JPH01226828A - 抗体およびそれを有効成分とする齲蝕予防剤の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 口腔内に適用し、プラークの形成を抑制して酩蝕を予防
する事ができる抗体及びそれを有効成分とする絨蝕予防
剤に関する。

（従来の技術） 歯科における２大疾患であるＵＫと歯周病の大きな誘因
にプラーク（歯垢）の沈着が挙げられる。

即ち、歯面に沈着したプラーク内部に酸が蓄えられ、そ
の酸によって歯の構成成分であるエナメル質が脱灰され
、鈷蝕を引き起こす。

そのプラークの大部分は細菌によって占められている。

その内、義蝕を誘発するものとして、Ｓ　　ｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｃｏｓ　　ｍｕｔａｎｓ　　’Ｐ　　Ａｃｔｉ
ｎｏｍｙｃｅｓ　　ｖｉｓｃｏｓｕｓ等が挙げられる。

特に、ストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓ　ｔｒｅ
ｐｔｏｃｏｃｃｏｓ　５ｕｔａｎｓ　　；以下Ｓ　、　
ｍｕｔａｎｓと略す、）が歯面に吸着し、ショ糖から多
糖を合成することによってプラーク形成される。具体的
には、Ｓ　、　ｍｕｔａｎｓがグルコシルトランスフェ
レース（ＧＴａｓｅ）を産生し、これによりシー！糖か
らデキストラン、ムタン等の粘着性多糖を合成する。そ
して、その合成された多糖は、Ｓ、　ｍｕｔａｎｓをは
じめとする他の口腔内細菌を巻き込み、プラークを形成
する。又、Ｓ　、　ｍｕｔａｎｓ等の菌により、種々の
糖から酸が産生され、その酸がプラーク内で滞留され、
エナメル質を脱灰する。

以上のように貼蝕の発生には、Ｓ　、　ｍｕｔａｎｓの
歯面への付着という第１ステージと不溶性グルカンの合
成という第２のステージが重要なステップとなっている
。

従って、Ｓ　、　５ｕｔａｎｓの歯面への付着の抑制又
は、不溶性グルカン合成の抑制を行うことでより効果の
高い門蝕予防が期待される。

（発明が解決しようとする課題） 従来、プラーク形成を抑制する方法として、抗閏剤、　
　ＧＴａｓｅ阻害剤、プラーク分解酵素１代用塘等種々
の物質が検討されている。

そのような中で、特定の物質に対して特異的に反応する
抗体が注目されており、抗体を用いた鯖蝕予防剤の研究
が行われている０例えば、Ｓ、■ｕｔａｎｓ全菌体を牛
に免疫することによって、得られる母乳を使用する方法
が知られている（英国特許第１５０５５１３号明細書）
。

又、Ｓ　、　ｍｕｔａｎｓ及びその菌に由来する各種の
抗原をヤギ・ウサギ・ラット等の哺乳動物に免疫して約
１カ月後ぐらいから血清を採取して、Ｓ　、　ｍｕｔａ
ｎｓと特異的に反応する抗体を調製し、その抗体を使用
する方法が提案されている（特開昭６０−３８３２７号
公報）。

しかしながら、母乳については、牛の管理・手間・費用
又、血液については、血液の採取・血液からの抗体の調
製・動物の管理等に手間・時間・費用等がかかり、いま
だ実用化されていない。

このような問題点について、本発明者らは、鋭意努力の
研究を行った結果、後述の理化学的特性を有するＳ　、
　ｍｕｔａｎｓの菌体表層蛋白抗原を鶏に免疫し、その
鶏が産生じた卵より抗体を調製すれば、前記の問題点が
ことごとく解決され、更に優れたプラーク形成抑制効果
を有することを見出し、本発明を完成するに至ったので
ある。

特に、鶏を用いた抗体の調製においては、必ずしも免疫
した抗原に特異的に反応する抗体が十分量得られるとは
限らない０例えば、ウィルス抗原を免疫した場合、十分
なる抗体価が得られなかった。

