JPH02180995A - 脂質混合物から糖脂質を分離する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は複合ｊ脂質（ＣＬＳ）を含有する脂質混合物か
ら糖脂質を分離する方法に関する。

従来の技術および発明が解決しようとする課題複合脂質
は生物学的Ｉ１ｍに広く分布する化学構造体であり、こ
れらは中間代謝および脳や肝臓のような、ある器官の細
胞に基本的位置を占める。

これらは２つの主な種類に分けられる、すなわち：無機
リン酸塩を加水分解により生ずる燐脂質（ＰＬＳ）、例
えばホスファデジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエ
タノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルイノシトール
（Ｐｌ）であり、そして基本構造がスフィンゴシンであ
る糖脂質（ＧＬＳ）、例えばセレブロシド、ヘマトシト
、ガングリオシド、七ノーおよびジガラクトシルジグリ
セリドのようなグリセロール、又はステリルグルコシド
およびそのエステルなどのステロールで、少なくとも１
個の糖残基を含有する。ＣＬＳ中の（ＧＬＳ）ＩはＰＬ
Ｓよりも一般に３〜１０倍小さい。

脳に高濃度で存在する動物Ｇ　ｔ−８は膜の重要な機能
性成分を構成し、膜内輸送、ｍ胞認識、シナプス伝達、
細胞成長、ホルモン固定、酵素、細菌、ｓｇＡ毒素、悪
性腫瘍変換および他の多くの生物学的機能に含まれる。

こうしてＧＬＳは、例えば薬剤、薬理学、老人医学およ
び化粧品に使用される。

ＧＬＳは生物学的組織から極性溶媒の各ｆ１混合液、例
えばクロロホルム−メタノール、ヘキサン−インプロパ
ツール、テトラヒドロフラン−水により完全に又は部分
抽出できることが知られている。これらの方法では、こ
れらが総脂質（ＴＬＳ）と呼ばれるように中性脂質（Ｎ
ＬＳ＞およびＰ［Ｓの混合物で得られるに過ぎない。別
法では、生物学的１１織は最初アセトンにより抽出して
大部分のＮＬＳ、例えばトリグリセリド、ステロールお
よび遊離脂肪酸を除去し、その後残ｆＢ膜脂質は上記極
性有機溶媒により抽出する。丁ＬＳは各種方法で継続分
間できる。もっとも広く使用される方法はＦｏｌｃｈの
方法であり、この方法はクロロホルム、メタノールＪ３
よび水の二相溶媒系で、上部相は大部分のガングリオシ
ドを含有し、ＧＬＳは４〜５個以上の糖残基および微Ｍ
の酸性ＰＬ、５（ＡＰＬＳ＞を含有し、そして下部層は
大部分のＰしＳ１セラミド、ステリルグルコシド、セラ
ミドモノ−、ジー、およびトリへキソシドおよびずべて
の非極性Ｗ１質、例えばトリグリセリドを含ＩＴ＋’る
、これら２相に集めることを含む。しかし、脂質の分離
は、例えばヘマトシトが両相に見出されるようにすっき
りしない。

ＮＬＳとＣＬＳの１つの既知大規模分離方法はへキサン
とエタノール混液の使用に基づく。他の方法は液体クロ
マトグラフィを使用するが不適当な能力、例えば３０ｊ
１９Ｗｔ質／ｇシリカゲルの不利を伴なう。特許出願Ｄ
Ｅ２９１５６１４号明Ｉ８書に記載のきわめて魅力的方
法はシリカゲル上でＴＬＳをＮＬＳおよびＰＬＳに分離
することを含む。

しかし、他のＣＬＳ、例えばガングリオシド又はＧＬＳ
について全く記載がない。この方法ではＮＬＳは炭化水
素に可溶性であるＴＬＳの部分として、これらの溶媒中
でミセル形成するＰＬＳに対し規定される。ミセルを形
成する脂質のみがシリカゲルから自由に溶離し、一方Ｎ
ＬＳは吸着して残留する。

しかし、この方法は不利を伴なう。実際に、多（のＧＬ
Ｓは炭化水素の存在で自然にミセルを形成しない。その
結果、炭化水素中で不溶性固体粒子を形成し、ＮＬＳを
吸着するシリカゲルカラムを妨害する。従って、ＰＬＳ
のみがカラムから定量的に溶離する。

ＣＬＳ混合物からＧＬＳの完全回収は可能であるが、異
常に長時間を要する。標準方法では、脂質は最初五酸化
リン上で２４〜４８時間完全に乾燥し次にピリジン中で
無水酢酸によりアセデル化する。アセチル化ＧＬＳはＦ
ｌｏｒｉｓｉｌカラムで液体クロマトグラフィにより他
の脂質から分離し、ＧＬＳは脱アセチル化し、中和し、
塩を除去し、最後に生成物を凍結乾燥する。この方法は
すべてのＰＬＳおよび塩基に敏感な結合を含有するある
ＧＬＳ、例えばＮ−０−ジアセチルノイラミン酸を有す
るガングリオシドに対し破壊的である。ざらに、操作は
数日又はまるまる１８を要する。

上記論議の難点を液体クロマトグラフィの簡単な方法に
より解決することが提案された。この方法は架橋結合ポ
リスチレンのマトリックスに共有結合することにより固
定したフェニル硼Ｍ　（ＰＢＡ）基を含有する再使用可
能樹脂の製造を含む。

樹脂はＰＢＡ基とＧＬＳ糖部分のシス−ジオール基間に
複合体を形成することによりすべてのＧＬＳを選択的に
保留し、こうしてＰＬＳおよびＮＬＳの完全な溶離を供
する。次にＧＬＳは水性有機溶媒により分解する。しか
し、樹脂のチャージ能力は比較的低く、代表的には０．
７〜７ＪＩｉＦＴＬ／グ又は０．１８〜１．８η／−樹
脂（見かけ容量）テアル。１　＃　−ｒ　Ｌ　［必要な
溶離ＷＪｔＩｓ容ｆｌＨｉ２．５〜２５ｔＩｄ！のオー
ダのものである。１００＃９樹脂を含有する商業的に入
手しつる樹脂カートリッジはＰＬＳとＧＬＳの分離には
無効である。

ＧＬＳはＧＬＳを含有するｗＢ質混合物からＰ　ｌ−８
に対して破壊的でない簡単なりロフトグラフ法により実
質的に定ｍ的に分離できる。

課　を解決するための手段 本発明方法は混合物を適当な溶媒に溶解し、硼酸ゲル上
に通してＩＩＪ脂質を選択的に吸着させ、その後糖脂質
を溶離溶媒によりゲルからｌ１１２着することを特徴と
する。

本発明によれば、使用詣Ｍ混合物は動物又は植物起源の
ものでよい。適当な動物ｆｆｉ質は例えば、腸、肺、胸
腺、骨髄、および好ましくは牛の脳のような屠殺場から
入手しうる動物組織の溶媒油田により得られるものであ
る。別の興味ある出発材料は人又は動物の胎盤である。

これらの組織は天然、凍結又は脱水状態のものでよい。

大間に入手できる別の興味ある出発材料はカビインおよ
びラクトースを含まないスィートバターミルクである。

植物脂質は、例えば天然大豆レシチンである。

出発材料から脂質を抽出するために、出発材料は例えば
＾速ミルで崩壊させ、親油性ではあるが、水混和性ＷＪ
ｔＡ又はＷＪ媒混合液中で均質化する。例えば、テトラ
ヒドロフラン、４：１〜１０：１容量比のテトラヒドロ
フランと水の混液、３：２容量比のジイソプロピルエー
テルとイソプロパツールの混液、ｊＩＡＭ化溶媒、例え
ばクロロホルム、ジクロロメタン、２：１容量比のクロ
ロホルムとメタノールの混液を使用することができる。

