KR890002947B1 - 충지 예방 조성물 - Google Patents

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Description

충지 예방 조성물

본 발명은 스트랩토코커스 뮤탄스(Streptococcus mutans)균의 전균체 또는 균체성분으로 동물을 면역시킴에 의해 얻은항체와 혼합시킨 충치(dental caries)예방조성물에 관한 것이다. 더 상세히는, 본 발명은 장기간동안 항체를 안전하게 보존하고 따라서 장기간에 걸쳐 항체로 하여금 그 효과를 확실하게 나타내도록하여, 이로써 치아 플라아크(plaque)의 형성을 억제하고 충치를 방지하는 충치예방 조성물에 관한것이다.

치아표면에 견고히 부착하는 치아플라아크는 박테리아 약 70%, 박테리아에 의해 생성되는 다당류 약 20% 및 음식잔존물 약 10%로 구성되어 있다.

치아플라아크에 정장된 산은 충치(dental caries)를 일으키면서 에나멜질을 부패시킨다고 한다.

그러므로, 치아플라아크는 충치의 원인인것으로 관찰되고있다.

치아플라아크의 형성은 구강박테리아, 특히 스트랩토코커스 뮤탄스균에 의한 수크로오스로부터 다당류의 합성에 기인하여 촉진된다. 더 구체적으로, 스트랩토코커스 뮤탄스균은 GTF(글루코실트랜스퍼라제, 댁스트란 합성효소)를 통하여 수크로오스로부터 댁스트란 및 뮤탄과 같은 점착성 다당류를 합성한다.

이와같이 합성한 다당류는 일정한 균총(bacterial bouquet)을 갖는 치아플라아크를 형성하면서 다른 박테리아(바이러스)뿐만 아니라 스트랩토코커스 뮤탄스균을 함입한다.

게다가, 스트렙토코커스 뮤탄스와 같은 박테리아는 각종 설탕을 이용함으로써 산을 생성하고 이와같이 생성된 산은 다당류와 박테리아 벽에 남아있음으로써 에니멜질의 표면을 탈석회 시킨다.

따라서 입안의 스트랩토코커스 뮤탄스균의 수를 감소시키고 충치를 방지하기 위해 치아플라아크의 형성을 억제시키는 것이 바람직하다.

입안의 스트랩토코커스 뮤탄스균의 정착(colonization)은 스트랩토코커스 뮤탄스의 전균체(全菌體)로 소를 면역시킴으로써 얻은 모유를 사용함으로써 억제됨이 영국허 제1505513호에 공지되어 있다.

본 발명자는 스트랩토코커스 뮤탄스균으로부터 유도된 각종 항원에 대한 항체중의 구강내 스트랩토코커스 뮤탄스균의 정착을 저해하는 항체를 연구하였다.

그 결과, 본 발명자는 스트랩토코커스 뮤탄스균, 그의 세포벽 획분(劃分), 섬유상구조획분, 선모(pilus)성분획분, 글루코실트랜스퍼라제 및 단백질항원 획분으로 포유동물을 면역시킴으로써 얻은 항혈청 및 우유에 포함된 항체는 치아플라아크 형성 억제표과를 가짐을 발견하였다. 그러나, 이들 항체는 충치예방 조성물에서 안정하지 않으며, 특히 그들은 라우릴황산나트륨과 같은 음이온성 계면 활성제의 존재하에서 쉽게 불활성화된다. 따라서 장기간동안 유효하게 남아있도록 하는 방법으로 항체를 충치예방 조성물에 함입시키는 것이 필요하다.

따라서, 본 발명을 요약하면 다음과 같다.

본 발명의 목적은 스트랩토코커스 뮤탄스균의 전균체 또는 균체 성분으로 면역시킨 동물로부터 얻은 항체가 장기간동안 안정하게 함입되는 충치예방 조성물을 제공하는 것이다.

위의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명자는 스트랩토코커 뮤탄스균의 전균체 또는 균체 성분으로 면역시킨 동물로부터 얻은 항체와의 충치예방 조성물의 혼합에 대한 일련의 연구를 수행하였다. 그 결과, 이와같이 얻은 항체는 비 이온성계면활성제, 특히 라우로일 디에탄올 아미드와 같은 알칸올아미드 지방산 에스테르와 조합하여 항체를 조성물에 혼입시킬 때, 라우릴 황산나트륨과 같은 음이온성 계면활성제를 포함하는 충체예방조성물에서 장기간동안 안정함을 발견하였다.

