CN108864179A - 一种基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法 - Google Patents
一种基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108864179A CN108864179A CN201810978721.8A CN201810978721A CN108864179A CN 108864179 A CN108864179 A CN 108864179A CN 201810978721 A CN201810978721 A CN 201810978721A CN 108864179 A CN108864179 A CN 108864179A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- chloroform
- column
- egg
- chromatography
- thin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 title claims abstract description 80
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 title claims abstract description 16
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 126
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 120
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 85
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 75
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims abstract description 45
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 41
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims abstract description 40
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 claims abstract description 39
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 claims abstract description 35
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 claims abstract description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 30
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims abstract description 29
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 29
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims abstract description 27
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims abstract description 11
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 10
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims abstract description 9
- 229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 claims description 28
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 26
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 23
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 21
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 19
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 16
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 9
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 8
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000011630 iodine Substances 0.000 claims description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 6
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 4
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 4
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 2
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims 1
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 abstract description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 4
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 abstract description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 2
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 abstract description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 abstract description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 abstract description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 5
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 150000001455 metallic ions Chemical class 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- 206010016946 Food allergy Diseases 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003925 brain function Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N n-[4-(1,3-benzoxazol-2-yl)phenyl]-4-nitrobenzenesulfonamide Chemical class C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1S(=O)(=O)NC1=CC=C(C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C=C1 SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 150000008105 phosphatidylcholines Chemical class 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 229940001941 soy protein Drugs 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000194 supercritical-fluid extraction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
- C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/09—Esters of phosphoric acids
- C07F9/10—Phosphatides, e.g. lecithin
- C07F9/103—Extraction or purification by physical or chemical treatment of natural phosphatides; Preparation of compositions containing phosphatides of unknown structure
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
Abstract
本发明属于磷脂深加工技术领域，涉及一种基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法。将蛋黄粗磷脂溶于氯仿中，以硅胶为固定相，氯仿、甲醇和冰乙酸混合溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱过程用薄层色谱进行监测，收集洗脱有磷脂酰胆碱的组分，旋转蒸发浓缩并用氮吹仪干燥，制得纯度为90％～98％的蛋黄磷脂酰胆碱。本发明采用三元混合溶剂梯度洗脱，操作过程简单，工艺简单，不需要复杂的设备，成本低廉，生产效率高，适合工业化生产，其中有机溶剂可以回收使用，填料通过再生处理重复使用。本发明制得的蛋黄磷脂酰胆碱，可以用于功能性食品、医药、化妆品等工业领域。