尚、鶏に免疫する際には、抗原・免疫方法等を十分に吟
味し、抗体価の高いものが得られるように検討しなけれ
ばならない。

従って、Ｓ　、　ｍｕｔａｎｓ菌体表層蛋白抗原を免疫
して、十分に高い抗体価を存する抗体が得られるという
知見は、全く予想されないものであり、本発明者らによ
って始めて得られたものである。

本発明の目的は、Ｓ　、　ｍｕｔａｎｓに対する免疫活
性を示し＼３　、ｍｕｔａｎｓの歯面への付着に対する
十分な阻害効果を有し、量産性にも優れ、生産コストが
低く、安全性にも優れ、門蝕予防剤の有効成分として有
用な抗体及び該抗体を含むＭＭ予防剤を提供することに
ある。

（課題を解決するための手段） 即ち、本発明は門蝕誘発の病原菌としての血清型がｃ、
ｅ又はｆであるストレプトコンカス・ミュータンスの菌
体表層蛋白抗原を免疫した鶏が産出する卵より調製され
た免疫グロブリンであって、前記ストレプトコンカス・
ミュータンスに対して免疫活性を有する抗体及びそれを
有効成分として含む＆ｉ練予防剤に関する。

本発明のＳ　、　５ｕｔａｎｓに対する免疫活性を有す
る抗体は、下記理化学的特性を存する血清型がＣ１ｅ又
はｒであるＳ　、　−ｕｔａｎｓｌｌｉ１体表層蛋白抗
原ＳＡを免疫した鶏が産生ずる卵より調製された免疫グ
ロブリンとして得ることができる。

■　５ＤＳ−電気泳動によって測定された分子量が１７
５，０００から１９５．０００ダルトンの範囲。

■　リポタイコ酸、多糖抗原、グルコシルトランスフェ
ラーゼ、フルクトシルトランスフェラーゼ等と区別され
るたんばく譬。

本発明・の抗体（以後抗ＳＡ抗体と称する）を得るため
に用いるＳ　１ｍｕｔａｎｓ菌体表層蛋白抗原ＳＡとし
ては、上記特性を有する表層蛋白質であればどのように
調製したものでも利用できる０例えば、Ｒｕ５ｓｅｌｌ
、　Ｍ、　Ｉｒ４．らの方法［Ｒｕ５ｓｅｌｌ、　Ｍ、
　１１．、　ｅｔ　ａｌ；　　ＩｎｆｅｃＬｉｏｎａｎ
ｄ　　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、　　２９．　９９９−１００
６　　（１９８０））に準して調製することができる。

即ち、血清型がｃ、ｅ又はｆ型である Ｓ　、　ｍｕｔａｎｓを適当な培地で培養し、その培養
上清あるいは、得られた菌体から調製される。

ここで用いるＣ型菌としては、３　、　ｍｕｔａｎｓｌ
ｎｇｂｒｉｔｔ株、　ＭＴ８１４８株、　１０４４９株
等の公知で、容易に入手可能な菌を用いることができ、
例えば、Ｓ　、　ｓ＋ｕｔａｎｓ　ＭＴ８１４８株、　
Ｉｎｇｂｒｉｔｔ株は大阪大学歯学部から、１０４４９
株はナショナル　コレクションオブ　タイプ　カルチャ
ーズ（ＮａｔｉｏｎａｌＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　
Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ　（ＮＣＴＣ））から入手
できる。又、ｅ梨園やｆ梨園についても公知の菌株を同
様に入手して用いればよい。

又、培地としては、少なくともグルコースを含む培地が
利用できる。

又、培養温度は、菌体増殖が得られ、且つ菌体表層蛋白
抗原ＳＡの生産に適した範囲内であれば良いが、良好な
菌体増殖と菌体表層蛋白抗原ＳＡの生産という点からは
、通常３７℃程度とするとよい。

又、培養時間は、培養温度、培地の種類等の培養条件に
よって異なるが、菌体表層蛋白抗原ＳＡの最適収量に達
する時期を選択して決定すれば良く、１８〜６４時間程
度とすればよい。