그러므로 본 발명에 따르면, 항체와 비이온성계면 활성제로 이루어지는 충치예방 조성물을 제공하는데, 상기 항체는 스트랩토코커스 뮤탄스균의 전균체로 구강에 적용할 수 있다. 그 안에 포함된 항체는 스트랩토코커스 뮤탄스균의 전균체 또는 균체성분으로 면역시킨 동물로부터 얻어지는데, 구강내의 스트랩토코커스 뮤탄균스의 정착을 방지하고 치아플라아크의 형성을 억제한다.

조성물에 함입된 비이온성계면활성제 때문에, 항체는 비활성화되지않고 장기간동안 그 효과를 유지한다.

본 발명의 상기한 목적과 다른목적, 특징 및 이점은 다음의 설명으로부터 더 충분히 이해될 것이다.

본 발명을 상세히 기술하면 다음과 같다.

본 발명의 충치예방 조성물은 항원으서 스트랩토코커스 뮤탄스균의 전균체 또는 균체 성분으로 면역시킨 동물로부터 얻은 항체와 혼합시킨다.

항원으로 사용된 스트랩토코커스 뮤탄스균은 예를들면 BHI배지의 투석에 의해 얻은 외액(外液)중에서 박테리아를 성장시키고 이와같은 성장시킨 박테리아를 세정하고 포르말린처리 시킴으로써 수행하는 공지의 배양 및 전처리를 통하여 제조될 수 있다.

바람직하게는 사람의 구강으로부터 분리해낸 혈청형 C, D, E, F 및 G에 속하는 스트랩토코커스 뮤탄스균, 특히 바람직하게는 혈청형 C에 속하는 사람의 구강내에 많은것이 사용될 수 있다.

이러한 스트랩토코커스 뮤탄스균은 NCTC10449, Ingbritt, OMZ70, JC-2등과 그들의 돌연변이주를 포함한다. 바람직한 돌연변이주의 예들은 K-Dp주(FERM-BP317), KH2주(FERM-P7166)및 K-Ⅲ주 (Bikoken deposit no. 6314)를 포함한다.

본 발명에 사용된 항체를 얻기 위한 항원은 스트랩토코커스 뮤탄스균의 전균체 또는 균체성분, 특히 스트랩토코커스 뮤탄스균의 세포벽 획분, 섬유상구조 획분, 선모성분획분, 글루코실트랜스퍼라제(GTF)획분, 및 단백질항원획분이다.

스트랩토코커스 뮤탄스균의 세포벽획분은 예를들면, 블레이바이스(Bleiweis et al.J. Bacteriol.,88,1198-1200, 1964)의 방법에 따라 스트랩토코커스 뮤탄스균을 브라운(Brown) 세포 파쇄기에서 0.17 내지 0.18mm 직경의 글라스 비이드를 사용하여 파쇄처리시킨 다음, 이와같은 얻은 세포벽을 트립신으로 처리하여 세포벽을 오염시키는 단백질을 제거하고, 이어서 세포벽을 증류수로 세척한 후 동결건조시킴으로써 제조될 수 있다.

섬유상(pili상 또는 fimbriae상) 물질 획분은 예를들면, 반호우트(J. Van Hoate et al., Arch. Oral Bio.,16, 1131-1141, 1971)의 방법에 따라 BHI배지의 투석에 의해 얻은 혐기적 조건하에서 5% 수크로오스를 포함하는 배지에서 스트랩토코커스 뮤탄스균을 배양한 다음 배지를 원심분리하여 상징액을 얻은 다음 상징액만큼의 부피로 에탄올을 3회 가하고 이어서 이와같이 얻은 용액의 침전을 수집함으로써 제조될 수 있다.

성보성획성분은 쓰르미즈(Tsurumizu et al., Japanese Journal of Bacteriology, 38(1)471, 1983)에 의해 제안된 방법에 따라 얻어진다. 이 방법에 따르면, 1M염을 포함하는 인산염 완충액과 같은 용매를 사용하여 배양된 박테리아로부터 보통의 세포 벽 추출법에 의해 순수한 구조획분이 제조된다. 예를들면, 스트랩토코커스 뮤탄스균, 변이주K-Dp의 선모성분획분을 얻기 위해 액체 배지에서 주를 성장시키고 배지를 황산암모늄으로 포화시킨다(33%). 상징액을 따르고 침전을 염화나트륨을 포함하는 인산염완충액(pH7.0)에 분산시키고 이어서 4℃에서 3일간 교반시킨다. 균체를 원심분리에 의해 제거하고 상징액을 황산암모늄으로 포화시킨다(60%). 침전을 인산염 완충액에 대해 투석하고 투석액을 수크로오스 밀도구배 초원심분리 분획을 시키고 수크로오스 밀도 8 내지 15%에서의 분획을 수집한다. 이 분획을 인산염 완충액에 대해 다시 투석하여 원하는 분획을 얻는다.

