Google Patents
Ｓ−（＋）−マンデルアミドおよびその誘導体の製造法Info
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- JPH0889267A JPH0889267A JP25156294A JP25156294A JPH0889267A JP H0889267 A JPH0889267 A JP H0889267A JP 25156294 A JP25156294 A JP 25156294A JP 25156294 A JP25156294 A JP 25156294A JP H0889267 A JPH0889267 A JP H0889267A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】微生物の作用により、ラセミ体のシアンヒドリ
ン、またはアルデヒドと青酸から光学活性なＳ−（＋）
−マンデルアミドまたはその誘導体を製造する際に、ア
ルデヒドを、反応系内に溶解し得る範囲内で、且つシア
ンヒドリンに対しては１〜１０倍モル、また青酸に対し
ては２〜１１倍モル添加する。 【効果】酵素の失活を抑制し、ラセミ体のシアンヒドリ
ン、またはアルデヒドと青酸から直接優位量（５０〜１
００％）のＳ−（＋）−マンデルアミド等を高収率で生
産、蓄積することができ、原料の全てを化学量論的に目
的物に変換することも可能である。
ン、またはアルデヒドと青酸から光学活性なＳ−（＋）
−マンデルアミドまたはその誘導体を製造する際に、ア
ルデヒドを、反応系内に溶解し得る範囲内で、且つシア
ンヒドリンに対しては１〜１０倍モル、また青酸に対し
ては２〜１１倍モル添加する。 【効果】酵素の失活を抑制し、ラセミ体のシアンヒドリ
ン、またはアルデヒドと青酸から直接優位量（５０〜１
００％）のＳ−（＋）−マンデルアミド等を高収率で生
産、蓄積することができ、原料の全てを化学量論的に目
的物に変換することも可能である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は微生物を用いてラセミ体
のシアンヒドリンまたはこのシアンヒドリンに対応する
アルデヒドと青酸から光学活性なＳ−（＋）−マンデル
アミドおよびその誘導体を製造する方法に関する。Ｓ−
（＋）−マンデルアミドおよびその誘導体は、加水分解
することによりＳ−（＋）−マンデル酸およびその誘導
体に変換することができる。Ｓ−（＋）−マンデルアミ
ドおよびＳ−（＋）−マンデル酸ならびにこれらの誘導
体は医・農薬の合成原料として重要な物質である。
のシアンヒドリンまたはこのシアンヒドリンに対応する
アルデヒドと青酸から光学活性なＳ−（＋）−マンデル
アミドおよびその誘導体を製造する方法に関する。Ｓ−
（＋）−マンデルアミドおよびその誘導体は、加水分解
することによりＳ−（＋）−マンデル酸およびその誘導
体に変換することができる。Ｓ−（＋）−マンデルアミ
ドおよびＳ−（＋）−マンデル酸ならびにこれらの誘導
体は医・農薬の合成原料として重要な物質である。
【０００２】
【従来技術】微生物によりニトリル化合物を水和して対
応するアミドを生産する技術に関する発明は多く、不斉
炭素を分子内に有するニトリルからのアミドの生産に関
しては、バチルス属、バクテリジューム属、マイクロコ
カス属、ブレビバクテリウム属に属する微生物をＤ，Ｌ
−α−アミノニトリルに作用させＬ−α−アミノ酸とＤ
−α−アミノアミドの混合物を得る方法（特表昭５６−
５００３１号公報参照）、ブレビバクテリウム属Ｒ３１
２株のＡ４変異株を用いてラセミ体のα−アミノ−γ−
メチルチオブチロニトリル、α−アミノプロピオニトリ
ル、α−アミノブチロニトリル、α−アミノ−β−フェ
ニルプロピオニトリル、α−アミノ−γ−メチルペンチ
ルニトリルおよびα−アミノイソバレロニトリルから対
応するＬ−体のアミノ酸とＤ−体のアミノアミドを５０
％づつの混合比で得る方法〔Adv.Biochem. Engineer.