Description
技术领域
本发明涉及磷脂深加工技术领域，具体的说，涉及一种基于低压层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法。
背景技术
磷脂酰胆碱(PC)，又称卵磷脂，是磷脂的主要成分。根据磷酸与甘油连接位置的不同，PC有α和β两种异构体，天然PC以α为主。作为生物膜的主要组成成分，PC在生物化学和生理学中起着非常关键的作用，比如：改善记忆力，减轻压力，增强婴儿的脑功能，促进神经传导，缓解焦虑等。磷脂酰胆碱广泛存在于大豆、蛋黄等生物组织中，鉴于大豆转基因问题以及大豆蛋白过敏问题，蛋黄可作为一种优选的原料，用作磷脂酰胆碱的制备，在蛋黄中磷脂酰胆碱含量占蛋黄磷脂总含量的80％。
到目前为止，磷脂酰胆碱的纯化方法有高效液相色谱法、金属离子沉淀法、超临界流体萃取法、膜分离法等。由于金属离子沉淀法会造成重金属离子残留的问题；高效液相色谱和超临界流体萃取法分离效果好，产品质量高，但存在设备成本高，大规模工业化应用受限的问题；膜分离法存在膜清洗困难而且处理量小等问题。
发明内容
本发明的目的在于是公开一种基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法：将原料溶于氯仿中，以硅胶为固定相，氯仿、甲醇和冰乙酸混合溶液为洗脱剂，洗脱过程用薄层色谱进行监控，收集洗脱有磷脂酰胆碱的组分，旋转蒸发浓缩并用氮吹仪干燥，制得纯度为90％～98％的蛋黄磷脂酰胆碱。
本发明采用的技术方案如下：
一种基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法，包括如下步骤：
S1、填料活化：称取200～300目的混合硅胶粉加热活化；优选方式下，步骤S1所述加热活化为：50～60℃，4～6h；
S2、装柱：向步骤S1活化后的硅胶粉中加入氯仿，用玻璃棒搅拌成浆状，湿法装入玻璃层析柱中，制得硅胶柱；
优选方式下，步骤S2所述的玻璃层析柱的直径和柱长比为(2～5):25；所述硅胶粉与氯仿的添加量比为3:(6～8)(g/ml)；
S3、上样：取蛋黄粗磷脂，用氯仿充分溶解，制得样品溶液；将所述的样品溶液沿柱壁缓缓加入步骤S2制备的硅胶柱中；
优选方式下，步骤S3所述蛋黄粗磷脂的添加量根据硅胶柱中所使用的硅胶粉用量的不同而改变，蛋黄粗磷脂的添加量为(10～20)mg/g硅胶粉；蛋黄粗磷脂与氯仿的料液比为150～300:1(mg/mL)；所述蛋黄粗磷脂中，磷脂酰胆碱的含量大于60％，磷脂酰乙醇胺的含量大于16％。
S4、梯度洗脱：当步骤S3中所述的样品溶液流至硅胶面时，立即用为10～20倍柱体积、体积比为18:5:1～17:5:1的氯仿、甲醇、冰醋酸混合溶液进行第一次洗脱；之后用30～50倍柱体积、体积比为16:5:1～10:5:1氯仿、甲醇、冰醋酸的混合溶液进行第二次洗脱，收集第二次洗脱的洗脱液；
S5、薄层色谱检测：对步骤S4收集到的洗脱液用薄层色谱进行检测，测定洗脱液中组分是否为目标组分，所述目标组分为：薄层色谱检测中出现单一斑点，且与磷脂酰胆碱标准品有同一迁移率的组分；
优选方式下，步骤S5所述的薄层色谱检测具体为，每收集0.25倍柱体积洗脱液用薄层色谱检测一次，用体积比为75:40:8:3的氯仿、甲醇、冰醋酸和水的混合液作为展开剂进行展开。
S6、样品浓缩：把步骤S5所述含有目标组分的洗脱液收集在一起，旋转蒸发浓缩成膏状，用氮吹仪吹干，得到蛋黄磷脂酰胆碱，所述蛋黄磷脂酰胆碱纯度为90～98％。
优选方式下，所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法，包括以下步骤：
S1、填料活化：称取15g、目数为200～300的混合硅胶粉，在50℃的烘箱里活化6h；
S2、装柱：选择长为200mm，直径为16mm的玻璃层析柱对磷脂酰胆碱进行分离纯化，向步骤S1活化后的硅胶粉中加入30mL氯仿搅拌成浆状，采用湿法装柱法将硅胶装入到玻璃层析柱中，得硅胶柱；
S3、将200mg的蛋黄粗磷脂用1mL氯仿溶解后沿柱壁缓慢加入步骤S2制备的硅胶层析柱内；
S4、梯度洗脱：先用20倍柱体积、体积比为18:5:1的氯仿、甲醇、冰醋酸混合溶液进行一次洗脱；再用50倍柱体积、体积比为16:5:1的氯仿、甲醇、冰醋酸混合溶液进行第二次洗脱，收集第二次洗脱的洗脱液；
S5、薄层色谱检测：将步骤S4收集的洗脱液用薄层色谱鉴定样品组成，每收集10mL鉴定一次，进行薄层色谱展开时，展开剂为体积比为75:40:8:3的氯仿、甲醇、冰醋酸和水的混合液，层析完毕后，取出薄板，干燥，放入碘缸内盖好，5min后有黄色斑点产生；如果薄层色谱检测中出现单一斑点，且与标准品PC具有同一迁移率，则判断所检测洗脱液中含有PC组分；
S6、样品浓缩：收集步骤S5鉴定为含有PC组分的洗脱液，旋转蒸发浓缩成膏状之后用氮吹仪进行干燥，得蛋黄磷脂酰胆碱；高效液相色谱鉴定本实施例制得的蛋黄磷脂酰胆碱纯度为98％。
本发明的有益效果是：
1、本发明提供了一种基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法，为从蛋黄粗磷脂中分离制备高纯度的磷脂酰胆碱提供了一种切实可行的方法，使用该方法可以方便的制备在工业具有广泛用途的磷脂酰胆碱产品。
