CN109781921A - 一种利用反相高效液相色谱法快速检测苯乳酸含量的方法 - Google Patents

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张雯
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Abstract

本发明公开了一种利用反相高效液相色谱法快速检测苯乳酸含量的方法，属于食品检测技术领域。色谱条件为：C18色谱柱(4.6×250mm，5μm)，流动相A为0.05％三氟乙酸水溶液，流动相B为乙腈，且流动相A和B的体积比为3：1，流速为1mL/min，进样量为10μL，色谱柱温为20～30℃，检测波长为210nm；将待测样品中的杂质和苯乳酸进行分离，检测苯乳酸的含量，通过保留时间和峰面积对苯乳酸进行定性和定量。本方法操作简单，检测快速，成本低，定量定性准确，能够与杂质峰分开，适用于食品和发酵溶液中苯乳酸总量的批量快速检测。

Description

一种利用反相高效液相色谱法快速检测苯乳酸含量的方法
技术领域
本发明属于高效液相色谱分析技术领域，涉及食品和发酵液中苯乳酸含量的快速检测，具体涉及一种利用反相高效液相色谱法快速检测苯乳酸含量的方法。
背景技术
苯乳酸是一种由乳酸菌产生的新型抗菌物质，具有广谱抗菌性，能够抑制多种食源性致病菌和腐败菌的生长，如单增李斯特菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌等。苯乳酸能够天然存在于蜂蜜、发酵面团和中式泡菜中。
目前，苯乳酸的检测主要有薄层层析法和高效液相检测法，薄层层析法测定苯乳酸检出限高、定量差，不适合发酵液中苯乳酸的测定，高效液相色谱法比较有代表性的是李兴峰等(李兴峰.乳杆菌生物合成苯乳酸的研究[D].江南大学，2008.)苯乳酸检测方法：10000r/min离心10min后，0.22μm微滤后进行高效液相色谱检测；其中，色谱条件：流动相为0.05％的三氟乙酸/甲醇(A)和0.05％的三氟乙酸/水(B)的混合液；梯度洗脱程序为：0～20min由10％A线性变化至100％，20～23min保持100％A，23～25min100％A线性变化至10％；流速1mL/min，检测波长210nm，柱温30℃。但该方法要求梯度洗脱，对仪器配制要求高，成本高，且梯度洗脱时间长，一个样品至少需要25min分析，对于大批量的样品，检测所需的时间长，效率不高，流动相比例发生变化时，基线容易发生漂移，对结果产生影响。
另外，苯乳酸有两种同分异构体，分别为D-型苯乳酸和L-型苯乳酸，已有检测方法通过高效液相色谱法使用手性色谱柱对D-型苯乳酸和L-型苯乳酸分别进行定性和定量检测，但有研究表明，D-型苯乳酸和L-型苯乳酸在抑菌性和食品工业中的应用上并无较大差别，且手性色谱柱对设备要求和成本高。使用C18色谱柱通过添加缓冲剂对D-型苯乳酸和L-型苯乳酸进行定性定量检测时，可以降低检测成本，但适用于药物合成中间体苯乳酸对应异构体的纯度检测和生产苯乳酸的定性定量，对食品工业检测苯乳酸总量和剂量检测来说，操作较复杂且效率不高。
发明内容
针对目前苯乳酸检测时对仪器要求高、检测时间长、人工和配制成本高和灵敏度低等问题，本发明的目的在于提供一种利用反相高效液相色谱法快速检测苯乳酸含量的方法，准确度高，稳定性好，操作简单，对流动相和仪器要求不高，节约成本，出峰时间快，缩短生产过程中的检测时间，且检测结果准确可靠。
本发明解决上述技术问题采用的技术方案如下：
利用反相高效液相色谱法快速检测苯乳酸含量的方法，具体地，包括以下步骤：
步骤a：配置流动相，过滤，脱气，调节仪器，平衡色谱柱；
步骤b：配制不同稀释倍数的苯乳酸标准溶液，采用高效液相色谱仪对苯乳酸标准溶液进行高效液相分析，利用Agilent1260离线数据处理软件进行数据处理，确定出峰时间，采用外标法，以苯乳酸含量为横坐标，峰面积为纵坐标，制作标准曲线绘制苯乳酸含量-峰面积标准曲线，得出标准曲线回归方程；
步骤c：将含有苯乳酸的样品溶液适度稀释，9000～10000r/min离心1～2min，离心后经过0.22μm微滤，采用与步骤b中标准溶液完全相同的色谱条件进行高效液相色谱分析，根据峰面积，按照步骤b的标准曲线回归方程，利用外标法计算得出含有苯乳酸的样品溶液中苯乳酸的含量。
其中，步骤b中，所述色谱柱为C18(4.6×250mm，5μm)色谱柱，色谱条件包括：
流动相：流动相A为0.05％三氟乙酸水溶液，流动相B为乙腈，且所述流动相A和B的体积比为3：1；
流动相流速：1mL/min；
检测波长：210nm；
色谱柱温：20～30℃；
进样量：10μL。
本发明流动相的选择，利用0.05％三氟乙酸水溶液来改善峰形，乙腈洗脱能力比甲醇强，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，C18色谱柱是亲水性色谱柱，由于不使用梯度洗脱，检测结果稳定，基线不会发生漂移。两者结合使检测结果更准确，且保留能力强，保留时间在6min左右，分离效果好，出峰时间合适。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
1、本发明流动相和流速不发生变化，压力稳定，出峰时间快，操作简单，结果准确可靠，能够大规模检测样品中苯乳酸的含量。
2、本发明采用C18色谱柱，相比手性色谱柱更加经济适应且易得，对仪器要求简单，结果也准确可靠。
