JPH0253458A

JPH0253458A - 食品

Info

Publication number: JPH0253458A
Application number: JP63205110A
Authority: JP
Inventors: Yasukuni Nishida; 西田　安邦; Tatsuo Kiyoshige; 清重　達夫; Takashi Hashimoto; 橋本　喬; Takashi Tsurumizu; 隆鶴水
Original assignee: Lion Corp
Current assignee: Lion Corp
Priority date: 1988-08-18
Filing date: 1988-08-18
Publication date: 1990-02-22
Anticipated expiration: 2012-12-10
Also published as: JP2689511B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は、歯周炎、歯槽膿漏やう蝕などの口腔疾患を予
防することができる口腔疾患予防食品に関する。

来の　　　び　　が　　しようとする歯周炎、歯槽膿漏等の歯周病とう蝕とは口腔の２大疾患
といわれているが、これら口腔疾患の原因としては、例
えば前者の場合はバクテロイデス・ジンジバリス等、後
者の場合はストレプトコッカス・ミュータンス等の細菌
が口腔内に定着し、増殖していくことによるところが大
きいとされており、このため口腔疾患の予防にはこれら
細菌の口腔内への定着を抑制するのが有効である。

従来、かかる観点から、バクテロイデス・ジンジバリス
等の歯周病原因菌やストレプトコッカス・ミュータンス
の全菌体又は菌体成分で咄乳動物を免疫することによっ
て得られる血中抗体又は乳中抗体を口腔用組成物或いは
食品中に配合し、上記細菌の口腔内への定着を抑制して
口腔疾患を予防することは知られている（特開昭６０−
１４２９１５゜特開昭６０−３８３２７．特開昭６０−
３８３２９゜特開昭６１−１１２０２８．特開昭６１−
１１２０２９゜特開昭６１−１１２０３０．特開昭６１
−２８９０２４゜特開昭６２−４１７．特開昭６１−２
７７６３２号公報）。

しかし、食品を製造する場合の配合性等の点から更に口
腔内細菌の定着を有効に抑制し、歯周病やう蝕を防止し
得る有効成分の開発が望まれる。

するための　　　び本発明者らは、上記事情に鑑み、更に検討を続けた結果
、口腔内細菌、特にバクテロイデス・ジンジバリス、バ
クテロイデス・インテルメデイウス、ア′クチノマイセ
ス・ビスコ−サス、ヘモフィルス・アクチノミセテムコ
ミタンス、フシバクテリウム・ヌクレイタム、アイコネ
ラ・コロ−デンス、ストレプトコッカス・ミュータンス
、ストレプトコッカス・サンイス等の細菌の１種もしく
は２種以上の全菌体又は菌体成分を抗原とし、これで家
禽を免疫した場合、得られる卵の卵黄中に抗体が蓄積、
存在し、この卵黄を含む卵全体、卵黄、或いはこの卵黄
から分画される水溶性画分を食品原料として使用するこ
とにより、得られた食品を摂取した場合に上記細菌の口
腔内定着を効果的に抑制し得ることを知見し１本発明を
なすに至ったものである。

以下、本発明につき更に詳しく説明する。

本発明に係る口腔疾患予防用食品は、バクテロイデス・
ジンジバリス、バクテロイデス・インテルメディウス、
アクチノマイセス・ビスコ−サス。

ヘモフィルス・アクチノミセテムコミタンス、フシバク
テリウム・スタレイタム、アイコネラ・コロ−デンス、
ストレプトコッカス・ミュータンス。

ストレプトコッカス・サンイス等の口腔内細菌の１種も
しくは２種以上の全菌体又は菌体成分を抗原とし、これ
で免疫した家禽から得られる卵、卵黄又は水溶性卵黄分
画物を原料とするものである。