又、その他の培養条件についても、上記の観点から適宜
選択すれば良い。

Ｓ　、　ｍｕｔａｎｓ菌体表層蛋白抗原ＳＡは、前述の
ようにＲｕ５ｓｅｌｌ、　Ｍ、　’ｔ４．らの方法（Ｒ
ｕｓｓｅｌｌ、　Ｍ、　Ｗ、。

ｅｔ　ａｌ；　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄ　Ｉｓ＋ｍｕ
ｎｉｔｙ＋　２９＋　９９９−１００６（１９８０）　
）に準じて調製する。

抗体を得るための抗原として、以上の操作で得られた菌
体培養上清もしくは菌体からの抽出物からの粗精標品Ｓ
Ａ又は、精製標品等して得られたＳＡ等を用いることが
できる。

次に、本発明の抗ＳＡ抗体の調製方法について詳述する
。

本発明の抗ＳＡ抗体は、上述のＳＡで免疫された鶏の卵
から調製することができる。

免疫される鶏としては、特に制限はないが、抗体の量産
性という点からは、白色レグホーン等の卵用種を用いる
と良い。

又、ＳＡによる免疫方法としては、皮下注射、筋肉注射
、腹腔的投与等による通常の方法や、点鼻１点眼等の方
法によって行うことができる。更に、ＳＡの投与量は、
所望の抗体価が得られ、且つ鶏に対して悪影響を与えな
い量を適宜選択すれば良い。

通常、初回免疫から数週間で投与抗原に対して特異的に
反応する抗体が鶏卵（卵黄）中に得られる。

尚、必要に応じて例えばＦＣＡ　（フロイント完全アジ
ュバント）、ＦＩＡ（フロイント不完全アジュバント）
等のアジュバントをＳＡと共に併用しても良い。

免疫から１力月以上経過した鶏から採取した卵から本発
明の抗ＳＡ抗体を調製することができる。

尚、卵黄中の抗体価は、酵素免疫吸着法（ＥＬＩＳ＾）
。

ラジオイムノアッセイ等を用いて測定することができ、
免疫後に２週程度の間隔で抗体価を測定することにより
抗体価の推移を追跡することができる。

後述の実施例においては、［！ＬＩＳＡでの測定により
抗体価の推移を追跡し、抗体価が十分に上昇した段階の
卵を採取して、本発明の抗ＳＡ抗体を調製した。

又、通常、約３カ月間にわたって高抗体価を得ることが
できる。

尚、免疫後、抗体価の減少が見られた場合、適当な間隔
で適宜追加免疫することにより抗体価を高くすることが
できる。

本発明の抗ＳＡ抗体は、例えば上記のようにして免疫し
た鶏の卵黄に含まれる免疫グロブリンを抽出・分離する
ことによって得ることができる。

この抽出・分離方法としては、例えば、デキストラン硫
酸やポリエチレングリコールを用いた沈澱法や、プロパ
ツールやクロロホルムを用いた抽出法等通常用いられて
いる免疫グロブリンを抽出・分離できる種々の方法等が
利用できる。

以上のようにして得られた本発明の抗ＳＡ抗体は、Ｓ　
、　ｍｕｔａｎｓの菌体に結合して存在するＳ　、　ｍ
ｕｔａｎｓ菌体表層蛋白抗原ＳＡに対して特異的に抗体
として反応する。即ち、Ｓ　、　ｍｕｔａｎｓに対して
免疫活性を有する。

Ｓ　、　ｍｕｔａｎｓに対して免疫活性を有する本発明
の抗ＳＡ抗体は、Ｓ　、　ｍｕｔａｎｓの歯面への付着
を阻害することによって、Ｓ　、　ｍｕｔａｎｓの口腔
内での活動を制御し、顯蝕を予防することができる。

以上記載のごとく本発明は、通常の哺乳動物から調製さ
れる製法に比べて、容易に、且つ大量に調製でき、しか
も卵黄から抗体を調製するという簡単な操作により免疫
グロブリンのうちＩｇＧ画分だけを特異的に分離精製す
ることができ、齢蝕予防剤の有効成分として有用なる抗
体を提供するものである。