勿論同様の親油性Ｗｊ媒およびその混液を使用すること
ができる。操作は１００℃以下の温度、例えば５０〜６
０℃の温度に加熱して行なうことが好ましい。

次に分散体は濾過し、例えば乾燥するまで真空蒸留する
ことにより溶媒を除去した後、粗ＴＬＳを集める。粗Ｔ
ＬＳは任意には溶媒中に再溶解し、次にデカントし、沈
降固体粒子を分離することにより精製することができる
。

別法では、脂質は非極性炭化水素溶媒、例えばヘキサン
により抽出できる。これは凍結乾燥又は噴霧乾燥した動
物組織から成る出発材料の場合好ましい。この場合、砕
解ミルで、例えばヘキサンの存在で環境温度で、組織を
完全に均質化し、その後、ＴＬＳの抽出は例えば６０〜
６２℃で、攪拌しながら、攬袢機を装行した密１羽反応
器で継続する。次にサスペンションはｍｍ温度で１〜２
時間放置する。沈澱が生成し、上澄相から分離後、非極
性炭化水素、例えばヘキサンにより上記のように再処理
する。合わ「た上澄相は遠心分離機で遠心分離し、又は
別法では、２４〜４８時間環境温度に放置する。形成沈
澱を分離し、透明溶液は、例えば真空ＭＲにより、初め
の重量の約１２〜１５％に濃縮する。ＴＬＳＩ縮液は等
容層の蒸留水で稀釈処理し、その後、残留ヘキサンを、
例えば窒素下で６８〜７０℃で蒸発して除去し、水性エ
マルジョンは、例えば凍結乾燥により乾燥する。

別法では、ヘキサンに溶解したＴし濃縮液は下記クロマ
トグラフィによるＣＬＳの製造に中間生成物として直接
使用できる。この場合、ＣＬＳ含有溶離物は溶媒除去後
期めの容積の５〜１０％に濃縮する。その後等容量の蒸
留水により稀釈し、エマルシコンは、例えば凍結乾燥に
より乾燥する。

脂質混合物はすべての脂質、すなわちＮＬＳおよびＣＬ
Ｓを含むことができ、又は好ましくはＣＬＳ単独で形成
することができる。この場合、ＣＬＳはシリカゲルカラ
ムで非掻性、水子混性炭化水素溶媒、例えばＣＬＳの溶
離溶媒として供する石油エーテル中で予め分離する。Ｎ
ＬＳはカラムに残留する。脂質の溶解中、超音波処理は
これらを完全に溶解するために使用することは好ましい
。

集めたＣＬＳは、特にＰｕｓ、プラスマロゲン、セラミ
ドへキソシド、グリセログリコリピドおよびガングリオ
シドを含む。ＮＬＳは極性、親油性溶媒混液、例えばク
ロロホルムおよびメタノール混液を使用してカラムから
脱着する。集めたＮＬＳは特にモノ−、ジーおよびトリ
グリセリド、脂肪酸、トコフェロール、油溶性ビタミン
、エストロゲンおよびフィトエストロゲンを含む。ＮＬ
Ｓは脂肪酸、およびＧＬＳから分離したこれらの脂肪酸
、特にアラキドン酸、ジホモガンマリノレン酸、エイコ
サペンタエン酸、および入の胎盤に存在するドコサヘキ
サエン酸を含むトリグリセリドリドを集めることを望む
場合、有利であるＧＬＳを全く含有しないことがわかる
。分離後、溶媒は、例えば真空蒸発により乾燥除去する
。

特にバターミルクの脂質処理に適用できるＣＬＳのみを
含有する脂質混合物を製造する一変法では、カビインお
よびラクトースを含まないスィート（非酸性）バターミ
ルクは極性溶媒、例えばアセトンにより処理して、溶解
するＮＬＳを、例えば透析濾過（洗滌を含む限外濾過）
により分離し、その後アセトンを除去した残漬は微極性
溶媒、例えばメタノールにより処理する。次に溶液は例
えばメタノールを蒸発して濃縮する。得た濃縮物は上記
のようにシリカゲルカラムで処理する。

パターミルク脂質を処１！ｌ！する好ましい一変法は、
ラクトースおよびカゼインを含まないバターミルクから
例えばヘキサンおよびメタノール混液によりＴＬＳを抽
出し、例えばミクロ濾過又は遠心分離により残漬の分離
後溶媒混液を例えば蒸発により除去する。次にＴＬｉｌ
ｌｌ液はバターミルクを直接処理する上記変法における
より著しく少ωの極性溶媒、例えばアセトンに°より処
理する。不溶性画分を集め、アセトンをぞこから除去す
る。この予備分離変法は上記変法以上のいくつかの利点
を有する＝７セトン所要司は約１０〜１２倍少ない；ア
セトンに不溶の物質は約７５〜８０重量％のＣ３Ｌおよ
び高融点トリグリセリドから成る約２０〜２５重量％の
ＮＬＳを含有する。これはＣＬＳの次の分離を達成する
ために上記場合におけるより１５倍までの少ないシリカ
ゲルが必要であるにすぎない。＠侵に使用バターミルク
の約４０〜４５重量％を表わすアセトン可溶性物質は、
トリグリセリドの他に遊離脂肪酸、ステロールおよび一
層容易に除去できる大多数の発臭化合物を含む。

この予備分離後、得た脂ＩＲ混合物は上記のようにシリ
カゲル上でクロマトグラフィにより処理する。

１Ｍ酸ゲルを満たしたカラムはＧＬＳからＰ　Ｉ−、Ｓ
を分離するために使用する。吸着剤は水および有機溶媒
に不溶の架橋結合ポリマーである。これはジヒドロキシ
ボリルアニリノメタクリル酸とし、４−ブタンジオール
ジメタクリレートの共重合化および架橋結合により得る
。任意の１理論に限定することを好まないが、ＰＬＳ、
１５よびＧＬＳの実質的足間分離はゲルのジヒドロキシ
ボリル基とＧＬＳのシス−ジオールが複合化し、水の存
在で脱複合化する、糖脂質と複合体を形成する吸着剤の
能力によることは明らかである。硼酸ゲルは極性媒体の
無水親油性溶媒に懸濁させる。例えば、５：１〜２：１
容聞比のクロロホルムおよびメタノールＵ液、又は４：
１〜２：１容量比のシイツブ［１ビルエーテルおよびイ
ソプロパツール混液を使用することができる。

上にのようにＰＬＳはカラムから溶離し、−万ＧＬＳは
吸着する。ＰＬＳは同じ溶１１を溶媒、例えば２：１容
量比のクロロホルムおよびメタノール混液を使用して集
め、その後溶媒は乾燥するまで真空蒸発して除去する。

ＧＬＳは極性、水ａ相性有機溶媒および１〜２５重量％
の脱イオン水を含む溶媒混液を使用してカラムから脱着
する。例えば、１０：１〜４：１容量比のテトラヒドロ
フランと水の混液、テトラヒドロフラン、メタノールお
よび水の混液、クロロホルム、メタノールおよび水の混
液、又はジクロロメタン、メタノール又はエタノールお
よび水の混液を使用することができる。テトラヒドロフ
ランおよび水の混液は使用することが好ましい。混液の
割合は溶離処理中変化できる。例えば、有機溶媒の豊富
な、代表的には１０：１容量の混液により出発し、４：
１（容ａで）混液で終了することができる。テトラヒド
ロフランは、例えば次の凍結乾燥中水と同時に容易に除
去できる利点を有する。アルコール含有混液を使用する
場合、アルコール／水混液に溶解するＧＬＳのみをＩ！
１２ｆｆし、ざらにカラムはテトラヒドロフランおよび
水の混液により再生中洗滌しなければならない。