ここで、バクテロイデス・ジンジバリス、バクテロイデ
ス・インテルメデイウス、アクチノマイセス・ビスコ−
サス、ヘモフィルス・アクチノミセテムコミタンス、フ
シバクテリウム・ヌクレイタム、アイコネラ・コロ−デ
ンス等の全菌体は、バクテロイデス・ジンジバリス、バ
クテロイデス・インテルメディウスにおいては１例えば
ヘミン及びメナジオンを加えたｌ−ツドヘビソトブロー
スを培地としで使用し、その他の」菌はトリプテイケー
スソイブロースを培地として使用し、生育した菌を洗浄
した後、ホルマリン処理するなど、公知の方法にｉ（＠
じて培養、前処理を行なったものが抗原として使用し得
る。また、これらの細菌の６１１体成分としては、その
線毛や莢膜が使用さ九るが、これら線毛抗原、莢膜抗原
は、公知の方法に準じて菌体から分断２分離したものを
用いることができる。

なお、これら細菌の菌株としては、いずれも公知のもの
を使用することができ、例えば微工研、アメリカン・タ
イプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）、ボスト
ンのフォーサイス・デンタル・センターなどから分与さ
れる菌株や、歯周病の病巣局所から分離した菌株などが
使用され得る。

一方、ストレプトコッカス・ミュータンス菌。

ストレプトコッカス・サンギス菌等は、例えばＢＨＩ培
地の透析外液を培地として使用し、生育した菌を洗浄後
ホルマリン処理するなど、公知の培養、前処理を行なっ
たものが使用し得る。この場合、ストレプトコッカス・
ミュータンス菌としては人の口腔内に多く存在する血清
型分類Ｃに居するものが好ましい。このようなストレプ
トコッカス・ミュータンス菌としてはＮＣＴＣ１０４，
４９゜Ｉｎｇｂｒｉｔｔ、　ＯＭ　Ｚ　７０　、　Ｊ　
Ｃ−２等が挙げられる。

また、ストレプトコッカス・サンギス菌としてはＮ　Ｃ
，Ｔ　Ｃ１０５５Ｇ　、　Ｎ　ＣＴ　Ｃ１０５５ｇ及び
５ＳＨ−８３，ＫＩＨ−Ｔ等が挙げられる。

これらストレプトコッカス・ミュータンス、ストレプト
コッカス・サンイス等の菌体成分としては、該菌の細胞
壁画分、該菌の線維状構造物１ｉｌｉｉ分。

該閑のグルコシルトランスフェレース（ＧＴＦ）画分及
び該閑のプロティン抗原画分が挙げられる。

この場合、ストレプトコッカス・ミュータンス菌、スト
レプトコッカス画分ブライワイス（ＢＬｃｉｔｙｅｉｓ）らの方法（Ｊ
．　ＩＩ；〕ｃｔｔ□．ｒｊｏ１．　。

８８、　　１１９８−１２００．１．９６４）に従い、
ブラウンの細胞破砕機を使用し、直径０．１７〜Ｑ．１
８ｎｎ＋のガラスピーズを用いて破砕処理を行ない、得
られた細胞壁をトリプシンで処理して細胞壁に混在する
タンパク質を除去し、蒸留水で洗浄後凍結乾燥を行なう
という方法等により調製したものなどが使用できる。線
維状構造物画分はジエイ・ヴアン・ホーテ（Ｊ．　Ｖａ
ｎ　Ｈｏａｔｅ）らの方法（Ａｒｃｈ．　Ｏｒａｌ．　
Ｂｉｏ．、よ旦，　　１１３１−１１４．１。

１　９　７　１）に従い、Ｂ　Ｈ　Ｉ透析培地に５％シ
ヨ糖を加え、嫌気的条件下で培養し、培養液の遠心分離
上清に３倍量のエタノールを加えて沈殿を集めるという
方法等により調製したものなどが使用できる。更に、Ｇ
ＴＦ画分は井」：らの方法（Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ａｓ
ｐｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｅｒ＋ｔａｌ　ｃａｒｉｅｓ　Ｖ
ｏｌ、ＩＩＩ　。