GTE분획은 예를들면, 이노우(Inoue et al., Microbial Aspects of dental caries vol.Ⅲ, 665-682, 1976 [Information Retrieval Inc.])의 방법에 따라 다음의 방법으로 제조된 용액을 사용하여 제조할 수 있다. : 스트랩토코커스 뮤탄스균을 BHI매제의 투석에 의해 얻은 배지에 의식, 성장시킨 후 균체를 원심분리에 의해 제거하고 상징액을 40%의 수준에서 황산암모늄으로 포화시키고 이어서 50mM인산염 완충액에 대해 40% 황산암모늄 획분의 침전을 투석시키고 얻은 용액을 농축 또는 투석시킨다. 단백질항원 획분은 예를들면, 레너(Lehner et al., J. General Microbiology, 122, 217-225, 1981)의 방법에 따라 BHI배지의 투석에 의해 얻은 배지에서 스트랩토코커스 뮤탄스균을 배양시킨 다음 배지의 원심분리시킴으로써 상징액을 얻고 이어서 75% 황산암모늄용액으로 분별시킴으로써 침전을 수집하고, 다음에 이와 같이 얻은 침전을 6M요소의 존재하에 DE-52컬럼크로마토그라피시키고 단백질항원 획분을 생리식 염수에 용해시키고, 이어서 이와 같이 얻은 용액을 투석시키며 그후 투석한 용액을 세파로오스 CL6B를 통해 겔투과 시킴으로써 제조할 수 있다.

상기 항원으로 포유동물을 면역시키는데 통상의 방법을 채택할 수 있다. 면역되는 포유동물로는, 염소, 양, 말, 소, 토끼등을 사용할 수 있다.

본 발명에서는, 상기 항원으로 포유동물을 면역시킴으로써 얻은 항혈청 또는 우유에 포함된 항체를 조성물에 혼합시킨다. 이 경우에, 그로부터 분리, 정제된 항체 뿐만 아니라 항혈청 및 우유를 상용할 수 있다. 이들 물질은 각각 단독으로 또는 둘 또는 그 이상의 조합으로 사용할 수 있다.

항체(항혈청 및 우유중의 단백질획분)는 염석법, 겔투과법, 이온교환크로마토그라피, 어피니티크로마토 그라피등을 포함하는 통상의 항체 정제법에 따라 염석법의 경우는 바람직하게는 황산암모늄을 사용하여 항혈청 및 우유로 부터 분리시킬 수 있다. 염석법에서는, 항혈청 또는 우유를 황산암모늄으로 바람직하게는 40%를 넘지 않는 수준으로 포화시켜 침전을 생성시키고, 이어서 생리식염수에 대해 침전을 투석시켜 항체로서 정제된침전을 얻는다.

바람직한 항체는 말 항혈청 및 소 항혈청과 우유로부터 얻어진다.

항체의 투여량은 바람직하게는 0.0001 내지 50g/Kg/일 일수있다. 이투여량을 확립하기 위해, 항체를 0.0002 내지 10중량%, 바람직하게는 0.0002 내지 5중량%의 양으로 원하는 조성물에 혼합시킨다.

본 발명의 충치예방 조성물은 상기한 항체 이외에 항체를 안정화시키기위새 비이온성 계면활성체를 포함한다. 그것은 조성물이 항체를 쉽게 불활성화시키는 음이온성 계면활성제를 포함하는 경우에도 장기간동안 항체를 불황성화시키는 것을 효과적으로 방지한다.

비이온성 계면활성제는 알칸올 아미드 지방산에스테르, 수크로오스 지방산에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산에스테르, 홀리옥시에틸렌 지방산에스테르, 홀리옥시에틸렌 아주까리 경화유 유도체, 락토오스지방산 에스테르, 락티톨지방산 이스테르, 말티톨지방산에스테르 및 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 블럭 공중합체를 포함한다. 그들은 단독으로 또는 서로 조합하여 사용할수있다. 그들중 바람직한 것은 알칸올아미드 지방산에스테르, 수크로오스지방산에스테르, 폴리옥기에틸렌 소르비탄 지방산에스테르, 폴리옥시에틸렌지방산 에스테르, 및 폴리옥시에틸렌 아주까리경화유 유도체이고, 가장 바람직한것은 알키올아미드 지방산에스테르이다.