１４ １（１９８０）参照）、シュードモナス属、ロド
コッカス属、ノカルディア属によるＤ，Ｌ−アミノニト
リルから光学活性なα−アミノ酸および／またはα−ア
ミノアミドを生産する方法（特開平２−３１６９４号公
報参照）、およびＤ，Ｌ−α−アミノニトリルから立体
特異的加水分解酵素により約４０％eeのＬ−α−アミノ
アミドを得る方法（特表昭６３−５００００４号公報参
照）などが知られている。
応するアミドを生産する技術に関する発明は多く、不斉
炭素を分子内に有するニトリルからのアミドの生産に関
しては、バチルス属、バクテリジューム属、マイクロコ
カス属、ブレビバクテリウム属に属する微生物をＤ，Ｌ
−α−アミノニトリルに作用させＬ−α−アミノ酸とＤ
−α−アミノアミドの混合物を得る方法（特表昭５６−
５００３１号公報参照）、ブレビバクテリウム属Ｒ３１
２株のＡ４変異株を用いてラセミ体のα−アミノ−γ−
メチルチオブチロニトリル、α−アミノプロピオニトリ
ル、α−アミノブチロニトリル、α−アミノ−β−フェ
ニルプロピオニトリル、α−アミノ−γ−メチルペンチ
ルニトリルおよびα−アミノイソバレロニトリルから対
応するＬ−体のアミノ酸とＤ−体のアミノアミドを５０
％づつの混合比で得る方法〔Adv.Biochem. Engineer.
１４ １（１９８０）参照）、シュードモナス属、ロド
コッカス属、ノカルディア属によるＤ，Ｌ−アミノニト
リルから光学活性なα−アミノ酸および／またはα−ア
ミノアミドを生産する方法（特開平２−３１６９４号公
報参照）、およびＤ，Ｌ−α−アミノニトリルから立体
特異的加水分解酵素により約４０％eeのＬ−α−アミノ
アミドを得る方法（特表昭６３−５００００４号公報参
照）などが知られている。
【０００３】また、α−アミノニトリル類からＬ−アミ
ノ酸類を製造する際に、対応するアルデヒドを存在させ
ることによりアミド類の副生を抑え、Ｌ−アミノ酸を選
択的に産生させる方法（特開平１−３１７３９３号公報
参照）があるが、この方法におけるアルデヒドの添加は
アミド類の副生を防止することを意図したものであり、
対応するアルデヒドを添加することによる反応速度およ
び生産性の改良を目的としたものではない。
ノ酸類を製造する際に、対応するアルデヒドを存在させ
ることによりアミド類の副生を抑え、Ｌ−アミノ酸を選
択的に産生させる方法（特開平１−３１７３９３号公報
参照）があるが、この方法におけるアルデヒドの添加は
アミド類の副生を防止することを意図したものであり、
対応するアルデヒドを添加することによる反応速度およ
び生産性の改良を目的としたものではない。
【０００４】一方、本発明者の一部らは、これらの方法
が光学活性なアミドとアミノ酸の混合物を与えるため
に、純粋な一方の化合物を取得するには煩雑な分離操作
が要求されること、また原理的にもアミドの収率が半分
にしか達し得ないことなど、製造上、技術的に解決すべ
き諸々の問題が見られることから、原料のすべてを一方
の光学活性体に変換する手法の開発を行い、微生物を用
いてラセミ体のマンデロニトリルおよびその誘導体、ま
たはベンズアルデヒドおよびその誘導体と青酸の混合物
から直接優位量の光学活性なＳ−（＋）−マンデルアミ
ドおよびその誘導体を製造する方法（特開平４−２２２
５９１号公報参照）を提案した。
が光学活性なアミドとアミノ酸の混合物を与えるため
に、純粋な一方の化合物を取得するには煩雑な分離操作
が要求されること、また原理的にもアミドの収率が半分
にしか達し得ないことなど、製造上、技術的に解決すべ
き諸々の問題が見られることから、原料のすべてを一方
の光学活性体に変換する手法の開発を行い、微生物を用
いてラセミ体のマンデロニトリルおよびその誘導体、ま
たはベンズアルデヒドおよびその誘導体と青酸の混合物
から直接優位量の光学活性なＳ−（＋）−マンデルアミ
ドおよびその誘導体を製造する方法（特開平４−２２２
５９１号公報参照）を提案した。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】この特開平４−２２２
５９１号公報記載の方法は、原料のラセミ体シアンヒド
リンが水溶液中でベンズアルデヒドと青酸に解離平衡す
