JPH0421648B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は口腔内に適用し、歯垢の形成を抑制し
たう蝕を予防することができるう蝕予防剤に関す
る。 歯の表面に付着する歯垢は、約70％が細菌、約
20％が細菌により形成された多糖、及び約10％が
食物残渣であり、固く歯面にこびりついている。
そして、その内部に貯えられた酸がエナメル質を
脱灰し、う蝕を引き起すといわれており、歯垢は
う蝕の原因として注目されている。 この歯垢は主にストレプトコツカス・ミユータ
ンスを中心とする口腔内細菌がシヨ糖から多糖を
合成することによつて形成が促進される。即ち、
ストレプトコツカス・ミユータンスはGTF（グル
コシルトランスフエレース、デキストラン合成酵
素）を産生し、これによりシヨ糖からデキストラ
ン、ムタン等の粘着性多糖を合成する。そして、
この合成された多糖はストレプトコツカス・ミユ
ータンスをはじめ、他の菌（病原菌）を巻き込
み、一定の菌叢を有する歯垢を形成する。また、
ストレプトコツカス・ミユータンス等の菌は種々
の糖を利用して酸を産生し、この酸は多糖及び菌
の壁の中に滞留することにより、エナメル表面を
脱灰していく。 従つて、う蝕を予防するためには、その大きな
原因とされているストレプトコツカス・ミユータ
ンス［数］の抑制、歯垢の形成を抑制、阻害する
ことが望まれる。 従来、ストレプトコツカス・ミユータンスの口
腔内への定着を抑制する方法として、ストレプト
コツカス・ミユータンス全菌体を牛に免疫するこ
とによつて得られる母乳を使用する方法が知られ
ている（英国特許第1505513号明細書）。 本発明者らはストレプトコツカス・ミユータン
スに由来する各種の抗原に対する抗体の中でスト
レプトコツカス・ミユータンス菌の口腔内の定着
を阻害する抗体の検討を行なつた。その結果、ス
トレプトコツカス・ミユータンス菌、該菌の細胞
壁画分、該菌の線維状構造物画分、該菌のグルコ
シルトランスフエレース画分、該菌のプロテイン
抗原画分を哺乳動物に免疫することによつて得ら
れる抗血清及び乳がある程度の歯垢形成抑制効果
を有することを見出したが、その効果は必ずしも
十分なものではなく、更に歯垢形成抑制効果を高
める必要があることが望まれた。 このため、本発明者らは更に鋭意研究を行なつ
た結果、前記抗血清又は乳にグルコシルトランス
フエレースインヒビター、プロテアーゼ又はデキ
ストラナーゼを添加、併用することにより、スト
レプトコツカス・ミユータンスの定着が抑制され
て歯垢形成抑制効果が著しく高まり、従つて前記
抗血清又はグルコシルトランスフエレースインヒ
ビター（GTFインヒビター）、プロテアーゼ又は
デキストラナーゼと組合せて用いることが、う蝕
の予防に有効であることを知見し、本発明をなす
に至つたものである。 従つて、本発明はストレプトコツカス・ミユー
タンス菌、該菌の細胞壁画分、該菌の線維状構造
物画分、該菌のグルコシルトランスフエレース画
分及び該菌のプロテイン抗原画分から選ばれる１
種以上の抗原を哺乳動物に免疫することによつて
得られる抗血清及び／又は乳と、グルコシルトラ
ンスフエレースインヒビター（GTFインヒビタ
ー）、プロテアーゼ及びデキストラナーゼから選
ばれる１種以上のシネルギストとを組合せてなる
ことを特徴とするう蝕予防剤を提供するものであ
る。 本発明によれば、前記抗血清及び／又は乳と前
記シネルギスト成分とを組合せて用いたことによ
り、これらが相乗的に作用し、ストレプトコツカ
ス・ミユータンス菌の口腔内の定着を阻害して歯
垢の形成を効果的に抑制するため、う蝕を有効に
予防することができる。 以下、本発明につき更に詳しく説明する。 本発明のう蝕予防剤は、上述したようにストレ
プトコツカス・ミユータンス菌体、該菌の細胞壁
画分、該菌の線維状構造物画分、該菌のグルコシ
ルトランスフエレース（GTF）画分及び該菌の
プロテイン抗原画分から選ばれる１種以上の抗原
