JPS62215534A - 鶏卵からの特異的抗体含有材料およびその製造方法と用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、鶏卵を利用して、各種抗原から選んだ特定の
抗原に特異的な抗体を含有する材料を製造する方法、な
らびにその抗体含有材料およびその用途に関する。

（従来の技術） 米国特許第４．４０２．９３８号には、分娩前の牛その
他の有蹄類動物の乳房に抗原物質を接種し、分娩後に初
乳およびその後の乳を採取し、これらから脂肪分と固形
分を除去して乳清を得、この乳清を０．２μ揃以下の孔
径のフィルターで限外口過することにより、口液として
分子！！ｔ１２００以下の未知構造のフードファクター
を含んだ生成物が得られることが開示されている。この
方法によれば、抗原物質としては、花粉、細菌、ウィル
ス、カビ、アルレゲン、精子および毒素が使用できる。

有効成分として上記のフードファクターを含有する生成
物は、栄養補給剤として有用である。

また、一般にこのような抗体含有生成物を動物に摂取さ
せると、その生成物の製造に使用した前記抗原と同じ抗
原に対する攻撃からこの動物を防護するのに効果を発揮
することも認められている。

しかしながら、上記米国特許の場合、感染防御に重要な
抗体成分は上記限外口過法により完全に除去されてしま
っていると考えられる。

さらに、上記方法では分娩最終週の牛に抗原を投与しな
ければならず、また採取対象も初乳を必須成分として含
むが、これは分泌期間が分娩後数日間と極めて限られて
いるため、大量に生産しようとすると非常に大規模な農
場を確保することが必要となり、我が国において上記方
法をｗＬ続して適用することは一般に困難である。

また、上述の米国特許においては、乳清か゛らの有効成
分の分離を０．２μｍのフィルターで行っているため、
生成物としてのフードファクターの他に、Ｂ溶解素、コ
ングルヂニン、インターフェロン、ラクトフェリン、ラ
クトペルオキシダーゼ、Ｂリンパ球、リゾチーム、マク
ロファージ、ポリペプチド、プロペリドン、チオシアネ
ートなどを含有するとされているが、これより分子量の
大きい、抗体分子などの乳中の有用成分が生成物から完
全に除かれてしまっている。したがって、製造過程にお
いて牛に抗原物質を投与しているにもかかわらず、その
抗原に特異的な抗体の一部が生成物に含まれずに利用さ
れないままになっている。

さらに、上記米国特許の方法は、初乳とその後の乳を別
々に処理し、固形分の分離のために数十口の凍結を必要
とするなど操作も煩雑である。

（発明が解決しようとする問題点） 豚、鶏等の家畜類の疾病のうち多くのものが抗体投辱に
よって感染防御が行い得ることは公知であり、そのため
多くの抗体含有材料の製造方法が提案されているが、例
えば前述の米国特許の方法のようにいずれも大量に製造
することはできず、高価なものとなっている。

その他、抗体含有材料は、家畜用飼料、化粧品、医薬品
等への添加物として、さらには血清学的診断用などの用
途にとっても有用であり、その大量で安価な供給が要望
されているところである。

したがって、本発明の目的は、ある抗原に対する抗体を
含有する材料を大量に供給できる安価な方法を提供する
ことである。

さらに、本発明の別の目的とするところは、大量かつ安
価に供給できるそのような抗体含有材料およびそれから
なる家畜用飼料、化粧品、医薬品等への各種添加物を提
供することである。

（問題点を解決するための手段） 本発明者は、かかる目的を達成すべく、上記米国特許の
方法に基き、抗体生成物の製造を大量にしかも時期を選
ばずにいつでも実施できるような手段を開発するため鋭
意検討を重ねた。しかし、牛を使用すると上述した制約
を避けることができないため、鶏の利用に着目して実験
を重ねたところ、鶏の利用によって効率的にしかも時期
を選ばずに接種した抗原に対応する抗体が生産され、こ
の抗体を含む各種用途に有用な材料を得ることができる
ことを知り、本発明を完成した。

ここに、本発明の要旨とするところは、予め抗原を接種
した鶏が産生した卵の全卵、卵黄もしくは卵白から、該
抗原に特異的な抗体を回収することにより得た、特異的
抗体含有材料である。

本発明は、また、鶏に抗原を接種し、該抗原に特異的な
抗体を鶏の体内に形成させること；前記抗体が卵子内に
形成されてから核部が産生した鶏卵を採取すること；お
よび該鶏卵の前記抗体を含有する全卵、卵黄もしくは卵
白から、例えば酸処理などの適宜処理によって前記抗体
を分離回収することからなる方法である。