ることにより容易にラセミ化する性質を利用し、このラ
セミ化と光学特異的なニトリル水和活性を有する微生物
とを組合わせることにより、シアンヒドリンの全てをＳ
−体マンデルアミドおよびその誘導体に変換するもので
ある。しかしながら、反応時に酵素活性が除々に低下
し、菌体当りのマンデルアミド生産性が充分に高いもの
ではなかった。したがって、如何に酵素の失活を抑制
し、Ｓ−（＋）−マンデルアミドおよびその誘導体の生
産性を上昇させるかが課題であった。
５９１号公報記載の方法は、原料のラセミ体シアンヒド
リンが水溶液中でベンズアルデヒドと青酸に解離平衡す
ることにより容易にラセミ化する性質を利用し、このラ
セミ化と光学特異的なニトリル水和活性を有する微生物
とを組合わせることにより、シアンヒドリンの全てをＳ
−体マンデルアミドおよびその誘導体に変換するもので
ある。しかしながら、反応時に酵素活性が除々に低下
し、菌体当りのマンデルアミド生産性が充分に高いもの
ではなかった。したがって、如何に酵素の失活を抑制
し、Ｓ−（＋）−マンデルアミドおよびその誘導体の生
産性を上昇させるかが課題であった。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決すべく研究を重ねた結果、反応時に原料のシアン
ヒドリンに対応するアルデヒドを特定量添加することに
より酵素の失活を抑制し得ることを見い出し本発明を完
成した。
を解決すべく研究を重ねた結果、反応時に原料のシアン
ヒドリンに対応するアルデヒドを特定量添加することに
より酵素の失活を抑制し得ることを見い出し本発明を完
成した。
【０００７】すなわち、本発明は、下記一般式（１）で
示されるラセミ体のシアンヒドリン、または該シアンヒ
ドリンに対応する下記一般式（２）で示されるアルデヒ
ドと青酸に、中性または塩基性の水性媒体中で、該シア
ンヒドリンのシアン基を立体特異的に水和する能力を有
する微生物またはその処理物を作用させることにより、
一般式（１）で示されるラセミ体のシアンヒドリンまた
は一般式（２）で示されるアルデヒドと青酸から直接優
位量の下記一般式（３）で示される光学活性なＳ−
（＋）−マンデルアミドまたはその誘導体を製造する方
法において、該シアンヒドリンに対応する一般式（２）
で示されるアルデヒドを、反応系内に溶解し得る範囲内
で、且つ一般式（１）で示されるラセミ体のシアンヒド
リンに対しては１〜１０倍モル、また青酸に対しては２
〜１１倍モル添加することを特徴とするＳ−（＋）−マ
ンデルアミドおよびその誘導体の製造法、である。
示されるラセミ体のシアンヒドリン、または該シアンヒ
ドリンに対応する下記一般式（２）で示されるアルデヒ
ドと青酸に、中性または塩基性の水性媒体中で、該シア
ンヒドリンのシアン基を立体特異的に水和する能力を有
する微生物またはその処理物を作用させることにより、
一般式（１）で示されるラセミ体のシアンヒドリンまた
は一般式（２）で示されるアルデヒドと青酸から直接優
位量の下記一般式（３）で示される光学活性なＳ−
（＋）−マンデルアミドまたはその誘導体を製造する方
法において、該シアンヒドリンに対応する一般式（２）
で示されるアルデヒドを、反応系内に溶解し得る範囲内
で、且つ一般式（１）で示されるラセミ体のシアンヒド
リンに対しては１〜１０倍モル、また青酸に対しては２
〜１１倍モル添加することを特徴とするＳ−（＋）−マ
ンデルアミドおよびその誘導体の製造法、である。
【０００８】
【化２】 〔Ｘは水素、メチル基、メトキシ基、イソプロピル基、
ヒドロキシル基、ニトロ基、スルホン基またはハロゲン
を表す〕
ヒドロキシル基、ニトロ基、スルホン基またはハロゲン
を表す〕
【０００９】本発明においては、微生物反応の基質とし
て、一般式（１）で示されるラセミ体のシアンヒドリ
ン、またはこのシアンヒドリンに対応する、すなわち水
溶液中で該シアンヒドリンと解離平衡する下記一般式
（２）で示されるアルデヒドと青酸を使用する。
て、一般式（１）で示されるラセミ体のシアンヒドリ
ン、またはこのシアンヒドリンに対応する、すなわち水
溶液中で該シアンヒドリンと解離平衡する下記一般式
（２）で示されるアルデヒドと青酸を使用する。
【００１０】一般式（１）のシアンヒドリンとしては、