3、本发明利用反相高效液相色谱法快速检测苯乳酸含量，准确度高，稳定性好，操作简单，对流动相和仪器要求不高，灵敏度高，且检测结果准确可靠，苯乳酸和杂质之间分离较好，有利于食品样品和乳酸菌发酵液中的苯乳酸定量检测。
4、现有的反相高效液相色谱快速检测苯乳酸异构体的方法如授权公告号CN102288703B中，检测苯乳酸的不同构型，该发明检测波长为254nm，出峰时间在19.017min，且流动相有环糊精手性选择剂和pH＝3的含10mM缓冲溶液的甲醇溶液；本发明检测为苯乳酸总量，出峰时间为6min左右，减少2倍的检测时间，在针对大批量样品检测苯乳酸总量时能大大减少检测时间，效率更高。另外，本发明的流动相为体积比3:1的0.05％三氟乙酸水溶液和乙腈，配制方便，操作简单，检测波长为210nm，在该波长下其与杂峰的分离情况较好。
附图说明
图1是本发明实施例1提供的苯乳酸标准溶液的液相色谱图；
图2是本发明实施例提供的含有苯乳酸的乳酸菌发酵液的液相色谱图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进一步说明。
以下实施例中采用的高效液相色谱仪为Agilent1260，色谱柱为AgilentZORBAXSB-C18(4.6×250mm，5μm)色谱柱。其中，色谱条件为：
流动相：流动相A为0.05％三氟乙酸水溶液，流动相B为乙腈，且所述流动相A和B的体积比为3：1；
流动相流速：1mL/min；
检测波长：210nm；
色谱柱柱温：20～30℃；
进样体积：10μL。
实施例1
利用反相高效液相色谱法快速检测苯乳酸含量的方法，具体步骤为：
步骤a、配置流动相，过滤，脱气，调节仪器，平衡色谱柱；
步骤b、采用上海子起生物科技有限公司的苯乳酸标准品配制的苯乳酸标准溶液，依次稀释得到浓度为10.0μg/mL、5.0μg/mL、2.0μg/mL、1.0μg/mL、0.5μg/mL的标准溶液，采用高效液相色谱仪对苯乳酸标准溶液进行高效液相分析，每个浓度的标准溶液分别进样两次，利用Agilent1260离线数据处理软件进行数据处理，色谱图如图1所示，图中保留时间为6.253min处为苯乳酸的峰，其余为杂质峰，峰面积如表1所示，并采用外标法绘制苯乳酸含量-峰面积的标准曲线，得出标准曲线回归方程：y＝34.822x+3.1095，R2＝0.9998。
步骤c、将含有苯乳酸的乳酸菌发酵液样品进行前处理，10000r/min离心2min，0.22μm微滤，利用高效液相色谱仪分析含有苯乳酸的样品，采用与上述标准溶液完全相同的色谱条件，记录峰面积，利用Agilent1260离线数据处理软件计算峰面积，代入标准曲线，得到样品的苯乳酸含量。从图2可以看出，保留时间6.216min为苯乳酸的峰，其余的为杂峰，主峰的出峰时间适宜，且与杂峰分离度良好。
表1：标准溶液浓度μg/mL与峰面积mAU*s数值记录表
实施例2
为验证上述实施例1的可行性和准确性，进行精密度试验，试验采用浓度为2.0μg/mL的苯乳酸标准溶液，连续进样8次，采用与实施例完全相同的色谱条件，测定结果表2所示。
表2：精密度试验数值
序号 苯乳酸峰面积
1 72.29832
2 69.76453
3 70.04261
4 70.24136
5 70.34277
6 70.04066
7 69.94110
8 68.87708
平均值 70.19355
RSD 1.4％
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种利用反相高效液相色谱法快速检测苯乳酸含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤a：配置流动相，过滤，脱气，调节仪器，平衡色谱柱；
步骤b：配制不同稀释倍数的苯乳酸标准溶液，采用高效液相色谱仪对苯乳酸标准溶液进行高效液相分析，利用Agilent1260离线数据处理软件进行数据处理，确定出峰时间，采用外标法以苯乳酸含量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制苯乳酸含量-峰面积标准曲线，得出标准曲线回归方程；
步骤c：将含有苯乳酸的样品溶液适度稀释，9000～10000r/min离心1～2min，离心后经过0.22μm微滤，采用与步骤b中标准溶液完全相同的色谱条件进行高效液相色谱分析，根据峰面积，按照步骤b的标准曲线回归方程，利用外标法计算得出含有苯乳酸的样品溶液中苯乳酸的含量。
2.根据权利要求1所述快速检测苯乳酸含量的方法，其特征在于，步骤b中，所述色谱柱为C18(4.6×250mm，5μm)色谱柱，色谱条件包括：
流动相：流动相A为0.05％三氟乙酸水溶液，流动相B为乙腈，且所述流动相A和B的体积比为3：1；
流动相流速：1mL/min；
检测波长：210nm；
色谱柱温：20～30℃；
进样量：10μL。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110426481A (zh) * 2019-09-16 2019-11-08 亚太星原农牧科技海安有限公司 一种测定发酵豆粕中乳酸含量的方法以及测定用待测液的提取方法
CN112526051A (zh) * 2020-12-18 2021-03-19 上海吉奉生物科技有限公司 一种Fmoc-赖氨酸高效液相色谱测定方法
CN117213385A (zh) * 2023-10-10 2023-12-12 江苏神力特生物科技股份有限公司 一种检测和定量牛樟芝固态发酵物中的安卓奎诺尔的方法