なお、前記抗体含有材料の利用形態としては、前記卵の
全卵もしくは卵黄をそのまま回収して利用する場合と、
前記卵の全卵、卵黄もしくは卵白から分子！ｌｔｏ、ｏ
ｏｏ以下のものを分離回収して利用する場合とがある。

前者の場合、特に、腸管感染症の予防治療用として有用
であり、後者の場合、分子！！ｔｌＯ，ｏｏｏ以下の区
画分にはＴＦ　（）ランスファファクター）等が含有さ
れているため、感染症の治療用として使用するのが特に
好ましい、残りの分子１！１０，０００超の区分には抗
体の実質的部分が含有されるため、特異的抗体含有材料
としてそのま〜別途利用できる。

本発明の好適態様にあっては、前記抗原として、花粉、
細菌、ウィルス、カビ、アレルゲン、罹患動物の血液、
精子および毒素よりなる群から、生成物の使用目的に応
じて適宜選んだものを使用できる。

本発明の抗体含有材料を飼料用添加物に使用する場合、
抗原が不活化、弱毒化もしくはサブユニット抗原である
のが特に好ましく、得られた生成物は、使用した抗原に
対応した抗体を含有しているので、これを動物に摂取さ
せると、感染予防治療効果が発揮される。

本発明の抗体含有材料はまた、前記特異的抗体のほかに
、米国特許第４，４０２．９３８号に記載のフードファ
クターも含有していると考えられ、したがって、この米
国特許に記載の栄養補給および感染予防効果も本発明の
抗体含有材料により得られよう。

なお、本発明にあって、特異的抗体は分子１ｔｏ。

０００で区分すると前述の分子１１１０，０００以下の
区分には実質的量含有されないが、便宜上この区分も抗
体含有材料と称する。後述するところから明らかなよう
に、この分子量１０，０００以下の区分は上記フードフ
ァクターに相当するものである。

（作用） 本発明の抗体含有材料の製造方法の例を具体的に次に説
明する。ただし、本発明の精神から離れることなく、こ
の方法の各種の変更法あるいは別法も考えられるが、そ
れらはいずれも本発明の範囲内である。

まず、豚、牛などの幼若動物に発生する大腸菌症、特に
下痢症の病原因子である例えばブタＥＴＥＣ９８７１’
　、　Ｋ８８　、Ｋ９９抗原などの適宜の抗原を、所望
により免疫増強剤（アジュバント）と共に鶏に接種する
。この接種は皮下注射あるいは腹腔内投与などの適宜の
経路で可能である。抗原の接種量は、使用抗原の種類及
び免疫増強剤の１！１類に応じて所望の抗体が体内に適
当量形成され、過度の毒性が発揮されないよう選択する
。これらの選択は実験により適宜行うことができる。通
常は、抗原の投与から数週間以内に核部の体内に投与し
た抗原に特異的な抗体が形成され、その鶏が産生ずる卵
にこの抗体が含まれるようになる。高力価の抗体が持続
するように適当な間隔（通常、最低２〜４週間）で同じ
抗原を追加接種することもできる。

卵における抗体の含有は、既知の検査法により確認する
ことができる。

このようにして抗体が卵に含有されるようになった後、
その鶏が産生ずる卵を採取する。同種の抗体を含有する
卵が適当量集まったところで、本発明の方法により抗体
含有材料を製造する。

まず、全卵（あるいは抗体の種類によっては卵黄もしく
は卵白のみ）を取り出し、撹拌することによって、エマ
ルジョン状とする。場合によっては、水を加えて希釈す
る。次に、分子ｆｉ１０．０００カットの限外口過フィ
ルターを使用することによって、抗体成分とツー１フア
クターを得る二つの工程に分かれる。

ずなわら、抗体成分を得るためには抗体を含打する卯エ
マルジジンそれ自体または分子量１０．０００超の抗体
成分のみを原料としてその抗体活性が破壊されないよう
な方法、たとえば、スプレードライ法または凍結乾燥法
により抗体を安定的に回収することができる。

一方、分子１ｉ１１Ｑ、ｏｏｏ以下のフードファクター
は次のようにして分離、回収することができる。たとえ
ばＩＮ塩酸を適当な酸性度（例：　ｐＨ４，５程度）に
なるまで添加し、固形分を沈殿させる。沈殿物を高速遠
心によって除去した後、アルカリ、たとえばＩＮ　Ｎａ
０１１水溶液で中和する。この酸性化と中和も適当な撹
拌下で実施する。このような酸処理に代えて、有機溶媒
で処理することもできる。