바람직한 알칸올아미드 지방산에스테르는 지방산기가 9 내지 18탄소원자를 갖고 알칸올기가 2내지 3탄소원자를 갖는 것이다. 지방산은 포황된 것 또는 불포화된것일수있고 직쇄 또는 분쇄기인것 일수있다.

지방산은 혼합된 지방산일수있다.

알칸올아미드 지방산에스테르의 예들은 카프로일 모노에탄올 아미드, 라우로일디에탄올아미드, 미리스토일 디에탄올아미드, 팔미토일 디에탄올아미드, 디에탄올아미드 코코닛유 지방산에스테르, 디에탄올아미드우지(牛脂)지방산에스테르 및 라우로일 모노이소프로판올 아미드를 포함한다.

그들중 바람직한것은 라우로일 디에탄올아미드 및 미리스토일디에탄올 아미드이다.

바람직한 수크로오스 지방산에스테르는 탄소수 8 내지 18인 지방산기를 갖고 에스테르화도 0.8 내지 3을 갖는 것이다. 그것은 예를들면, 수크로오스 모노-및 디-라우레이트를 포함한다,

바람직한 폴리옥시에틸렌 스트비탄 지방산에스테르는 탄소수 8내지 20의 지방산기, 첨가한 산화에틸렌 6내지 60몰 및 에스테르화도 1내지 3을 갖는 것이다.

그것은, 예를들면, 폴리옥시 에틸렌(20몰) 소르비탄 모노 올레이트, 폴리옥시에틸렌(6몰)소르비탄 모노스 테아레이트 및 폴리옥시에틸렌(20몰)소르비탄 모노라우레이트를 포함한다.

바람직한 폴리옥시에틸렌 지방산에스테르는 첨가한 산화 에틸렌 1내지 60몰 및 탄소수 8내지 20의 지방산을 갖는것이다. 그것은 예를들면, 폴리옥시에틸렌(60)몰 아주까리 경화유, 폴리옥시에틸렌(10몰)라우레이트 및 폴리옥시에틸렌(40몰)스테아레이트를 포함한다.

충치예방조성물에서 비이온성 계면활성제의 양은 조성물 0.1내지 3중량%, 바람직하게는 0.3 내지 1.5중량%이면된다.

비이온성 계면활성제는 충치예방 조성물에 혼합된 항체로 하여금 조성물이 항체를 쉽게 불활성화시키는 음이온성 계면 활성제를 포함하는 경우에도 불활성화 되는 것을 방지한다. 그러므로, 충치예방 조성물은 라우릴황산나트룸 및 미리스틸황산나트륨과 같은 8내지 18탄소원자를 갖는 황산알킬의 수용성염, 고지방신의 나트륨염, 라우릴모노글리세라이드 술폰산나트륨 및 코코닛모노글리세이드 술폰산나트륨과 같은 지방산기에 10내지 18탄소원자를 갖는 고지방산의 술폰화 모노글리세리드의 수용성염, 고지방산의 모노글리세리드모노 황산나트륨, α-올레핀 술폰산염, 파라핀 술폰산염, 소디움 N-메틸-N팔미토일 오투라이드(touride), N-라우로일 사르코신산 나트륨, 소디움 N-라우로일 알라니을 포함하는 음이온성 계면 활성제가 혼합되은 것이 효과적일수있다.

그들중, 황산알킬의 수용성염이 바람직하다.

충치예방 조성물의 음이온성 계면활성제의 양은 0.5 내지 3중량%, 바람직하게는 1내지 2중량%일수있다.

음이온성 계면활성제에 대한 비이온성 계면활성제의 비는 0.4 ; 1 내지 3 : 1, 바람직하게는 1 : 1 내지 1.5 : 1중량비 이어야 한다.

본 발명의 충치예방조성물은 상기한 항체이외에 불소화합물, 클로로헥시딘, 용군(溶菌)효소, 박테리오신글리코실 트랜스퍼라제 억제제, 프로테아제 및 대스트라나제로부터 선택된 적어도 한가지 상승제(synergist)를 혼합시킬수 있다. 그들은 스트랩토코커스 뮤탄스균의 정착과 치아 플라아크의 형성을 억제하게되고 충치예방효과를 증가시킬것이다.