これらの種々の抗体含有画分は、通常の馴蝕予防剤に配
合し、本発明に係るａＡ蝕予防剤を調製することができ
る。

即ち、本発明の關蝕予防剤は練り歯磨き・粉歯磨き・液
状歯磨き等の歯磨き類、マウスウォッシュ、口腔用パス
タ、歯肉マツサージクリーム、うがい用錠剤、トローチ
、チューインガム、缶飲料等口腔内商材だけではなく、
その目的においては種々の食品にも適用されるものであ
る。

本発明抗体の献蝕予防材への配合量は、その投与形態に
応じた投与量に従って適宜選択すれば良く、例えば、１
０３以上の抗体価を有する抗体を０、０００１−１０重
量％程度とすることができる。

向、本発明のａＡ蝕予防剤の伸、の成分としては、使用
目的、使用形態等に応した適当な成分が用いられる。例
えば練り歯磨きの場合では、炭酸カルシウム、燐酸水素
カルシウム、ピロリン酸カルシウム、不溶性メタリン酸
ソーダ、水化アルミナ。

無水ケイ酸等の研磨剤、グリセリン、ソルビット。

プロピレングリコール等の保湿剤、ラウリル硫酸ナトリ
ウム、ラウロイルサルコシンナトリウム。

石鹸末等の発泡剤、カルボキンメチルセルロースナトリ
ウム、カラギーナン等のバインダー、さらに適当なる香
料成分、甘味剤、保存剤等の成分を水と混合し、常法に
従って製造する。又、マウスウォッシュ等の口腔洗浄剤
その他においても、製品の性状に応じた成分が適宜配合
される。

尚、本発明においては、歯牙着色除去剤３口臭予防剤、
フッ素等の虫歯予防剤、抗酵素予防剤等の種々の薬効成
分を配合することも可能である。

よって、本発明の義蝕予防剤は、前記免疫卵より調製し
た卵黄抗体を用いることにより、ストレプトコ・マウス
・ミュータンスによるプラークの形成を効果的に抑制し
、Ｍ蝕の発生を良好に防止する。しかも、前記卵黄抗体
は安全性が高いため、本発明の話蝕予防剤は使用上の安
全性が高いものである。

〔実施例〕

以下実施例により本発明を更に詳細に説明する。

尚、以下における％表示は、特に、指定されていない場
合には、重量／容量％を示す。

実施例１ （ａｌ抗原の調製 Ｓ、　ｓ＋ｕｔａｎｓ　Ｉｎｇｂｒｉｔｔ株（血清型Ｃ
１大阪大学歯学部から入手）を１２１の半合成培地（Ｂ
ｏｗｄｅｎ。

Ｇ、　Ｉｌ、、　ｅｔ　ａｌ；　Ｊ、　Ｄｅｎｔ、　Ｒ
ｅｓ、　（Ｓｐｅｃｉａｌ　ｌ５ｓｕｅ　Ａ）旦、　Ａ
６０−６４　（１９７６）　）で３７℃、７２時間培養
した。培養液を連続遠心により菌体と培養上清とに分離
した０分離した培養上清に対して７５９４　飽和の硫安
沈澱処理（４℃、−晩）を行い、得られた沈澱物を遠心
分離法により回収した。次に、この沈澱物を８Ｍ尿素を
含むｌｏｍＭ）リス塩酸緩衝液（ｐ）１８．０）に溶解
した溶液を蒸留水に対して透析し、更に、該溶液中を沈
澱物と上清液に分離した。

その沈澱物を８Ｍ尿素を含む１０ｍＭ）リス塩酸緩衝液
（ｐＨ８，０）に溶解し、不溶物を遠心分離により除去
したのち、その上清液をＤＥＡＥ　−セルロース（ＤＥ
ＡＥ−ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ、ワットマン製）の５．０×
３０ｃｍ０カラムにかけた。

カラムに吸着した画分は、Ｏ，ｌ　５Ｍ　Ｎａｃｌ、　
８　Ｍ尿素を含む１０１１Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐ）１
８．０）によって選択的に溶出させた。

溶出液は、適当な量にて分画し、各両分を７．５％のポ
リアクリルアミドゲルを用いたＳＯ３−ポリアクリルア
ミド電気泳動（以後５ＤＳ−ＰＡＧＥと略す）に供与し
た。その結果、ｔｓｓ、ｏｏ。