を哺乳動物に免疫することによつて得られる抗血
清及び／又は乳を使用するものである。 ここで、抗原として用いるストレプトコツカ
ス・ミユータンス菌は、例えばBHI培地の透析
外液を培地として使用し、生育した菌を洗浄後ホ
ルマリン処理するなど、公知の培養、前処理を行
なつたものが使用し得る。この場合、ストレプト
コツカス・ミユータンス菌としては人の口腔内に
多存する血清型分類ｃに属するものが好ましい。
このようなストレプトコツカス・ミユータンス菌
としてはNCTC10449，Ingbritt，OMZ70，JC−
２等が挙げられる。 また、ストレプトコツカス・ミユータンス菌の
細胞壁画分はBleiweisらの方法（J.Bactriol.，
88，1198−1200，1964）に従い、ブラウンの細胞
破砕機を使用し、直径0.17〜0.18mmのガラスビー
ズを用いて破砕処理を行ない、得られた細胞壁を
トリプシンで処理して細胞壁に混在するタンパク
質を除去し、蒸溜水で洗浄後凍結乾燥を行なうと
いう方法等により調製したものなどが使用でき
る。線維状構造物画分はJ.Van Hoateらの方法
（Arch.Oral.Bio.，16，1131−1141，1971）に従
い、BHI透析培地に５％シヨ糖を加え、嫌気的
条件下で培養し、培養液の遠心分離上清に３倍量
のエタノールを加えて沈殿を集めるという方法等
により調製したものなどが使用できる。更に、
GTF画分は井上らの方法（Microbial Aspects
of dental caries Vol.，665−682，1976
［Information Retrieval Inc.］）に従い、BHI透
析培地にストレプトコツカス・ミユータンスを植
菌し、生育後遠心分離により菌体を除去し、上清
に硫酸アンモニウムを加え、40％硫酸アンモニウ
ム画分の沈殿を50mMのリン酸緩衡液で透析し、
濃縮した液を用いるという方法等により調製した
ものなどが使用できる。また、プロテイン抗原画
分はLehnerらの方法（J.General Microbiology，
122，217−225，1981）に従い、BHI透析培地で
培養し、遠心して得られた上清を75％の硫酸アン
モニウムを用いて分画し、沈殿を採取し、この沈
殿を6M尿素存在下でDE−52カラムクロマトグラ
フイーを行ない、更にプロテイン抗原画分を生理
食塩水に溶かし、透析後セフアロースCL6Bにて
ゲル濾過を行なつて画分を得るという方法等によ
り調製したものなどが使用し得る。 前記抗原を哺乳動物に免疫する方法は通常の方
法が採用できる。また、免疫される哺乳動物とし
てはヤギ、ヒツジ、ウマ、ウシ、ウサギ等が用い
られる。 本発明は上述したように前記抗原を哺乳動物に
免疫することによつて得られる抗血清、乳を使用
するものであるが、本発明においてはこの抗血清
及び乳の１種を単独で使用しても２種以上を混合
して使用してもよい。 本発明のう蝕予防剤にあつては、前記抗血清又
は乳に加えてグルコシルトランスフエレースイン
ヒビター（GTFインヒビター）、プロテアーゼ及
びデキストラナーゼから選ばれる１種以上のシネ
ルギストを組合せて用いるものである。 この場合、GTFインヒビターとしては、
Arthrinum sp.，Fusarinum sp.，
Macrophomina sp.， Micromonospora sp.，
Gnomoniella sp.，Nodulisporium sp.，
Aspergillus sp.等に由来するものが好適に使用
でき、具体的には特開昭56−103193号公報、同57
−28097号公報、同57−98215号公報、同57−
146587号公報記載のもの等が使用できる。 また、プロテアーゼとしては、Aspergillus
sp.，Bacillus ps.等に由来するものが好適に使用
でき、デキストラナーゼとしてはChaetomium
sp.，Streptomyces sp.，Bacillus sp.，