例えば、マンデロニトリル、２−メチルマンデロニトリ
ル、２−メトキシマンデロニトリル、４−イソプロピル
マンデロニトリル、４−ヒドロキシマンデロニトリル、
３−および４−ニトロマンデロニトリル、３−スルホマ
ンデロニトリル、２−、３−および４−クロルマンデロ
ニトリル、２−、３−および４−ブロムマンデロニトリ
ルが挙げられ、一般式（２）で示されるアルデヒドは、
ベンズアルデヒド等のそれぞれ一般式（１）のシアンヒ
ドリンに対応するアルデヒドである。
例えば、マンデロニトリル、２−メチルマンデロニトリ
ル、２−メトキシマンデロニトリル、４−イソプロピル
マンデロニトリル、４−ヒドロキシマンデロニトリル、
３−および４−ニトロマンデロニトリル、３−スルホマ
ンデロニトリル、２−、３−および４−クロルマンデロ
ニトリル、２−、３−および４−ブロムマンデロニトリ
ルが挙げられ、一般式（２）で示されるアルデヒドは、
ベンズアルデヒド等のそれぞれ一般式（１）のシアンヒ
ドリンに対応するアルデヒドである。
【００１１】基質としてシアンヒドリンを用いる場合、
シアンヒドリンの濃度は、通常０．１〜１０重量％、好
ましくは０．２〜５．０重量％であり、このシアンヒド
リンに対応するアルデヒドを反応系内に溶解し得る範囲
内で、且つ該シアンヒドリンに対して１〜１０倍モル、
好ましくは１〜５倍モル添加する。また、基質としてア
ルデヒドと青酸を用いる場合には、青酸濃度は、通常
０．１〜１．０重量％、好ましくは０．１〜０．５重量
％であり、アルデヒドを反応系内に溶解し得る範囲内
で、且つ青酸に対して２〜１１倍モル、好ましくは２〜
６倍モル添加する。
シアンヒドリンの濃度は、通常０．１〜１０重量％、好
ましくは０．２〜５．０重量％であり、このシアンヒド
リンに対応するアルデヒドを反応系内に溶解し得る範囲
内で、且つ該シアンヒドリンに対して１〜１０倍モル、
好ましくは１〜５倍モル添加する。また、基質としてア
ルデヒドと青酸を用いる場合には、青酸濃度は、通常
０．１〜１．０重量％、好ましくは０．１〜０．５重量
％であり、アルデヒドを反応系内に溶解し得る範囲内
で、且つ青酸に対して２〜１１倍モル、好ましくは２〜
６倍モル添加する。
【００１２】アルデヒドの添加量は、使用する基質の種
類、濃度により異なるが、上記範囲内で適宜決めること
ができる。添加量が反応系内に溶解し得る範囲を越える
と、アルデヒドの油滴が生成し、この油滴に基質が移行
するためか、反応速度が低下する。また、上記下限値未
満では効果が少なく、一方上限値地を越えても効果は頭
打ちとなる。
類、濃度により異なるが、上記範囲内で適宜決めること
ができる。添加量が反応系内に溶解し得る範囲を越える
と、アルデヒドの油滴が生成し、この油滴に基質が移行
するためか、反応速度が低下する。また、上記下限値未
満では効果が少なく、一方上限値地を越えても効果は頭
打ちとなる。
【００１３】反応媒体としては、基質であるシアンヒド
リンのラセミ化を促進するために、水または緩衝液など
の水性媒体を用い、反応系を中性付近ないしは塩基性、
すなわちｐＨ４〜１１、好ましくはｐＨ６〜１０に調整
する。
リンのラセミ化を促進するために、水または緩衝液など
の水性媒体を用い、反応系を中性付近ないしは塩基性、
すなわちｐＨ４〜１１、好ましくはｐＨ６〜１０に調整
する。
【００１４】本発明に用いられる微生物としては、例え
ば、ロドコッカス属の微生物としてＡＴＣＣ ３３２７
８、ロドコッカス ｓｐ．ＨＮ６−１（微工研菌寄第１
１７７３号）、ロドコッカス ｓｐ．ＨＴ４０−６（微
工研菌寄第１１７７４号）、ロドコッカス ｓｐ．ＰＮ
４２−２（微工研菌寄第１１７７５号）およびシュード
モナス属の微生物としてシュードモナス クロロラフィ
ス Ｂ２３（微工研条寄第１８７号）を挙げることがで
きる。
ば、ロドコッカス属の微生物としてＡＴＣＣ ３３２７
８、ロドコッカス ｓｐ．ＨＮ６−１（微工研菌寄第１
１７７３号）、ロドコッカス ｓｐ．ＨＴ４０−６（微
工研菌寄第１１７７４号）、ロドコッカス ｓｐ．ＰＮ
４２−２（微工研菌寄第１１７７５号）およびシュード
モナス属の微生物としてシュードモナス クロロラフィ
ス Ｂ２３（微工研条寄第１８７号）を挙げることがで