ダルトンの分子量をメインに含んでいる両分を集めてｌ
０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，４）に対して透析し、更
に、該溶液中に生じた沈澱を遠心分離法により除去して
上清液を得た。この上清液を粗精製標品（免疫抗原）と
した。

更に、該標品を５ＤＳ−ＰＡＧＥにかけ、クマシ・ブリ
リアント・ブルー（ＣＢＢ）での染色を行ったところ、
１８５にダントンの位置のバンドをメインとする数本の
バンドが検出された。

上記の５ＤＳ−ＰＡＧＥの結果から算出された咳標品中
のＳＡ含有率は４０重量％であった。

ｔｂ＋抗原の鶏への免疫 ｔａ＋で得た粗精製免疫抗原標品０．５ｓ＋ｊ’（ＣＢ
Ｂ−Ｇ法で測定した場合の０．５ｍｇたんばく質量を含
む）とＦＡＣ（フロイント完全アジュバント）０．５Ｊ
を１　：　１　混合してＷ２Ｏ型のエマルジョンとした
。

得られたエマルジョンを鶏の胸筋にＱ、　５　ｍ　ｌず
つ注射し、初回免疫を行った後、下記の方法に従って、
採取した卵から得たＷＳＦ（後述）の抗体価を測定し、
その推移を観察した。

次に、第１図に示すように初回免疫後８週後に卵黄中の
抗体価が下がり始めたのを確認して、前回と同様にして
２次免疫を行った。

２次免疫終了後、約１カ月経過した後から鶏が産生ずる
卵を集卵した。

（Ｃ１抗体の調製 卵から分離した卵黄１３ｖａｌとこれと同量のＰＢＳ（
リン酸緩衝液、ρ１１７．４）を混合し、得られた混合
液に更に混合液と同量（２６ａ＋ｆ）のクロロホルムを
加えて、これをよく撹拌した。

撹拌終了後、混合液を室温下で３０分間放置した後、こ
れを３．００Ｏｒｐｍ　、２０分間の遠心分離にかけ、
最上層の透明画分を回収し、抗体含有画分（Ｗａｔｅｒ
　５ｏｌｕｂｌｅ　Ｆｒａｃｔｏｎ；Ｗ　Ｓ　Ｆ　）と
した。

この両分は、１．７Ｘ１０’　の抗体価を有していた。

尚、該１．７Ｘ１０’の抗体価を示すＷＳＦ（１３閣１
　；　１３ｍｇの卵黄から調製）たんばく質含有濃度を
とニーレフト法により測定し、該ＷＳＦ中の全たんばく
質量を求めたところ約２６１１ｇという値を得た（約２
．０ｍｇ／ｍｌ　Ｘ　Ｉ　３ｗＩｊり。

ｔｄｌ抗体価の測定方法； 抗体価の測定は、ＥＬＩＳＡによって行った。

まず、実施例２で得た精製免疫抗原標品を３１０ｎｇ／
ｍｌとなるように５０ｍＭ炭酸ナトリウム媛衝ｌ佼（ｐ
Ｈ９，６）に溶解させて得られた溶液を、９６穴フ゛レ
ート〔イムロン（１ｍｓｕｌｏｎ　）　２　、グイナテ
ノク社製〕の各ウェルに１００μｌずつ入れ、４℃で一
晩放置し、該両分に含まれる精製抗原をプレートに吸着
させた。

次にプレートを３％ＢＳＡ　（生血清アルブミン）を含
むＰＢＳ（ｐＨ，４）と３７℃で１時間接触させて、ブ
ロッキングを行った後、ＰＢＳ−Ｔでプレートを５回洗
浄した。

ここで、先に得たＷＳＦのＰＢＳ−Ｔによる２段階稀釈
液の１００μｌを各ウェルに加え、３７℃で１時間反応
させた。

反応終了後、プレートをＰＢＳ−Ｔで５回洗浄し、更に
、プレートに２次抗体としてのベルオキンダーゼ結合抗
ニワトリＩｇＧ抗体（たんぽ（質量１．６７μｇ／ｍｊ
りの１００μｉを各ウェルに加え、２５℃で３０分間反
応させた後、ＦＢＩ−Ｔで５回洗浄した。