６６５−６８２．１９７６　［Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ
　ＲＣｔｒｉｅｖａｌＩｎｃ、］　）に従い、ＢＨＩ透
祈培地にストレプトコッカス・ミュータンス菌、ストレ
プ１−コツカス。

サンイス菌等を植菌し、生育後遠心分離により菌体を除
去し、上清に硫酸アンモニウムを加え、４０％硫酸アン
モニウム画分の沈Ｆａを５０ｍＭのリン酸緩衝液で透析
し、濃縮した液を用いるという方法等により調製したも
のなどが使用できる。また、プロティン抗原画分はレー
ナー（Ｌｅｈｎｃｒ）らの方法（，１，Ｇｅｎｅｒａｌ
　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、　　１２２　、２１７−
２２５．１９８１）に従い、Ｂ　）−Ｉ　Ｉ透析培地で
培養し、遠心して得られた上清を７５％の硫酸アンモニ
ウムを用いて分画し、沈殿を採取し、この沈殿を６Ｍ尿
素存在下でＤＥ−５２カラムクロマトグラフイーを行な
い、更にプロティン抗原画分を生理食塩水に溶かし、透
析後セファロースＣＬ６Ｂにてゲル濾過を行なって両分
を得るという方法等により調製したものなどが使用し得
る。

本発明は、前記抗原を用いて家禽に免疫することによっ
て得られる抗体を含有する卵、卵黄、水溶性卵黄分画物
を食品原料とするものである。この場合免疫される家禽
としてはニワトリ、アヒル。

ウズラ等が用いられる。また、家禽に免疫する方法とし
ては抗原単独又は２種以上を組合せて免疫することがで
き、その際アジュバン１−と共に皮下又は筋肉内へ免疫
する方法、飼料又は水と共に経口的に免疫する方法等、
通常の方法が採用できる。

なお、水溶性卵黄分画物を得る方法としては。

卵黄にカラギナンやキサンタンガムを加え、生じた沈殿
を遠心分離等の方法で除去し、その上清に一対し硫酸ア
ンモニウムによる分画沈殿を行ない、水で透析するなど
の方法が採用し得る。

本発明の食品は、上記卵、卵黄、水溶性卵黄分画物の１
種又は２種以上を原料として使用することにより製造さ
れ、例えばチューインガム、アイスクリーム、ババロア
、マヨネーズ、ドレッシング、チョコレート、プリン、
生クリームなどとして調製され得るが、この場合を記卵
、卵黄、水溶性卵黄分画物は、その摂取１が０．０００
１〜５０ｇ／ｋｇ／日になるように使用することが好ま
しい。

なお、食品の他成分はその食品の種類に応じて適宜選定
される。

１班列仇呆本発明の食品によれば、口腔内細菌の全菌体又は菌体成
分を免疫した家禽から得られる卵、卵黄。

水溶性卵黄分画物を配合したことにより、上記細菌の口
腔内への定着を有効に防止し１口腔疾患の予防に効果的
に使用されると共に、これら抗体含有成分の配合性は良
好なものであるから、食品の調製上難点がないものであ
る。

以下、実験例により本発明の効果を具体的に示す。

〔実験例１〕（１）抗原の調製バクテロイデス・ジンジバリス３８１株、バクテロイデ
ス・インテルメディウスＡＴＣＣ３３５６３株。

ＡＴＣＣ２５６１１株はそれぞれヘミン及びメナジオン
を加えたトツドヘビットブロースで、アクチノマイセス
・ビスコ−サスＴ１４Ｖ株、ヘモフィルス・アクチノミ
セテムコミタンスＹ４株、フシバクテリウム・ヌクレイ
タムＡＴＣＣ２５２８６株、アイコネラ・コロ−デンス
１０７３株はそれぞれトリプチケースソイブロースで２
１１間培養した後、８０００ｒｐｍ、１５分間の遠心で
菌体を集め、これを５ｍＭ、ｐＨ７，４のリン酸緩衝液
で洗滌した後、０．５％のホルマリンで１晩処理したも
のを全菌体抗原とした。