Corynebacterium等に由来するものが好適に使用
できる。 なお、本発明においては、これらシネルギスト
成分の１種を単独で用いても２種以上を併用する
ようにしてもよい。 本発明に係るう蝕予防剤は、練歯磨、粉歯磨、
液状歯磨等の歯磨類、マウスウオツシユ、口腔用
パスタ、歯肉マツサージクリーム、うがい用錠
剤、トローチ、チユーインガム、アイスクリー
ム、ホイツプクリームなど、口腔内に適用される
種々の態様に調製され、使用される。 この場合、前記の抗血清又は乳とシネルギスト
成分とは一緒に混合して所定の剤型に調製しても
よく、或いは抗血清又は乳とシネルギスト成分と
をそれぞれ別個の剤型に調製し、使用時に両者を
併用するようにしてもよい。 前記抗血清又は乳の投与量は、0.0001〜50ｇ／
Kg／日とすることが好ましく、またシネルギスト
成分の投与量は、グルコシルトランスフエレース
インヒビター（GTFインヒビター）の場合は
0.0001〜10ｇ／Kg／日、プロテアーゼ、デキスト
ラナーゼの場合は0.0001〜５ｇ／Kg／日とするこ
とが好ましい。この場合、抗血清又は乳はこれを
含む剤型全体の0.0002〜10％（重量％、以下同
じ）、特に0.002〜５％の配合量とし、またシネル
ギスト成分はこれを含む剤型全体に対しグルコシ
ルトランスフエレースインヒビター（GTFイン
ヒビター）の場合は0.0001〜10％、特に0.001〜
５％、プロテアーゼの場合は0.0001〜10％、特に
0.001〜５％、デキストラナーゼの場合は50〜10
万単位／ｇ、特に500〜5000単位／ｇの配合量と
し、上記投与量において口腔内適用することが好
ましい。 なお、本発明のう蝕予防剤の他の成分として
は、使用目的、使用態様等に応じた適宜な成分が
用いられる。例えば練歯磨の場合であれば、第２
リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、ピロリン酸
カルシウム、不溶性メタリン酸ナトリウム、非晶
質シリカ、結晶質シリカ、アルミノシリケート、
酸化アルミニウム、水酸化アルミニウム、レジン
等の研磨剤、カルボキシメチルセルロース、ヒド
ロキシエチルセルロース、アルギン酸塩、カラゲ
ナン、アラビアガム、ポリビニルアルコール等の
粘結剤、ポリエチレングリコール、ソルビトー
ル、グリセリン、プロピレングリコール等の粘稠
剤、ラウリル硫酸ナトリウム、ドデシルベンゼン
スルホン酸ナトリウム、水素添加ココナツツ脂肪
酸モノグリセリドモノ硫酸ナトリウム、ラウリル
スルホ酢酸ナトリウム、Ｎ−ラウロイルザルコシ
ン酸ナトリウム、Ｎ−アシルグルタミン酸塩、シ
ヨ糖脂肪酸エステル等の発泡剤、それにペパーミ
ント、スペアミント等の精油、ｌ−メントール、
カルボン、オイゲノール、アネトール等の香料素
材などの香料、サツカリンナトリウム、ステビオ
サイド、ネオヘスペリジルジヒドロカルコン、グ
リチルリチン、ペリラルチン、ｐ−メトキシシン
ナミツクアルデヒドなどの甘味剤、防腐剤などの
成分を水と混和し、常法に従つて製造する。ま
た、マウスウオツシユ等の口腔洗浄剤その他にお
いても、製品の性状に応じた成分が適宜配合され
る。 なお、本発明においては、ムタナーゼ、ソルビ
ン酸、アレキシジン、ヒノキチオール、セチルピ
リジニウムクロライド、アルキルグリシン、アル
キルジアミノエチルグリシン塩、アラントイン、
ε−アミノカプロン酸、トラネキサム酸、アズレ
ン、ビタミンＥ、水溶性第一もしくは第二リン酸
塩、第四級アンモニウム化合物、塩化ナトリウ
ム、生薬抽出物などの有効成分を配合することも
できる。 而して、本発明に係るう蝕予防剤は、前記抗血
清及び／又は乳と前記シネルギスト成分とを組合
せて用いたことにより、ストレプトコツカス・ミ
ユータンスによる歯垢の形成を効果的に抑制し、
う蝕の発生を良好に防止する。しかも、前記抗血
清、乳及びシネルギスト成分はいずれも安全性が