次に、プレートの各ウェルに０．２Ｍ　リン酸２ナトリ
ウム−０，１Ｍ　クエン酸緩衝液（ｐ）１５．０　）　
　５　ｏ、ｔに基質である０−フェニレンジアミン２０
ｍｇおよび過酸化水素ｌＯμ！を溶解した溶液を１００
μｐ加え、２５℃で２０分間反応させた。反応停止は、
３Ｎ硫酸溶液１００μ！加えることで行った。

反応停止後、各ウェルの吸光度（００，９”　）を測定
することによって抗体価を測定した。抗体価はエンドポ
イントタイター法により求め、吸光度が０．２となる稀
釈倍率とした。

ｔｅ＋抗体によるＳ　、　ｍｕｔａｎｓの凝集活性抗Ｓ
Ａ抗体のＳ、　ｍｕｔａｎｓへの凝集活性を検討した。

まず、ホルマリン処理Ｓ、　５ｕｔａｎｓ　ｌｎｇｂｒ
ｉｔｔ株をマクファーランド指数を５　（ＯＤｓｓ。＃
　２．　ＯＯ）となるように調製し、試験管に０−５　
ｍ　ｌとなるように分注した。

ここで、（Ｃ１で得られた１、７ＸｌＯ’　の抗体価を
有するＷＳＦのＰＢＳの２段階稀釈液の０．５ｍｌを各
試験管に加え、３７℃で一晩反応させた。反応終了後、
Ｓ　、　ｍｕｔａｎｓ　Ｉｎｇｂｒｉｔｔ菌体の凝集の
有無を目視にて判断した。又、凝集が確認される最終稀
釈倍率とするエンドポイントタイター法にて凝集抗体価
を求めた。

その結果、ｔｅｌで得た！、７Ｘ１０’の抗体価ををす
るＷＳＦは、Ｓ、　５ｕｔａｎｓ　ＩｎｇｂｒｉＮ株菌
体を凝集することが確認され、更に該ＷｓＦは菌体凝集
価６４の値を示した。

（ｆｌ　Ｓ　、　＋＊ｕｔａｎｓの平滑面への付着抑制
テストＳ、　ｍｕｔａｎｓの歯面への付着のモデル実験
として、ガラス面への付着実験を行った。

即ち、＋ｃ＋で得た抗体を加えることで、Ｓ　、　ｓｕ
ｔａｎｓＩｎｇｂｒｉｔｔ株のガラス面への付着がどの
程度阻害されるかを評価するものであり、その詳細を以
下に述べる。

まずｔＣｒで得た１、７Ｘ１０’の抗体価を有するＷＳ
Ｆ及びその１０倍稀釈液を試験溶液とした。

これとは別に、免疫をしていない鶏（（ｂ）と同様の鶏
）の卵からｔＣｒと同様にしてＷＳＦを調製し試験溶液
とした。尚、該Ｗ　Ｓ　Ｆ　′ｈ＜Ｓ　、　ｍｕｔａｎ
３菌体表層蛋白抗原ＳＡに対して特異的に反応しないこ
とを確認した。

次に、これらの各試験γ８液を１３＋ａ−φ×１００１
ＩＩＩ試験管にｌＷ１分注した後、更に１．５％スクロ
ースを含む１．５倍１度のＢＨＩ培地２−１をそれぞれ
の試験管に加えた。

更に、各試験管にＢＨＩ培地で前培養したＳ、　ｍｕｔ
ａｎｓ　ｌｎｇｂｒｉｔｔ株の懸！Ａ液０．１ｍｌを加
えて、３０°に傾斜させた状態で、３７℃の温度下で１
８時間静置培養した。

表１に各試験管内に調製した調製物の組成を示す。

静置培養終了後、各試験管を以下の操作に従って処理し
、菌体の試験管壁への付着悦を求めた。

静置培養終了後の試験管（この試験管を第１の試験管と
する）を静かに回転させ、試験管壁に付着していない菌
体を含んだ溶液の全量を第２の試験管に移した。次に、
菌体が付着している第１の試験管に５０ｍＭリン酸緩衝
液（ｐＨ６，８）の３鶴ｉを加え、これを再び回転させ
、解離した菌体を含む緩衝液の全量を第３の試験管に移
した後、この第１の試験管に、５０ａ＋ＭＩＪン酸緩衝
液（ｐｌ＋　６．８　）の３−Ｅを加えた。