2、本发明提供了一种基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法，用氯仿、甲醇、冰醋酸的三元混合溶剂梯度洗脱，操作过程简单，工艺简单，不需要复杂的设备，成本低廉，生产效率高，适合工业化生产，其中有机溶剂可以回收使用，填料通过再生处理重复使用。
3、本发明制得的蛋黄磷脂酰胆碱纯度高达90％～98％，可以用于功能性食品、医药、化妆品等工业领域。
附图说明
图1是本发明制得的蛋黄磷脂酰胆碱的高效液相色谱图。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可以从商业途径获得。
下述实施例中所使用的蛋黄粗磷脂购买自北京美亚斯磷脂技术有限公司，商品号：E-70；蛋黄粗磷脂中的磷脂酰胆碱含量大于60％，磷脂酰乙醇胺含量大于16％。
下述实施例中所使用的200～300目混合硅胶粉购买自青岛美高集团有限公司，商品号：1610644
实施例1：
S1、填料活化：称取15g、目数为200～300的混合硅胶粉，在50℃的烘箱里活化6h；
S2、装柱：选择长为200mm，直径为16mm的玻璃层析柱对磷脂酰胆碱(PC)进行分离纯化，向步骤S1活化后的硅胶粉中加入30mL氯仿搅拌成浆状，采用湿法装柱法将硅胶装入到玻璃层析柱中，得硅胶柱；
S3、将200mg的蛋黄粗磷脂用1mL氯仿溶解后沿柱壁缓慢加入步骤S2制备的硅胶层析柱内；
S4、梯度洗脱：先用20倍柱体积的氯仿、甲醇、冰醋酸三元混合溶剂(氯仿:甲醇:冰醋酸＝18:5:1，体积比)进行第一次洗脱，除去溶液中的色素和其他磷脂组分后，再50倍柱体积的用氯仿、甲醇、冰醋酸三元混合溶剂(氯仿:甲醇:冰醋酸＝16:5:1，体积比)进行第二次洗脱，收集第二次洗脱的洗脱液；
S5、薄层色谱检测：将步骤S4收集的洗脱液用薄层色谱鉴定样品组成，每收集10mL洗脱液鉴定一次，进行薄层色谱展开时，展开剂为体积比为75:40:8:3的氯仿、甲醇、冰醋酸和水的混合液，层析完毕后，取出薄板，干燥，放入碘缸内盖好，5min后有黄色斑点产生；如果薄层色谱检测中出现单一斑点，且与标准品PC具有同一迁移率，则判断所检测洗脱液中含有PC组分；
S6、样品浓缩：收集步骤S5鉴定为含有PC组分的洗脱液，旋转蒸发浓缩成膏状之后用氮吹仪进行干燥，得蛋黄磷脂酰胆碱。高效液相色谱鉴定本实施例制得的蛋黄磷脂酰胆碱纯度为98％。
实施例2：
S1、填料活化：称取15g、目数为200～300的硅胶粉，在55℃的烘箱里活化5h；
S2、装柱：选择长为200mm，直径为16mm的玻璃层析柱对磷脂酰胆碱(PC)进行分离纯化，向步骤S1活化后的硅胶粉中加入35mL氯仿搅拌成浆状，采用湿法装柱法将硅胶装入到玻璃层析柱中，得硅胶柱；
S3、将150mg的蛋黄粗磷脂用1mL氯仿溶解后沿柱壁缓慢加入步骤S2制备的硅胶层析柱内；
S4、梯度洗脱：先用15倍柱体积的氯仿、甲醇、冰醋酸三元混合溶剂(氯仿:甲醇:冰醋酸＝17:5:1，体积比)进行第一次洗脱，除去溶液中的色素和其他磷脂组分后，再用40倍柱体积的氯仿、甲醇、冰醋酸三元混合溶剂(氯仿:甲醇:冰醋酸＝12:5:1，体积比)进行第二次洗脱，收集第二次洗脱的洗脱液；
S5、薄层色谱检测：将步骤S4收集的洗脱液用薄层色谱鉴定样品组成，每收集10mL洗脱液鉴定一次，进行薄层色谱展开时，展开剂为体积比为75:40:8:3的氯仿、甲醇、冰醋酸和水的混合液，层析完毕后，取出薄板，干燥，放入碘缸内盖好，5min后有黄色斑点产生；如果薄层色谱检测中出现单一斑点，且与标准品PC具有同一迁移率，则判断所检测洗脱液中含有PC组分；
S6、样品浓缩：收集步骤S5鉴定为含有PC组分的洗脱液，旋转蒸发浓缩成膏状之后用氮吹仪进行干燥，得蛋黄磷脂酰胆碱。高效液相色谱鉴定本实施例制得的蛋黄磷脂酰胆碱纯度为94％。
实施例3：
S1、填料活化：称取15g、目数为200～300的硅胶粉，在60℃的烘箱里活化4h；
S2、装柱：选择长为200mm，直径为16mm的玻璃层析柱对磷脂酰胆碱(PC)进行分离纯化，向步骤S1活化后的硅胶粉中加入40mL氯仿搅拌成浆状，采用湿法装柱法将硅胶装入到玻璃层析柱中，得硅胶柱；
S3、将300mg的蛋黄粗磷脂用1mL氯仿溶解后沿柱壁缓慢加入步骤S2制备的硅胶层析柱内；
S4、梯度洗脱：先用10倍柱体积的氯仿、甲醇、冰醋酸三元混合溶剂(氯仿:甲醇:冰醋酸＝18:5:1，体积比)进行第一次洗脱，除去溶液中的色素和其他磷脂组分后，再用30倍柱体积的氯仿、甲醇、冰醋酸三元混合溶剂(氯仿:甲醇:冰醋酸＝10:5:1，体积比)进行第二次洗脱，收集第二次洗脱的洗脱液；
S5、薄层色谱检测：将步骤S4收集的洗脱液用薄层色谱鉴定样品组成，每收集10mL洗脱液鉴定一次，进行薄层色谱展开时，展开剂为体积比为75:40:8:3的氯仿、甲醇、冰醋酸和水的混合液，层析完毕后，取出薄板，干燥，放入碘缸内盖好，5min后有黄色斑点产生；如果薄层色谱检测中出现单一斑点，且与标准品PC具有同一迁移率，则判断所检测洗脱液中含有PC组分；
S6、样品浓缩：收集步骤S5鉴定为含有PC组分的洗脱液，旋转蒸发浓缩成膏状之后用氮吹仪进行干燥，得蛋黄磷脂酰胆碱。高效液相色谱鉴定本实施例制得的蛋黄磷脂酰胆碱纯度为90％。
实施例4
S1、填料活化：称取94g、目数为200～300的硅胶粉，在60℃的烘箱里活化4h；
S2、装柱：选择长为200mm，直径为40mm的玻璃层析柱对磷脂酰胆碱(PC)进行分离纯化，向步骤S1活化后的硅胶粉中加入188mL氯仿搅拌成浆状，采用湿法装柱法将硅胶装入到玻璃层析柱中，得硅胶柱；