綿毛抗原の調製は、同様に上記培地で２日間培養した上
記細菌を集菌、洗滌した後、蒸留水中でガラスピーズと
共に２日間ゆるやかに撹拌し、Ｎｏ、２５の注射針（０
，５Ｘ２５＋１１１１）に３回通し、菌体より線毛を分
断した。次いで８０００ｒｐｍ。

１５分間の遠心で菌体と上清に有る線毛を分離し、」二
清を蒸留水で透析した後、凍結乾燥を行ない、線毛抗原
とした。

また、莢膜抗原は、同様に集めた菌体をＯ，ＯＩＭ−Ｅ
ＤＴＡを含むＩＪ　’）酸緩衝液（０，０５Ｍ、ｐＨ７
，４）で６０℃において３０分間反応させた後、Ｎｏ、
２’５の注射針に３回通し、菌体より莢膜を分離した。

次いで８０００ｒｐｍ、１５分間の遠心で菌体を除去し
た上清を４０００Ｏｒｐｍ、２時間超遠心し、その沈渣
を莢膜抗原とした。

（２）鶏卵抗体画分の３Ａ製法上記の抗原をフロイント完全アジュバントと混合して鶏
に免疫し、その後上記抗原とフロイント不完全アジュバ
ントとを混合したもので３回免疫し、卵を採取した。そ
ののち、卵を卵黄と卵白に分け、卵黄に等量の水を加え
、０．５％のλ−カラギナンの懸濁液を加え、撹拌後８
０００　ｒｐｍ　１１０分間遠心し、上清を採取した。

更に、２０％硫酸アンモニウムによる分画沈殿を５回繰
り返し、水で透析後、１０倍濃度の生理食塩水を加えて
０．１５Ｍ−ＮａＣｆｌ水溶液とし、その後０．４５ｇ
ｎのフィルターで濾過を行ない、炉液を採取した。

（３）バクテロイデス・ジンジバリスのハムスター口腔
内定着抑制実験ゴールデンハムスター（８週令、雄）を−群６〜７匹に
し、下顎第一臼歯を木綿糸（Ｎｏ、　５０　）で結紮後
、バクテロイデス・ジンジバリス３８１−Ｒ’　　ｌＸ
ｌ０”個／ｍＱの菌液０，１ｍＱ、をハムスター口腔内
に接種した。菌接種３０分後にバクテロイデス・ジンジ
バリスを抗原として得られた鶏卵抗体画分とグリセリン
との等景況合液０．１ｍＱ又は水とグリセリンとの等景
況合液（コントロール）０．１ｍＱを［１腔内に投与し
、混合液の存在下歯周ブラシにて各歯列を２０回ブラッ
シングした。

以上の操作を３日間行ない、その後１週間は毎日２回ブ
ラッシングのみを行なった。ブラッシング終了後、結紮
した木綿糸を採取し、結紮糸中のバクテロイデス・ジン
ジバリス数及び全嫌気性菌数を測定した。結果を第１表
に示す。

第１表第１表の結果から明らかなように、対照群に比較して各
種鶏卵抗体画分は有意の差をもってバクテロイデス・ジ
ンジバリスの口腔内定着を阻止することが認められた。

（４）鶏卵抗体による各種口腔細菌のハムスター口腔内
定着阻止効果３日間培養したアクチノマイセス・ビスコ−サスＴ１４
Ｖ、バクテロイデス・インテルメディウスＡＴＣＣ３３
５６３，ヘモフィルス・アクチノミセテムコミタンスＹ
４．フシバクテリウム・ヌクレイタムＡＴＣＣ２５２８
６及びアイコネラ・コロ−デンス１０７３のストレプト
マイシンｋＨ’１株をｐＨ７，２の１ｍＭリン酸緩衝液
に濁度１．０（ＯＤ、、ａ＝１．０）となるように１謁
濁し、各種抗体と１＝１の割合で混合し、３７℃で３０
分間反応させた。対照群として同様にリン酸ｍｌ液と反
応させた。