きる。
【００１５】次に本発明の一般的実施態様について説明
する。本発明に使用される微生物の培養は資化し得るグ
ルコース、グリセロール、サッカロースなどの炭素源、
尿素、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウムなどの窒素
源、生育に必須の塩化マグネシウム、塩化カルシウム、
塩化鉄などの無機栄養素などを含有した通常の培地を用
いて行なわれる。また、これらの培地に酵母エキス、肉
エキス、糖蜜などの天然培地を添加したものも使用する
ことができる。さらに、培養初期から中期に生育を大き
く阻害しない濃度のベンゾニトリル、ベンジルシアニ
ド、イソブチロニトリルなどのニトリル類、ε−カプロ
ラクタムなどのラクタム類、イソブチルアミド、フェニ
ルアセトアミドなどのアミド類を酵素誘導物質として、
またコバルトイオン、鉄イオンなどを酵素の補欠分子族
として添加することにより高い酵素活性が得られる。
する。本発明に使用される微生物の培養は資化し得るグ
ルコース、グリセロール、サッカロースなどの炭素源、
尿素、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウムなどの窒素
源、生育に必須の塩化マグネシウム、塩化カルシウム、
塩化鉄などの無機栄養素などを含有した通常の培地を用
いて行なわれる。また、これらの培地に酵母エキス、肉
エキス、糖蜜などの天然培地を添加したものも使用する
ことができる。さらに、培養初期から中期に生育を大き
く阻害しない濃度のベンゾニトリル、ベンジルシアニ
ド、イソブチロニトリルなどのニトリル類、ε−カプロ
ラクタムなどのラクタム類、イソブチルアミド、フェニ
ルアセトアミドなどのアミド類を酵素誘導物質として、
またコバルトイオン、鉄イオンなどを酵素の補欠分子族
として添加することにより高い酵素活性が得られる。
【００１６】使用する培地のｐＨは４〜１０、培養温度
は５〜５０℃の範囲で選べばよく、培養は１〜１４日程
度好気的に行い活性が最大となるまで継続すればよい。
は５〜５０℃の範囲で選べばよく、培養は１〜１４日程
度好気的に行い活性が最大となるまで継続すればよい。
【００１７】一般式（１）で示されるシアンヒドリン等
の水和反応は、上記の方法にて培養した微生物の菌体ま
たは菌体処理物（菌体の破砕物、粗・精製酵素、固定化
菌体・酵素等）を所定のｐＨに調製した水または緩衝液
などの水性媒体中で、所定量の基質およびアルデヒドに
接触させることによって行われる。
の水和反応は、上記の方法にて培養した微生物の菌体ま
たは菌体処理物（菌体の破砕物、粗・精製酵素、固定化
菌体・酵素等）を所定のｐＨに調製した水または緩衝液
などの水性媒体中で、所定量の基質およびアルデヒドに
接触させることによって行われる。
【００１８】微生物等の使用量は基質に対して乾燥菌体
として０．０１〜５．０重量％であり、反応温度は０〜
５０℃、好ましくは１０〜３０℃、反応時間は１〜７２
時間程度である。
として０．０１〜５．０重量％であり、反応温度は０〜
５０℃、好ましくは１０〜３０℃、反応時間は１〜７２
時間程度である。
【００１９】かくして、一般式（１）で示されるラセミ
体のシアンヒドリンまたは一般式（２）で示されるアル
デヒドと青酸から高収率で光学活性Ｓ−（＋）−マンデ
ルアミドおよびその誘導体が生産、蓄積される。生成物
の単離は濃縮、抽出、晶析などの公知の方法を利用して
行うことができる。
体のシアンヒドリンまたは一般式（２）で示されるアル
デヒドと青酸から高収率で光学活性Ｓ−（＋）−マンデ
ルアミドおよびその誘導体が生産、蓄積される。生成物
の単離は濃縮、抽出、晶析などの公知の方法を利用して
行うことができる。
【００２０】
【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
る。
る。
【００２１】実施例１ （１）培養 下記培地にロドコッカス属のＰＮ４２−２、ＨＮ６−１
およびＨＴ４０−６株を各々接種し３０℃で９６時間好