ある場合、ＧＬＳの純粋分離が必要である。このだめに
、ＧＬＳはクロロホルムおよびメタノールの溶媒混液に
、例えば５０℃に加熱し、二重壁撹拌機付きデカンテー
ションフラスコに溶解し、そこにＫＣ！水溶液を導入す
る。最初攪拌は急速で、次にｄくづる。２相すなわちガ
ングリオシドを含有する水性相および他のＧＬＳを含有
する有ｎ層を形成する。例えば重力により排液して上部
相を分離後、溶媒は、例えば真空蒸発によりそこから除
去する。

本発明方法の特別の一態様では、ＰＬＳは一方では非酸
性ＰＬＳ　（ＮＰＬＳ）および酸性ＰＬＳ（ＡＰＬＳ＞
に分離し、またＧＬＳはイオン交換クロマトグラフィに
より非酸性ＧＬＳ　（ＮＧＬＳ）および酸性ＧＬＳ　（
ＡＧＬＳ）に分離できる。これらの分離の利点は高速液
体クロマトグラフィ（１−ＩＰＬｃ）　、高速薄層りＬ
１マドグラフィ（）４ＰＴＬＣ）および核磁気共鳴分光
分析（ＮＭＲ＞のような標準分析方法ではＣＬＳの各種
画分の検出およびＴａができないことである。何故なら
、生物学的抽出物に含まれる１后質の種類はこれらの方
法が有効であるためには余りに多すぎるからである。存
在するすべての種類の脂質のＨＰＬＣによる溶離は各秤
移動相を使用せずに、又はある脂質の誘導体を合成せず
に達成することはできない。

架橋結合アガロースイオン交！！！樹脂、特にアセテー
ト形の急速−処理ジエチルアミノエチルセフ７０−スゲ
ル上での予備分離は１時間につき１０Ｆｉ容積の処理土
で各種酸性および非酸性画分にＧＬＳおよびＰＬＳを定
量的に分離できる。この分離により、各種区分は蛍光検
索と組み合せたＨ　Ｐ　ＴＬＣにより同定および定量で
きる。

本発明方法の別の特別の態様では、大豆の天然レシチン
は、例えばＮＬＳを予備分離せずに、硼酸ゲル上を通す
ことによりＧＬＳおよび遊離糖を実質的に完全に除去す
ることができる。ＧＬＳ含右含分画分のＩ脱イオン水に
対し透析してＴｉ離糖を除去できる。こうしてフィトグ
リコリピドを得る。この態様の変法では、ＮＬＳおよび
ＣＬＳはシリカゲル上で予備分離し、そのＩＩＧＬｓお
よびＰＬＳは硼酸ゲル上でＣＬＳから分離する。得たＰ
ＬＳは糖脂質およびＴｉ離糖を含まない。従って、これ
らは、例えば非経口エマルジョン中に、ＰＬＳの代表的
リスクはもはや全く存在しない。この点に関してこれら
の組成は卵レシチンのものと比較できる。

本発明は分離により得る画分の使用にも関する。

第１の態様では、動物組織のＰＬＳ、ＧＬＳおよびガン
グリオシドおよびパターミルクのＰＬＳは化粧組成物の
製造に使用できる。

第２の態様では、ＰＬＳ、（３ＬＳおよびガングリオシ
ドを抽出する各組織の組成が特異的であるこれらの両分
は、特に幼児栄養のための栄養組成物の処方に使用する
。

第３の態様では、ガングリオシドを含有する両分は化粧
品用に、又は神経系の治療に対する薬剤の製造に適する
リボゾームの製造に使用できる。

第４の態様では、フィトグリコリピドを含まない大豆レ
シチンは非経口エマルジョンの製造に使用できる。

最後の態様では、入の胎盤のＮＬＳはＧＬＳを含まず、
特にアラキドン酸、ジホモガンマリノレン酸、エイコサ
ペンタエン酸およびドコサヘキサエン酸を含有する脂肪
酸トリグリセリドを青るために使用できる。これらのト
リグリセリドは本発明により得た他の画分、特にＰＬＳ
、ＧＬＳおよびガングリオシドと一緒に特に幼児栄養の
ための栄養組成物の製造に使用できる。

本発明は数例により例示する。例中部および％は特記し
ない限り重担による。

これらの例で、試料からＨＰＴＬＣによるＮＬＳおよび
ＣＬＳの分離効率をシリカゲルで被覆した１　０Ｘ　１
０ｃｍのガラスプレート上で試験した。

画分の各種成分は蛍光により十分に規定された標準化合
物と比較して検索した。

ＣＬＳからＧＬＳの定量的分離はいくつかの方法：ＨＰ
ＴＬＣ，比色法および気相クロ７トグラフイ（ＧＬＣ）
により測定した。特に、ＨＰＴＬＣによる糖脂質の分離
は標準純粋ＧＬＳと比較することにより糖脂質の糖基を
特異的に着色するオルシノールにより検知して測定した
。

ＰＬ画分を分析するために、ＰＬＳはイオン交換り０マ
ドグラフイによりＮＰＬＳおよびＡＰＬＳに予備分離し
、次いでｌ−ｆ　Ｐ丁ＬＧにより各種成分を検索し各画
分を標準純粋ＰＬＳと比較した。

同時に、ＧＬ画分の内容物は分取イオン交換クロマトグ
ラフィにより１次いで各種非酸性成分（ＮＧＬＳ）およ
び酸性成分（ＡＧＬＳ）をＩ−ＩＰＴＬＣにより分析し
標準試料と比較して証明した。

ｐ４１ １．１　　　の　のＴＬＳの 噴霧乾燥により乾燥した粉末形の５　ＫＢの牛の脳を５
０１のテトラヒドロフランおよび水の溶媒混液（４：１
容量比）中で２０℃で１０．００Ｏｒ、　ｐ、　１．で
回転する０−タリミキサーで均質化する。

３〜５分後、脳脂質の抽出は１６０〜２５０ｒ、　ｐ、
　ａ、で攪拌しながら１００Ｊの密閉反応器で５０〜６
０℃で２０分継続する。得たサスペンションは４０〜５
０℃で１工程紙フィルターを備えた二重ジャケット付き
濾過タンクに通す。濾過タンクに保留した固体粒子は４
：１容最比の４０〜５０℃の温度に保持したテトラヒド
ロフランおよび水混液３５１により除去する。

脳粗ｍ賀抽出物を含有する合せた濾液は真空蒸発機で６
５〜７５℃で恒重量に濃縮し、その後残留水は５１のイ
ソプロパツールを連続添加し、次いで共沸蒸発すること
により脂質濃縮物から除去する。

１．２　　粗１質の ２．６８に３を表わす上記粗抽出物は１０１のテトラヒ
ドロフランに再溶解し、カプセルにより密閉した瓶中で
１５００〜１７００ｇで１０分遠心分離した。別法では
、溶解した粗抽出物は２４時間環境温度に放置し、その
後沈澱固体を分離する。