高く、従つて本発明のう蝕予防剤は使用上の安全
性が高いものである。 次に実験例を示し、本発明の効果を具体的に示
す。 ［実験例］ 下記抗原を使用し、下記の方法によりその抗血
清及び母乳を得た。 (1) 抗原 ストレプトコツカス・ミユータンス NCTC10449 BHI培地の透析外液を培地として使用し、生
育した菌を洗浄した後、ホルマリン処理したもの
を使用。 ストレプトコツカス・ミユータンス NCTC10449の細胞壁画分 Bleiweisらの方法（J.Bacteriol.88，1198−
1200，1964）に従つて調製したものを使用。 ストレプトコツカス・ミユータンス NCTC10449の線維状構造物画分 J.Van Hoateらの方法（Arch.Oral.Bio.，16，
1131−1141，1971）に準じて調製したものを使
用。 ストレプトコツカス・ミユータンス NCTC10449のグルコシルトランスフエレース画
分 井上らの方法（Microbial Aspects of dental
caries Vol.，665−682，1976［Information
Retrieval Inc.］）に従つて調製したものを使用。 ストレプトコツカス・ミユータンス NCTC10449のプロテイン抗原画分Lehnerらの方
法（J.General Microbiology，122，217−225，
1981）に従つて調整したものを使用。 (2) 抗血清、母乳の調製法 上記の抗原をフロイント完全アジユバントと混
合し、妊娠ヤギ、ウマ、ウシ又はウサギに免疫
し、その後抗原とフロイント不完全アジユバント
とを混合したもので３回免疫し、出産後に初乳を
採取した。また、抗血清については上記と同様に
４回免疫後採血し、凝固させ、その遠心上清をサ
ンプルとした。 次に上記抗血清及び母乳並びにシネルギスト成
分としてグルコシルトランスフエレースインヒビ
ター（GTFインヒビター）、プロテアーゼ、デキ
ストラナーゼを使用し、下記方法によりストレプ
トコツカス・ミユータンスの口腔内定着試験を行
なつた。 (3) ストレプトコツカス・ミユータンスの口腔内
定着実験 ハムスター５週令雄を一群５匹にし、それぞれ
にストレプトコツカス・ミユータンス
NCTC10449株を１×10⁸個接種する。その日から
それぞれの有効成分（前記抗血清、乳及びシネル
ギスト成分）を飲料水として投与し、１週間後及
び４週間後にハムスターの口腔内の歯列を減菌し
た綿球でこすり、少量の生理食塩水中に浸して菌
を均一に分散させる。その一定量をBHI平板培
地及びミユーテイスサリバリウス平板培地にまい
て全菌体数及びストレプトコツカス・ミユータン
ス菌のコロニー数をカウントする。ストレプトコ
ツカス・ミユータンス菌の数は全菌数10000個当
りの菌数であらわした。なお、飲料水中の抗血清
又は母乳の濃度は0.025％とし、シネルギスト成
分の濃度はGTFインヒビターとプロテアーゼの
場合が0.01％、デキストラナーゼの場合が0.005
％とした。 なお、比較のため、抗血清又は母乳とシネルギ
スト成分とを併用せず、抗血清又は母乳を単独添
加した場合、シネルギスト成分を単独添加した場
合、更に抗血清、母乳、シネルギスト成分を添加
しない場合（コントロール）についても同様の試
験を行なつた。 第１表にシネルギスト成分としてGTFインヒ
ビターを使用した場合の結果、第２表にプロテア
ーゼを使用した場合、第３表にデキストラナーゼ
を使用した場合の結果を示す。 【表】 【表】 【表】 するものを用いた。
【表】 【表】 第１〜３表の結果から、本発明に係る抗血清、
母乳とシネルギストとの組合せはストレプトコツ
カス・ミユータンスの定着を良好に抑制すること
が知見される。 以下、実施例を示す。なお、％はいずれも重量
％を示す。 ［実施例１］ 練歯磨 第２リン酸カルシウム・２水和物 50.0％ グリセリンン 20.0 カルボキシメチルセルロース 1.0 ソジウムラウリルサルフエート 1.5 ソジウムラウロイルザルコシネート 0.5 香 料 1.0 サツカリン 0.1 水 残 100.0％ 以上の成分にヤギ抗全菌体血清0.1％と、プロ
テアーゼ0.001％又はGTFインヒビターA0.1％又
はデキストラナーゼ3000単位／ｇ組成物を配合す
る。 ［実施例２］ 練歯磨 第２リン酸カルシウム・２水和物 50.0％ ソルビツト 10.0 グリセリン 10.0 カルボキシメチルセルロース 1.0 ソジウムラウリルサルフエート 2.0 香 料 1.0 サツカリン 0.1 エタノール 2.0 ムタナーゼ 0.1 水 残 100.0％ 以上の成分にウシ抗細胞壁血清0.1％と、プロ
テアーゼ0.001％又はGTFインヒビターC0.1％又
はデキストラナーゼ3000単位〜ｇを配合する。 ［実施例３］ 練歯磨 炭酸カルシウム 50.0％ グリセリン 20.0 カラゲナン 0.5 カルボキシメチルセルロース 1.0 ラウリルジエタノールアマイド 1.0 シヨ糖モノラウレート 2.0 香 料 1.0 サツカリン 0.1 水 残 100.0％ 以上の成分にシ抗GTF母乳0.05％とプロテア
ーゼ0.001％又はGTFインヒビターB0.1％又はデ
キストラナーゼ3000単位／ｇを配合する。 ［実施例４］ 練歯磨 第２リン酸カルシウム・２水和物 50.0％ グリセリン 20.0 カルボキシメチルセルロース 2.0 ソジウムラウリルサルフエート 2.0 香 料 1.0 サツカリン 0.1 水 残 100.0％ 以上の成分にウマ抗プロテイン血清0.1％と、
プロテアーゼ0.001％又はGTFインヒビターA0.1
％又はデキストラナーゼ3000単位／ｇを配合す
る。 ［実施例５］ 練歯磨 無水ケイ酸 30.0％ グリセリン 30.0 ソルビツト 20.0 カルボキシメチルセルロース 1.0 ソジウムラウリルサルフエート 2.0 香 料 1.0 サツカリン 0.1 エタノール 2.0 水 残 100.0％ 以上の成分にヒツジ抗プロテイン血清0.1％と、
プロテアーゼ0.0001％又はGTFインヒビター
A0.1％又はデキストラナーゼ2000単位／ｇを配
合する。 ［実施例６］ 粉歯磨 第２リン酸カルシウム・２水和物 50.0％ 炭酸カルシウム 30.0 グリセリン 10.0 α−オレフインスルフオネート 1.0 香 料 1.0 サツカリンン 0.1 デキストラン 0.5 水 残 100.0％ 以上の成分にヒツジ抗線維状構造物血清0.1％
と、プロテアーゼ0.0001％又はGTFインヒビタ
ーB0.1％又はデキストラナーゼ2000単位／ｇを
配合する。 ［実施例７］ 液状歯磨 ポリアクリル酸ナトリウム 50.0％ グリセリン 30.0 香 料 0.9 サツカリン 0.1 エタノール 3.0 リノール酸 0.05水 残 100.0％ 以上の成分にヤギ抗GTF母乳0.01％又は0.02％
及びヤギ抗プロテイン母乳0.01％又は0.02％と、
プロテアーゼ0.002％又はGTFインヒビター
A0.02％又はデキストラナーゼ3000単位／ｇを配
合する。 ［実施例８］ マウスウオツシユ エタノール 20.0％ 香 料 1.0 サツカリン 0.05 ラウリルジエタノールアマイド 0.3 水 残 100.0％ 以上の成分にヤギ抗GTF血清0.1％と、プロテ
アーゼ0.01％又はGTFインヒビターB0.01％又は
デキストラナーゼ3000単位／ｇを配合する。 ［実施例９］ うがい用錠剤 炭酸水素ナトリウム 54.0％ 第２リン酸ナトリウム 10.0 ポリエチレングリコール 3.0 クエン酸 17.0 硫酸ナトリウム（無水） 13.6 香 料 2.0 オレイン酸 0.1 100.0％ 以上の成分にウサギ抗GTF血清0.1％と、プロ
テアーゼ0.005％又はGTFインヒビターA0.05％
又はデキストラナーゼ3000単位／ｇを配合する。 ［実施例10］ 歯肉マツサージクリーム 白色ワセリン 8.0％ プロピレングリコール 4.0 ステアリルアルコール 8.0 ポリエチレングリコール4000 25.0 〃 400 37.0 シヨ糖ステアリン酸エステル 0.5 水 残 100.0％ 以上の成分にウシ抗線維状構造物母乳0.5％と、
プロテアーゼ0.05％又はGTFインヒビターA0.5
％又はデキストラナーゼ3000単位／ｇを配合す
る。 ［実施例11］ チユーインガム ガムベース 43.85％ 炭酸カルシウム 2.0 水アメ 15.0 砂 糖 30.0 シヨ糖パルミテート 1.0 フルクトース 4.0 マルトース 3.0 香 料 1.0 100.0％ 以上の成分にウシ抗全菌体母乳0.1％と、プロ
テアーゼ0.001％又はGTFインヒビターC0.1％又
はデキストラナーゼ3000単位／ｇ配合する。 ［実施例12］ トローチ アラビアゴム 6.0％ ブドウ糖 72.0 ゼラチン 3.0 香 料 0.2 ｌ−メントール 0.1 スペアミント油 0.1 アスコルビン酸ナトリウム 0.1 水 残 100.0％ 以上の成分にヤギ抗プロテイン血清0.05％又は
0.1％と、プロテアーゼ0.005％又はGTFインヒビ
ターC0.1％又はデキストラナーゼ3000単位／ｇを
配合する。 ［実施例13］ 口腔用パスタ ポリオキシエチレンモノステアレート 2.0％ ソルビタンモノオレエート 2.0 セチルアルコール 2.0 パルミチルアルコール 3.0 プロピレングリコール 15.0 カルボキシメチルセルロース 5.0 ゼラチン 1.0 サツカリン 0.2 ペパーミント油 0.5 スペアミント油 0.5 塩化リゾチーム 5000単位／ｇ水 残 100.0％ 以上の成分にウマ抗GTF血清0.05％又は0.1％
と、プロテアーゼ0.005％又はGTFインヒビター
A0.1％又はデキストラナーゼ3000単位／ｇを配
合する。 ［実施例14］ 口腔用パスタ グリセリルモノラウレート 3.0％ オレイルアルコール 5.0 ポリエチレングリコール 15.0 白色ワセリン 3.0 Ｎ−パルミトイルグルタミン酸モノナトリウム
0.5 ヒドロキシエチルセルロース 5.0 酢酸トコフエロール 0.1 サツカリンナトリウム 0.2 和種ハツカ油 0.7 カルボン 0.5 アネトール 0.3 オイゲノール 0.1 水 残 100.0％ 以上の成分にウサギ抗線維状構造物血清0.025
％又は0.05％と、プロテアーゼ0.0025％又はGTF
インヒビターB0.05％又はデキストラナーゼ3000
単位／ｇを配合する。 ［実施例15］ アイスクリーム クリーム（脂肪率50％） 16.84％ 牛乳（ 〃 3.7％）＊ 42.65 無糖脱脂練乳 24.24 砂 糖 11.25 コーンシロツプ 4.65 安 定 剤 0.35 100.00％ ＊：ウシ抗線維状構造物母乳３％を含有 以上の成分にプロテアーゼ0.001％又はGTFイ
ンヒビターC0.002％又はデキストラナーゼ250単
位／ｇを配合する。 ［実施例16］ アイスクリーム クリーム（脂肪率40％） 31.54％ 牛乳（ 〃 3.7％）＊＊ 37.16 無糖脱脂練乳 15.08 砂 糖 11.25 コーンシロツプ 4.67 安 定 剤 0.30 100.00％ ＊＊：ウシ抗プロテイン母乳５％を含有 以上の成分にプロテアーゼ0.001％又はGTFイ
ンヒビターA0.1％又はデキストラナーゼ5000単
位／ｇを配合する。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ストレプトコツカス・ミユータンス菌体、該
   菌の細胞壁画分、該菌の線維状構造物画分、該菌
   のグルコシルトランスフエレース画分及び該菌の
   プロテイン抗原画分から選ばれる１種以上を哺乳
   動物に免疫することによつて得られる抗血清及
   び／又は乳と、グルコシルトランスフエレースイ
   ンヒビター、プロテアーゼ及びデキストラナーゼ
   から選ばれる１種以上のシネルギストとを組合せ
   てなることを特徴とするう蝕予防剤。