気的に培養を行った。 培地（ｐＨ７．４） グルコース ２７ｇ ポリペプトン ４ｇ 酵母エキス ２ｇ 硫酸アンモニウム ０．２ｇ 硝酸アンモニウム ２ｇ ＭｇＣｌ2 ０．２ｇ ＣａＣｌ2 ４０mg ＭｎＳＯ4 ・４Ｈ2 Ｏ ４mg ＦｅＣｌ3 ・７Ｈ2 Ｏ ０．７mg ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．１mg ε−カプロラクタム ４ｇ ＣｏＣｌ2 ・６Ｈ2 Ｏ ３０mg ３０ｍＭりん酸緩衝液（ｐＨ７．４） １０００ml
およびＨＴ４０−６株を各々接種し３０℃で９６時間好
気的に培養を行った。 培地（ｐＨ７．４） グルコース ２７ｇ ポリペプトン ４ｇ 酵母エキス ２ｇ 硫酸アンモニウム ０．２ｇ 硝酸アンモニウム ２ｇ ＭｇＣｌ2 ０．２ｇ ＣａＣｌ2 ４０mg ＭｎＳＯ4 ・４Ｈ2 Ｏ ４mg ＦｅＣｌ3 ・７Ｈ2 Ｏ ０．７mg ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．１mg ε−カプロラクタム ４ｇ ＣｏＣｌ2 ・６Ｈ2 Ｏ ３０mg ３０ｍＭりん酸緩衝液（ｐＨ７．４） １０００ml
【００２２】（２）活性測定 培地から菌体を採取し、遠心分離により各々の菌体を２
０ｍＭりん酸緩衝液（ｐＨ７．５）で３回洗浄した。沈
殿した菌体を上記緩衝液に懸濁し、これを終濃度が１０
ｍＭマンデロニトリルと０〜４０ｍＭベンズアルデヒド
となるようにりん酸緩衝液（ｐＨ７．５）に添加し、３
０℃、３０分間攪拌しながら反応を行った。反応の停止
は反応液を遠心分離し菌体を除去することにより行っ
た。上清中のマンデルアミド含量を液体クロマトグラフ
ィー（ＨＰＬＣ）（カラム；SHODEXODS F511A キャリ
ア；0.1M H3 PO4 ：アセトニトリル＝４：１，モニタ
ー；254nm)で分析した。活性は、３０℃において乾燥菌
体１ｍｇが１分間に反応液１ｍｌ当り１μmolの生成物
を与える能力を１ユニット（１Ｕ）と定義して求めた。
ベンズアルデヒド添加区の活性を無添加区を１００とし
たときの相対活性で表−１に示した。
０ｍＭりん酸緩衝液（ｐＨ７．５）で３回洗浄した。沈
殿した菌体を上記緩衝液に懸濁し、これを終濃度が１０
ｍＭマンデロニトリルと０〜４０ｍＭベンズアルデヒド
となるようにりん酸緩衝液（ｐＨ７．５）に添加し、３
０℃、３０分間攪拌しながら反応を行った。反応の停止
は反応液を遠心分離し菌体を除去することにより行っ
た。上清中のマンデルアミド含量を液体クロマトグラフ
ィー（ＨＰＬＣ）（カラム；SHODEXODS F511A キャリ
ア；0.1M H3 PO4 ：アセトニトリル＝４：１，モニタ
ー；254nm)で分析した。活性は、３０℃において乾燥菌
体１ｍｇが１分間に反応液１ｍｌ当り１μmolの生成物
を与える能力を１ユニット（１Ｕ）と定義して求めた。
ベンズアルデヒド添加区の活性を無添加区を１００とし
たときの相対活性で表−１に示した。
【００２３】（３）生産性 １０ｍＭマンデロニトリルと０〜４０ｍＭベンズアルデ
ヒドを含むりん酸緩衝液（ｐＨ７．５）に微量（反応時
ＯＤ630 ＝ 0.005）の菌体を添加し、３０℃、７２時間
攪拌しながら反応させた。反応後、上清中のマンデルア
ミド含量を測定し、使用した菌体重量当たりのアミド生
産量を計算で求めた。ベンズアルデヒド無添加区の生産
性を１００としたときの相対生産性で表−１に示した。
ヒドを含むりん酸緩衝液（ｐＨ７．５）に微量（反応時
ＯＤ630 ＝ 0.005）の菌体を添加し、３０℃、７２時間
攪拌しながら反応させた。反応後、上清中のマンデルア
ミド含量を測定し、使用した菌体重量当たりのアミド生
産量を計算で求めた。ベンズアルデヒド無添加区の生産
性を１００としたときの相対生産性で表−１に示した。
【００２４】実施例２ （１）培養 下記培地にシュードモナス クロロラフィス Ｂ２３株
を接種し２５℃で９６時間好気的に培養を行った。 培地（ｐＨ７．２） シュークロース １０ｇ 味液 １０ｇ メタクリルアミド ２ｇ ＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ １０mg ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ２０mg 蒸留水 １０００ml