澄明溶液は回転真空蒸発機で６５〜７０℃で乾燥するま
で濃縮する。２．３２に９の脳ＴＬＳおよび０．３６＊
＃の非脂質不純物を得る。

１．３　　牛の脳のＣＬＳの単 ６０〜８０℃の１５１の石油ｌ−チルを入れた内径２１
．３ｃｍ、長さ１００ｃｍのガラスカラムに２０１の石
油エーテルに分散させた４に！Ｉの０．２１〜０．０６
２ｍｍ　（７０〜２３０メツシユ）のシリカゲルを満た
ず。シリカゲルはＹめ少な（とも１６時間１６０〜１６
５℃で処理して活性化する。ガラスカラムはシリカゲル
粒子を保留するために１００〜１６０ミクロンの多孔性
を有するガラス濾過器を含む。上記脳ＴＬＳ、すなわら
２．３２Ｋｇを１０１の石油エーテルに攪拌溶解し、次
にクララデイ溶液が透明になるまで２〜５分超音波ＩＩ
Ｕ埋する（２５０〜５００ｗ／Ｋｙｍｔ！！＞、超音波
処理試料の温度は４５〜５０℃に保持する。

次にシリカゲルカラムに通し、ＣＬＳは１５〜３０１の
石油エーテルにより完全に溶離する（溶離液１）。ＮＬ
Ｓ（溶離液２）は１：１容昂比のクロロホルムとメタノ
ール混液１５７を使用してシリカゲルから１８２＠する
。

１．４　　シリカ　ル吸着剤の再生 １５１のメタノール、次に１５〜２０１の脱イオン水を
吸着剤に通す。吸着剤は６時間１０５℃で、次に１８時
闇１６０〜１６５℃でオーブン乾燥する。最後に、再活
性化吸着剤は１５１の石油エーテルに分散し、大気水分
との接触を回避する。

１．５　　牛の脳の０１８の凍結乾燥 上記溶離液１は５０〜１００Ｊ回転真空乾燥機で５０〜
７５℃で完全乾燥するまで濃縮する。次にＣＬＳは環境
湯度で１２〜２４時間窒素流にさらし残留微Ｉｆ溶媒を
除去する。これらの溶媒を含まないリビドは４０〜４５
℃で蒸留水（５Ｋ９水対１ＫｇＣＬＳ）中で均質化し、
その後書たエマルジョンはステンレス鋼プレート上に１
〜１．５ｃＩＩの厚さの層に伸ばす。エマルジョンは一
４０℃で凍結し、凍結乾燥する。こうして１．４５Ｋｙ
のＣＩ−８を得る。

１．６　　ＮＬＳの回収 溶離液２は１．５節におけるように乾燥するまで濃縮す
る。１．５節におけるように溶媒の除去後、０．４８に
！ｉのＮＬＳを得る。

１．７　　　の脳のＰＬＳおよびＧＬＳの分離上記１．
５節に記載のように製造した牛の脳のＣＬＳは４：１容
量比のクロロホルムおよびメタノール混液に１９９ビド
対５ｇ溶媒混液の割合で溶解する。リビドの溶解は４０
〜５０℃で超音波処理により加速する。その後溶液をブ
フナー濾過器に通してすべての粒子を除去する。

長さ３０ｃＩＩ、内径５１の使用ガラス吸着カラムは１
００〜１６０ミクロンの多孔性を有するガラス濾過器お
よび層の＾さを１５〜３０ｃＩＩに調節できる処理用ア
ダプターの二層支持体を含む。カラムは低圧（１〜２パ
ール）ポンプに連結し、これはＯ〜６０ｍ／分の割合で
３万バルブを通して３つの異る溶離溶液を送達できる。

１５０ｇの硼酸ゲルは１．０ＯＯｄのテトラヒドロフラ
ンにサスペンドし、サスペンションは連続バッチのカラ
ムに注入し、過剰の溶媒は重力により流れるままにする
。処理用アダプターは２０〜２２αの層の高さに調整す
る。使用前、カラムは３層容積（１，２００〜１，３０
０ｍ）の脱イオン水により３０〜５０−７分の割合で、
次に１ｗ４容積の０．５Ｎ塩酸により、次に３層容積又
はそれ以上の脱イオン水により中性ｐＨ値まで、３層容
積のメタノール、最後に容量化２：１のクロロホルムお
よびメタノール混液の３１！ｆ容積により洗滌する。

カラムは２０ｄ／分の割合で４＝１容量比のクロロホル
ムおよびメタノール混液２０−により予備洗滌する。次
にカラムに牛の脳のＣＬＳ試料、すなわち、４：１容聞
比のクロロホルムとメタノール混液１５０ｇに対し３０
ｇの脂質を同じ割合で、次に４：１容量比のクロロホル
ムおよびメタノール混液２０ｍをチャージする。ＰＬＳ
およびプラスマロゲンは５０ｍ／分の割合で２：１容量
比のクロロホルムおよびメタノール混液３層容積（１，
２００〜１．３００−）を使用して５〇−７分の割合で
カラムから溶離する。例えばセラミドへキソシド、ガン
グリオシドおよびスルファチドを含むすべてのＧＬＳ＠
溶離するために、４：１容量比のテトラヒドロフランお
よび水混液の３層容積をＰＬＳに対し同じ割合で使用す
る。

１．８　　硼酸ゲルカラムのライン　　生硼酸ゲルカラ
ムは２：１容量比のクロロホルムおよびメタノール混液
３層容積を使用し６０−７分の割合で各溶離サイクル後
ゲルを再生脱水する。

１．９　　牛（７）脳＋７）ＰＬＳお、Ｊ：びＧＬＳの
ＰＬＳを含有する画分は６５〜７０’Ｃで乾燥するまで
輿空ｍ縮し、次に上記のように凍結乾燥する（１．５節
）。無臭の白色、吸湿性粉末９５０〜９７０９をこうし
て得る。

ＧＬＳを含有する画分はテトラヒドロフランを完全に除
去するまで７０〜７５℃で真空濃縮し、残漬を脱イオン
水に採り全体を２５００ａｉ！にする。

均質化後、グリコリピドを含有するエマルシヨンは上記
のように凍結乾燥する。４８０〜４９０ｇの無臭白色粉
末を得る。

例　　２ ２．１　　ラクトースを含まないバターミルクの脂質の
抽出 新鮮バターミルクは透析ｍ過によりラクトースを除き、
次に噴霧乾燥により乾燥する。得たバターミルク粉末は
次の組成をｈする： ％ 水分　　　　　　　　　　　　　　　　２．５（オーブ
ンで１０２℃、２時間後測定）脂肪　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　５２．９（Ｈｏｊｏｎｎｉ
ｅｒ法） ノご　ん　白　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２
９．７（ＮＸ　　　６．３８　　　） ラクトース　　　　　　　　　　　　　８．１（酵素的
に測定） 灰分　　　　　　　　　　　　　　　　６．８８０　Ｋ
Ｂのバターミルクの粉末はホモジナイザーを使用して２
０〜２２℃で４５０Ｊのアセトン中に分散させる。脂肪
は１２０〜２５　Ｏｒ、ｐ、ｉ、で攪拌又は回転する刃
を装備した密１！１反応器で抽出する。抽出温度は約２
０分２０〜２２°Ｃに保持し、その後分散体は１１稈紙
フィルターを備えたタンクで濾過する。保留固体粒子は
２０〜２２℃で別の３００７アセトンにより洗滌する。

次に合ねゼだ濾液は真空蒸発乾燥し、２６／（ｇの中性
バターミルク脂質を集める。次に３５〜４０’Ｃに２時
間保持した濾過タンク内の脂肪を含まない保留バターミ
ルク残漬に窒素を通して溶媒を除去する。