これをアクナノマイセス実験群は無処置のハムスター口
腔内に、その他の細菌実験群は下顎第一臼歯に本綿糸（
Ｎｏ、　５０　）を結紮したゴールデンハムスターの口
腔内に反応液Ｑ、１ｍＱ、左右類のう内に各０．１ｍＱ
接種した。菌の接種は連続３日間行ない、その１週間後
に結紮糸を取り、結紮糸中の標的細菌数および全嫌気性
菌数を測定した。

１群６匹で行ない、実験期間中飼料は高蔗糖含有のダイ
エツト２０００を、飲料水に水道水を自由に与えた。結
果を第２表に示す。

第２表ストレプトコッカス・サンイスＮ　ＣＴ　Ｃ１０５５６
ＢＨＩ培地の透析外液を培地として使用し、生育した菌
を洗浄した後、ホルマリン処理したものを全菌体抗原と
して使用した。

ブライワイス（ＢｌｅｉｔｌＩｅｉｓ）らの方法（Ｊ、
　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、。

−Ｌ影、、１１９８−１２００．１９６４）に従って調
製したものを使用した。

第２表の結果からも、各種鶏卵抗体がいずれもその抗原
細菌の口腔内定着を有効に抑制することが認められる。

〔実験例２〕下記抗原を使用し、下記の方法によりその抗体画分を得
た。

（１）抗原の調製ストレプトコ　カス・ミュータンスＮＣＴＣ１０４４９
ジェイ・ヴアン・ホーテ（Ｊ、　Ｖａｎ　Ｈｏａｔｅ）
らの方法（Ａｒｃｈ、　０ｒａ１．　Ｂｉｏ、、　ｌ　
６．　１１３１−１１．４１゜１９７１）に準じて調製
したものを使用した。

井上らの方法（Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ａｓｐｅｃｔｓ　
ｏｆ　ｄｅｎｔａｌ　ｃａｒｉｅｓＶｏｌ、Ｉｎ、　　
６６５−６８２．　１９７６　［Ｔｎｆｏｒｍａｔｉｏ
ｎＲｅｔｒｉｅｖａｌ　Ｉｎｃ、］　）に従って調製し
たものを使用した。

レーナー（Ｌｅｈｎｅｒ）らの方法（Ｊ、　Ｇｅｎｅｒ
ａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ。

１２２．２１７−２２５．１９８１）に従って調製した
ものを使用した。

（２）鶏卵抗体画分の調製法」二記の抗原をフロイント完全アジュバントと混合して
鶏に免疫し、その後抗原とフロイント不完全アジｊバン
トとを混合したもので２週間ごとに３回免疫し、卵を採
取した。なお、抗体の低下にともない、その後１ケ月ご
とに免疫した。そののち卵を卵黄と卵白に分け２卵黄に
等量の水を加え、０．５％のλ−カラギナンの懸濁液を
加え、撹拌後１１００００ｒｐ、１０分間遠心し、上清
を採取した。更に、２０％硫酸アンモニウムによる分画
沈殿を５回繰り返し、水で透析後、１０倍濃度の生理食
塩水を加えて０．１５Ｍ−ＮａＣＱ水溶液とし、その後
０．４５−のフィルターで′？ｊｊ過を行ない、ｐ液を
採取した。