を接種し２５℃で９６時間好気的に培養を行った。 培地（ｐＨ７．２） シュークロース １０ｇ 味液 １０ｇ メタクリルアミド ２ｇ ＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ １０mg ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ２０mg 蒸留水 １０００ml
【００２５】（２）活性、生産性測定 実施例１と同様にして行った。結果を表−１に示した。
【００２６】実施例３ （１）培養 実施例１と同様にしてロドコッカス ＨＴ４０−６株を
培養した。
培養した。
【００２７】（２）活性測定 実施例１と同様に洗浄、懸濁したＨＴ４０−６菌体を、
２または３ｍＭのシアンヒドリンおよび各シアンヒドリ
ンに対応するアルデヒド２〜９ｍＭを含む２０ｍＭりん
酸緩衝液（ｐＨ７．５）に添加し、３０℃、３０分間攪
拌しながら反応を行い、実施例１と同様に相対活性を求
めた。結果を表−２に示した。
２または３ｍＭのシアンヒドリンおよび各シアンヒドリ
ンに対応するアルデヒド２〜９ｍＭを含む２０ｍＭりん
酸緩衝液（ｐＨ７．５）に添加し、３０℃、３０分間攪
拌しながら反応を行い、実施例１と同様に相対活性を求
めた。結果を表−２に示した。
【００２８】（３）生産性測定 実施例１と同様に洗浄、懸濁したＨＴ４０−６菌株を、
２または３ｍＭのシアンヒドリンおよび各シアンヒドリ
ンに対応するアルデヒド２〜９ｍＭを含む２０ｍＭりん
酸緩衝液（ｐＨ７．５）に添加し、３０℃で７２時間攪
拌しながら反応を行い、実施例１と同様にして相対生産
性を求めた。結果を表−２に示した。
２または３ｍＭのシアンヒドリンおよび各シアンヒドリ
ンに対応するアルデヒド２〜９ｍＭを含む２０ｍＭりん
酸緩衝液（ｐＨ７．５）に添加し、３０℃で７２時間攪
拌しながら反応を行い、実施例１と同様にして相対生産
性を求めた。結果を表−２に示した。
【００２９】実施例４ （１）培養 実施例１と同様にロドコッカス ＨＴ４０−６株を培養
した。
した。
【００３０】（２）蓄積反応 実施例１と同様に洗浄、懸濁したＨＴ４０−６株（乾燥
菌体として０．６ｇ）を１０ｍＭのマンデロニトリルと
３０ｍＭのベンズアルデヒドを含む３００ｍｌの２０ｍ
Ｍりん酸緩衝液（ｐＨ７．５）に添加し、１５℃で攪拌
しながら反応を行い、実施例１に示したＨＰＬＣにより
反応の進行を確認しながら、マンデロニトリルを手動で
供給し４８時間蓄積反応を行った。また、比較のためベ
ンズアルデヒド無添加でも同様な実験を行った。結果を
表−３に示した。
菌体として０．６ｇ）を１０ｍＭのマンデロニトリルと
３０ｍＭのベンズアルデヒドを含む３００ｍｌの２０ｍ
Ｍりん酸緩衝液（ｐＨ７．５）に添加し、１５℃で攪拌
しながら反応を行い、実施例１に示したＨＰＬＣにより
反応の進行を確認しながら、マンデロニトリルを手動で
供給し４８時間蓄積反応を行った。また、比較のためベ
ンズアルデヒド無添加でも同様な実験を行った。結果を
表−３に示した。
【００３１】なお、上記実施例１〜４において、生成し
たマンデルアミドおよびその誘導体の光学純度を光学分
割用カラム（ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＣＡ−１，ダイセル
化学工業、キャリア；１００％エタノール）を用いて測
定した。その結果、いずれの実施例においても光学純度
はＳ−（＋）体として９０％ｅｅ以上であった。
たマンデルアミドおよびその誘導体の光学純度を光学分
割用カラム（ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＣＡ−１，ダイセル
化学工業、キャリア；１００％エタノール）を用いて測
定した。その結果、いずれの実施例においても光学純度
はＳ−（＋）体として９０％ｅｅ以上であった。
【００３２】
【表１】
【００３３】
【表２】
【００３４】
【表３】
【００３５】
【発明の効果】本発明によれば、酵素の失活が抑制で
き、ラセミ体のシアンヒドリン、またはアルデヒドと青
酸から直接優位量（５０〜１００％）のＳ−（＋）−マ
ンデルアミド等を高収率で生産、蓄積することができ、
原料の全てを化学量論的に目的物に変換することも可能