S3、将1.5g的蛋黄粗磷脂用10mL氯仿溶解后沿柱壁缓慢加入步骤S2制备的硅胶层析柱内；
S4、梯度洗脱：先用10倍柱体积的氯仿、甲醇、冰醋酸三元混合溶剂(氯仿:甲醇:冰醋酸＝18:5:1，体积比)进行第一次洗脱，除去溶液中的色素和其他磷脂组分后，再用30倍柱体积的氯仿、甲醇、冰醋酸三元混合溶剂(氯仿:甲醇:冰醋酸＝10:5:1，体积比)进行第二次洗脱，收集第二次洗脱的洗脱液；
S5、薄层色谱检测：将步骤S4收集的洗脱液用薄层色谱鉴定样品组成，每收集63mL洗脱液鉴定一次，进行薄层色谱展开时，展开剂为体积比为75:40:8:3的氯仿、甲醇、冰醋酸和水的混合液，层析完毕后，取出薄板，干燥，放入碘缸内盖好，5min后有黄色斑点产生；如果薄层色谱检测中出现单一斑点，且与标准品PC具有同一迁移率，则判断所检测洗脱液中含有PC组分；
S6、样品浓缩：收集步骤S5鉴定为含有PC组分的洗脱液，旋转蒸发浓缩成膏状之后用氮吹仪进行干燥，得蛋黄磷脂酰胆碱。高效液相色谱鉴定本实施例制得的蛋黄磷脂酰胆碱纯度为90％。
实施例5：
S1、填料活化：称取66g、目数为200～300的硅胶粉，在60℃的烘箱里活化4h；
S2、装柱：选择长为250mm，直径为30mm的玻璃层析柱对磷脂酰胆碱(PC)进行分离纯化，向步骤S1活化后的硅胶粉中加入176mL氯仿搅拌成浆状，采用湿法装柱法将硅胶装入到玻璃层析柱中，得硅胶柱；
S3、将1.2g的蛋黄粗磷脂用6mL氯仿溶解后沿柱壁缓慢加入步骤S2制备的硅胶层析柱内；
S4、梯度洗脱：先用10倍柱体积的氯仿、甲醇、冰醋酸三元混合溶剂(氯仿:甲醇:冰醋酸＝18:5:1，体积比)进行第一次洗脱，除去溶液中的色素和其他磷脂组分后，再用30倍柱体积的氯仿、甲醇、冰醋酸三元混合溶剂(氯仿:甲醇:冰醋酸＝10:5:1，体积比)进行第二次洗脱，收集第二次洗脱的洗脱液；
S5、薄层色谱检测：将步骤S4收集的洗脱液用薄层色谱鉴定样品组成，每收集44mL洗脱液鉴定一次，进行薄层色谱展开时，展开剂为体积比为75:40:8:3的氯仿、甲醇、冰醋酸和水的混合液，层析完毕后，取出薄板，干燥，放入碘缸内盖好，5min后有黄色斑点产生；如果薄层色谱检测中出现单一斑点，且与标准品PC具有同一迁移率，则判断所检测洗脱液中含有PC组分；
S6、样品浓缩：收集步骤S5鉴定为含有PC组分的洗脱液，旋转蒸发浓缩成膏状之后用氮吹仪进行干燥，得蛋黄磷脂酰胆碱。高效液相色谱鉴定本实施例制得的蛋黄磷脂酰胆碱纯度为90％。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、填料活化：取200～300目的混合硅胶粉加热活化；
S2、装柱：向步骤S1活化后的硅胶粉中加入氯仿，搅拌成浆状，湿法装入玻璃层析柱中，制得硅胶柱；
S3、上样：取蛋黄粗磷脂，用氯仿充分溶解得样品溶液，将所述的样品溶液沿柱壁加入步骤S2制备的硅胶柱中；
S4、梯度洗脱：当步骤S3中所述的样品溶液流至硅胶面时，用10～20倍柱体积、体积比为18:5:1～17:5:1的氯仿、甲醇、冰醋酸三元混合溶液进行第一次洗脱；之后用30～50倍柱体积、积比为16:5:1～10:5:1的氯仿、甲醇、冰醋酸体三元混合液进行第二次洗脱，收集第二次洗脱的洗脱液。
S5、薄层色谱检测：对步骤S4收集到的洗脱液用薄层色谱进行检测，测定洗脱液中组分是否为目标组分，所述目标组分为：薄层色谱检测中出现单一斑点，且与磷脂酰胆碱标准品有同一迁移率的组分；
S6、样品浓缩：把步骤S5所述含有目标组分的洗脱液收集在一起，浓缩成膏状，干燥，得到蛋黄磷脂酰胆碱，所述蛋黄磷脂酰胆碱纯度为90～98％。
2.根据权利要求1所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法，其特征在于，步骤S1所述加热活化为：50～60℃，4～6h。
3.根据权利要求1所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法，其特征在于，步骤S2所述的玻璃层析柱的直径和柱长比为(2～5):25。
4.根据权利要求1所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法，其特征在于，步骤S3所述蛋黄粗磷脂，添加量为10～20mg/g硅胶粉。
5.根据权利要求1所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法，其特征在于，步骤S3所述蛋黄粗磷脂与氯仿的料液比为150～300:1mg/mL。
6.根据权利要求1所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法，其特征在于，步骤S3所述蛋黄粗磷脂中，磷脂酰胆碱的含量大于60％，磷脂酰乙醇胺的含量大于16％。
7.根据权利要求1所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法，其特征在于，步骤S5所述的薄层色谱检测具体为，每收集0.25倍柱体积洗脱液用薄层色谱检测一次，用体积比为75:40:8:3的氯仿、甲醇、冰醋酸和水的混合液作为展开剂进行展开。
8.根据权利要求1所述基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、填料活化：称取15g、目数为200～300的混合硅胶粉，在50℃的烘箱里活化6h；
S2、装柱：选择长为200mm，直径为16mm的玻璃层析柱对磷脂酰胆碱进行分离纯化，向步骤S1活化后的硅胶粉中加入30mL氯仿搅拌成浆状，采用湿法装柱法将硅胶装入到玻璃层析柱中，得硅胶柱；