次に、下記方法によりストレプトコッカス・ミュータン
ス、ストレプトコッカス・サンイスの口腔内定着試験を
行なった。

（３）ストレゾ１−コツカス・ミュータンス、ストレプ
トコッカス・サンイスのロ腔内定着実験ハムスター５週
令雄を一群５匹にし、それぞれにストレプトコッカス・
ミュータンスＮＣＴＣ１０４４９株又はストレプトコッ
カス・サンイスＮＣＴＣ１０５５６株をＩ　Ｘ　１０’
個接種した。

その日から上記鶏卵抗体画分を飲料水に混ぜて１％溶液
として投惨し、１週間後及び４週間後にハムスターの口
腔内の歯列を滅菌した綿球でこすり。

少量の生理食塩水中に浸して菌を均一に分散させた。そ
の一定量をＢＨＩ平板培地及びミーティスサリバリウス
平板培地にまいて全菌体数及びストレプトコッカス・ミ
ュータンス菌、ストレプトコッカス・サンイス菌のコロ
ニー数をカランＩ−Ｌ、た。

ストレプトコッカス・ミュータンス菌、ストレプトコッ
カス・サンイス菌の数は全菌数１００００個当りの菌数
で表わした。なお、飲料水中の抗体画分の濃度はいずれ
も０．０２５％とした。

結果を第３，４表に示す。

第４表第３表第３．４表の結果より、ストレプトコッカス・ミュータ
ンス、ストレプトコッカス・サンイスの鶏卵抗体画分は
、ストレプトコッカス・ミュータンス、ストレプトコッ
カス・サンイスの定看を良好に抑制することが知見され
る。更に、免疫抗原としては全菌体よりも菌体成分の方
が優れていることが確認された。

以下、実施例を示す。なお、％はいずれも重量％を示す
。

〔実施例１〕チユーインガムガムベース　　　　　　　　　　４３．９％炭酸カルシ
ウム水アメ砂糖ショ糖パルミテートフルクトースアル１ヘース香料卵黄抗細胞壁抗体画分又は卵黄抗莢膜抗体画分（使用菌：ストレプトコッカス・ミュータンスＮＣＴＣ１０４４９又はバクテロイデス・インテルメデイウスＡＴＣ，Ｃ２５６１１２，０１５、。

３０．０１．０４．０３．０１．００．１〔実施例２〕アイスクリームクリーム（脂肪率５０％）牛乳（脂肪率３．７％）無糖脱脂練乳砂糖コーンシロップ１００．０％１６．８４％４２．１７２４．２４１１’、２５４．６５安定剤卵黄抗線毛状構造物抗体画分又は抗線毛状構造物卵黄（使用菌：ストレプトコツカス・ミュータンスＮＣＴＣＬＯ４４９又はストレプ１−コツカス・サンイスＮＣＴＣ：ｌＯ５５６）０．３５０．５１００．０％〔実施例３〕アイスクリームクリーム（脂肪率４０％）牛乳（脂肪率３．７％）無糖脱脂練乳砂糖コーンシロップ安定剤抗プロティン卵黄（使用菌：ストレプトコッカス・ミュータンスＮＣＴＣ１０４４９３１，５４％３２．１　Ｇ１５．０８１Ｌ、２５４．６７０．３５．０１００．０％〔実施例４〕ババロア生地牛乳砂糖バニラのサヤセラチン生クリーム抗線維状構造物卵黄又は抗莢膜卵黄（使用菌：ストレプトコツカス・ミュータンスＮＣＴＣ１０４４９、ストレプトコツ力ス・サンイスＮＣＴＣ１０５５８゜バクテロイデス・ジンジバリス３８１又はバクテロイデス・インテルメディウスＡＴＣＣ７５ｍ９０ｇ１本０ｇ５ｍ９５個出願人　　ラ　イ　オ　ン　株式会社代理人　　弁理士　小　島　隆　司

Claims

【特許請求の範囲】

１、口腔内細菌の全菌体又は菌体成分を抗原とし、これ
で免疫した家禽から得られる卵、卵黄又は水溶性卵黄分
画物を原料とすることを特徴とする食品。