불소화합물의 예들은 모노플루오로인산나트륨, 모노플루오로인산칼륨, 모노플루오로인산수소나트륨 및 모노 흘루오로인산암모늄과 같은 모노플루오로인산염 : 플루오르화나트륨, 플루오르화 칼륨, 플루오르화 리튬 및 플루오르화 암모늄과 같은 플루오르화 알칼리 금속 : 및 헥사플루오로지르콘산 칼륨, 헥사플루오로 티탄산칼륨, 플루오르화 세슘, 플루오르화 니켈, 플루오르화 지르콘, 프루오르화 은, 히드로플루오르화 헥실하민, 히드로플루오르화 라우릴하민, 히도로플루오르화 세틸아민, 히드로플루오르화 글리신, 히드로플루오르화 리신 및 히드로플루오르화 알라닌과 같은 다른 화합물들을 포함한다.

그중 바람직한것은 모노플루오르 인산나트륨 및 모노플루오로인산칼륨과 같은 모노플루오로인산염 : 플루오르화 나트륨, 플루오르화 칼륨과 및 플루오르화 암모늄과 같은 플루오르화 알칼리금속 : 그리고 플루오르화 주석 및 염화 플루오르화 주석과 같은 주석함유플루오르화물이다.

가장 바람직한것은 모노플루오로힌산나트륨, 플루오르화 나트륨 및 플루오르화 주석이다.

클로로헥시딘의 예들은 클로로헥시딘 히드로클로라이드와 클로로헥시딘 글루코네이트를 포함한다.

용균효소의 예들은 스트랩토미세즈 그리세우스(Streptomyces griseus), 스트랩토미세스 디아스타토크로마젠스(S. diaststochromagenes), 스트랩토미세스 화리노서스(S. farinosus), 챨라롭시스(Chalaropsis), 플라보박테리움(Flavobacterrium), 믹소박터(Myxobacter), 스타필로코커스 에피데르미시스(Staphylococcus epidermdi), 마이크로코커스(Micorococcus), 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomdnas aeruginosa), 아에로모나스(Aeromonas), 스트랩토미세스 알버스(Streptomyces albus) 및 스트랩토미세스 글로비스포러스(Streptomyces globisporus)로부터 유도된것을 포함한다.

박테리오신의 예들은 엔터로박터 클로아세(Enterobactor cloacae), 에세리치아 콜리(Escherichia coli), 프로테우스 미아빌리스(Proteus Miabilis), 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomdnas aeruginosa), 스트랩토코커스 뮤탄스 및 스트랩토코커스 스타필롤리티커스(Str. staphlolyticus)로부터 유도된것들을 포함한다.

GIH 억제제의 예들은 Arthrinum sp., Fusarium sp., Macrophomina sp., Gnomoniella sp., Nodulisporium sp., 및 Aspergillus sp.로부터 유도된 것들을 포함한다. 사용될수있는 특정한 실시예들이 일본특허공개 Nos. 103193/1981, 28097/1982, 98215/1982 및 146587/1982에 발표되어 있다.

프로테리아제의 예들은 Aspergillus sp. 및 Bacillus sp.로부터 유도된 것들을 포함한다.

댁스테라나제의 예들은 Chaetomium sp., Streptomyces sp., Bacillus sp., Corynebacterium으로부터 유도된것들을 포함한다.

본 발명에서 상기한 상승제들은 단독으로 또는 서로 조합하여 사용할수 있다. 상기한 항체 및 상승제는 함께 혼합하여 원하는 형태의 조성물로 만들수 있으며 또는 사용시 함께 넣는 분리된 제제로 만들수 있다.

상승제의 튜여량은 다음과 같다 :

불소화합물 0.0001 내지 1g/Kg/일

클로로헥시딘류 클로로헥시딘일 때 0.0001 내지 1g/Kg/일

용균효소 0.0001 내지 10g/Kg/일

박테리오신 0.0001 내지 10g/Kg/일

GIF 억제제 0.0001 내지 10g/Kg/일

프로테아제 0.0001 내지 5g/Kg/일

댁스트라나제 0.0001 내지 5g/Kg/일

상승제를 포함하는 각 조성물에서의 상승제의 양은 다음과 같다 :

불소화합물 : 불소로 환산하여 0.0001 내지 0.1중량%, 바람하게는 0.0001 내지 0.001중량%.

클로로헥시딘류 : 클로로헥시딘으로 환산하여 0.1 내지 1000ppm, 바람지하게는 10 내지 100ppm.

용균효소 : 0.0001 내지 10중량%, 바람직하게는 0.01 내지 5중량%.

박테리오신 : 0.0001 내지 10중량%, 바람직하게는 0.01 내지 5중량%.

GIF 억제제 : 0.0001 내지 10중량%, 바람직하게는 0.01 내지 5중량%.

프로테아제 : 0.0001 내지 10중량%, 바람직하게는 0.01 내지 5중량%.