S3、将200mg的蛋黄粗磷脂用1mL氯仿溶解后沿柱壁加入步骤S2制备的硅胶层析柱内；
S4、梯度洗脱：先用20倍柱体积、体积比为18:5:1的氯仿、甲醇、冰醋酸三元混合溶液进行第一次洗脱；再用50倍柱体积、体积比为16:5:1的氯仿、甲醇、冰醋酸三元混合溶液为进行第二次洗脱，收集第二次洗脱的洗脱液；
S5、薄层色谱检测：将步骤S4收集的洗脱液用薄层色谱鉴定样品组成，每收集10mL鉴定一次，进行薄层色谱展开时，展开剂为体积比为75:40:8:3的氯仿、甲醇、冰醋酸和水的混合液，层析完毕后，取出薄板，干燥，放入碘缸内盖好，5min后有黄色斑点产生；如果薄层色谱检测中出现单一斑点，且与标准品磷脂酰胆碱具有同一迁移率，则判断所检测洗脱液中含有磷脂酰胆碱组分；
S6、样品浓缩：收集步骤S5鉴定为含有磷脂酰胆碱组分的洗脱液，旋转蒸发浓缩成膏状之后用氮吹仪进行干燥，得蛋黄磷脂酰胆碱；高效液相色谱鉴定本实施例制得的蛋黄磷脂酰胆碱纯度为98％。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810978721.8A CN108864179A (zh) | 2018-08-27 | 2018-08-27 | 一种基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810978721.8A CN108864179A (zh) | 2018-08-27 | 2018-08-27 | 一种基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108864179A true CN108864179A (zh) | 2018-11-23 |
Family
ID=64321752
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810978721.8A Pending CN108864179A (zh) | 2018-08-27 | 2018-08-27 | 一种基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108864179A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111039976A (zh) * | 2019-12-26 | 2020-04-21 | 江苏汉斯通药业有限公司 | 梯度法纯化大豆磷脂酰胆碱的方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5284941A (en) * | 1988-10-28 | 1994-02-08 | Nestec S.A. | Process for obtaining glycolipids and phospholipids |
| CN102911201A (zh) * | 2012-10-25 | 2013-02-06 | 山东师范大学 | 一种制备南极磷虾磷脂酰胆碱标准品的工艺 |
| CN104558020A (zh) * | 2014-12-30 | 2015-04-29 | 广州白云山汉方现代药业有限公司 | 一种注射用蛋黄磷脂酰胆碱的制备方法 |
-
2018
- 2018-08-27 CN CN201810978721.8A patent/CN108864179A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5284941A (en) * | 1988-10-28 | 1994-02-08 | Nestec S.A. | Process for obtaining glycolipids and phospholipids |
| CN102911201A (zh) * | 2012-10-25 | 2013-02-06 | 山东师范大学 | 一种制备南极磷虾磷脂酰胆碱标准品的工艺 |
| CN104558020A (zh) * | 2014-12-30 | 2015-04-29 | 广州白云山汉方现代药业有限公司 | 一种注射用蛋黄磷脂酰胆碱的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 龚雁: ""磷脂化合物的分离制备和测定方法研究"", 《万方数据知识服务平台-北京化工大学硕士学位论文》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111039976A (zh) * | 2019-12-26 | 2020-04-21 | 江苏汉斯通药业有限公司 | 梯度法纯化大豆磷脂酰胆碱的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Feng et al. | Analytical methods of isolation and identification | |
| Rao et al. | Determination of available lysine in oilseed meal proteins. | |
| Nelson | Lipid composition of erythrocytes in various mammalian species | |