次に、得られた上清を、分子５１ｔｏ、ｏｏｏカットの
孔径をもった限外口過フィルター（孔径−０，４５μｍ
）により限外口過して、フードファクターを含有する両
分を捕集することができる。この限外口過フィルターの
孔径を選択することによって、ウィルス、マイコプラズ
マ、細菌などを有効に除去できる。すなわち、分子量お
よそ１０，０００超の抗体分子量は除去されるので、ウ
ィルスや細菌は除かれ、フードファクターが主成分とし
て０液に残留する。

以上の操作は、通常は室温よりあまり高くない温度以下
、たとえば０〜２５℃程度の温度で行うのが好ましい。

４４）られな生成物は、液状のままあるいは凍結乾燥な
どの適宜の手段により保存することができる。

かくして、本発明によれば、鶏を抗原接種対象動物にす
ることから、多数の個体に接種が可能であって、また常
に卵を生産しているから時期的にも何ら制限されず、簡
便に生物体内の抗体産生反応を利用できるのである。ま
た、多数の個体を利用できるので、本発明を多様な多く
の抗原に容易に適用でき、ざまざまな種類の異なる抗体
含有材料を計画的に同時に製造することができる。

しかも、本発明では、鶏卵を回収するだけでよいから、
簡便であり、またその後の処理も著しく簡便かつ容易に
なる。

本発明の生成物、すなわち抗体含有材料（抗体成分およ
び／またはフードファクター）は、各種の用途に有用で
あると期待され、たとえば、飼ｔｉｔ用添加物、医薬品
、化粧品、食品として利用できよう。

次に、本発明をその実施例によってさらに詳細に説明す
るが、本発明はそれらによって特に制限されるものでは
ない。

去旅撚 実験用鶏に抗原としてブタＥＴＥＣ９８７Ｐ抗原を１羽
につき約４５ｍｇ皮下注射した。４週後同量の同じ抗原
をブスターとして再度注射した。この鶏の抗体定璽試験
（凝集反応）の結果、上記抗原に対する特異的な抗体の
生成が確認されたので、その確認の日以降の鶏卵の採取
を開始した。このときの初回免疫後日数と卵黄抗体価と
の関係を第１図にグラフで示す。８週間で飽和値に達し
たことが分かる。

次いで、同様にして別の実験用鶏に抗原に８８、Ｋ９９
を投与した。

得られた卵黄抗体の安定性を評価した。採取した鶏卵か
ら卵黄のみを使い、これをスプレィドライ法によって粉
末化し、この抗体粉末１ｇを９ｓｉのＰＢＳで溶解し等
量のクロロホルムを加えて強く振とう後、３，０ＯＯｒ
ｐａ＋で２０分遠心分離処理をした上清を原液として凝
集反応によって力価を測定した。

結果は第１表にまとめて示す、いずれの抗原の場合も６
ケ月保存後でも抗体力価はほとんど変化しなかった。こ
の抗体含有材料は飼料添加物、医薬品として特に有用で
ある。

第１表 次に、ブクＩ！ＴＥＣ９８７１’抗原を投与した場合に
ついて、採取された鶏卵の全卵約５ｋｇを撹拌して、卵
エマルジョンとし、ｐｕｓで２倍に希釈し、ミキサーで
１５分間撹拌した。この希釈卵エマルジジンにｌＮ１１
ＣＩを９１１が４．５となる量で添加し、さらに１５分
間撹拌した後、析出した固形分を高速遠心により除去し
た。この上清をＩＮ　Ｎａ０１１で中和処理をした後、
孔径０．４５μ鋼の限外フィルターで口過し、分子ｆｆ
１１０．０００以下のものを分離回収した。このカット
分には前記抗原に対する特異的な’ｒＦ（）ランスファ
ファクター）的物質が含有されていた。

次いで、本発明にかかる抗体含有材料の効果を確認する
ために、前述のようにして得られた抗体粉末を仔豚に経
口的に投与した。

抗体投与群と対照群とに対し、それぞれ９８７Ｐ”ＩＥ
Ｔ［ＩＣ攻撃後の体温の変化、臨床症状、そして攻撃菌
の増殖状況をそれぞれ評価した。

結果は第２図および第２表ないし第４表にまとめて示−
す。

第２図からは、抗体投与群では、攻撃直後一旦体温が低
下するが、はり２日経過後直ぐに回復し、一方、対照群
では体温の回復が数口遅れることが分かる。このときの
臨床症状は第２表に便の状態によってまとめて示すよう
に、抗体投与群では３０目では全く正常便となるが、対
照群では死亡例も含めて５　Ｆｌ経過後も回復していな
い。同様の傾向は第３表および第４表からも看取される
。