更に、第１〜第３の試験管を超音波処理し、各試験管内
に均一な菌体浮遊液を調製し、各浮遊液の吸光度（ＯＤ
ｓｓ。）を測定し、以下の式に従って付着率を求めた。

得られた結果を表１に示す。

表　　１ 実施例２　　ＳＡ精製標品の調製 実施例１と同様の条件で、Ｓ　、　ｍｕｔａｎｓ　ｌｎ
ｇｂｒｉｔｔ株を半合成培地（１２１７）で培養した。

得られた培養上清に対して７５％飽和の硫安沈澱処理（
４℃、−晩）を行い、得られた沈澱物を遠心分離法によ
り回収した。次に、この沈澱物を８Ｍ尿素を含むｌｏｍ
Ｍ）リス塩酸緩衝液（ｐ）１８．０）に溶解した溶液を
藤留水に対して透析し、更に、該溶液中を沈澱物と上清
液に分離した。その沈澱物を８Ｍ尿素を含むｌＯｍＭ）
リス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）に溶解し、不溶物を遠心
分離により除去したのち、上清液を得た。その上清液を
、以下に詳述する調製用５ＤＳ−ＰＡＧＥに供与する粗
≦Ａ精製標品とした。

調製用５ＤＳ−ＰＡＧＥ操作条件； 上述した咳粗ＳＡ精製標品６ｓ＋ｌ（８Ｍ尿素を含む１
０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐ）１８．０）に溶解）にＳ
ＤＳを０．１３６　ｇ　、　　βメルカプトエタノール
を０．３４ｍ６を加えよく撹拌し、６０℃でｌＯ分間イ
ンキユーヘートした。この７容液を１０．０００ｒｐ−
で１０分間遠心し、その上清を調製用５ＤＳ−ＰＡＧＥ
に添加する試料とした。

調製用５ＤＳ−ＰＡＧＥは１０％グリセロールを含む５
％アクリルアミドゲルにて分離を行った。

粗５Ａｊｌ製櫟品３■２を：’ｓ＋ｓ＋厚、１６０Ｘ１
６　（１＋鴫の１０％グリセロールを含む・５％アクリ
ルアミドゲルに供与した。泳動は、２０ｍＡ定ｔｆＬで
約１８時間行った。

泳動終了後、分離ゲルを４℃の０．２５ＭＫｃ＋　溶液
につけ、目的の１８５．０００ダルトンのバンドを選択
的に切り取った。１８５．０００ダルトンの蛋白質はポ
リアクリルアミドゲルから電気的に溶出し、０．１％Ｓ
ＤＳを含むリン酸緩衝液（ｐｌ＋　７．２　）に透析し
た。

得られた蛋白質は２ｍｇの溶液であり、２８０ｎｍの吸
光度より求めた蛋白質量は３．４ｍｇであった。

更に、実施例１と同様に咳標品を５ＤＳ−ＰＡＧＥにて
分析を行ったところ、分子量 ｉｓｓ、ｏｏｏダルトンの位置に単一のバンドが検出さ
れ、該精製標品が分子量ｔｓｓ、ｏｏｏダルトンのＳＡ
精製標品であることが確認された。

上記ＳＡ精製免疫抗原標品を抗原として用いる以外は実
施例１と同様にして抗体の調製を行ったところ、同様に
ＳＡと特異的に反応する抗体が得られた。

更に、得られた抗体の菌体付着阻害効果を同様の方法で
試験した結果、同様に優れた効果が認められた。更に、
菌体凝集活性を試験した結果、同様に優れた効果が認め
られた。