| Zhou et al. | Separation and purification of α-glucosidase inhibitors from Polygonatum odoratum by stepwise high-speed counter-current chromatography combined with Sephadex LH-20 chromatography target-guided by ultrafiltration–HPLC screening | |
| Wang et al. | Investigation of six bioactive anthraquinones in slimming tea by accelerated solvent extraction and high performance capillary electrophoresis with diode-array detection | |
| CN101871920A (zh) | 用于生物样本中多氯联苯类化合物快速前处理与纯化的多级改进柱 | |
| US20150065752A1 (en) | Process for isolating kukoamine | |
| CN107727760A (zh) | 一种茶叶中农药对映异构体残留量的测定方法 | |
| CN108872447A (zh) | 基于亲水性固相萃取的甲状腺抑制剂的检测方法 | |
| Stolyhwo et al. | Studies on the analysis of lipid classes by gradient elution adsorption chromatography | |
| Wei et al. | A rapid ion chromatography column-switching method for online sample pretreatment and determination of L-carnitine, choline and mineral ions in milk and powdered infant formula | |
| Wen et al. | A polyamide resin based method for adsorption of anthocyanins from blackberries | |
| CN108864179A (zh) | 一种基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法 | |
| CN106124645A (zh) | 针头式固相萃取过滤器 | |
| CN109096327A (zh) | 一种高纯度蛋黄磷脂酰乙醇胺的制备方法 | |
| Carmali et al. | Recovery of lupanine from Lupinus albus L. leaching waters | |
| Itoh et al. | Modified Bartlett assay for microscale lipid phosphorus analysis | |
| Samet et al. | High-performance liquid chromatography separation of phospholipid classes and arachidonic acid on cyanopropyl columns | |
| CN107389817B (zh) | 食品中防腐剂联合检测方法 | |
| CN107778337B (zh) | 超临界二氧化碳萃取螺旋藻中糖脂的方法 | |
| Attoumbré et al. | Preparative separation of glycoalkaloids α-solanine and α-chaconine by centrifugal partition chromatography | |
| NZ208241A (en) | Purification of blood plasma or serum: selective removal of (very) low density lipoproteins (ldl and vldl) | |
| Amari et al. | Isolation and purification of lecithin by preparative high-performance liquid chromatography | |
| Oliver | [26] Colorimetric analysis of vitamin A and carotene | |
| Wang et al. | Isolation of potential α-glucosidase inhibitor from Inonotus obliquus by combining ultrafiltration-liquid chromatography and consecutive high-speed countercurrent chromatography |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20181123 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |