JPH02502881A - 生物の酵素活性及び合成能を高める方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 生物の＃業活性及び合成能を高める方法本発明は、生物の＃素ｔＢ性及び合成能 を高める方法に関し、これは、生＊１不活性化エリシトール（Ｅｌｉｃｉｔｏｒ ｅｎ）含有微生物、その７″ｙグメント又はニリントール含有微生物の分泌物と ｉ！触させることｔ−特徴とするが、非微生ｇｌＪ性主物の＃累活性及び合成能 を高めるために、不活性化ニリントール含有バクテリア、その７２グメント、ニ リントール含有バクテリアの分泌智を使用することを条件とする。

ニリントールは高等植物の組織と接触しそれらの酵素の活性及び合成比をたかめ る微生物性の又は植物性の作用物質として周知でるる。このように、これらの植 物に蓄積された内容物質は、抗微生物性の場合、フィトアレキシン（Ｐｈｙｔｏ ａｌｅｘｉｎｅ）と称される（Ｎａｔｕｒｗｉｓｇｅｎｓｃｈａｆｔｅｎ　６８ ｔ　　１９８１ｐ　４４７　ｆｆ。

Ａｄｖ、　Ｅｎｚｙｍｏｌ　５５ｙ　１９８３ｔ　　１　ｆｆ及びＳｐａｋｔｒ ｕｍｄｅｒＷｉａａｅｎａｃｈａｆｔ　１１．　１９８５＊　８５　ｔｔ　）。

現在フィトアレキシンの定義に駅当する１００棟以上の化合智が櫨々の穫豐櫨か ら分慝さｎている。それらは徳々の天然智のグループに所属する、例えばテルペ ノイド、リルンｒＩＲ誘導坏、アセチレン及びポリアセテレフ、ビベンゾル、ス チルベン、７エナントレン及びゾヒドｏ７エナントレン、べ／シフ２ン及び７二 ノールヘンゾ７ラン、７０クマリン、７ペナルミン（Ａｖｅｎａｌｕｍｉｎ）　 、７ラバン、フェニルベンゾフラン、ベンゾキサテノン、アルカロイド、イソ７ −ｙボッイド類でるる（Ｂｒｏｏｋｓ　ａｎｄ　Ｗａｔａｏｎ、　Ｎａｔ、　Ｐ ｒｏｄ、　Ｒｅｐｏｒｔａ２．１９８５，４２７ン。

このニリントール作用は令息の所技術的応用を見出していない。これには多くの 根拠が存する：高等植物のｍ胞を経隣的に是認される条件のもとて准中培養で増 殖させることは小数の例外を除外すれば令息不可絽である。ニリントールを微生 物による発廖で使用することは先験的に無益と思われた。それというのもニリン トールの作用様式に関する有力な学説（ＡｌｂｅｒｓｈｅｉｍＰ、　ｕｎｄ　Ｄ ａｒｙｉｌｌ　Ａ、　Ｇ、　Ｓｐｅｋｔｒｕｍ　ｄｅｒ　Ｗｉｓｓｅｎｈａｆｔ 　。

１１．１９８５．８５）によれば、ニリントールは微生物における酵素活性及び 物質代謝過程に影響しな−という前提から出発しなければならなかったからであ る。

現行の学説によればバクテリア、告えはエルビニア（Ｆ；ｒｖｉｎｉａ）　１４ の包板は、植物の細５に壁から憎建の酪累（ペクテナーゼ）ｔ−用いて内因性の ニリントールとしてフィト７レキシン形Ｗ、ｔ−ｍ戟するニリントール（オリ！ ガククツｏニド）′ｆ：遊嘔することによってのみ植物にフィトアレキシン形成 ｔ−誘発できることに注目ナベきでるる。

ところで、次のニリントールと称される倣ｇ：、智からの化合智及び細胞製品が 、意外なことに微生物に訃いて酵素活性及び合成能を高める能力のめることが見 出さｎた・更に％＃巣でも栄５Ｉ累でもないニリントールを含むバクテリアも存 在することが見出された。

本発明の方法は、基本的に遊離又は合成石れたニリントールを用いて実施できる が、これは鳳則的に余夕にも高価でるる。従って不活性化されたエリシトール含 有微生物又はこｎｃ）微生９！ＪＯ７之グメント、例えばｍ胞櫨７２クション、 機械的に破砕さｎた又は化学的もしくは酵素的に溶解された細Ｍ＆７７グメント 又は補助剤例えばエタノール又は７セトンで沈澱さｎた細胞内容′４！Ｊ質ｔ− 便用すれば十分でるる。不活性化された微生物とは、本発明の重体においては長 期間生活能力を失ったものを称する。

微生Ｗがニリントール′に培養液中に放出又は溶解又は滅菌によりて水溶性のエ リシトール含有珀ｍＰｉ容物質を形成するときは、これらのエリシトール言有倣 主−の分節−も不発＠０方法の笑厖のために使用で在る。

５ｉＬ主智Ｏ谷々の屋のエリシトール含有生差物に、不発明方法の矢應に好適で ある。

ｆ！ＩＬ’Ｅ＠の中でニリントールを有することで句らｎている％、０は籍に次 の第１表にまとめらｎｆｃ函休及体酵母類である： ａ！１表 アルテルナリア・カルタン（人１ｔｅｒｎａｒｉａ　ｃａｒｔｈａｍｉ）Ａｒｃ ｈ、Ｂｌｏｃｈ、Ｂｉｏｐ、２２９ｔ　　１９８４．　１３６、ボトリチス・タ ネレア（ＡＴＣＣ４Ｂ　５４５　）　（Ｂｏｔｒｙｔｉａｃｉｎｅｒｅａ）　Ｐ ｈｙａｉｏｌ、　Ｐｌａｎｔ　Ｐａｔｈｏｌ、　１　１　ｅ　　１９７７　ｐ２ ８７、 セントシステス・フイムプリ１り（Ｃａｒａｔｏｃｙａｔｉａｆｉ、１Ｑｂｒｉ ａＺａ）　ｐｈｙｌｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　２５　ｔ　　１９８４　ａ　　７５ ９、セントシステス・クルミ（Ｃｅｒａｔｏｃｙａｔｉａ　ｕｌｍｉ）　Ｐｈｙ ｔｏ−ｃｈｓ、ｎ１ｓｔｒｙ　２３ｅ　　１９８４．５８３コンドロステレクム 会ゾルプレクム（Ｃｈｏｄｒｏａｔｅｒｅｕｍｐｕｒｐｕｒｅｕｍ）　Ｊ＋Ｃｈ ｅｎ、　８ｏｃ、　Ｐｅｒｋｉｎ　Ｔｒａｎｓ　Ｉ　、　　１９８４Ｃ１ａｄｏ ａｐｏｒｉｕｍ　ｆｕｌｖｕｍ）　Ｐｈｙｓｉｏｌ、　Ｐｌａｎｔ　Ｐａｔｈｏ ｌ、　１６ｍ１９８０．３９ｉ、 コレトトリクム・す／デムチアヌム（ＡＴＣＣ５２４７１）（Ｃｏｌｌｅｔｏｔ ｒｉｃｈｕｍ　ｌｉｎｄｅｍｕｔｈｉａｎｕｍ）　Ｆｏｕｒ、　Ｊ、Ｂｉｏ−ｃ ｈｅｍ、　１２９ｐ　　１９８３ｐ　５９３．７ナリクム・ソンニ（Ｆｕｓａｒ ｉｕｍ　ａｏｌａｎｉ）　Ｐｌａｎｔ　Ｐ２１１ｙｓｉ−ｏｌ、７６．１９８４ ．８６５ ７ｔリクム・ンツニ７スプモリ（Ａｒｅａ　４４９３４　）（Ｆｕａａｒｉｕｍ 　ａｏｌａｎｉｆａｐｍｏｒｉ）　Ｎａｔ、　Ｐｒｏｄ、　Ｒａｐ、　Ｑ　。

１９８５．４３９ ガノデルマ串７ゾ９　ｔ　）ム（Ｇａｚｏｄｅｒｍａ　ａｐｐｌａｎａｔｕｍ） Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉａｔｒｙ　２２ｅ　１９８３．　１０５９、グロメレ２・ シングラメ（Ｇｌｏｍｅｒｅｌｌａ　ｃｉｎｇｕｌａｔａ）ｐｈｙａｉｏｌ、　 ＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌ、　２　Ｌｌ　９８２ｅ　　１７１、ヘルミントスボリ クム・カルボヌム（ＡＴＴＣ５２４７１）（Ｈｅｌｍｉｎｔｈａｐｏｒｉｕｍ　 ｃａｒｂｏｎｕｍ）　Ｚ、　Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｈ、　５ｅｃｔ。

ｃ３８，１９８３，８９９、 モニリニア拳フルクテコ之（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ　ｆｒｕｃｔｉｃｏｌａ）　Ｊ 。

紅、　Ｃｈｅｗ、ＳＯＣ，ｔ　８４ｐ　　１９６２ｅ　　１９１９、ネクトリア ・ヘマトコツ力（Ｎｅｃｔｒｉａ　ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃａ）Ｐｈｙｔｏｃｈ ｅｍｉａｔｒｙ　２２＊　　１９８３ｔ　２２９１．７オマ・エクシグア（Ｐｈ ｏｍａ　ｅｘｉｇｎａ）　Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ、　２ｊ。

１９８２．１８１８、 フィト７ト之・カナビボラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ　ｃａｐｎａｂｉｖｏｒ ａ）Ｚ、Ｎａｔｕｒ４．５ｅｃｔ、　ｃ、３９．　１９８４＊　２１７、フィト ７トラパカゾｙ　シ（ＡＴＣＣ５２７７１ン（Ｐｈｙｚｏｐｈｔｈｏｒａ　ｃａ ｐａｉｃｉ）Ｐｈｙｓｉｏｌ、ＰＸａｎｔ　Ｐａｔｈｏｌ。

１８．１９８１，３７９、 フィト７トク・イン７エクタｙｘ（ＡＴＣＣ４４７７６）（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈ ｏｒａ　ｉｎｆｅｃｔａｎｇ）　Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ、　２３　、１９ｄ４゜５ ３７、 フィト７トン・メガスペルマ・パール・グリシネア（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ 　　ｍｅｇａａｐｅｒｍａ　　ｗａｒ　　ｇｌｙｃｉｎｅａ）Ａｒｃｈ。

Ｂｉｏｃｈ、　Ｂｉｏｐｈ、　２２９　　１９８４　ｅ　　１３６、フイトフト ラ・イン７エクタンス（ＰｈｙｔＯｐｈｔｈＯｒａｉｎｆｅｃｔａｎｓ）　Ｐｈ ｙｔｏｐａｔｈｏｌ　Ｚ、　２７ｅ　　１９５６，２６７、フィト７トン・メガ スペルマ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｍｅｇａｓｐｅｒｍａ）Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃ ｈｅｗ、２５９　、　　ｉ　９８’４゜フィト７トク争二コテアネ（Ｐｈｙｔｏ ｐｈｔｈｏｒａｎｉｃｏｔｉａｎｅ）　　Ｐｈｙｚｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ　　７ 　１　　ｚ　　　１　９８　Ｌ　　８６４、プツチニア・コロナタ（Ｐｕｃｃｉ ｎｉａ　ｃｏｒｏｎａｉａ）　Ｐｈ５ｉｏｌ。

Ｐｌａｎｔ　Ｐａｔｈｏｌ、　２０ｓ　　１９８２ｔ　　１８９、ピリキュクリ ア・オリゼー（ＡＴＣＣ１５９２３）（Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｌａ　　ｃｒｙｚａ ｅ）　　Ａｇｒｉｃ、　　Ｂｉｏｌ、　　Ｃｈｅｍ、　　４　８　＃１９８４． ２５３、 ナツカロミセスーセレビシェ（ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒａＹｉａｉａ ｅ）　Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｃｌ、　６２ｐ　　１９７８＊　１０７、ヴエル チシリクム・アルボ−アトルム（Ｖｅｒｔｉｃｌｌｌｉｕｍａよりｏａｔｒｕｍ ）　Ｎａｔ、Ｐｒｏｄ、　Ｒａｐ、　２＊　　１９８５．４２９、ヴエルテシリ クム・ダアーリエ（ＡＴＣＣ２６２８９）（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｄａｈ 工１ａｅ）　ＡＴＣＣ−Ｋａｔａｌｏｇ、　１６　、　Ａｕｆｌ−１９８４゜ 個有の研究において、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕａ）、コリネパクテリクム（Ｃ ｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｌｕｕ）、プレピパクテリク７４（Ｂｒｅｙｉｂａｃｔ ｅｒｉｕｍ）　、セルロモナス（Ｃａｌｌｕｌｏ−ｍｏｎａｓ）、２クトバチル ス（Ｌａｃｓｏｂａｃｉｌｌｕａ）　％ピメロパクター（Ｐｉｍａｌｏｂａｃ　 Ｈｓｒ）、ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕａ　）、及びスタフィロコッカ ス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｇ）の蹟属のグ″）ム陽性バクテリヤ濾株をト リノシンを用＾る蛋白質分解によ夕ｎ裂した？Ｉｍ胞愛表品及び水蒸気減筒した これらの諸属の微生物及びこｎら０濾過智をエリシト−ルを含有するか否かを検 太した。久Ｏ第２戎に、ニリシトールの慎重されたバクテリヤ株をめげる。

第２表 バチルス・リヒエニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕａ　１ｉｃｈｅｚｘｆｏｒｚｉｃ ）人ＴＣＣ９９４５、 バチルス・プミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｕｍｉｌｔ＝ｓ）　Ａ　’！’　Ｃ Ｃプレビパクテリクムやプタニクム（Ｂｒ　ｅｖｉ　ｂａｃ　ｔｍｒｉｕｂｕｔ ａｎｉｃｕｍ　Ａ　Ｔ　ＣＣ２１１９６グレピバクテリクムー７之プム（Ｂｒｅ ｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｚｆｌａｙｕｍ）　Ａ　Ｔ　ＣＣ１３８２６、ＡＴＣＣ１ ４０６７グレピバクテリクム・ラクト７エルメントム（Ｂｒｅｙｉｂａｃｔａｒ ｉｕｍ　　ｌａｃｔｏｆｅｒｍ＠ｎｔｕｍ）　　Ａ　　Ｔ　　ＣＣ１３６５５グ レビバクテリウム・グルタミンｒネシスＣＢｒｅｖｉｂａｃｔａｒｉｕｍ　　ｇ ｌｕｔａｍｉｎｇｅｎｅｓｉａ）　　ＡＴＣＣ１３７４７グレビパクテリクム・ アムモニアｒネ／ス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ａｍｍｏｎｉａｇａｎｅ ａ）人Ｔ　ＣＣ６８７２コリネパクテリクム・ヒドロカルボクラスタム（Ｃｏｒ ｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｈｙａｒｏｃａｒｂｏｃｌａａｔｕＸＬＩ）人ＴＣ Ｃコリネバクテリクム・ネ７リデイ（Ｃｏｒｙｎｅｏａｃｔｅｒｉｕｎｎｅｐｎ ｒｉｄｉｉ）　Ａ　Ｔ　ＣＣ１１４２５コリネパクテリクム嗜バクロメタボルム （ｃｏｒｙｎｅｂａｃ−ｔｅｒｉｕｍ　ｐａｕｒｏｍｅｔａｂｏｌｕｚ）　Ａ　 Ｔ　ＣＣ８５６８コリネバクテリクム拳リリクム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｉｅｒｉ ｕｍｉｌｌｉｕｎ）　　人　ＴＣＣ１５９９０コリネバクテリクム・ストリアト ム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉ　−ｕｍ　ｓｔｒｉａｔｕｍ）　Ａ　Ｔ　ＣＣ ６９４０コリネバクテリクム・キセローシス（ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｘ−ｕ ｍ　ｘｅｒｏａｌａ）Ａ　Ｔ　ＣＣ３７３コリネパクテリクＡ−シフテリー！− （Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ−ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）（Ｓｔａｍｍ　 Ｍａｓｓ、８　／　Ｂｅｈｒｉｎｇ　　Ｗｅｒｋｅ）コリネパクテリクＡ−メ： ｙ　＊　：ｘ　ｙ　（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｓｒｉｕｍｍｅｌａａｓｅｃｏｌａ ）人ｒｃｃ１７９６５コリネバクテリクム・グルタミクム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃ ｔｅｒｉ−ｕｍ　ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）　Ａ　Ｔ　ＣＣｉ　３０３２コリネバ クテリクム・ユントキシダンス（Ｃｏｒｙｎ・−ｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｕｒａｔ ｏｘｉｄａｎａ）人ｒｃｃ２ｉ７４９２クトバチル′ス・カゼイ・ナプスノ・ラ ムノスス（Ｌａｃｔｏｂａｃｈｉｌｌｕａ　　ｃａａｅｉ　　ａｕｂｓｐ、　　 ｒｈａｍｎｏａｕｓ）ＡＴＣＣ２クトバテルス・プツンタルム（Ｌａｃｔｏｂａ ｃｉｌｌｕａｐｌａｎｔａｒｕｍ）　ＤＳＭ　　２０　ｉ　７４ビメロバクター ートメセンス（Ｐｉｍｅｌｏｂａｃｚｅｒ　ｔｕｍ＋５ａｃｅ−ｎａＪ人Ｊ１４ ６０ ロドコッカス＋１フフスシアンス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕａｆａａｃｉａｕｓ） 　（Ａ　Ｔ　ＣＣ１２９７５ンロドコツカス７アスシアンスｉ　−Ｐｒｏｆ、　 Ｄｒ、　５ｔｏｌｐ。

Ｕｎｉｙ、　Ｂａｙｒｅｕｔｈによる遊）！！豐Ｕｎｉｖ、　Ｂａｙｒｅｕｔｈ 　Ｋよる遊Ｉｔ物。

不発明の４吐においては、従来グラム漕江の真正−函の少数の属のｊｄｌ函株の みがニリシトールを有するか察却できる隈りでは）、Ｉｔ’ｄＥｌ病鳳坏として 知られるニリシトールの活性の存在が多くの場合検討された。従ってＦ１様にニ リシトールを有する廻に多くの微生物例えばミコバクテリア（Ｍ）ｒｃＯｂａｃ ｔｅｒｉｕｍン、ノカルディア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）　、ノカルデイオスデス（ Ｎｏｃａｒｄｉｏｉｄｅａ）又はプソイドノカルディア（Ｐａｅｕｄｏｎｏｃａ ｒｄｉａ）真のバクテリアを見つけることが期待される。

ニリシトール活性に関する微生物の試験に、専問家に熟知の慣用のスクリー二ノ グテストを用−で容易に冥厖される。゛ 例えば、−迷の実験で＃累活注又は合成比を扁めるべき微生物を、液中層ｇ！七 行い、−々の培養物に色々の種又は亜種の不活性化された微生Ｗｔ”２Ａｌｌえ 、発酵が行わｎｆｃ恢、どの培′Ｊ！智で酵素活性又は合成比の上昇が連成され るかを分析ｆＡｆすることができる。値ｔＥ費ＯＩ＃系活注の上昇に、肖えは基 買の兄＃による風化の際に、この方法による生座吻の形成速度の同上又はこれの 収量の同上から認識さｎる。こルに相応して、倣ｇ：ｇＪのせ成屁の上昇は、例 えば倣坐りの内谷吻買の形成速度の上昇又はそれらの９負の収量の同上から認識 さｎる。

央遁例で蒔−に記載されてｉるこれ迄夾ルされた実験の示す如く、倣庄’ｌｌｏ ＃累Ｏ活往又は合成能を＾めるための不発明の方法は、丼常に多方面にわたって 利用ざｎるように思ゎｎる。かくして第２表に挙げられｆｃ４ＩＬ生智の細生物 製品の碩刃によって、ストレプ）＜オシン［Ｐｒｏｄｉｇｉｏａｉｎ〕）　、遍 びにストレプトミセス・コニリコール（８１ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒン、ストレプ トミセス・グリセ第２バー（Ｓｔ、　ｇｒｉａｅｏｒｕｂｅｒ）　、ストレプト ミセス・２テリシクス（ａｔ、　１ａｔｅｒｉｃｉｕｓン、ストレプトミセス・ プルプ２センス（Ｓｔ、　ｐｕｒｐｕｒａｓｃｅｎａ）及びストレプトミセス・ ピ第２セウス（Ｓｔ、　ｖｉｏｌａｃｅｕａ）の色素形成を刺戟することができ た。更にストレプトミセス・クラブリゲルス（ｓｚ、　ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕ ｓ）のノー２クタムー抗生智質及びクラビセプス・パスパリ（Ｃ１ａｖｉ−ｃｅ ｐａ　ｐａｇｐａｌｉ）のアルカロイド合成を刺戟することが可能でろうた。

倣王智のｆ成絽のこのような上昇は第２表に孕げられたバクテリアの＃Ｉ胞義品 を用匹て連成できるはか夕でなく、第１茨に挙げられて＾るニリシトール含有の 園類及び＃母ｔ−用いても倣庄吻の酵素活性及び合成比の上昇の巡ｇが期待さｎ る否でるる。

更に帛２表に挙げらルた微生物の細胞壁製品を便用してエシュショルテア参カリ フオルニカ（ｇｓｃｈｓｃｈｏｌｔ−ｚｉａ　ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）又は之 りボルフイア・セルペンテナ（Ｒａｕｗｏｌｆｉａ　ａｅｒｐｅｎｔｉｎａ）の ような高等檀ｔｏｍｓ培養に２いてアルカロイド形Ｋ　ＣＤ　＊　、を義の上昇 ｔ−這連成ることにｇ功した。

Ｏ叱方及び１７−クトステロイドｆｉ−選択的に還元するロドトルラ・グルチニ ス（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｇｌｕｔｉｎｉｓ）の叱方及びステロイド’ｒ１ ５αの位置で水散１こするぺ二シリクム・之イストリクキイ（Ｐｅｎｉｃｌｌｌ ｉｕｍ　ｒａｉｓｔｒｉｅｋ−１１）の叱方をＥｊＡ＃に高めることに成功し次 。これらの＃１胞壁展品を用いてクルプ２リア・ルナータ（Ｃｕｒｙｕｌａｒｉ ａ　１ｕｎａｔａ）のステロイドの１１／位水散化の絽力を高める区みは、令息 のｊｆｒ不灰功のままでｂりた。

これらの研究は、本発明の万ｆｆ１ｔｆ用して多くの他ＯＢ業的ｆ−利用価僅の 大きい微生物内容吻負の形成管刺戟しかつ技１！ｉｒ＋３９に有用な倣主御の個 の靜索后注を上４させることが可能になると＾り希皇の出現を正曲化した〇 このような微生物Ｐ３菩ｇＪ［は、例えば仇庄智買１例えはペニシリン、セファ ロスポリン、ナイフロスボリン、アクテンマイシン、グラミシジン、ネオマイ７ ン、デンタマイシン、ニスタチン（Ｎｙｓｔａｔｉｎｓ）　、テト之ナイクリン 、ニコマイシン又はりノコマイシン、エリスロマイシン、りＥ２″ｙムフェニコ ール、グリセオフルビン、又μ７７ゾン酸等、麦角アルカロイド、例えばエル− ｒｐ　ｙ　ｙテン、エルゴタミン、エルゴシン、エルゴクリステン、エルゴコル ニン、アグロクラビン（Ａｒｇｏｃｌａｖｉｎ）、カノク之ビン（Ｃｈａｎｏｃ ｌａｖｉｎ）、７エストクラビン（Ｆｅａｔｕｃ工ａｙｉｎ）パスバリン酸（Ｐ ａｓｐａｌｉｎｓＭｕｒｅ）又はリセルグｊｉｉ　（ＬｙｓｅｒｇｓＭｕｒｅ） 誘導体、ビタミン、例えばビタミンＢ１２　、リボン２−ビン又はβ−カロチン 、Ｉ＃素ｆ％ｌえばアミラーゼ、グルコースイソメラーゼ、プロテア−ぜ、ペク チナーゼ、セル２−ゼ、リパーゼ、ペニシリンアシンーゼ、キチナーゼ又はラク ターゼ、ヌクレオシド、例えばグアニル酸又はイノシンは又は例えばアミノ酸、 例えばシスティン、グルタミン酸、トリシト７アン、又はリシンでるる。