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0610049A2 (en) * 1993-02-03 1994-08-10 Nitto Chemical Industry Co., Ltd. Process for producing optically active alpha-hydroxycarboxylic acid having phenyl group
US5580765A (en) * 1993-02-03 1996-12-03 Nitto Chemical Industry Co., Ltd. Process for producing optically active a-hydroxycarboxylic acid having phenyl group using gordona terrae
WO1998013119A1 (en) * 1996-09-24 1998-04-02 Altus Biologics Inc. Crosslinked protein crystals as universal separation media
CN101831394A (zh) * 2010-02-05 2010-09-15 山东大学 耐热的芽孢杆菌及其在制备苯乳酸中的应用
CN102175797A (zh) * 2011-03-10 2011-09-07 河南省商业科学研究所有限责任公司 一种现场测定发酵样品中苯乳酸含量的检测方法
CN102288703A (zh) * 2011-07-29 2011-12-21 江南大学 一种反相高效液相色谱快速检测苯乳酸异构体的方法
US20140193920A1 (en) * 2013-01-10 2014-07-10 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Metabolomics of human biological fluids identify signatures of malignant glioma
CN105543291A (zh) * 2016-02-15 2016-05-04 江南大学 一种微生物转化的方法

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0610049A2 (en) * 1993-02-03 1994-08-10 Nitto Chemical Industry Co., Ltd. Process for producing optically active alpha-hydroxycarboxylic acid having phenyl group
US5580765A (en) * 1993-02-03 1996-12-03 Nitto Chemical Industry Co., Ltd. Process for producing optically active a-hydroxycarboxylic acid having phenyl group using gordona terrae
WO1998013119A1 (en) * 1996-09-24 1998-04-02 Altus Biologics Inc. Crosslinked protein crystals as universal separation media
CN101831394A (zh) * 2010-02-05 2010-09-15 山东大学 耐热的芽孢杆菌及其在制备苯乳酸中的应用
CN102175797A (zh) * 2011-03-10 2011-09-07 河南省商业科学研究所有限责任公司 一种现场测定发酵样品中苯乳酸含量的检测方法
CN102288703A (zh) * 2011-07-29 2011-12-21 江南大学 一种反相高效液相色谱快速检测苯乳酸异构体的方法
US20140193920A1 (en) * 2013-01-10 2014-07-10 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Metabolomics of human biological fluids identify signatures of malignant glioma
CN105543291A (zh) * 2016-02-15 2016-05-04 江南大学 一种微生物转化的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
EMANUELE ARMAFORTE ET AL: "High-performance liquid chromatography determination of phenyllactic acid in MRS broth", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110426481A (zh) * 2019-09-16 2019-11-08 亚太星原农牧科技海安有限公司 一种测定发酵豆粕中乳酸含量的方法以及测定用待测液的提取方法
CN112526051A (zh) * 2020-12-18 2021-03-19 上海吉奉生物科技有限公司 一种Fmoc-赖氨酸高效液相色谱测定方法
CN112526051B (zh) * 2020-12-18 2022-08-09 上海吉奉生物科技有限公司 一种Fmoc-赖氨酸高效液相色谱测定方法
CN117213385A (zh) * 2023-10-10 2023-12-12 江苏神力特生物科技股份有限公司 一种检测和定量牛樟芝固态发酵物中的安卓奎诺尔的方法

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