である。
き、ラセミ体のシアンヒドリン、またはアルデヒドと青
酸から直接優位量（５０〜１００％）のＳ−（＋）−マ
ンデルアミド等を高収率で生産、蓄積することができ、
原料の全てを化学量論的に目的物に変換することも可能
である。
フロントページの続き (72)発明者 遠藤 隆一 神奈川県横浜市鶴見区大黒町10番１号 日 東化学工業株式会社中央研究所内
Claims (1)
- 【請求項１】 下記一般式（１）で示されるラセミ体の
シアンヒドリン、または該シアンヒドリンに対応する下
記一般式（２）で示されるアルデヒドと青酸に、中性ま
たは塩基性の水性媒体中で、該シアンヒドリンのシアン
基を立体特異的に水和する能力を有する微生物またはそ
の処理物を作用させることにより、一般式（１）で示さ
れるラセミ体のシアンヒドリンまたは一般式（２）で示
されるアルデヒドと青酸から直接優位量の下記一般式
（３）で示される光学活性なＳ−（＋）−マンデルアミ
ドまたはその誘導体を製造する方法において、該シアン
ヒドリンに対応する一般式（２）で示されるアルデヒド
を、反応系内に溶解し得る範囲内で、且つ一般式（１）
で示されるラセミ体のシアンヒドリンに対しては１〜１
０倍モル、また青酸に対しては２〜１１倍モル添加する
ことを特徴とするＳ−（＋）−マンデルアミドおよびそ
の誘導体の製造法。 【化１】 〔Ｘは水素、メチル基、メトキシ基、イソプロピル基、
ヒドロキシル基、ニトロ基、スルホン基またはハロゲン
を表す〕
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25156294A JP3313000B2 (ja) | 1994-09-21 | 1994-09-21 | Ｓ−（＋）−マンデルアミドおよびその誘導体の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25156294A JP3313000B2 (ja) | 1994-09-21 | 1994-09-21 | Ｓ−（＋）−マンデルアミドおよびその誘導体の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0889267A true JPH0889267A (ja) | 1996-04-09 |
| JP3313000B2 JP3313000B2 (ja) | 2002-08-12 |
Family
ID=17224669
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25156294A Expired - Fee Related JP3313000B2 (ja) | 1994-09-21 | 1994-09-21 | Ｓ−（＋）−マンデルアミドおよびその誘導体の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3313000B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6900037B2 (en) | 2001-06-15 | 2005-05-31 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | Method for producing amide compounds |
-
1994
- 1994-09-21 JP JP25156294A patent/JP3313000B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6900037B2 (en) | 2001-06-15 | 2005-05-31 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | Method for producing amide compounds |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3313000B2 (ja) | 2002-08-12 |
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