댁스트라나제 : 0.0001 내지 10중량%, 바람직하게는 0.01 내지 5중량%.

본 발명에 따르는 충치예방 조성물은 치마제(치약, 치분 및 액상 치마제 포함), 마우스 워시(mouth washes), 구강용 페이스트, 치육마사지크림, 양치용 정제, 트로치, 껌, 아이스크림, 거품 크림등과같은 구강내에 적용하는 각종형태로 제조 및 사용될수 있다. 조성물은 특정한 조성물의 타입과 형태에 의존하여 추가의 공지성분들을 더 포함할 수있다. 어떠한 원하는 공지의 성분들을 상기항체 및 상승제 성분과 혼합시킬 수 있다.

치마조성물의 제조에 있어서 연마제는 제2인산칼슘2수화물, 제2인산칼슘 무수물, 제1인산칼슘, 제3인산칼슘, 탄산칼슘, 피로인산칼슘, 불용성 메타인산나트륨, 무정형실리카, 결정실리카, 알루미노 실리케이트, 산화 알루미늄, 수산화 알루미늄, 제3인산마그네슘, 탄산마그네슘, 황산칼슘, 이산화티탄, 수지 등을 포함하는데, 조성물의 5 내지 95중량%, 특히 15 내지 60중량%의 양으로 일반적으로 배합될수있다.

그가운데, 수산화 알루미늄이 상기한 항체의 안정화효과 때문에 바람직하다. 수산화 알루미늄으로서, 인산 또는 그의 염으로 수산화알루미늄을 표면처리함으로써 얻은 개질수산화 알루미늄이 사용된다.

페이스트형 조성물, 전형적으로 치약의 제조시, 카르복시메틸 셀룰로오스나트륨, 메틸셀루로오스, 카르복시메틸 히드록시 에틸 셀룰로오스 나트륨, 히드록시에틸 셀룰로오스, 알긴산나트륨, 카라기난, 아라비아고무, 크산탄고무(xanthan gum), 트라가 칸스 고무(tragacanth gum), 카라야 고무(karaya gum), 폴리비닐 알코올, 폴리아크릴산나트륨, 카르복시비닐 중합체, 폴리비닐돈등을 포함하는 결합제를 0.3 내지 5중량%의 양으로 일반적으로 배합할수있다.

그 가운데, 카라기난은 항체를 안정화시킬수 있기 때문에 바람직하다.

페이스트형 액상조성물, 전형적으로 치약 및 마우스워시를 제조시, 폴리에틸렌글리콜, 소르비롤, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 크실리톨, 말티톨, 랄티톨 등을 포함하는 보습제를 10내지 70중량%의 양으로 배합할수있다.

페파민트유 및 스페아민트유를 포함하는 정유와 같은 향료 l-멘톨, 카르본, 유게놀, 및 아니톨을 포함 p-메톡시 신나민산 알데히드화같은 감미제, 방부제 등을 유효량 배합할수있다.

본 발명에서, 뮤타나제, 소르빈산, 알레시딘, 히노키티올, 염화세틸피리디늄, 알킬글리신, 글리신산, 알킬디아미노, 에틸, 알란토인, ξ-아미노카프로산, 트라넥삼산, 아줄렌, 비타민 E, 수용성 제1 또는 제2인산염, 제4차 암모늄화합물, 염화나트륨 및 생약추출물도 또한 유효량 배합할수있다.

또한 본 발명 조성물은 젤라틴, 펩톤, 카제인, 콜라겐 및 알부민과 같은 단백질을 포함한다.

이들 단백질은 상기한 항체를 효과적으로 안정화시킬수있다.

단백질의 배합량은 바람직하게는 조성물의 0.001 내지 10중량% 특히 0.05 내지 5중량%의 범위일수있다.

통상 사용하는 원하는 성분을 선정하고 종래의 방법으로 그들을 혼합함으로써 다른 타입의 조성물도 또한 제조할수있다.

조성물의 형태를 각종 타입에 대한 다른성분의 예들은 다음의 실시예에 나타내었다.

페이스트형 액상 경구용 조성물은 일반적으로 5 내지 10의 범위에 이르는 pH를 가지나 거기에 제한되지는 않는다.

본 발명의 충치방지 조성물은 보관을 위해서나 편리한 사용을 위해서 적당한 용기에 포장할수있다.