次に本発明の蘭蝕予防剤の実施例を記載する。

（実施例３）　練り歯慶き ピロリン酸カルシウム　　　　　　　４２％グリセリン
　　　　　　　　　　１５％ソルビット７０％　　　　
　　　　　１０％カルボキシメチルセルロース　　　１
２％サッカリンナトリウム　　　　　　　０．１％ラウ
リル硫酸ナトリウム　　　　　２０９Ａ香　　料　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．　０
　　％水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　残　　量１００％ 以上の成分に実施例１で得た抗体含有画分（ＷＳＦ）０
．５％（抗体価１．７ＸｌＯ’のもの）を配合する。

（実施例４）　マウシェウォッシュ エタノール　　　　　　　　　　　２２．５％サッカリ
ンナトリウム　　　　　　０．０５％ラウリルジェタノ
ールアミド　　　０．３％香　　料　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　１．０　　％水　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残　　量１０
０％ 以上の成分に実施例１で得た抗体含有画分（ＷＳＦ）０
．５％（抗体価１．７ｘｌｏ’のもの）を配合する。

（発明の効果） 本発明により、Ｓ　、　ｍｕｔａｎｓの歯面への付着に
対する十分な阻害効果を有し、量産性にも優れ、生産コ
ストが低（、安全性にも優れ、う蝕子防剤の有効成分と
して有用な抗体及び該抗体を含むう蝕子防剤が提供され
た。

特に、本発明のＳ　、　ｍｕｔａｎｓに対する免疫活性
を有する抗体は、従来の哺乳動物を免疫して得る抗体と
比較して以下のような利点を有する。

ｆ１１本発明の抗体は、免疫した鶏の卵中に得られ、採
卵、卵の取り汲いおよび卵がらの抗体の取得に特別な、
あるいは熟練した技術を必要としない。

しかも、卵黄には免疫グロブリンのうちＩｇＧクラスし
か移行しないので、ＩｇＧのみを容易に得ることができ
る。

これに対して、免疫した哺乳動物から裸面により抗体を
得る場合には、保証に熟練した技術が必要とされ、しか
も血清から大量のＩｇＧを分離・精製することは非常に
困難である。

（２）本発明の抗体の調製に用いられる鶏は、管理が容
易であり、例えばラット等と比較してもその管理費用が
安い。

しかも、哺乳動物から継続的に多量の血液や乳を得るこ
とは困難であり、哺乳動物を用いる方法は抗体の量産に
は通さないが、鶏は長期間にわたって安定して卵を生み
続けるので、本発明の抗体は頃産可能であり、かつ生産
コストが低い。

（３）免疫した哺乳動物の血液や乳から調製した抗体の
安定性は必ずしも良好でなく、血清中で、あるいは安定
性は必ずしも良好でなく、血清中で、あるいは精製した
状態でも一８０℃程度の温度条件下での保存が必要とさ
れる。

本発明の抗体は、良好な安定性を有し、また保存性も良
く、例えば卵の状態で４℃で１〜２箇月間保存できる。

最後に、鶏を用いた抗体を調製する場合、必ずしも免疫
した抗原に特異的に反応する抗体が十分屋得られるとは
限らない。例えば、ウィルス抗原を免疫しても、十分な
抗体価が得られなかった。

従って、Ｓ　、　ａ＋ｕｔａｎｓの菌体表層蛋白抗原で
鶏を免疫しても、実用的レヘルの抗体価を有する抗体が
得られるかどうかは全くＹ−想されないものであり、本
発明者らによって始めて達成されたものである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例Ｉにおいて、免疫した鶏の抗体価の推
移を示すグラフである。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）■蝕誘発の病原菌としての血清型がｃ、ｅ又は、
   ｆであるストレプトコッカス・ミュータンスの菌体表層
   蛋白抗原を免疫した鶏が産生する卵より調製された免疫
   グロブリンであって、前記ストレプトコッカス・ミュー
   タンスに対して免疫活性を有する抗体。
2. （２）■蝕誘発の病原菌としての血清型がｃ、ｅ又は、
   ｆであるストレプトコッカス・ミュータンスの菌体表層
   蛋白抗原を免疫した鶏が産生する卵より調製された免疫
   グロブリンであって、前記ストレプトコッカス・ミュー
   タンスに対して免疫活性を有する抗体を有効成分として
   含む■蝕予防剤。