５３〜５５　Ｋｇの脂肪および溶媒を含まないバターミ
ルク固形は１０．０ＯＯｒ、ｌ）、１．で回転するホモ
ジナイザーで５６０１のメタノール中に分散させる。そ
の俊二重壁反応器で６０〜６２℃で２０〜３０分脂質の
抽出を継続する。次に分散体は密閉二重壁タンクに配列
した紙フィルターに６０〜６２℃で１．５〜２．５バー
ル圧下に通し、その後フィルター上に保留した固体粒子
を８０１熱メタノールにより除去する。メタノール濾液
は４０〜４５１容岨に濃縮し、残留メタノールは６０〜
９０℃でメタノールと共沸混合物を形成する石油エーテ
ル１００〜１５０１と共沸蒸苗して蒸発する。

２．２　　バターミルクのＣＬＳの単離２、　ＩＩ）で
得た上記濃縮液古層を６油エーテルにより１００１に調
整し、その後溶液は環境温度で４８時間放置する。形成
固体沈澱は線通により除去し、その模清澄化石油エーテ
ル相は上記例１．３節に２献のように２６７ｃｙ（約６
５１の１層容積に相当）のシリカゲルを含有する内径３
５ｃｇ１、長さ１００ｃｓ＋のカラムに通す。すべての
ＣＬＳは６５〜７０１石油エーテル（溶離液１）により
溶離するが、一方吸者すピドは１：１容最比のクロロホ
ルムおよびメタノール混液８０１により脱着する（溶離
液２）、溶離液１は乾燥するま′Ｃ真空濃縮し、脱イオ
ン水に分散し、次に例１．５節に記載のように凍結乾燥
する。こうして１０．２に９のＣＬＳを得る。乾燥する
まで濃縮した溶離液２がら５．１Ｋｇの残留ＮＬＳを（
ｑる。

２．３　　バターミルクのＰＬＳおよびＧ　Ｌ　Ｓの上
記２．２節に記載のように得たバターミルクのＣＬＳ試
料６００ｇを硼酸ゲルカラムに通し、ＰＬＳは例１の７
節記載と同じ方法でＧＬＳがら分離する。例１，１．９
節記載のように乾燥するまで濃縮し、凍結乾燥後、バタ
ーミルクのＰＬＳ３６５ｇを白色状無臭粉末形で得る。

２．４　　バターミルクのＧＬＳの精製ＧＬＳを含１４
づ゛る画分はＶＡｌ、　　１．９節に記載のように真空
濃縮してテトラヒドロフランを完全に除去する。その後
、残渣を脱イオン水に採り、全体を８００−にする。次
にＧＬＳ水性溶液は３５００ダルトンの分子量カットオ
フ限界を有する透析膜を使用して脱イオン水に対し透析
する。ＧＬＳ溶液は凍結乾燥して１％より少ない遊離ラ
クトースを含有する精製ＧＬＳの白色粉末１６０ｇを得
る。乾燥後、透析物は７５９を表わす。

例　　３ ３．１　　牛骨部のＣＬＳの単離 １（［！ｌの新たに均質化した牛骨部を凍結乾燥し、得
た乾物１．６〜１．７Ｋｇは２：１容聞比のジクロロメ
タンおよびメタノールの溶媒混液５０１に２０〜２２℃
で分散する。牛骨部のＴＬＳは例１．１節におけるよう
に閉鎖反応器で抽出する。例１．２節におけるように濾
過および溶媒混液の除去後、０．６５ＫｇのＴＬＳを冑
、２．５１のヘキサンに再溶解し、形成溶液は例１記載
のように７５０ｇのシリカゲルを満たした内径１０ａ＋
＋、長さ４０１のガラスカラムに通す。

ＣＬＳは２１のヘキサンにより溶離し、一方ＮＬＳは２
：１容徹比のクロロホルムおよびメタノールの混液２１
をカラムに通すことによってんラムからｌ１１２＠する
。ＣＬＳは例１．５節に記載のように凍結乾燥して４３
０ｇの白色、吸湿性、無臭粉末を得る。

３．２　　　　　（７）ＣＬＳオよＴｊ　Ｐ　Ｌ　Ｓ　
（７）　　　オヨＵ四皇 牛骨部の上記４３０ｇのＣＬＳは例１．７節におけるよ
うに４二１容量比のクロロホルムおよびメタノールの溶
媒混液２．１５０ｇに溶解する。Ｃ１８は１，１節記載
のように１５０ｇの溶媒に対し３０ｇの脂質からＰＬＳ
およびＧ１８画分に分離し、ｆＩＡＭゲルカラムは１．
８ｗＪにおけるように２：１容量比のクロロホルムおよ
びメタノール混液３層容積を使用して各サイクル後再生
する。次に溶離および吸着画分は１．９節におけるよう
に濃縮、凍結乾燥し、無臭、白色粉末形の２７４９ＰＬ
Ｓおよび１５０ｇＧＬＳを得る。

例　　４ ４．１　　　の脳のＧＬＳの　　による例１．９節にお
けるように製造した牛の脳の６゜ＪのＧＬＳを、上部に
シャフト攪拌機を装置したｌＣ１容の二重壁デカンテー
ションフラスコで３゜２００ｍのクロロホルムおよび１
．６００−のメタノールから成る溶媒混液中に分散させ
る。攪拌機のシャフトは相互に離れた２枚の刃を−え、
下部の刃のみ溶媒に浸漬するようにする。ＧＬＳ溶液の
濃度は徐々に５０℃に上げ、その後１，２００ＩＩｌの
８８％ＫＣＪ水溶液を添加し、従って攪拌機の上部刃も
浸漬する。３００〜６００　ｒ、ｐ、ｍ、の初めの速度
から、攪拌機は５〜１０　ｒ、Ｉ）、１．に速度を落と
し、デカンテーションフラスコの加熱は１５分後にスイ
ッチを切るβ２相が形成し、それぞれが１つの刃により
攪拌を継続する。８〜１２時間後、ガングリオシドを含
有する上部水性相および他のＧＬＳを含有する上部相が
透明になると他のＧＬＳからガングリオシドの完全な分
離が認められる。上部相は重力によりデカンテーション
フラスコから流し、上部相は別に集める。上部相の他の
ＧＬＳはモノガラクトシルセラミドおよびスルファチド
により形成する。

４．２　　ＣＬＳ相の単離 すべてのスルファチドおよび中性ＧＬＳ　（モノガラク
トシルセラミド）を含有する上部相は６５〜７５℃で乾
燥するまで真空濃縮し、次いで例１．９節記載のように
凍結乾燥する。最終生成物は４９ｇの純粋ＧＬＳ　（モ
ノガラクトシルセラミドおよびスルファチド）から成る
完全な白色粉末で００ａｅから３００〜６００−の透明
溶液に減少させる。次に水性相は例２．４節におＧプる
ように透析し、その後濃縮上部相は例１．９１１に記載
のように凍結乾燥する。最終生成物は牛の脳の代表的ガ
ングリオシドを含有する無臭、完全な白色粉末５゜１ｇ
であり、ＳｖｅｎｎｅｒｈｏｌｍおよびＨｏｌｍｇｒｅ
ｎの略語を使用して次にリストする： ＮｅｕＡｃａ２４３　　Ｇａｌβ１−＋　３　Ｇａ１Ｎ
ＡＣβ１→４　［ＮｅｕＡｃａ　２−＋３　］　　Ｇａ
ｌβ１−＋ＧＩｃ　−＋　Ｃｅｒ（ＧＤｌ　ａ）、　　
ＮｅｕＡｃａ２−）　８　　ＮｅｕＡｃａ２−＋３　　
Ｇａｌβ１−＞　４　Ｇｌｃ　−＋Ｃｅｒ　　（ＧＤ３
　）　、　　ＮｅｕＡｃａ　２−＋３Ｇａｌβ１−３　
Ｇａｌ　ＮＡｃβ１−＋　４　［ＮｃｕＡｃα２−＋８
　　ＮｅｕＡｃα　２−）３　　］　　　Ｇａｌβ　１
　−＋　　４　　Ｇｌｃ−ｅ　　Ｃａｒ（ＧＴｌｂ）　
　ａｎｄ　　Ｇａｌβ１−＋　３　　Ｇａｌ　　ＮＡｃ
β１→４［ＮｅｕＡｃｃｚ２−＋３］　　Ｇａｌβ１−
＋　４　　Ｇｌｃ→Ｃｅｒ（Ｇ旧　）。

例　　５ バターミルクのＧＬＳの分離 例２，４節におけるように単離したバターミルクのＧＬ
Ｓは例４の抽出方法を使用して分離する。

ガングリオシドを含有する上部相は有機溶媒クロロホル
ムおよびメタノールが完全蒸発するまで６５〜７０℃で
真空濃縮し、約２，４００ｓｄの初めの容積は３００〜
６００ｄ１．：減少する。水性濃縮物は例２．４節に記
載のように４℃で２４時間脱イオン水に対し透析する。

最終生成物はＧＤ３　（、約８０％を表わす）、ＧＭｌ
　（例４．２節で説明）およびＮ１５ＬＩＡＣα２−＋
　３　Ｇａｌβ１−＞　４　Ｇｌｃ−＋Ｃｅｒ（５ｖｅ
ｎｎｅｒｈｏ１−および１ｌｏＩｌｏｒｌによれば０Ｍ
３）のようなバターミルクの代表的ガングリオシドから
本質的に成る４、８ｇのじみのない粉末である。

遊離ラクトース含量は１％未満である。

上部相は例４．２１１ｉ１におけるように完全乾燥まで
濃縮し、次いで凍結乾燥する。ジヘキソシルおよびトリ
へキソシルセラミドのような中性糖脂質のみを含有し１
．Ｍｆｆｉラクトースを含まない完全な白色粉末４６ｇ
を得る。

入の胎盤を３：２ｆＪｆｆｌ比のイソプロピルエーテル
およびイソプロパツールの溶ｔＲ混液により抽出し、次
にヘキ勺ン中で初めのクララデイ溶液が透明になるまで
５５〜６０℃で超音波処理する（４００ｗ／１００９胎
盤、３５０ｄへキサン中）。

ガラス濾過器を装置した内径５．５ｃＩｎを有する３０
　ｃｍのガラスカラムに予め１５時聞１６０〜１６５℃
で活性化し、次にヘキサンに分散した１００びの０．２
１〜０．０６２ｓＩ（７０〜２３０メツシユ）シリカゲ
ル粒子を満たす。

次に試料は５０℃でカラムに通し、その後ＣＬＳの溶離
は４００〜５００ｄのへキリンにより完了する（溶離液
１）。

ＮＬＳ（溶離液２〉は１：１容量比のクロロホルムおよ
びメタノールの溶媒混液５００−を使用してカラムから
脱着する。乾燥するまで溶離液１および２を真空濃縮し
て５５．３９のＣＬＳおよび４４．７ｇのＮＬＳを得る
。

ＣＬＳを含有する画分は、溶媒混液に基づく通例の抽出
および分離方法を使用する場合、一般にＣＬＳに随伴す
るエストロゲンを含まない利点を有する。

カラムを再生するために、２５０Ｉｄのメタノール、次
いで１，０００ｍの脱イオン水を吸着剤に通し、次に上
記のように熱活性化を行なう。

６．２　　入の胎盤のＰＬＳおよびＧＬＳの単離ガラス
濾過器を装置した内径５．５１を有する３０ａｘの長さ
のガラスカラムに１００ｇの１酸ゲルを満たす、２：１
容聞比のクロロホルムおよびメタノール溶媒混液にサス
ペンドしたゲルは約１ｃｌｌ厚の石英砂層で被覆する。

次に吸着剤は３層容積のメタノール、３１Ｆｉ容積の脱
イオン水、１層容積の０．５Ｎ　　ＨＣｉ次に１０層容
積の説イオン水により中性ｐＨ値まで連続洗滌し、ゲル
は３層容積のメタノールおよび次に２：１容量比のクロ
ロホルムおよびメタノールの溶媒混液３層容積を使用し
て親油形に転換する。

６．１記載のように得た入の胎盤の１５ｇのＣＬＳは２
：１容垣比のクロロホルムおよびメタノールの溶媒１ｆ
ｌｉｌ！６０ｍに溶解し、カラムに通す。溶離液を乾燥
するまで真空濃縮後、１４９（溶離液１）を得る。ＧＬ
Ｓ　（溶離液２）は４：１＊ｌ比のテトラヒドロフラン
および水の溶１１ｗ１６００ｄを使用してカラムから脱
着する。２：１の容量比のりａロホルムおよびメタノー
ル混液６００１ｄによりカラムの再生侵、次いで入の胎
盤の第２の１５ｇＣＬＳ試料を通し、カラムを再生し、
最後に、入の胎盤の第３の１５！？ＣＬＳ試料を通し、
ＰＬＳ画分（溶離液１）を合せ、溶媒を完全乾燥して除
去し、入の胎盤の４０〜４２ｇのＰＬＳを巣める。ＧＬ
Ｓを含有する合せた？Ｗｌｌｌｌ液２を乾燥するまで濃
縮後、残渣は水に再サスペンドして５０℃で超音波処理
し、ｌＪ結乾燥後入の胎盤の３ｇＧＬＳを集める。

例　　７ 大豆のフィト　リコリビ゛の単離 ２５ｇの商業的に入手できる天然大豆レシチンを４：１
容聞比のクロロホルムおよびメタノールの溶媒混液７５
ＩＩ！に溶解し、形成溶液は例６゜２１１に記載のよう
に’ａＭゲルカラムに通す。これにより２２．７ｇのＮ
ＬＳおよびＰＬＳ混合物、および２．３ｇのフィトグリ
コリピドおよび遊離糖を含有する画分を得る。例２．４
節におけるように透析および濃縮により遊離糖を含まな
い大豆ライ１ヘグリコリビド１ｇ（４％）を得る。

例　　８ 大豆のＰＬＳおよびフィトグリコリピドの分離ＮＬＳを
含有する４０ｇの両分およびＣＬＳを含有する６０ｇの
両分を例１．３ｍにおけるように商業的に入手できる天
然大豆レシチン１００ｇから分離する。

ＣＬＳを含有する両分は３：２容量比のジイソプロピル
エーテルおよびイソプロパツールの溶媒混液２００ｍに
４０℃で超音波処理して再溶解する。形成溶液はジイソ
プロピルエーテルおよびイソプロパツールの溶媒混液に
分散したＩａ酸ゲルカラム−内径５．５ｃ１１、長ざ３
０ｔ：ｍ−を通して１５ｇの連続バッチに通す。ＰＬＳ
を含有する画分は２！容積の３：２容量比のジイソプロ
ピルエーテルおよびイソプロパツールの溶９Ｘ、混液、
次いで１層容積のイソプロパツールを使用して溶ｉする
。

フィトグリコリピドを含有するＩｉ！ｉ分は例６．２節
に記載のように４：１容量比のテトラヒドロフランおよ
び水の溶媒混液の３層容積によりカラムから脱着する。

各ケイクル後、吸着剤は１層容積のイソプロパツール、
次に３：２容冷比のジイソプロピルエーテルおよびイソ
プロパツールの溶媒混液の２１１Ｊ容積を使用して再生
する。

一方ではＰＬＳの合せた両分および他方ではフィトグリ
コリピドを別々に集め、乾燥するまで真空濃縮して４０
ｇのＰＬＳおよび２Ｃ１のフィトグリコリピドを得る。

こうして製造したＰＬＳは大豆レシチンに天然に存在し
望ましくない二次作用を起こしうる化合物を含まないこ
とで特徴がある。

これらはグリコリピドおよびＴ１１１を糖の少ない卵黄
のものに比較でき、人が十分に許容できる非杼ロエマル
ジョン製造用に魅力あるものにする。

例　　９ ９．１　　モルモット腸のＰＬＳおよびＧＬＳの７．８
６９のモルモットの錫を１：２容量比のクロロホルムお
よびメタノール溶媒混液２×８０ｄで連続洗ｉ１１″９
る。均質化物は２５００ｇで遠心分離し、透明上澄液を
乾燥するまで真空濃縮する。

得た２９０Ｆ＋の粗すビドは１０Ｉ１１テトラヒドロフ
ランに溶解し、溶液は２５００ｇで遠心分離し、次に乾
燥するまで濃縮して２５０■のＴＬＳを得る。ＮＬＳは
丁ＬＳを２Ｘ２．５ａｅヘキサン中で超音波処理するこ
とにより溶解し、０．２１〜０．０６２履（７０〜２３
０メツシユ）の活性化シリカゲル粒子を満たした内径１
ｃＩｉ、長さ１０ｃｍのガラスカラムに溶液を通してス
テロール、ｉｓ脂肪酸およびトリグリセリドとして除去
する。１９０ａｙのＣＬＳをこうして２５−ヘキサンに
より定量的に溶離する。５７ηＮＬＳを２：１容吊比の
クロロホルムおよびメタノール溶媒混液の３層容積によ
りカラムから脱Ｍ　Ｔる。次にＣＬＳを例１．７節に記
載のように１４３ａｌｌＳＦのＰＬＳおよび４７ａｙＧ
ＬＳに分離する。脱イオン水に対する透析および凍結乾
燥により遊離糖を含まない１６．６■の純粋０１８画分
を得る。

８．５−の急速−処理用ジエヂルアミノエチルセフ７０
−スゲルをエタノールにサスペンドし、内径１．１５α
、長さ１０Ｃ１１のガラスカラムに形成サスペンション
を満たす。次にゲルは３０Ｉｄの脱イオン水により洗滌
し、２０−の２Ｍ酢酸ナトリウム水溶液によりアセテー
ト形に転換し、３０ｄの脱イオン水、１０ｍのメタノー
ル、および最後に２：１容石比のクロロホルムおよびメ
タノール溶媒混液１０ｄにより連続洗滌する。ゲルは７
〜１０厘厚の石英砂の層で被覆する。モルモット腸の１
４３ａｇＰＬＳ試料をカラムに通し、その模非酸性ＰＬ
Ｓを２：１容量比のクロロホルムおよヒメタ／−／Ｌ、
溶媒′６ｉ液２Ｘ２ｄ、次１．：１０ａｔ’、そして最
後に５ｍメタノールの連続部分により溶離する。微圧を
保持して溶離を促進する。乾燥するまで溶媒の真空除去
により１０７１ｆｌのＮＰＬＳが残留する。

カラムに保留される酸性ＰＬＳを！８２＠するために、
クロロホルム、メタノールおよび０．８Ｍ酢酸ナトリウ
ム水溶液（３０：６０：８）の溶媒混合物１５Ｉｌ！を
カラムに通す。酸性画分を乾燥するまで濃縮し、２：１
容量比のクロロホルムおよびメタノールの溶媒混液２Ｘ
ｌｄ中に超音波処理して再溶解し、その後場は６０：３
０：４．５容量比のクロロホルム、メタノールおよび水
の溶媒混液中のセファデックスＧ−２５ゲル４ａｅを満
たした内径１．１５ａｇ、長さ１０ｃｍのガラスカラム
で除去し、カラムは微圧下に維持する。溶媒を乾燥する
まで真空除去すると３５ａｙＡＰＬＳが残る。

各サイクル後、イオン交換カラムは１Ｍ容積のメタノー
ルおよび次に２：１の容積比のり［１０ホルムおよびメ
タノール溶媒混液の２層容積を使用して再生する。

ＮＰＬ画分は代表的にはホスファチジルコリン、ホスフ
ァチジルエタノールアミンおよびスフィンゴミエリンを
含む。

ＡＰＬ画分は代表的にはホスファチジルイノシトール、
ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸およびカルジ
オライビンを含む。

ＮＧＬおよびＡＧＬ画分は上記９．２９に記載の方法に
より分離する。１１．９ＩＩ！ｊＮＧＬＳおよび４．５
＃ＦＡＧＬＳを上記１６．６ｍｇ（９，１節）から得る
。

得たＮＧＬＳは代表的にはセラミドへキソシドおよびグ
リコグリセＯリビドである。

得たＡＧＬＳは代表的には硫＠　ｊ’、、１化へマドシ
トおよびガングリオシドである。

例　　１０ １０．１　　牛の　のＴＬＳの抽出変法噴霧乾燥により
乾燥した粉末形の８　Ｋｇの牛の脳を環境温度でコロイ
ドミルで４５υヘキサン中で均質化し、その後、２５　
Ｏｒ、ｐ、ｓ、で回転する刃攪拌機を装置した密閉反応
器で６０℃で抽出を継続する。

３０分抽出後、サスペンションは別の容器で１〜２時間
放置する。上澄相はデカンチーシコンにより集め、沈澱
固体は別の３０都のヘキサンにより再抽出する。

第２抽出物は１〜２１１１７ｆｌｔｌｉ直し、上澄相は
デカンテーションにより集め、次に上記上澄相と合せる
。環境温度で２４〜４８時間放置後、合せた上澄相は半
透明液体を与え、これから慎重なデカンテーションによ
り固体残渣を分離する。

次に液体相は６６〜７０℃で予備濃縮して初めの容積の
１２〜１５％に真空蒸発する。その後、予備濃縮物は等
容量の蒸留水により稀釈する。溶媒は６８〜７０℃で蒸
留して除去し、得たエマルジョンは均質化し、−４０℃
に凍結し、次に凍結乾燥する。牛の脳の３．３２Ｋｇの
−ｒ　Ｌ　Ｓをこうして次の組成を有する無臭、吸湿性
ベージュ色粉末形で得る： ％ コレステロール　　　　　　　　２５〜２７ＣＬＳ　　
　　　　　　　　　　　７３〜７５ＰＬＳ　　　　　　
　　　　　　５０〜５３ＧＬＳ　　　　　　　　　　　
　２０〜２３中性ＧＬＳおよびスルファチド １５〜１８ ガングリオシド　　　　　　　１，５〜１．８８Ｋｇの
粉末形牛の脳を上記１０．１節記載のように液相を予備
濃縮するまで処理する。ヘキサン中の濃縮物は３．３υ
ＴＬ８を含有する。すぐれた分散体を超音波処理により
製造し、次に３．３〜３．５Ｕのシリカゲルを満たした
例１．３１記載のものと同じカラムに通す。次にＣＬＳ
をカラムから２０〜２５１のヘキサンにより溶離し、溶
離液はヘキサンを真空蒸発して初めの型開の１２〜１５
％に予備ａＭする。同重吊の水で稀釈後、エマルジョン
は上記１０．１ｗＪ記載のように処理して次のものを含
むＣＬＳ２．４５Ｋｇを得る：％ ＰＬＳ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　７０
〜７３ＧＬＳ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　２５〜２８中性ＧＬＳおよびスル“ノ７チド ２０〜２５ ガングリオシド　　　　　　２〜３ ＮＬＳは２：１容量比のクロロホルムおよびメタノール
混液の２Ｗａ容積によりカラムから１１１１し、その後
溶離液は真空蒸発して始、めのｍｍの５％に濃縮する。

５１ヘキサンにより稀釈後、ＮＬＳ溶液は乾燥するまで
濃縮して、９５％より多いコレステロールを含有する０
、８ＢＫ９の黄色粉末を得る。

例１１ １１．１　　バターミルクのＣＬＳの分　変法スィート
バターミルクは透析濾過してカゼインおよびラクトース
を除き、次に噴霧乾燥により乾燥する。

稈だバターミルクの粉末は次の組成を有する二％ 水分（オーブンで２時間、１０２℃後）３．２２ 全固形　　　　　　　　　　　　９６．７８全リビド（
Ｈｏｊｏｎｎｉｅｒ法）　　　６１．２４たん白（ＮＸ
６．３８）　　　　３２．４３ラクトース（酵素的に定
ｍ）　　　１．２４圧分　　　　　　　　　　　　　１
，８７１００ｇのこの粉末を９４：６’ｆＨｆＳ比のへ
キサンおよびメタノール混液５００ｄにより５０℃でコ
ロイドミルで２回均質化する。各均質化後、均質化物は
１．５００Ｊで２分遠心分離する。

上澄用を６５℃で乾燥するまで真空濃縮し、バター油の
高％（７０〜７５％）のため流体として残るＴＬＳ６５
．２びを得る。

ＴＬＳを４０℃に冷却し、コロイドミルで１．５〜２倍
聞のアセトン（９０〜１３０ｄ＞により均質化し、環境
温度（２２〜２４℃）に戻し、次に２．０００ｇで１分
遠心分離した。大部分のＮＬＳおよび発臭物質を含有す
る透明上澄用を除去する。集めた固体残渣はＣＬＳを含
有する。ヘキサンに再溶解し、次いで真空蒸発により濃
縮し、アセトンに不溶性物質（ＡＩＭ）２１．７ｇを得
る。

この物質を３倍量のヘキサンにサスペンドし、その後Ｃ
ＬＳ　（８０，６％）を等用のシリカゲル（１０〜１１
ｇ）を使用して液体吸着クロマトグラノィによりＮＬＳ
　（１９，４％）から分離する。

次に上記バターミルクのＣＬＳ　（１７，５！？）を１
００倍量蒸留水中で均質化し、エマルジョンは凍結乾燥
する。

１１．２　　バターミルクのＣＬＳの　２分離変法１１
．１節記載と同じ組成を有する７、８４７（ＩＦのバタ
ーミルクは連流下に攪拌しなから９４：６容量比のへキ
サンおよびメタノール溶媒混液９０１により処理する。

１５分侵、桿たサスペンションを４０℃に冷却し、次に
ミクロフィルターを通し、その後フィルターは９４：６
容猷比のヘキサンおよびメタノール混液１０！により洗
滌する。

次に濾液は乾燥するまで６５℃で真空蒸発により濃縮し
て４．５７に３の丁ＬＳを得、これは４０℃に冷ｍＬ、
、２倍ｆｆｉ　（１０１＞　（１）？ｔ？ト＞Ｉ；ｒす
均質化し、環境温度（２２〜２４℃）に冷ｆＪ）する。

１．５００ｇで１〜３分遠心分ＩＩｌ後、大部分のＮＬ
Ｓおよび発臭化合物を含有する透明上澄用は廃東し、ア
セトン不溶性物質（ＡＩＭ）を１０１ヘキサン中に採取
し、乾燥するまで真空蒸発により濃縮する。こうして１
．５２ＫｇのＡＩＭを１ｎる。。

ＡＩＭを３〜４倍ＦＰｉ（１）へ＄４）ン（６〜７１　
）　中に採取し、次に約１　Ｋｌの吸着剤を使用してシ
リカゲル上で吸着り１コマトグラフイによりそのＣＬＳ
（１，１６Ｋｇ）Ｊ５よびそのＮＬＳ　（０，３６Ｋｇ
）に分離する。ＣＬＳを含有する溶離液を集め、窒ｉ流
中で蒸発乾燥する。４０℃で５分９倍吊０蒸留水により
均質化後、エマルジョンは凍結乾燥する。

Claims (18)

【特許請求の範囲】
1. （１）適当な溶媒に溶解した脂質混合物をほう酸ゲル上
   に通して糖脂質を選択的に吸着させ、その後糖脂質をゲ
   ルから溶離溶媒により脱着することを特徴とする、複合
   脂質を含有する脂質混合物から糖脂質を分離する方法。
2. （２）使用する脂質混合物はシリカゲルで中性脂質を分
   離後に得、そしてエストロゲンを含まず、糖脂質および
   燐脂質を含有する複合脂質混合物である、請求項１記載
   の方法。
3. （３）糖脂質をイオン交換樹脂に通して非酸性糖脂質か
   ら酸性糖脂質を分離する、請求項１記載の方法。
4. （４）燐脂質をイオン交換樹脂に通して非酸性燐脂質か
   ら酸性燐脂質を分離する、請求項１記載の方法。
5. （５）使用する脂質混合物を動物組織、特に牛の脳、胸
   腺又は骨髄の溶媒抽出により得る、請求項１記載の方法
   。
6. （６）使用する脂質混合物はラクトースを含有しない全
   バターミルクの溶媒抽出により得る、請求項１記載の方
   法。
7. （７）バターミルクを極性溶媒により処理して、中性脂
   質溶液を分離し、残差を回収しかつ極性溶媒を除去後、
   残差を微極性溶媒により処理し、この微極性溶媒の除去
   後、複合脂質含有−脂質混合物をシリカゲルの吸着クロ
   マトグラフィにより分離する、請求項６記載の方法。
8. （８）バターミルクを先ず微極性溶媒により処理し、残
   差を分離した後、溶液を集め、溶媒を除去して濃縮物を
   得、その後濃縮物を極性溶媒により処理し、不溶性画分
   を集め、極性溶媒を除去して、複合脂質含有−脂質混合
   物をシリカゲルの吸着クロマトグラフィにより分離する
   、請求項６記載の方法。
9. （９）使用する脂質混合物を人又は動物の胎盤の溶媒抽
   出により得る、請求項１記載の方法。
10. （１０）使用する脂質混合物を動物腸管の溶媒抽出によ
    り得る、請求項１記載の方法。
11. （１１）使用する脂質混合物は天然大豆レシチンである
    、請求項１記載の方法。
12. （１２）水の存在で糖脂質を溶媒抽出して、水性相に存
    在するガングリオシドを他の糖脂質から分離する、請求
    項１記載の方法。
13. （１３）化粧品、規定食又は医薬組成物の製造に対し請
    求項１から１２のいずれか１項に記載の方法により得た
    画分の使用。
14. （１４）化粧組成物の製造に動物組織の糖脂質、燐脂質
    およびガングリオシドの請求項１３記載の使用。
15. （１５）非経口エマルジョンの成分として、望ましくな
    い副作用を生じうる化合物を含まないレシチンの製造に
    対し請求項１１記載の方法により得た燐脂質の請求項１
    ３記載の使用。
16. （１６）特にアラキドン酸、ジホモガンマリノレン酸、
    エイコサペンタエン酸およびドコサヘキサエン酸を含有
    し、糖脂質を含まない脂肪酸トリグリセリドの製造に対
    し入の胎盤から請求項２記載の方法により得た中性脂質
    の請求項１３記載の使用。
17. （１７）規定食又は医薬組成物の製造に対し請求項１２
    記載の方法により得たガングリオシドの請求項１３記載
    の使用。
18. （１８）化粧品用に適するリポゾームの製造に対し請求
    項１２記載の方法により得たガングリオシドの請求項１
    ３記載の使用。