치약의 경우에, 플라스틱튜브 및 알루미늄 박층 플라스틱 튜브와 같은 플라스틱 용기 또는 알루미늄 튜브와 같은 금속용기에 포장할수있다. 보통 상기한 항체는 금속 용기에서 쉽게 불할성화되나 본 발명의 충치방지조성물은 항체가 금속용기에 불활성화 되는것을 방지하는 그안에 혼입된 비이온성 계면활성제 때문에 알루미늄튜브와 같은 금속용기에 포장할 수 있다.

본 발염의 충치예방 조성물은 구강 내에 적당한 형태의 제제로 적용할수있다. 그안에 포함된 항체는 스트랩토코커스 뮤탄스균의 전균체 또는 균체성분으로 면역된 동물로부터 얻는데, 구강내에서 스트랩토코커스 뮤탄스균의 정착을 방지하고 치아 플라아크의 형성을 억제한다.

조성물에 함입된 비이온성 계면활성제 때문에 항체는 불활성화 되지 않고 그 효과를 장기간 유지한다.

본 발명의 예들은 다음에 제공되나 본 발명은 여기서 한정된지 않는다.

[실시예1]

항혈청 및 모유는 다음의 방법에 따라 다음의 항원을 사용하여 얻었다.

(1) 항원

스트랩토코커스 뮤탄스 NCTC 10449

BHT 배지의 투석에 의해 얻은 의액에서 성장한 박테리아를 세처한 후, 사용하기 이전에 포르말린으로 처리하였다.

스트랩토코커스 뮤탄스 NCTC 10449의 세포벽회분

블레이바이스(Bleiweis et al., J. Bacteriol., 88, 1198-1200, 1984)의 방법에 따라 제조한 분율을 사용하였다.

스트랩토코커스 뮤탄스 NCTC 10449의 섬유상 구조획분

반 호우트(J. Van Hoate et al., Arch. Oral. Bio., 16, 1131-1141, 1971)의 방법에 따라 제조한 획분을 사용하였다.

스트랩토코커스 뮤탄스 NCTC 10449의 선모성분획분

쓰루미즈(Tsurumizu et al., Japanese Journal of Bacteriology, 38(1), 471, 1983)의 방법에 따라 제조한 획분을 사용하였다.

스트랩토코커스 뮤탄스 NCTC 10449의 글루코실 트랜스퍼라제 획분

이노우(Inoue et al., Microbial Aspects of dental caaries Vol. Ⅲ, 665-682, 1976 Information Retrieval Inc.)의 방법에 따라 제조한 획분을 사용하였다.

스트랩토코커스 뮤탄스 NCTC 10449의 단백질 항원획분

레너(Sehner et al., J. General Microbiology, 122, 217-225, 1981)의 방법에 따라 제조한 획분을 사용하였다.

(2) 항혈청, 우유 및 항체의 제조

항원 50 내지 100g/ml과 등량의 완전 프룬드 어주번트의 혼합물을 임신중의 염소, 말, 소 또는 토끼의 등에 중량 Kg당 0.3ml의 투여량으로 피하주사하였다. 다음에 항원과 불완전 프룬드 어주번트의 혼합물로 2 내지 4주의 간결으로 상기와 같은 방법으로 면역을 되풀이하였다. 출산후 초유를 채취하였다.

한편, 항혈청을 얻기위해 상기와 같은 방법으로 4회 면역을 시킨 동물로부터 혈액을 채취하고 혈액을 응고시키고 원심 분리기로 상징액을 분리하였다.

상기한 초유는 등량의 0.9% 염용액을 가하여 1500rpm에서 60분간 원심분리하였다. 상층의 지방과 침전을 따르고 중간층의 액체 성분을 수집하였다.

진한 염산으로 pH 4로 조절하였다. 결과 용액을 5000rpm으로 30분간 재원심 분리시키고 상징액을 트리스 히드록시아미노메탄으로 중화시키고 황산암모늄으로 75% 포화 시켰다.

결과침전을 수집하고 인산염 완충액에 대해 투석하여, 이로써 우유의 항체성분(내액)을 얻었다.

상기한 항혈청은 황산암모늄으로 50% 포화시키고 결과 침전을 인산염 완충액에 대해 투석하여 이로써 항혈청의 항체(내액)을 얻었다.

[실험1]

표1에 나타낸 계면활성제 2.5%와 항체 10%(말, S. mutans, 10449주, 선모성분)를 40℃에서 1주동안 저장하였고 잔유항에 활성을 다음의 방법으로 측정하였다.

표1은 계면활성제가 없는 항체활성을 100으로하여, 지수로 표현한 결과를 나타낸다.

항체활성의 측정 :

인삼염 완충액(0.1M, pH7) 4ml를 샘플1g에 가하여 샘플내 용해성 성분을 완충액에 용해시킨다.

용액을 원심분리하고 상징액을 수집한다.

상징액중의 항체의 활성을 ELISA법(Eng vall E. et al., J. Immunol., 109 : 129-135, 1972)에 따라 항원으로서 스트랩토코커스 뮤탄스 변이주 K-Dp의 균체를 사용함으로써 측정한다.

405nm에서의 흡광도를 구한다.

[표1]

[실험2]

다음 조제의 치약을 제조하였다 :

치약은 40℃에서 2주간 보관하였고 잔유항체활성을 시험 1과 같은 방법으로 측정하였다. 표2는 라우로일디에탄올 아미드 1.5%를 포함하는 치약의 항체활성을 100으로하여 지수로 결과를 나타내었다.

[표2]

[실험3]

다음 조제의 치약을 제조하였다.

치약을 40℃에서 2주간 저장하고 잔유황제 활성을 실험1에서와 같은 방법으로 측정하였다. 표 3은 수산화알루미늄 45%를 포함하는 치약의 항체활성을 100으로, 치수로 결과를 나타낸다.

[표3]

[실험4]

치약을 40℃에서 2주간 저장하고 잔유황제 활성을 실험1에서와 같은 방법으로 측정하였다. 표4는 펩톤 함유치약의 항체활성을 100으로, 지수로 결과를 나타낸다.

[표4]

[실험5]

치약을 40℃에서 2주간 저장하고 잔유황제 활성을 실험1에서와 같은 방법으로 측정하였다. 표5는 카라기난 1.5%를 포함하는 치약의 항체활성을 100으로 지수로 결과를 나타낸다.

[실시예 2 (치약)]

[실시예 3 (치약)]

[실시예 4 (치약)]

[실시예 5 (치약)]

[실시예 6 (마우스 위시)]

[실시예 7 (마우스 위시)]

[실시예 8 (마우스 위시)]

[실시예 9 (마우스 위시)]

사용시 물로 10배 희석함

Claims (9)

1. 인간형 스트랩토코커스 뮤탄스 혈청형 c, d, e, f 또는 g의 균주 또는 변이주에 대한 항체를 조성물 중량을 기준으로 0.0002 내지 10중량%, 지방산기에 탄소원자 9개 내지 18개 그리고 알칸올기에 탄소원자 2개 내지 3개를 가진 알칸올아미드 지방산 에스테르, 지방산기에 탄소원자 8개 내지 18개 그리고 에스테르화도 0.8 내지 3을 가진 수크로오스 지방산 에스테르, 지방산기에 탄소원자 8개 내지 20개, 첨가된 에틸렌 옥사이드 6 내지 60몰 및 에스테르화도 1 내지 3을 가진 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 지방산기에 탄소원자 8개 내지 20개 그리고 첨가된 에틸렌 옥사이드 1 내지 60몰을 가진 폴리옥시에틸렌 지방산에스테르 및 그들의 혼합물로 구성된 군으로 부터 선택된 비이온성 계면활성제를 조성물 중량을 기준으로 0.1 내지 3중량% 포함하는 것을 특징으로 하는 충치예방조성물.
2. 제1항에 있어서, 돌연변이주는 스트랩토코커스 뮤탄스균의 변이주 K-Dp, KH2 또는 K-Ⅲ주인 것을 특징으로하는 충치예방조성물.
3. 제1항에 있어서, 균체성분은 스트랩토코커스 뮤탄스균의 세포벽 획분, 섬유상 구조물획분, 선모성분획분, 글루코실 트랜스퍼라제 획분 또는 단백질 항원획분인 것을 특징으로한는 충치예방조성물.
4. 제1항에 있어서, 함입된 항체를 포함하는 항혈청 또는 우유인 것을 특징으로하는 충치예방조성물.
5. 제1항에 있어서, 함입된 항체는 항체를 포함하는 항혈청 또는 우유로부터 분리되는 것임을 특징으로 하는 충치예방 조성물.
6. 제1항에 있어서, 비이온성 계면활성제는 음이온성 계면활성제와 함께 병용하는 것을 특징으로하는 충치예방조성물.
7. 제6항에 있어서, 음이온성 계면활성제에 대한 비이온성 계면활성제의 비는 0.4 : 1 내지 3 : 1중량비인 것을 특징으로하는 충치예방조성물.
8. 제6항에 있어서, 음이온성 계면활성제는 술폰산알킬의 수용성염인 것을 특징으로하는 충치예방조성물.
9. 제1항에 있어서, 치약 또는 마우스워시로서 충치예방 조성물.