原則的に、内因性又は外因性の蛋白質形成を高めることは遺伝的に変異された微 生物に２いても可能である。このような有用な蛋白ＪＸｒｉ、すでに述べた＃尤 及び抗生書質ばか夕ではなく文例としてはインターフェロン、インシニリン、エ リスｏボイチ７　（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｔｉｍ）及びＴＮＰでろる。

＃素活性によって工業的に利用さｎる微生物は、例として次の文献に配賦ざｎて いる。： Ｗ、　Ｃｈａｒｎｅｙ　ａｎｄ　Ｈ，Ｈｅｒｚｏｇ：　Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　’ ｒｒａｎａｆｏｒｍａ−１ｉｏｎａ　ｏｆ　５ｔｅｒｏｉｄｓ　：　Ａｃａｄｅ ｍｉｃ　Ｐｒｅａａ　、　Ｎｅｖｒ　Ｙｏｒｋｓｔｃ、　１９６７、 に、Ｋｉａａｌｉｃｈ　：　　Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　　Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔ ｉｏｎｓ　　ｏｆＮｏｎ−ａｔａｒｏｉｄａｌ　Ｃｙｃｌｉｃ　Ｃｏｍｐｏｕｎ ｄｓ；　　；　　Ｇｃｓｏｒｇ　ＴｈｉｅｍｅＰｕｂｌ、　８ｔｕ＄ｔｇａｒｔ （Ｄ　Ｒ）　、１９７６及びＫ　、Ｋｉｅｓｌｉｃｈ：Ｂｉｏｔｒａｍｆｏｒｍ ｔｉｏｎａ　；　ｉｎ　Ｈ，Ｊ、Ｒｅｈｍ　ｕｎｄ　Ｇ、Ｒｅｅｄ（Ｈｅｒａｕ ａｇｅｂｅｒ）：　　Ｂｌｇ　　−ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　　＃　　Ｗｅｉｎｈ ｅｉｍ（ｐ　Ｒ）　　ｅｓｃ、　’Ｖ”ｏｌｂａ　　１　９８４゜このような微 生物は、とシわけステロイド変換、例えば１１α、１１１又は１５α位−水歳化 、Δ、ｒ、ＭＸ孟、１７α、１７β−ケト還元又はステリンの＠鎖の分解る。

新しい微生物の内菩書質、例えば新しい抗生ｑＩＩ質を見つけることも可比でろ り、この際、試験すべき微生物に不活性化されたニリシトール含有微生物を加え る。

従ってこの希望は根拠のないことではない。それというのもチ＜ｏｉ４＊樋物は ニリシトールを含有する微生−に感染した−にのみ著しｈ童のフイトアレキ７ン を形成することが刈られてｉるからでるる。

いかなるエリシトール含有微生９Ｊが一定の微生−の＃素活性及び合成餌を扁の るかｔ測定することは、専門家に周知の慣用法を用ｉて行なう。

本発明法Ｏ夾應は、微生物を用＾る発酵に関する威ｐは専門家にとっては間層は なｌ／％ａ　ｗｌ素活性又に合成能の高められるべき微生物を周知の条件下で層 貴し、層重に不活注化賂ｎたエリクトール貧有値生物、それらの７−）グメント 、それらＯ彌出智又は分ｉＩ；ＩＰ智を添加し、通？１１のごとく発酵を継続さ せる。不活性化された倣生り、この生体の７２グメント又は抽出書又はニリシト ール含有微生物の分す智の添加はすでに発酵圓始＃に行なうことができる。ｉｋ 通な−ｍ時期区、肯然培誉賂ルｆｃ微生物の種類に依存するが、床に対数増殖期 のｉ過に左右され、個々の例で検討されねばなりな−。

バクテリアでは、例えば発錐關始後４〜６０時１’ｉ４に添ｍを夷焉することが 屡々ｉ幼として立証されている。

不活性化彼生り又はそれの７″ｙグメントの添ＸＩＫ賑しては発ｊｌ？ｉｌ簿３ 当９通例１〜１００ＯＮ（有為には１０〜２００！ｉ）の不活性化された微生物 又は０．１〜１０Ωｌ（有潤には１〜６０１）のこの生＊（Ｄ７：ｙグメントを 使用する。ニリシトール含有微生物の分泌物を変周する場合は、原則として発酵 容積１　ｔｍ”尚シ１の＃素による変換に使用される微生物の非累活性を高める ために不発明の方＠が用いられるならば、基質のＩＱ加は一般に、工！ｊ　’； ’　）　−Ａ−ｆｉ有不活性化値主曹又はその７２グメント又は分に智の添加後 ０〜１０時間に開始する。

竣ｍ発酵条件は、ｆ用？、主１、変周培地、発酵時間、エリシトールｔＶＷ買の 櫨類と虚等に依存し；漠々の場合においてこれらは専門家に周昶の予備案験によ りて検討されねばならない。

不活性化されたエリクトール含有倣ミ曹を得るためには、これら微生ｗｔ慣用Ｏ 条件下で培養し次＾で層重液の這心分艇又は濾Ａによりて分層し、所鼠によりて は、ｆｌｃ？１１し再、度分庫する。値生′４ｒＪを不活性化するには攬々Ｏ方 法を用いることができる。

町餌な不活性化の方法は、これらの微生＠に典型的な＃ｌ胞毒、肖えはエチレン オキシド、ホルムアルデヒド、オゾン、水銀化合物、有伝溶剤、例えば、メタノ ール、エタノール又にアセトンを作用さぜるか又は微生物を９０〜１４０℃のＩ ＸＪ熱、極端な圧力差の作用犠砕）、ｉｉ＆Ｊ！Ｔ仮亀界の作用又は紫外域照射 、ｒ線照射又は超ｆ［作用によって死訳させることよｐなる。該不活性化の実見 さｎる条件は、専門家に８ｔＥ！Ｊである（ｘ、　Ｈ，ｌｖａｌｌｈＭｕａｅｒ 、　Ｂ、　Ｓｃｈｍｉｄｔ　：　５ｚｅｒｉｌｉａａｔｉｏｎ。

Ｄｅｓｉｎｆｅｋｔｉｏｎ、　　Ｋｏｎａｅｒｖｉｓｒｕｚｇ、　　Ｃｈｅｍｏ ｔｎｅｒａｐｉｅ。

Ｇｅｏｒｇ　　Ｔｎｉｍｅ　　Ｖｅｒｌａ、ｇ、　　５ｔｕｔｔ５ａｒｔ　　（ Ｄ　　Ｅ　　）ｐ　　　１９６７ン。

エリシトール百Ｍ償生ぜの７２グメ／トに、偶えば参透圧ショック又は温度ショ ンクのｔ′Ｐ用による微生物の＃解、倣８：智Ｏ目己溶解、超音技による細胞の 処理又はガラス玉、ガ之ス禅又は石夷砂による微生ｖＯＭ枠及びこれに１枕〈分 画遠心によって得ることができる（Ｈｕｇｈｅｓ、　Ｄ、　Ｒ，、Ｗｉｍｐｅｎ ｎｙ、　Ｊ、　Ｗ、　Ｔ、　ａｎａ　Ｌｌｏｙｄ。

Ｄ、　：　Ｔｈｅ　ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｚｉｃｒｏｏｒｇａ ｎｉａＩｌｃｓ、　Ｘｎ　：Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ 、　Ｍｏｌ　１３　、　　（Ｎｏｒｒｉａ、　Ｊ、Ｒ。

ａｎｄ　Ｒｉｂｂｏｎｓ、Ｄ、Ｗ、、ａｄｓ、）ｐｐ、１〜５４．　　Ａｃａｄ ｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　Ｌｏｎｄｏｎ、　１９７１　ン０ こｎらの−ｆｌ１７之グメ／トから、例えばトリプ７ン処理によって樗ｊＩＩ！ さｎｆｉｃ−胞愛７ラクションを調装することができる。既述のようにかつ、次 の笑應例に便用されるｄＪ８１ｉ７７り７ヨンは、５ｃｎｌｅ’１ｆｅｒとＫａ ｎｄｌｅｒ（Ａｒｃｈ６Ｍｉｋｒｏｂｉｏ１．５７．１９６７ｔ　３３５−３６ ５　）記載の方法に従って作られた。

個万、水浴性の細胞成分から例えばエタノール又はアセトンを用いる沈減によ夕 、エリシトール含有沈澱吻を作ること４′ｑ１ｍである（Ｋｏｃｏｕｒｅｋ、　 Ｊ、　ａｎｄ　Ｂａ１ｌｏｕ。

ＣＪ！、、Ｊ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　１０Ｌ　　１？６９ｔ　　１１７５−１ １８１）。

エリシトール含有微生−の分泌−は、浴解、漏れ易くする（ｌｅａｋｙ　ｍａｃ ｈｅｎ）　、臨界点以上で液状のガス（例、戻戚ガスンを用いる抽出又は細胞を 水中で加熱滅菌することによって得られた活性放出されたｉａ胞酸成分ろられた 層重液でるる、これらに、　ｍ要に頗して更に、例えば颯油注の１買の抽出、強 く層重された１質の吸アの酵素不言のエリシトール含脣ｇｌＩ質の便用が実験的 に区明可総でｂりたことはすでに述べたが、これは場合によっては、医薬作用ｇ 質製造のための檀９！Ｊ細胸培責の便用にとって］ｉ景でろる（Ｍ、Ｈ，Ｚｅｎ ｋｉｎ　：Ｐｈａｒｍａｚｉ＠　ｈｅｕｔｅ、　　ｉ　　［］３ｔ　　　１　９ ８２．　　Ｂａｎｄ３ｔ１３１−１３８ン。原則的にバクテリアのエリシトール 含有智５１ｉ［ｔ−１１ｗ智又は人１′１１００組域又は細胞の培養での内容１ 買の合ＩｊＸ、絽を高めるためにもｆ！用できるか又治療例えば創Ｓ信兼の際に も便用できることは考えらｎる。

次の果り例は不発明の詳細な説明に有用である。

例　　１ 側處壁＾品によるストレプトミセス・リビダンスオシンＰｒｏａｉｇｉｏｓｉｎ 　）合成の］ｉｌ１戦諏　塘　　　　　　　　　　　　　　　　１０３９グルコ ース　　　　　　　　　　　　　　　１０Ｉ塩化マグネククム・６水和智　　　 　　　　　　　１０．１２　＃硫皺カリクム　　　　　　　　　　　　　　０． ２５　、Ｆ６蒸溜水　　　　　　　　　　　　　　８０１３１１７し、次の新し く縞贅された溶液で無醜的に補足する。

０−５　％　　ＫＪｉ２ＰＯａ浴液　　　　　　　　　　　　１ｄ６．６８９！ ｓ　ＣａＣＡ２−２ＨｚＯＩＩ　ｆｔ　　　　　　　　　　８　ｄ２０チ　Ｌ− ｒロリン浴叙　　　　　　　　　　１．５ｄ５．７　５　　％　　Ｔｇｓ　　緩 衝貞讐ｇ（４７，２）　　　　　　　　　　　　　１０ｄ微重元業ｆ！１１！［ Ｑ、２ａｊ （１！当ｊ）　Ｚｎ（Ａ２　（Ｚｎ２価）　　　　４０Ｉ９ＦｅＣ１３・６Ｈｚ Ｏ（Ｆｅ３ｆｉ）　　　２００ＩＣｕＣｊ２　・２ＨｚＯ（Ｃｕ２価）　　　１ 　（Ｃ’ｊ’ＭｎＣｊ２　・４Ｈ２０（ｊｊｎ２価）　　１０ダＮａ２Ｂ４Ｏ７ ・１Ｈ２０１ＣＪ”ｉｌＣＮＨ４）ａｃＭＯｔｏｚ４ン・４Ｈ２０ｉｏＭ９含胃 ） ｉ　　Ｎ　　−ＮａＯＨ０，５Ｍ この栄誉液谷々１．８Ｉ！を無菌的に３−内容のポリスチロール簀マルチデイツ シ二の小ｍ　（Ｋａｍｍｅｒ）　２４個中に入ｎる（Ｍｕｌｔｉｄｉｇｈ、　Ｆ ａ、　ＮｕｎＣ＊　６２００　Ｗｉｅａ−ｂａｄｅｍ　１２　）。ニリシトール の含意に関して試験すべき細胞壁装品各々２〜をＭ蒸溜水甲で２０分間１２０℃ で滅画し、得られる懸濁液を小鼠に加える。２−の小蚕には添加物を加えず、対 照として便用する。すべての小室中で童を就−釣に昇温溜水を用いて滅菌的に２ ｄになるようにｖ４層する。各々の小室に、ストレプトミセス・リビダンス（Ａ Ｔｃｃｉ９８４４）Ｃ）胞子の懸濁液５μ！を均一に黛誕的に接種する。実験パ ッチのインキュベーションは、好′ＡＥＢ（Ｔａｂｌａｒ振盪器；１分ａｒｉｏ ｏ回＠）Ｋ２６’Ｏで行う。

９６１Ｒｉｒ４醜に＃ｌ胞を遠心分離し、生理大項水で況いＣａＣ１ｚ上でＸ？ ！乾戯させると、茨４に挙げられた細胞の収量が得られる。遠心の際に得られる 上置みを−７に調整し、水で４−まで稀釈し、その吸収スペクトル全１８０から ｓｏｏｎｍｏｒ４で測定する。合成さｎた可溶性二次腫物アクチノルロゾン（Ａ ｃｔｉｎｏｒｈｏｄｉｎ）　及びプロディジオジン（Ｐｒｏｄｉ５ｉｏａｉｎ） の相対量は、自製的に描かれるスペクトルの吸収ピークを計ることによって近似 的に測定さｎる。

次のＭ３我は、とｎらの実績系において達成さＩした鰯釆を示す。

ｊｇ３機 試験バクテリアの１１ｄｌ胞壁　　　　乾燥細胞、収量　　色素富有麓−（対　 　　照）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２２ 　　　　　　　　　　　　　　　　１Ｂ　ｗ　Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、 　　　　　Ｂａ　ｍ　Ｂａｃｉ工ｌｕｇ。

Ｃ＝　Ｃｏｒｙｎｅｌ：＋ａｃｔｓｒｉｕｍ、　　　　Ｃｏ　＝　Ｃｅｌｌｕｌ ｏｍｏｎａｓ。

Ｌ　＝　Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕａ、　　　　　　Ｓ　ｘ　５ｔａｐｈｙｌｏ ｃｏｃｃｕａ。

例２ ｊｔｉ！胞！ｉ璃出曹によるストレプトミセス・リビダンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ ｙｃｅｇ　１ｉｖｉｃｌａｎａバＡＴＣＣ１９８４４ンの着色内容物質合成の） ｌ戟 例１０条件下でるるか、昇温溜水で２０分間１２０℃で滅菌した細織壁輔品の滅 菌１通智２ダを便用した場合にこｎらの滅菌した側胞虚の懸濁液を使用した場合 と殆ど同様の強度の８累形成の刺戟がストレプトミセス・リビダンス（ＡＴＣＣ １９８４４ンに、２ｈて這成さｍｕ抽出物によるストレプトミセス・リビダンス （人’Ｉ’ＣＣ）の屑色円容９！Ｊ質（アクテンルホデイ／、プロディジオジン ）合成の］１戦 例２の条件下でるるか、ｉｍ厖壁襄品２ｊｌＤかわ）にａ！Ｉ＆物質夫々２０１ １９を使用した場合に、滅菌された一ｍ壁の懸濁ｇ、Ｏ使用の場合とほぼ同じ強 度の色累形成の刺戟が達成される。

例　４ ス）レフトミセス・コエリコロル（Ｓｔｒｅｐｔｏｚｙｃｅａｃｏａｌｉｅｏｌ ｏｒ　）　Ａ　３　（２ンもしく　Ｉ′１（ＡＴＣＣ１３４０５）のＮ芭Ｐ３容 物負合成の刺戟 例１０条件下であるが、ストレプトミセス・コエリコｃＩル人５Ｃ２）’ｉｆ用 した顔に、明瞭な色票形成（多分同様にアクチノルホデイン）の３＃戟がこのバ クテリアで連成される。

例５ ストレプトミセス・グリｔオラパー（Ｓｔｒｅｐｚｏｍｙｃｅａｇｒｉａｅｏｒ ｕｂｅｒ）　ＣＤＳＭ　４０２７５　）における着色内容物質合成の刺戟 ガ１の条件下であるが、ストレプトミセス・グリｔオラパー（ＤＳＭ　４０２７ ５　）　’に使用した場合、同様に極めて明瞭な色Ｘ形ｇＯ上昇（多分アント之 ナイクリンー抗生脅質）がこのバクテリアにおいても達成てれる。

［６ ストレプトミセス−プルノンセンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｐｕｒｐｕｒａ ａｃｅｎａ）　（ＤＡＭ　４　Ｑ　３１０　）に２ける着色内容物質合成のｌ１ Ｉｌ戟 例１０条粁下でめるが、ス）Ｌ／プトミ大ス・プルプ之セ／スＣＤＳＭ　４０５ １０　）　ｔ−便用した場合に、このバクテリアにおいて同様に６某形成（多分 同様にアント７Ｆｔイクリンー尻庄智質）の強力な上昇が運瓜逼れる。

例　　７ ストレプトミセス・２クテリシクス（Ｓｔｒｅｐｔｏ工ｙｃｅａｌａｃｔａｒｉ ｃｚｕｓ）　（ＤＳＭ　４０１６３　）における膚色内谷吻気Ｏ屑戟 ＮＩＯ条件下でるるか、ストレプトミセス・ツクテリシクス（ＤＡＭ　４０　ｉ 　６３　）便用の場合に、このバクテリアにおいて同体に古巣形成の有意義な上 昇が漏成ストレプトミセスーピ第２セクス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅａｖｉｏｌ ａｃｅｕａ）　ＣＤＳＭ　４００８２　）における着色内容物質合成の刺戟 例１０条件下でるるか、ストレプトミセス・ピオラセクスＣＤＡＭ　４００８２ 　）　１１！！用の一首に、このバクテリアに訃いて同様に有意義な６累形成の 増加が達成ざストレプトミセス・タップリｒルス（ＳｔｒｅｐｔｍｙｃｅａＣ工 ａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ２７０６４）によるβ−之クりム抗主 １ｉｌｙ（セファロスポリン、ペニシリンＮ）形成の刺戟 ３−（Ｎ−モルホリノンーグロバ／スルホ／酸（ＭＯＰＳン　　　　　　５ｉｘ ｚｕｐｏ番　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　６．５９ＭｇＢＯ４−７ｋｉｚＯＬ］、６　Ｊｉ’Ｌ−７スパ之イン　　　 　　　　　　　　　２ｉ！グリセリン　　　　　　　　　　　　１ｕＩ膵母エキ ス（Ｏｚｉｄ、　Ｗｓｓｅｄ、　ＤＨ）　　　　　　　１　＆成跡元木塩浴液　 　　　　　　　　　　　　　１−（１）当５　Ｆｅ２Ｏ２・７ＨｚＯ（Ｆｅ工１ ）　　　　　１　＃ＭｎＬ、ｕ２・４Ｈ２０（Ｍｎ工ｌ）　　　　ｉ　ｉｔＺ心 ２”７’ｄ２０　　　　　　１　＆Ｃａｄ２　　　　　　　　１　、ｐ 含有） を昇温溜水で１１とし、滅−する（２０２）−閥１２０”０）。

この栄養溢液各１．８ｄを３ｄ円容積Ｏ滅漏ポリステレーＡＩ−″ｌＦルチディ ッシュ（Ｍｕｌｔｉｄｉａｈ　；　Ｎｕｎｃ社、６２Ｗ工ｅｓｂａｄｅｎ　１２ 　）の小室にに＆−釣に入ｎる。ニリシトール活性を試戚ナベき細胞ａ表品各２ ダ又は−詔置磯Ａ１０Ｍ９ｔ−丼′ｔＡ溜水中で滅菌（２０４ｔ、＜は４５分関 １２０℃）さ３た均−悪濁献として添加する。対照として１Ｎ！用する２−の小 菫は添加物をｔまない。仄−でナベての小璽甲に２ｒて重１ｒ差酒溜水七用いて 滅蓄的に２−と丁ゐ。各々の小型にストレプトミセス・り之プリデゝルス（Ｓｓ ｒｅｐｔｏｍｙｃｅ、ｓ　ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ２７０ ６４）（１）胤子繰８１准５μｌで一様に襞種する。

−遅の実績のイン中ユベーシ３ノは、好気的条洋行なう。イ／キュペーション時 間に２４−１３時間でｂる。

仇５Ｅ　ｗ　Ｘ形成の変化は、平板拡散賦駿云を几いて対照と比収して恒討する 。軟栄餐摩天中に想濁妊せた探ｍｉ留ｓは、ミクロコツカス・ルテクス（ｎｉｃ ｒｏｃｏｃｃｕａｘｕｚｅｕａ）もしくにバチルスｌ−ブチリス（Ｂａｃｉｌｌ ｕａｓｕｏＳｉｌｉｓ）　（１０６ＭＭ１／　ｍｌ　）でるる。穢準瀘虱片（直 径０．９ｃｘ）上に試職小呈からの遠心した（４ｄ、０００Ｘ＆）培養叙各２５ μノを施与する。４℃で４時間の拡散時間の後、この主安試績１ｔ３０℃で２４ 時閏イ／キュベートする。

プレビバクテリクム＋１７之プム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔａｒｉｕｍｆｌａｖｕｍ ）　（人Ｔｃｃ１３８２６）の死滅−店又にこのバクテリアの細胞ｍＷ品もしく はコリ不バクテリクムφ　ゾ７テ　リ　アエ　（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕ ｍ　ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｓ）（Ｓｔａｍｍ　Ｍａｓｓ、　５　）の細胞像義品 の添Ｊのもとで行わｎｆｃ培餐Ｋｊ？＾て、対照に比べて明瞭な抑制量の拡大に 、ストレプトミセス・り之ブリデルスによるβ−之クりム抗庄Ｗ＊Ｃペニシリン Ｎ１七７アロスボリンン生成の増大を示した。

例１０ エシュシ３．Ａｚチア−ｚす７オｙ＝力（ＥａｃｎａｃｈｏｌｔｚｉａＣａｌｉ ｆｏｒｎｉｃａ）の理髪によるアルカロイド（ｔノグイナリンＳａｎｇｕｉｎａ ｒｉｎ、セリルピンＣｎｅｌｉｒｕｂｉｎ、マルカルピンＭａｒｃａｒｐｉｎ及 びセレリスリンＣｈｅｌｅｒｙｔｈｒｉｎ　）形成の刺戟 ポリスチー−ルーマルチディツシュ（Ｎｕｎｃ　ｈ　６２００Ｗｉｅｓｂａｄｅ ｎ　１２　）の１ｄの小室２４個中でＪ、　Ｂｅｒｌｉｎａｔ、ａｌ、　（Ｚ、 Ｎａｔｕｒｆｏｒａｃｈ、＝３８Ｃ、１９８５＊　３４６−３５２）によって最 通として記載さｎｆｃ粂汗のもとテ、大々エシュショルテア・カリ７オルニ７の Ｍｗｃ培妥を行り。小呈のｍ−に添加せず対照とし、−一の小屋に加熱抽出及び エタノール沈波＃母ニリシトール（Ｋｏｃｏｕｒｅｋ　Ｊ、　ａｎｄ　Ｂａ１ｌ ｏｕ、　Ｃ，Ｒ，、Ｊ、　Ｂａｃｔｅｒｉｌ　１ｏｏ。

１９６９．１１７５−１１８１によって製造）２６６号句を、又残）には第６表 に亭げらｎたバクテリアの細胞−製品−８２６６ダ／ｌ　　ｔ−人ｎる。次いで 、培黛智を７２時間２４゛Ｃでインキユベートシ、つづいて培養智のアルカロイ ド富有型を元度針で測定し、その鍬、酵母ニリシトールによって訪纒さｎたアル カロイドせｉ菫を１００％と評価する。

次の第４表はこｎら一遅の実験に工つて這成さｎた結果を示す。

ｊｇ４我 試験バクテリア−Ｍｍ　　　　　　　エリシトール活ａ（５）プレピバクデリワ ム・７ラプムＡＴＣＣ１４０６７５０グレピバクテリクム・グルタミデネス　　 　　　　　　　１１３（Ｂ　、ｇｌｕｔａｍｉｎｇｅｎｅｇンＡＴＣＣ１３７Ｐ ｒｏｆ、　Ｄｒ、　５ｔｏｌｐ／Ｂａｙｒｅｕｔｈ　Ｕｎｉｖ、　（Ｄ単嘔体α ドコッカス・７アスシアンス　２７ Ｐｒｏｆ、　Ｄｒ、　５ｔｏｌｐ／Ｅａｙｒｅｕｔｈ　Ｕｎｉｖ、の単層体ラワ ボルフイア・セルペンテナ（Ｒａｕｖｏｌｆｉａｓｅｒｐｅｎｔｉｎａ）　Ｏ培 養におけるインドールアルカロイド（バｖ−、ｙアコタきンＶａ１１ｅａｉａｃ ｏｚａｍｉｎ）形成のＪ！ｉ１！１９２！ボルフイア命セルペンチナ（Ｓｔｏｃ ｋｉｇｔ、　Ｊ、、Ａ。

ｐｆｉＬｚｎｅｒ　　ａｎｄ　　Ｊ、Ｆｉｒｌ　　Ｐｌａｎｔ　　Ｃｏ１１　　 Ｒｅｐ、　　ユ、　３６−６９＜１９８１ンのｍａｎ層書ｔ、Ｌｉｎ５．ｎａｌ ｅｒ　ＪｔびＳｋｏｏｇの（Ｌ　ｓ　）　−層Ｂ　（Ｐｈｙａｉｏｌ、　Ｐｌａ ｎｔａｒｕｍ　１８　ｐｌｏｏ−１２７（１９６５）中テ＝＝迄ｍ岳ｒ　（１０ ０ｒ、ｐ、ｍ、ン２６℃かつ１７元（６００Ｌｕｘ　）　Ｋオ１．ｎ　テ培養す る。エリシトール′Ｍ域のたりに、１！のＬＳＩ地当ｐ新ｇｍ胞２００／［輩を 接種する。倣圧吻のニリシトール富有７ラグメントとしてＭ　４　表に挙げられ たバクテリアの此旭壁義品を５＠地１！当力１３０ダの負度で製油Ｔる。

５日間のイゾキュベークヨン後に、エリシト−ｈ化された培ｗＩｖ中でも、対照 中でｔ％細厖智買は２倍にすっり。ｊ！ｉ胞を収穫し、メタノールでｍｍｆる。

インドールアルカロイドバレシアコタξンの＊＊。

′Ｍｉ出物のヨＰＬＣ−分艦床で定量する。床処理の対照に検地１）当ρ僅か１ ．１６ダを含イナゐにすざないが１エリシトール化ざｎた層誉智における収ｘに １！尚クシ最大５８ｙでるる。Ｃれはニリシトールによる５０倍の増Ｊに匹敵す ゐ。

例１２ ０ドトル２争グルチニス（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｇｌｕｔｉｎｉａ）Ｘｙｏ 　　０３８９による１７−クトステロイドーレダクターゼー活注の′Ｒ戦 ａ）５％グルコース−ＨｚＱ ２チコー７スナイーブリ刀− を言有し−ｔ６．５に一歴さｎた減困宋黛培瑞５ｏＯ―を有する２ノのエルレン マイヤー７之スコに、ロトトル２・グルテニス（ＩＦｏ　　０３８９）の類９Ａ 寒天培誉讐からの違法を景復し、４０時ｒ４６０°Ｃで１９Ｏｒ、ｐ、ｍ、で培 養する。

ｂ）　　１チコーンスナイーノリ万一 ５チＮｕｒｕｐａｎ　”　（表造元ｎｕｒｕｐａｎ　ＧｍｂＨ，４０００Ｄｕｓ ｓｅｌｄｏｒｆ　ｌ　；　Ｄ　Ｂ　）１％Ｍｅｔａｒｉｎ　　　Ｃ襄慮元Ｌｕｃ ａｇ　Ｍａｙｅｒ　；２１１００Ｈａｍｂｕｒｇ　２８　、＋　Ｄ　Ｂ　）−６ ，２に一姫したものを含ひ滅函栄養培堆１０〇−ｋＮｆる５００！Ｊエルレンマ イヤ−７２スコに、力１２ａＣ）記載に従って製造さｎｆｃロドトルラ（池。ｄ ｏ−ｚｏｒｕｌａ）の予備培養’１１１０１１１１ｊを接種し、３０℃で７時間 １８０　ｒ、ｐ、ｍ、で培養する。

そＯｔｋ培養資に、６−ヒドロキシ−１，３，５（１０）、７−ニストッテトラ エン（ｅｎｔｒａｔｅｔｒａｅｎ）　−１７−オン１０ηを加え挺に２１０時間 巌鰺させる。久＾でこの培養智をメチルイソブチルケトンで抽出し、抽出物を製 編し、得られた祖庄腫智を姓戚ｒルの力之ムのクロマトグラフィーで精良する。

このようにして１．３゜５（１０）、７−エストツテトラエンー３，１７α−ジ オール５．９ダ（＝理論値の５９う）が得らｎる。

ｃ）Ｗ１２ｂの条市のもとで、３−ヒドロキシ−１゜３．５（１０）、７−エス トラテトラエン−１フーオン１０ダをロドト／Ｉ／う・グルチニスの培養管と共 に発酵させるが、この培養四に基質の添加の１編にバチルスかりヒエニアオルミ ス（Ｂａｃｉｌｌｕａ　ｌλｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓＡＴＣＣ９９４５ンのｍ＋ 扇虚ｊ１品５０ダの滅菌水中懸濁ｇ５−會Ｊえる点で区別される。培養物の説処 理後Ｋｉ、３，５（１０）、７−エスト２テトラエ／−３゜１７−ジオ−＃　６ ．８１に９（−理Ｎ５１ｉの６８チ）が得られバチルス会し／トス（Ｂａｃｉｌ ｌｕｓ　１ｅｎｚｕｓ）　（Ａ　Ｔ　ＣＣ１３８０５）のステロイド−Δｌ−デ ヒドラーゼｇａのＪｌｉ１１職 ａ）　　Ｑ、５★コーンステイープリカー０．０５チグルコース・Ｈ２Ｏ ０，１−酵母エヤス Ｐｋ１７．０に一贅し九減−栄被猷５０ＣＪｄｋイする２ノのエルレンマイヤ− ７クスコに、バチルス・レントクス（Ｅａｃｉｌｌｕａ　１ｅｎｔｕａ）　（Ａ 　Ｔ　ＣＣ１３８０５ンｑ）、ｉ濁液ｔ−捩種し４８時間６０℃で１９　Ｏｒ、 ｐ、ｍ、で振盪する。

ｂン　６チ大豆粉 Ｏ，Ｓ　Ｓコーンステイープリカー ０．１チ酵母エキス ｏ、ｏ　５　％グルコース・Ｈ２Ｏ を含みｐＨ７，３に調豊ざｎた諷１栄餐液１００ｄを有する５ｏａｔｏエルレン マイヤー７ラスコＫ　／（ｆ　ルス。

レントス予備培＊＠１ｏｏ−を朕徳し、７時開３０℃で、１８０　ｒ−ｐ−ｍ− で＆遣する。次いで、培誉切にジメチルホルムアミド４−中０６α、９ａ−ゾフ ルオルー１１β、１７α−ジヒドロキシ−１６α−メチル−４−プレグネ７−３ ｍ　２０−ジＸ７４０Ｍ９の滅Ｍ醪液を添加し更に４１ｔＲ間インキ二ベートす る。

次に、培養管ｔメチルインブチルケトンで畑出し、抽出液を真空で凝縮させ、そ の残分ｔ−硅酸１ラムのクロマドグ２フイーによって精製する。このようにして ６α、９α−ゾフルオルー１１β、１７α−ジヒドロキシ−１６α−メチル−１ ，４−プレグナシエン−３゜２０−ジオン１６１Ｍ９（−理論値の４０％］が得 られる。

Ｃン　例１３ｂの条件のもとで、６α、９α−シフにオル−１１β、１７α−ジ ヒドロヤシ−１６α−メチ＃−１，４−プレグネン−３，２０−ジオン４０ダｔ バチルス・レントクスの培養物と共に発酵させるが、基質添２ｋｌＮ前に％　こ の培養物にコリネバクテリウム・ジ７テνアエ（Ｓｔａｍｍ　Ｍａａｓ、　８ン のｋＪ胞垂Ｎ　５ａ　５０　”９の無画的水ｃＦＩＪＩ！ｍ献５ゴを添加する点 で異なる。培養物の後処ｍ後に、６α、９α−ゾフルオルー１１１゜１７α−ジ ヒドロキシ−１６α−メチル−１，４−プレグナジェン−３，２０−シＸン２１ ダ（富埋麿厘の５２．５チ）が得られる。

例１４ り２ビセプスーパスパリ（Ｃ１ａｖｉｃｅｐａ　ｐａａｐａｌｉ）（人ＴＣ０１ ３８９５）によるアルカロイド（リセルグ臘アミド及びインリセルグ家アミド） 形成の′ｙＩＪ戟＆）４−ソルビット（工業的に純粋） １チグルコース・Ｈ２Ｏ ２鋒こは（戚 ０．６　チ　（ＮＥｉ４）２８０番 （６）。

０．５％＃母ｍ　ｔｆｄ智（Ｄｉｆｃｏ　　ｃａｒ　Ｄｉｆｃｏ　Ｌａｂａ。

ｐｅｔｒ＋ｉｉ／υＳＡ　） ０．１チ　■ｚｐｏ４ ０．０３　％−ＭｇＳＯ４−７ＨｚＯ を含÷苛性ソーダで−５，２にｖ４差した滅菌栄黛浴液５０ｄを有する５ｏｏｎ ＜ｏエルレンマイヤ−７２スーに、−７０℃に凍結されたり２ピセブス・パスパ リ（ＡＴＣＣ１３８９５）の培養物を接棟し、５日間２４℃で、２４０　ｒ、ｐ 、ｍ、で振盪する。

ｂ）　　８チンルビツト（工業的に屍粋ン６チコハク酸 ０．９　チ　（ＮＨ，ン２ｓｏ４ ０．１　％　Ｃａ（ＮＯ３）２・４Ｈ２０゛０．０５チｘ２Ｈｐｏ＝ ０．０３％ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０ ０，０２％酵母抽出吻（Ｄｉｒｃｏ　”　ａｅｒ　Ｄｉｆｃｏ　Ｌａｂｓ。

Ｄ−１ｔｒｏｉＶ勺８Ａ） ０．０００７％ＦｅＳＯ４”７Ｈ２０（Ｆｅｌ）０．０００６　％　Ｚｎ８０４ ”７Ｈ２Ｇを含春苛性ノーダで−５，２に調査さルた賦麺栄養浴液５０ｄｆ−Ｗ ｆる５ｏｏｎのエルレンマイヤ−７ラスコにクラビセプスーパスパリの予備層！ ｇ！Ｉ５！ｌｊ’に城棟ム２５０時間２４℃で２４　Ｏｒ、ｐ、ｍ、で振盪する 。

次いで、この培養物に、少くと−Ｐｋ４ｉｏに這する量の苛性ソーダを加えメチ ルイソプテルクトンで抽出し、抽出辰を真？！千で濃縮し、硅酸カンムによるク ロマドグ２フイーで精製する。

こうして、リセルグ酸アミドとイソリセルグ威アミドの混合ｖ３５ダが得らｎる （収ｊｉ７００ダ／！培養物ン Ｃ〕　例１４ｂＯ条件のもとで、クラビセブス・パスパリを培養するが、この培 賞吻に７２時間説、２りＦバチルス・カゼイ・５ｕｌ：ｔａｐ、ラムノサス（ｒ ｎａＪ！ＬｎＯ５ｕｊｌン（人ＴＣＣ７４６９）の側胞徳装品２５ダを水に無菌 的に懸濁し九液５ｄを添加した点で異なる。層餐智の後処理後に、リセルグ酸ア ミド及びイソリ１ルグ掖アミドの混合−４５ダが得られる（収量９００ダ／培養 ペニシリクム・ライストリツキイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｒａｉａｔｒｉｃｋ ｉｉ）　（人ＴＯＣ１０４９０）による１５ｇヒドロキシ＞−ｆＯＪｌ＠ ａ）　　３チグルコース・Ｈ２Ｏ １チコー７ステイーノリカー ０．２　％　ＮａＮＯ３ ０，０５−Ｍｇ５Ｑ、・７Ｈ’ｚＯ ［１，０５％辿 ０．００２　％　Ｆｅｆ３Ｑ４・６Ｈ２０ＣＦｔｈ＋す０．１％■、ＰＯ。

０．２　　％　　Ｋ、ＨＰＯ。

を有し−６，０にｇ！ｌｉ！−石ｎた無菌的栄養培地５００ｄを有スる２）のエ ルレンマイヤ−７ツスコにペニシリウム・レイストリツキイ（人ＴＣＣ１０４５ ）０）の傾斜寒天培養からの塗床を簀楕し、４８時間６０℃で１８Ｏｒ、ｐ、ｎ ｔ、で培養する。

ｂ）　　１チコ一ンステープリカー ３１％グルコース−Ｂ２０ ０．１−ＫＨ２Ｐｏ。

０．２％に２ＨＰＯ４ ０，０５うＭｇＳＯ４・７Ｈ２０ を含”ｉｉｉ’　Ｌ４６．ＯＫｍｄ整された無菌栄養培地１００−を有する５０ ０−のエルレンマイヤ−７クスコにａ）。

記載に従りて装量された１０−のペニシリウムの予備培養物を接種する。その後 培養物に３００ダの１３−エチル−４−ボネン−３，１フーシオンを添加し、１ ２０時閏６Ｏ℃で１８　Ｏｒ、ｐ、Ｉｌで発酵させる。

次いで、培養ｗｔ−メチルイソブチルケトンで抽出し抽出′ｇを漫鑵し、得られ る粗生成１を硅酸力之ムクロマトグ′ｙフィーによって稽襄する。こうして、１ ３−エチル−１５α−ヒドロキシ−４−？ネンー３，１７−ジオン１８０ダが得 らｎる。

ｃ）　　ｂ）の条件のもとで、１６−エチル−４−ゴネンー６，１フーゾオン６ ００ダをペニシリウム・ライストリツキイの培養費と共に発酵させるが、この培 養前に、４′Ｘ添」の直前にコリネバクテリウム・シ７テリアエ（Ｓｔａｍｍ　 Ｍａｓｓ　、　８）　（Ｚ）　ｉＡ　ＭＡ　壁５０　’Ｑの水中含有ａｍｄ濁液 ｔＩＡｍする。培養物の後処理後、１６−エチル−１５α−ヒドロキシー４−ゴ ネンー６，１７−ジオン２１０ダが得られる。

国際調査報告

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. １．非微生物在の生物の酵素活性及びその合成能を高あるたあに、不活性化エリ シトール含有バクテリア、そのフラグメント又はエリシトール含有バクテリアの 分泌物を使用すること条件として、生物を不活性化エリシトール含有微生物、そ れらのフラグメント又はエリシトール含有微生物の分泌物と接触させることを特 徴とする、生物の酵素活性及びその合成能を高ある方法。
2. ２．微生物を、不活性化エリシトール含有微生物、それのフラグメント又はエリ シトール含有微生物の分泌物と接触させることを特徴とする、請求項１に記載の 微生物の酵素活性及びその合成能を高ある方法。
3. ３．色素形成、アルカロイド形成又は抗生物質形成能を有するバクテリア、菌及 び酵母を不活性化エリシトール含有バクテリア、菌又は酵母、これらのフラグメ ント又はこれらの微生物の分泌物と接触させることを特徴とする請求項２に記載 の微生物の合成能を高ある方法。
4. ４．ステロイド変換能を有するバクテリア、菌又は酵母を不活性化エリシトール 含有バクテリア、菌又は酵母、これらのフラグメントヌはこれらの微生物の分泌 物と接触させることを特徴とする請求項２に記載の微生物の酵素活性を高ある方 法。
5. ５．色素合成、フルカロイド合成又はフイトアレクシン合成能を有する高等植物 の細胞培養物を不活性化エリシトール含有バクテリア、これのフラグメント又は これらバクテリアの分泌物と接触させることを特徴とする請求項１に記載の生物 による合成能を高める万法。
6. ６．生物を、水中で加熱減菌したエリシトール含有微生物又はそれらの濾過物と 接触させることを特徴とする、請求項１から５のいずれか１に記載の生物の酵素 活性合成能を高ある方法。