（発明の効果） すでに述べたところから明らかなように、本発明によれ
ば、鶏を抗原接種対象動物にしてその産生ずる卵を採取
するため、多量にかつ安価に抗体含有材料が製造でき、
あるいは、場合によっては抗原を多種用意して６鶏にそ
れぞれ接種することにより多くの種類の抗体含有材料を
少量だけ筒便かつ安価に製造できる。

したがって、かかる抗体含有材料の用途は飛躍的に拡大
することが考えられる。

また、現在大きな問題になっている仔豚の大腸菌症であ
る下痢症に対しても、本発明にかかる特異的抗体含有材
料の投与によりほぼ完全に防１ｎできることから、その
実際上の利益には計り知れないものがある。

【図面の簡単な説明】

第１図は、免疫後日数と卵黄抗体価との関係を示すグラ
フ：および 第２図は、攻撃菌投与後の仔豚の体温の変化を示すグラ
フである。

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. （１）予め抗原を接種した鶏が産生した卵の全卵、卵黄
   もしくは卵白から得た、該抗原に特異的な抗体を含有す
   る特異的抗体含有材料。
2. （２）前記卵の全卵もしくは卵黄をそのまま回収して得
   た、特許請求の範囲第１項記載の特異的抗体含有材料。
3. （３）前記卵の全卵、卵黄もしくは卵白から分子量１０
   ，０００以下のものを分離回収して得た、特許請求の範
   囲第１項記載の特異的抗体含有材料。
4. （４）前記抗原が、花粉、細菌、ウィルス、カビ、アレ
   ルゲン、罹患動物の血液、精子および毒素よりなる群か
   ら選ばれる、特許請求の範囲第１項ないし第３項のいず
   れかに記載の特異的抗体含有材料。
5. （５）前記抗原が不活化、弱毒化もしくはサブユニット
   抗原である、特許請求の範囲第１項ないし第３項のいず
   れかに記載の特異的抗体含有材料。
6. （６）鶏に抗原を接種し、該抗原に特異的な抗体を鶏の
   体内に形成させること、前記抗体が卵子内に形成されて
   から該鶏が産生した鶏卵を採取すること、および該鶏卵
   の前記抗体を含有する全卵、卵黄もしくは卵白から前記
   抗体を含有する物質を回収すること、 からなる、鶏卵からの特異的抗体含有材料の製造方法。
7. （７）前記卵の全卵もしくは卵黄をそのまま回収して得
   た、特許請求の範囲第６項記載の特異的抗体含有材料。
8. （８）前記卵の全卵、卵黄もしくは卵白から分子量１０
   ，０００以下のものを分離回収して得た、特許請求の範
   囲第６項記載の特異的抗体含有材料。
9. （９）前記鶏卵から前記抗体を分離回収するに際し、全
   卵、卵黄もしくは卵白液を、エマルジョン状になるまで
   撹拌し、次いで酸処理と中和あるいは有機溶媒処理を行
   った後、遠心分離し、得られた上清を抗体含有画分を分
   離するように限外ロ過する、特許請求の範囲第８項記載
   の方法。
10. （１０）前記限外ロ過が、分子量約１０，０００を超え
    る抗体成分を除去するものである、特許請求の範囲第９
    項記載の方法。
11. （１１）前記抗原が、花粉、細菌、ウィルス、カビ、ア
    レルゲン、罹患動物の血液、精子および毒素よりなる群
    から選ばれる、特許請求の範囲第６項ないし第１０項の
    いずれかに記載の方法。
12. （１２）前記抗原が不活化、弱毒化もしくはサブユニッ
    ト抗原である、特許請求の範囲第６項ないし第１０項の
    いずれかに記載の方法。
13. （１３）予め抗原を接種した鶏が産生した卵の全卵、卵
    黄もしくは卵白から得た、該抗原に特異的な抗体を含有
    する特異的抗体含有材料からなる、飼料用添加物。
14. （１４）前記特異的抗体含有材料が、全卵もしくは卵黄
    をそのまま回収して得たものである、特許請求の範囲第
    １３項記載の飼料用添加物。
15. （１５）前記特異的抗体含有材料が、全卵、卵黄もしく
    は卵白から分子量１０，０００以下のものを分離回収し
    て得たものである、特許請求の範囲第１３項記載の飼料
    用添加物。
16. （１６）前記抗原が不活化、弱毒化もしくはサブユニッ
    ト抗原である、特許請求の範囲第１３項ないし第１５項
    のいずれかに記載の飼料用添加物。